CN1958786B - 一种玉米青贮用乳酸菌剂及制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有玉米乳杆菌和坚强肠球菌的玉米青贮用乳酸菌剂，含乳酸菌活菌数大于10¹¹cfu/g，水分含量小于5％，同时还公开了本发明所述玉米青贮用乳酸菌剂的制作方法。本发明采用高密度培养、离心和冻干等工艺，所得的玉米青贮用乳酸菌剂具有加速全株玉米青贮成熟和提高全株玉米青贮品质的优点。

Description

一种玉米青贮用乳酸菌剂及制作方法

技术领域

本发明涉及一种乳酸菌剂及制备方法，具体涉及一种玉米青贮用乳酸菌剂及制作方法，属于饲料添加剂领域。

背景技术

青贮饲料种类繁多，具有来源广，成本低，采集方便，适口性好和养分比较全面等特点，是有关食草性动物的主要饲料，比如是牛、羊、猪、鱼、鸡、鸭、鹅的理想饲料。一般禾本科作物、豆科作物、块根、块茎以及水生饲料和树叶等均可用来青贮。目前用得最多的是专门种植用于青贮的玉米(带谷穗)，其次是摘穗后的玉米秸、高粱秸以及甘薯藤。

青贮的原理是在适宜的条件下，通过厌氧发酵，产生酸性环境，抑制有害微生物的繁衍，从而达到保存饲料的目的。为了满足乳酸菌发酵，除了保证厌氧、水分等条件外，还需要一定的可溶性糖分(饲料干物质的8％～10％)存在。因此，含糖多的原料如玉米秸、青草等容易青贮成功，反之如稻草、麦秸等就难以青贮成功。

在制作时，整株秸秆(包括杆、茎、叶)都可用于青贮，桔秆的绿色和叶片可以保存下来。所以，能保存作物秸秆中85％以上的养分。一般青饲料晒干后养分损失30％至40％，维生素几乎全部损失。而且由于青贮饲料柔软多汁、气味酸甜芳香，适口性好，十分适于饲喂肉牛，肉牛也很喜欢采食；并能促进消化腺的分泌，对于提高饲料的消化率有良好作用。青贮饲料可以充分利用当地丰富的饲草资源，特别是利用大量的玉米秸秆青贮饲喂肉牛，可以大大减少玉米秸秆的浪费。

青贮饲料是一个复杂的微生物共生体系，主要包括乳酸菌，酵母菌，梭状芽孢杆菌和芽孢杆菌，乙酸菌，霉菌，其中以乳酸菌的数量和种类最多，也是在青贮饲料发酵中起主要作用的微生物。乳酸菌产酸和耐酸能力都很强，它们能够利用原料中的碳水化合物进行乳酸发酵，形成乳酸和少量乙酸，可使青贮饲料中乳酸含量达到1.5％～2％，使得pH降低。由于青贮饲料中添加了天然快速发酵剂，所以在发酵前期，可以快速降低环境pH值，pH值的迅速下降，不仅抑制丁酸菌的繁殖，也能阻止其他不良菌，如丝状真菌、酵母及霉菌的生长。从而有利于改善青贮饲料的发酵品质。

随着我国经济的迅速发展，畜牧业的发展也很快，因此青贮饲料需求就很大，而现有的青贮饲料制作技术中缺少高效发酵剂，来保证青贮饲料快速进入乳酸发酵阶段，加速青贮成熟，并减少青贮制备过程中营养物质的消耗，以提高青贮品质。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够加速全株玉米青贮成熟和提高全株玉米青贮品质的玉米青贮用乳酸菌剂。

本发明的目的还在于提供一种具有加速全株玉米青贮成熟和提高全株玉米青贮品质的玉米青贮用乳酸菌剂的制作方法。

本发明中所涉及的比例均为重量比。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案为：

一种含有玉米乳杆菌(Lactobacillus zeae)和坚强肠球菌(Enterococcus durans)的玉米青贮用乳酸菌剂，含乳酸菌活菌数大于10¹¹cfu/g(每克样品含有的菌落形成单位)，水分含量小于5％。

其中优选的是，玉米青贮用乳酸菌剂中含乳酸菌活菌数为1.0×10¹¹～1.0×10¹²cfu/g，水分含量为1～4％。

所述玉米乳杆菌和所述坚强肠球菌是2005年8月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China GeneralMicrobiological Culture Collection Center，CGMCC)保藏的，菌种保藏号分别是：CGMCC No.1432和CGMCC No.1433。

为了便于运输使用并延长乳酸菌剂的保存期，可将乳酸菌剂制成冻干粉。当所述玉米青贮用乳酸菌剂为冻干剂型时，还包括75％～80％总量的冻干保护剂。

所述冻干保护剂的作用是为了减少活菌冻干损失，延长产品货架期。所述的冻干保护剂选自脱脂乳、甘油、麦芽糊精、碳酸钙、蔗糖、麦芽糖、谷氨酸钠或海藻糖等中的一个或两个以上的混合；其中以海藻糖、脱脂乳、甘油或谷氨酸钠中的一个或两个以上的混合为佳。其中的混合比采用本领域常用的比例添加即可。

如当冻干保护剂选用脱脂乳和甘油时，加入量为8～18∶1，优选为10～15∶1。

为实现本发明的另一目的，本发明所述玉米青贮用乳酸菌剂的制作方法，包括如下步骤：

1)将所述的玉米乳杆菌、坚强肠球菌分别在发酵培养基中，在37℃下培养12～20hr，活化3～4次，然后将活化后的发酵剂分别按2～4％的接种量、(1～2)∶1的菌数比的比例接种到发酵罐中，pH值控制在5.7～6.0，在37℃下混合培养14～16小时得发酵液；

2)然后将所述的发酵液在0～4℃下，转速6000～8000g进行离心处理10～15分钟，得发酵菌泥；

3)最后将发酵菌泥加入所述冻干保护剂后，进行冷冻干燥得玉米青贮用乳酸菌冻干粉。

所述的发酵培养基成分为：

大豆蛋白胨5g  胰蛋白胨10g    牛肉浸膏5g

酵母粉5g        葡萄糖20g      吐温80 1g

混合盐溶液10mL，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌15min。

混合盐溶液：K₂HPO₄ 200.0g/L，MgSO₄·7H₂O 58g/L，H₃COONa500g/L，MnSO₄·4H₂O 25g/L，(NH₄)₂HC₆H₈O₇ 200g/L。

本发明所采用的发酵罐为本领域常用的发酵罐，可为5L、10L或50L等规格。

发酵过程中pH值的控制可采用加入5mol/L～8mol/L的NaOH溶液。

所述冻干保护剂可先用蒸馏水配成水溶液，115℃下灭菌15min，再加入发酵菌泥中，冷冻干燥得保护剂含量为75％～80％的玉米青贮用乳酸菌冻干粉，本发明经冷冻干燥得率为11％～14％。

菌泥与保护剂的水溶液重量比以1∶8～12为好，此时冻干前菌悬液的密度为1.14～1.20g/ml。

所述的冷冻干燥工艺可采用本领域常用的工艺条件，优选的条件为：

搁板温度：-40～-50℃真空度：6～8Pa制品温度：15～20℃

冷凝器温度：-55～-65℃

冻干时间：冷冻段1.5～2hr，真空段40～90min，干燥段5～6hr。

由此制备方法所得的玉米青贮用乳酸菌剂中含乳酸菌活菌数大于10¹¹cfu/g，水分含量小于5％。

本发明所述的玉米青贮用乳酸菌剂可应用于玉米青贮饲料的生产，在使用时，需将本发明所述的玉米青贮用乳酸菌剂采用培养基活化制成乳酸菌液，然后在每层青贮原料上喷洒一定量的菌液，压实密封后，25～30日青贮即发酵成熟。

本发明的研究人员基于动物实验，通过乳酸菌分离与鉴定、生长特性的研究、影响其存活因素的研究、对玉米青贮成熟和品质的影响、乳酸菌在玉米青贮发酵过程中的动态变化、对试验动物的产奶量和乳品质的影响实验，筛选出加速玉米青贮成熟和提高玉米青贮品质等功能性强的菌种，经过大量实验确定选用玉米乳杆菌、坚强肠球菌用于生产玉米青贮用乳酸菌剂，同时采用了高密度培养、离心和冻干等方法制成冻干产品。

本发明将乳酸菌剂加入到青贮饲料的生产中去，经检验，在发酵前期可以快速降低pH值，乳酸菌数迅速增加，加速发酵成熟，而且乳酸、乙酸和总氮的含量也得以提高，明显改善了青贮饲料的发酵品质，因此本发明所述的乳酸菌剂具有加速玉米青贮成熟和提高玉米青贮品质等优点。

附图说明

图1为乳球菌的产酸速率图；

图2为乳杆菌的产酸速率图；

图3为本发明所述玉米青贮饲料生产的工艺流程图；

图4为不同青贮饲料对奶牛产奶量的影响。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

玉米青贮用乳酸菌冻干剂采用玉米乳杆菌和坚强肠球菌发酵培养、冷冻干燥而成。

选用生长特性好的坚强肠球菌，其菌落特征为：

形状：圆形，表面状态：光滑，形状：隆起，菌落颜色：微黄，边缘情况：完整，表面有光泽，质地粗糙，不透明；

菌体特征：椭圆形态，成对、成链排列，液体生长情况：沿壁有生长，底部有沉淀。

玉米乳杆菌的菌落特征为：

形状：圆形，表面状态：光滑，形状：隆起，菌落颜色：微黄，边缘情况：整齐，表面有光泽，质地粘稠，半透明；

菌体特征：中长杆，单在、成对、成串，液体生长情况：薄层沉淀，沿壁有生长。

冻干剂选用脱脂乳和甘油作为冻干保护剂，脱脂乳占总量的70％，甘油占总量的7％。

具体制备过程如下：先将玉米乳杆菌、坚强肠球菌分别在发酵培养基中活化3次，37℃下培养16小时，然后将活化后的发酵剂分别按3％的接种量，以1∶1的比例接种到10L的发酵罐中，流加5mol/L的NaOH溶液将pH值控制在5.8，37℃下在发酵培养基中混合培养15小时得发酵液。

所用发酵培养基成分为：

大豆蛋白胨5g  胰蛋白胨10g    牛肉浸膏5g

酵母粉5g        葡萄糖20g      吐温80 1g

混合盐溶液10mL，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌15min。

混合盐溶液：K₂HPO₄ 200.0g/L，MgSO₄·7H₂O 58g/L，H₃COONa500g/L，MnSO₄·4H₂O 25g/L，(NH₄)₂HC₆H₈O₇ 200g/L。

然后将得到的发酵液在4℃下，转速6000g进行离心处理15分钟，去除上清液，得发酵菌泥；再将发酵菌泥中加入菌泥总量10％的脱脂乳和1％的甘油(重量比为10∶1)，进行冷冻干燥得玉米青贮用乳酸菌冻干粉。

冷冻干燥在冷冻干燥机中进行，工艺条件为：

搁板温度：-40℃        真空度：6Pa    制品温度：20℃

冷凝器温度：-60±2℃

冻干时间：冷冻段1.5hr，真空段50min，干燥段5hr。

经检测，玉米青贮用乳酸菌冻干剂中含乳酸菌活菌数1.0×10¹²cfu/g，水分含量4％。

实施例2

玉米青贮用乳酸菌冻干剂，由玉米乳杆菌和坚强肠球菌发酵培养而成，含总量75％的脱脂乳和总量5％的甘油，含乳酸菌活菌数3.6×10¹¹cfu/g，水分含量4.5％。

其制备过程如下：先将玉米乳杆菌坚强肠球菌分别在发酵培养基中活化4次，37℃下培养12小时，然后将活化后的发酵剂分别按2％的接种量，以2∶1的比例接种到10L的发酵罐中，流加8mol/L的NaOH溶液将pH值控制在5.7，在37℃下混合培养14hr得发酵液。

发酵培养基成分为：

大豆蛋白胨5g  胰蛋白胨10g    牛肉浸膏5g

酵母粉5g        葡萄糖20g      吐温80 1g

混合盐溶液10mL，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌15min。

混合盐溶液：K₂HPO₄ 200.0g/L，MgSO₄·7H₂O 58g/L，H₃COONa500g/L，MnSO₄·4H₂O 25g/L，(NH₄)₂HC₆H₈O₇ 200g/L。

然后将得到的发酵液在2℃下，转速8000g进行离心处理10分钟。

最后去除上清液，得发酵菌泥；再将发酵菌泥中加入菌泥总量15％的脱脂乳和1％的甘油(重量比为15∶1)，进行冷冻干燥得玉米青贮用乳酸菌冻干粉。

所述的冷冻干燥工艺条件为：

搁板温度：-45℃       真空度：8Pa    制品温度：15℃

冷凝器温度：-58±2℃

冻干时间：冷冻段2hr，真空段60min，干燥段6hr。

实施例3

玉米青贮用乳酸菌冻干剂采用玉米乳杆菌和坚强肠球菌发酵培养、冷冻干燥而成。含乳酸菌活菌数4.1×10¹¹cfu/g，水分含量1％。

其制备过程如下：先将玉米乳杆菌、坚强肠球菌分别在发酵培养基中活化3次，37℃下培养20小时，然后将活化后的发酵剂分别按4％的接种量，以1.5∶1的比例接种到50L的发酵罐中，流加6mol/L的NaOH溶液将pH值控制在6.0，在37℃下混合培养16hr得发酵液。

发酵培养基成分为：

大豆蛋白胨5g  胰蛋白胨10g    牛肉浸膏5g

酵母粉5g        葡萄糖20g      吐温80 1g

混合盐溶液10mL，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌15min。

混合盐溶液：K₂HPO₄200.0g/L，MgSO₄·7H₂O58g/L，H₃COONa500g/L，MnSO₄·4H₂O25g/L，(NH₄)₂HC₆H₈O₇200g/L。

然后将得到的发酵液在2℃下，转速7000g进行离心处理12分钟，得发酵菌泥；再将发酵菌泥中加入菌泥总量18％脱脂乳和1％甘油，进行冷冻干燥得玉米青贮用乳酸菌冻干粉。

所述的冷冻干燥工艺条件为：

搁板温度：-50℃        真空度：8Pa    制品温度：20℃

冷凝器温度：-62±2℃

冻干时间：冷冻段2hr，真空段90min，干燥段6hr。

经检测，玉米青贮用乳酸菌冻干剂中含乳酸菌活菌数4.1×10¹¹cfu/g，水分含量1％，含总量72％的脱脂乳和总量4％的甘油的冻干保护剂。

实施例4

制备过程同实施例1，不同的是冻干保护剂采用重量比为8∶1的海藻糖和碳酸钙，经检测，冻干保护剂占总量的75％，含乳酸菌活菌数8.6×10¹¹cfu/g，水分含量2％。

实施例5

制备过程同实施例1，不同的是冻干保护剂采用麦芽糖，占总量的80％，含乳酸菌活菌数5.6×10¹¹cfu/g，水分含量1.5％。

实施例6

制备过程同实施例1，不同的是冻干保护剂采用麦芽糊精、蔗糖和谷氨酸钠混合，经检测，冻干保护剂占总量的76％，含乳酸菌活菌数2.5×10¹¹cfu/g，水分含量3％。

实验例1

本实验例目的在于对不同乳酸菌菌株进行筛选与确定。

选择9株乳酸菌：分别为：(坚强肠球菌Enterococcus durans)KLDS6.0401、(坚强肠球菌Enterococcus durans)KLDS6.0402、(粪肠球菌Enterococcus faecalis)KLDS6.0403、(玉米乳杆菌Lactobacillus zeae)KLDS1.0401、(布氏乳杆菌Lactobacillus buchneri)KLDS1.0406、(布氏乳杆菌Lactobacillus buchneri)KLDS1.0404、(布氏乳杆菌Lactobacillusbuchneri)KLDS1.0405、(玉米乳杆菌Lactobacillus zeae)KLDS1.0402、(布氏乳杆菌Lactobacillus buchneri)KLDS1.0403。其表观特性见表1和2。

表1乳酸球菌的表观特征

表2乳酸杆菌的表观特征

将分离并鉴定的9株乳酸菌，分别按3％的接种量传入MRS液体培养基中，37℃恒温培养。主要根据菌株的不同产酸能力，生长特性来筛选适宜用作青贮饲料的菌株。每隔2h测定不同菌株发酵液pH，绘制的产酸速率曲线是不同发酵时间(h)对应发酵液pH的变化。

所用MRS液体培养基的成分：

大豆蛋白胨5g    牛肉浸膏10g    酵母粉5g

葡萄糖20g     吐温80 1g

K₂HPO₄2g，MgSO₄·7H₂O 5.8g，H₃COONa 5g，MnSO₄·4H₂O0.25g，

(NH₄)₂HC₆H₈O₇2g，加蒸馏水至1000mL，用乙酸或氨水调pH5.8-6.0，121℃灭菌15min。

产酸速度是乳酸菌活力良好的重要特征之一，不同菌株间存在较大的差异。如图1，2所示，球菌中KLDS6.0402和KLDS6.0403菌株产酸性能较好，其中KLDS6.0402菌株的产酸能力最强，10h左右pH值就能达到3.6；杆菌中KLDS1.0401和KLDS1.0406菌株的产酸性能较好，14h左右就能达到很低的酸度，尤其是KLDS1.0401菌株的产酸能力非常强，14h左右pH值能够降低到3.22。这样就使得制备玉米青贮时，青贮饲料的pH值能够迅速降低，从而抑制青贮玉米原料中的酵母菌、霉菌以及腐败菌的生长。因此选择球菌KLDS6.0402和KLDS6.0403菌株，杆菌KLDS1.0401和KLDS1.0406菌株，用来发酵玉米青贮饲料，进一步筛选所需菌株(见实验例3)。

实验例2

本实验例目的在于研究本发明所述玉米青贮用乳酸菌剂制作玉米青贮饲料工艺。

1.乳酸菌的玉米青贮饲料配方，见表3。

表3

2.乳酸菌的添加方法

调制时，在青贮窖底部铺上一层塑料布，也可以铺15cm厚的清洁垫草或吸水性强的草粉，每加入约0.5m厚的青贮原料，就用喷雾器喷洒上一定量的菌液。压实后再加入0.5m厚的青贮原料，然后再加入乳酸菌液，重复此过程，要注意层层压实。添加完毕后，试验组中的乳酸菌接菌量为4×10⁷CFU/g(原料)。

3.玉米青贮饲料生产的工艺流程和主要工艺参数

工艺流程(见图3)：在含水量为70％左右时收割玉米秸杆，揉切成长度为2～3cm；然后装填时，每装0.5m左右，压实1次；层层压实后，乳酸菌接菌量为4×10⁷CFU/g(鲜样)；密封后发酵25-30日青贮即发酵成熟。

主要工艺参数：

在含水量为70％左右时收割；

揉切长度为2～3cm；

装填时，每装0.5m左右，压实1次；

接菌量为4×10⁷CFU/g(鲜样)。

实验例3

本实验例目的在于研究本发明所述玉米青贮用乳酸菌剂对于加速玉米青贮成熟的作用。

1.含乳酸菌的玉米青贮饲料的制作

按照实验例2所述玉米青贮用乳酸菌剂制作玉米青贮饲料工艺，分别利用不同组合的乳酸菌制作青贮饲料。其中，试验组1添加布氏乳杆菌(KLDS1.0406)；试验组2添加布氏乳杆菌(KLDS1.0406)和坚强肠球菌(KLDS6.0402)；试验组3添加玉米乳杆菌(KLDS1.0401)；试验组4添加玉米乳杆菌(KLDS1.0401)和坚强肠球菌(KLDS6.0402)；试验组5添加布氏乳杆菌(KLDS1.0406)和粪肠球菌(KLDS6.0403)；试验组6添加玉米乳杆菌(KLDS1.0401)和粪肠球菌(KLDS6.0403)；试验组7添加坚强肠球菌(KLDS6.0402)和粪肠球菌(KLDS6.0403)；对照组8添加同体积蒸馏水。

2.发酵过程中乳酸菌变化的测定

将青贮饲料样品用四分法称取10g，溶于90mL0.9％的灭菌NaCL溶液，充分搅拌，将此溶液用灭菌NaCL溶液稀释后，涂布于MRS固体培养基，在37℃下培养48h计数。计测单位表示为：每克鲜样中所含有的菌数(CFU/g)。表4青贮饲料发酵过程中乳酸菌的动态(CFU/g)

3.发酵过程中pH值的测定

分别在第1、2、3、5、7、10、15、20、30日取样。用四分法均匀取50克青贮饲料样品加入150mL的去离子水在4℃的冰箱内浸泡一个晚上后取出用力揉搓，得到的浸提液用快速定量滤纸过滤，用烧杯盛装滤液，烧杯内的滤液用pH计测得该样品的pH值，结果见表5。

表5青贮饲料发酵过程中pH值的变化

添加乳酸菌的玉米青贮饲料同对照组相比，pH值迅速降低，乳酸菌数迅速增加，48h就达到10⁹CFU/g(鲜样)。经过25-30日，pH值可达到3.67，添加乳酸菌的玉米青贮即发酵成熟。

由以上实验可见，添加玉米乳杆菌(KLDS1.0401)和坚强肠球菌(KLDS6.0402)的试验组4乳酸菌的动态波动大，而且菌落数高，发酵过程中pH值迅速降最低值。因此玉米乳杆菌和坚强肠球菌可加速玉米青贮饲料成熟。

实验例4

本实验例目的在于研究本发明所述玉米青贮用乳酸菌剂对提高玉米青贮品质的作用

1.青贮饲料的感官评定

青贮饲料的感观评定及主要成分的分析在装填后30天进行。依据农业部颁布的《青贮饲料质量评定标准》对青贮饲料进行感官评定。

表6感官及水分、pH值综合评定结果

2.青贮饲料主要成分分析

青贮饲料主要成分的分析在装填后30天进行。粗蛋白(CP)含量用凯氏定氮法测定；中性洗涤纤维(NDF)用Ankom220型纤维分析仪测定；有机酸含量的测定：乳酸含量用Water2695型高效液相色谱仪测定(测定条件：流动相：0.5％(NH₄)₂HPO4，流速2mL/min；色谱柱：C18，柱温70℃；检测器：UV214nm)，挥发性脂肪酸含量用岛津GC-14C型气相色谱仪测定(测定条件：色谱柱：3m×2mm的不锈钢填充柱；温度：柱温170℃，气化室、检测器温度均为190℃；载气：氮气的压力为150kpa，氢气压力为40kpa，空气压力40kpa；灵敏度100)。

表7青贮饲料品质综合评定

注：小写字母表示同一行之间差异的显著性(p＜0.05)，字母不同表示差异显著，相同则表示差异不显著

同对照组相比，添加乳酸菌的玉米青贮青贮饲料品质较好，感官评定得分提高了30％，乳酸、乙酸和粗蛋白含量分别提高了75％、45％和25％，丁酸和中性洗涤纤维的含量分别降低了67％和4％。

实验例5

本实验例目的在于研究本发明所述玉米青贮用乳酸菌剂制作玉米青贮饲料对奶牛产奶量和乳品质的调节作用。

1.饲喂试验

利用本发明所述的玉米青贮用乳酸菌剂制作的玉米青贮饲料进行饲喂效果试验。试验中选择10头健康黑白花奶牛，年龄在3-5岁之间并且都处于产奶期的120日左右，分成两组，每组五头奶牛。分别在饲料中添加试验组和对照组玉米青贮，每日每头奶牛玉米青贮、玉米秸秆和精料的饲喂量分别为5kg、5kg和3.5kg。预试期为10日，试验期为30日。记录每头奶牛的每日产奶量，取预饲期第9、10日和试验期第29、30日的奶样进行乳成分分析(主要包括：乳脂肪、乳蛋白、非脂乳固体等)。

2.对奶牛产奶量的影响

图4为不同青贮饲料对奶牛产奶量的影响。从图4可以看出，在整个试验期中对照组奶牛的产奶量在试验开始的第1～10天里产奶量有所提高，但不显著(p＞0.05)，接着开始下降，而试验组奶牛的产奶量在整个试验期间逐渐上升，但不显著(p＞0.05)。由于对照组和实验组的奶牛都处于产奶期的120天左右，正是产奶量开始下降的时候，对照组奶牛产奶量的下降正好也证明了这一结果。试验组奶牛的产奶量不但没有下降，反而逐渐升高，在整个试验期结束时每头牛每天平均产奶量提高了0.77kg。由此可见，饲喂添加乳酸菌的玉米青贮饲料能够提高奶牛的产奶量。

3.对奶牛的乳成分的影响

表8饲喂不同青贮饲料的奶牛的乳成分分析结果

注：小写字母表示同一行之间差异的显著性(p＜0.05)，字母不同表示差异显著，相同则表示差异不显著

如表8方差分析的结果所示，对照组和试验组的乳脂肪含量差异不显著(p＞0.05)，只是在整个试验期结束时，对照组的乳脂肪含量降低，而试验组的乳脂肪含量则有所上升；在整个试验期结束后试验组的乳蛋白含量显著提高(p＜0.05)，而对照组的乳蛋白含量则只是略有增加；在整个试验期结束后试验组的非脂乳固体含量显著提高(p＜0.05)。因此奶牛饲喂利用乳酸菌发酵的全株玉米青贮，能够显著提高牛乳中蛋白质和非脂乳固体的含量。

因此，采用饲喂添加乳酸菌的玉米青贮饲料能够提高奶牛的产奶量，在整个试验期结束时每头牛日平均产奶量提高了0.77kg。试验组的乳蛋白含量提高了24.62％，非脂乳固体的含量提高了1.21％。

Claims (10)

1.一种玉米青贮用乳酸菌剂，其特征在于：含有玉米乳杆菌和坚强肠球菌，含乳酸菌活菌数大于10¹¹cfu/g，水分含量小于5％。

2.如权利要求1所述的玉米青贮用乳酸菌剂，其特征在于：含乳酸菌活菌数为1.0×10¹¹～1.0×10¹²cfu/g，水分含量为1～4％。

3.如权利要求1所述的玉米青贮用乳酸菌剂，其特征在于：所述玉米青贮用乳酸菌剂为冻干剂型，包括75％～80％总量的冻干保护剂。

4.如权利要求3所述的玉米青贮用乳酸菌剂，其特征在于：所述的冻干保护剂为选自脱脂乳、甘油、麦芽糊精、碳酸钙、蔗糖、麦芽糖、谷氨酸钠或海藻糖中的一种或两种以上的组合。

5.如权利要求4所述的玉米青贮用乳酸菌剂，其特征在于：所述的冻干保护剂为海藻糖、脱脂乳、甘油或谷氨酸钠中的一个或两个以上的混合。

6.如权利要求4所述的玉米青贮用乳酸菌剂，其特征在于：所述的冻干保护剂选用加入量为8～18∶1的脱脂乳和甘油。

7.一种制作如权利要求1所述的一种玉米青贮用乳酸菌剂的方法，其特征是，步骤如下：

1)将所述的玉米乳杆菌、坚强肠球菌分别在发酵培养基中，在37℃下培养12～20小时，活化3～4次，然后分别将活化后的发酵剂分别按2～4％的接种量、1～2∶1的菌数比的比例接种到发酵罐中，pH值控制在5.7～6.0，在37℃下混合培养14～16小时得发酵液；

2)然后将所述的发酵液在0～4℃下，转速6000～8000g进行离心处理10～15分钟，得发酵菌泥；

3)最后将发酵菌泥加入冻干保护剂后，进行冷冻干燥得玉米青贮用乳酸菌冻干粉。

8.如权利要求7所述的一种制作玉米青贮用乳酸菌剂的方法，其特征在于：所述的发酵培养基的成分为： 

大豆蛋白胨5g  胰蛋白胨10g    牛肉浸膏5g

酵母粉5g      葡萄糖20g      吐温80 1g

混合盐溶液10mL，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌15分钟

混合盐溶液：K₂HPO₄ 200.0g/L，MgSO₄·7H₂O 58g/L，H₃COONa500g/L，MnSO₄·4H₂O 25g/L，(NH₄)₂HC₆H₈O7 200g/L。

9.如权利要求7所述的一种制作玉米青贮用乳酸菌剂的方法，其特征在于：发酵过程中pH值的控制采用加入5mol/L ~8mol/L的NaOH溶液。

10.如权利要求7所述的一种制作玉米青贮用乳酸菌剂的方法，其特征在于：所述的冷冻干燥工艺条件为：

搁板温度：-40～-50℃真空度：6～8Pa制品温度：15～20℃

冷凝器温度：-55℃～-65℃

冻干时间：冷冻段1.5～2小时，真空段40～90分钟，干燥段5～6小时。 

Images