CN2911690Y - 猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。本设计的检测试纸条由不吸水薄片的支撑层、反应试剂载体吸附层和覆盖的保护膜所组成。反应试剂载体吸附层从样品端依次为采用玻璃棉的样品纤维层、吸附金标蛋白(抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1或去核定位信号衣壳蛋白)的纤维层、印制检测印迹(抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb2或山羊抗猪IgG多克隆抗体)和对照印迹(山羊抗小鼠IgG多克隆抗体或抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1)的纤维素膜层、手柄端吸水材料层，在样品纤维层与金标纤维层交界处的保护膜上印制样品标记线。本实用新型用于PCV2抗原或抗体检测操作简单，能较好满足不同层次人员的需要。
Description
技术领域
本实用新型属于生物技术领域，涉及一种快速诊断器具，特别是涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。
背景技术
PCV2是引发猪断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，该病主要以患畜生长迟缓、进行性消瘦和多系统病理损伤为特征。除了引发PMWS外，PCV2还与猪皮炎与肾病综合征、新生仔猪先天性脑震颤、增生性坏死肺炎以及怀孕母猪的繁殖障碍等病的发生有关。目前认为，PCV2可诱发一系列的圆环病毒病。自1996年在加拿大首次发现PMWS以来，PCV2感染引起的相关疾病已在全世界广泛存在，我国也不例外，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。根据PMWS的流行病学，临床症状和剖检病理变化可对PCV2感染作出初步诊断，但确诊仍需要以实验室诊断技术检测PCV2抗原及其抗体。PCV2的衣壳蛋白是该病毒的主要免疫原，检测PCV2衣壳蛋白抗体从而可反映PCV2的抗体水平。对猪群PCV2抗体水平进行监测，可确切了解猪体免疫水平或感染状况，制定最适免疫程序或淘汰选育，有效预防和控制PCV2的侵袭和传播，避免因此而引起的重大经济损失。
目前，国内外采用的PCV2检测技术主要有：病毒分离培养，间接免疫荧光(IFA)，免疫酶单层试验(IMPA)，原位杂交(ISH)，聚合酶链式反应(PCR)等等。上述技术和方法虽然可以检测PCV2及其抗体水平，在实践中也取得一定的效果，但均存在试验操作复杂，耗时长，需要特定的专业技能和仪器设备等，成本昂贵，常限于实验室内进行，很难在基层普及和推广。因此，研制开发适用于养殖基层的快捷、简便的PCV2抗体检测器具，对猪群PCV2免疫水平进行实时监测，建立科学的、灵活的猪群疫病免疫程序，对疫病的预防和控制有重要意义。
发明内容
本实用新型的目的是克服上述已知技术存在的不足，提供一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。可有效检测猪的PCV2抗原或抗体，用于PCV2感染的抗原、抗体诊断。
本设计的猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条由支撑层1、反应试剂载体吸附层和覆盖的保护膜所组成；所述支撑层为不吸水薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，反应试剂载体吸附层从样品端依次为样品纤维层2、金标纤维层3、纤维素膜层4、手柄端吸水材料层5，在纤维素膜层4上印制有条状的检测印迹6和条状的对照印迹7。
所说不吸水薄片层的支撑层采用的是硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，样品纤维层采用玻璃棉，手柄端吸水材料层采用吸水纸，纤维素膜层采用硝酸纤维素膜，金标纤维层采用吸附金标蛋白的玻璃棉，在样品纤维层与金标纤维层及手柄端吸水材料层上覆盖有保护膜，在样品纤维层与金标纤维层交界处的保护膜上偏向样品纤维层一侧0.5cm处印制样品标记线。
用于抗原检测的试纸条的所述玻璃棉吸附的金标蛋白为胶体金标记抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1，在纤维素膜层上的检测印迹6为抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb2，对照印迹7为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体。
用于抗体检测试纸条的所述玻璃棉吸附的金标蛋白为胶体金标记重组PCV2去核定位信号衣壳蛋白，在纤维素膜层上的检测印迹6为山羊抗猪IgG多克隆抗体，对照印迹7为抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1。
所说的重组PCV2去核定位信号衣壳蛋白为利用原核高效表达系统表达和纯化的基因工程重组蛋白，可与PCV2阳性血清特异结合。
所说的抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体特异识别PCV2衣壳蛋白，与猪圆环病毒1型衣壳蛋白无交叉反应，可有效区分猪圆环病毒1型和2型病毒。
本实用新型有益的积极效果是：PCV2抗原或抗体检测试纸条操作简单，人人都可操作，能较好满足不同层次人员的需要，如疫病监测、海关检疫、卫生防疫、集约化养殖到个体养殖等，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。PCV2抗原或抗体检测试纸条具有下列各项优点：
(1)特异性强，敏感性高。PCV2抗原或抗体检测试纸条以抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体或重组表达的PCV2去核定位信号衣壳蛋白为基础制备而成；单克隆抗体为高亲和力的抗PCV2衣壳蛋白特异性均质抗体，特异识别PCV2衣壳蛋白，与PCV1无交叉反应；重组去核定位信号衣壳蛋白蛋白为非全病毒抗原、安全性好，不含无关杂蛋白，具有良好抗原性，因此具有很高的特异性和敏感性。
(2)操作简便快速。使用PCV2抗原或抗体检测试纸条检测PCV2抗原或抗体时，无需另配其它试剂，在2-10分钟内即可判定检测结果。
(3)显示检测结果形象、直观准确。PCV2抗原或抗体检测试纸条以一条红棕色条状印迹和两条红棕色条状印迹作为检测的阴性和阳性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹表示在被检测样品液中PCV2病毒或抗体为阴性，两条棕红色“||”印迹表示在被检样品中PCV2病毒或抗体为阳性，结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。
(4)成本低，投资少。PCV2抗原或抗体检测试纸条可在检测现场完成操作，检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。
附图说明
图1是PCV2抗原及抗体检测试纸条侧视结构示意图；
图2是PCV2抗原及抗体检测试纸条俯视结构示意图，图中：支撑层1，样品端纤维层2，金标玻璃棉3，纤维素膜层4，手柄端吸水材料层5，检测印迹6，对照印迹7，样品端保护膜8，标记线9，手柄端保护膜10。
具体实施方式
本实用新型的技术方案是：一种PCV2抗原或抗体检测试纸条，具有支撑层1，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层2，金标纤维层3，纤维素膜层4，手柄端为吸水材料层5，在纤维素膜层4上印制有检测印迹“|”6和对照印迹“|”7，其排列组合为“||”。不吸水的支撑层薄片层用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层用玻璃棉，吸水材料层用吸水纸，纤维素膜层用硝酸纤维素膜，金标纤维层用吸附金标蛋白的玻璃棉，在玻璃棉与金标玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制样品标记线。
PCV2抗原检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体mAb1，在纤维素膜层上的检测印迹6为抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb2，对照印迹7为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体，PCV2抗体检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记PCV2重组去核定位信号衣壳蛋白，在纤维素膜层上的检测印迹6为山羊抗猪IgG多克隆抗体，对照印迹7为抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1。
PCV2抗原或抗体检测试纸条的实施结构
PCV2抗原或抗体检测试纸条实施结构参见图1，图2。图中，1为支撑层用不吸水薄片条，实施中可采用塑胶薄片条或采用不吸水的硬质纸片材，反应试剂载体吸附层由2，3，4，5，组合而成，从样品端2开始，到手柄端5依次粘贴在支撑层1上面；其中2为样品端纤维层，实施中可使用玻璃纤维棉简称玻璃棉，3为吸附金标蛋白的纤维层，可采用精制玻璃纤维棉，简称为金标玻璃棉，4为纤维素膜层，实施中可采用硝酸纤维素膜，5为手柄端吸水材料层，采用吸水纸，如滤纸或其它吸水纸均可，试纸条总长8cm，宽度0.4cm，6为用抗PCV2dCap单克隆抗体mAb2或山羊抗猪IgG多克隆抗体在硝酸纤维素膜上印制的检测印迹“|”，7为用山羊抗小鼠IgG多克隆抗体或抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1在硝酸纤维素膜上印制的对照印迹“|”，在纤维素膜层上的检测印迹和对照印迹组合排列为“||”。8，10为保护膜，覆盖在玻璃棉及金标玻璃棉的保护膜为8，在玻璃棉和金标玻璃棉交界处对应位置的白色保护膜上偏向玻璃棉一方0.5cm处的保护膜上印有一条标记线9，在标记线9右边印有箭头和Max字样，覆盖在吸水层滤纸上的保护膜为10，保护膜可用黄色或其它颜色，2，3，4，5各层彼此之间交界处纤维互相交叉渗透。
PCV2抗原或抗体检测试纸条实施检测反应原理
PCV2抗原检测试纸条检测反应原理为：PCV2抗原检测试纸条样品端插入待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动待检抗原与金标蛋白一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗透到滤纸层中，在扩散过程中待检抗原与金标蛋白相结合，形成金标蛋白-抗原复合物，该复合物可与检测印迹中的抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb2相结合，生成红棕色“|”标记，部分未与抗体结合的金标蛋白不能与检测印迹结合而继续扩散，在纤维膜上与对照印迹中的山羊抗小鼠IgG多克隆抗体结合，生成红棕色标记“|”两种标记组合叠加，形成两条红棕色阳性标记“||”，反之只有金标蛋白与对照印迹相结合，没有金标蛋白-抗原复合物形成，不能与检测印迹结合，则生成阴性标记“|”。如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效。
PCV2抗体检测试纸条检测反应原理为：PCV2抗体检测试纸条样品端插入待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动待检抗体与金标蛋白一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗透到滤纸层中，在扩散过程中待检抗体与金标蛋白相结合，形成金标蛋白-抗体复合物，该复合物可与检测印迹中的山羊抗猪IgG多克隆抗体相结合，生成红棕色“|”标记，部分未与抗体结合的金标蛋白不能与检测印迹结合而继续扩散，在纤维膜上与对照印迹中的抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体mAb1结合，生成红棕色标记“|”两种标记组合叠加，形成两条红棕色阳性标记“||”，反之只有金标蛋白与对照印迹相结合，没有金标蛋白抗体复合物形成，不能与检测印迹结合，则生成阴性标记“|”。如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效。
PCV2抗原或抗体检测试纸条检测实例操作方法
检测样品溶液的制备：采集待检猪淋巴结，脾，肺或血清，以样品稀释液或生理盐水1∶5，1∶10，1∶20倍比稀释，制备梯度稀释样品溶液。
PCV2抗原或抗体检测试纸条检测实例操作方法：将PCV2抗原或抗体检测试纸条样品端分别插入梯度稀释待检测样品液中，插入深度不超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果，在纤维素膜上显现两条红棕色标记“||”表示检测结果呈阳性，显现一条标记“|”为阴性，检测试纸条呈阳性的样品最大稀释度为待检样品的抗原或抗体滴度，如果检测试纸条在待检样品各个稀释度均呈阴性，则表明待检样品中不含PCV2病毒或抗体，如果检测试纸条没有标记显示，则表明试纸条失效。
实施例1 PCV2抗原检测试纸条
使用PCV2抗原检测试纸条检测猪PCV2感染时，采集待检猪肉样或病变组织，充分研磨后，以生理盐水1∶10或1∶20稀释，制备待检样品溶液，将PCV2抗原检测试纸条样品端插入待检测样品液中，插入深度不超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果，在纤维素膜上显现两条红棕色标记“||”的样品为PCV2阳性，表明待检样品感染PCV2，显现一条标记“|”为PCV2阴性，则表明待检样品没有PCV2感染，如果检测试纸条没有标记显示，则表明试纸条失效。
实施例2 PCV2抗体检测试纸条
使用PCV2抗体检测试纸条检测猪血清PCV2抗体水平时，采集待检猪血液，分离血清，以生理盐水1∶10，1∶20，1∶40倍比稀释，制备梯度稀释样品溶液，将PCV2抗体检测试纸条样品端分别插入梯度稀释待检测样品液中，插入深度不超过标记线9，约10秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果，在纤维素膜上显现两条红棕色标记“||”的样品为PCV2抗体阳性，显现一条标记“|”为PCV2抗体阴性，PCV2阳性的样品最大稀释度即为待检血清样品的PCV2抗体滴度，如果检测试纸条在待检血清各个稀释度均呈阴性，则表明待检血清不含PCV2抗体，如果检测试纸条没有标记显示，则表明试纸条失效。
Claims (6)
1、猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：它由支撑层(1)、反应试剂载体吸附层和覆盖的保护膜所组成；所述支撑层为不吸水薄片层，反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，反应试剂载体吸附层从样品端依次为样品纤维层(2)、金标纤维层(3)、纤维素膜层(4)、手柄端吸水材料层(5)，在纤维素膜层(4)上印制有条状的检测印迹(6)和条状的对照印迹(7)。
2、根据权利要求1所述猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说不吸水薄片层的支撑层采用的是硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，样品纤维层采用玻璃棉，手柄端吸水材料层采用吸水纸，纤维素膜层采用硝酸纤维素膜，金标纤维层采用吸附金标蛋白的玻璃棉，在样品纤维层与金标纤维层及手柄端吸水材料层上覆盖有保护膜，在样品纤维层与金标纤维层交界处的保护膜上偏向样品纤维层一侧0.5cm处印制样品标记线。
3、根据权利要求1或2所述的猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：用于抗原检测的试纸条的所述玻璃棉吸附的金标蛋白为胶体金标记抗猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体mAb1，在纤维素膜层上的检测印迹(6)为抗猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体mAb2，对照印迹(7)为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体。
4、根据权利要求1或2所述的猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：用于抗体检测试纸条的所述玻璃棉吸附的金标蛋白为胶体金标记重组猪圆环病毒2型去核定位信号衣壳蛋白，在纤维素膜层上的检测印迹(6)为山羊抗猪IgG多克隆抗体，对照印迹(7)为抗猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体mAb1。
5、根据权利要求3或4所述的猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的重组猪圆环病毒2型去核定位信号衣壳蛋白为利用原核高效表达系统表达和纯化的基因工程重组蛋白，可与猪圆环病毒2型阳性血清特异结合。
6、根据权利要求3或4所述的猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：所说的抗猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体特异识别猪圆环病毒2型衣壳蛋白，与猪圆环病毒1型衣壳蛋白无交叉反应，可有效区分猪圆环病毒1型和2型病毒。
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