CN1899605A - 粒细胞巨噬细胞刺激因子治疗宫颈炎及宫颈糜烂的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM－CSF)在制备外用药物的新用途。制备的该外用药物特别是在治疗子宫颈炎和子宫颈糜烂上的新用途。

Description

粒细胞巨噬细胞刺激因子治疗宫颈炎及宫颈糜烂的新用途

技术领域

本发明涉及制备含有重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的外用药物制剂在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的新用途。上述含有rhGM-CSF的外用药物制剂上可以是外用溶液、外用软膏剂、外用凝胶剂及外用栓剂；上述外用制剂对于治疗子宫颈炎或子宫颈糜烂或子宫颈炎并发子宫颈糜烂具有良好的疗效。

背景技术

GM-CSF是活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、肥大细胞、内皮细胞及成纤维细胞等细胞产生并分泌的一种酸性蛋白。成熟的rhGM-CSF由127个氨基酸组成，是含144个氨基酸的蛋白前体切去17个氨基酸的信号肽后所得的蛋白质，相对分子量为147000Da，生物活性不受糖基化的影响。

近年来，由于应用基因工程技术可以大量地生产出rhGM-CSF从而促进了对rhGM-CSF的研究并扩大了其临床应用，它是众多细胞因子中最为临床研究者所熟悉、且已正式投放市场的一种产品。GM-CSF最基本作用是刺激粒系造学祖细胞向粒细胞、巨噬细胞增殖分化，并逐渐成熟为具有吞噬功能的细胞。然而其临床应用并非如此单一，而是非常广泛，并涉及到很多领域。

目前，rhGM-CSF的临床应用现状主要包括以下几个方面：

1、rhGM-CSF在肿瘤性疾病治疗中的应用

(1)实体肿瘤性疾病：临床上，多数肿瘤化疗药物随剂量增加会增加对骨髓造血功能的毒性作用，导致中型粒细胞减少，增加感染机会。研究者证明在化疗后加用GM-CSF，则可缩短中性粒细胞减少的时间，降低感染率；同时，GM-CSF在肿瘤治疗方面可以诱导并增强外周血单核-巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。

(2)白血病：GM-CSF有促使白细胞祖细胞更多地进入细胞周期的作用，可缩短化疗患者中性粒细胞减少期的持续时间，增加化疗药物对白血病细胞的杀灭作用，减少发热和感染并发症。

(3)再生障碍性贫血：在再生障碍性贫血治疗中使用GM-CSF，可是病人感染率降低50％左右。

2、GM-CSF在骨髓移植中的应用

GM-CSF能加速造血功能恢复，明显加速WBC、PMN的恢复，降低感染率、减少抗生素输注次数而缩短住院时间；同时，还可通过应用rhGM-CSF等细胞因子来调节和促进正常造血干细胞的生长。

3、GM-CSF在抗感染治疗中的作用

由于GM-CSF有刺激粒系造学祖细胞向粒细胞、巨噬细胞增殖分化，并逐渐成熟为具有吞噬功能细胞的功能，因此临床上可以协同治疗感染性疾病；另外，在艾滋病患者的菌血症及感染扩散过程中(分枝杆菌侵入到单核巨噬细胞内)，使用GM-CS能够激活被感染了的巨噬细胞，进而抑制或杀灭细胞内的分枝杆菌，可协同抗生素治疗效果。

基于GM-CSF大量的基础及临床研究结果，GM-CSF在下述几方面将具有良好的临床应用前景：

1、GM-CSF有促进伤口愈合的作用

动物实验表明，GM-CSF能够诱导纤维母细胞增殖以及典型肌原细胞的形成；活化中性粒细胞和单核/巨噬细胞、促进内皮细胞有丝分裂和迁移、促进角化细胞的增殖并调节纤维母细胞的表达。因此，在促进伤口愈合过程中起着非常重要的作用。

2、根据GM-CSF对细胞周期与化疗周期中的作用特点应用本细胞因子。

利用GM-CSF对造血系统各个生长发育水平细胞均有作用这一特点，在各个化疗周期中选择合适时间，联合应用GM-CSF，则可大大减少化疗毒性而增强化疗疗效。

3、GM-CSF的免疫增效作用

众多实验表明，GM-CSF是一种非常有效的免疫佐剂，它可通过全身作用、区域性应用、局部应用、融合蛋白及体外活化抗原表达细胞等五种方式来增强机体对疫苗(抗原)的免疫应答，增强机体对疾病的免疫抵抗能力。

子宫颈炎(cervicitis)及子宫颈糜烂是是育龄妇女的多发病，约有20％或更多的妇女患有此病。子宫颈糜烂发病原因及病理过程比较复杂。其发病常与自身雌激素代谢水平、妊娠期及妊娠后、分娩、流产、服用避孕药、精神神经因素、细菌(链球菌、葡萄球菌及肠球菌)及病毒感染、性生活过于频繁、机械性损伤等密切相关。病理改变常见子宫颈非特殊性炎症、子宫颈内膜上皮下有淋巴细胞、浆细胞及单核细胞浸润、子宫颈柱状上皮及腺上皮伴有不同程度鳞状上皮化生等。

目前，临床上对于子宫颈炎及子宫颈糜烂的治疗，在排除早期宫颈癌之后，多以局部治疗为主。对糜烂面积小或炎症浸润较浅的病例可用腐蚀性药物(硝酸银、铬酸钾及中药)局部敷用；糜烂面积大或炎症浸润较深的病例，可用冷冻、激光、或电熨疗法；急性子宫颈炎时一般口服广谱抗生素(如头孢类抗生素加灭滴灵)治疗。无论是物理疗法或是局部用药治疗子宫颈炎及子宫颈糜烂，其病理修复过程都是使糜烂面柱状上皮坏死、结痂、脱落后，被新生的鳞状上皮覆盖。上述临床治疗方法的局限性在于药物都不能深达糜烂面下方的炎性组织，因此患者远期效果均不满意，即使有近期疗效，不久又可复发。

巨噬细胞在清除坏死组织中起着关键作用。GM-CSF可趋化血液循环中的单核细胞进入组织成为巨噬细胞，同时可活化炎症局部聚集的巨噬细胞和中性粒细胞。活化的巨噬细胞和中性粒细胞可产生和分泌胶原酶、弹性蛋白酶、纤溶酶激活剂等，清除各类坏死组织、细胞碎片、细菌裂解物等；另外，内皮细胞和上皮细胞表面含有GM-CSF受体，GM-CSF可直接促进内皮细胞迁移、增生及活化，使新的鳞状上皮覆盖创面，最终使得疾病得到彻底治疗。

由于GM-CSF理化性质的特殊性(如易于在肠道中分解等)，目前在临床治疗中均以注射液方式进行使用，迄今为止，还未见GM-CSF外用制剂用于治疗子宫颈炎和子宫颈糜烂的研究工作及相关文献及专利报道。

发明内容

本发明的目的在于提供rhGM-CSF外用制剂的新用途，即在制药中的新应用。

实际上，本发明涉及rhGM-CSF外用制剂(外用溶液、凝胶剂、软膏剂及栓剂等)作为制备治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂中的应用。

涉及rhGM-CSF外用制剂(外用溶液、凝胶剂、软膏剂及栓剂等)作为制备治疗子宫颈炎中的应用。

涉及rhGM-CSF外用制剂(外用溶液、凝胶剂、软膏剂及栓剂等)作为制备治疗子宫颈糜烂中的应用。

涉及rhGM-CSF外用制剂(外用溶液、凝胶剂、软膏剂及栓剂等)作为制备治疗子宫颈炎并发子宫颈糜烂中的应用。

为了更好地理解本发明的实质，下面用rhGM-CSF外用制剂在治疗子宫颈炎及子宫颈糜烂的药效学试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。

1、外用rhGM-CSF溶液、软膏剂、凝胶剂及栓剂的制备如下：

外用rhGM-CSF溶液：将0.5％白蛋白加入rhGM-CSF原液，加无菌注射用水定容，制成不同浓度的外用rhGM-CSF溶液。

外用rhGM-CSF软膏剂：在称量过的容器内加入3％明胶、甘油40％、0.15％山梨酸溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，温度在40℃时加入0.5％白蛋白及rhGM-CSF(2.5μg rhGM-CSF/g基质)，搅拌均匀后罐装，放凉，封口，即成rhGM-CSF外用软膏剂。

外用rhGM-CSF外用凝胶剂：在称量过的容器内加入3％明胶、甘油40％、0.15％山梨酸溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，温度在40℃时加入0.5％白蛋白及rhGM-CSF(3.0μg rhGM-CSF/g基质)，搅拌均匀后罐装，放凉，封口，即成rhGM-CSF外用凝胶剂。

外用rhGM-CSF栓剂：在称量过的容器内加入20％明胶、40％甘油、0.15％山梨酸溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，温度在40℃时加入0.5％白蛋白及rhGM-CSF(3.5μg rhGM-CSF/g基质)，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装，即成rhGM-CSF外用栓剂。

2、rhGM-CSF外用药物对宫颈炎并发宫颈糜烂的药效学试验

rhGM-CSF是长春金赛药业有限公司研制的已上市药品。为确定rhGM-CSF对子宫颈炎及子宫糜烂的治疗作用，本实验在建立宫颈炎并发宫颈糜烂的动物模型基础上，观察了rhGM-CSF外用制剂对动物子宫颈炎及子宫颈糜烂的影响。采用四周分别连续给药的方式，停药后处死动物，取出子宫进行病理组织学分析。结果显示：给药四周后，模型对照组和空白溶剂组的病理过程无明显改变；而rhGM-CSF溶液、rhGM-CSF软膏、rhGM-CSF凝胶剂及rhGM-CSF栓剂治疗组的病理过程得到了明显改善，证明了rhGM-CSF外用制剂对子宫颈炎及子宫颈糜烂具有显著疗效，发现了rhGM-CSF在制药领域中将其用于治疗子宫颈炎及子宫颈糜烂的新用途。

实验材料

药品：rhGM-CSF原料为长春金赛药业有限责任公司已上市产品。

动物：雌性昆明小鼠(18～20g)，购于吉林大学白求恩医学部动物部。

动物模型

动物随机分两组，一组用机械性刺激致炎，另一组用药物(大肠杆菌)致炎，两周后处死动物，进行病理组织学检验，以确定宫颈炎模型的建立。

实验方法

(1)动物分组随机分成七组，每组30只。分别为：

a.正常动物组

b.宫颈炎及宫颈糜烂动物模型对照组

c.rhGM-CSF溶液治疗组

d.rhGM-CSF软膏剂治疗组

e.rhGM-CSF凝胶剂治疗组

f.rhGM-CSF栓剂治疗组

h.阳性药对照组

(2)给药方法

a.给药周期及给药途径：4周阴道给药

b.方法：受试药rhGM-CSF溶液、软膏剂、凝胶剂及栓剂均按20g鼠经阴道给药0.1g(含rhGM-CSF1.6μg)，给药4周后处死动物，取出动物子宫，立即放入福尔马林固定液中固定，做石蜡切片，HE染色，在显微镜下做病理组织学检查。

(3)观察指标

a.药物对动物体重的变化。

b.观察给药4周后药物对宫颈炎及宫颈糜烂病理组织学的改变。

实验结果

(1)动物体重：各组动物在阴道给药一周、二周、三周或四周后，体重均无显著性差异。结果详见表1。

表1.动物阴道给药一周后体重变化

动物数	正常对照组	空白溶液组	rhGM-CSF溶液组	rhGM-CSF软膏剂组	rhGM-CSF凝胶剂组	rhGM-CSF栓剂组	阳性药对照组
								1234567	30302830282828	28303026262824	28282426242624	28282624283028	28242830262430	30222628242428	30262628243030

8910111213141516171819202122

28

3030282828282626282624283014

282430262624302426242626242624

262828262228242634302626282626

282426283024262822283028262824

282826262828282026222830242826

282826263030242428262428262826

结果显示：各组平均体重与对照组比较均无显著性差异

表2.动物阴道给药两周后体重变化

动物数	正常对照组	空白溶液组	rhGM-CSF溶液组	rhGM-CSF软膏剂组	rhGM-CSF凝胶剂组	rhGM-CSF栓剂组	阳性药对照组
								1234	32302830	30303428	30302628	30302826	30263032	30222628	30262628

5678910111213141516171819202122

30323230

28322432303028303028283028263030死亡

262826302432282826322628262628262826

303230283028262430262834322628302826

282832302628303224283026323030283028

242428282826262828282026222830242826

243030282826263030242428262428262826

结果显示：各组平均体重与对照组比较均无显著性差异

表3.动物阴道给药三周后体重变化

动物数	正常对照组	空白溶剂组	rhGM-CSF溶液组	rhGM-CSF软膏剂组	rhGM-CSF凝胶剂组	rhGM-CSF栓剂组	阳性药对照组
								12	3232	3030	3232	3432	3228	3428	3430

3456789101112

30303230

3228283226303032

2830283030322834

30283236323034323028

32343030343028282830

30343030323432323432

30302638322832283032

结果显示：各组平均体重与对照组比较均无显著性差异

表4.动物阴道给药四周后体重变化

动物数	正常对照组	空白溶剂组	rhGM-CSF溶液组	rhGM-CSF软膏剂组	rhGM-CSF凝胶剂组	rhGM-CSF栓剂组	阳性药对照组
								123456789101112	343232303232	32303430303430323032	32343032323032343034	343232303236323234323230	323034343032343228303032	343030343030323432323432	343032303038323032303032

结果显示：各组平均体重与对照组比较均无显著性差异

上述四个表格中的实验结果表明：各组平均体重与对照组比较均无显著性差异；各给药组与溶剂组平均体重比较均无显著性差异，t检验P值均大于0.05；各组间平均体重比较均无显著性差异，t检验P值均大于0.05。证明各种rhGM-CSF外用制剂在上述剂量下，不会对动物产生明显的毒副作用，从而证明了上述外用制剂的安全性。

(2)病理组织学结果

①正常动物宫颈病理组织学结果

鳞状上皮层及柱状上皮层大致正常，间质及腺体内膜正常。结果见附图1。

②宫颈炎及宫颈糜烂动物模型组病理组织学结果炎症反应明显，炎细胞浸润较多，部分柱状上皮脱失缺损，结构不清，间质血管充血张，炎细胞大量浸润，腺体扩张，其间有少量炎细胞浸润，腺腔内分泌物较多，病理组织学结果显示宫颈有炎症及糜烂样改变。结果见附图2。

③给药4周后药物对宫颈炎及宫颈糜烂动物模型病理组织学的改变

a.正常动物宫颈病理组织学结果

鳞状上皮层及柱状上皮层大致正常，有鳞状上皮老化，间质及腺体内膜正常。

结果见附图3。

b.宫颈炎动物模型组病理组织学结果

鳞状上皮层变性坏死，大部分脱落缺失，鳞状上皮层变薄，有炎性细胞浸润，柱状上皮层变性坏死，部分上皮缺失，柱状上皮及间质有大量炎性细胞浸润，上皮层变薄，结构不清，上皮无明显增生增厚，间质血管扩张充血，出血较多，腺体扩张，分泌增生有明显的异形结构，其间有较多炎性细胞浸润。结果见附图4。

c.rhGM-CSF溶液组动物宫颈病理组织学结果

药物对动物宫颈病理组织学结果显示：炎症损伤减轻。结果见附图5。

d.rhGM-CSF软膏组动物宫颈病理组织学结果

炎症反应减轻粘膜损伤少。结果见附图6。

e.rhGM-CSF凝胶剂组动物宫颈病理组织学结果

有少量炎性细胞浸润，炎症损伤减轻。结果见附图7。

f.rhGM-CSF栓剂凝胶剂组动物宫颈病理组织学结果

鳞状上皮炎性反应显著减弱，上皮层增生增厚，有角化层，柱状上皮结构清晰，无明显炎细胞浸润，无变性坏死，增生增厚并不明显，间质水肿，无明显增生及炎症反应，腺体大致正常。结果见附图8。

g.阳性药物组动物宫颈病理组织学结果

鳞状上皮层增生增厚，炎性反应不明显，柱状上皮部分缺生，但增生明显，有轻微炎细胞浸润，间质可见炎细胞浸润，血管充血扩张，组织增生水肿，腺体增生明显，数量增多，出现明显异形结构，管腔扩张，分泌物较多。结果见附图9。

实验结论

(1)动物给药4周，动物模型组和空白溶剂对照组的宫颈炎及宫颈糜烂病理组织学无明显变化。

(2)动物给药4周，阳性药物(聚甲酚磺醛阴道栓)对动物宫颈炎及宫颈糜烂具有一定疗效。

(3)动物给药4周，GM-CSF溶液对动物宫颈炎及宫颈糜烂具有显著疗效。

(4)动物给药4周，GM-CSF软膏对动物宫颈炎及宫颈糜烂具有显著疗效。

(5)动物给药4周，GM-CSF凝胶对动物宫颈炎及宫颈糜烂具有显著疗效。

(6)动物给药4周，GM-CSF栓剂对动物宫颈炎及宫颈糜烂具有显著疗效。

具体实施方式

下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。

rhGM-CSF溶液

实施例1

将羟基乙脂1克、甘油1克、山梨酸0.026克在70±5℃溶解，加入0.5％人血白蛋白，加入rhGM-CSF原液2000μg，加无菌注射用水定容至100克。冷却，灌装。

实施例2

将尼泊金甲脂0.01克、甘油0.5克、山梨酸0.026克、月桂氮卓酮2.6克在70±5℃溶解，加入0.8％人血白蛋白，加入rhGM-CSF原液600μg，加无菌注射用水定容至100克。灌装。

实施例3

将尼泊金甲脂0.01克、右旋糖苷1克、山梨酸0.015克在70±5℃溶解，加入1％人血白蛋白加入到rhGM-CSF原液420μg，加无菌注射用水定容至100克。灌装。

实施例4

将尼泊金乙脂0.01克、甘露醇1克、山梨酸0.015克、月桂氮卓酮2.6克在70±5℃溶解，加入0.5％人血白蛋白，加入rhGM-CSF原液150μg，加无菌注射用水定容至100克。灌装。

rhGM-CSF凝胶剂

实施例1

将卡波姆10克在70±5℃熔融，加入吐温-80 2克、甘油50克、氢氧化钠4克、羟基乙脂1克，补足水量，于115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF 1mg，加无菌水至100克。混合均匀后罐装，放凉，封口。

实施例2

将卡波姆934 1克在70±5℃熔融，加入吐温-80 0.2克、甘油1克、三乙醇胺2克、尼泊金甲脂0.01克，补足水量，于115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白0.5％及rhGM-CSF 500μg，加无菌水至100克。混合均匀后罐装，放凉，封口。

实施例3

将羧甲基纤维素钠1克在70±5℃熔融，加入硫酸软骨素0.05克、乙二胺四乙酸0.025克、焦亚硫酸钠0.05克，补足水量，于115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白0.3％及rhGM-CSF 2000μg，加无菌水至100克。混合均匀后罐装，放凉，封口。

实施例4

将羧甲基纤维素钠1克在70±5℃熔融，加入甘露醇0.05克、硫酸软骨素0.05克，补足水量，于115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF 700μg，加无菌水至100克。混合均匀后罐装，放凉，封口。

实施例5

将羧甲基纤维素钠1克在70±5℃熔融，加入硫酸软骨素0.05克、右旋糖苷1克，补足水量，于115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白2％及rhGM-CSF 350μg，加无菌水至100克。混合均匀后罐装，放凉，封口。

rhGM-CSF软膏剂

实施例1

将十八醇50克在70±5℃熔融，加入月桂氮卓酮2.6克、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)10克、十二烷基硫酸钠(SDS)0.1克、山梨酸0.026克溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白0.5％及rhGM-CSF 800μg，加无菌水至100克，搅拌均匀后罐装，放凉，封口。

实施例2

将卡波姆941 1克在70±5℃熔融，加入十二烷基硫酸钠(SDS)1克、蓖麻油25毫升、三乙醇胺2毫升、甘油10毫升，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF 1000μg，加无菌水至100克，搅拌均匀后罐装，放凉，封口。

实施例3

将十八醇60克在70±5℃熔融，加入月桂氮卓酮2.6克、吐温-802克、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)10克、甘油5克、尼泊金甲脂0.026克，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白3％及rhGM-CSF 200μg，加无菌水至100克，搅拌均匀后罐装，放凉，封口。

实施例4

将聚甘油硬脂酸脂V 15克在70±5℃熔融，加入石蜡0.8克、十二烷基硫酸钠1克、甘油10克、尼泊金乙脂0.01克，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF100μg，加无菌水至100克，搅拌均匀后罐装，放凉，封口。

rhGM-CSF栓剂

实施例1

将明胶10克、甘油10克在70±5℃熔融，加入葡萄糖0.7克、硼酸0.7克、苯甲酸钠0.2克，混合均匀，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF 800μg，加无菌水至50克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

实施例2

将明胶10克、甘油10克在70±5℃熔融，加入甘露醇0.7克、山梨酸0.025克、苯甲酸钠0.2克，混合均匀，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF 500μg，加无菌水至50克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

实施例3

将明胶10克、甘油10克在70±5℃熔融，加入聚乙二醇400 3.3克、山梨酸0.025克，混合均匀，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF 100μg，加无菌水至100克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

实施例4

将明胶20克、甘油40克在70±5℃熔融，加入山梨酸0.15克，混合均匀，溶涨过夜，次日补足水量(按40％)，115℃、灭菌20分钟，将温度降至40±2℃，加入人血白蛋白2％及rhGM-CSF1000μg，加无菌水至100克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

实施例5

将脂肪酸甘油酯在70±5℃熔融，将山梨酸0.026克、甘油1克加至熔融的基质中，混合均匀，115℃、灭菌20分钟，待温度降至40±2℃时，加入人血白蛋白1％及rhGM-CSF溶液100μg，加水定容至100克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

实施例6

将半合成甘油酯在70±5℃熔融，将尼伯金乙酯0.01克、甘油1克、羧甲基纤维素纳0.01克加至熔融的基质中，混合均匀，115℃、灭菌20分钟，待温度降至40±2℃时，加入人血白蛋白0.5％及rhGM-CSF溶液1000μg，加水定容至100克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

实施例7

将脂溶性基质半合成甘油酯在70±5℃熔融，将苯酚0.1克、甘油1克、羟基乙酯0.1克加至熔融的基质中，混合均匀，115℃、灭菌20分钟，待温度降至40±2℃时，加入人血白蛋白2％及rhGM-CSF溶液750μg，加水定容至100克，搅拌均匀后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

附图说明：

图1.正常动物宫颈病理组织学结果：磷状上皮层及柱状上皮层大致正常，间质及腺体内膜正常。

图2.宫颈炎动物模型组宫颈病理组织学结果：炎症反应明显，炎细胞浸润较多，部分柱状上皮脱失缺损，结构不清，间质血管充血。

图3.正常动物宫颈病理组织学结果：磷状上皮层及柱状上皮层正常，有磷状上皮老化，间质及腺体内膜正常。

图4.宫颈炎动物模型组病理组织学结果：炎性细胞浸润较多，柱状上皮层变性坏死，柱状上皮及间质有大量炎性细胞浸润。

图5.GM-CSF溶液组动物宫颈病理组织学结果：炎症损伤减轻。

图6.GM-CSF软膏组动物宫颈病理组织学结果：炎症反应减轻，粘膜损伤少。

图7.GM-CSF凝胶剂组动物宫颈病理组织学结果：有少量炎性细胞浸润，炎症损伤减轻。

图8.GM-CSF栓剂组动物宫颈病理组织学结果：无明显炎细胞浸润，无变性坏死，增生增厚并不明显，腺体正常。

图9.给药四周后，阳性药物组动物宫颈病理组织学结果：鳞状上皮层增生增厚，炎性反应不明显，柱状上皮部分缺生，有轻微炎细胞浸润。

Claims (29)

1、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)在制备治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂外用制剂的新用途。

2、如权利要求1所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。

3、如权利要求2所述的rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液，其组分包括rhGM-CSF、溶剂、pH调节剂、稳定剂、抑菌剂、保湿剂、抗氧化剂、和/或促吸收剂。

4、如权利要求2及3所述的阴道溶液，以重量％计：外用制剂具有下列组成：rhGM-CSF(0.0001-0.1％)、溶剂(60-90％)、pH调节剂(0.5-5％)、稳定剂(0.1-3％)、抑菌剂(0.1-5％)、抗氧化剂(0.01-2％)、保湿剂(0～30％)、和/或促吸收剂(0.01-3％)。

5、如权利要求2所述的rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道软膏剂，其组分包括rhGM-CSF、软膏基质、pH调节剂、稳定剂、抑菌剂、抗氧化剂、保湿剂、和/或促吸收剂。

6、如权利要求2及5所述的阴道软膏剂，以重量％计：外用制剂具有下列组成比例：rhGM-CSF(0.0001-0.1％)、软膏基质(60-90％)、pH调节剂(0.5-5％)、稳定剂(0.1-3％)、抑菌剂(0.1-5％)、抗氧化剂(0.01-2％)、保湿剂(0.5～30％)，和/或促吸受剂(0.01-3％)。

7、如权利要求2所述的rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道凝胶剂，其组分包括rhGM-CSF、凝胶基质、pH调节剂、稳定剂、抑菌剂、抗氧化剂、保湿剂，和/或促吸受剂。

8、如权利要求2及7所述的阴道凝胶剂，以重量％计：外用制剂具有下列组成比例：rhGM-CSF(0.0001-0.1％)、凝胶基质(30-90％)、pH调节剂(0.5-5％)、稳定剂(0.1-3％)、抑菌剂(0.1-5％)、抗氧化剂(0.01-2％)、保湿剂(0.5～30％)，和/或促吸受剂(0.01-3％)。

9、如权利要求2所述的rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道栓剂，其组分包括rhGM-CSF、栓剂基质、pH调节剂、稳定剂、抑菌剂、抗氧化剂、和/或促吸受剂。

10、如权利要求2及7所述的阴道栓剂，以重量％计：外用制剂具有下列组成比例：rhGM-CSF(0.0001-0.1％)、栓剂基质(60-90％)、pH调节剂(0.5-5％)、稳定剂(0.1-3％)、抑菌剂(0.1-5％)、抗氧化剂(0.01-2％)、和/或促吸受剂(0.01-3％)。

11、如权利要求2所述，rhGM-CSF在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂中药物的有效浓度范围为0.0001％-0.1％；给药方法为每天给药一次，连续给药28天。

12、如权利要求2所述，rhGM-CSF在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂中药物有效浓度的最佳范围为0.0005％-0.05％；给药方法为每天给药一次，连续给药28天。

13、如权利要求2所述，rhGM-CSF外用制剂的辅料包括溶剂、基质、pH调节剂、稳定剂、抑菌剂、抗氧化剂、防腐剂、保湿剂和/或促吸收剂。

14、如权利要求3及4所述的阴道溶液中：其中的溶剂成分可以是：无菌注射用水、生理盐水、生理环境缓冲液等，或其他适宜物质。

15、如权利要求5及6所述的阴道软膏剂制剂中：软膏基质成分可以是：天然甘油酯类：豚脂、植物油、氢化植物油、硫酸化氢化蓖麻油；烃类：凡士林、石蜡、地蜡、液体石蜡；类脂：羊毛脂、羊毛醇、蜂蜡、白蜂蜡、鲸蜡、胆固醇；水包油型基质：一价皂、鲸蜡醇、硬脂醇、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、甘油单硬脂酸酯、聚甘油硬脂酸酯、吐温-(20、21、40、60、61、65、80、81、85)聚氧乙烯(40)硬脂酸酯；水溶性基质可以是：甘油明胶、淀粉甘油、海藻酸钠、聚乙二醇、甲基纤维素、羟甲基纤维素钠，或其他适宜物质。

16、如权利要求7及8所述的阴道凝胶剂制剂中：凝胶基质成分可以是：水溶性基质包括：甘油、、丙二醇(10～85％)、卡波姆(0.5～3％)、海藻酸盐、明胶、西黄耆胶、透明质酸钠、聚维酮、泊洛沙姆、壳聚糖、聚乙烯醇、聚维酮、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟乙纤维素、羟丙纤维素、羧甲基纤维素、黄原胶、壳聚糖、磷脂，或其他适宜物质；油性基质可以是：液状石蜡、聚氧乙烯、脂肪、胶体硅、铝皂、锌皂，或其他适宜物质。

17、如权利要求9及10所述的阴道栓剂制剂中：栓剂基质成分可以是：油性基质包括：可可脂、香果脂、半合成椰油酯、混合脂肪酸甘油酯、Witepsol、Massa.Estarinum、硬脂酸丙二醇酯，或其他适宜物质；水溶性基质包括：甘油明胶、聚乙二醇(0.1～2％)、聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、吐温61、吐温60、卡波姆(0.5～3％)，或其他适宜物质。

18、如权利要求2所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。其中外用制剂中所使用的蛋白保护剂可以是：甘露醇、甘油、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、人血白蛋白(0.01～2％)、环糊精，或其他适宜物质。

19、如权利要求2所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。其中外用制剂中所使用的促吸受剂可以是：月桂氮酮、甲酰二甲胺、二甲基亚砜、烟酸乙酯、丙二醇、尿素、阿斯巴甜、曲拉酮(Triton X-114，)、维生素E琥珀酸酯、新橘皮苷二氢查耳酮、橘皮苷、桉叶油醇、N-甲基-2-吡洛酮、肉豆蔻酸异丙酯，或其他适宜物质。

20、如权利要求2所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。其中外用制剂中所使用的保湿剂可以是：甘油、丙二醇，或其他适宜物质。

21、如权利要求2所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。其中外用制剂中所使用的抗氧剂可以是：亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、硫代硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠，或其他适宜物质。

22、如权利要求2所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。其中外用制剂中所使用的抑菌剂可以是：山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚、丙酸、苯甲酸、脱氢醋酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、乙烯吡洛烷酮碘，或其他适宜物质。

23、如权利要求2所述，rhGM-CSF药物在治疗子宫颈炎和/或子宫颈糜烂的外用药物制剂可以是阴道溶液、阴道凝胶剂、阴道软膏剂或阴道栓剂等。其中外用制剂中所使用的pH调节剂可以是：盐酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、枸橼酸、醋酸、醋酸钠、马来酸、马来酸钠、枸橼酸钠、硼酸、硼酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠，组氨酸，或其他适宜物质。

24、如权利要求2所述的软膏剂制剂，其制备方法是将基质卡泊姆在70±5℃熔融，将山梨酸、甘油等分别加至熔融的卡泊姆基质中，混合均匀，待温度降至40±2℃时，加入人血白蛋白及rhGM-CSF溶液，冷却，罐装。

25、按照权利要求2所述的凝胶剂制剂，其制备方法是将基质卡波姆在70±5℃熔融，将山梨酸、甘油等分别加至熔融的基质中，混合均匀，待温度降至40±2℃时，加入人血白蛋白及rhGM-CSF溶液，冷却，罐装。

26、按照权利要求2所述的栓剂制剂，其制备方法是将基质甘油明胶在70±5℃熔融，将山梨酸、甘油等分别加至熔融的基质中，混合均匀，待温度降至40±2℃时，加入人血白蛋白及rhGM-CSF溶液加入到上述基质中，最后灌模，冷却，成型，脱模，包装。

27、如权利要求2所述的rhGM-CSF外用制剂，其特征在于通过阴道给药用于治疗子宫颈炎。

28、如权利要求2所述的rhGM-CSF外用制剂，其特征在于通过阴道给药用于治疗子宫颈糜烂。

29、如权利要求2所述的外用制剂，其特征在于通过阴道给药用于治疗子宫颈炎并发子宫颈糜烂。

Images