CN85107218A - S-腺苷-l-蛋氨酸与聚阴离子的稳定盐的制备方法及其应用 - Google Patents

S-腺苷-l-蛋氨酸与聚阴离子的稳定盐的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

S-腺苷-L-蛋氨酸与水溶性聚阴离子生成的一些稳定盐，诸如多磷酸根，聚磺酸乙烯酯，聚硫酸乙烯酯或聚磷酸乙烯酯，聚丙烯酸酯，聚磺酸苯乙烯酯等即为所说的聚阴离子。
本发明所说的盐，是在pH值不超过3.5的水溶液中通过沉淀作用制得的。这些盐具有特殊的稳定性，溶解性，不吸湿性，并且作为药物复合物的活性组分是有价值的。

Description

本发明涉及以下几个方面：S-腺苷-L-蛋氨酸（SAM）和水溶性聚阴离子生成的一些新的稳定盐;这些盐的制取过程;含有上述新盐作为其活性组分的医疗配方。
SAM（S-腺苷-L-蛋氨酸通常叫SAM）普遍存在于生物组织里，起着某些重要的生化作用：（a）它在大量的甲基移转反应中起着甲基供体的作用;（b）它是一种特定裂解酶的基质，这种裂解酶将微小颗粒转化为甲硫基代腺苷（MTA）和高丝氨酸;（c）它对转移核糖核酸（tRNA）起着氨基丁酸链的供体的作用;（d）在维生素H的生物合成作用中，它是氨基酸链的供体;（e）它是腺苷部分的供体;（f）它是下列物质的助催化剂：溶（细胞）素-2，3-氨基变位酶，苏氨酸合成酶，丙酮酸甲酸裂解酶和N5-甲基四氢化叶酸-高半光氨酸甲基转移酶;（g）它是下列物质的抑制剂：H核糖核酸酶，亚甲基四氢叶酸还原酶，和磷酸乙醇胺胞啶转移酶;（h）它为细菌和白血球的趋药性所需;（i）在原核生物和真核生物中，为脱氧核糖核酸的限制和变型作用体系所需。况且，它的脱羧产物S-腺苷-（5′）-3-甲基硫代丙胺（癸-SAM，deca-SAM）在多胺的生物合成作用中起着丙胺基供体的作用。最近已有很多非常详细的文献，涉及到SAM和癸-SAM的很多方面的生物学用途（Zappia V.et al.，“Biomedical and pharmacological roles of Adenosylmethionine andthe Central Nervous System”，page 1，Zappia V.et al.，Eds.，pergamon press N.Y.，1979;Paik W.K.et al.，“Protein Methylation”，Maister A.Ed.，J.Wiley and Sons N.Y.，1980;“Biochemistry of S-Adenosylmethionine and Related Compounds”，Usdin E.et al.Eds.，Mac Millan Press L.t.D.，1982），尤其是SAM在甲基移转作用中作为甲基供体，导致广范围的代谢物的生物合成，形成某些化学键，例如：N-CH3（甲胍基醋酸或叫肌酸、胆酸、N-甲基菸酰胺、肾上腺素、许多生物碱、蛋白质、核酸）、S-CH8（蛋氨酸、S-甲基蛋氨酸）、O-CH8（Methanephrine，木质素、果胶、酚类）、C-CH3（C28-麦角甾醇、胸腺碱（胸腺嘧啶）、核糖苷、某些抗生素、蛋白质、核酸、多糖化物）。酶催甲基移转作用产生的各种各样的化合物和化学键表明，这些化学键起着多方面的生理学作用。其中，我们可能还记得解毒作用，它是通过例如吡啶及衍生物的甲基化作用进行的，这些衍生物包括尼克酸及其酰胺等。甲基化作用经常也能改变分子的生理学性质，只要考虑下列各对物质的区别就可以说明这一点：去甲肾上腺素和肾上腺素，吗啡和可待因（碱）等等。（Borchardt R.T。，“Enzymatic Basis of Detoxication”，Vol.Ⅱ，page 43，Academic Press，1980）。转移核糖核酸（tRNA）中存在着许多甲基化碱，这一发现是很有意义的;因而，提出了各种假设来说明调节作用可能是通过多核苷酸的甲基化作用进行的（Kersten H.，“Biochemistry of     S-Adenosylmethionine    and    Belated    Compounds”，page    357，Usdin    E.et    al.Eds.，Mac    Millan    Press    L.t.D.，1982）。蛋白质的甲基化作用也是重要的，它是W.K.Paik和其共同工作者最近几年进行的几项研究工作的课题。正是几种酶的作用，使得：（a）精氨酸的胍残基甲基化形成ω-N-甲基精氨酸;（b）赖氨酸残基的氨基甲基化形成ε-N-甲基-赖氨酸和ε-N-二甲基-赖氨酸;（c）二羧基氨基酸残基中的羧基的甲基化形成甲基酯。
除了对蛋白质本身具有官能意义之外，蛋白质的赖氨酸残基的甲基化还将导致N-三甲基-赖氨酸的生成，这一结果并非无关紧要的。这种甲基化的氨基酸在肉毒碱的生物合成中是一个中间体。除了甲基移转作用外，SAM起基本作用的其他代谢方向是朝着多胺的生物合成方面进行的。在这一生物发生路线中，在酶催脱羧反应之后，SAM作为丙胺基供体分别与腐胺（丁二胺-〔1，4〕）和精作用，生成精和精胺，存在于真核生物中的原始生物多胺（Zappia V.et al.，J.Biol.Chem.7276，225，1980）。多胺的生物合成与甲基移转作用相关，不仅是因为在两种路线中利用了共同的基质，而且还因为SAM的脱羧产物癸-SAM是甲基移转作用的抑制剂（Zappia V.et al.，J.Biol.Chem.244，4499，1969）。同一作者还报告了一种由MTA产生的类似的抑制效应。除了那些以SAM为基质的反应外，还要提到一些由硫化合物进行的调节机能。例如在由高半光胺酸甲基化生成蛋氨酸的反应中，SAM所起的调节作用。事实上，当N5-甲基四氢叶酸作为甲基供体参加反应、而维生素B12是甲基化反应的中间体时，SAM作为B12的甲基化作用引发剂，以催化浓度存在是需要的。在锍化合物所起的其他调节作用中，值得记住的是它对乙醇胺胞啶转移酶的影响。控制这种酶的活性的机理实际上已经被应用，这种机理可能涉及蛋白质的一种非酶催甲基化反应。同样的机理也被用于解释H核糖核酸（来自小牛胸腺）的不可逆钝化作用，这种作用是通过SAM实现的。（Zappia V.et al.“Biomedical and Pharmacological roles of Adenosylmethionine and the Central Nervous System”，page 1，Zappia V.et al，Eds.，Pergamon Press N.Y.，1979）。还有重要的一点，就是转硫反应、叶酸循环和甲基移转反应彼此间的代谢关系。
给出甲基以后，SAM转换成S-腺苷-高半光胺酸（SAH），而SAH是迄今所研究的所谓甲基作用的强有力的抑制剂。所以，降解SAM的酶，一种L-氨基酸氧化酶和一种特殊的水解酶在甲基移转作用中间接地起着一种调节作用。虽然水解反应平衡是朝着缩合作用方向转移的，SAH还是照样可以被水解，这是因为反应产物通过酶催化方法被除掉了的缘故。事实上，腺苷很快被转变成次黄苷（肌苷），次黄嘌呤，黄嘌呤，它作为尿酸被排泄出来，而高半光胺酸通过两个竞争体系被代谢：产生半光胺酸的转硫作用体系，和称为“硫守恒循环”的体系，后者又和叶酸盐联系起来。
由于它的多重的和复杂的生化功能，SAM能够产生许多药理作用，参见附表一。
利用酵母很容易以工业规模生产SAM，这种酵母是在含蛋氨酸的介质中培养的（Cantoni    G.L.，“Methods    in    Enzymology”，3，600，1967）。
下面的结构式代表天然的生物激活型的腺苷蛋氨酸（Zappia    V.et    al.，Biochem.Biophys.Acta    178，185，1969），化学名称为5′〔〔（3S）-3-氨基-3-羧基-丙基〕甲基-（S）-砜〕-5′-脱氧腺苷，以符号（-）SAM表示之，结构式还就分子中不同的可电离基团分别给出了PKa值（Farooqui    J.et    al.，“Electrophoresis”4，261，1983）。
Figure 85107218_IMG1
Figure 85107218_IMG2
pH值不仅决定了分子的带电状态，还影响着分子在溶液中的化学稳定性。具有足够酸度的介质和低的温度防止SAM很快降解为MTA（主要产物）。这一降解过程是由于羧基碳原子对氨基酸γ亚甲基的分子内的亲核攻击，由于附近存在锍产生的极，这个亚甲基变得特别具有反应活性（Zappia V。et al.，““Transmethylation”，Usdin E.et al.Eds.，Elsevier N.Y.，1979;Zappia V.et al.，“Methods in Enzymology”，94，73，1983）。pH较高时，溶液稳定性就低，分子按照不同的机制迅速降解。SAM的盐作为结晶固体存在时，它的稳定性则受到阴离子特性的严格控制。尤其可以观察到，增加阴离子的空间阻碍改善了固相分子的稳定性。根据这一例证，占优势的降解机理推导出了MTA的生成。有一种SAM盐，具有下面的表达式：SAM+·HSO4·H2SO- 4·CH3C0H4SO3H（美国专利3，954，726号，1976.5.4.-U.S.Patent NO.3，954，726 of May 4，1976），它很快在药物学中得到应用。
已经发现，SAM和阴离子型的水溶性聚合电解质生成的某些盐，它们有一些很好的特性，这些特性使得它们在药物配方和制备方面都特别适合。
在pH值高达3.5时，事实上SAM的带电状态已能保证SAM分子和阴离子型水溶性聚合电解质上带负电的活性点之间稳定的特殊的相互作用。
这种相互作用的结果，将生成不溶性盐，它的化学计量关系可能依赖于几种因素，例如;（a）反应物的比率;（b）反应介质的pH值和性质;（c）聚阴离子的性质。在所研究的大多数例子中，通过沉淀生成的盐的化学计量比率在0.5到0.1之间变化，其量纲定义为SAM的摩尔数/聚合体克当量数。
从所得盐的稳定性和制备角度考虑，特别推荐采用1∶3的比率（SAM摩尔/聚阴离子当量数）。另一方面，也有的化学计量不在上面的0.1到0.5的比率范围内（SAM摩尔/聚合体当量数），这种化学计量是和沉淀过程相适应的，它可以通过使用过量的或不足量的聚阴离子（相对于SAM来说）来实现。
在化学计量比率低于0.3的盐中，沉淀之所以达到电中性是因为介质中有阳离子作为与SAM结合的聚阴离子的抗衡离子。而在化学计量比率较高的盐中，介质里的阴离子部分地中和砜化合物的正电荷。
广义地说，强的和弱的多元酸和阴离子是SAM的不溶性盐形成的根源。来自强酸的聚阴离子的典型例子是一些这样的聚合体或共聚体，它们在大分子骨架中以重复方式含有某些基团，如：-SO- 3（聚磺酸乙二醇酯;聚磺酸苯乙烯酯等）;-OSO- 3（聚硫酸乙烯酯和聚硫酸苯乙烯酯等）;-O-PO＝ 3和-O-PO3H-（聚磷酸乙烯酯等），
Figure 85107218_IMG3
（多磷酸酯、甲基磷酸酯等等）。来自弱酸的聚阴离子的典型例子是一些这样的聚合体或共聚体，它们的结构中含有-COO-基团（聚丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯，羧甲基纤维素，聚半乳糖醛酸酯，等等）。
至于聚阴离子的分子量，SAM盐的沉淀过程是不受这一参数严格控制的。事实上，可以观察到，一般地说，每个聚阴离子都能在酸性介质中与SAM生成不溶性盐，聚合体的分子量范围可以很大，它的上限取决于聚阴离子的水溶性，它的下限是某一聚合度，这个聚合度应能使分子算得上聚合电解质类物质（Doty    P.et    al.，“Polymeric    Electrolytes”，Ann.Rev.Phys.Chem.3，81，1952）。
根据迄今所知道的关于聚合电解质的物理化学特性，由SAM和聚阴离子生成不溶性盐的机理可以减少到两种过程。按照第一种过程，SAM经由它的带正电的活性点与聚阴离子的一个分子稳定地相互作用，负电荷被中和，形成含有几个聚合体链的节段，结果盐被沉淀出来。按照第二种过程的机理，同一个SAM分子同时和不同的聚阴离子分子的带电活性点相互作用，同时产生电荷的中和和分子间的交连，这两种因素都有助于盐的沉淀。在形成不溶性盐的过程中，SAM和聚阴离子间的相互作用有两种形式，它们所起作用的相对大小取决于沉淀条件和聚阴离子的性质。
应当注意，两种过程都涉及到一种同时进行的稳定的相互作用，即SAM各种带电活性点和负电荷之间的吸引，这些负电荷局部地限定在大离子的表面部分。
在SAM摩尔数/聚阴离子当量数比率为1∶3的情况下，本发明所述的盐可用下面的式子来表示：
Figure 85107218_IMG4
其中
Figure 85107218_IMG5
基团可以代表
Figure 85107218_IMG6
（多-或偏-磷酸根），或者X代表
Figure 85107218_IMG7
基团，而R-代表下列基团之一：
Figure 85107218_IMG8
，-SO- 3，-OSO- 3，-OPO3H，COO-.
如上所述，只要不出现聚阴离子溶解并且仍能属于聚合电解质类物质，这种聚合体的分子量（表现在n值的大小）是不很严格的。
为清楚起见，下面的式子给出了SAM的完整的结构式和SAM与 基团相互作用的阳离子活性点， 为前面所提到的基团。如前面所指出的，式子所表示的SAM即可以是单个聚合体链的一部分，也可以是整个独立分子的一部分。
Figure 85107218_IMG11
本发明所述的盐特别稳定，甚至在高于室温的条件下也是如此。事实上，对这些盐进行的热稳定性和时间关系的分析结果表明：当在45℃保持其固体状态时，这些化合物具有无限期的稳定性;但是在75℃时，就可以看到各种盐的稳定性彼此间有所不同。在任何情况下，SAM和聚阴离子所形成的盐在75℃时的稳定性一般都远远高于迄今所研究的所有其它盐的稳定性。以半衰期衡量，在最好条件下，其它盐的半衰期不到24小时，而SAM与聚阴离子形成的盐的半衰期则长达10到20倍之多。
SAM和聚阴离子形成的盐在pH＞4的水相中被增溶溶解，溶解速速度受下列因素控制：聚合体的化学性质;固体盐的化学计量比率值及其物理特性以及介质的离子强度。溶解过程中pH值不发生任何变化，即使在缓冲能力差的介质中也是如此，原因是这些盐的固有酸度较低。
一般地讲，SAM和聚阴离子形成的经过冷冻干燥的盐都是不吸湿的，而且呈现为白色晶状结构的固体。
SAM在酸性水溶液（荐用pH值2.0到3.5）中的沉淀是不受影响的，甚至溶液中存在着很高浓度的中性分子或具有离子特征的分子时也不受影响。况且，这种沉淀作用的专一性很高，例如，在MTA存在时，SAM可被选择沉淀，MTA是锍化合物的主要降解产物之一。有可能从极稀的化合物溶液中（＞0.001M）使SAM和聚阴离子结合沉淀出来，但要获得紧密的沉淀，却应使用0.002到0.2摩尔浓度的溶液，这样的沉淀可以仅仅通过沉出很容易地加以收集。要想提高不溶性盐的产率，可以在水相中加入多至一体积的水溶性有机溶剂，如甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮、甲基酮等。当溶液中每摩尔SAM使用3当量的聚阴离子时，一般说来，对SAM的沉淀过程和固体盐的稳定是最适合的条件。较高或较低比率的不同的化学计量决定于沉淀中来自介质的其他抗衡离子，如果SAM与聚阴离子的化学计量比率低于0.33，这些抗衡离子为阳离子;若这个比率高于0.33，则为阴离子。要使SAM和聚阴离子生成沉淀，可以在剧烈搅动的同时，将聚阴离子的水溶液加入到SAM溶液中，反过来也可以，尽管在一定的环境条件下，4℃的低温可以改进沉淀的产率，但在室温下也可以很快地生成沉淀。按照聚阴离子的化学性质，沉淀的形式或呈现为各种不同稠度的凝胶，或呈现为紧密的大颗粒状物质，前者很快粘附在容器壁上，而后者，在多数情况下，可以用简单的倾析法除去上层液体。用水洗涤（需要时用有机溶剂洗涤）以后，沉淀的盐可以在真空下加热使之干燥（荐用温度50℃），或者用冷冻干燥法。研磨后的固体成为晶状粉末，适合于药物配方中作为活性组分使用。
这种一般流程还可以有特殊变动，它在这样的情况下使用：溶液中含有其它种类的分子，它影响SAM盐的沉淀。例如，使用含有浓缩SAM的酵母提取物就是这样的情况。根据这一特殊变动后的流程，在pH5的适当体积的水溶液或缓冲溶液中，使沉淀增溶溶解。用这样的方法，使包藏在沉淀之中的外来分子种类在整个溶液中得到解释，然后将溶液pH值降低到2至3，SAM和聚阴离子又重新生产沉淀盐。
本发明所叙述的流程概念简单，成本又低，因而能有助于制定出工业规模的制备方法。
下面给出的例子展示了SAM和聚阴离子生成的一系列盐的制备情况。很明显，可以预料，有很多可能的具体方案，下面的例子只能说明其中的少数几种，因为这些例子只想涉及本发明所包括的范围，这些例子仅涉及在不同浓度的SAM溶液中进行的沉淀操作，尽管这些工艺流程方法也可能直接应用于含有浓缩的SAM的酵母提取物。
例1
取10升SAM硫酸盐溶液，浓度为40毫摩尔，用硫酸调到pH2.0。取2升0.6当量浓度的聚对苯乙烯磺酸（poly-para-styrene sulfonic acid）溶液（分子量7×104），其pH值调到2（多酸的当量重量，184）。于室温下剧烈搅动的同时，将后者加入到前者。可以看到立刻生成乳白色乳浊液，并在几分钟之内便凝结成一团粘稠状物质。
用简单的倾析法除去液体，用10升蒸馏水分两次洗涤沉淀，洗时要剧烈搅动溶液。用倾析法除去洗涤水以后，沉淀在真空中干燥，得到342克白色不吸湿的晶状产品，将产品磨细。这样得到的产品在pH＜4的水中是不溶解的，而pH为4至7时，可为看到溶解度在增加。在pH4时，盐的水溶液的紫外光谱图中在258毫微米处有一最大吸收峰，这和SAM的紫外谱相符合。腺嘌呤生色团的克分子消光系数较高，它和聚阴离子的苯生色团又有重迭的谱图，这两点掩盖了盐结构的紫外光谱。
对SAM和聚磺酸对苯乙烯酯生成的盐进行过高压液相色谱分析（Zappia V。et al.，“Methods in Enzymology”，94，57，1983），（ULTRASIL CX为固定相，25cm×4.6mm内径阳离子柱，0.5摩尔浓度的甲酸铵为流动相，pH值为4，流速为1毫升/分），盐溶在洗提缓冲液中，实验结果表明：在6.6分钟处有一色谱峰，和SAM具有相同的保留时间，而色谱峰的积分结果指出，锍化合物占沉淀盐干重的40%左右。对SAM与聚磺酸对苯乙烯酯生成的盐还做了1H-核磁共振谱分析（溶剂为H2O，pH7.0）。试验表明，存在正确的积分关系，SAM的信号分别位于δ8.2，6.0，4.5，3.9，3.5，2.7和2.3处，聚阴离子的增大信号分别在δ7.5，6.5和1.5。
对聚阴离子和SAM的最佳分离信号进行积分，从它们的相对关系中可以估计，盐中SAM的摩尔数和对磺酸聚苯乙烯酯的当量数的比率大约为0.3。
在pH为4到5时，这种盐缓慢溶解，而在pH7时，它很快地增溶溶解。
0.1摩尔的SAM与聚磺酸对苯乙烯酯生成的盐放在1升磷酸缓冲液中（pH7，浓度0.01摩尔），盐的增溶溶解并未使溶液产生任何明显的pH变化，这就说明，沉淀盐的剩余酸度是可以忽略的。
盐在45℃时可以无限期地保持稳定，而在75℃时半衰期为一个月以上。
例2
取1升SAM硫酸盐溶液，浓度20毫摩尔，用硫酸调至pH2.5，在室温和剧烈搅动条件下，加入500毫升0.12当量浓度的聚磺酸对苯乙烯钠溶液（分子量5×105，pH2.5，盐的当量重量206）。沉淀反应发生时的现象和例1相同。洗涤并冷冻干燥后得到16.5克白色不吸湿的晶状固体。除了在pH＞4时增溶溶解时间有所增加以外，它的光谱、色谱分析和稳定性特征和例1相似。
例3
取10升0.1当量浓度的NaClO4溶液，内含0.3摩尔SAM高氯酸盐，用HClO4调pH到2。另取2升0.45当量浓度的聚磺酸对苯乙烯钠溶液，分子量6×106，pH2（盐的当量重量206）。在室温和剧烈搅动条件下将后者加入前者。沉淀反应的演变过程与例1相似，洗涤并冷冻干燥以后，得到271克白色不吸湿的晶状固体，它的光谱、色谱分析和稳定性特征与例1相似，仅有的区别是在pH＞4时增溶溶解的速度比较慢。
例4
取1升SAM硫酸盐溶液，浓度0.1摩尔，H2SO4调pH到2.0;另取0.5升0.6当量浓度的聚磺酸乙烯钠溶液（分子量2×108，pH2，盐的当量重量为130）;在室温和剧烈搅动条件下将后者加入前者。
生成的乳白色乳浊液逐渐凝聚在反应容器壁上，得到一种清澈的很粘的凝胶。把温度降到4℃可以促进这一凝聚过程，这就可以用倾析法除去液体。
按照例1的处理方法洗涤并冷冻干燥，得到白色的不吸湿的晶状固体61.1克。
该产品在pH＞4时迅速增溶溶解，它的水溶液在pH6时的紫外光谱图和SAM的紫外谱图是完全一致的，都在258mμ处有最大吸收。
对该盐进行高压液相色谱分析，色谱条件如例1所述，结果表明，存在单一的紫外吸收峰，且该峰的保留时间和SAM的相同，该峰的积分值指出，锍化合物占沉淀盐干重的55%左右。
SAM盐的核磁共振谱（溶剂2H2O，pH5.4）表明，存在下正确的积分关系，SAM的信号位于δ8.5，8.4，6.2，4.6，4.0，3.6，3.0和2.4处，在这些信号附近，有增大的信号位于δ2.0和3.5。这些放大信号可认为是聚阴离子的脂肪链引起的。将后者的氢谱的积分和SAM的分离较好的质子谱的积分进行比较，可以得出，盐中SAM的摩尔数与聚阴离子的当量数之比值大约是0.3。和例1中看到的情况一致，剩余酸度是可以忽略的，固体盐在45℃时的稳定性是无限期的，而在75℃时半衰期可认为在一个月以上。
例5
取5升SAM硫酸盐溶液，浓度30毫摩尔，用H2SO4调到pH2.5，另取3升0.15当量浓度的聚磷酸乙烯钠溶液（分子量约1×105，pH值2.5，盐的当量重量168）。在室温和剧烈搅动条件下将后者加入前者，发生了絮凝作用，将溶液温度降到4℃可以加速絮凝过程。两小时以后，形成足够紧密的沉淀，可以通过离心分离慢慢将沉淀过滤出来，按照例1方法将产品洗涤并冷冻干燥，可得到81克白色的不吸湿的晶状固体。该产品在pH7时可以迅速增溶溶解。按照例1介绍的方法对产品进行高压液相色谱分析，结果表明，存在单一的紫外吸收峰，该峰的保留时间和SAM的相同，峰的积分值可以指出，锍化合物占沉淀盐干重的60%左右。pH6时盐的水溶液的紫外谱图和SAM的紫外谱是完全一致的。
除了聚合体骨架中的亚甲基和甲川基的化学位移值有所不同以外，核磁共振谱图和例4的谱图相似，在这种情况下，化学位移值是以增大信号的形式位于δ2.0和4.6处。通过比较锍化合物和聚阴离子的质子谱的积分值可以得出，SAM的摩尔数和聚阴离子的当量数之比大约为0.5。
与例1指出的情况相一致，剩余酸度是可以忽略的，固体盐的稳定性在45℃时是无限期的，而在75℃时半衰期为10天以上。
例6
取10升SAM硫酸盐溶液，浓度0.01摩尔，用H2SO4调到pH2.5。另取2升0.15当量浓度的六偏磷酸钠溶液，pH调到2.5（六偏磷酸钠-Sodium hexametaphosphate的当量重量102）。在4℃和剧烈搅动情况下将六偏磷酸钠溶液加入到SAM硫酸盐溶液中，很快生成白色乳浊液，2至4小时以后，便凝聚成很粘的半透明的凝胶，粘在反应器的壁上，这样就可以用倾析法除去液体。按照例1介绍的方法洗涤并冷冻干燥后便得到53克白色的、不吸湿的晶状固体。该产品在pH7时迅速增溶溶解。如同例1，高压液相色谱分析结果表明存在单一的紫外吸收峰，具有和SAM相同的保留时间，峰的积分值表明，锍化合物占沉淀盐干重的63%左右。pH6时盐的水溶液的紫外吸收和核磁共振谱图与SAM的相应谱图是完全一致的。
借助于测定晶体产品水解生成的酸，进行了盐中磷酸根含量的测定，测定结果证实化学计量比率为1∶3，其量纲定义为SAM摩尔数/六偏磷酸盐的当量数。
与例1的结果一致，剩余酸度是可以忽略的，固体盐在45℃时的稳定性是无限期的，而在75℃时它的半衰期可被认为是10天左右。
例7
取5升SAM的硫酸盐溶液，浓度为0.02摩尔，用H2SO4调至pH2.5。另取0.5升0.6当量浓度的多聚磷酸溶液（当量重量80，P2O5总含量89%）。在4℃和强烈搅拌条件下，将多聚磷酸溶液加入SAM硫酸盐溶液中。所谓多聚磷酸溶液是这样制备的：把154克P2O5溶在100克H3PO4中，在100℃加热24小时，然后把制得的多聚磷酸溶解在4℃的水中，很快用NaOH把pH值调到2.5。
反应的过程与例6中所述情况相似，产品为54克盐。固体盐的光谱数据和分析结果的特征以及稳定性都和例6结果一致。
例8
取10升SAM硫酸盐溶液，浓度为0.1摩尔，用硫酸调至pH2.5。另取2升1.5当量浓度的多聚磷酸溶液（分子量约为2×103，当量重量80，pH2.5）。在4℃和剧烈搅动情况下，将多聚磷酸溶液加入硫酸盐溶液中。反应过程与例6相似。产品为518克盐。
固体盐的光谱数据和分析结果所赋予的特征以及盐的稳定性都和例6结果一致。
例9
取5升SAM硫酸盐溶液，浓度为40毫摩尔，用H2SO4调pH2.0;另取0.5升1.2当量浓度的聚丙烯酸溶液（分子量2.5×105，pH3.0，多酸的当量重量72）。在剧烈搅动下把聚丙烯酸溶液加入SAM硫酸盐溶液中。立刻生成白色的胶粘沉淀并粘在反应容器壁上，这就可以用倾析法将母液除去。
按照例1的方法洗涤并冷冻干燥，得到102克白色不吸湿的晶状固体。该产品在pH6时迅速增溶溶解。按照例1的条件做高压液相色谱分析，存在一个紫外吸收峰，而且和SAM具有相同的保留时间，这个峰的积分值表明，锍化合物占沉淀盐干重的60%左右。pH6时这种盐的水溶液的紫外光谱和SAM的紫外光谱是完全一致的。
核磁共振谱图和例4的谱图相似，只是聚合体骨架中亚甲基和甲川基的化学位移数值所有不同，本例中，作为增大的信号位于δ1.8和2.2，通过比较锍化合物和聚阴离子的质子的积分值可以得出，SAM的摩尔数对聚阴离子的当量数的比值为1∶3，和例1情况一致，剩余酸度是可以忽略的，固体盐在45℃时的稳定性是无限期的，而在75℃时它的半衰期约为20小时。
例10
75℃时固相的热稳定性
为了考察1，3，4，5，6，7和9各假中所制得的盐在固相和75℃时的热稳定性，已将它们和下面两种盐进行了对比。SAM的氯化物和化学式SAM+·HSO- 4H2SO4·2CH3C6H4SO3H代表的复盐。附图的曲线清楚地表明，按照本发明所制得的盐具有较高的稳定性，附图的座标分别是SAM的降解百分率和时间。
依照本发明所制得的SAM的盐实际上和含有非聚合电解质型抗衡离子的锍化合物具有同样的毒性。为了估价本发明制得的盐的药物代谢动力学和生物学方面的应用性能，分别制得了S-腺苷-L-（变-14C）蛋氨酸（S-Adenosyl-L-（met-14C）methionine）和聚磺酸对苯乙烯酯，多磷酸根和硫酸根生成的盐（作为参考化合物），制备方法是用上述三种聚阴离子的溶液分别去沉淀S-腺苷-L-（变-14C）蛋氨酸溶液（比放射性为2微居/摩尔）。
用Wistar雄鼠，每5只分为一组，用10毫克/公斤的剂量（相当于来自14C10微居的放射性强度）进行胃管灌胃处理，从给药开始，在不同的时间（2，8，24和48小时）处死。
尿和粪便只在24小时和48小时收集，而血液是在30分钟时由尾部静脉取样。肝、肾、小肠和大肠、胃以及肠容物（bowel    contents）、尿、粪便和血浆被收集并计量它们的放射性（以衰变/分·克或衰变/分·毫升为单位）。
所得结果清楚地表明，按本发明制得的盐被有效地吸收，在24小时后被吸收并参与代谢的放射性占引入机体放射性剂量的60%以上。
因在酸性介质中不溶解，SAM与聚磺酸对苯乙烯酯和多磷酸根生成的两种盐在胃中不被吸收，它们在胃中停留时间不到两小时，比SAM硫酸盐的停留时间要短。
SAM与聚阴离子生成的稳定盐在肠部（小肠）已经增溶溶解，吸收过程也已开始。一般地说，当以聚磺酸对苯乙烯酯和多磷酸根为聚阴离子生成的SAM盐作为放射源时，放射性吸收情况和以SAM硫酸盐为放射源时的吸收情况相吻合，所以，SAM与聚阴离子生成的新盐可以方便地用于药物制备供口服或非肠道使用。
由于在酸性介质中溶解能力差，SAM和聚阴离子生成的盐在口服配方中，表现为受胃保护（gastroprotected）而以肠道吸收为主的一类药物成分。当使用诸如聚磺酸苯乙烯酯，聚磺酸乙烯酯，聚磷酸乙烯酯等等这些生物不能降解的大分子时，建议用这样的聚阴离子：具有足够高的分子量使之不被肠道吸收，而保证将它们随着粪便有效地排出体外。
用于静脉注射药物配方时，在SAM和聚阴离子形成的盐中，建议使用含有这样的聚阴离子的盐：能很快地在活体内生物降解成无毒分子。例如多磷酸盐，它能通过生物组织中存在的焦磷酸酶有效地降解为无机磷酸盐。SAM和六偏磷酸根生成的盐是一个非肠道给药的代表例子。这种化合物在一种低克分子浓度的缓冲溶液中增溶溶解后，能被有效地用于非肠道使用。
下面是几个药物配制的例子，它们都含有本发明制得的盐作为其活性组分：
药片或胶囊：含有20到200毫克活性组分，和所用赋形剂掺在一起。活性组分可用锍化合物表示，淀粉、硬脂酸镁、乳糖、滑石都可作为赋形剂。
冷冻干燥的安瓿剂：静脉或肌肉注射用。含有20到500毫克以化合物来表示的活性组分，使用时和无菌的或无热源溶剂溶在一起，这些溶剂可能含有止痛药、缓冲剂等。
栓剂：含有50到500毫克以锍化合物表示的活性组分，和赋形剂一起可以很方便地在直肠使用。
本发明所制得的复合物都能用于SAM所适应的所有病症，根据病情诊断结果、病人的体重和情况，非肠道使用每天1至2次，口服每天2至4次。

Claims (15)

1、一类S-腺苷-L-蛋氨酸和水溶性聚阴离子形成的盐的制备方法，其特征在于此类盐是在酸性介质中由聚阴离子和锍化合物生成沉淀而制得。
2、根据权利要求1所述的盐的制备方法，其特征在于阴离子的聚合体结构中含有强酸型或弱酸型官能团。
3、根据权利要求1，2所述的S-腺苷-L-蛋氨酸盐的制备方法，其特征在于其中的水溶性聚阴离子选自下面的一组聚阴离子：多磷酸根，偏磷酸根，聚磺酸苯乙烯酯，聚磺酸乙烯酯，聚硫酸乙烯酯，聚磷酸乙烯酯，聚丙烯酸酯。
4、根据权利要求3所述的S-腺苷-L-蛋氨酸盐的制备方法，其特征在于其中聚阴离子选自多磷酸根或偏磷酸根。
5、根据权利要求3所述的S-腺苷-L-蛋氨酸盐的制备方法，其特征在于其中的聚阴离子是聚磺酸对苯乙烯酯。
6、根据权利要求1～5中任一项所述的S-腺苷-L-蛋氨酸盐的制备方法，其特征在于其中组分的化学计量比率为0.1到0.5，其量纲定义为SAM的摩尔数/聚合体的克当量。
7、根据权利要求6所述的S-腺苷-L-蛋氨酸盐的制备方法，其特征在于其中组分的化学计量比率为0.33左右，量为SAM的摩尔数/聚合体的克当量。
8、根据权利要求1～7所述的通过锍化合物和水溶性聚阴离子的沉淀作用实现盐的制备过程。其特征在于这个过程包括的步骤是：（a）在室温下一边搅动一边将具有酸性pH值的SAM溶液和具有同样pH值的聚阴离子溶液相混合。（b）通过倾析、过滤或离心作用收集生成的沉淀物，用水洗涤收集的沉淀物，然后通过真空蒸发或冷冻干燥方法使沉淀物干燥。
9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于（a）所得的SAM，是从酵母细胞的萃取物中被沉淀出来的，主轴酵母细胞含有被浓缩的锍化合物。
10、根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在干燥以前，生成的沉淀先要被溶在PH4到5的适当体积的水中。然后通过降低溶液的PH值使之重新沉淀出来。
11、根据权利要求9所述的方法，其特征在于（a）是在4℃的条件下进行的。
12、根据权利要求8所述的方法，其特征在于（a）中的沉淀过程快结束时，在水相中加入可达1体积的与水相混溶的有机溶剂。
13、根据权利要求8所述的方法，其特征在于（b）中沉淀的洗涤是用在有机溶剂中研磨的方法。
14、一种药物复合物的制备方法，其特征在于该方法是将权利要求1-7中所述的至少一种盐作为活性物质，再加任意的无毒赋形剂并相混合。
15、根据权利要求14所述的药物复合物，其特征在于它们是适于口服、非肠道和直肠使用的片剂、糖衣片剂、胶囊;适于静脉或肌肉注射的安培剂，以及栓剂等。
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