CS220296B1 - Sposob výroby oligogalakturónových kyselin enzymovou hydrolýzou - Google Patents

Abstract

Vynález sa týká spósobu výroby oligogalakturónových kyselin enzýmovou hydrolýzou, pri ktorom sa na pektan sodný pósobí endo-D-galaturónanázou z pektinázy pri pH 4,5 až 4,8, teplote 30 až 45 °C počas 60 až 90 minút.

Description

220296 3

Vynález sa týká spůsobu přípravy oligo-galakturónových kyselin enzýmovou hydro-lýzou.

Oligogalakturónové kyseliny sa doterazpriemyselne nevyrábajú. Boli připravené vniektorých laboratóriach cestou chemickejhydrolýzy: Hatanaka C., Ozawa J.: J. Agr.Chem. Soc. Japan 40, str. 98 (1960); Rexová--Benková L·.: Chem. Zvěsti 24, str. 59 (1970)alebo enzýmovou degradáciou účinkom pu-rifikovaných enzýmov: Van HoundemhovenF.; Vitt P.; Vister J.: Carbohydr. Res. 34, str.233 (1974); H. Stutz E.: Advan. Enzymol.20, str. 41 (1968); Nagel G. W., Wilson T.E.: J. Chromatogr. 41, str. 410 (1969). Všet-ky popísané postupy chemickej hydrolýzysú viacstupňové reakcie, ktoré predstavujúzložitú izolačnú techniku. Doteraz popísanéenzýmové hydrolýzy sú založené na použitíspecifických purifikovaných enzýmov, kto-rých příprava je velmi náročná na čas, za-riadenie a speciálně chemikálie. Tieto nedo-statky odstraňuje spQsob výroby oligogala-kturónových kyselin enzýmovou hydrolýzou,ktorého podstata spočívá v tom, že sa napektan sodný působí endo-D-galakturonaná-zou z pektinázy pri pH 4,5 až 4,8 teplote 30až 45 °C počas 60 až 90 minút. Výhodou tohto postupu je, že endo-D-ga-lakturonanázy sa nemusia izolovat v čistomstave na enzýmovú hydrolýzu sa můžu bezpredchádzajúcej úpravy použit' priamo ob-chodné preparáty (Igrazym M 10, Pectofoe-tidín, bulharská pektínaza a Leozym R.),bežne používané v konzervárenskom prie-mysle. Poznanie optimálnych podmienok preúčinok týchto enzýmov (pH, teplota, kon-centrácia enzýmu a substrátu) ako i ichspůsobu účinku umožňuje cielenú hydrolýzu.Použitie určitého preparátu (z horevym^no-vaných) umožňuje získat určité zloženie oli-gogalakturónových kyselin, ako to vyplýváz príkladov 1, 2 a 3. Ďalšou velkou přednos-tou uvedeného spůsobu je, že hydrolýza pre-bieha formou jednostupňovej reakcie a prepriebeh reakcie nie je potřebný další sub-strát, alebo konenzým.

Olióogalakturónové kyseliny sú látky dů-ležité z hladiska teoretického štúdia pekto-lytických enzýmov a pektínových látok a precharakterizáciu v priemysle používanýchpektolytických enzýmov. Příklad 1 1 g pektanu sodného (priemerná moleku-lová hmotnost 27 000, obsah uronidov 90 %)sa postupné za miešania rozpustí v 100 mloctanového tlmivého roztoku (pH 4,8), 30mg enzýmového preparátu (Igrazym M10)sa rozpustí v 100 ml octanového tlmivéhoroztoku (pH 4,8). Po přefiltrovaní roztokuenzýmu sa obidva roztoky spoja. Enzýmováhydrolýza prebieha pri 40 °C za miešania ale-bo trepania 60 minút. Priebeh enzýmovejhydrolýzy sa kontroluje chromatograficky(produkt degradácie) a spektrofotometric- ky (stupeň degradácie polymérneho substrá-tu). Po 60 minútovej hydrolýze sa reakciaukončí 20 minútovým varom. Roztok poochladení sa přefiltruje a supernatant savysuší mrazovou sublimáciou. Produkty de-gradácie kyselina D-galaktopyranurónová,kyselina digalakturónová a kyselina tri-galakturónová sa rozpuštěné v 0,05 M fos-fátovom tlmivom roztoku nanesú na dve zasebou zapojené kolony Sephadexu G-25 Fi-ne (molekulové síto) za účelom ich rozdele-nia. Efluenty jednotlivých oligogalakturó-nových kyselin sa zahustia mrazovou subli-máciou a odsolia na kolóne Sephadexu G-10.Výťažok oligogalakturónových kyselin je až90 %. Příklad 2

Postupovalo sa ako v příklade 1, s týmrozdielom, že sa 20 mg enzýmového prepa-rátu (Pectofoetidín) rozpustilo v octanovomtlmivom roztoku pH = 4,6 a enzýmová hyd-rolýza prebiehala pri teplote 45 °C počas80 minút. Produktami enzýmovej hydrolýzyboli: kyselina D-galaktopyranurónová, ky-selina digalakturónová, kyselina trigalaktu-rónová, kyselina tetragalakturónová a ky-selina pentagalakturónová. Výťažok bol až70 %. Příklad 3

Postupovalo sa ako v příklade 1, s týmrozdielom, že sa 25 mg enzýmového prepa-rátu (bulharská pektináza) rozpustilo voctanovom tlmivom roztoku pH = 4,5 a en-zýmová hydrolýza prebiehala 90 minút priteplote 30 °C. Produktami enzýmovej hydro*íýžy boli: kyselina D-galaktopyranurónová,kyselina digalakturónová, kyselina triga-lakturónová, kyselina tetragalakturónová,kyselina pentagalakturónová, kyselina he-xagalakturónová a kyselina heptagalakturó-nová. Výťažok oligogalakturónových kyselinbol 60 °/o. Příklad 4

Kvantitativné stanovenie jednotlivých oli-gogalakturónových kyselin sa uskutočnilochromatografiou na tenkých vrstvách sili-kagelu na platniach Silufol v systéme 1-bu-tanol—kyselina mravčia—voda (2:3:1) adetekciou anilínftalátom. Oligogalakturóno-vé kyseliny sa identifikovali na základe

Rf hodnůt —-— , ktoré sú lineárně závislé od stupňa polymerizácie oligogalakturóno-vých kyselin, Ako referenčně vzorky sa po-užili kyselina D-galaktopyranurónová aStandarty jednotlivých oligogalakturónovýchkyselin připravené chemickou hydrolýzou. Význam vynálezu spočívá v použití oligo- galakturónových kyselin na testovanie růz- ných enzymatických preparátov používaných

Claims (1)

1. 220296 S v konzervátorskom a potravinárskom prie-mysle, ako i při teoretickom štúdiu vlast- 6 ností a mechanizmu účinku pektolytickýchenzýmov. PREDMET Spósob výroby oligogalakturónových ky-selin enzýmovou hydrolýzou vyznačujúci satým, že na pektan sodný sa působí endo-D- vynalezu -galakturónanázou z pektinázy pri pH 4,5až 4,8, teplote 30 až 45 °C počas 60 až 90minút.