CN104546988A - 一种瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:将新鲜瓜蒌去子后捣碎或干燥瓜蒌粉碎,用水煎煮,浓缩,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;取干粉,加入干粉质量15-25%的α-淀粉酶,加蒸馏水使溶解,水浴酶解4h;取出后过滤,浓缩,95%醇沉至50%,静置,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;将瓜蒌粗多糖,加蒸馏水使溶解,进行膜分离;将UF-50,NF-400?2段多糖冻干粉分别加入辅料制成制剂。本发明能显著提高小鼠脾指数和胸腺指数,具有安全、无毒、工艺可行的特点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法。
背景技术
瓜蒌是传统中医用药之一。现代医学研究表明,瓜蒌提取物有扩张冠状动脉、增加血流量、提高耐缺氧能力、降低血清胆固醇、抗菌、抗癌等多种作用。(阴健,郭力弓.中药现代研究与临床应用(1),第1版[M].北京:学苑出版社,1993:260.)
关于瓜蒌所含挥发油、氨基酸、微量元素、甾醇类和三萜类、油脂等成分的研究已有一些报道,而瓜蒌的多糖分级分离研究未见报道,粗多糖提取多采用水提醇沉,Sevag法去蛋白,水透析氯仿和正丁醇,再醇沉获得的方法;(屠婕红,黄佳.瓜蒌皮中水溶性多糖的提取及含量测定[J].时珍国医国药,2009,(2):281;屠婕红,余菁,盛静.瓜蒌多糖的提取及组分分析[J].中国现代应用药学杂志2005,(3):240)也有用水提醇沉,鞣酸去蛋白,再过聚酰胺柱,醇沉获得的方法。(王国凯,刘劲松,王刚.安徽中医学院学报[J].2008,(2):48)。
多糖(polysaccharide)是由10个以上的单糖分子通过糖苷键聚合而成,分子量大,一般为数万甚至数百万,是构成生命的四大基本物质之一。到目前为止,已有300多种多糖从天然产物中被提取出来,其中从中药中获得的水溶性多糖最为重要。研究表明,中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种药理作用。在临床上已广泛用于治疗肝炎、艾滋病、癌症等多种疾病。鉴于其重要的免疫调节作用,中药多糖又被称为免疫活性多糖。
诸多研究表明,中药多糖在对免疫系统各个环节的调节中都有着举足轻重的影响。作为一种有很大开发潜力的免疫调节剂,中药多糖在人类消除疾病及增强人体抵抗力的过程中必将发挥巨大的作用。因此,深入系统地研究中药多糖对免疫系统的作用,能使人们从更多的角度认识中药,这将对中医学的发展研究产生深远的影响。(中国现代中药,V0l.15 No.4:286-289)
发明内容
本发明的目的在于提供一种安全、无毒、工艺可行的瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法。
本发明的一种瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将新鲜瓜蒌1kg去子后捣碎或干燥瓜蒌1kg粉碎,用5-10倍水煎煮1-3小时,浓缩至密度为1-1.1,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;
(2)取干粉,加入干粉质量15-25%的α-淀粉酶,加蒸馏水3-5倍使溶解,在55℃-60℃水浴酶解4h;取出后过滤,滤液浓缩至密度为1-1.1,95%醇沉至50%,静置2h,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;
(3)将瓜蒌粗多糖,加蒸馏水40-50倍使溶解,进行膜分离,膜分离参数为:温度:20-25℃;压力:超滤膜0.1-0.2Mpa,纳滤膜0.2-0.3Mpa;
(4)收取得到UF-50、NF-40共2段多糖液,真空冷冻干燥,得冻干粉;
(5)将UF-50、NF-400 2段多糖冻干粉分别加入常规辅料,按常规技术制成各种制剂。
本发明与现有技术相比,具有明显有益效果,从以上技术方案可知:本发明是由瓜蒌粗多糖经过膜分离得到的分子量为5万级和400级的多糖制剂,利用微滤、超滤和纳滤三级分离,通过不同的膜截留不同的分子量部分,富集有效成分,采常温操作,不破坏活性成分,又可分级分离,大大提高有效成分的得率,操作简单,能耗少,工序简捷;再利用冷冻干燥技术,干燥截留液,所得的冻干粉形态疏松,色泽好,较好地保留了有效成分的生物活性。通过动物分组及其免疫方法,以脾指数及胸腺指数为指标,证明瓜蒌多糖UF-50和NF-400多糖制剂有免疫增强作用,能显著提高小鼠脾指数和胸腺指数,经毒理实验证实该制剂无毒性,是一种新的免疫增强剂,可开发应用。
具体实施方式
下面通过实验例和实施例进一步说明本发明的有益效果。
实验例
将UF-50和NF-400多糖制剂进行小鼠免疫增强作用,具体实验如下:
选用小鼠实验为药理基础,免疫器官重量试验法:临床上用盐酸地塞米松致小鼠免疫缺陷,摘取脾脏及胸腺,称重,计算脾指数及胸腺指数;采用Microsoft Office Excel 2003统计软件,SPSS for windows 12.0统计系统,实验数据以均数+标准差( ±S)表示,采用成组t检验进行数理学统计。
小鼠免疫实验:
动物分组,造模及给药:
将144只小鼠随机分成12组,每组12只(雌雄各半),每只均重20g,分为正常对照组(生理盐水9 mg/mL),模型组(地塞米松2.5 mg/Kgd-1),对照组(左旋咪唑72.7 mg/Kgd-1),胸腺肽组(15.4 mg/Kgd-1),瓜蒌多糖UF-50(35.1 mg/Kgd-1),NF-400(35.1 mg/Kgd-1)。
灌胃给药,连续给药8天,对照组和模型组均给生理盐水,其余各自给药相应试剂。到第三天,除正常对照组以外,其余组分别采用腹腔注射地塞米松(25 mg/Kgd-1),在末次灌胃给药后24h,先称取小鼠重量,然后颈椎脱臼处死小鼠,摘取脾脏及胸腺,称重。计算脾指数和胸腺指数。
给药安排:每天下午灌胃给药,到第三天后,早上注射地塞米松,下午灌胃给药。
脾脏及胸腺指数K值:K(mg/g)=器官重量/小鼠体重。
试验结果显示:UF-50制剂及NF-400制剂对盐酸地塞米松致免疫缺陷小鼠脾脏有增殖作用,与模型组比较:UF-50有显著差异(P<0.05),NF-400有极显著差异(P<0.01); UF-5及NF-400制剂对盐酸地塞米松致免疫缺陷小鼠胸腺有增殖作用,与模型组比较:UF-50制剂有显著差异(P<0.05),NF-400制剂有极显著差异(P<0.01)。
采取小鼠最大给药量试验,UF-50制剂及NF-400制剂最大给药量均为32 g/(kg·d),相当于成人日用量(35.1 mg/kg)的912倍。2周观察期内未见小鼠有毒性反应及死亡。
通过以上实验证明,瓜蒌多糖UF-50制剂及NF-400制剂均具有增强小鼠免疫功能的作用。造模后小鼠胸腺严重萎缩,而阳性药及UF-50制剂、NF-400制剂均能使小鼠胸腺恢复正常;造模后小鼠脾脏严重萎缩,而阳性药及UF-50制剂、NF-400制剂均能使小鼠脾脏恢复正常,特别是NF-400制剂对小鼠脾脏的恢复作用与胸腺肽相当,有很好的应用前景。
计量取决于所要达到的效果,治疗时间及给药方式;以人用瓜蒌生药材的计量及有效计量为参考,这些计量一般是成人每天口服含UF-50或NF-400活性成分10mg。
实施例1:
一种瓜蒌多糖免疫增强颗粒剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将新鲜瓜蒌1kg去子后捣碎,用5倍水煎煮1小时,浓缩至密度为1,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;
(2)取干粉,每10g干粉加入1.5gα-淀粉酶,加蒸馏水5倍使溶解,在55℃水浴酶解4h;取出后过滤,滤液浓缩至密度为1,95%醇沉至50%,静置2h,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;
(3)取瓜蒌粗多糖,加蒸馏水50倍使溶解,进行膜分离,膜分离参数为:温度:25℃;压力:超滤膜0.2Mpa,纳滤膜0.3Mpa;
(4)收取得到UF-50、NF-40共2段多糖液,真空冷冻干燥,得冻干粉;
(5)以含活性化合物10mg的颗粒剂计,取UF-50、NF-400 2段多糖冻干粉各10mg分别加入糊精1990mg、蔗糖8000mg,按常规技术制成颗粒剂。
实施例2:
一种瓜蒌多糖免疫增强胶囊剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥瓜蒌1kg粉碎,用10倍水煎煮3小时,浓缩至密度为1.1,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;
(2)取干粉,每10g干粉加入2.5gα-淀粉酶,加蒸馏水3倍使溶解,在60℃水浴酶解4h;取出后过滤,滤液浓缩至密度为1.1,95%醇沉至50%,静置2h,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;
(3)取瓜蒌粗多糖,加蒸馏水40倍使溶解,进行膜分离,膜分离参数为:温度:20℃;压力:超滤膜0.1Mpa,纳滤膜0.2Mpa;
(4)收取得到UF-50、NF-40共2段多糖液,真空冷冻干燥,得冻干粉;
(5)以含活性化合物10mg的胶囊剂计,取UF-50、NF-400 2段多糖冻干粉各10mg分别加入淀粉150mg、滑石粉55mg、羧甲淀粉钠35mg、磷酸氢钠、25mg、硬脂酸镁15mg,按常规技术制成胶囊剂。
实施例3:
一种瓜蒌多糖免疫增强片剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将新鲜瓜蒌1kg去子后捣碎,用7倍水煎煮2小时,浓缩至密度为1.05,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;
(2)取干粉,每10g干粉加入2gα-淀粉酶,加蒸馏水4倍使溶解,在57.5℃水浴酶解4h;取出后过滤,滤液浓缩至密度为1.05,95%醇沉至50%,静置2h,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;
(3)取瓜蒌粗多糖,加蒸馏水45倍使溶解,进行膜分离,膜分离参数为:温度:22.5℃;压力:超滤膜0.15Mpa,纳滤膜0.25Mpa;
(4)收取得到UF-50、NF-40共2段多糖液,真空冷冻干燥,得冻干粉;
(5)以活性化合物10mg的片剂计,取UF-50、NF-400 2段多糖冻干粉各10mg分别加入淀粉37mg、糊精20mg、羧甲淀粉钠8mg、硬脂酸镁55mg、羧甲基纤维素钠55mg、淀粉浆18% 110mg,按常规技术制成片剂。
实施例4:
一种瓜蒌多糖免疫增强咀嚼片的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥瓜蒌1kg粉碎,用8倍水煎煮2小时,浓缩至密度为1.1,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;
(2)取干粉,每10g干粉加入2gα-淀粉酶,加蒸馏水4倍使溶解,在58℃水浴酶解4h;取出后过滤,滤液浓缩至密度为1,95%醇沉至50%,静置2h,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;
(3)取瓜蒌粗多糖,加蒸馏水45倍使溶解,进行膜分离,膜分离参数为:温度:20℃;压力:超滤膜0.2Mpa,纳滤膜0.2Mpa;
(4)收取得到UF-50、NF-40 2段多糖液,真空冷冻干燥,得冻干粉;
(5)以含活性化合物10mg的咀嚼片计,取UF-50、NF-400 2段多糖冻干粉各10mg分别加入糊精200mg、淀粉83mg、甘露醇81mg、山梨醇81mg、硬脂酸镁8mg,按常规技术制成咀嚼片。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,任何未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (2)
1. 一种瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将新鲜瓜蒌1kg去子后捣碎或干燥瓜蒌1kg粉碎,用5-10倍水煎煮1-3小时,浓缩至密度为1-1.1,95%醇沉至50%,过滤,滤取沉淀干燥,烘干得粉;
(2)取干粉,加入干粉质量15-25%的α-淀粉酶,加蒸馏水3-5倍使溶解,在55℃-60℃水浴酶解4h;取出后过滤,滤液浓缩至密度为1-1.1,95%醇沉至50%,静置2h,过滤,沉淀干燥后获得瓜蒌粗多糖;
(3)将瓜蒌粗多糖,加蒸馏水40-50倍使溶解,进行膜分离,膜分离参数为:温度:20-25℃;压力:超滤膜0.1-0.2Mpa,纳滤膜0.2-0.3Mpa;
(4)收取得到UF-50、NF-40共2段多糖液,真空冷冻干燥,得冻干粉。
2.如权利要求1所述的一种瓜蒌多糖免疫增强剂的制备方法,其中:将UF-50、NF-400 2段多糖冻干粉分别加入常规辅料,按常规技术制成各种制剂。
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