CN105859869B

CN105859869B - 粒细胞巨噬细胞刺激因子及其制剂和应用

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Publication number: CN105859869B
Application number: CN201610172455.0A
Authority: CN
Inventors: 金磊; 王思勤; 岳本亮; 刘云杉
Original assignee: JINSAI DRUG CO Ltd CHANGCHUN
Current assignee: Jinsai Drug Co., Ltd., Changchun
Priority date: 2016-03-24
Filing date: 2016-03-24
Publication date: 2017-06-20
Anticipated expiration: 2036-03-24
Also published as: CN105859869A

Abstract

本发明属于蛋白质药物领域，涉及粒细胞巨噬细胞刺激因子，其适合用于预防宫腔粘连术后的复发并能提高妊娠率。另外，本发明还涉及GM‑CSF的药物制剂及其应用等。

Description

粒细胞巨噬细胞刺激因子及其制剂和应用

技术领域

本发明属于蛋白质药物领域，具体而言，本发明涉及粒细胞巨噬细胞刺激因子，尤其适合用于预防宫腔粘连术后的复发并能提高妊娠率。另外，本发明还涉及GM-CSF的药物制剂及其应用等。

背景技术

粒细胞巨噬细胞刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulatingfactor，简称为GM-CSF)由活化T细胞、单核/巨噬细胞分泌，能够刺激骨髓前体细胞增殖分化为粒细胞和单核/巨噬细胞，激活成熟的粒细胞和单核/巨噬细胞。

人GM-CSF可以通过成熟的基因重组技术获得，如可参见中国专利申请第98126746.7、01105972.9、03137202.3和200810137280.5号等。除了刺激粒细胞、单核/巨噬细胞成熟，促进成熟细胞向外周血释放等作用外，GM-CSF也被发现能用于治疗或预防乙型肝炎，如可参见中国专利申请第200610167110.2号等。

重组人GM-CSF(简称为rhGM-CSF)主要以注射剂(包括粉针剂)形式提供，也有外用液体制剂和喷雾剂等提供，如可参见中国专利申请第200510012840.0和200510103201.5号等。

在这些较早期的研究之后，GM-CSF的研究归于平静，没有新的药用用途被发现的预期，也缺乏积极性投入新的制剂的研究，更无法预期新的制剂与新的药用用途的配合。

然而，本发明人坚持长期深耕于GM-CSF的研究，没有受近十年来+GM-CSF的研究趋势的束缚，幸运地发现了GM-CSF在预防宫腔粘连术后的复发和提高妊娠率等方面可能有药用价值的迹象，深入研究，设计出特别适合预防宫腔粘连术后的复发和提高妊娠率的药物制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供粒细胞巨噬细胞刺激因子，其适用于预防宫腔粘连术后的复发并能提高妊娠率。本发明的目的还在于提供包含上述GM-CSF的药物组合物及其制备方法。另外，本发明的目的还在于提供上述GM-CSF的药物应用。

具体而言，在第一方面，本发明提供了粒细胞巨噬细胞刺激因子，其适用于预防宫腔粘连术后的复发并能提高妊娠率。优选地，本发明的第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子是重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子。尽管rhGM-CSF在生物大分子结构上是已知的，但是本发明人令人意外地发现了其(尤其是其优化的药物制剂)预防宫腔粘连术后的复发和提高妊娠率的新用途。

在第二方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子和药学上可接受的载体。在本文中，“药学上可接受的载体”指无毒固态、半固态或液态填充剂、稀释剂、缓冲剂、保护剂、防腐剂、包裹材料或其他制剂辅料。根据本领域的公知技术，可以根据治疗目的、给药途径的需要将药物组合物制成各种剂型，优选该组合物为单位剂量形式，如固体制剂(如片剂、膜剂、丸剂、胶囊、粉剂、粉针剂、或颗粒剂等)、液体制剂(如糖浆剂和乳液剂、消毒的注射用溶液或悬浮液、气雾剂或液体喷剂、滴剂、或针剂等)、以及自动注射装置或栓剂。本发明的药物组合物优选是子宫腔灌注剂，在本文中，可以被简称为宫腔灌注剂或灌注剂，其流动性介于注射用溶液和固体制剂之间，是半固体制剂，适合用于向子宫腔灌注。

优选在本发明第二方面的药物组合物中，药学上可接受的载体包括羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和/或白蛋白，更优选，药学上可接受的载体包括羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白。

进一步地，优选在本发明第二方面的药物组合物中，羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比为1.5～2.5：25～40：0.3～0.5：0.45～0.75:0.12～0.18:0.6～1，优选为1.8～2.2：30～40：0.35～0.45：0.55～0.65：0.13～0.16：0.7～0.9。在本发明的具体实施方式中，羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比为2：35：0.4：0.6：0.15：0.8。

另外，优选在本发明第二方面的药物组合物中，药学上可接受的载体还可以包括水。优选羧甲基纤维素钠和水的重量比为1.5～2.5：45～75，优选为1.8～2.2：55～65，例如为约2：61。在本发明的具体实施方式中，配方中的水量为100％的余量。

在第三方面，本发明提供了制备本发明第二方面的药物组合物的方法，其包括：

(1)混合羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯和尼泊金甲酯，加水溶胀；

(2)任选补足水量；和，

(3)灭菌后，加入白蛋白和本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子，混合均匀。

本发明第三方面的方法制备的药物组合物适合向子宫腔灌注。

优选本发明第三方面的方法在步骤(3)后还包括分装和/或封装等过程。

在第四方面，本发明提供了本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子在制备用于预防宫腔粘连术后的复发的药物中的应用。宫腔粘连(IUA)又称Asherman综合征，是指各种原因导致的子宫内膜基底层的严重损伤，引起子宫肌壁的相互粘连。当前，宫腔粘连的主要治疗手段是通过宫腔镜手术分离粘连，然后将球囊或避孕环置入宫腔。在本文中，这些手术过程被统称为宫腔粘连术。该治疗方案的最大问题是高复发率，一般术后两周或1月复查，复发率约为40～50％。本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子能够预防宫腔粘连术后的复发。

在第五方面，本发明提供了本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子在制备能提高妊娠率的药物中的应用。现代社会，尤其是我国，由于计划生育的实施、妇女生育年龄的延迟以及人工流产等因素，导致不孕不育率呈逐渐走高的趋势，其中有相当比例即使采用辅助生殖技术(如，试管婴儿)仍然导致受孕失败。本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子能够提高妊娠率，尤其是试管婴儿的妊娠率。

在本发明第四或第五方面的应用中，药物可以以合适的药物制剂形式来提供本发明第一方面的粒细胞巨噬细胞刺激因子。优选地，药物是本发明第二方面的药物组合物。

本发明的有益效果在于，本发明的粒细胞巨噬细胞刺激因子，特别是以本发明的宫腔灌注剂的形式提供，能有效预防宫腔粘连术后的复发并能提高妊娠率。

为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。另外，本发明引用了公开文献，这些文献也是为了更清楚地描述本发明，它们的全文内容均纳入本发明进行参考，就好像它们的全文已经在本发明说明书中重复叙述过一样。

具体实施方式

以下本文将通过具体的实施例来描述发明。如未特别指明之处，可根据本领域技术人员所熟悉的《药物制剂学》等手册和相关药物法规、规定(尤其是CFDA的相关临床试验指引)以及本文所引用的参考文献中所列的方法来实施。另外，实施例中所使用的材料除有特别说明外，均可通过商业途径从市场上购买。

实施例1.rhGM-CSF宫腔灌注剂的制备

配方量100％中，2％羧甲基纤维素钠、35％甘油、0.4％吐温-80、0.6％对羟基苯甲酸甲酯和0.15％尼泊金甲酯溶胀过夜，如有蒸发，次日补足水量，118℃、灭菌30分钟，温度在40℃时加入0.8％白蛋白及rhGM-CSF(每克辅料基质中含有100μg rhGM-CSF)，搅拌均匀后放凉、封装，即成。

实施例2.rhGM-CSF预防宫腔粘连术后复发的临床试验

知情同意的60例宫腔粘连患者随机分成两组，其中试验组(30例)的患者在宫腔镜下实施粘连宫腔组织锐性分离，术后宫腔灌注实施例1制备的rhGM-CSF灌注制剂5g，然后放置宫腔球囊；过48小时后取出宫腔球囊，然后再宫腔灌注实施例1制备的rhGM-CSF灌注制剂5g；

对照组(30例)与试验组的宫腔镜下手术方法一致，术后同样放置球囊进行扩张，只是并未进行宫腔灌注治疗。

患者一月后复诊，结果显示，试验组无一例宫腔粘连复发，即复发率为0％；而对照组有13例宫腔粘连复发，即复发率为43％。这表明，本发明的rhGM-CSF灌注制剂能够有效预防宫腔粘连术后的复发。另外，使用中没有需要停止试验的不良反应和副作用事件被报告。

实施例3.rhGM-CSF对提高妊娠率的临床试验

知情同意的78例先期试管婴儿(IVF)失败的患者随机分成三组，其中：

试验组1(28例患者)，口服戊酸雌二醇8mg/日，共10日进行内膜准备；检测卵泡达到12mm后进行宫腔处理，即轻微搔刮子宫内膜+灌注实施例1制备的rhGM-CSF灌注制剂5g。

试验组2(25例患者)，口服戊酸雌二醇8mg/日，共10日进行内膜准备；检测卵泡达到12mm后进行宫腔处理，即灌注实施例1制备的rhGM-CSF灌注制剂5g，但不进行内膜搔刮。

对照组(25例患者)，口服戊酸雌二醇8mg/日，共10日进行内膜准备；未进行任何宫腔处理。

然后，观察患者行试管婴儿的妊娠成功率，结果显示，试验组1共有14例患者受孕，妊娠率50％；试验组2共有9例患者受孕，为36％；对照组共有6例患者受孕，妊娠率仅为24％。这表明，本发明的rhGM-CSF灌注制剂能够提高妊娠率，尤其是有效促进试管婴儿的妊娠成功。另外，使用中没有需要停止试验的不良反应和副作用事件被报告。

Claims

1.宫腔灌注剂，其包含粒细胞巨噬细胞刺激因子和药学上可接受的载体,其中，药学上可接受的载体包括羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白，所述羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比为1.5～2.5：25～40：0.3～0.5：0.45～0.75:0.12～0.18:0.6～1。

2.权利要求1所述的宫腔灌注剂，其中，粒细胞巨噬细胞刺激因子是重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子。

3.权利要求1所述的宫腔灌注剂，其中，羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比为1.8～2.2：30～40：0.35～0.45：0.55～0.65：0.13～0.16：0.7～0.9。

4.权利要求3所述的宫腔灌注剂，其中，羧甲基纤维素钠、甘油、吐温-80、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比为2：35：0.4：0.6：0.15：0.8。

5.权利要求1所述的宫腔灌注剂，其中，药学上可接受的载体还包括水。

6.权利要求5所述的宫腔灌注剂，其中，羧甲基纤维素钠和水的重量比为1.5～2.5：45～75。

7.权利要求6所述的宫腔灌注剂，其中，羧甲基纤维素钠和水的重量比为1.8～2.2：55～65。

8.权利要求7所述的宫腔灌注剂，其中，羧甲基纤维素钠和水的重量比为2：61。

9.权利要求1-8之一所述的宫腔灌注剂的制备方法，其包括：

(2)任选补足水量；和，

(3)灭菌后加入白蛋白和粒细胞巨噬细胞刺激因子，混合均匀。

10.权利要求9所述的制备方法，其中，粒细胞巨噬细胞刺激因子是重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子。

11.权利要求1所述的宫腔灌注剂，其是权利要求9或10所述的制备方法制备的。

12.粒细胞巨噬细胞刺激因子在制备用于预防宫腔粘连术后的复发和/或能提高妊娠率的药物中的应用，其中药物是权利要求1～8之一所述的宫腔灌注剂。

13.权利要求12所述的应用，其中，妊娠率是试管婴儿的妊娠率。

14.权利要求12所述的应用，其中，粒细胞巨噬细胞刺激因子是重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子。

15.权利要求12所述的应用，其中，宫腔灌注剂是权利要求9或10所述的制备方法制备的。