CS239883B1 - Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745 - Google Patents

Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745 Download PDF

Info

Publication number
CS239883B1
CS239883B1 CS841348A CS134884A CS239883B1 CS 239883 B1 CS239883 B1 CS 239883B1 CS 841348 A CS841348 A CS 841348A CS 134884 A CS134884 A CS 134884A CS 239883 B1 CS239883 B1 CS 239883B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
alkaloids
strain
ergocryptine
sclerotia
ccm
Prior art date
Application number
CS841348A
Other languages
English (en)
Other versions
CS134884A1 (en
Inventor
Pavel Harazim
Zdenek Malinka
Alois Krajicek
Jiri Spacil
Jiri Bohac
Josef Valik
Jan Bremek
Milena Cernouskova
Original Assignee
Pavel Harazim
Zdenek Malinka
Alois Krajicek
Jiri Spacil
Jiri Bohac
Josef Valik
Jan Bremek
Milena Cernouskova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pavel Harazim, Zdenek Malinka, Alois Krajicek, Jiri Spacil, Jiri Bohac, Josef Valik, Jan Bremek, Milena Cernouskova filed Critical Pavel Harazim
Priority to CS841348A priority Critical patent/CS239883B1/cs
Publication of CS134884A1 publication Critical patent/CS134884A1/cs
Publication of CS239883B1 publication Critical patent/CS239883B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Řešení se týká oborů mikrobiologie a farmaceutického průmyslu. Účelem je zlepšení surovinové základny pro výrobu zejména argokorninu, dále ostatních alkaloidů ergotoxinové skupiny a pro výrobu polosyntetických alkaloidu. Jako surovinová základna slouží sklerocia námele, obsahující námelové alkaloidy. Uvedeného účelu se dosáhne použitím sklerocií nového průmyslového kmene mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-745, která obsahuje námelové alkaloidy v množství 0,30 až 0,89 % (průměrný obsah 0,48 ;'.') při příslušných výrobách. Ve sklerociích je minimálně 70 % sumy alkaloidů tvořeno ergokorninem a minimálně 12 % sumy alkaloidu tvořeno alfa-ergokryptinem a beta-ergokryptinem s průměrným vzájemným poměrem 1,8 : 1. Nový průmyslový kmen se dále vyznačuje schopností poskytovat při parazitiokem růstu na žitě za užití recentní agrotechaiky velmi vysoké hektarové výnosy v rozmezí 692 až 1 118 kg.

Description

(54) Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu
Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745
Řešení se týká oborů mikrobiologie a farmaceutického průmyslu. Účelem je zlepšení surovinové základny pro výrobu zejména argokorninu, dále ostatních alkaloidů ergotoxinové skupiny a pro výrobu polosyntetických alkaloidu. Jako surovinová základna slouží sklerocia námele, obsahující námelové alkaloidy. Uvedeného účelu se dosáhne použitím sklerocií nového průmyslového kmene mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-745, která obsahuje námelové alkaloidy v množství 0,30 až 0,89 % (průměrný obsah 0,48 ;'.') při příslušných výrobách. Ve sklerociích je minimálně 70 % sumy alkaloidů tvořeno ergokorninem a minimálně 12 % sumy alkaloidu tvořeno alfa-ergokryptinem a beta-ergokryptinem s průměrným vzájemným poměrem 1,8 : 1. Nový průmyslový kmen se dále vyznačuje schopností poskytovat při parazitiokem růstu na žitě za užití recentní agrotechaiky velmi vysoké hektarové výnosy v rozmezí 692 až 1 118 kg.
239 883
- 1 23S 883
Vynález se týká nového průmyslového kmene mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL., vyznačujícího se při polní kultivaci na žitě velmi vysokými hektarovými výnosy námelových sklerocií s vysokým obsahem ergokorninu a s doprovodnými žádoucími alkaloidy alfa-ergokryptinem a beta-ergokryptinem. ve výhodném poměru.
Ergokornin, alfa-ergokryptin a beta-ergokryptin jsou alkaloidy ergotoxinové skupiny a jsou významnými léčivými substancemi. Mohou být použity i jako výchozí látky pro přípravu polosyntetických derivátů námelových alkaloidů s rozšířeným spektrem účinků. Strukturu námelových alkaloidů ergokorninu a alfa-ergokryptinu popsali poprvé Stolí a Hofinann (Helv. Chim. ácta 26,
1570, 1943)j strukturu beta-ergokryptinu popsal poprvé Schlientz se sp. (Experientia 23» 991, 1967)·
Ergokornin je v současné době v terapeutické praxi používán v lékových formách ve směsi s alfa a beta-ergokryptinem a ergokřistinem většinou pod obchodním názvem DH-ergotoxin. Uvedené alkaloidy jsou v lékových formách obsaženy v přesně definovaném poměru. Pro výrobu ergokorninu v průmyslovém měřítku je dosud využíván kmen Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-508 (Strnadové K., Eybal J., autorské osvědčení č. 176 803, 1976).
Dále je vyvinut způsob fermentační přípravy námelových alkaloidů s řízeným poměrem tvorby ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu (Kybal J>, Malinka Z., Harazim P., Stuchlík J., Spáčil J., Svoboda E., autorské osvědčení č. 202 613, 1980) a vyšlechtěn kmen Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-725 produkující v saprofýtických podmínkách směs ergokorninu, alfa a betaergokryptinu (Strnadové K., Kybal J., Svoboda E., Spáčil J., autorské oievědčení č. 222 391, 1982).
Kmen CCM F-508 se při kultivaci na žitě vyznačuje produkcí sklerocií s průměrným obsahem sumy alkaloidů 0,424 $, s toho
239 88!
ergokornin, alfa a beta-ergokryptin tvoří 70 - 80 % v přibližném poměru 8 : 5,5 ί 1· Průměrné hektarové výnosy sklerocií kmene CCM F-508 se pohybují kolem 120 kg. Při výrobě lékových forem námelových alkaloidů ergotoxinové skupiny ze sklerocií tohoto kmene je limitujícím faktorem nízký obsah sumy alkaloidů, nepříznivý vzájemný poměr alfa a beta-ergokryptinu, vysoký obsah nežádoucích doprovodných alkaloidů a v důsledku nízkých hektarových výnosů vysoká cena tohoto námele. Fermentační způsob výroby ergokorninu, alfa a beta-ergokryptinu podle autorského osvědčení č. 202 613 (1980) a při využití kmene CCM F-725 není dosud ekonomicky přístupný.
Pro výrobu alfa a beta-ergokryptinu jsou mimo kmene CCM F-508 v současné době využívány i kmeny Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-672 (Malinka Z., Harazim P., Spáčil J., autorské osvědčení č. 222 150, 1982), CCM F-721 (Malinka Z., Harazim P., Spáčil J., autorské osvědčení č. 225 272, 1983). Kmen CCM F-672 se při kultivaci na žitě vyznačuje produkcí sklerocií, obsahujících velmi Čistý alfa-ergokryptin. Při výrobě lékových forem námelových alkaloidů ergotoxinové skupiny z tohoto kmene je nutno přidávat všechny ostatní složky. Ekonomicky výhodnější je použití tohoto kmene pro výrobu polosyntetických léčebných preparátů. Kmen CCM F-721 se při kultivaci na žitě vyznačuje vysokými hektarovými výnosy námelových sklerocií s vysokým obsahem alfa a beta-ergokryptinu a nízkým obsahem doprovodných alkaloidů. Při výrobě lékových forem námelových alkaloidů ergotoxinové skupiny z tohoto kmene je nutno přidávat ergokornin.
Uvedené nedostatky kmene CCM F-508 a fermentačního způsobu výroby ergokorninu odstraňuje do značné míry vynález, jímž je nový kmen Claviceps purpurea (Fr.) TUL., uložený v Československé sbírce mikroorganismů University J. E. Purkyně, Brno, tř. Obránců míru 10, pod označením CCM F-745· Tento kmen je předmětem vynálezu..
Hlavní výhodou nového kmene je při kultivaci na žitě vysoká produkce sumy alkaloidů ve sklerociích, která dosahuje průměru 0,48 % sušiny biomasy, přičemž v sumě alkaloidů je převažující složkou ergokornin, který je obsažen v poměru k Žádoucím doprovodným alkaloidům alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu v průměrné hodnotě 4,2 i 1. Poměr alfa-ergokryptinu ku betahergokryptinu je ve výhodné hodnotě průměrně 1,8 : 1. Další
- 3 239 883 výhodou je nízká tvorba nežádoucích doprovodných alkaloidů (ergokornam, ergokryptamy, ergometrin), které tvoří průměrně 12 % sumy alkaloidů. Další výhodou jsou velmi vysoké hektarové výnosy sklerocií, které dosahují při užití recentní agrotechniky pěstování námele průměru 847 kg. Tyto vlastnosti kmene umožňují získat při polním pěstování sklerocia za nižší pořizovací cenu, než při pěstování dosud používaného kmene GCM F-508. Tato sklerocia jsou velmi výhodnou surovinou pro farmaceutický průmysl vzhledem k obsahu a spektru alkaloidů. Zejména při současném užití s kmenem CCM F-721 při výrobě preparátů ergotoxinového typu poskytuje kmen efektivní zdroj ergokorninu a poměr doprovodných žádoucích alkaloidů alfa a beta-ergokryptinu podstatně zjednodušuje pracovní operace při přesném nastavování požadovaného poměru jednotlivých složek. Přínosy použití tohoto kmene se promítají především do zefektivnění postupů extrakce a izolace při výrobě produktů ergotoxinového typu. Vlastnosti kmene umožňují rovněž použití jeho sklerocií jako suroviny pro výrobu polosyntetických preparátů.
Popis vlastností nového kmene:
Při saprofytickém růstu na sladinové živné půdě ztužené agarem tvoří houba kolonie z typického sfaceliového vzdušného mycelia. Mycelium. je poměrně bohatě větvené a postranní hyfy jsou ukončeny konidiogenními buňkami. Konidie mají průměrné rozměry 6,6 x 3,5 mikrometru. Mladé mycelium je téměř bílé, starší kultury mají střední růžovo-fialovou pigmentaci. Při parazitickém růstu na žitě tvoří houba středně tmavá, hnědo-fialově pigmentovaná sklerocia. Na diploidním fertilním žitě je průměrná hmotnost sklerocií 0,113 g. Sklerocia tohoto kmene, vyrostlá na žitě, obsahují námelové alkaloidy v množství od 0,30 do 0,89 % sušiny biomasy, při průměrném obsahu 0,48 S. Minimálně 70 % sumy alkaloidů je tvořeno ergokorninem, minimálně 12 % sumy alkaloidů je tvořeno alfa-ergokryptinem a beta-ergokryptinem ve vzájemném poměru 0,6 - 2,3 : 1 (průměr 1,8 : 1). Poměr ergokorninu ku alf© a beta-ergokryptinu je 2,3 “ 7,8 ί 1 (průměr 4,2 : 1). Další doprovodné alkaloidy jsou ergokornam, ergokryptamy a ergometrin; jejich obsah činí nejvýše 18 % sumy alkaloidů (průměr 12 %).
Nový produkční kmen byl vyšlechtěn z původně travního kmene
- 4 239 883 námele, získaného ze třtiny lesní. Sklerocia námele ze třtiny obsahovala průměrně 0,34 % námelových alkaloidů, tvořených ze 64 % směsí ergokorninu, alfa a beta-ergokryptinu, z 19 % ergosinem. Zbývajících 17 % tvořily ergokornam, ergokryptamy a ergometrin. Po naočkování tohoto travního kmene na žito byla získána sklerocia obsahující průměrně 0,38 % alkaloidů. Pro další šlechtění bylo vybráno sklerocium obsahující 0,38 % sumy alkaloidů, z toho 73 So tvořily ergokornin, alfa-ergokryptin a betaergokryptin v poměru 5,3 : 3,6 : 1; 12 % tvořil ergosin, 15 95 tvořily ergokornam, ergokryptamy a ergometrin. Vybrané sklerocium bylo převedeno do saprofýtické kultury a vytvořené konidie byly ozařovány UV zářením. Suspenze konidií byla ozařována
-2 -1 zdrojem UV záření s výkonem 15 J.o . s po dobu 280 sekund, kdy přežívalo 0,15 % konidií. Po ozařování byla suspenze konidií monokonidiově rozizolována. Celý postup UV mutageneze byl opakován třikrát. Potom bylý kultury z jednotlivých monokonidiových izolátů naočkovány na žito a vzniklá sklerocia byla jednotlivě analyzována. Z těchto sklerocií bylo pro další šlechtění vybráno sklerocium s obsahem alkaloidů 0,43 z toho 79 % tvořily ergokornin, alfa a beta-ergokryptin v poměru 4,9 :
2,3 i 1} 21 % tvořily ergokornam, ergokryptamy a ergometrin. Suspenze konidií, vykultivovaných z tohoto sklerocia, byla ozařována UV zářením a postup ozařování kombinovaný monokonidiovou izolací byl opakován čtyřikrát. Kultury z monokonidiových izolátů byly naočkovány na žito. Na základě analýzy sklerocií získaných z jednotlivých izolátů a infekceschopnosti kultur pro žito byl vybrán kmen, který se vyznačuje vysokou tvorbou ergokorninu, tvorbou žádoucích dopx'ovodných alkaloidů alfa a beta-ergokryptinu ve výhodném poměru, nízkým obsahem nežádoucích doprovodných alkaloidů a dlouhodobou stabilitou těchto vlastností. Při růstu na hostitelské rostlině při recentně užívané agrotechnice pěstování námele se tento kmen vyznačuje velmi vysokými hektarovými' výnosy sklerocií. Stabilita těchto vlastností byla potvrzena opakovaným pěstováním na žitě ve třech vegetačních obdobích. Tento kmen je předmětem vynálezu.
Způsob kultivace nového kmene pro získání výchozí suroviny k izolaci a extrakci ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu a k následné výrobě finálních produktů z těchto alkaloi
- 5 239 883 dů i pro získání výchozí suroviny k extrakci sumy alkaloidů a následné výrobě polosyntetických preparátů, je doložen v příkladě použití, aniž by se tímto příkladem jakkoli omezovaly vlastnosti nového kmene, způsob jeho kultivace a použití .
Příklad použití:
Z potřebného objemu saprofytické kultury kmene se připraví vodná suspenze konidií. Příslušně neředěnou suspenzí konidií se pomocí očkovacího stroje naočkují klasy žita ve fázi metání na ploše jednoho hektaru. Pro naočkování této plochy se použije minimálně 5 · 10^ konidií. Po 35-60 denním růs tu na žitě s chemicky vyvolanou samčí sterilitou se provede sběr narostlých sklerocií námele. Z jednoho hektaru žita bylo získáno 927 kg suchých sklerocií námele tohoto kmene, obsahujících 0,48 % sumy alkaloidů, ze které bylo 88 9» tvořeno ergokorninem, alfa-ergokryptinem a beta-ergokryptinem ve vzájemném poměru 7,6 : 1,8 : 1. Získaná droga byla vyextrahována, extrak ty z části použity pro výrobu ergotoxinu, z části použity pro výrobu polosyntetických preparátů.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    239 883
    Nový průmyelový kmen mikroorganizmu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-745, wji-vetrtfj/ct' v polní kultuře na šitě sklerocia v minimálním množství 692 kg/ha, s obsahem sumy alkaloidů nejméně 0,30 % vztaženo na sušinu biomasy, s obsahem ergokorninu v sumě alkaloidů minimálně 70 %, s poměrem ergokorninu ku alfa a beta-ergokryptinu minimálně 2,3 : 1 a s poměrem alfa-ergokryptinu ku beta-ergokryptinu minimálně 0,6 ί 1.
CS841348A 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745 CS239883B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS841348A CS239883B1 (cs) 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS841348A CS239883B1 (cs) 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS134884A1 CS134884A1 (en) 1985-06-13
CS239883B1 true CS239883B1 (cs) 1986-01-16

Family

ID=5347646

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS841348A CS239883B1 (cs) 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS239883B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS134884A1 (en) 1985-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Azcón Germination and hyphal growth of Glomus mosseae in vitro: effects of rhizosphere bacteria and cell-free culture media
Zhou Cultivation of Ganoderma lucidum
CN103563655A (zh) 培育活体蛹化冬虫草的工艺
KR102140050B1 (ko) 갈란타민 생산을 위한 석산 부정근의 생산방법
JP2023099425A (ja) オニノヤガラの有機栽培方法
CN102796672A (zh) 一种蜡蚧轮枝菌固体发酵培养基及其制备方法和应用
CN101238208A (zh) 真菌麦角菌(Fr.)Tul.的工业生产菌株
KR100723068B1 (ko) 인삼 사포닌 성분이 함유된 팽이 버섯의 재배방법
CS239883B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745
CN104877914A (zh) 一种高产猴头菌诱变菌株h07及制备方法
CS239884B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734
CZ2019790A3 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM8865
CS242138B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Pr.) TUL. CCM P-755
CN1212387C (zh) 从虫草体分离培养的细棒束孢sx-1及其培养方法和用途
KR100187897B1 (ko) 가잠을이용한동충하초의인공재배방법
CS225272B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL, CCM F-721
CZ283773B6 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea /Fr./ Tul.
CS276359B6 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL.CCM 8057
CS276627B6 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM 8059
CZ279877B6 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM 8058
CN116138065B (zh) 小球藻胞外代谢物在高等植物促生抗逆中的应用
JPS60190800A (ja) フアイトアレキシン誘導物質
CZ287130B6 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) Tul.
RU2118661C1 (ru) Штамм гриба claviceps purpurea (fr.) tul. - продуцент эргокриптинов
CZ2023105A3 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM9309