JP3169222B2 - 生物活性剤用新規リンカー - Google Patents

生物活性剤用新規リンカー

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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、治療薬として有用なアントラサイクリンと
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、又は天然も
しくは合成起源のタンパク質もしくはペプチドのような
キャリヤーとの複合体、その製造方法、このような複合
体を含有する医薬組成物、及びある種の哺乳動物腫瘍の
治療におけるその使用に係る。本発明は更に、新規アン
トラサイクリン誘導体及びその製造法にも係る。
近年、多数の細胞毒性の強いアントラサイクリンが合
成されている。例えば、糖部分のＣ−３′位に結合した
モルホリノ又は置換モルホリノ環を有するアントラサイ
クリンは、実験用マウス腫瘍に対して有望な抗腫瘍活性
を示した［Bioactive molecules,55−101,vol 6,J.Wi
lliam Lown編,Elveiser 1988］。
本発明は、薬剤の治療効果を向上させ、人体に投与後
にその毒性効果を低下させるために、生物活性剤から治
療上有用な薬剤を放出するための新規リンカーに係る。
より詳細には、生物活性剤は一級又は二級の遊離ヒドロ
キシル基を有しており且つ選択された細胞集団に対して
反応性の抗体又はレセプター組織に対して反応性の天然
もしくは合成起源のタンパク質、ペプチドもしくはポリ
マーのようなキャリヤーに結合した、抗生物質、抗腫瘍
物質又は抗ウイルス化合物のような治療分類に属する薬
剤を含む。
少なくとも１個の一級又は二級ヒドロキシル基を含む
各薬剤は、リンカーアームを介してキャリヤーに共有結
合しており、一級又は二級ヒドロキシル位置で酸感受性
アセタール結合を介して該リンカーアームに結合してい
る。本発明の生物活性剤の酸感受性アセタール結合は、
ターゲット組織で酸性の外部又は内部環境に活性薬剤を
放出することができる。
従って、本発明は一般式1: ［Ａ−Ｏ−Ｗ−Ｚ］ａ−Ｔ １ 〔式中、Ａ−Ｏ−部分は式Ａ−Ｏ−Ｈの抗腫瘍剤の残基
であり、−Ｏ−Ｈは一級又は二級ヒドロキシル基であ
り、ａは１〜30の整数であり、Ｗは一般式2: （式中、ｂは１〜４の整数であり、ＢはC1−C3アルキレ
ン基であり、R1及びR2は各々独立して水素、ハロゲン、
アルキル、フェニル又は置換フェニルである）の基であ
り、Ｚはスペーサー基であり、Ｔはキャリヤー部分であ
り、ただしキャリヤー部分Ｔは、腫瘍関連抗原に結合す
ることが可能なポリクローナル抗体又は抗原結合部位を
含むそのフラグメント、腫瘍細胞集団で優先的又は選択
的に発現される抗原に結合することが可能なモノクロー
ナル抗体又は抗原結合部位を含むそのフラグメント、腫
瘍細胞に優先的又は選択的に結合することが可能なペプ
チド又はタンパク質、及びポリマーキャリヤーから選択
される〕の複合体を提供する。
好ましくはａが１〜５である。Ｂは−（CH2）２−が
適切である。R1及びR2の定義において、ハロゲンは典型
的には塩化物、臭素又はヨウ素であり、アルキルはメチ
ル又はエチルのようなC1−C4であり得る。置換フェニル
はハロゲン又はアルキル置換フェニルであり得、その場
合、ハロゲン及びアルキルは前記の通りであり得る。好
適なＺ基を以下に示す。
（ｉ）−NH−； （ii）−NH−（CH2）ｃ−Ｓ−Ｓ−（式中、ｃは１〜４
の整数である）； （iii）−NH−［Ｃ］ｄ−Ｎ＝CH−（式中、 ａ）ｄは０であるか、 ｂ）ｄは１であり且つ［Ｃ］は−NH−CO（CH2）ｅ−Ｏ
−（CH2）ｅ−であり、ｅは２〜４の整数であるか、 ｃ）ｄは１〜４の整数であり且つ［Ｃ］は−（CH2）ｆ
−Ｏ−（CH2）ｆ−であり、ｆは１又は２であるか、又
は ｄ）ｄは２〜６の整数であり且つ［Ｃ］はCH2であ
る）； （iv）−NH−［Ｃ］ｄ−NH−CO（式中、［Ｃ］及びｄは
上記と同義である）； （ｖ）−［Ｄ］−NH−（式中、［Ｄ］は−NH−［CH2］
ｇ−COであり、ｇは２〜６の整数である）； （vi）−［Ｅ］−CO（式中、［Ｅ］は−NH−（CH2）ｇ
−NH−であり、ｇは２〜６の整数である）； （vii）式： のピペラジニルカルボニル部分。
上記式１中、薬剤Ａ−Ｏ−Ｈは好ましくは、ドキソル
ビシン、モルホリノ環が場合によりC1−C4ルコキシ基の
ようなアルコキシ残基で２″位を置換されたその３′−
デアミノ−３′−モルホリニル誘導体のようなアントラ
サイクリンの類に属する抗腫瘍剤;5−フルオロデオキシ
ウリジン又はアラビノフラノシルシトシン（シタラビ
ン）のようなピリミジン類似体;4−デスアセチルビニル
ブラスチンのようなビンカアルカロイドの誘導体；又は
ポドフィロトキシンもしくはイルジンのような他の抗腫
瘍剤である。あるいは、薬剤Ａ−Ｏ−Ｈは、３′−アジ
ド−３′−デオキシチミジン（AZT）、ブロモビニルデ
オキシウリジン（BVDU）、９−［（２−ヒドロキシエト
キシ）メチル］グアニン（アシクロビール）もしくは９
−［（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］
グアニン（ガンシクロビール）のような抗ウイルス剤、
又はチエナマイシンのような抗生物質、又は（5R,6S）
−２−カルバモイルオキシメチル−６−［（1R）−ヒド
ロキシエチル］−２−ペネム−３−カルボン酸及びアセ
トキシメチル（5R,6S）−２−カルバモイルオキシメチ
ル−６−［（1R）−ヒドロキシエチル］−２−ペネム−
３−カルボキシレートのような新規ペネム誘導体でもよ
い。
Ａ−Ｏ−部分がアントラサイクリンＡ−Ｏ−Ｈから誘
導されるとき、典型的にはＡ−Ｏ−部分は、 を表し、式中、R10は水素原子、ヒドロキシ基又はメト
キシ基であり、R11及びR12は一方が水素原子であり且つ
他方がヒドロキシ基であるか又はR11が水素もしくはヨ
ウ素原子であり且つR12が水素原子であり、R13はアミノ
基又はモルホリノ環に含まれる窒素原子である。モルホ
リノ環は例えば、以下のように窒素原子がＣ−３′に結
合したモルホリノ（MO）、３−シアノ−４−モルホリノ
（CM）又は２−メトキシ−４−モルホリノ（ΜΜ）環で
あり得る。
キャリヤー部分Ｔは典型的には、腫瘍関連抗原に結合
することが可能なポリクローナル抗体又は抗原結合部位
を含むそのフラグメント、腫瘍細胞集団で優先的又は選
択的に発現される抗原に結合することが可能なモノクロ
ーナル抗体又は抗原結合部位を含むそのフラグメント、
腫瘍細胞に優先的又は選択的に結合することが可能なペ
プチド又はタンパク質、及びポリマーキャリヤーから選
択される。
キャリヤー部分、好ましくはＴ−［NH2］ｘ（ｘは縮
合に有効なアミノ基の数である）として表され得る物質
から誘導されるキャリヤー部分は、腫瘍関連抗原に対す
るポリクローナル抗体；腫瘍細胞集団で優先的もしくは
選択的に発現される抗原に結合するモノクローナル抗
体；腫瘍細胞に優先的もしくは選択的に結合する天然も
しくは組換ペプチドもしくはタンパク質もしくは成長因
子、又はポリリシンのような天然もしくは合成ポリマー
キャリヤーから選択され得る。キャリヤー部分は更に、
抗体のFabもしくはＦ（ab′）２フラグメントのような
上記キャリヤーの部分、又は組換DNA技術により得られ
る上記ペプチドもしくはタンパク質の部分から誘導され
得る。
上記抗体及び夫々の可能な治療用途の代表例を以下に
挙げる。
−抗体T101［Royston,I.et al.,J.Immunol.1980,125,7
25］のような抗Ｔ細胞抗体、 −抗体OKT1（Ortho）ATCC CRL 8000のような抗CD5抗
体（慢性リンパ性白血病）、 −抗体OKT9（Ortho）ATCC CRL 8021のような抗体トラ
ンスフェリンレセプター抗体（卵巣腫瘍及び他の腫
瘍）、 −抗体MAb9.2.27（Bumol,T.F.et al.,Proc.Natl.Acad.
Sci.USA 1982,79,1245）のような抗メラノーマ抗体
（メラノーマ）、 −抗CEA 1116 NS−3d ATCC CRL 8019、抗α−フェ
トプロテインOM ３−1.1 ATCC HB 134（肝癌）、79
1T/36［Embleton,M.J.et al.,Br.J.Cancer 1981,43,5
82］（骨肉腫）、B72.3［US−Ａ−4.522,918（1985）］
（結腸直腸癌及び他の腫瘍）のような抗癌マーカー抗
体、 −抗体OVB ３ ATCC HB 9147のような抗卵巣癌抗
体、 −抗体（HMGF抗原）［Aboud−Pirak,E.et al.,Cancer
Res.1988,48 3188］のような抗乳癌抗体、 −抗体1G3.10［Yu,D.S.et al.,Eur.J.Urol.1987,13,19
8］のような抗膀胱癌抗体。
上記成長因子及び天然又は組換起源のタンパク質の代
表例は、FGF,EGF,PDGF,TGF−α，α−MS,インターロイ
キン、インターフェロン、TNFメラノトロピン（MSH）等
である。
Ｔ−［SH］x1（式中、x1は縮合に有効なチオール基の
数を表す）として表され得る物質から誘導されるキャリ
ヤー部分は好ましくは、例えばＮ−スクシンイミジル−
Ｓ−アセチルチオアセテート（SATA）、Ｎ−スクシンイ
ミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（SP
DP）、D,L−ホモシステインチオラクトン、Ｎ−アセチ
ル−D,L−ホモシステインチオラクトン又は２−イミノ
チオラクトンを使用して得られるチオール化ポリクロー
ナル又はモノクローナル抗体から誘導される。
Ｔ−［CHO］x2（式中、x2は縮合に有効はホルミル基
の合計数を表す）として表され得る物質から誘導される
キャリヤー部分は好ましくは、US−Ａ−4,671,958に記
載されているようにFc領域に優先的に配置され、化学的
又は酵素的方法により選択的にアルデヒド基に酸化され
た炭水化物部分を有するポリクローナル又はモノクロー
ナル抗体から誘導される。キャリヤーＴ−［CHO］x2は
更に、適切なポリマーキャリヤーのホルミル化もしくは
酸化、又は適切は糖タンパク質の炭水化物残基のアルデ
ヒド基への酸化から誘導され得る。
Ｔ−［COOH］x3（式中、x3は縮合に有効なカルボキシ
ル基の合計数を表す）として表され得る物質から誘導さ
れるキャリヤー部分は好ましくは、ポリアスパラギン酸
もしくはポリグルタミン酸、下記構造： （式中、［Ｘ］:Gly−Phe−Leu−Gly、−NH−（CH2）ｎ
−CO、ｎは１〜５、［Ｐ］:OH、Ｏ−C6H4pNO2、x/y（90
/10−95/5mol/mol％）、MW 10000−40000、好ましくは
12000〜20000である）［J.Kopecek,“Biodegradation
of polymers for biomedical use"IUPAC Macromol
ecules.H.Benoit ＆ P.Rempp,Ed.:505−520（1982）P
ergamon Press.Oxford,England参照］を有するＮ−
（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（HMPA）
から誘導されるような可溶性及び生分解性合成コポリマ
ー、下記構造： （式中、x:y:z＝1:1:1）を有する肺組織にターゲッタブ
ルな薬剤キャリヤーとして有用なポリ（GluNa,Ala,Ty
r）（Mw25000〜50000ダルトン）のようなポリ（アミノ
酸）コポリマー［R.Duncan et al.,Journal of Bio
active and Compatible Polymers,Vol 4,July 198
9］、又はモノクローナル抗体もしくはポリクローナル
抗体に天然に存在するかもしくは抗体二官能性無水物
（例えば無水マレイン酸）で処理することにより化学的
に導入されるカルボキシル基から誘導される。
本発明は更に式１の複合体の製造方法を提供するもの
であり、該方法は、式3: Ａ−Ｏ−Ｗ−OH ３ （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは上記と同義である）の誘導体
を、式１の複合体中に前記スペーサー基Ｚ及びキャリヤ
ー部分Ｔをもたらすことが可能な物質と縮合させ、こう
して式１の複合体を形成する段階を含む。
縮合は混合酸無水物、アジ化物もしくは式３の誘導体
の活性化エステルのような活性化誘導体を介して、又は
ジシクロヘキシルカルボジイミドのような縮合剤の存在
下で直接反応により実施され得る。適切な方法は、式３
の誘導体を式4: Ａ−Ｏ−Ｗ−Ｌ ４ （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは上記と同義であり、Ｌはアミ
ド結合を形成するための活性化基、例えばＮ−オキシス
クシンイミド、その水溶性誘導体Ｎ−オキシスルホシン
イミド、2,4−ジニトロフェノキシ基,2,3,4,5,6−ペン
タフルオロフェノキシ基又はｔ−ブトキシカルボニルオ
キシ基を表す）の活性化誘導体に変換し、 （ｉ′）得られた式４の化合物を上記式Ｔ−［NH2］ｘ
の物質と縮合させてアミド結合を有する式１の生物活性
剤を得るか、又は （ii′）式４の化合物を式NH2−（CH2）ｃ−SHのチオー
ル誘導体（例えばｃ＝２のとき、２−アミノエタンチオ
ール）と縮合させ、得られた式5: Ａ−Ｏ−Ｗ−NH−（CH2）ｃ−SH ５ （式中、Ａ−Ｏ−,W及びＣは上記と同義である）の化合
物を上記Ｔ−［SH］x1の物質と縮合させ、ジスルフィド
結合を有する式１の複合体を得るか、又は （iii′）式４の化合物をヒドラジン、スクシンジヒド
ラジン誘導体、アジピンジヒドラジン誘導体もしくはジ
アミノ化合物と反応させ、得られた式6: Ａ−Ｏ−Ｗ−NH−［Ｃ］ｄ−NH2 ６ （式中、Ａ−Ｏ−,W,［Ｃ］及びｄは上記と同義であ
る）の化合物を上記式Ｔ−［COH］x2の物質と縮合さ
せ、オキシム結合を有する式１の生物活性剤を得る。
有用な方法は、 （iv′）上記のような一般式６の化合物を、場合により
縮合剤の存在下で、上記式Ｔ−［COOH］x3のキャリヤー
部分を含む反応から得られる式7: Ｔ−［CO−Ｌ′］ｙ ７ （式中、ｙは１〜30の整数であり、活性化カルボキシル
基の合計数を表し、Ｔは式１の得られた複合体における
キャリヤー部分であり、Ｌ′はヒドロキシ又はアミド結
合を形成するための活性化基である）の物質と縮合さ
せ、式１の複合体を得、未反応の活性化カルボキシル基
が存在する場合は、１−アミノ−２−プロパノールのよ
うな医薬上許容可能なアミンでクエンチされ得る。
他の有用な方法は、 （ｖ′）式４の化合物を式H2N−［CH2］ｇ−COOH（式
中、ｇは上記と同義である）のアミノ誘導体と縮合さ
せ、式8: Ａ−Ｏ−Ｗ−［Ｄ］−OH ８ （式中、Ａ−Ｏ−,W及び［Ｄ］は上記と同義である）の
誘導体を形成し、場合により式８の化合物を式9: Ａ−Ｏ−Ｗ−［Ｄ］−Ｌ ９ （式中、Ａ−Ｏ−,W,［Ｄ］及びＬは上記と同義であ
る）の活性化誘導体に変換し、得られた式９の化合物又
は式８の化合物を縮合剤の存在下で上記式Ｔ−［NH2］
ｘの物質と縮合させ、式１の生物活性剤を得る。
他の方法は、 （vi′）式４の化合物を式H2N−（CH2）ｇ−NH2（式
中、ｇは上記と同義である）のアミノ誘導体と反応さ
せ、式10: Ａ−Ｏ−Ｗ−［Ｅ］−Ｈ 10 （式中、［Ｅ］は上記と同義である）の誘導体を形成す
るか、又は （vii′）式４の化合物をピペラジンと反応させ、式11: Ａ−Ｏ−Ｗ−［ピペラジン］−Ｈ 11 の誘導体を形成し、上記式10又は11の化合物を上記式７
の物質と縮合させ、式１の複合体を得る。
例えば、式３又は８の化合物を誘導体４又は９に変換
するための活性化方法は、式３又は８の化合物を酢酸エ
チル又はN,N−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、
N,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下でＮ
−ヒドロキシスクシンイミド又はその水溶性３−置換ナ
トリウムスルホン酸塩と反応させる。このような場合、
式４及び９においてＬは残基： を表し、Raは水素原子又は硫酸ナトリウム基を表す。
Ｔ−［COOH］x3型のキャリヤーを一般式７の化合物に
変換する活性化方法は、このようなキャリヤーをジメチ
ルホルムアミドのような溶媒中、N,N′−ジシクロヘキ
シルカルボジイミドの存在下でｐ−ニトロフェノールと
反応させる（この場合、Ｌ′はpNO2C6H5−Ｏ−を表す）
か、又はテトラヒドロフランもしくはジメチルホルムア
ミドのような溶媒中、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エ
トキシ−1,2−ジヒドロキノン（EEDQ）［B.Belleau et
al.,JACS,90 1651（1968）］と反応させる（この場
合、式７中、Ｌ′は残基： を表す）。
別の方法は、ナトリウム塩のような、キャリヤーＴ−
［COOH］x3のアルカリ塩を、水又はジメチルホルムアミ
ドのような溶媒中で（C1−C4）−アルキルハロカーボネ
ート、好ましくはエチルクロロカーボネート（C2H5O−C
OCl）のようなアルキルハロカーボネートと反応させ
る。その場合、式７中、残基Ｌ′は−COOC2H5を表す。
式１の複合体を製造するための縮合方法は、式３又は
８の誘導体と式Ｔ−［NH2］ｘのキャリヤーから出発
し、アミド型の共有結合を形成することが可能であり且
つキャリヤーの構造に適合可能な条件下で実施される。
水性溶媒又は有機溶媒中でのキャリヤーの化学的安定性
にしたがって、一般式4,5,6,9,10及び11の中間体との結
合反応のために種々の手順を使用することができる。有
機溶媒に対して感受性のキャリヤーの場合、好適条件
は、pH7〜9.5、温度４〜37℃の緩衝水溶液を数時間から
数日間使用する。
誘導体５を式Ｔ−［SH］x1のキャリヤーと縮合させる
ことにより式１の複合体を製造するための方法は、pH6
〜７、温度４℃の緩衝水溶液を数時間から数日間使用す
る条件下で実施される。
誘導体６を式Ｔ−［CHO］x2のキャリヤーと縮合させ
ることにより式１の複合体を製造するための方法は、オ
キシム又はヒドラゾン型の共有結合を形成することが可
能であり且つキャリヤーの構造に適合可能な条件下で実
施される。好適条件は、pH4〜7.5、温度４〜37℃の緩衝
水溶液を数時間から数日間使用する。
誘導体6,10又は11を式Ｔ−［CO−Ｌ′］ｙのキャリヤ
ーと縮合させることにより式１の複合体を製造するため
の方法は、アミド型の共有結合を形成することが可能で
あり且つキャリヤーの構造に適合可能な条件下で実施さ
れる。好適条件は、pH7〜9.5、温度４〜37℃の緩衝水溶
液を数時間から数日間使用する。
他の条件は、室温で１〜３時間無水ジメチルスルホキ
シド又はジメチルホルムアミドを使用する。
ここで「数時間から数日間」なる期間は４時間〜５日
間であり得る。
例えば、式４及び９の化合物と抗体Ｔ−［NH2］ｘと
の縮合に適切な条件は、モノクローナル抗体1mg/mlを含
有する0.1Mリン酸ナトリウム水溶液及び0.1M塩化ナトリ
ウム水溶液、pH8を24時間20℃で30倍モル当量の４又は
９のN,N−ジメチルホルムアミド10％w/v溶液で処理す
る。複合体をSephadex Ｇ−25（Pharmacia Fine Che
mical,Piscataway,N.H.）でゲル過により精製し、PBS
（リン酸緩衝食塩溶液）で溶離させる。
式５の化合物とチオール基を有する官能化抗体との結
合に適切な条件は、モノクローナル抗体1mg/mlを含有す
る0.1M酢酸ナトリウム水溶液及び0.1M塩化ナトリウム水
溶液、pH6を、24時間４℃で30倍モル当量の５の同一緩
衝液５％w/v溶液で処理する。複合体を上記のようにゲ
ル過により精製する。
式６の化合物とＴ−［COH］x2型のキャリヤーとの結
合に適切な条件は、モノクローナル抗体1mg/mlを含有す
る0.1M酢酸ナトリウム水溶液及び0.1M塩化ナトリウム水
溶液、pH6〜７を、24時間20℃で30倍モル当量の６の同
一緩衝液５％w/v溶液で処理する。複合体を上記のよう
にゲル過により精製する。
式6,10及び11の化合物と式７の活性化キャリヤーとの
縮合に適切な条件は、５〜50mg/mlの化合物6,10又は11
を含有するジメチルホルムアミドのような無水極性溶媒
を等量の化合物７で１〜24時間20℃で処理する。
一般式３の化合物並びに式4,5,6,9,10及び11の活性化
化合物は新規化合物であり、したがって、本発明の範囲
に含まれる。
化合物3,5,6,10及び11は中間化合物及び／又は治療薬
として活性な物質の両方として有用である。より詳細に
は、一般式３の中間化合物は、上記一般式Ａ−Ｏ−Ｈの
化合物の有用なプロドラッグである。式３の誘導体は図
式1: に示すプロセスにより製造され得る。この方法は、式Ａ
−Ｏ−Ｈの薬剤を式12: （式中、B,b,R1及びR2は上記と同義であり、R3はメチル
又はエチルのような保護基を表す）の１種のようなマス
クされたカルボキシ基を有する適切なエノールエーテル
誘導体と縮合させ、得られた化合物から保護基を除去す
ることからなる。
本発明を限定するものではないが、抗腫瘍性アントラ
サイクリンは一般式１の生物活性誘導体を生成するため
の適切なヒドロキシル化薬剤（Ａ−OH）の一例である。
アントラサイクリンの類のうちで、一般式（13）の
３′−デアミノ−３′−モルホリニル誘導体、例えば
３′−デアミノ−３′−（４−モルホリニル）ドキソル
ビシン（13a）又は３′−デアミノ−３′−（２−メト
キシ−４−モルホリニル）ドキソルビシン（13b）［E.
M.Acton et al;Morpholinyl Anthracyclines,Bioact
ive Molecules,Vol 6,J.W.Lown編,Elsevier,1988参
照］は選択化合物： Ａ−OH＝13a:R4OH,R5＝H Ａ−Ｏ−＝13a′:R4＝Ｏ−,R5＝Ｈ Ａ−OH＝13b:R4OH,R5＝OCH3 Ａ−Ｏ−＝13b′:R4＝Ｏ−,R5＝OCH3 を表す。
式13a,bのアントラサイクリンを上記のような一般式
３の新規な酸感受性誘導体に変換するには、上記式12の
化合物（式中、Rxはエチル基のような残基である）で処
理すればよく、後者の化合物は、J.A.Landgrebe et a
l.,J.Org.Chem,43,1244（1975）に記載されているよう
に、ケトン基を有する適切な化合物をジアゾ酢酸エチル
と反応させることにより製造される。アントラサイクリ
ン及び一級又は二級ヒドロキシル基を有する他の化合物
と化合物12との反応を実施するために好適な条件では、
ジメチルホルムアミドのような極性溶媒中で室温で数時
間から１日間ｐ−トルエンスルホン酸又はショウノウス
ルホン酸のようなスルホン酸触媒を使用する。式３の化
合物中でアントラサイクリンに結合した酸感受性部分の
マスクされたカルボキシル基を式４の化合物の活性化カ
ルボニル基に変換し、適切なキャリヤーとの結合を介し
て新規生物活性剤を製造する。場合により、一般式４の
アントラサイクリン誘導体を一般式5,6,8,9,10及び11の
誘導体に変換し、一般式１の新規生物活性剤を製造する
ための適切なキャリヤーと反応させてもよい。
上記のような治療薬として有用な薬剤をアントラサイ
クリンについて記載したと同様に式12の化合物と反応さ
せ、所定の哺乳動物疾患の治療用生物活性剤に転化させ
てもよい。
本発明の式１の生物活性剤は、ヒドロニウムイオン触
媒加水分解又はin vivo酵素切断後に親薬剤であるＡ−
OHを放出するアセタール結合を含むので、有用な治療剤
である。例えば、悪性腫瘍では正常組織に比較して解糖
の割合が高いことは周知である。このため、乳酸の産生
が増加し、腫瘍中のpHは低下する［H.M.Rauen et a
l.,Z.Naturforsch,Teil B,23（1968）1461］。
上記方法にしたがって製造される複合体は、種々の化
学的−物理的方法により特徴付けられる。例えば、元の
分子量を保持していること及び凝集物を形成しないこと
は、種々の波長でアントラサイクリン及び抗体を同時且
つ独立して検出するクロマトグラフィーゲル過（Yu,
D.S.et al.,J.Urol.140,415,1988）及びゲル電気泳動
法により確認される。得られる化合物の全体の電荷分布
はクロマトグラフィーイオン交換法により決定される。
アントラサイクリン濃度は、親アントラサイクリンから
得られる標準較正曲線に対する分光光度法な滴定により
決定される。タンパク質濃度は、ビシンコン酸アッセイ
（Smith,P.K.et al.,Anal.Biochem.150,76,1985）又は
Bradford染料アッセイ（Bradford,M.M.,Anal.Biochem.7
2,248,1976）のような比色アッセイにより決定される。
結合手順後の抗体の抗原結合活性維持は、ELISA法（Yu,
D.S.et al.,J.Urol.140,415,1988）及び細胞蛍光定量
法（Gallego,J.et al.,Int.J.Cancer33,737,1984）に
より決定される。親薬剤との比較における複合体の細胞
毒性維持の評価は、最大細胞毒性効果を解明するために
十分なインキュベーション時間後にターゲット細胞によ
る3H−チミジンの取り込み阻害試験（Dillmann,R.O.et
al.,Cancer Res,48,6097,1988）により決定される。
抗原陰性細胞系との比較における抗原陽性に対する複
合体の選択的細胞毒性の評価は、短時間インキュベーシ
ョン後の抗原陽性対抗原子陰性細胞系による3H−チミジ
ンの取り込み阻害試験（Dillmann,R.O.et al.,Cancer
Res,48,6096,1988）により決定される。
複合体の酸感度は、適切な緩衝溶液中で化合物をイン
キュベーションした後、上記クロマトグラフィー法によ
り評価される。
また、抗体部分（225I）及び／又はアントラサイクリ
ン部分（14C）における複合体の放射性標識及びHPLC分
析法を使用して血漿中での安定性を評価する。
生物学的活性 ４時間処理後の単一細胞平板培養技術（コロニーアッ
セイ）を使用して、化合物３′（実施例１で調製）ドキ
ソルビシン及び３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メ
トキシ−４−モルホリニル］ドキソルビシン（13b）と
比較しながら、LoVo（ヒト結腸腺癌）及びLoVo−DoXo耐
性（LoVo/DX）細胞に対してin vitroで試験した。濃度
応答曲線で50％阻害濃度（IC50）を計算した。表１に示
した結果から明らかなように、化合物３′の細胞毒性は
感受性細胞系及び耐性細胞系の両方でドキソルビシンよ
りも高いが、その親化合物13bに比較すると15〜20分の
１であった。ドキソルビシン及び化合物13bと比較しな
がら、P388−ドキソルビシン耐性白血病（P388/DX Joh
nson）を有するCDF−１マウスで化合物３をin vivoで
試験した。表２に報告するデータから明らかなように、
腫瘍接種後１日目に化合物３′を0.22mg/kgの容量で腹
腔内投与すると、非常に活性（T/C184％）であった。
細胞毒性薬剤３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メ
トキシ−４−モルホリニル］ドキソルビシンの残基が酸
感受性リンカーを介して結合している式１′,1″,1v,1
vi及び1vii（夫々実施例5,6,9,11及び12で調製）の複合
体を、ドキソルビシン及び遊離薬剤13bと比較しなが
ら、P388/DX Johnson白血病についてin vivoで試験し
た。表３に示すデータから明らかなように、腫瘍接種後
１日目に静脈内投与したすべての新規化合物は遊離薬剤
13bに等しい活性を維持している。LD50-100と最適用量
との比として表される治療指数は、全複合体とも遊離薬
剤13bよりも高い。
表４は、37℃でpH3（酢酸緩衝液）で複合体から放出
される３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−
４−モルホリニル］ドキソルビシン（13b）のｔ50％を
示す。
化合物の治療効果及び親化合物に比べての治療効果の
改良をヒト移植腫瘍の動物モデルで決定した。ヒト腫瘍
の異種移植片を有するヌードマウスを、適切な用量の複
合体、遊離薬剤、抗体及び薬剤と抗体の物理的混合物を
等用量で処理し、腫瘍増殖を記録し、種々の処理群につ
いて比較した。
複合体は医薬上許容可能なキャリヤー又は希釈剤を含
む医薬組成物として調合した。任意の適切なキャリヤー
又は希釈剤を使用できる。適切なキャリヤー及び希釈剤
は生理的食塩溶液及びリンゲルデキストロース溶液を含
む。
以下、実施例により本発明を非限定的に説明する。
実施例１ 14−Ｏ−（１−カルボキシメチルオキシ−シクロヘキ
シル）−３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ
−４−モルホリニル］ドキソルビシンの調製［３′;A−
Ｏ−＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝Ｈ］。
英国特許出願第8928654.6号に記載されているように
調製した３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ
−４−モルホリニル］ドキソルビシン（13b）（0.68g,1
mmol）を無水ジメチルホルムアミド（20ml）に溶解さ
せ、溶融ｐ−トルエンスルホン酸（50mg）の存在下で２
−（シクロヘキセン−１−イル）−オキシ酢酸エチル
［12′;b＝1,R3＝C2H5,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝Ｈ］
（6g,32mmol）で処理した。混合物を室温で２時間撹拌
後、炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、塩化メチレンで
抽出した。有機相を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
させ、過した。溶媒を減圧下に除去し、塩化メチレン
／メタノール（98/2容量）混合物を溶離系として使用し
てフラッシュケイ酸カラムで残渣をクロマトグラフィー
精製し、標記化合物３′のエステル誘導体（R3＝C2H5）
を得た。
これを窒素の存在下に１時間撹拌しながら０℃で0.1N
水酸化ナトリウム水溶液（200ml）で処理した。その
後、混合物を酢酸でpH8.2に調整し、ｎ−ブタノールで
抽出した。有機相を水洗し、減圧下に小容量に濃縮し、
塩化メチレン／メタノール（80/20容量）混合物を溶離
系として使用したケイ酸カラムでクロマトグラフィー精
製し、遊離酸誘導体として標記化合物３′（0.35g,収率
43％）を得、これを等量の塩酸で処理し、凍結乾燥し
た。
担体として珪藻土プレート（Merck）F254、溶離系と
して塩化メチレン／メタノール（95/5容量）を使用する
TLC、Rt＝0.13。MS−FD:m/e 783（Ｍ＋）。
1NMR（200MHz,DMSO d6）δ:1.12（d,J＝6.4Hz,3H,CH
3−５′）； 2.0p2.7（m,7H,CH2−8,O−CH2CH2−N,O−CH−CH2−N,H
−３′）;2.94（s,2H,CH2−10）;3.24（s,3H,CH−OC
H3）;3.40,3.73（m,2H,NCH2CH2O）;3.57（m,1H,H−
４′）;3.91（s,2H,OCH2COOH）;3.97（s,3H,OCH3−
４）;4.04（dq,J＝6.4,1.0Hz,1H,H−５′）;4.35（dd,J
＝2.2,5.2Hz,1H,OCH−OCH3）;4.61（s,2H,CH2−14）;4.
92（m,1H,H−７）;5.24（m,1H,H−１′）;7.6P7.9（m,3
H,H−1,H−2,H−３）;13.20（bs,1H,OH−11）;14.02
（s,1H,OH−６）。
実施例２ 14−Ｏ−（１−カルボキシメチルオキシシクロヘキシ
ル）−３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−
４−モルホリニル］ドキソルビシンのＮ−オキシスクシ
ンイミジル誘導体の調製［４′;A−Ｏ−＝13b′,b＝1,B
＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H, 実施例１に記載したように調製した化合物３′（0.2
g,0.25mmol）を無水ジメチルホルムアミド（8ml）に溶
解させ、０℃に冷却し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
（0.2g）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（0.4g）
で処理した。混合物を０℃で２時間維持し、その後、室
温で一晩放置した。その後、混合物を減圧下で小容量に
濃縮し、塩化メチレン／メタノール（97/3容量）混合物
を溶離系として使用してフラッシュケイ酸カラムでクロ
マトグラフィー精製した。標記化合物を含有する溶離液
を減圧下に濃縮乾涸させ、その後、残渣を酢酸エチルに
とり、過し、減圧下で小容量に濃縮した。最後に、エ
チルエーテルを加え、標記化合物４′（0.130g）をガラ
ス漏斗で集め、エチルエーテルで洗い、窒素雰囲気下に
保存した。
担体として珪藻土プレート（Merck）F254、溶離系と
して塩化メチレン／メタノール（95/5容量）を使用する
TLC、Rt＝0.37。MS−FD:m/e 864（Ｍ＋）。
実施例３ 14−Ｏ−（１−ヒドラジノカルボニルメチルオキシシ
クロヘキシル）−３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−
メトキシ−４−モルホリニル］ドキソルビシンの調整
［６′,A−Ｏ−＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2
＝H,d＝０］。
実施例２に記載したように調製した化合物４′（20m
g）をテトラヒドロフラン（5ml）に溶解させ、ヒドラジ
ン水和物の１Μイソプロパノール溶液を加えた。混合物
を０℃で70分間維持した。その後、塩化メチレンを加
え、混合物を冷水で３回洗った。有機層を分離し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥させ、過し、溶媒を減圧下に除
去した。塩化メチレン／メタノール（99/1容量）混合物
を溶離系として使用したケイ酸カラムで残渣をクロマト
グラフィー精製した。化合物６′（20mg）をエチルエー
テルで沈殿させた。
担体として珪藻土プレート（Merck）F254、溶離系と
して塩化メチレン／メタノール（95/5容量）を使用する
TLC、Rt＝0.25。MS−FD:m/e 797（Ｍ＋）。
1NMR（200MHz,DMSO d6）δ:1.36（d,J＝6.6Hz,3H,CH
3−５′）； 1.76（m,2H,CH2−２′）;2.30（m,2H,CH2−８）;2.50
（m,1H,H−３′）;2.55（m,4H,N−CH2−CH（OCH3）,N−
CH2−CH2−Ｏ）;2.98（d,J＝18.8Hz,1H,H−10ax）;3.22
（dd,J＝1.0,18.8Hz,1H,H−10e）;3.39（s,3H,CH（OC
H3））;3.55,3.95（m,2H,NCH2CH2O）;3.70（m,1H,H−
４′）;3.95（m,1H,H−５′）;4.09（s,3H,CH3−Ｏ−
４）;4.10（m,2H,O−CH2CONH）;4.50（m,1H,NCH2−CH
（OCH3））;4.67（s,2H,CH2−14）； 5.28（m,1H,H−７）;5.54（m,1H,H−１′）;7.64（b
s,1H,CONHNH2）;7.78（t,J＝7.9Hz,1H,H−２）;8.04
（d,J＝7.9Hz,1H,H−１）;13.32（s,1H,OH−11）;13.98
（s,1H,OH−６）。
実施例４ 14−Ｏ−（１−（４−カルボキシ−１−ｎ−ブチル）
カルバモイルメチルオキシ−１−シクロヘキシル）］−
３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−モ
ルホリニル］ドキソルビシンの調製［８′,A−Ｏ−＝13
b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H,g＝４］。
γ−アミノブチル酸（15mg,0.15mmol）を0.05Μリン
酸緩衝pH7.6（2.5ml）に溶解させ、実施例２に記載した
ように調製した化合物４′（30mg,0.033mmol）のアセト
ニトリル（3ml）溶液を加えた。混合物を室温に一晩維
持し、その後、酢酸でpH6に調整し、ｎブタノールで抽
出した。有機層を分離し、真空下に蒸発させた。塩化メ
チレン／メタノール（99/5容量）混合物を溶離系として
使用してケイ酸カラムで残渣をクロマトグラフィー精製
し、20mgの標記化合物８′を得た。担体として珪藻土プ
レート（Merck）F254、溶離系として塩化メチレン／メ
タノール（95/1容量）を使用するTLC、Rt＝0.55。MS−F
D:m/e 884（Ｍ＋）。
実施例５ 式１′のポリグルタミン酸複合物の調製［１′:A−Ｏ
−＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H,Z＝−NH
−NH−CO−,a＝2,T＝ポリ−Ｌ−グルタミン酸］。
分子量2000〜15000のポリ−Ｌ−グルタミン酸（Sigm
a）（85mg）及び実施例３に記載したように調製した化
合物６′（20mg）をジメチルホルムアミド（2ml）に溶
解させ、３時間撹拌した。その後、Ｎ−エトキシカルボ
ニル−２−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリン（25mg）
を加えた。混合物を撹拌下に一晩維持し、その後、エチ
ルエーテルと石油エーテルとの混合物に注いだ。沈殿を
ガラスフィルターで集め、エチルエーテルで洗い、炭酸
水素ナトリウムの2.5％水溶液（8ml）で溶解させた。溶
液を逆相カラムRP−8,40−63μｍ（Merck）（30×1.8c
m）に通し、水とアセトニトリルとの混合物（０〜20％
のアセトニトリル）で溶離させた。複合体を含有する溶
離物を凍結乾燥させ、その後、ガラスフィルターで集
め、メタノール及びエチルエーテルで洗い、標記化合物
１′（45mg）を得た。分光測定によると、複合体は式13
bのメトキシモルホリノ13％を含有する。
実施例６ 式１″のポリ（GluNa,Ala,Tyr）−複合体の調製
［１″:A−Ｏ−＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2
＝H,Z＝−NH−NH−CO−,a＝2,T＝ポリ（GluNa,Ala,Ty
r）］。
実施例５に記載した同一手順に従い、分子量25000〜5
0000のポリ（GluNa,Ala,Tyr）（1:1:1）（Sigma）（60m
g）及び実施例３に記載したように調製した化合物６′
（20mg）をジメチルホルムアミド（2ml）に溶解させ、
３時間撹拌し、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ
−1,2−ジヒドロキノリン（25mg）で処理し、逆相カラ
ム精製後、35mgの標記化合物１″を得た。
実施例７ 式１の抗メラノーマ複合体の調製［１:A−Ｏ−＝
13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H,Z＝−NH−,T
＝Epl］。
実施例２に記載した化合物４′のN,N−ジメチルホル
ムアミド（37.5mcl）10-2M溶液を、精製マウスモノクロ
ーナル抗体ヒトメラノーマ抗体Ep1［Giacomini,P.et a
l.,Int.J.Cancer 39 729（1978）］を0.1M NaH2PO4,
0.1M NaCl,pH8に溶解してなる2mg/ml溶液1mlに室温で
撹拌下にゆっくりと加えた。反応混合物を暗所で室温で
一晩撹拌し、遠心分離した。PBS（Gibco,10×,Cat.N.04
2−04200M）pH7.3を溶離剤としてSephadex−G25（PD−1
0,Pharmacia）でゲル過クロマトグラフィーにより複
合体を単離した。分別したピークを集め（1.5ml）、ア
ンスラサイクリン含有量を480nmで分光分析によりアッ
セイした。タンパク質含有量を比色タンパク質分析（BC
A,Pierce）でアッセイした。複合体は11.4/1.0のアンス
ラサイクリン／タンパク質比で1.27mg/mlの抗体を含有
していた。生成物の化学物理的プロフィルを、二波長検
出（280及び480nm）を伴うHPLC−ゲル過分析（BioSil
SEC−250カラム、0.1M NaH2PO4,0.1M NaCl,pH7.0）
及びSDS−PAGEにより決定した。HPLCにより、カラム空
容量で溶離する50％のタンパク質凝集物の形成が検出さ
れた。
SDS−PAGEによると、アンスラサイクリン吸収及びク
ーマシー染料タンパク質反応のいずれも160kDの分子量
に位置しており、共有結合形成と非共有相互作用による
凝集物形成とが確認された。
実施例８ 式1ivの抗結腸癌複合体の調製［1iv:A−Ｏ−＝13b′,
b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H,Z＝−NH−NH−,T＝B
72.3］。
B72.3抗体（US−Ａ−4,522,918）を0.1M NaH2PO4,pH
6緩衝液（1ml）に2.6mg/mlの濃度で溶解してなる溶液
を、暗所で４℃でNaIO4の0.1M水溶液0.1mlで処理した。
１時間後、0.1M NaH2PO4緩衝液,pH6を溶離剤としてSep
hadex G25カラム（PD−10,Pharmacia）でゲル過クロ
マトグラフィーにより生成物を精製した。
タンパク質を含有するフラクション（1.7mg,2ml）
を、実施例３に記載した化合物６′と同一緩衝液中10％
w/v溶液30倍モル当量で処理した。暗所で37℃で24時間
後、反応混合物を実施例７に記載したように精製した。
複合体は2.4/1のアンスラサイクリン／タンパク質比
で0.48mg/mlの抗体を含有しており、モノマー含有率は8
5％であった。
実施例９ ３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン
及び14−Ｏ−｛１−［４−Ｎ−メタクリロイルグリシル
フェニルアラニルロイシルグリシル）ビドラジノ］−カ
ルボニルメチルオキシシクロヘキシル｝−３′−デアミ
ノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−モルホリニル］
ドキソルビシン（1v）のコポリマーの調製［1v:A−Ｏ−
＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H,Z＝−NHNH
−CO,T＝HPMA,X＝Gly−Phe−Leu−Gly］。
３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン
及びＮ−メタクリロイルグリシルフェニルアラニルロイ
シルグリシンの４−ニトロフェニルエステルのラジカル
重合により、J.Kopecek et al.,Makromol.Chem.177,2
833−2848（1976）に記載されているように調製したコ
ポリマーHPMA［Ｘ＝Gly−Phe−Lue−Gly,P＝OC6H4pNO2
含有量（mol/mol％）4.2％］0.58gを、実施例３に記載
したように調製した誘導体６′（0.1g）と共に無水ジメ
チルスルホキシド（15ml）に溶解させた。室温で２日
後、１−アミノ−２−プロパノール（0.4ml）を加え、
反応混合物をアセトンとエチルエーテルの1/1（v/v）混
合物（300ml）に注いだ。沈殿を集め、95％エタノール
（10ml）に再溶解させ、アセトン（80ml）で標記化合物
1vを沈殿させ、これを収集してエーテルで洗った。
収量:0.51g。
３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−
モルホリニル］ドキソルビシン塩酸塩（13a）として計
算したアンスラサイクリンの含有量（w/w％）:3.3％。
式1v中の％モル比（r:s:t）＝（95.7:0.79:3.52）。
実施例10 14−Ｏ−（ピペラジノカルボニルメチルオキシシクロ
ヘキシル）−３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メト
キシ−４−モルホリニル］ドキソルビシンの調製［1
1′:A−Ｏ−＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝
Ｈ］。
実施例２に記載したように調製した化合物４（100m
g）を無水テトラヒドロフラン（20ml）に溶解させ、０
℃に冷却し、ピペラジン（50mg）の無水テトラヒドロフ
ラン（2ml）溶液を加えた。反応混合物を℃で15分間撹
拌し、その後、塩化メチレン（100ml）で希釈し、水洗
（３×50ml）した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、溶媒を減圧下に除去した。塩化メチレン
／メタノール（80/20容量）混合物を溶離系として使用
してケイ酸カラムで粗生成物をクロマトグラフィー精製
した。化合物11′（80mg）をエチルエーテルで沈殿させ
た。
担体として珪藻土プレート（Merck）F254、溶離系と
して塩化メチレン／メタノール（70/30容量）を使用す
るTLC、Rt＝0.60。FD−MS:m/z 868（100,［Ｍ＋
Ｈ］＋）。
1HNMR（200MHz,CDCl3）δ:1.35（d,J＝6.6Hz,3H,5′
−CH3）； 1.3−1.9（m,12H,2′−CH2,シクロヘキサン）;2.11
（dd,J＝4.2,14.6Hz,1H,8ax−Ｈ）;2.3−2.5（m,5H,8eq
−H,3′−H,3″ax−H,5″−CH2）;2,60（dd,J＝3.9,11.
2Hz,1H,3″eq−Ｈ）;2.86（m,4H,CH2−NH−CH2）； 3.00（d,J＝18.9Hz,1H,10ax−Ｈ）;3.23（dd,J＝1.2,
18.9Hz,1H,10eq−Ｈ）;3.37（s,3H,2″−OCH3）;3.4−
3.6（m,5H,CON（CH2）2,6″ax−Ｈ）;3.90（m,1H,6″eq
−Ｈ）;3.98（q,J＝6.6Hz,1H,5′−Ｈ）;4.07（s,3H,4
−OCH3）;4.18（s,2H,OCH2CON）;4.48（dd,J＝2.5,3.9H
z,1H,2″eq−Ｈ）;4.79（m,2H,14−CH2）;5.24（m,1H,7
−Ｈ）;5.53（m,1H,1′−Ｈ）;7.37（d,J＝7.7Hz,1H,3
−Ｈ）;7.76（dd,J＝7.7,6.8Hz,1H,2−Ｈ）;8.02（d,J
＝6.8Hz,1H,1−Ｈ）;13.30（bs,1H,11−OH）;13.98（s,
1H,6−OH）。
実施例11 ３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン
及び14−Ｏ−｛１−［４−［Ｎ−メタクリロイルグリシ
ル）ピペラジン−１−イル］−カルボニルメチルオキシ
シクロヘキシル｝−３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）
−メトキシ−４−モルホリニル］ドキソルビシンのコポ
リマー（1vi）の調製［1Vi:A−Ｏ−＝13b′,b＝1,B＝−
（CH2）２−,R1＝R2＝H,Z＝［1,4−ピペラジニル］−CO
−,T＝HPMA及びＸ＝HN−CH2−CO−］。
３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン
とＮ−メタクリロイルグリシルの４−ニトロフェニルエ
ステルのラジカル重合により、J.Kopecek et al.,Mak
romol.Chem.177,2833−2848（1976）に記載されている
ように調製したコポリマーHPMA［Ｘ＝NH−CH2−CO−,P
＝OC6H4pNO2含有量（mol/mol％）7.6％］0.42gを無水ジ
メチルスルホキシド（2.2ml）に溶解させ、実施例10に
記載したように調製した誘導体11′（0.07g）と反応さ
せた。室温で２時間後、１−アミノ−２−プロパノール
（0.05ml）を加え、反応混合物をアセトンとエチルエー
テルの1/1（v/v）混合物（200ml）に注いだ。沈殿を収
集して95％エタノール（10ml）に再溶解させ、アセトン
（80ml）で標記化合物1viを沈殿させ、収集し、エーテ
ルで洗った。
収量:0.39g。
３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−
モルホリニル］ドキソルビシン塩酸塩（13a）として計
算したアンスラサイクリンの含有量（w/w％）:9.74％。
式1vi中の％モル比（r:s:t）＝（92.4:2.15:5.45）。
実施例12 ３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン
及び14−Ｏ−｛１−［４−（６−メタクリロイルアミノ
カプロイル）ピペラジン−１−イル］−カルボニルメチ
ルオキシシクロヘキシル｝−３′−デアミノ−３′−
［２（Ｓ）−メトキシ−４−モルホリニル］ドキソルビ
シンのコポリマー（1vii）の調製［1vii:A−Ｏ−＝13
b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R2＝H,Z＝［1,4−ピペ
ラジニル］−CO−,T＝HPMA及びＸ＝HN−（CH2）５−CO
−］。
３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパン
及び４−ニトロフェニルＮ−メタクリロイルアミノカプ
ロネートのラジカル重合により、J.Kopecek et al.,M
akromol.Chem.177,2833−2848（1976）に記載されてい
るように調製したコポリマーHPMA［Ｘ＝NH−（CH2）５
−CO−,P＝OC6H4pNO2含有量（mol/mol％）5.3％］0.6g
を無水ジメチルスルホキシド（3ml）に溶解させ、実施
例10に記載したように調製した誘導体11′（0.1g）と反
応させた。室温で２時間後、１−アミノ−２−プロパノ
ール（0.1ml）を加え、反応混合物をアセトンとエチル
エーテルの1/1（v/v）混合物（200ml）に注いだ。
実施例11に記載した同一手順にしたがい、0.58gの標
記化合物1viiを回収した。
３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−
モルホリニル］ドキソルビシン塩酸塩（13a）として計
算したアントラサイクリンの含有量（w/w％）:9.2％。
式1vi中の％モル比（r:s:t）＝（94.7:2.05:3.31）。
実施例13 ポリ（Glu−Na,Ala,Tyr）（1:1:1）及び14−Ｏ−（ピ
ペラジノカルボニルメチルオキシシクロヘキシル）−
３′−デアミノ−［２（Ｓ）−メトキシ−４−モルホリ
ニル］ドキソルビシンの複合体（1viii）の調製
［1viii:A−Ｏ−＝13b′,b＝1,B＝−（CH2）２−,R1＝R
2＝H,Z＝［1,4−ピペラジニル］−CO−,T＝ポリ（Glu−
Na,Ala,Tyr）］。
分子量25000〜40000のポリ（Glu−Na,Ala,Tyr）（1:
1:1）（Sigma）（0.2g）を室温で撹拌下に水（5ml）に
溶解させた。0.1N HClでpH3に酸性化させることによ
り、対応する遊離酸を水溶液から沈殿させた。
ポリ（Glu−OH,Ala,Tyr）（0.17g）を回収して真空下
に乾燥させ、無水ジメチルホルムアミド（10ml）に溶解
させ、実施例10に記載したように調製した14−Ｏ−（ピ
ペラジノカルボニルメチルオキシシクロヘキシル）−
３′−デアミノ−［２（Ｓ）−メトキシ−４−モルホリ
ニル］ドキソルビシン（11″）（0.035g）及びＮ−エト
キシカルボニル−２−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリ
ン（EEDQ）（0.08g）を加えた。EEDQの別のアリコート
（0.08g）を３時間後に加えた。反応混合物を室温で一
晩撹拌し、その後、エチルエーテル（300ml）に注い
た。沈殿を水（10ml）に懸濁させ、0.1N NaOH（14ml）
で処理した。溶液を0.1N HClでpH8.5に調整し、Sephad
ex G10のカラムに通した。水溶液を凍結乾燥し、0.16g
の標記化合物1viiiを得た。
３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−
モルホリニル］ドキソルビシン塩酸塩（13a）として計
算したアントラサイクリンの含有量（w/w％）:10％。式
1viiiの化合物中の％モル比（r:s:t:u）＝（31.33:2.0
1:33.33:33.33）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｈ 17/00 Ｃ０７Ｈ 17/00 (72)発明者 カルーソ，ミケーレ イタリー国、20131・ミラン、ビア・デ ジデリオ、３ (72)発明者 リパモンテイ，マリナ イタリー国、20162・ミラン、ビア・フ ルビオ・テステイ、91 (72)発明者 ルツジエリ，ダニエラ イタリー国、20156・ミラン、ビア・ポ リドーロ・ダ・カラバツジオ、15 (72)発明者 スアラート，アントニーノ イタリー国、20158・ミラン、ビア・デ リイ・インブリアーニ、39 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 31/70 A61K 39/395 A61K 47/48 C07H 15/252 C07H 17/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (30)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】一般式1: ［Ａ−Ｏ−Ｗ−Ｚ］ａ−Ｔ １ 〔式中、Ａ−Ｏ−部分は式Ａ−Ｏ−Ｈの抗腫瘍剤の残基
    であり、−Ｏ−Ｈは一級又は二級ヒドロキシル基であ
    り、ａは１〜30の整数であり、Ｗは一般式2: （式中、ｂは１〜４の整数であり、ＢはC1−C3アルキレ
    ン基であり、R1及びR2は各々独立して水素、ハロゲン、
    アルキル、非置換フェニル又はハロゲン若しくはC1−C4
    アルキルで置換されたフェニルである）の基であり、Ｚ
    はスペーサー基であり、Ｔはキャリヤー部分であり、た
    だしキャリヤー部分Ｔは、腫瘍関連抗原に結合すること
    が可能なポリクローナル抗体又は抗原結合部位を含むそ
    のフラグメント、腫瘍細胞集団で優先的又は選択的に発
    現される抗原に結合することが可能なモノクローナル抗
    体又は抗原結合部位を含むそのフラグメント、腫瘍細胞
    に優先的又は選択的に結合することが可能なペプチド又
    はタンパク質、及びポリマーキャリヤーから選択され
    る〕の複合体。
  2. 【請求項２】Ａ−Ｏ−部分が式Ａ−Ｏ−Ｈのアントラサ
    イクリンから誘導されることを特徴とする請求項１に記
    載の複合体。
  3. 【請求項３】Ａ−Ｏ−部分が、 （式中、R10は水素原子、ヒドロキシ基又はメトキシ基
    であり、R11及びR12は一方が水素原子であり且つ他方が
    ヒドロキシ基であるか又はR11が水素もしくはヨウ素原
    子であり且つR12が水素原子であり、R13はアミノ基又は
    モルホリノ環に含まれる窒素原子である）を表すことを
    特徴とする請求項２に記載の複合体。
  4. 【請求項４】ａが１〜５の整数であることを特徴とする
    請求項１に記載の複合体。
  5. 【請求項５】Ｂが−（CH2）２−を表すことを特徴とす
    る請求項１に記載の複合体。
  6. 【請求項６】Ｚが、 （ｉ）−NH−； （ii）−NH−（CH2）ｃ−Ｓ−Ｓ−（式中、ｃは１〜４
    の整数である）； （iii）−NH−［Ｃ］ｄ−Ｎ＝CH−（式中、 ａ）ｄは０であるか、 ｂ）ｄは１であり且つ［Ｃ］は−NH−CO（CH2）ｅ−CO
    −NH−であり、ｅは２〜４の整数であるか、 ｃ）ｄは１〜４の整数であり且つ［Ｃ］は−（CH2）ｆ
    −Ｏ−（CH2）ｆ−であり、ｆは１又は２であるか、又
    は ｄ）ｄは２〜６の整数であり且つ［Ｃ］はCH2であ
    る）； （iv）−NH−［Ｃ］ｄ−NH−CO（式中、［Ｃ］及びｄは
    上記と同義である）； （ｖ）−［Ｄ］−NH−（式中、［Ｄ］は−NH−［CH2］
    ｇ−COであり、ｇは２〜６の整数である）； （vi）−［Ｅ］−CO（式中、［Ｅ］は−NH−（CH2）ｇ
    −NH−であり、ｇは２〜６の整数である）； （vii）式： のピペラジニルカルボニル部分 であることを特徴とする請求項１に記載の複合体。
  7. 【請求項７】キャリヤー部分Ｔが抗Ｔ細胞抗体、抗CD5
    抗体、抗トランスフェリンレセプター抗体、抗メラノー
    マ抗体、抗癌マーカー抗体、抗卵巣癌抗体、抗乳癌抗体
    及び抗膀胱癌抗体から選択されることを特徴とする請求
    項１に記載の複合体。
  8. 【請求項８】キャリヤー部分Ｔが成長因子であることを
    特徴とする請求項１に記載の複合体。
  9. 【請求項９】請求項１に記載の式１の複合体の製造方法
    であって、式3: Ａ−Ｏ−Ｗ−OH ３ （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは上記と同義である）の誘導体
    を、前記スペーサー基Ｚ及びキャリヤー部分Ｔをもたら
    すことが可能な物質と縮合させ、こうして前記複合体を
    形成することを特徴とする方法。
  10. 【請求項１０】縮合が、式３の誘導体の活性化誘導体を
    介して又は縮合剤の存在下で直接反応により実施される
    ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
  11. 【請求項１１】式３の誘導体を式4: Ａ−Ｏ−Ｗ−Ｌ ４ （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは請求項９に記載した意味を有
    し、Ｌはアミド結合を形成するための活性化基を表す）
    の活性化誘導体に変換し、 （ｉ′）得られた式４の化合物を式Ｔ−［NH2］ｘ（式
    中、Ｔは請求項１で定義したキャリヤー部分であり、ｘ
    は縮合に有効なアミノ基の数を表す）の物質と縮合させ
    るか、又は （ii′）式４の化合物を式NH2−（CH2）ｃ−SH（式中、
    ｃは１〜４の整数である）のチオール誘導体と縮合さ
    せ、得られた式5: Ａ−Ｏ−Ｗ−NH−（CH2）ｃ−SH ５ （式中、Ａ−Ｏ−,W及びＣは上記と同義である）の化合
    物を式Ｔ−［SH］x1（式中、Ｔは上記と同義であり、x1
    は縮合に有効なチオール基の数を表す）の物質と縮合さ
    せるか、又は （iii′）式４の化合物をヒドラジン、スクシンジヒド
    ラジン誘導体、アジピンジヒドラジン誘導体もしくはジ
    アミノ化合物と反応させ、得られた式6: Ａ−Ｏ−Ｗ−NH−［Ｃ］ｄ−NH2 ６ （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは請求項１に記載した意味を有
    し、［Ｃ］及びｄは請求項６に記載した意味を有する）
    の化合物を式Ｔ−［CHO］x2（式中、Ｔは請求項１で定
    義したキャリヤー部分であり、x2は縮合に有効なホルミ
    ル基の数を表す）の物質と縮合させることを特徴とする
    請求項９に記載の方法。
  12. 【請求項１２】請求項11に記載したように製造した一般
    式６の化合物を、場合により縮合剤の存在下で、式7: Ｔ−［CO−Ｌ′］ｙ ７ （式中、Ｔは請求項１で定義したキャリヤー部分であ
    り、ｙは１〜30の整数であって、キャリヤー部分上のカ
    ルボキシル基の合計数を表し、Ｌ′はヒドロキシ又はア
    ミド結合を形成するための活性化基である）の物質と縮
    合させる段階（iv′）を含むことを特徴とする請求項９
    に記載の方法。
  13. 【請求項１３】式３の化合物を式H2N−［CH2］ｇ−COOH
    （式中、ｇは２〜６の整数である）のアミノ誘導体と縮
    合させ、式8: Ａ−Ｏ−Ｗ−［Ｄ］−OH ８ （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは請求項１に記載した意味を有
    し、［Ｄ］は請求項６に記載した意味を有する）の誘導
    体を形成し、場合により式８の化合物を式9: Ａ−Ｏ−Ｗ−［Ｄ］−Ｌ ９ （式中、Ａ−Ｏ−,W及び［Ｄ］は上記と同義であり、Ｌ
    はアミド結合を形成するための活性化基である］の活性
    化誘導体に変換し、得られた式９の化合物又は式８の化
    合物を縮合剤の存在下で請求項11に記載の式Ｔ−［N
    H2］ｘの物質と縮合させる段階（ｖ′）を含むことを特
    徴とする請求項９に記載の方法。
  14. 【請求項１４】（vi′）式４の化合物を式H2N−（CH2）
    ｇ−NH2のアミノ誘導体（ｇは請求項６に記載した意味
    を有する）と反応させ、式10: Ａ−Ｏ−Ｗ−［Ｅ］−Ｈ 10 （式中、Ａ−Ｏ−及びＷは請求項９に記載した意味を有
    し、［Ｅ］は請求項６に記載した意味を有する）の誘導
    体を形成するか、又は （vii′）式４の化合物をピペラジンと反応させ、式11: Ａ−Ｏ−Ｗ−［ピペラジン］−Ｈ 11 の誘導体を形成し、上記式10又は11の化合物を請求項12
    に記載の式７の物質と縮合させる ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
  15. 【請求項１５】医薬上許容可能なキャリヤー又は希釈剤
    と、有効成分として請求項１に記載の複合体又は請求項
    ９から14のいずれか一項に記載の方法により製造された
    複合体を含有する抗腫瘍目的に使用するための医薬組成
    物。
  16. 【請求項１６】請求項９に記載の式３の誘導体。
  17. 【請求項１７】14−Ｏ−（１−カルボキシメチルオキシ
    シクロヘキシル）−３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）
    −メトキシ−４−モルホリニル］ドキソルビシンである
    ことを特徴とする請求項16に記載の誘導体。
  18. 【請求項１８】請求項16に記載の式３の誘導体の製造方
    法であって、式Ａ−Ｏ−Ｈ（式中、Ａ−Ｏ−は請求項１
    に記載の意味を有する）の薬剤を式12: （式中、B,b,R1及びR2は請求項１に記載した意味を有
    し、R3は保護基を表す）の化合物と縮合させ、こうして
    形成された化合物から前記保護基を除去することを特徴
    とする方法。
  19. 【請求項１９】請求項11に記載の式４の誘導体。
  20. 【請求項２０】Ｎ−オキシスクシンイミジル−14−Ｏ−
    （１−カルボキシメチルオキシ−シクロヘキシル）−
    ３′−デアミノ−３′−［２（Ｓ）−メトキシ−４−モ
    ルホリニル］ドキソルビシンであることを特徴とする請
    求項19に記載の誘導体。
  21. 【請求項２１】請求項19に記載の式４の誘導体の製造方
    法であって、請求項18に記載の式３の誘導体を式４の誘
    導体に変換することを特徴とする方法。
  22. 【請求項２２】請求項11に記載の式５の誘導体。
  23. 【請求項２３】請求項22に記載の式５の誘導体の製造方
    法であって、請求項11に記載の方法により式３の誘導体
    から式５の誘導体を製造することを特徴とする方法。
  24. 【請求項２４】請求項11に記載の式６の誘導体。
  25. 【請求項２５】14−Ｏ−（１−ヒドラジノカルボニルメ
    チルオキシ−シクロヘキシル）−３′−デアミノ−３′
    −［２（Ｓ）−メトキシ−４−モルホリニル］ドキソル
    ビシンであることを特徴とする請求項24に記載の誘導
    体。
  26. 【請求項２６】請求項24に記載の式６の誘導体の製造方
    法であって、請求項11に記載の方法により式３の誘導体
    から式６の誘導体を製造することを特徴とする方法。
  27. 【請求項２７】請求項13に記載の式９の誘導体。
  28. 【請求項２８】請求項27に記載の式９の誘導体の製造方
    法であって、請求項13に記載の方法により式３の誘導体
    から式９の誘導体を製造することを特徴とする方法。
  29. 【請求項２９】請求項14に記載の式10又は11の誘導体。
  30. 【請求項３０】請求項29に記載の式10又は11の誘導体の
    製造方法であって、請求項14に記載の方法により式４の
    誘導体から式10又は11の誘導体を製造することを特徴と
    する方法。
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