CN1903089A - 一种发酵烟草提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种烟用发酵烟草提取物及其制备方法。是按以下方法制备而得的：以特征突出的代表性烟叶为筛选对象，通过微生物纯化技术获取烟叶表面的产香菌株。并以产香菌株为出发菌种，活化后添加至灭菌的液体发酵培养基中，发酵后通过直接浓缩或醇类溶剂沉淀后浓缩或脂溶性溶剂萃取后浓缩得到。本发明与现有的烟草提取物相比具有以下优点：采用了烟草陈化过程的产香菌株，该类菌株对烟碱耐受性高，对烟草类发酵培养基的适用性好，所得的发酵烟草提取物嗅香突出，能够强化卷烟中某种烟叶原料的特征。
Description
技术领域
本发明涉及烟用香料及制备方法，尤其是一种应用烟叶表面产香菌种制备的发酵烟草提取物以及它的制备方法。
背景技术
目前，烟草工业异地化加工的问题逐渐突出，烟叶原料存在不足，特征性强的烟用香料能够帮助卷烟企业有效保证品牌的异地加工，实现产品的均质化。烟用较多的烟草类提取物一般采用传统方法制得，即采用单体烟叶或复配的叶组为原料通过水、醇提取或分子蒸馏得到，这样提取的烟草类提取物特征较弱，添加后对卷烟的改善有一定局限。采用优质烟叶陈化过程中的产香菌株发酵烟草提取物进行具有相应烟叶特征的烟草提取物的制备尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种特征性强的发酵烟草提取物及其制备方法，该方法制备的发酵烟草提取物添加到卷烟中可以增强卷烟的特征。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
发酵烟草提取物是按以下方法制取：以特征突出的代表性烟叶为筛选对象，采用筛选固体培养基，通过微生物纯化方法获取烟叶表面的产香菌株，并以产香菌株为出发菌种，采用筛选用的液体培养基20～40℃活化1小时～7天制得种子液；以灭菌的液体发酵培养基0.5％～50％的接种量添加种子液，在温度10～50℃下发酵1小时～7天，得到发酵液，发酵液用以下方法提取：
①对发酵液直接进行浓缩即得发酵烟草提取物成品；
②对发酵液进行浓缩后，用醇类溶剂沉淀，除去沉淀物后，浓缩回收醇类溶剂得膏状发酵烟草提取物成品；
③对发酵液进行脂溶性溶剂萃取，萃取液浓缩后回收溶剂得到发酵烟草提取物成品。
本发明的制备方法中，其中所述的筛选培养基为添加0.1％～20％烟草水提物或烟膏水稀释液的牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基。
本发明的制备方法中，其中所述的微生物纯化方法为稀释涂布平板法、平板划线分离法及单细胞挑取法。
本发明的制备方法中，其中所述的沉淀所用醇类溶剂为水与乙醇的复合溶剂；其中所述的脂溶性溶剂为石油醚、二氯甲烷。
本发明的液体发酵培养基可以为单体烟叶水提物、复配烟叶水提物，也可以是烟膏产品的水稀释液，也可以在上述水提物与稀释液中添加酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾。
本发明的发酵烟草提取物与现有的烟草提取物相比，由于经过了烟草表面产香菌的发酵产香过程，所得的发酵烟草提取物添加至卷烟中能够增加烟草的本香，强化卷烟中某种烟叶的特征。
具体实施方式
实施例1：
以津巴布韦烟叶为产香菌株筛选对象，采用添加10％津巴布韦烟叶(10倍)水提液的牛肉膏蛋白胨固体培养基进行筛选，平板划线分离法纯化后得到津巴布韦烟叶表面优势芽孢杆菌，以牛肉膏蛋白胨液体培养基接种该优势芽孢杆菌，30℃培养2天，制取芽孢杆菌种子液；以云南烟末1kg为原料，添加10kg水，80℃水浴提取2小时，过滤后得到水提物，补充水提物重量的1％葡萄糖、0.5％磷酸二氢钾，115℃灭菌30min后冷却至室温，成为液体发酵培养基；按液体发酵培养基重量的5％接种上述芽孢杆菌种子液，30℃通气发酵3天；发酵液65℃减压浓缩得到粗膏，加入3倍体积50％乙醇回溶，冷冻过夜，过滤除去不溶物，55℃减压浓缩得到具有津巴布韦特征的发酵烟草提取物产品。
实施例2：
同实施例1方法筛选菌种，并进行发酵液、粗膏的制备；粗膏经过0.5倍石油醚萃取其香气成分三次，萃取液合并，经过40℃减压浓缩后得到澄清透明液体，即得发酵烟草提取物产品。
实施例3：
以云南红大烟叶为产香菌株筛选对象，采用添加5％红河烟膏的牛肉膏蛋白胨固体培养基进行筛选，稀释涂布平板法纯化后得到表面优势短杆菌；以牛肉膏蛋白胨液体培养基接种该优势短杆菌，25℃培养1天，制取短杆菌种子液；红河烟膏1kg，用5kg水稀释后115℃灭菌30min，冷却至室温，成为液体发酵培养基；按液体发酵培养基重量的5％接种上述短杆菌种子液，30℃通气发酵3天，发酵液65℃减压浓缩得到具有红大特征的发酵烟草提取物产品。
实施例4：
以土耳其香料烟为产香菌株筛选对象，采用添加5％土耳其香料烟(10倍)水提液的牛肉膏蛋白胨液体培养基进行密封摇瓶筛选，富集表面厌氧菌，3天后稀释涂布平板筛选得到表面兼性厌氧芽孢杆菌；以添加5％土耳其香料烟(10倍)水提液的牛肉膏蛋白胨液体培养基接种该兼性厌氧芽孢杆菌，30℃培养2天，制取兼性厌氧芽孢杆菌种子液；复配烟膏(保山香料烟膏和红河烟膏按1∶8重量比混合)500g，用2.5kg水稀释后115℃灭菌30min，冷却至室温为液体发酵培养基；按液体发酵培养基重量的2％接种上述厌氧芽孢杆菌种子液，30℃密闭培养2天，65℃减压浓缩发酵液，得到粗膏，通过30％乙醇沉淀，60℃减压浓缩回收乙醇后得到香料烟特征的发酵烟草提取物产品。
实施例5：
以巴西烟叶为产香菌株筛选对象，采用添加10％巴西烟叶(10倍)水提液的PDA培养基进行培养，采用单细胞挑取法得到烟叶表面酵母菌纯菌株；以添加2％巴西烟叶(10倍)水提液的PDA液体培养基接种该酵母菌，30℃培养7天，制取酵母种子液；复配烟叶(玉溪烟叶和红河烟叶按1∶1重量比混合)1kg，添加8kg水，80℃水浴提取2小时，过滤后得到水提物，补充水提物重量的0.5％酵母膏、0.1％蛋白胨，115℃灭菌30min后冷却至室温，成为液体发酵培养基；按液体发酵培养基重量的5％接种上述酵母菌种子液，30℃通气培养1天后密闭转入后发酵，6天后取出，发酵液65℃减压浓缩后得到粗膏；通过75％乙醇沉淀后，除去沉淀物，55℃减压浓缩得到发酵烟草提取物产品。
实施例6：
同实施例5方法筛选酵母菌，并进行发酵液、粗膏的制备；粗膏经过0.5倍二氯甲烷萃取其香气成分三次，萃取液合并，经过40℃减压浓缩后得到澄清透明液体，即得发酵烟草提取物产品。
Claims (7)
1.一种发酵烟草提取物，其特征在于按以下方法制取：以特征突出的代表性烟叶为筛选对象，采用筛选培养基，通过微生物纯化方法获取烟叶表面的产香菌株；并以产香菌株为出发菌种，采用筛选用的液体培养基20～40℃活化1小时～7天制得种子液；以灭菌的液体发酵培养基0.5％～50％的接种量添加种子液，在温度10℃～50℃下发酵1小时～7天，得到的发酵液进行浓缩，或者对浓缩液经过醇类溶剂沉淀，除去沉淀物后进行浓缩提取，或者对浓缩液进行脂溶性溶剂萃取，萃取液进行浓缩，得到发酵烟膏产品。
2.根据权利要求1所述的发酵烟草提取物，其特征在于：所述的特征突出的烟叶是津巴布韦烟叶、红大烟叶、土耳其香料烟、巴西烟叶。
3.根据权利要求1所述的发酵烟草提取物，其特征在于：所述的微生物纯化方法为稀释涂布平板法、平板划线分离法及单细胞挑取法。
4.根据权利要求1所述的发酵烟草提取物，其特征在于：用于筛选的培养基为添加0.1％～20％烟草水提物或烟膏水稀释液的牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基。
5.根据权利要求1所述的发酵烟草提取物，其特征在于：所述的液体发酵液为烟叶水提物或烟膏的水稀释液，或在上述水提物与稀释液中添加酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾。
6.根据权利要求1所述的发酵烟草提取物，其特征在于：用于提取的醇类溶剂为水与乙醇的复合溶剂。
7.根据权利要求1所述的发酵烟草提取物，其特征在于：用于提取的脂溶性溶剂为石油醚、二氯甲烷。
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