CS239884B1 - Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734 - Google Patents

Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734 Download PDF

Info

Publication number
CS239884B1
CS239884B1 CS841349A CS134984A CS239884B1 CS 239884 B1 CS239884 B1 CS 239884B1 CS 841349 A CS841349 A CS 841349A CS 134984 A CS134984 A CS 134984A CS 239884 B1 CS239884 B1 CS 239884B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
sclerotia
alkaloids
strain
ergocryptine
ccm
Prior art date
Application number
CS841349A
Other languages
English (en)
Other versions
CS134984A1 (en
Inventor
Zdenek Malinka
Pavel Harazim
Alois Krajicek
Jiri Spacil
Josef Stuchlik
Original Assignee
Zdenek Malinka
Pavel Harazim
Alois Krajicek
Jiri Spacil
Josef Stuchlik
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zdenek Malinka, Pavel Harazim, Alois Krajicek, Jiri Spacil, Josef Stuchlik filed Critical Zdenek Malinka
Priority to CS841349A priority Critical patent/CS239884B1/cs
Publication of CS134984A1 publication Critical patent/CS134984A1/cs
Publication of CS239884B1 publication Critical patent/CS239884B1/cs

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Účelem řešení je zlepšení surovinové základny pro výrobu preparátů s léčebným účinkem, složených z klasických námelových alkaloidů ergotoxinové skupiny a pro výrobu polosyntetických léčebných preparátů. Jako surovinová základna slouží sklerocia tohoto kmene, obsahující námelové alkaloidy. Uvedeného účinku se dosáhne použitím sklerocií nového průmyslového kmene mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734, která obsahují námelové alkaloidy v množství 0,32 až 0,93 % (průmyslový obsah 0,51 %) při příslušných výrobách. Ve sklerociích je minimálně 91,5 % sumy alkaloidů tvořeno ergokorninem, alfa-ergokryptinem a beta-ergokryptinem s průměrným vzájemným poměrem 3,3 : 2,1 : 1. Nový průmyslový kmen se dále vyznačuje schopnosti poskytovat při parazitickém růstu na žitě za užití recentni agrotechniky velmi vysoké hektarové výnosy sklerocií v rozmezí 840 až 1270 kg. Řešeni se týká oborů mikrobiologie a farmaceutického průmyslu.

Description

Vynález se týká nového průmyslového kmene Claviceps purpurea (Fr.) TUL., vyznačujícího se při polní kultivaci na žité tvorbou námelových sklerocií s vysokým obsahem ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu a schopností dosahovat velmi vysokých hektarových výnosů námele.
Ergokornin, alfa-ergokryptin a beta-ergokryptin jsou alkaloidy ergotoxinové skupiny a jsou významnými léčivými substancemi. Mohou být použity i jako výchozí látky pro přípravu polosyntetických derivátů námelových alkaloidů s rozšířeným spektrem účinků. Strukturu námelových alkaloidů alfa-ergokryptinu a ergokorninu popsali poprvé Stolí a Hofmann (Helv. Chim. Acta 26, 1570, 1943), strukturu beta-ergokryptinu popsal poprvé Schlientz se sp. (Experientia 23, 991, 1967).
V současné době jsou v terapeutické praxi používány lékové formy směsi námelových alkaloidů ergokorninu, alfa-ergokryptinu, beta- ergokryptinu a ergokristinu většinou pod obchodním názvem DH-ergotoxin. Tyto lékové formy obsahují ergokornin, alfa-ergokryptin, beta-ergokryptin a ergokristin v přesně definovaném poměru 3 ί 2 : 1 : 3. Pro výrobu ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu v průmyslovém měřítku jsou dosud využívány kmeny Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-508 (Strnadová K., Kybal J., autorské'osvědčení č. 176 803, 1976), CCM F-672 (Malinka Z., Harazim'P., Spáčil J., autorské osvědčení č. 222 150, 1982), CCM F-721 (Malinka Z., Harazim P., Spáčil J., autorské osvědčení č. 225 272, 1983). Dále je vyvinut způsob fermentační přípravy námelových alkaloidů s řízeným poměrem tvorby ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu (Kybal J., Malinka Z., Harazim P., Stuchlík <J., Spáčil J., Svoboda E., autorské osvědčení č. 202 613, 1980)' a vyšlechtěn kmen Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-725 produkující v saproMytických podmínkách směs ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu
239 884
-3(Strnadová K., Kybal J., Svoboda E., Spáčil J., autorské osvědčení č. 222 391, 1982).
Kmen CCM F-508 se při kultivaci na řitě vyznačuje produkcí sklerocií, která obsahují průměrně 0,424 % sumy alkaloidů, z to ho ergokornin a ergokryptiny tvoří 70 až 80 %. Přibližný poměr obsahu ergokorninu, alfa a beta-ergokryptinu je 8 : 5,5 : 1.
Při výrobě lékových forem námelových alkaloidů ergotoxinového typu ze sklerocií tohoto kmene je nevýhodou nízký obsah žádoucích alkaloidů, vysoké množství nežádoucích alkaloidů (20-30 % sumy alkaloidů) a zejména velmi nízký obsah beta-ergokryptinu. Další nevýhodou jsou nízké hektarové výnosy a z toho plynoucí vysoká cena námele.
Kmen CCM F-672 se při kultivaci na žitě vyznačuje produkcí velmi čistého alfa-ergokryptinu. Při výrobě lékových forem námelových alkaloidů ergotoxinové skupiny z tohoto kmene je nutné přidávat všechny ostatní složky a pracně nastavovat požadovaný poměr. Pro vysokou čistotu alfa-ergokryptinu ve eklerociích tohoto kmene je ekonomicky výhodnější použití pro výrobu polosyntetických léčebných preparátů na bázi alfa-ergokryptinu.
Kmen CCM F-721 se při kultivaci na žitě vyznačuje tvorbou námele s vysokým obsahem alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu se vzájemným poměrem průměrně 1,15 i 1 a maximálním obsahem nežádoucích doprovodných alkaloidů v celkové sumě 10 %. Při výroOě lékových forem námelových alkaloidů ergotoxinové skupiny z tohoto kmene je nutno přidávat ergokornin a obtížně nastavovat požadovaný přesný poměr složek.
Fermentační způsob výroby ergokorninu, alfa a beta-ergokryptinu podle autorského osvědčení δ· 202 613 z roku 1980 a při využití kmene CCM F-725 není dosud ekonomicky přístupný.
Uvedené nedostatky výše zmíněných kmenů námele pro polní produkci a fermentačního způsobu výroby alkaloidů ergotoxinové skupiny odstraňuje do značné míry vynález, jímž je nový kmen Claviceps purpurea (Fr.) TUL., uložený v Československé sbírce mikroorganismů University J. E. Puřkyně, Brno, tř. Obránců míru 10, pod označením CCM F-734. Tento kmen je předmětem tohoto vynálezu.
Hlavní výhodou nového kmene je při kultivaci na žitě vyso- 4 239 ká produkce sumy alkaloidů ve sklerociích, která dosahuje průměru 0,51 # sušiny biomasy, velmi nízká tvorba nežádoucích doprovodných alkaloidů, které tvoří průměrně 6 % sumy alkaloidů a vysoká tvorba žádoucích alkaloidů ergokorninu, alfa-ergokryptinu/ a beta-ergokryptinu (průměr 94 % sumy) ve velmi příznivém poměru průměrně 3»3 i 2,1 : 1. Další výhodou nového kmene je vysoká /schopnost infikovat hostitelskou rostlinu, která umožňuje při recentně užívané agrotechnice pěstování námele dosahovat průměrného hektarového výnosu námelových sklerocií 982 kg. Tyto vlastnosti kmene umožňují při polním pěstování získat sklerocia, která představují velmi výhodnou surovinu pro farmaceutickou výrobu. V důsledku vysokých hektarových výnosů je pořizovací cena tohoto námele nižší, než cena dosud užívaných kmenů námele. Použití této suroviny umožní zefektivnit postupy extrakce a izolace při výrobě produktů ergotoxinového typu, zejména snížením spotřeby surovin, snížením počtu technologických operací a pracnosti. Vlastnosti kmene umožňují rovněž použití jeho sklerocií pro výrobu polo3yntetických preparátů.
Popis vlastností nového kmene :
Při saproíýtickém růstu na sladinové půdě ztužené agarem tvoří houba kolonie z typického sfaceliového vzdušného mycelia. Mýcelium je poměrně bohatě větvené a postranní hyíý jsou ukončené konidiogenními buňkami. Hojně tvořené konidie mají průměrné rozměry 7 x 3»5 mikrometru. Mladé mýcelium je téměř bílé, starší kultury mají střední růžovo-fialovou pigmentaci. Při parazitickém růstu na žitě tvoří houba středně tmavá, hnědo-fialově pigmentovaná sklerocia. Na diploidním fertilním žitě je průměrná hmotnost sklerocií 0,106 g. Sklerocia tohoto kmene, vyrostlá na žitě, obsahují námelové alkaloidy v množství od 0,32 do 0,93 %' sušiny biomasy při průměrném obsahu 0,51 Minimálně 91,5 % sumy alkaloidů je tvořeno ergokorninem, alfaergokxyptinem a beta-ergokryptinem (průměrně tvoří 94 % sumy). Poměr ergokorninu ku ergokryptinům je 0,95-1,6 : 1 (průměr
3,3 í 3,1), poměr alfa-ergokryptinu ku beta-ergokryptinu je
1,6 - 2,7 ί 1 (průměr 2,1 : 1). Doprovodné alkaloidy jsou ergometrin, ergokornam a ergokryptam,/·
- iS 239 884
Nový, prodpkčh^ kmen byl vyšlechtěn z původně travního kmene námele, získaného ze třtiny lesní. Sklerocia námele ze třtiny obsahovala průměrně 0,34 % námelových alkaloidů, tvořených ze 64 % směsí ergokorninu, alfa a beta-ergokryptinu, z 19 % ergosinem, zbývajících 17 % tvořily ergokornam, ergokryptamy a ergometrin. Po naočkování tohoto travního námele na žito byla získána sklerocia .obsahující 0,38 95 alkaloidů, z toho 73 % tvořily ergokornin, alfa-ergokryptin a beta-ergokryptin v poměru
5,3 í 3,6 : 1 ; 12 % tvořil ergosin, 15 % tvořily ergokornam, ergokryptamy a>ergometrin. Vybrané sklerocium bylo převedeno do saprofytické kultury a vytvořené konidie byly ozařovány UV zářením. Suspenze konidií byla ozařována zdrojem UV záření s vý-2-1 koněm 15 J.m .s po dobu 280 sekund, kdy přežívalo 0,15 % konidií. Po ozařování byla suspenze monokonidiově rozizolována. Celý postup UV-mutageneze a izolace byl opakován třikrát. Potom byly kultury z jednotlivých monokonidiových izolátů naočkovány na žito a vzniklá sklerocia byla jednotlivě analyzována. Z těchto sklerocií bylo pro další šlechtění vybráno sklerocium s obsahem alkaloidů 0,41 95, z toho 93 % tvořily ergokornin, alfa a beta-ergokryptin v poměru 4,2 : 2,6 : lj 7 95 tvořily ergokornam, ergokryptamy a ergometrin. Suspenze konidií, vykúltivovaných z tohoto sklerocia, byla ozařována UV zářením a postup ozařování kombinovaný monokonidiovou izolací byl opakován dvakrát. Kultury z monokonidiových izolátů byly naočkovány na žito. Na základě analýzy sklerocií získaných z těchto izolátů a infekceschopnosti kultur byl vybrán kmen, který se vyznačuje velmi dobrým spektrem alkaloidů, minimem doprovodných nežádoucích alkaloidů a dlouhodobou stabilitou těchto vlastností. Při růstu na hostitelské rostlině při recentně užívané agrotechnice se tento kmen vyznačuje velmi vysokými hektarovými výnosy sklerocií. Stabilita těchto vlastností byla potvrzena opakovaným pěstováním na žitě ve 4 vegetačních obdobích. Tento kmen je předmětem vynálezu.
Způsob kultivace nového kmene pro získání výchozí suroviny k izolaci ergokorninu, alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu a následné výróbě finálních produktů z těchto alkaloidů, i pro získání výchozí suroviny k extrakci sumy alkaloidů a následné výrobě polosyntetických preparátů, je doložen v příkladě použi-
239 884 tí, aniž by se tímto příkladem jakkoli omezovaly vlastnosti nového kmene, způsob jeho kultivace a použití.
Příklad použití:
Z potřebného objemu saprofýtické kultury kmene se připraví vodná suspenze konidií. Příslušně naředěnou suspenzí konidií se pomocí očkovacího stroje naočkují klasy žita ve fázi metáni na ploše 1 ha. Pro naočkování této plochy se použije minimálně 11 . 10 konidií. Po 35-60 denním růetu na žitě s chemicky vyvolanou samčí sterilitou se provede sběr narostlých sklerocií námele. Z jednoho hektaru žita bylo získáno 1 066 kg suchých sklerocií námele tohoto kmene, obsahujících 0,51 % sumy alkaloidů, ze které bylo 94 % tvořeno ergokorninem, alfa a beta-ergokryptinem ve vzájemném poměru 3»3 ϊ 2,1 : 1. Získaná droga byla vyextrahována, extrakty z části izolovány na jednotlivé alkaloidy a použity pro výrobu ergotoxinu, z části použity pro výrobu polosyntetických preparátů.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    239 884
    Nový průmyslový kmen mikroorganizmu Claviceps purpurea /Fr./ TUL. CCM F - 734, vytvářející v polní kultuře na žitá sklerocia v minimálním množství 840 kg/ha, s obsahem sumv alka loidů nejméně 0,32 $ vztaženo na sušinu biomasy, s obsahem ergo.corninu, alfa-ergokrvpt.inu a beta-ergokrvptinu nejméně
    91,5 % sumy alkaloidů a se vzájemným poměrem ergokorninu ku ergokryptinům minimálně 0,95 : 1 a poměrem alfa- ergókrvptinu ku beta*»ergokryptinu minimálně 1,6 : 1.
CS841349A 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734 CS239884B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS841349A CS239884B1 (cs) 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS841349A CS239884B1 (cs) 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS134984A1 CS134984A1 (en) 1985-06-13
CS239884B1 true CS239884B1 (cs) 1986-01-16

Family

ID=5347655

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS841349A CS239884B1 (cs) 1984-02-27 1984-02-27 Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS239884B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS134984A1 (en) 1985-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103563655B (zh) 培育活体蛹化冬虫草的工艺
CZ286032B6 (cs) Polycyklická sloučenina, způsob její výroby, farmaceutický prostředek a biologicky čistá kultura
CN102763560B (zh) 以蝉幼虫为寄主的虫草子实体及其培育方法
Xu et al. Strategies for the improvement of salidroside production in cell suspension cultures of Rhodiola sachalinensis
JP2022516888A (ja) エルゴチオネインを産生する菌株及びそのスクリーニングのための方法
CN101238208A (zh) 真菌麦角菌(Fr.)Tul.的工业生产菌株
CS239884B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM F-734
CN104877914A (zh) 一种高产猴头菌诱变菌株h07及制备方法
CS239883B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismů druhu Claviceps purpurea (Fr) TUL. CCM F-745
Scragg et al. Picrasma quassioides Bennet (Japanese quassia tree): in vitro culture and production of quassin
CN1212387C (zh) 从虫草体分离培养的细棒束孢sx-1及其培养方法和用途
CZ2019790A3 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM8865
CS225272B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL, CCM F-721
CZ405598A3 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) Tul.
CZ283773B6 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea /Fr./ Tul.
CS242138B1 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Pr.) TUL. CCM P-755
CS276627B6 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu druhu Claviceps purpurea (Fr.) TUL. CCM 8059
CS276359B6 (cs) Nový průmyslový kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL.CCM 8057
CN113337433B (zh) 一种产吡咯喹啉醌的假单胞菌及其应用
WO2024127299A1 (en) Production of a psychoactive alkaloid and compositions, and production of a fruiting body organism
CZ2023105A3 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM9309
RU2118661C1 (ru) Штамм гриба claviceps purpurea (fr.) tul. - продуцент эргокриптинов
KR910002859B1 (ko) 시코닌계 색소의 제조방법
CZ239691A3 (en) novel industrial strain of micro-organisms claviceps purpurea (fr.) tul., ccm 8058
CZ279533B6 (cs) Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps purpurea /Fr./ Tul.