CN101344524B - 一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条 - Google Patents

一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，该试纸条含有支撑层、吸附层和保护层，吸附层从测试端依次为样品纤维层、吸附金标物纤维层、纤维素膜层和吸水材料层；吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的SPA或胶体金标记的纯化PPV和JEV抗原液中任一种或两种；在纤维素膜层上设有检测印迹和对照印迹，检测印迹用纯化PPV和JEV抗原液中任一种或两种印制，对照印迹用羊或兔抗SPA的IgG液、或用羊(或兔)抗PPV和JEV中任一种或两种病毒的IgG溶液印制。本发明试纸条检测时特异性强、敏感性高，无需附加设备、试剂，人人均可操作，特别适合现场快速检测猪病的特异抗体。

Description

一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条
一、技术领域：
本发明涉及一种检测猪繁殖障碍性病毒传染病抗体的器具，特别是涉及一种一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条。
二、技术背景：
我国是生猪的生产和消费大国。随着大中小型规模化养猪场、种猪场数量的逐年增加，猪繁殖障碍性疾病已成为我国规模化猪场最重要的疾病之一，发病率平均达30％以上，造成巨大的经济损失，并严重制约着养猪业的发展。猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒和伪狂犬病毒等是造成猪繁殖障碍的重要病毒。PRRSV引起猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)，表现为感染母猪发热、厌食，怀孕后期发生流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等，感染仔猪发生呼吸困难(肺炎)、免疫机能障碍和高死亡率；因部分病猪的耳朵发紫，又称蓝耳病。蓝耳病近年来在我国广为传播，如2006年我国南北10多个省(市、区)的猪群发生的“高热病”现认为是高致病性PRRSV毒株引起的，发病猪群达200万头，死亡40万头。PPV(代号P)引起猪细小病毒病，主要表现为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、死胎、畸形胎、木乃伊胎和弱仔以及屡配不孕，而其他年龄的猪感染后不表现明显的临床症状。目前猪细小病毒病在我国猪群中广为传播，在大多数感染猪场呈地方性流行并且很难净化，从而造成了持续的经济损失，严重阻碍了养猪业的健康发展。JEV(代号J)引起人畜共患病—流行性乙型脑炎。猪乙型脑炎主要表现为感染猪发热、厌食，母猪怀孕后期突然发生流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等，新生仔猪良莠不齐、死亡率高，感染公猪出现睾丸炎。猪乙型脑炎主要由带病毒的蚊虫叮咬而传播，主要分布在亚洲各国，我国大部分地区均有本病发生。
生产中，PPV、JEV与PRRSV等病毒引起的繁殖障碍性疾病，其临床症状相似，而且经常混合感染，单凭临床病理变化往往不能及时正确诊断，最后确诊有赖于实验室检查，如要检测病猪样品中病原或其特异抗体的存在、甚至用分离到的病原复制出临床病例。目前实验室检测PPV和JEV抗体的方法有：(1)病毒培养与抗体检测：取标准病毒接种猪原代或传代肾细胞等培养，用酶或荧光素标记二抗检测待检血清中的特异抗体，或直接检测待检血清中的中和抗体；(2)多数情况下用血凝抑制试验(HI)检测PPV或JEV感染猪血清中的特异抗体，也有人用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染猪血清中的特异抗体。病毒培养与抗体检测技术操作复杂、需要仪器和较长的时间，不适合生产或现场的快速诊断需要。ELISA和HI比较简便、快速，常用来检测JEV和PPV的抗体，但仍不便于我国基层或现场普遍推广应用。因为ELISA仍需要酶标仪和试剂，较多的操作步骤和经验，HI也需要新鲜的豚鼠或鹅红血球；这些仪器、试剂在基层较为缺乏，或者缺乏操作人员和保存条件。为此，有人研究报道了用斑点免疫金渗滤法来检测PPV、JEV及其抗体。这种方法利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原—抗体反应由ELISA或HI的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶体金标记代替酶标记和红血球标记，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况而判断结果。因此，比HI或ELISA更简便、快速和实用。但目前报道的斑点免疫金渗滤法一次只能检测一种猪病抗体，而且至少需添加两次试剂和洗涤两次才能获得结果；其操作仍不够简便，仍不便于非专业的基层人员使用。因此，研究一种简便而快速、一步可以检测一种或多种猪病病毒抗体的实时在线检测技术，非常重要而迫切。
三、发明内容：
本发明的目的是克服现有技术中检测猪细小病毒和猪乙型脑炎猪病抗体存在的缺陷，提供一种特异性强、敏感性高、简便、快速检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的免疫金标试纸条。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，该试纸条含有支撑层和吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，吸附层附着在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、吸附金标物纤维层、纤维素膜层和手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上设有检测印迹和对照印迹；所述吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的葡萄球菌蛋白A即SPA，所述检测印迹用纯化的猪细小病毒PPV和猪乙型脑炎病毒JEV抗原液中的任一种或两种印制，所述对照印迹用羊或兔抗SPA的IgG溶液印制；或者，所述吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的纯化猪细小病毒PPV和猪乙型脑炎病毒JEV抗原液中的任一种或两种，所述检测印迹用纯化的PPV和JEV抗原液中对应的任一种或两种印制，所述对照印迹用羊或兔抗PPV和JEV中对应的任一种或两种病毒的IgG溶液印制。
所述吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的SPA，所述检测印迹用纯化的PPV和JEV两种抗原液印制，所述对照印迹用羊或兔抗SPA的IgG溶液印制；或者，所述吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的纯化PPV和JEV两种抗原液，所述检测印迹用纯化的PPV和JEV两种抗原液印制，所述对照印迹用羊或兔抗PPV和JEV两种病毒的IgG溶液印制。
所述支撑层用不吸水的硬质塑胶片条或硬纸条制成。
所述测试端样品吸附纤维层用玻璃棉、或尼龙纤维、或聚酯纤维制成；所述吸附金标物纤维层用玻璃棉制成。
所述纤维素膜层用硝酸纤维素膜、或纯纤维素膜、或羧化纤维素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纤维素膜制成。
所述吸水材料层用吸水纸制成。
所述检测印迹和对照印迹为直线式、或斜线式、或实心圆点，所述纤维素膜层上含有一条或个检测印迹时，一条或个检测印迹和对照印迹的排列形式为“||”、“＝”、“//”、“\\”、“-|”、“|-”、“+”、
Figure G200810141159XD00032
“
Figure G200810141159XD0003185940QIETU
”、
Figure G200810141159XD00033
中的任一种；纤维素膜层上含有两条或个检测印迹时，两条或个检测印迹和对照印迹的排列形式为“|||”、“
Figure G200810141159XD0003161202QIETU
”、“///”、“\\\”、
Figure G200810141159XD00034
”
Figure G200810141159XD00035
Figure G200810141159XD00036
中的任一种。
所述试纸条吸附层上面含有一层保护层，所述保护层附着在吸附层上；在所述测试端样品吸附纤维层、吸附金标物纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端样品吸附纤维层与吸附金标物纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端样品吸附纤维层一侧0.5cm处。
根据测试要求，选择吸附金标物纤维层、检测印迹和对照印迹中对应的一种表达形式。
注明：如果吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的葡萄球菌蛋白A即SPA，则检测印迹用纯化的PPV和JEV抗原液中的任一种或两种印制，对照印迹用羊或兔抗SPA的IgG溶液印制；如果吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的纯化猪细小病毒PPV和猪乙型脑炎病毒JEV抗原液中的任一种或两种，则检测印迹用纯化的PPV和JEV抗原液中对应的任一种或两种印制，对照印迹用羊或兔抗PPV和JEV中对应的任一种或两种病毒的IgG溶液印制。
本发明的积极有益效果：
1、检测特异性强、敏感性高：本发明快速检测试纸条以胶体金标记两种纯化的猪病病毒(Wi)或SPA为基础制备而成，金标抗原或SPA中的金颗粒与抗原或SPA分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对PPV和JEV这两种纯化猪病病毒(Wi)的特异性影响很小，也不影响SPA与抗体的结合及抗体与抗原的结合，且具有较高的标记率。因此，本发明快速检测试纸条具有较高的特异性和敏感性，可检测到2纳克相应的抗体蛋白。
2、操作简便、快速：使用本发明试纸条检测过程中无需附加任何其它仪器和试剂，只要将其测试端插入待检血清中30秒左右，然后在5分钟左右即可判定检测结果。
3、检测结果显示直观、准确：本发明检测试纸条以显示棕红色的检测印迹和对照印迹作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜层上只显示一条(个)棕红色对照印迹C，表示这两种猪病抗体在被检血清中均未检出；在纤维素膜层上显示一条(个)棕红色对照印迹C和两条(个)棕红色检测印迹P、J，则表示在被检血清中检出这两种猪病的抗体；在纤维素膜层上显示一条(个)棕红色对照印迹C和两条(个)棕红色检测印迹P、J中的任一种，则表示在被检血清中检出这两种猪病抗体相对应中的一种，检测结果呈阳性；结果判定直观、准确、简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。
4、减少投资和降低检测成本：使用本发明快速检测试纸条，不需要另配其它仪器、设备和试剂，节省大量仪器、设备和附加试剂费用；一条试纸一次可以检测一种或两种猪病抗体，而且专业和非专业人士均可随时随地进行实时在线检测，无需支付专家诊断检查费及其相关费用。因此，可以节省检测成本，降低检测费用。
5、应用范围广、便于推广使用：本发明快速检测试纸条操作简单成“一步式”或“傻瓜式”，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。
四、附图说明：
图1一种一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体试纸条的侧视结构示意图。
图2一种一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体试纸条的俯视结构示意图。
五、具体实施方式：
以下实施例仅为了进一步说明本发明，并不限制本发明的内容。
要制备一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，需先制备纯化的PPV(代号P)和JEV(代号J)，抗PPV和JEV的抗体IgG，以及抗SPA的抗体IgG，用于制备吸附金标物纤维层、检测印迹和对照印迹。
1、羊抗或兔抗SPA的IgG的制备：
以50μg～100μg SPA/kg体重经皮下和肌肉注射阴性健康羊或家兔3～4次，末次免疫20天后静脉采血，以ELISA测定其血清抗体效价在1：2000以上，心脏采血或颈动脉放血，收集其高免血清。取1份血清加2份PBS液(pH7.2)混匀，加等体积饱和硫酸铵液混匀，置4℃冰箱内2h，在4℃、10000r/min离心15min，弃上清液；以适量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，加饱和硫酸铵液至其最终浓度为33％，置4℃冰箱内2h，在4℃、10000r/min条件下离心15min，弃上清液，以少量PBS液(pH7.2)溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS液(pH7.2)过夜透析，换液2～3次，在4℃、10000r/min条件下离心15min，收集上清液，以紫外分光光度计测定其蛋白浓度。以饱和硫酸铵法提取的羊(或兔)抗SPA的IgG，用来制备本发明快速检测试纸条的对照印迹。
2、羊抗或兔抗PPV和JEV的IgG(Xi)制备：
采用国家批准的PPV和JEV这两种猪病的灭活疫苗或弱毒疫苗，多次免疫接种抗体阴性健康羊或兔。末次免疫20天后静脉采血，以HI测定其血清PPV或JEV的抗体效价均在1:1024以上，心脏采血或颈动脉放血，收集其高免血清，以饱和硫酸铵法提取血清中IgG抗体(方法与提取抗SPA的IgG相同，不再重述)。
3、纯化PPV和JEV(Wi)的制备：
3.1纯化PPV的制备：待ST细胞长成单层后，弃其生长液，用PBS液洗2次，接种适量PPV毒液，37℃条件下吸附1h，加维持液后继续于37℃培养，待细胞病变(CPE)达80％时收获病毒培养物，-20℃和常温下反复冻融3次，4℃、8000r/min离心30min，取上清。向上清液中分别缓慢加入NaCl和PEG-6000至其最终浓度分别为0.5mol/L和10％，用1mol/L的NaOH调其pH至8.0，4℃条件下搅拌过夜后，4℃、10000r/min离心30min，沉淀物以少量TNE缓冲液溶解，4℃条件下搅拌过夜后再同上4℃离心，收集上清液。用TNE缓冲液配制成30％、40％、50％和60％的不连续梯度蔗糖液，小心逐层加入离心管内，将经PEG浓缩的PPV液加入离心管最上层，4℃、39500r/min离心2h。将各离心管中的相同白色区带合并，测定各区带血凝价，并用PPV标准阴性、阳性血清做HI试验。取病毒带对TNE透析，浓缩即为纯化病毒，-32℃冻存备用。
3.2纯化JEV的制备：待BHK-21细胞长成单层后接种适量弱毒SA14-14-2，待80％的细胞出现病变时，收毒于-20℃冰箱，反复冻融3次后，4000rpm/min离心1h，22000r/min离心40min，去沉淀；上清液用30％的(NH4)2SO4溶液沉淀后，5000r/min离心30min，收集沉淀，加生理盐水至原体积的10％，再用蒸馏水透析纯化，经萘氏试剂检测无NH4 +，2％BaCl2溶液检测无SO4 2-后，用PEG20000浓缩至原体积的5％。该浓缩液经蔗糖不连续梯度(30％至60％)离心，23000r/min离心4h，收取病毒带透析浓缩即为纯化病毒液，测定其蛋白含量，-32℃保存待用。
4、金标纯化PPV和JEV(Wi)玻璃棉或金标SPA玻璃棉的制备：
以柠檬酸钠还原法制备金溶胶：即在50～100ml沸腾的0.01～0.05％氯金酸水溶液中加入2～4ml的0.5～2％柠檬酸三钠溶液，获得直径15nm左右的胶体金。以0.1mol/L的K2CO3调胶体金pH至8.5～9.5，以1:1000～1300的标记比将待标记的纯化病毒PPV或JEV(W1或W2)或者SPA加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后，加20％PEG10000至其最终浓度为0.05％，4℃、1500～3000r/min离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000r/min离心1h，弃上清液，获初步纯化金标病毒或SPA混合物后，用丙烯葡聚糖S-400柱层析，分离纯化金标蛋白，分别获得胶体金标记的PPV、JEV或者SPA。将1:100～500稀释的胶体金标记物吸附于精制玻璃棉中，4℃低温真空干燥，制备出金标抗原或SPA玻璃棉。
5、本发明快速检测试纸条实施检测的原理：
当本发明快速检测试纸条测试端插入待检测血清后，待检血清通过虹吸带动待检猪病抗体及金标抗原玻璃棉中的金标抗原(Wi)一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗入手柄端滤纸中，扩散过程中待检猪病抗体可与相应的金标SPA或病毒抗原(Wi)相结合，该结合物进而与纤维素膜上的纯化病毒抗原检测印迹结合，从而显示出棕红色的检测印迹P和/或J；而羊(兔)抗SPA的IgG、或羊(兔)抗病毒的IgG则可分别与金标SPA或金标病毒抗原(Wi)结合，形成棕红色对照印迹C。如果待检血清中没有PPV和/或JEV的抗体，试纸条只显示出一条(个)棕红色对照印迹C；血清中含有抗PPV和/或JEV的抗体，则分别与其金标抗原W1、W2或SPA结合，再与纤维素膜上的相应病毒抗原检测印迹P和/或J结合，显示出棕红色的检测印迹，为阳性标记；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作失误。
6、本发明快速检测试纸条的检测操作方法：
(1)检测样品液的制备：无菌取病猪的血液，并分离血清，以生理盐水作1：50倍稀释血清待测。
(2)检测操作：将本发明快速检测试纸条测试端插入待检测血清中，插入深度不超过标记线9，约30秒后取出试纸条，水平放置约1～5分钟，同时观察结果。
(3)结果判断：如果在检测试纸条纤维素膜层上只显示出一条(个)棕红色对照印迹C，表示检测结果呈阴性，说明在被检血清中未检测出抗PPV和/或JEV的抗体；如果检测试纸条上的纤维素膜层上出现棕红色的对照印迹C和检测印迹P或J，表示检测结果呈阳性，即在待检血清中检测出抗PPV或JEV的抗体；如果检测印迹P、J同时出现，表示在待检血清中检测出PPV和JEV的抗体；如果纤维素膜带上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作有误。
实施例一：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条
参见图1和图2，图中1为支撑层，用硬质塑胶薄片条制成，2为测试端的样品吸附纤维层，用玻璃棉制成，3为吸附金标物纤维层，用吸附有胶体金标记SPA的玻璃棉制成，根据上述具体实施方式4中所述的制备方法制备其金标SPA玻璃棉，4为纤维素膜层，采用硝酸纤维素膜制成，5为吸水材料层，用吸水滤纸制成；将编号2、3、4、5各层从左端测试端至右粘贴在硬质塑胶薄片条1上，彼此之间交界处纤维互相交叉渗透；在硝酸纤维素膜层4上，6用纯化的PPV和JEV两种病毒抗原液印制的检测印迹P和J，7为用羊(或兔)抗SPA的IgG溶液印制的对照印迹，两种印迹排列形成的组合印迹带为“|||”、“
Figure G200810141159XD0008161441QIETU
”、“///”、“\\\”、“”、
Figure G200810141159XD00081
Figure G200810141159XD00082
Figure G200810141159XD00083
中的任一种。8—1为覆盖在测试端样品吸附纤维层2和吸附金标物纤维层3上面的白色保护膜，在2和3交界处对应保护膜8-1位置上偏向于样品吸附纤维层2一侧0.5cm处印有标记线9，9的右端印有箭头及max字样，吸水材料层5(手柄端)上覆盖有其它颜色(如黄色)保护膜8-2。
待测血清的制备及检测步骤和操作方法，与具体实施方式6中的检测操作方法相同，不再重述。
实施例二：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例一基本相同，不同之处在于：
吸附金标物纤维层3用吸附有胶体金标记的PPV和JEV两种纯化病毒抗原液的玻璃棉制成，根据上述具体实施方式4中所述的制备方法制备其金标纯化病毒抗原(Xi)玻璃棉；在硝酸纤维素膜层4上，7为用羊(或兔)抗PPV和JEV两种病毒的IgG溶液印制的对照印迹C，两种印迹带平行排列组合为“|||”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例三：一步检测猪细小病毒抗体的试纸条，与实施例一基本相同，不同之处在于：
吸附金标物纤维层3用吸附有胶体金标记SPA的玻璃棉制成，根据上述具体实施方式4中所述的制备方法制备其金标SPA玻璃棉，6用纯化的PPV病毒抗原液印制的检测印迹P，7为用羊(或兔)抗SPA的IgG溶液印制的对照印迹C，两种印迹带排列形成的组合印迹带为“||”、“＝”、“//”、“\\”、“-|”、“|-”、“+”、“┻”、“┳”、“
Figure G200810141159XD0009190323QIETU
”、
Figure G200810141159XD00091
中的任一种。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例四：一步检测猪细小病毒抗体的试纸条，与实施例三基本相同，不同之处在于：
吸附金标物纤维层3用吸附有胶体金标记的PPV纯化病毒抗原液的玻璃棉制成，根据上述具体实施方式4中所述的制备方法制备其金标纯化病毒抗原玻璃棉；7为用羊(或兔)抗PPV病毒的IgG溶液印制的对照印迹C，检测印迹和对照印迹组合排列为“||”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例五：一步检测猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例三基本相同，不同之处在于：
吸附金标物纤维层3用吸附有胶体金标记SPA的玻璃棉制成，根据上述具体实施方式4中所述的制备方法制备其金标SPA玻璃棉，6用纯化的JEV病毒抗原液印制的检测印迹J，7为用羊(或兔)抗SPA的IgG溶液印制的对照印迹C，检测印迹和对照印迹组合排列为“
Figure 200810141159X100002G200810141159XD0009190323QIETU
”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例六：一步检测猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例五基本相同，不同之处在于：
吸附金标物纤维层3用吸附有胶体金标记的JEV纯化病毒抗原液的玻璃棉制成，根据上述具体实施方式4中所述的制备方法制备其金标纯化病毒抗原玻璃棉；7为用羊(或兔)抗JEV病毒的IgG溶液印制的对照印迹C，检测印迹和对照印迹组合排列为“||”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例七：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例一基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用尼龙纤维制成，纤维素膜层4采用纯纤维素膜制成，检测印迹和对照印迹平行排列组合为“\\\”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例八：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例一基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用聚酯纤维制成，纤维素膜层4采用羧化纤维素膜制成，检测印迹和对照印迹平行排列组合为“
Figure G200810141159XD0010190430QIETU
Figure 200810141159X100002G200810141159XD0009190323QIETU
”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例九：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例三基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用尼龙纤维膜制成，纤维素膜层4采用聚偏二氟乙烯(PVDF)纤维素膜制成。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例十：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例二基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用尼龙纤维制成，纤维素膜层4采用纯纤维素膜制成，检测印迹和对照印迹平行排列组合为“///”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例十一：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例三基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用聚酯纤维素制成，纤维素膜层4采用羧化纤维素膜制成，检测印迹和对照印迹平行排列组合为“\\”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例十二：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例五基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用聚酯纤维素制成，纤维素膜层4采用聚偏二氟乙烯纤维素膜制成，检测印迹和对照印迹平行排列组合为“-|”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。
实施例十三：一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，与实施例一基本相同，不同之处在于：
支撑层1采用不吸水的硬纸条制成，样品吸附纤维层2采用聚酯纤维素膜制成，纤维素膜层4采用纯纤维素膜制成，检测印迹和对照印迹平行排列组合为“
Figure G200810141159XD0011190520QIETU
”。其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同具体实施方式6中的操作方法，不再重述。

Claims (8)

1.一种一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条，该试纸条含有支撑层和吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，吸附层附着在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、吸附金标物纤维层、纤维素膜层和手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上设有检测印迹和对照印迹，其特征是：所述吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的纯化猪细小病毒PPV和猪乙型脑炎病毒JEV抗原液中的任一种或两种，所述检测印迹用纯化的PPV和JEV抗原液中对应的任一种或两种印制，所述对照印迹用羊或兔抗PPV和JEV中对应的任一种或两种病毒的IgG溶液印制。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述吸附金标物纤维层吸附有胶体金标记的纯化PPV和JEV两种抗原液，所述检测印迹用纯化的PPV和JEV两种抗原液印制，所述对照印迹用羊或兔抗PPV和JEV两种病毒的IgG溶液印制。
3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述支撑层用不吸水的硬质塑胶片条或硬纸条制成。
4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述测试端样品吸附纤维层用玻璃棉、或尼龙纤维、或聚酯纤维制成；所述吸附金标物纤维层用玻璃棉制成。
5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述纤维素膜层用硝酸纤维素膜、或纯纤维素膜、或羧化纤维素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纤维素膜制成。
6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述吸水材料层用吸水纸制成。
7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述检测印迹和对照印迹为直线式、或斜线式、或实心圆点，所述纤维素膜层上含有一条或个检测印迹时，一条或个检测印迹和对照印迹的排列形式为“| |”、“＝”、“/ /”、“\ \”、“- |”、“| -”、“+”、“⊥”、
Figure FSB00000753408400011
“··”、中的任一种；纤维素膜层上含有两条或个检测印迹时，两条或个检测印迹和对照印迹的排列形式为“| | |”、
Figure FSB00000753408400021
“/ / /”、“\ \ \”、“···”、
Figure FSB00000753408400022
Figure FSB00000753408400023
中的任一种。
8.根据权利要求1～7任一项所述的试纸条，其特征是：所述试纸条吸附层上面含有一层保护层，所述保护层附着在吸附层上；在所述测试端样品吸附纤维层、吸附金标物纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端样品吸附纤维层与吸附金标物纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端样品吸附纤维层一侧0.5cm处。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101699290B (zh) * 2009-04-03 2013-12-25 李克生 肺炎支原体抗体(IgG/IgM)金标快速检测卡
CN101930003B (zh) * 2010-08-19 2013-07-24 武汉中博生物股份有限公司 抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂板及制备方法
CN102445536A (zh) * 2011-09-29 2012-05-09 中国检验检疫科学研究院 检测马脑炎病毒抗体的金标免疫试纸条及其制备方法和应用
CN103116022A (zh) * 2013-01-23 2013-05-22 广西壮族自治区兽医研究所 快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条及其制备方法
CN103941015A (zh) * 2013-03-15 2014-07-23 河南省农业科学院 猪胸膜肺炎放线杆菌内毒素抗体快速检测试纸条
CN103217527B (zh) * 2013-04-17 2016-09-14 河南省农业科学院 马立克氏病病毒和禽网状内皮组织增生病病毒快速联检试纸条
CN109946457A (zh) * 2019-03-04 2019-06-28 武汉科前生物股份有限公司 一种检测猪流行性腹泻病毒的胶体金试纸条

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201051101Y (zh) * 2006-04-03 2008-04-23 河南省动物免疫学重点实验室 莱克多巴胺残留快速检测试纸条
CN201298042Y (zh) * 2008-08-28 2009-08-26 河南省农业科学院 一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201051101Y (zh) * 2006-04-03 2008-04-23 河南省动物免疫学重点实验室 莱克多巴胺残留快速检测试纸条
CN201298042Y (zh) * 2008-08-28 2009-08-26 河南省农业科学院 一步检测猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒抗体的试纸条

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何小维等.胶体金快速诊断技术的研究进展.《中国人兽共患病学报》.2007,第23卷(第1期),第86-88页. *
喻鑫铃等.胶体金SPA双联抗体检测试纸条法诊断日本血吸虫病的初步研究.《实用预防医学》.2006,第13卷(第3期),第521-523页. *
汪琳等.免疫胶体金技术及其在检验检疫中的应用.《检验检疫科学》.2004,第14卷(第4期),第56-58页. *

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