CS209974B1 - Spósob výroby kyseliny digalakturónovej enzýmovou hydrolýzou - Google Patents

Description

3 209 974

Vynález sa týká spCeobu přípravy kyseliny digalakturonovej enzýmovou hydrolýzou.

Kyselina digfllakturonová sa doteraz priemyselne nevyrábe. Bola připravená v niekol’-kých laboratóriách cestou chemickéj hydrolýzy (Hatanaka C., Ozawa J. J. Agr. Chem. Soc.Japan Vol. 40 str. 96,0.966); Rexová-Benková L.,Chem. Zvěsti 24 CL970) str. 59; van Honden-hoven F., Wittp D., Vieeer J. Carbohyd. Res. str. 233 (1974)). Všetky poísané postupy súviacstupňové a značné sa odlišujú heterogenitou získaného produktu. Spoločným rysom týchtopostupov je, že vedú k malým výťažkom kyseliny digalakturonovej popři vysokom výtažku vyš-ších oligogalakturonových kyselin. Získanie kyseliny digalakturonovej v čistom stave zozmeei oligogalakturonových kyselin má mnohé nevýhody ako je pracnost, časová náročnost aviacstupňové izolácie,.

Tieto nedostatky odstraňuje spfisob výroby kyseliny digalakturonovej enzýmovou hydro-lýzou, ktorého podstata spočívá v tom, že sa na zmes oligogalakturonových kyselin pfisobíenzýmom endo-D-galakturonanázou pri teplote 30 až 40 °C a pH 4,2 až 5, pričom kyselina di-galakturonová sa oddělí chroraatograficky na koloně a efluent sa odpaří alebo vysuší mrazo-vou sublimáciou. Výhodou tohto postupu je, že endo-D-galakturonáza sa nemusí izolovat v čistom stave.Na enzýmovú hydrolýzu sa mfiže použit endo-D-galakturonanáza z komerČných preparátov pekto-lytických enzýmov (Pectinase, Rohament, Pectinex, Ultra, Pekticín, Leozym a i.) bežne po-užívaných v konzervárskom priemysle. Jedinou požiadavkou na použitý enzýmový preparát jenízký obsah exo-D-galakturonanázy. Ďalšou velkou přednostou uvedeného spfisobu je, že hydrolýza prebieha formou jednostupňovej reakcie a pře priebeh reakcie nie je potřebný 3alšísubstrát alebo koenzým.

Kyselina digalakturónová je látka dfiležitá z hlediska teoretického štúdia enzýmova pektínových látok a pre charakterizáciu v priemysle používanýeh pektolytických enzýmov. Příklad 1 500 mg oligogalakturonových kyselin sa za miešania rozpustí v 70 ml octanového tlmi-vého roztoku (pH = 4,6) a 20 mg enzýmového preparátu (Leozym, endo-D-galakturonanáza)sa rozpustí v 30 ml octanového tlmivého roztoku. Po přefiltrovaní roztoku enzýmu sa obidvaroztoky spoje. Enzýmová hydrolýza prebieha pri 40 °C za miešania alebo trepania 10 až 12hodin. Enzýmom katalyzovaná reakcia po kontrole chromatografiou sa ukončí 20 minútovýmvarom. Po ochladení sa roztok přefiltruje a zahustí vákuovým odpařováním při 40 °C. 2,5 ml zahuštěného hydrolyzátu sa nanesie na stípec molekulového šita (Sephadex G-10)a efluent s kyselinou digalakturonovou sa odpaří, alebo vysuší mrazovou sublimáciou. Výťažok kyseliny digalakturonovej je až 80 %. Příklad 2

Postupovalo sa ako v přiklade 1 s tým rozdielom, že enzýmový preparát (8 mg Rohament)rozpustil v octanovom tlmivom roztoku o pH 4,8 a enzýmová hydrolýza prebiehala pri teplote30 °C počas 4 až 6 hodin. Výťažok kyseliny digalakturonovej bol až 70 %. V$ztíbbl vynálezu spočívá v použití kyseliny digalakturonovej na testovanie rfiznych

Claims (1)

1. 4 209 974 enzymatických preparátov používaných v konzervárskom, kožiarskom a textilnom priemyale. PREDMET VYNÁLEZU Spdsob výroby kyseliny digalakturónovej enzýmovou hydrolýzou vyznačujúci sa tým, žesa na zmes oligogalakturónových kyselin pĎsobí enzýmom endo-D-galakturonanázou pri teplote30 až 40 °C a pH 4,2 až 5, pričom kyselina digalakturonová sa oddělí chromatograficky nakoloně a efluent sa odpaří alebo vysuší mrazovou sublimáciou. Cena: 2,40 Kčs Vytiskly Moravské tiskařské závody, provoz 11, tř. Lidových milicí 5, Olomouc