CN1935201A - 附子提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种附子提取物，它是由附子Radix AconitiLateralis Preparata及其炮制品为原料制备而成的提取物。本发明提供了该附子提取物的质量控制指标。本发明还提供了该附子提取物的制备方法和含有附子提取物的药物组合物。本发明药物解决了患者使用不便和安全性的问题，在质量上对不同炮制品进行了比较，明确了药效，解决了生附子在临床上使用的安全性问题，扩大了药源，节约了炮制成本，为临床提供了一种新的选择。

Description

附子提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种附子提取物，属于中药制剂领域。
背景技术
生附子是毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根，其加工品有黑顺片，淡附片、白附片等共作附子用。《伤寒论》是最早应用附子，且相当成熟记载，在20首方中运用附子如芍药甘草附子汤、附子泻心汤、附子汤、四逆汤等。在这些方中，有些附子为生用，有些为炮制后用。在四逆类方中如干姜附子汤、茯苓四逆汤、四逆汤、通脉四逆汤、白通汤、白通加猪胆汁汤、四逆加人参汤、通脉四逆加猪胆汁汤等8首方中附子均为生用以回阳救逆。在附子的主产地许多中医临床仍在使用生附子配伍使用。
其加工品有黑顺片，白附片等在临床应用较多，加工炮制过程中，生品中所含毒性很强的双酯类生物碱(乌头碱等)，易水解生成毒性较小的单酯类生物碱，继续水解，则生成毒性更小的不带酯键的生物碱，而起到减毒的作用。文献表明：主要通过加热和水漂的过程，是双酯类生物碱的含量下降，达到减毒的目的，但时在炮制过程中不可避免降低总生物碱的含量，日本有学者怀疑炮制有过度的可能，缺乏足够的药效学和毒理学证据；目前在炮制品中间，炮制方法不同，含量也不同，药典未做明确的区分，仅对起毒性作用的酯性碱作了限量检查。
在临床上，汤剂仍是目前附子应用最广的剂型，文献统计表明，汤剂引发的毒性比例可达11.27％，主要原因在于患者使用时，药典规定要先煎使用，至于要先煎多久，加水量、煎煮次数、火力等很难在实际中得到控制。因此，要解决好附子的毒性和疗效问题，又要方便临床使用，通过附子及其炮制品种黑顺片，白附片进行了药效试验和毒性试验，在含量测定的基础上，对三个品种的水提取制备时间点进行深度了研究，确定了最佳时间点，通过制剂工艺的形式确定下来，并建立了质量标准。
发明内容
本发明的技术方案在于提供一种附子提取物，本发明的另一技术方案是提供含有该附子提取物的药物组合物及其制备方法。
本发明提供了一种附子提取物，它是由附子Radix Aconiti Lateralis Preparata或其炮制品为原料制备而成的水或乙醇提取物，其中，提取物中含有双酯性生物碱照异肟羟酸铁法以乌头碱C34H47NO11计在0.04mg～0.75mg，含总生物碱照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.50～3.6mg。
其中，所述的附子或其炮制品为：生附子、黑附片、白附片，它是由附子RadixAconiti Lateralis Preparata及其炮制品为原料制备而成的提取物，其中，生附子中每克提取物中含双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.07mg～0.75mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在1.0～3.6mg；黑顺片中每克提取物中含双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.04mg～0.25mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.50～1.80mg；白附片中每克提取物中含双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.05mg～0.3mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.65～1.75mg。
以乌头碱为指标成分，测定本发明提取物中双酯性生物碱及总生碱的含量，因为生物碱类成分既是本发明提取物的活性成分，也是毒性成分，因此，对生物碱类成分的质量控制非常重要，直接影响了药物的有效、安全。只有在上述质量控制的范围内的药物才能满足安全、有效，才能便于临床使用。
它是由附子Radix Aconiti Lateralis Preparata及其炮制品为原料，加水或有机溶剂提取而得。
本发明附子提取物是由如下方法制备：
取生附子药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮5.5～6.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
或，取黑顺片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮4.5～5.5小时，第2次加7～9倍量水，煎煮2.5～3.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
或，取白附片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮3.5～4.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得。
进一步地，它是由如下方法制备：
取生附子药材饮片，第一次加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮6小时；第二次加10倍量水，煎煮4小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得；
取黑顺片药材饮片，第一次加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮5小时；第二次加8倍量水，煎煮3小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得；
取白附片药材饮片，加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮2次，每次4小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得。
本发明还提供了一种药物组合物，它是由所述的附子提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
其中，所述的药剂是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、合剂。
本发明还提供了该药物组合物的制备方法，它包括如下步骤：
a、取生附子药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮5.5～6.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
或，取黑顺片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮4.5～5.5小时，第2次加7～9倍量水，煎煮2.5～3.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
或，取白附片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮3.5～4.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
b、将a步骤的干燥物加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
其中，步骤a具体如下：
取生附子药材饮片，第一次加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮6小时；第二次加10倍量水，煎煮4小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得；
取黑顺片药材饮片，第一次加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮5小时；第二次加8倍量水，煎煮3小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得；
取白附片药材饮片，加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮2次，每次4小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得。
其中，所述浓缩是将滤液减压浓缩至相对密度1.02~1.05，60℃；所述干燥方法为一步制粒法，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
本发明药物解决了患者使用不便和安全性的问题，在质量上对不同炮制品进行了比较明确的区分，解决了生附子在临床上使用的安全性问题，扩大了药源，节约了炮制成本，且本发明采用不同的提取条件下制备的产品功效不同，适应症广泛，为临床提供了一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1生附子水提取物的制备
取生附子药材13.50kg，以水浸泡30min，加至10倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后6h，第2次加10倍量水，煎煮4小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.51Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
实施例2附子水提取物的制备
取生附子药材12.50kg，以水浸泡30min，加至9倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后5.5h，第2次加9倍量水，煎煮3.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.25Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
实施例3本发明药物颗粒剂的制备
取生附子药材11.50kg，以水浸泡30min，加至11倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后6.5h，第2次加11倍量水，煎煮4.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.08Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃，提取物加淀粉制粒，整粒，即得颗粒剂。
实施例4黑顺片提取物的制备
取黑顺片药材12.35kg，以水浸泡30min，加至10倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后5h，第2次加8倍量水，煎煮3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.03Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
实施例5黑顺片提取物的制备
取黑顺片药材11.50kg，以水浸泡30min，加至9倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后4.5h，第2次加7倍量水，煎煮2.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.03Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
实施例6本发明药物片剂的制备
取黑顺片药材12.35kg，以水浸泡30min，加至11倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后5.5h，第2次加9倍量水，煎煮3.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.03Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃，制备的提取物加入辅料，制颗粒、压片，即得。
实施例7白附片提取物的制备
取白附片药材12.35kg，以水浸泡30min，加至10倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后4h，第2次加10倍量水，煎煮4小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.03Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
实施例8白附片提取的制备
取白附片药材11kg，以水浸泡30min，加至11倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后4.5h，第2次加11倍量水，煎煮4.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
实施例9本发明药物胶囊剂的制备
取白附片药材12.35kg，以水浸泡30min，加至9倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后3.5h，第2次加9倍量水，煎煮3.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至1.02~1.05(60℃)，干燥即得2.03Kg提取物，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃，制备的提取物加入淀粉制颗粒、装胶囊，制成胶囊剂。
实施例10本发明药物提取物的质量控制方法
【性状】本品为棕黄色至棕色颗粒，气微，味微苦涩。
【鉴别】取本品2g，研细，置具塞锥形瓶中，加氨试液5ml，加入乙醚3ml，超声提取10分钟，振摇20分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，加0.25mol/L硫酸溶液，振摇提取，分取酸液，照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)测定。在231nm与274nm波长处有最大吸收。
【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2000年版一部附录IC)。
【限量检查】照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)测定。
1、标准曲线的绘制  精密称取乌头碱对照品20mg加适量无水乙醇溶解，移入10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。精密量取乌头碱标准液0、0.50、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50ml，置25ml容量瓶中，加乙醇至2.5ml，精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml，于60~65℃中水浴10分钟，取出，放冷，加入13ml高氯酸铁试液，摇匀，放置5分钟，精密加入高氯酸试液8ml，摇匀，用高氯酸铁试液定容至刻度。以空白作参比，在520nm下测定其吸光度，以生物碱量与吸收度值作图并经直线回归处理，得线性方程式。
2、供试品溶液的制备  分别精密称取2个最小包装内容物，加氨试液5ml，用乙醚50ml连续振摇1小时，冷浸过夜，再用乙醚50ml分3次洗涤，滤过，合并滤液和洗液，低温蒸干，加乙醚5ml溶解，挥干，加乙醇2.5ml溶解，置25ml容量瓶中，自“精密加入碱性盐酸羟胺”起至“在520nm下测定其吸光度”计算求得总生物碱含量
本品每袋2g，含生附子以乌头碱(C34H47NO11)计，不得高于1.5mg。
本品每袋4g，含黑顺片以乌头碱(C34H47NO11)计，不得高于1.0mg。
本品每袋4g，含白附片以乌头碱(C34H47NO11)计，不得高于1.5mg。
【含量测定】照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)测定。
1、标推曲线的绘制  精密称取乌头碱对照品10mg加适量氯仿溶解，移入100ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得。精密量取乌头碱标准液0、0.50、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50ml，分别置于分液漏斗中，并精密加入氛仿至20.0ml。以第一份为空白对照，然后各加入10mlpH6.1±0.1溴甲酚绿染料，充分振摇，静置1小时，氯仿液过滤至25ml容量瓶中并用氯仿稀释至刻度。于410nm波长处，分别测定空白、供试液的吸收度。以生物碱量与吸收度值作图并经直线回归处理，得线性方程式。
2、供试品溶液的制备  分别精密称取单个最小包装内容物，按鉴别法备用，用乙醚-氯仿(3∶1)混合液代替氯仿，置蒸发皿中，水浴低温蒸干加乙醚-氯仿(3∶1)混合液5ml蒸干，加氯仿使溶解，定容于1ml，每次测定分别取0.1ml的溶液，转移至分液漏斗中，加氯仿至20ml，即得。自“加入10mlpH6.1±0.1溴甲酚绿染料”起至“410nm波长处”依法测定，计算求得总生物碱含量：
本品每袋2g，含生附子以乌头碱(C34H47NO11)计，不得少于3.6mg。
本品每袋4g，含黑顺片以乌头碱(C34H47NO11)计，不得少于3.5mg
本品每袋4g，含白附片以乌头碱(C34H47NO11)计，不得少于3.0mg。
以下通过药效试验的方法对本发明的有益效果做进一步详述。
试验例1本发明附子提取物提取工艺不同参数的筛选试验
(一)筛选试验
1、实验材料
1.1药物
附子(生附子、白附片、黑附片)：受试药物，购自四川江油，经本校生药鉴定教研室鉴定为乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根，当年采收。以3倍量水浸泡30min，加至10倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后15min、30min、60min、120min、3h、4h、6h等7个时间点，煎煮完毕减压浓缩为每ml含原生药3g。根据均匀设计表，附子(生附子、白附片、黑附片)煎煮15min、30min、60min、120min、3h、4h、6h的7个时间点依次取临床剂量(15g/60kg.d-1)的24倍、2倍、48倍、12倍、1倍、36倍和6倍，临用时用蒸馏水分别配制成60％、7.5％、120％、30％、2.5％、90％、15％的药液备用。
参附注射液：雅安三九药业有限公司生产，批准文号：国药准字Z51020664，生产批号：040513。规格：10ml/支。
醋酸地塞米松：阳性药物，浙江仙琚制药股份有限公司生产。批准文号：国药准字H33020822。生产批号：040209。规格：0.75mg/片。实验时用蒸馏水配制成0.03％的药液备用。
盐酸曲马多片：阳性药物，石家庄制药集团有限公司生产。批准文号：国药准字H10960106。生产批号：031003。规格：50mg/片。实验时用蒸馏水配制成1％的药液备用。
通便灵胶囊：阳性药物，四川奇力制药有限公司生产。批准文号：国药准字Z51020262。生产批号：040201。规格：12粒×2板/盒。实验时用蒸馏水配制成5％的药液备用。
金匮肾气丸：阳性药物，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产。批准文号：国药准字Z11020417。生产批号：040811。规格：360粒/瓶。实验时用蒸馏水配制成33.33％的金匮肾气丸药液备用。
羟基脲胶囊：造模药物，山西安特生物制药股份有限公司生产。批准文号：国药准字H14023012。生产批号：20030702。规格：0.25×12粒×2板/盒。实验时用蒸馏水配制成3.75％的羟基脲药液备用。
氢化可的松注射液：造模药物，天津金耀氨基酸有限公司生产。批准文号：国药准字H12020887。生产批号：040310。规格：100mg/20ml/支。
盐酸普鲁帕酮：造模药物，广州明兴制药有限公司生产。批准文号：国药准字H4402049。生产批号：MC3201。规格：35mg/10ml/支。
1.2动物
昆明种小鼠，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号：04-11。SD大鼠，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号：04-11。检疫后备用。
1.3仪器
BL-420E生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司研制。RB-200型智能热板仪，成都泰盟科技有限公司生产。
2、实验方法
2.1温阳试验
2.1.1心阳虚试验
张子彬，Tsung O.Cheng，张玉传.充血性心力衰竭学.北京：科学技术文献出版社，2002，204
2.1.2肾阳虚试验
2.1.2.1生附子肾阳虚试验
廖进民，吴铁.羟基脲致“阳虚”大鼠代谢变化的实验研究.广东解剖学报，1994；16(1)：24-28
2.1.2.2白附片肾阳虚试验
2.1.2.2.1游泳试验
孔成文，雷春利，吕文伟，等.黄芪皂甙对实验性心力衰竭的作用[J].白求恩医科大学学报，1994，20(2)：125
2.1.2.2.2爬杆试验
孔成文，雷春利，吕文伟，等.黄芪皂甙对实验性心力衰竭的作用[J].白求恩医科大学学报，1994，20(2)：125
2.1.2.3黑附片肾阳虚试验
2.1.2.3.1游泳试验
取体重20-24g的昆明种小鼠(雌雄各半)120只，随机分为空白对照组(n＝10)、模型对照组(n＝14)、阳性对照组(n＝12)、黑附片15min组(n＝12)、30min组(n＝12)、1h组(n＝12)、2h组(n＝12)、3h组(n＝12)、4h组(n＝12)、6h组(n＝12)。给药方法及数据处理同2.1.2.2.1。
2.1.2.3.2爬杆试验
取体重20-24g的昆明种小鼠(雌雄各半)120只，随机分为空白对照组(n＝10)、模型对照组(n＝14)、阳性药物组(n＝12)、黑附片15min组(n＝12)、30min组(n＝12)、1h组(n＝12)、2h组(n＝12)、3h组(n＝12)、4h组(n＝12)、6h组(n＝12)。给药方法及数据处理同2.1.2.2.2。
2.1.3阳虚便秘试验
2.1.3.1生附子阳虚便秘试验
取体重20-24g昆明种小鼠(雌雄各半)158只，随机分为空白组(n＝10)、模型组(n＝20)、阳性药物组(n＝16)、生附子15min组(n＝16)、30min组(n＝16)、1h组(n＝16)、2h组(n＝16)、3h组(n＝16)、4h组(n＝16)、6h组(n＝16)。除空白对照组外，各组均灌胃山西白醋(山西省美和居老陈醋有限公司生产，酸度3.5g/100ml)，首剂量15ml/kg，第2日起10ml/kg.d-1，连续9日。第7日，灌胃白醋的同时给予10％的0℃活性炭冰水25ml/kg.d-1，连续3日。各实验组造模同时按组分别灌胃蒸馏水、5％通便灵胶囊药液、60％、7.5％、120％、30％、2.5％、90％、15％的生附子药液10ml/kg.d-1，连续9日。第8日，动物禁食不禁水24h。于末次给药1h后，将小鼠分别放入代谢笼内，记录各组动物3h内排便粒数及首粒排便时间(潜伏期)。观察完毕后，各组小鼠灌胃营养糊(红墨水125ml、羧甲基纤维素钠5g、淀粉5g、奶粉10g、白糖5g)15ml/kg，15分钟后处死，测量小肠全长及营养糊推进长度，计算肠推进率(营养糊推进长度/小肠全长×100％)。实验数据用SPSS11.0统计软件处理，回归分析采用均匀设计1.0专用软件处理。
2.1.3.2白附片阳虚便秘试验
取20-24g昆明种小鼠(雌雄各半)130只，随机分为空白对照组(n＝13)、模型对照组(n＝13)、阳性组(n＝13)、白附片15min组(n＝13)、30min组(n＝13)、60min组(n＝13)、1h组(n＝13)、2h组(n＝13)、3h组(n＝13)、4h组(n＝13)、6h组(n＝13)。给药方法及数据处理同2.1.3.1。
2.1.3.3黑附片阳虚便秘试验
实验方法及数据处理同2.1.3.1。
2.2抗炎试验
2.2.1二甲苯耳廓肿胀试验
徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学(第2版).北京：人民卫生出版社，1991，719
2.2.2蛋清足跖肿胀试验
徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学(第3版).北京：人民卫生出版社，2002，911
2.2.3巴豆油肉芽肿试验
徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学(第3版).北京：人民卫生出版社，2002，918
2.3镇痛试验
2.3.1扭体试验
徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学(第3版).北京：人民卫生出版社，2002，882
2.3.2热板试验
徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学(第3版).北京：人民卫生出版社，2002，885
3、实验结果
3.1温阳试验
3.1.1心阳虚试验
3.1.1.1对心率的影响
模型组大鼠给予普鲁帕酮10.5mg/kg造模后，心率立即显著减慢，数秒内降至最低，其后缓慢上升，持续数十分钟，与空白组比较有极显著性差异。白附片除3h组外，其余各时间剂量组心率在不同时间均有明显加快，与模型组比较有显著性或极显著性差异。经回归分析，2.5min、5min、10min、15min最优条件分别为0.25小时25.06倍、1.929小时25.82倍、1.561小时29.39倍、6小时25倍，20min、25min、30min和60min则分别为6小时25.35倍、0.25小时37.38倍、6小时48倍和6小时48倍。
结果详见表1和回归分析。
表1对急性心衰阳虚大鼠心率(％)的影响
Figure A20051002170500121
组别   动物(只)   剂量(g/kg)                             给药后
2.5min 5min 10min
空白组模型组阳性组   101010   -蒸馏水24 98.1±12.234.6±8.4△△△37.9±18.2 97.3±7.948.8±11.9△△△61.3±10.4* 99.5±7.154.8±5.87△△△64.7±12.6*
白附片  15min30min1h2h3h4h6h   10101010101010   60.751230.2591.5 54.4±18.9**28.7±10.632.2±21.446.5±11.8*33.2±11.528.9±9.525.6±10.9 64.9±16.8*45.1±5.841.9±16.767.4±19.7*42.1±4.648.9±14.138.1±12.8 66.8±10.3**59.3±16.461.9±9.671.3±22.8*53.8±8.469.0±19.4*54.8±11.3
                                             给药后
    15min   20min   25min   30min     60min
    104.7±11.861.1±7.1△△△70.5±17.575.5±7.7***67.3±15.672.7±9.6**78.8±20.7*60.6±10.173.3±14.8*69.9±12.4   107.5±12.166.4±11.4△△△77.2±14.785.3±12.4**71.1±14.779.7±12.1*85.0±22.3*67.7±15.982.9±17.5*80.2±7.0**   108.2±10.268.9±12.5△△△84.6±11.8**92.8±13.1**74.3±13.685.3±7.6**85.1±22.3*71.4±16.988.3±18.9*82.4±3.6**   110.1±13.770.4±9.7△△△88.6±12.6**95.8±13.2***78.3±14.187.6±6.1***84.2±26.674.3±19.088.53±16.6**84.17±3.16***     106.1±6.571.6±12.0△△△94.9±15.0**98.0±13.1***89.2±20.0*89.4±13.2**79.1±12.676.1±15.097.1±7.2***84.4±12.1*
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
2.5min：最优条件：X1＝0.25h，X2＝25.06倍  预期试验结果：Y＝3.41
5min：最优条件：X1＝1.929h，X2＝25.82倍  预期试验结果：Y＝3.82
10min：最优条件：X1＝1.561h，X2＝29.39倍  预期试验结果：Y＝3.50
15min：最优条件：X1＝6h，X2＝26倍  预期试验结果：Y＝9.49
20min：最优条件：X1＝6h，X2＝25.35倍  预期试验结果：Y＝8.17
25min：最优条件：X1＝0.25h，X2＝37.38倍  预期试验结果：Y＝4.36
30min：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝7.24
60min：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝27.6
3.1.1.2对左室内压最大上升速率的影响
模型组大鼠给予普鲁帕酮10.5mg/kg造模后，左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)立即显著下降，数秒内降至最低，其后缓慢上升，持续数十分钟，与空白组比较有极显著性差异。白附片各时间剂量组+dp/dtmax均有上升，其中15min组、1h组、2h组和4h组显著上升，与模型组比较有显著性差异或极显著性差异。经回归分析，5min、10min、15min最优条件分别为0.25小时28.17倍、4.551小时20.65倍、2.654小时48倍，20min、25min、30min和60min则分别为6小时34.75倍、6小时48倍、6小时45.09倍和6小时48倍。结果详见表2和回归分析。
表2对急性心衰阳虚大鼠+dp/dtmax(％)的影响
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)                              给药后
2.5min 5min 10min
  空白组模型组阳性组   101010   -蒸馏水24 97.5±5.141.9±12.5△△△87.9±22.3*** 98.6±9.348.2±17.4△△△97.7±23.8*** 101.2±10.955.4±11.2△△△131.9±60.8**
白附片  15min30min1h2h3h4h6h   10101010101010   60.751230.2591.5 51.3±14.135.8±13.435.0±17.054.1±18.944.9±9.837.4±19.037.0±14.0 62.2±8.7*43.8±12.946.1±21.761.9±21.548.9±11.848.3±23.441.5±20.3 67.8±9.2*62.8±14.865.4±20.174.5±13.4**54.3±14.266.4±15.353.0±15.7
                                                   给药后
 15min  20min  25min  30min  60min
 109.2±13.465.7±4.5△△△145.4±73.8**75.6±16.066.7±18.980.8±13.6**78.3±10.2**59.1±19.872.2±13.564.8±14.8  114.0±13.470.5±7.3△△△149.6±81.9**82.1±16.5*70.5±7.385.8±21.1*77.7±14.362.2±20.881.5±11.5*76.9±16.3  110.6±15.271.8±11.9△△△164.1±68.7***85.9±15.6*72.2±14.485.4±18.672.4±11.968.1±19.081.7±11.880.8±14.4  107.1±16.167.2±15.0△△△162.4±62.5***80.4±12.1*72.5±14.683.4±19.3*72.6±14.665.6±16.781.9±13.7*78.1±9.9  96.8±22.858.2±10.0△△△142.0±45.9***42.8±36.968.8±16.968.2±24.056.4±28.664.0±19.177.7±15.3**64.1±10.9
注：与空白组比较，△△△P＜0.001：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
5min：最优条件：X1＝0.25h，X2＝28.17倍  预期试验结果：Y＝2.47
10min：最优条件：X1＝4.551h，X2＝20.65倍  预期试验结果：Y＝5.71
15min：最优条件：X1＝2.654h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝3.91
20min：最优条件：X1＝6h，X2＝34.75倍  预期试验结果：Y＝2.80
25min：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝12.4
30min：最优条件：X1＝6h，X2＝45.09倍  预期试验结果：Y＝3.92
60min：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝13.2
3.1.1.3对左室内压最大下降速率的影响
模型组大鼠给予普鲁帕酮10.5mg/kg造模后，左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)立即显著升高，数秒内升至最高，其后缓慢下降，持续数十分钟，与空白组比较有极显著性差异。白附片各时间剂量组-dp/dtmax均有下降，其中15min组、2h组和4h组显著下降，-dp/dtmax百分率显著上升，与模型组比较有显著性差异。经回归分析，5min、10min、15min最优条件分别为0.25小时29.58倍、0.25小时27.41倍、1.964小时30.7倍，20min、25min、30min和60min则分别为6小时34.28倍、6小时48倍、4.827小时1倍和6小时48倍。结果详见表3和回归分析。
表3对急性心衰阳虚大鼠-dp/dtmax(％)的影响
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)                           给药后(％)
2.5min 5min 10min
  空白组模型组阳性组   101010   -蒸馏水24 104.0±5.460.5±14.01△△△81.4±22.8* 99.7±6.367.0±15.4△△△104.6±19.4*** 97.5±11.171.3±14.4△△△100.5±18.5***
白附片  15min30min1h2h3h4h6h   10101010101010   60.751230.2591.5 67.1±6.649.8±20.552.8±23.669.5±25.254.6±19.853.8±22.850.0±26.0 80.8±9.7*55.3±18.065.2±27.477.9±24.760.0±18.064.1±22.057.2±30.3 89.2±21.5*77.3±18.584.0±25.888.7±19.8*69.3±12.582.0±12.069.5±20.8
                                                给  药  后
  15min   20min   25min   30min   60min
  100.7±14.377.5±7.6△△△101.8±13.9***95.4±22.7*79.7±19.693.2±27.289.5±21.475.3±15.187.8±11.4*78.0±22.1   108.2±9.579.2±12.7△△△104.8±19.3**96.9±22.7*82.4±21.095.9±30.588.6±31.282.6±16.990.0±7.2*91.6±21.5   98.3±10.780.7±8.4△△△105.9±22.4**97.9±20.2*84.1±21.791.0±22.980.9±36.482.2±17.687.4±4.8*90.6±21.6   91.8±10.371.7±11.6△△105.2±17.2***85.1±23.077.1±19.481.2±23.178.9±34.983.2±17.982.4±8.2*82.2±15.2   80.8±7.659.6±19.5△△87.9±16.2**39.8±36.059.6±16.465.6±22.450.7±28.666.1±15.264.8±11.861.3±15.2
注：与空白组比较，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
5min：最优条件：X1＝0.25h，X2＝29.58倍  预期试验结果：Y＝2.58
10min：最优条件：X1＝0.25h，X2＝27.41倍  预期试验结果：Y＝2.58
15min：最优条件：X1＝1.964h，X2＝30.7倍  预期试验结果：Y＝2.67
20min：最优条件：X1＝6h，X2＝34.28倍  预期试验结果：Y＝2.94
25min：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝16.6
30min：最优条件：X1＝4.827h，X2＝1倍  预期试验结果：Y＝3.39
60min：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝3.6
3.1.2肾阳虚试验
3.1.2.1生附子肾阳虚试验
3.1.2.1.1对肾阳虚大鼠一般状态的影响
模型组动物给予造模药375mg/kg.d-117天后一般状态较差，体重显著减轻，被毛蓬松，嗜卧少动，小便增多，畏寒喜暖，摄食量减少。生附子15min组、1h组和6h组一般状况较好，体重有明显增加的趋势，尤以6h组为甚，连续17天造模，未见有动物死亡。结果详见表4。
表4对肾阳虚大鼠体重的影响
Figure A20051002170500161
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)                   体重(g)
  给药前   5天
  空白组模型组阳性组  10910   -蒸馏水3.33   215.60±13.01223.33±20.47219.00±15.08   234.00±15.00228.54±21.98221.42±22.07
生附子  15min30min1h2h3h4h6h  88998612   60.751230.2591.5   223.00±20.19223.17±24.69221.67±20.79218.67±17.76221.58±21.56218.67±15.19219.42±17.97   230.33±25.49228.58±25.48227.25±20.75227.58±24.41229.50±22.37218.27±18.22232.00±16.37
                           体重(g)
    10天     13天     17天
    249.30±15.35229.67±34.46226.73±26.41229.92±40.64216.00±35.51226.18±14.65227.70±29.57213.08±31.31209.80±16.21230.67±20.16     259.50±18.18236.33±22.38△215.18±37.26232.30±41.22219.60±27.77228.20±19.76226.80±39.07217.36±24.81213.38±25.67227.25±20.18     264.10±16.82220.89±21.93△△△221.80±28.25243.86±34.00220.63±17.74225.78±24.21229.11±34.62221.88±26.24205.00±21.61232.83±24.07
注：与空白组比较，△P＜0.05，△△△P＜0.001。
3.1.2.1.2对肾阳虚大鼠体温的影响
3.1.2.1.2.1肾阳虚大鼠造模16天体温变化
模型组大鼠造模第10天体温即显著降低，与空白组比较有显著性差异。给予生附子药液后，温度显著升高，尤以1h组和6h组为甚，与模型组比较有显著性或极显著性差异。回归分析表明，以6小时48倍升温作用显著。结果详见表5及回归分析。
表5对肾阳虚大鼠体温的影响
  组别   动物(只)     剂量(g/kg)                 体温(℃)
    给药前     5天
  空白组模型组阳性组   10910     -蒸馏水3.33     37.39±0.6237.40±0.4437.37±0.34     36.71±0.4236.81±0.4237.13±0.70
生附子   15min30min1h2h3h4h6h   88998612     60.751230.2591.5     37.38±0.4137.58±0.2637.58±0.6037.56±0.3337.45±0.6637.42±0.6537.44±0.35     36.77±0.3637.05±0.3837.04±0.2337.05±0.2736.66±0.5536.88±0.3037.18±0.42*
                             体温(℃)
    10天     13天   16天
    37.05±0.3636.34±0.68△△36.35±0.3536.14±0.5236.49±0.8937.20±0.67**36.71±0.3836.72±0.8536.24±0.8937.27±0.53**     36.87±0.2936.83±0.4736.54±0.8837.16±0.6637.03±0.3837.42±0.46*36.90±0.5136.65±1.3637.30±0.33*36.84±0.28   37.14±0.5136.92±0.6637.35±0.8336.83±0.3736.69±0.5236.97±0.6136.96±0.5136.84±0.4736.47±1.0937.61±0.70*
注：与空白组比较，△△P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
回归分析：
第5天：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝9.83
第10天：最优条件：X1＝6h，X2＝1倍  预期试验结果：Y＝6.53
第13天：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝7.19
第16天：最优条件：X1＝6h，X2＝10.49倍  预期试验结果：Y＝2.37
3.1.2.1.2.2对肾阳虚大鼠12时辰体温的影响
模型组大鼠造模16天后体温普遍降低，给予生附子药液后体温明显升高，6小时组在9时-21时体温显著升高，与模型组比较有显著性或极显著性差异。结果详见表6。
表6对肾阳虚大鼠12时辰体温的影响
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)                       体温(℃)
9-11时        11-13时        13-15时
  空白组模型组阳性组   10910   -蒸馏水3.33 37.14±0.51   37.22±0.24    37.22±0.2736.92±0.66   37.16±0.59    37.07±0.6537.35±0.83   37.18±0.61    37.33±0.57
生附子  15min30min1h2h3h4h6h   88998612   60.751230.2591.5 36.83±0.37   37.14±0.48    37.05±0.4436.69±0.52   36.95±0.73    37.06±0.8036.97±0.61   37.08±0.55    37.11±0.5336.96±0.51   36.98±0.65    36.98±0.5936.84±0.47   36.88±0.30    37.00±0.5036.47±1.09   36.62±1.15    36.83±0.4837.61±0.70*  37.99±0.82**  37.83±0.79**
                                                 体温(℃)
    15-17时  17-19时  19-21时 21-23时  23-1时
    36.60±0.4236.58±0.8736.81±0.6936.76±0.4336.91±0.9436.67±0.8137.22±0.5536.93±0.4036.92±0.5737.83±0.82*** 37.15 ±0.3237.12 ±0.8337.14±0.8137.04±0.4837.06±0.4936.90±0.6637.37±0.6037.08±0.5137.10±0.3937.71±0.73* 37.19±0.2137.02±0.5637.24±0.4936.98±0.5137.10±0.5837.11±0.4837.44±0.5137.09±0.3937.23±0.7037.58±0.86* 37.20±0.2137.41±0.6737.41±0.4937.14±0.5337.18±0.7637.72±0.4337.58±0.3537.41±0.3037.650.5937.87±0.71 37.32±0.2537.68±0.4637.59±0.6137.20±0.4837.28±0.5237.39±0.4137.46±0.5337.18±0.6937.15±0.9937.35±0.88
                                                 体温(℃)
    1-3时   3-5时   5-7时   7-9时
    37.87±0.3237.77±0.5237.60±0.4537.26±0.5737.39±0.7037.43±0.5037.51±0.3937.11±0.8937.70±0.6837.85±0.64   38.11±0.2337.53±0.44△37.80±0.6037.30±0.8137.23±0.4737.37±0.5837.51±0.4837.08±0.3537.32±1.0437.48±0.81   37.78±0.1837.69±0.5637.39±0.7037.11±0.9737.30±0.8236.83±1.7637.20±0.4537.25±0.5237.40±1.0937.29±1.01   37.05±0.4037.41±0.5737.37±0.6236.88±1.1036.88±0.8337.06±0.7237.24±0.6537.19±0.4437.33±1.0237.43±0.77
注：与空白组比较，△P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
3.1.2.1.3对肾阳虚大鼠游泳时间的影响
模型组大鼠游泳时间显著缩短，与空白组比较有极显著性差异。生附子15min组、1h组和6h组游泳时间显著延长，与模型组比较，有极显著性差异。经回归分析，生附子发挥药效的最佳时间剂量为6小时48倍。结果详见表7和回归分析。
表7对阳虚大鼠游泳时间的影响
Figure A20051002170500181
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)     游泳时间(秒)
  空白组模型组阳性组   10910   -蒸馏水3.33     258.30±59.38152.67±68.86△△259.90±50.93**
生附子  15min30min1h2h3h4h6h   88998612   60.751230.2591.5     271.63±23.93***194.00±60.95258.00±62.30**159.33±36.08211.50±72.12214.00±66.15262.08±83.02**
注：与空白组比较，△△P＜0.01；与模型组比较**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝18.8
3.1.2.1.4对肾阳虚大鼠脏器系数的影响
模型组大鼠造模17天后胸腺显著萎缩，脾脏明显减小。1h组、2h组、3h组、4h组和6h组胸腺明显增大，1h组和4h组脾脏明显增重，与模型组比较，有显著性或极显著性差异。结果详见表8及回归分析。
表8对肾阳虚大鼠脏器系数(％)的影响
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)   胸腺   脾
  空白组模型组阳性组  10910   -蒸馏水3.33   0.1156±0.04120.0257±0.0118△△△0.0521±0.0186**   0.482±0.1280.395±0.0600.486±0.204
生附子  15min30min1h2h3h4h6h  88998612   60.751230.2591.5   0.0393±0.01470.0402±0.02250.0465±0.0183*0.0536±0.0286*0.0478±0.0199*0.0657±0.0221***0.0544±0.0108***   0.583±0.3040.508±0.1570.525±0.148*0.453±0.1720.553±0.1070.722±0.327*0.524±0.191
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
胸腺：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝6.81
脾脏：最优条件：X1＝5.23h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝3.82
3.1.2.2白附片肾阳虚试验
3.1.2.2.1游泳试验
3.1.2.2.1.1一般状态
模型组动物连续给予造模药40mg/kg.d-110天后一般状态较差，体重不增，被毛蓬松，嗜卧少动，小便明显增多，畏寒喜暖，摄食量明显减少。白附片15min组、6h组一般状况较好，体重逐渐增加。末次体重，白附片6h组与模型组比较有显著性差异。回归分析结果表明，白附片增加体重的最佳煎煮时间和给药剂量分别为6小时，19.89倍。结果详见表9及回归分析。
表9对肾阳虚小鼠体重的影响
Figure A20051002170500201
  组别  动物(只) 剂量(g/kg)                         体重(g)
 药前  第5天  第10天
  空白组模型组阳性组  111414 -蒸馏水3.33  25.68±2.5325.52±2.3425.32±2.20  29.84±3.3925.02±3.74△△26.22±2.30  32.54±3.1724.87±4.19△△△26.36±2.50
白附片  15min30min1h2h3h4h6h  14121515131512 60.751230.2591.5  25.84±1.8225.06±2.8725.74±1.8325.87±1.5226.38±1.9425.58±2.1726.16±1.73  26.74±1.9626.84±2.8326.31±2.7626.02±2.5427.39±2.6025.98±3.4126.89±3.24  27.30±2.1026.98±3.5426.46±2.7226.31±2.2425.79±2.9926.25±3.0127.68±2.62*
注：与空白组比较，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05。
回归分析：
体重：最优条件：X1＝6h，X2＝19.89倍  预期试验结果：Y＝2.18
3.1.2.2.1.2对游泳时间的影响
空白组低温游泳时间平均达223.73秒，模型组小鼠游泳时间显著缩短，平均游泳时间仅为102.86秒，与空白组比较有极显著性差异。白附片除3h组外，其余各给药组游泳时间均明显延长，与模型组比较有显著性或极显著性差异。回归分析表明，白附片延长肾阳虚小鼠游泳时间的最佳时间剂量为6h23.18倍。结果详见表10及回归分析。
表10对肾阳虚小鼠游泳时间的影响
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)     游泳时间(秒)
  空白组模型组阳性组     111414   -蒸馏水3.33     223.73±95.01102.86±35.49△△△181.29±65.64***
白附片  15min30min1h2h3h4h6h     14121515131512   60.751230.2591.5     180.64±65.07***145.67±56.20*163.25±55.41**166.67±65.97**145.62±77.18170.20±86.40*179.58±56.22***
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
游泳时间：最优条件：X1＝6h，X2＝23.18倍  预期试验结果：Y＝7.01
3.1.2.2.2爬杆试验
空白组小鼠爬杆动作敏捷，平均爬杆时间达845.18秒；模型组动物爬杆反应迟钝，平均爬杆时间仅268.64秒，与空白组比较有极显著性差异。白附片各给药组爬杆时间均延长，其中以15min组、1h组和6h组最为明显，与模型组比较有显著性或极显著性差异。经回归分析，白附片延长肾阳虚小鼠爬杆时间的最佳时间剂量分别为6h14.54倍。结果详见表11及回归分析。
表11对肾阳虚小鼠爬杆时间的影响
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)     爬杆时间(秒)
  空白组模型组阳性组   111113   -蒸馏水3.33     845.18±108.69268.64±169.01△△△528.92±250.54**
白附片  15min30min1h2h3h4h6h   13101513131312   60.751230.2591.5     650.69±270.16***447.704±331.78506.73±306.16*497.46±344.45351.92±272.98415.54±290.24712.83±245.24***
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
爬杆时间：最优条件：X1＝6h，X2＝14.54倍  预期试验结果：Y＝5.45
3.1.2.3黑附片肾阳虚试验
3.1.2.3.1游泳试验
3.1.2.3.1.1一般状态
模型组动物连续给予造模药40mg/kg.d-110天后，一般状态较差，体重不增，被毛蓬松，嗜卧少动，小便明显增多，畏寒喜暖，摄食量明显减少。黑附片15min组、30min组、4h组和6h组一般状况较好，体重逐渐增加。末次体重，黑附片30min组和4h组与模型组比较有显著性差异。回归分析结果表明，黑附片增加体重的最佳煎煮时间和给药剂量分别为6小时，48倍。结果详见表12及回归分析。
表12对肾阳虚小鼠体重的影响
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)                          体重(g)
 药前 第5天  第10天
  空白组模型组阳性组  10910   -蒸馏水3.33  20.93±1.1420.96±1.4120.67±1.71 26.08±1.3720.52±2.04△△△21.43±1.93  28.63±2.6820.90±2.19△△△21.61±1.95
黑附片  15min30min1h2h3h4h6h  1291099810   60.751230.2591.5  21.06±1.4521.03±1.4420.82±1.2821.08±1.4421.27±1.3520.57±1.5620.96±1.29 22.78±1.55**22.10±2.0121.85±2.4821.38±1.7021.61±2.1920.90±2.1722.45±2.27*  22.57±2.2023.56±2.34*22.06±3.1721.14±2.1721.79±3.5923.53±2.48*22.25±2.05
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
回归分析：
体重(末次)：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝9.76
3.1.2.3.1.2对游泳时间的影响
空白组低温游泳时间平均达232.5秒，模型组小鼠游泳时间显著缩短，平均仅129.67秒，与空白组比较有极显著性差异。黑附片1h组、4h组和6h组游泳时间显著延长，与模型组比较有显著性或极显著性差异。其余各给药组游泳时间有明显延长的趋势。回归分析表明，黑附片延长肾阳虚小鼠游泳时间的最佳时间剂量为6h，37.57倍。结果详见表13及回归分析。
表13对肾阳虚小鼠游泳时间的影响
Figure A20051002170500221
  组别   动物(只)     剂量(g/kg)     游泳时间(秒)
  空白组模型组阳性组   10910     -蒸馏水3.33     232.50±41.24129.67±44.68△△△193.09±44.98**
黑附片  15min30min1h2h3h4h6h   1291099810     60.751230.2591.5     182.17±66.45141.11±72.73195.64±85.22*158.33±50.73128.78±47.58228.88±63.69**177.36±46.47*
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
回归分析：
游泳时间：最优条件：X1＝6h，X2＝37.57倍  预期试验结果：Y＝9.23
3.1.2.3.2爬杆试验
空白组小鼠爬杆动作敏捷，平均爬杆时间为547.6秒；模型组动物爬杆反应迟钝，平均爬杆时间仅142秒，与空白组比较有极显著性差异。黑附片各给药组爬杆时间均延长，其中以15min组和1h组最为明显，与模型组比较有显著性差异。经回归分析，黑附片延长肾阳虚小鼠爬杆时间的最佳时间剂量分别为6h23.94倍。结果详见表14及回归分析。
表14对肾阳虚小鼠爬杆时间的影响
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)     爬杆时间(秒)
  空白组模型组阳性组  10910   -蒸馏水3.33     547.60±275.09142.00±97.08△△△352.60±224.36*
黑附片  15min30min1h2h3h4h6h  119108989   60.751230.2591.5     357.00±257.14*153.56±101.60294.70±178.59*235.38±280.55126.44±138.98210.13±131.90261.11±158.88
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05。
回归分析：
爬杆时间：最优条件：X1＝6h，X2＝23.94倍  预期试验结果：Y＝4.59
3.1.3阳虚便秘试验
3.1.3.1一般状况
模型组动物个别于造模第2天就出现腹胀状态，普遍于造模3-4天时出现倦怠蜷缩，活动减少，皮毛蓬松，后期动物死亡率较高，皆因腹胀大至死，动物瘦弱，触之觉皮毛松弛，无肉。阳性药物组、生附子、白附片、黑附片的1h组和6h组动物一般状态较好，活动较频繁，皮毛略蓬松，但触之有肉感。与模型组比较有显著性差异。各组体重比较，无显著性差异。
3.1.3.2排便潜伏期和排便粒数
模型组小鼠造模9天后排便潜伏期显著延长，3小时排便粒数显著减少，与空白组比较，有极显著性差异。生附子排便潜伏期除15min组和4h组外，均显著缩短，3小时排便粒数1h组和6h组显著增加；白附片排便潜伏期60min组、3h组、4h组和6h组均显著缩短，3小时排便粒数30min组和6h组显著增加；黑附片排便潜伏期30min组和4h、6h组均显著缩短，3小时排便粒数1h组和6h组显著增加。与模型组比较有显著性或极显著性差异。经回归分析，生附子排便潜伏期和排便粒数最优条件分别为6小时19.71倍和6小时48倍；白附片排便潜伏期和排便粒数最优条件均为6小时48倍；黑附子排便潜伏期和排便粒数最优条件均为6小时48倍。结果详见表15、16、17和回归分析。
表15生附子对阳虚便秘小鼠排便潜伏期和颗粒数的影响
Figure A20051002170500231
  组别  动物(只)   剂量(g/kg) 潜伏期(分)     颗粒数(粒)
  空白组模型组阳性组  101511   -蒸馏水0.5 23.54±6.23104.53±56.24△△△69.27±43.79     12.87±5.133.67±3.62△△△7.39±4.09*
生附子  15min30min1h2h3h4h6h  1615812141412   60.751230.2591.5 80.25±43.1960.87±27.06*54.75±42.44*52.75±49.28*58.86±52.88*57.93±74.1550.17±46.58*     4.44±3.835.00±3.648.88±3.87**4.83±3.104.71±3.757.14±7.127.08±3.80*
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
回归分析：
潜伏期：最优条件：X1＝6h，X2＝19.71倍  预期试验结果：Y＝4.34
排便次数：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝4.62
表16白附片对阳虚便秘小鼠排便潜伏期和排便粒数的影响
Figure A20051002170500241
组别  动物(只)   剂量(g/kg)     排便潜伏期(分)   排便粒数(粒/3h)
空白组模型组阳性组  131110   -蒸馏水0.5     25.14±6.7261.91±59.03△△△   13.31±3.754.73±4.36△△△9.60±4.38*
白附片  15min30min1h2h3h4h6h  10101010101112   60.751230.2591.5     20.00±9.99*41.80±33.8435.40±30.4412.70±7.24*23.00±10.6317.60±10.92*19.55±5.80*9.08±7.11*   7.10±3.645.80±4.49*7.60±2.767.50±4.817.20±3.528.36±3.8310.67±5.33**
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
排便潜伏期：
最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝4.03
排便颗粒数：
最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝3.53
表17黑附片对阳虚便秘小鼠排便潜伏期和排便粒数的影响
  组别  动物(只)     剂量(g/kg) 潜伏期(分)     颗粒数(粒)
  空白组模型组阳性组  101511     -蒸馏水0.5 23.54±6.23104.53±56.24△△△69.27±43.79     12.87±5.133.67±3.62△△△7.39±4.09*
黑附片  15min30min1h2h3h4h6h  13131112141410     60.751230.2591.5 81.38±39.8871.15±8.91*76.27±11.8768.50±65.5783.21±38.6061.21±36.54*59.00±15.62*     4.54±3.585.31±3.437.18±3.74*3.83±4.114.64±4.015.50±3.768.50±2.64**
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
回归分析：
潜伏期：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝8.20
排便次数：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝5.42
3.1.3.3对胃肠推进的影响
模型组小鼠胃肠推进率显著降低，与空白组比较有极显著性差异。生附子除15min组外其余各组胃肠推进率显著增加：白附片1h组和6h组胃肠推进率显著延长；黑附片除30min组和1h组外，其余各组胃肠推进率显著增加。与模型组比较有显著性或极显著性差异。经回归分析，生附子发挥药效的最优条件为6小时48倍；白附片为6小时1倍；黑附片发挥药效的最优条件为6小时48倍。结果详见表18、19、20和回归分析。
表18生附子对阳虚便秘小鼠胃肠推进的影响
Figure A20051002170500251
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)   胃肠推进率(％)
  空白组模型组阳性组  101510   -蒸馏水0.5   74±1233±11△△△56±22**
生附子  15min30min1h2h3h4h6h  1315812121212   60.751230.2591.5   32±943±13*56±23**48±21*47±13**55±19***47±12**
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
胃肠推进：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝9.62
表19白附片对阳虚便秘小鼠胃肠推进率的影响
Figure A20051002170500252
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)     胃肠推进率(％)
  空白组模型组阳性组  131110   -蒸馏水0.5     68.33±7.1238.24±9.34△△△62.81±9.24***
白附片 15min30min1h2h3h4h6h  10101010101112   60.751230.2591.5     34.24±8.7334.65±13.0153.58±10.63**36.65±12.6446.51±11.6136.11±8.1453.61±6.29**
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
回归方程：最优条件：X1＝6h，X2＝1倍  预期试验结果：Y＝5.38
表20黑附片对阳虚便秘小鼠胃肠推进率的影响
Figure A20051002170500261
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)   胃肠推进率(％)
  空白组模型组阳性组   101510   -蒸馏水0.5   74±1233±11△△△56±22
黑附片  15min30min1h2h3h4h6h   13111010121310   60.751230.2591.5   53±18**42±1840±1245±13*50±14**50±21*58±15***
注：与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
回归分析：
胃肠推进：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝10.1
3.2抗炎试验
3.2.1二甲苯抗炎试验
模型组小鼠造模后1.5h耳廓肿胀明显。生附子组除2h、3h、4h外，其余各组耳廓肿胀均明显缩小，与模型组比较，均有显著性或极显著性差异。经回归分析，生附子发挥药效的最优条件为0.25h，48倍。结果详见表21及回归分析。
表21对二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀的影响
  组别  动物(只)   剂量(g/kg)     耳廓肿胀度(mg)
  模型组阳性组  1010   蒸馏水0.003     10.80±2.306.40±2.46***
生附子  15min30min1h2h3h4h6h  10101010101010   60.751230.2591.5     8.00±1.56**8.20±3.12*7.60±2.17**10.90±0.889.40±1.3510.20±2.358.50±2.55*
注：与模型组比较，*P＜0.05，**＜P0.01，***P＜0.001。
回归分析：
最优条件：X1＝0.25h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝5.2
3.2.2对蛋清足跖肿胀的影响
模型组大鼠右足跖注射鸡蛋清后很快肿胀，注射后1h肿胀达高峰，注射后6h仍肿胀明显。生附子组除3小时1倍剂量无效外，其余均有明显抑制大鼠足跖肿胀的作用。经回归分析，生附子发挥药效的最优条件：30min、1h、2h、6h时为6h，48倍；3h、4h时为0.25h，31.64倍和31.93倍。结果详见表22和回归分析。
表22对鸡蛋清致炎大鼠足跖肿胀的影响
Figure A20051002170500271
  组别  动物(只)  剂量(g/kg)                      肿胀度(ml)
  0.5h   1h   2h
  模型组阳性组  1010  蒸馏水0.003   0.67±0.250.58±0.22   0.86±0.260.66±0.26   0.74±0.230.52±0.21*
生附子  15min30min1h2h3h4h6h  10101010101010  60.751230.2591.5   0.32±0.14**0.61±0.310.49±0.170.59±0.270.71±0.240.51±0.300.50±0.22   0.28±0.18***0.65±0.350.49±0.17**0.64±0.350.78±0.200.59±0.22*0.50±0.25   0.32±0.15***0.56±0.360.47±0.23*0.50±0.29*0.64±0.220.52±0.24*0.46±0.21*
                                        肿胀度(ml)
    3h     4h     6h
    0.69±0.200.38±0.19**0.25±0.17***0.41±0.26*0.39±0.22**0.41±0.29*0.57±0.170.46±0.22*0.33±0.16***     0.56±0.190.20±0.13***0.18±0.18***0.39±0.220.37±0.22*0.37±0.25*0.52±0.190.48±0.180.22±0.13***     0.46±0.130.07±0.10***0.15±0.11***0.28±0.240.27±0.18*0.28±0.25*0.34±0.170.28±0.14**0.18±0.13***
注：与模型组比较，*P＜0.05，**＜P0.01，***P＜0.001。
回归分析：
0.5h：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝9.17
1h：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝15.2
2h：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝9.57
3h：最优条件：X1＝0.25h，X2＝31.64倍  预期试验结果：Y＝5.47
4h：最优条件：X1＝0.25h，X2＝31.93倍  预期试验结果：Y＝4.91
6h：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝18.4
3.2.3对巴豆油肉芽肿的影响
模型组大鼠造模后1周体重未增加，反有减轻趋势，渗出液量较多，肉芽增生显著。生附子15min组、1h组、2h组和4h组给药1周后体重显著增加，15min组、30min组和6小时组渗出液量显著减少，肉芽增生除2小时组外其余各组亦显著减轻，与模型组比较，有显著性或极显著性差异。经回归分析，生附子发挥药效的最优时间剂量为，体重：2.274h、38.22倍；渗出液：0.25h、1倍；肉芽肿：0.25h、48倍。结果详见表23和回归分析。
表23对巴豆油致炎大鼠的影响
Figure A20051002170500281
  组别  动物(只) 剂量(g/kg)     体重(g)  渗出液(ml)  肉芽肿(g)
    药前     药后
  模型组阳性组   888109lO10109 蒸馏水0.001560.751230.2591.5 220.70±21.75217.80±19.66222.70±15.85208.10±18.05212.70±13.08218.10±16.00215.30±16.03212.40±17.97215.20±19.90 213.25±27.65176.00±12.39**239.50±14.14*226.80±24.39245.00±10.52**246.00±21.64*234.60±29.22244.90±18.02**239.44±29.01  0.613±0.3680.044±0.062***0.006±0.018***0.015±0.034***0.578±1.3431.163±2.0190.341±0.6370.325±0.5590.067±0.200**  6.16±2.641.02±1.03***1.06±0.48***1.70±0.92***2.17±1.89**4.85±3.342.52±1.86**2.44±2.27**1.52±0.73***
生附子 15min30min1h2h3h4h6h
注：与模型组比较，*P＜0.05，**＜P0.01，***＜P0.001。
回归分析：
体重：最优条件：X1＝2.274h，X2＝38.22倍  预期试验结果：Y＝4.37
渗出液：最优条件：X1＝0.25h，X2＝1倍  预期试验结果：Y＝6.3
肉芽重：最优条件：X1＝0.25h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝7.07
3.3镇痛试验
3.3.1扭体试验
模型组小鼠注射0.6％醋酸后疼痛明显，表现为扭体次数频繁。生附子除4h组外，其余各时间剂量组扭体次数显著减少，与模型组比较，有显性著或极显著性差异。经回归分析，生附子发挥药效的最佳时间剂量为0.25小时27.88倍。结果详见表24和回归分析。
表24对醋酸致痛小鼠的影响
  组别   动物(只)   剂量(g/kg)   潜伏期(秒)   扭体次数(次/15min)
  模型组阳性组   1010   蒸馏水0.1  218.60±47.28900.0±0.00***     43.70±7.100.00±0.00***
生附子  15min30min1h2h3h4h6h   10101010101010   60.751230.2591.5  274.30±72.95279.20±85.89397.90±280.38283.50±104.62203.90±80.65241.40±112.17317.40±214.61     17.10±9.19***24.20±9.41***19.90±13.99***28.40±9.14***31.10±12.51*34.80±15.8022.60±11.30***
注：与模型组比较，*P＜0.05，**＜P0.01，***P＜0.001。
回归分析：
最优条件：X1＝0.25h，X2＝27.88倍  预期试验结果：Y＝7.28
3.3.2热板试验
生附子除30分钟组外，其余各组痛阈值与模型组比较均有显著或极显著性差异。经回归分析，生附子60分钟时间点发挥药效的最佳时间剂量为0.25小时40.86倍。结果详见表25和回归分析。
表25对热板致痛小鼠痛阈值(秒)的影响
Figure A20051002170500291
    组别   动物(只) 剂量(g/kg) 基础痛阈  30min
    模型组阳性组   1010 蒸馏水0.1 18.58±3.2018.60±4.98  12.58±3.1332.64±17.49**
生附子  15min30min1h2h3h4h6h   10101010101010 60.751230.2591.5 18.80±3.4618.72±5.7518.94±2.1718.55±2.6618.67±5.5918.85±2.7618.80±6.06  16.04±3.28*10.54±4.3117.35±4.98*20.86±8.50**16.57±3.79*20.61±5.68**17.02±6.75
    60min   90min   120min
    11.15±4.4728.15±14.12***16.52±4.27*11.27±5.1016.69±3.87**15.02±5.4012.64±5.8716.35±4.43*18.50±8.99*   12.99±4.8218.26±8.1514.08±4.0110.06±3.8310.89±3.1214.31±4.6715.07±4.1513.97±4.1819.97±11.67   10.90±4.0919.76±14.516.77±6.00*11.80±5.6511.25±1.8111.73±3.3017.67±7.00*14.28±6.8219.67±7.94**
注：与模型组比较，*P＜0.05，**＜P0.01。
回归分析：
0.5h：最优条件：X1＝3.286h，X2＝27.86倍  预期试验结果：Y＝4.42
1h：最优条件：X1＝0.25h，X2＝40.86倍  预期试验结果：Y＝3.38
1.5h：最优条件：X1＝6h，X2＝1倍  预期试验结果：Y＝2.2
2h：最优条件：X1＝6h，X2＝48倍  预期试验结果：Y＝18.4
上述药效试验证明，以水浸泡30min，加至10倍量水煎煮附子15min、2h、5h、6h温心阳，4h、6h温肾阳，6h温脾阳效果较好；以水浸泡30min，加至10倍量水煎煮附子15min、5h、6h抗炎作用较好；以水浸泡30min，加至10倍量水煎煮附子15min、3h、6h镇痛效果较好。
试验例2本发明附子(生附子、白附片、黑附片)提取物提取工艺不同参数的安全性试验
1.生附片动物急性毒性试验资料及文献资料
1.1.实验材料
1.1.1.药物
生附片各时间点水煎液，受试药物，分别含生药量为15min、30min、1h、2h均为3.3g/ml，3h为2g/ml，4h为1.33g/ml，6h为1.05g/ml，均由成都中医药大学药学院提供，试验批号：050622，用各水煎液灌胃小鼠。
1.1.2.动物
SPF小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，合格证号：川实动管质04-11，检疫后备用。
1.2.实验方法
预试：取SPF小鼠，雌雄各半，禁食不禁水12hr，通过试验测得15min、30min的全死、全活量，做LD50；1h、2h、3h、4h及6h以小鼠耐受的最大容积0.4ml/10g.B.W的剂量灌胃，24h连续给药3次。连续观察3d，记录动物有无毒性反应以及实验前后体重变化，以不产生死亡的剂量为最大耐受量(MTD)。
取SPF小鼠100只，雌雄各半，禁食不禁水12hr，按体重随机分为10组，每组10只。在15min、30min的全死全活量之间再设定3个剂量组，分别灌胃相应浓度的药液；连续观察7天，记录动物死亡只数，求其LD50。
取SPF小鼠120只，雌雄各半，禁食不禁水12hr，按体重随机分为6组，每组20只。即空白对照组(N＝20)、1h组(N＝20)、2h组(N＝20)、3h组(N＝20)、4h组(N＝20)及6h组(N＝20)。以小鼠耐受的最大容积0.4ml/10g.B.W的剂量分别灌胃相应浓度的药液，24h连续给药3次；连续观察7天，记录动物有无毒性反应以及实验前后体重变化，以不产生死亡的剂量为最大耐受量(MTD)。
以上结果均用SPSS12.0统计软件处理。
1.3.实验结果
1.3.1生附片15min时间点药液结果
SPF小鼠灌胃生附片15min时间点药液后，均出现行动迟缓、神情淡漠、呕吐涎沫、扭体等不同程度的中毒反应，死亡多发生在给药后24小时内死亡。动物死亡情况详见表1。
Y＝-10.016+0.5095X r＝0.968
LD50＝19.657g/kg。
表26 15min生附片灌胃给药对动物死亡的影响
    组别   动物(只)   剂量(g/kg)   死亡数(只)
    12345   1010101010   16.6518.3220.1522.1624.97   136910
1.3.2生附片30min时间点药液结果
SPF小鼠灌胃生附片30min时间点药液后，均出现行动迟缓、神情淡漠等不同程度的中毒反应，死亡多发生在给药后24小时内死亡。动物死亡情况详见表2。
Y＝-3.476+0.1153X r＝0.561
LD50＝30.151g/kg。
表27 30min生附片灌胃给药对动物死亡的影响
    组别   动物(只)   剂量(g/kg)   死亡数(只)
    12345   1010101010   16.6520.9826.4333.3141.625   02469
1.3.3生附片1h、2h、3h、4h及6h时间点药液结果
SPF小鼠灌胃生附片其他各时间点药液后，发育健康，肌肉丰满，被毛浓密而有光泽、紧贴其身，眼睛明亮而灵活、无异常的分泌物，肛周洁净，摄食正常，四肢健壮，自发活动正常，体重逐渐增加。7d内未内动物死亡及毒副反应。实验结束时肉眼尸解未见明显病理改变。
2.白附片动物急性毒性试验资料
2.1.实验材料
2.1.1.药物
白附片各时间点水煎液，受试药物，分别含生药量为15min、30min、1h、2h、3h、4h及6h为3.33g/ml，均由成都中医药大学药学院提供，试验批号：050625，用各水煎液灌胃小鼠。
2.1.2.动物
SPF小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，合格证号：川实动管质04-11，检疫后备用。
2.2.实验方法
预试：取SPF小鼠若干只，雌雄各半，禁食不禁水12hr，将15min、30min、1h、2h、3h、4h及6h各时间点水煎液以小鼠耐受的最大容积0.4ml/10g.B.W的剂量灌胃，24h连续给药3次。连续观察3d，动物均无死亡和明显的毒性反应，以此不产生死亡的剂量为最大耐受量(MTD)。
取SPF小鼠160只，雌雄各半，禁食不禁水12hr，按体重随机分为8组，每组20只。即空白对照组(N＝20)、15min组(N＝20)、30min组(N＝20)、1h组(N＝20)、2h组(N＝20)、3h组(N＝20)、4h组(N＝20)及6h组(N＝20)。以小鼠耐受的最大容积0.4ml/10g.B.W的剂量分别灌胃相应浓度的药液，24h连续给药3次；连续观察7天，记录动物有无毒性反应以及实验前后体重变化，以不产生死亡的剂量为最大耐受量(MTD)。
以上结果均用SPSS12.0统计软件处理。
2.3.实验结果
SPF小鼠灌胃白附片5min、30min、1h、2h、3h、4h及6h各时间点水煎液后，发育健康，肌肉丰满，被毛浓密而有光泽、紧贴其身，眼睛明亮而灵活、无异常的分泌物，肛周洁净，摄食正常，四肢健壮，自发活动正常，体重逐渐增加。7d内未内动物死亡及毒副反应。实验结束时肉眼尸解未见明显病理改变。
3.黑附片动物急性毒性试验资料
3.1.实验材料
3.1.1.药物
黑附片各时间点水煎液，受试药物，分别含生药量为15min、30min、1h、2h、3h、4h及6h为3.33g/ml，均由成都中医药大学药学院提供，试验批号：0500701，用各水煎液灌胃小鼠。
3.1.2.动物
SPF小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，合格证号：川实动管质04-11，检疫后备用。
3.2.实验方法
预试：取SPF小鼠若干只，雌雄各半，禁食不禁水12hr，将15min、30min、1h、2h、3h、4h及6h各时间点水煎液以小鼠耐受的最大容积0.4ml/10g.B.W的剂量灌胃，24h连续给药3次。连续观察3d，动物均无死亡和明显的毒性反应，以此不产生死亡的剂量为最大耐受量(MTD)。
取SPF小鼠160只，雌雄各半，禁食不禁水12hr，按体重随机分为8组，每组20只。即空白对照组(N＝20)、15min组(N＝20)、30min组(N＝20)、1h组(N＝20)、2h组(N＝20)、3h组(N＝20)、4h组(N＝20)及6h组(N＝20)。以小鼠耐受的最大容积0.4ml/10g.B.W的剂量分别灌胃相应浓度的药液，24h连续给药3次；连续观察7天，记录动物有无毒性反应以及实验前后体重变化，以不产生死亡的剂量为最大耐受量(MTD)。
以上结果均用SPSS12.0统计软件处理。
3.3.实验结果
SPF小鼠灌胃黑附片5min、30min、1h、2h、3h、4h及6h各时间点水煎液后，发育健康，肌肉丰满，被毛浓密而有光泽、紧贴其身，眼睛明亮而灵活、无异常的分泌物，肛周洁净，摄食正常，四肢健壮，自发活动正常，体重逐渐增加。7d内未内动物死亡及毒副反应。实验结束时肉眼尸解未见明显病理改变。
4.实验结论
SPF小鼠灌胃生附片15min、30min时间点药液的LD50分别为19.657g原生药/kg(约相当于人用量的79倍)和30.151g原生药/kg(相当于人用量的121倍)。1h、2h MTD均为399.6g原生药/kg(相当于人用量的1600倍)、3h MTD为240g原生药/kg(相当于人用量的961倍)、4h MTD为160g原生药/kg(相当于人用量的640倍)、及6h MTD(最大给药量)为126.32g原生药/kg(相当于人用量的505倍)；所有动物均未出现死亡或异常中毒反应。提示生附片煎煮15min、30min仍然具有一定的毒性，煎煮时间达到1h以上基本没有明显毒性。
SPF小鼠灌胃白附片15min、30min、1h、2h、3h、4h及6h MTD均为399.6g原生药/kg(相当于人用量的1598倍)；所有动物均未出现死亡或异常中毒反应。提示白附片水煎液没有明显毒性。
SPF小鼠灌胃黑附片15min、30min、1h、2h、3h、4h及6h MTD均为399.6g原生药/kg(相当于人用量的1598倍)；所有动物均未出现死亡或明显中毒反应。提示黑附片水煎液没有明显毒性。
上述实验说明本发明附子(生附子、白附片、黑附片)提取物煎煮时间1h以上安全。
上述药效、安全试验证明，采用本发明所述的方法制备的产品，在质量控制的标准范围内，药效明确，且针对不同的适应症，达到了安全、有效，为临床提供了一种新的选择。

Claims (8)

1、一种附子提取物，其特征在于：它是由附子Radix Aconiti Lateralis Preparata或其炮制品为原料制备而成的水或乙醇提取物，其中，提取物中含有双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.04mg～0.75mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.50～3.6mg。
2、根据权利要求1所述的附子提取物，其特征在于：所述的附子或其炮制品为：生附子、黑附片、白附片，其中，生附子每克提取物中含双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.07mg～0.75mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在1.0～3.6mg；黑顺片每克提取物中含双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.04mg～0.25mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.50～1.80mg；白附片每克提取物中含双酯性生物碱，照异肟羟酸铁法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.05mg～0.3mg，含总生物碱，照溴甲酚绿法测定，以乌头碱C34H47NO11计在0.65～1.75mg。
3、根据权利要求2所述的附子提取物，其特征在于：
所述的生附子提取物是由下述方法制备；取生附子药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮5.5～6.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
所述的黑附片提取物是由下述方法制备：取黑顺片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮4.5～5.5小时，第2次加7～9倍量水，煎煮2.5～3.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
所述的白附片提取物是由下述方法制备：取白附片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮3.5～4.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得。
4、一种药物组合物，它是由权利要求1～3任一项所述的附子提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
5、根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于：所述的药剂是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、合剂。
6、一种制备权利要求4或5所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：
a、取生附子药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮5.5～6.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
或，取黑顺片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮4.5～5.5小时，第2次加7～9倍量水，煎煮2.5～3.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
或，取白附片药材饮片，第一次加9～11倍量水，浸泡20～40分钟，煎煮3.5～4.5小时，第2次加9～11倍量水，煎煮3.5～4.5小时，滤过，浓缩，干燥，即得；
b、将a步骤的干燥物加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
7、根据权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：步骤a具体如下：
取生附子药材饮片，第一次加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮6小时；第二次加10倍量水，煎煮4小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得；
取黑顺片药材饮片，第一次加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮5小时；第二次加8倍量水，煎煮3小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得；
取白附片药材饮片，加10倍量水，浸泡30分钟，煎煮2次，每次4小时，滤过，滤液浓缩，干燥即得。
8、根据权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述浓缩是将滤液减压浓缩至相对密度1.02～1.05，60℃；所述干燥方法为一步制粒法，进风温度为：90～100℃，出风温度为：60～65℃。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103349686A (zh) * 2013-07-19 2013-10-16 苏州市天灵中药饮片有限公司 一种包含白附片的中药及其制备方法
CN104644631A (zh) * 2015-01-31 2015-05-27 云南省第一人民医院 新乌头碱对k562细胞生物学特性的改变
CN110279759A (zh) * 2019-07-10 2019-09-27 成都中医药大学 一种基于泥附子直接加工的配方颗粒及其制备方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1369278A (zh) * 2001-02-16 2002-09-18 中国科学院长春应用化学研究所 附子、乌头类剧毒中药的炮制方法
CN1283278C (zh) * 2003-07-03 2006-11-08 昆明市医学科学研究所 泥附子加工工艺

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103349686A (zh) * 2013-07-19 2013-10-16 苏州市天灵中药饮片有限公司 一种包含白附片的中药及其制备方法
CN104644631A (zh) * 2015-01-31 2015-05-27 云南省第一人民医院 新乌头碱对k562细胞生物学特性的改变
CN110279759A (zh) * 2019-07-10 2019-09-27 成都中医药大学 一种基于泥附子直接加工的配方颗粒及其制备方法

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