CN1877318A - 一种检测紫花前胡素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测紫花前胡素的方法,具体地说,涉及一种用高效液相色谱法检测紫花前胡素的方法,其包括用高效液相色谱法测定样品中紫花前胡素的步骤,其特征在于所述的色谱为反相色谱,且流动相为磷酸盐缓冲溶液、乙腈和十二烷基硫酸钠的混合溶液。该方法检测紫花前胡素,具有异构体之间易分离,不干扰,检测时间短,测定结果准确等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测紫花前胡素的方法,具体地说,涉及一种用高效液相色谱法检测紫花前胡素的方法,该方法检测紫花前胡素,具有异构体之间易分离,不干扰,检测时间短,测定结果准确等优点。本发明属于中药分析化学领域。
背景技术
紫花前胡为伞形科植物紫花前胡Angelica decursiva(Miq.)Franch的干燥根,多年生宿根草本植物,具有疏风清热、下气化痰等功效,主产湖南、江西、安徽等地,我国分布比较广泛,也是临床上的常用中药。具有散风清热、降气化痰的功效,临床上常用于风热咳嗽痰多,燥湿清热等症状的治疗。现代研究表明该类植物含有挥发油及香豆素等化学成分,例如主要有紫花前胡苷(nodakenin)、紫花前胡苷元(nodakenetin)、紫花前胡素(decursin)、伞花内酯等。紫花前胡素,其分子式C19H20O5,熔点:110~112℃,[α]d 15:+172(c=7,CHCL3)。研究发现,其中的紫花前胡素对治疗白血病、糖尿病、高血压以及降低肾毒素具有显著效果,它也能抑制幽门螺杆茵,而幽门螺杆菌与胃和十二指肠溃疡、胃炎、胃癌等疾病密切相关。
紫花前胡素(decursin)
随着中药现代化的发展,开发安全、有效、可控的现代中药,是中药研究的重要途径之一。对天然药物中活性药物成分的检测和测定等质量控制,是中药现代研究和开发的重要内容,其中探索活性成分有效、快捷的测定方法尤为关键。紫花前胡素是一重要的药物活性成分,广泛存在于伞形科植物中,是多数中药例如紫花前胡等的有效成分。目前,关于紫花前胡素的检测方法,还主要是比色法和薄层色谱法等,方法效率低下,灵敏度低,重现性和可靠性等都存在严重缺陷,远远不能满足现代中药要求和标准。因此,探索一种更加灵敏、快捷、有效的紫花前胡素检测方法,具有十分重要意义。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的上述缺陷,提供了一种通过高效液相色谱法检测紫花前胡素的方法,从而为紫花前胡素的开发以及中药的质量控制,提供一种有效的方法。本发明的技术方案如下:
本发明的检测紫花前胡素的方法,其包括用高效液相色谱法测定样品中紫花前胡素的步骤,其特征在于所述的色谱为反相色谱,且流动相为磷酸盐缓冲溶液、乙腈和十二烷基硫酸钠的混合溶液。
其中,所述的“样品”,具有广义的含义,一方面是指含有紫花前胡素的原料或原药材,例如伞形科植物紫花前胡药材(根、茎、叶或果实等)或其经过适当的提取和/或分离步骤之后所得到的提取物,另一方面,也指含有上述原料或药材的复方药物,例如含有紫花前胡药材的中药复方或中成药等,此外,所述“样品”还包括上述样品经过适当处理之后制成的待测样品,也称“供试品”,例如紫花前胡原料经过适当提取分离步骤所配制成的供试品。
其中,所述的反相色谱,色谱柱可以为C2~C22的材料,例如ODS柱(Shim-pack VP-ODS),型号为AT.Lichrom C18,或其它规格,柱子的填充物质是十八烷基结合硅胶;也还可以选用Intersil ODS-2或Capcell Pakc-18等柱子的固定相。其中,作为本发明一优选实施方案,使用ODS柱(250MM*4.6MM,5UM)作为固定相。
其中,上述流动相的组成成分为磷酸盐缓冲溶液、乙腈和十二烷基硫酸钠,其中,所述的磷酸盐缓冲溶液可以为磷酸、次磷酸、偏磷酸、磷酸氢钠、磷酸二氢钠或磷酸钠等组成的缓冲溶液,本发明优选用磷酸和磷酸二氢钠缓冲溶液,更优选pH值为5的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液。
上述流动相中组成成分的配制,可以根据样品及其预处理情况以及固定相种类进行调整,本领域一般技术人员可以通过实验来确定符合要求的配比。作为本发明实施方案之一,所述的流动相优选采用通过如下方法配成:
(1)pH值为5的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液稀释10倍后,与乙腈等体积混合;
(2)按1000毫升步骤(1)所得的混合液中加入1.5~4.5克、优选2~3克、更优选2.88克十二烷基硫酸钠的比例向混合液中加入十二烷基硫酸钠。
本发明上述所述的高效液相色谱法检测紫花前胡素的方法,测定时的柱温,可以为室温或稍微低于或高于室温的温度,通常,柱温为20~40℃,优选30~35℃。
本发明上述所述的高效液相色谱法检测紫花前胡素的方法,其中,测定的流速可以为每分钟0.5~2毫升,优选每分钟1.0~1.5毫升。
本发明上述所述的高效液相色谱法检测紫花前胡素的方法,其中,测定的检测波长可以在250~300纳米范围内,优选为280纳米。
本发明通过反复实验和摸索,意外地发现通过使用反相色谱法,并以磷酸盐缓冲溶液、乙腈和十二烷基硫酸钠组成的流动相,进行高效液相色谱法检测样品中紫花前胡素,方法具有分离度好、灵敏度高以及重现性好等优点,而且流动相没有使用甲醇等试剂,尤其是,本发明方法的色谱分离好,紫花前胡素异构体之间易分离,时间短,结果准确。可以有效地检测和测定紫花前胡素,可作为紫花前胡素指控的有效手段。
附图说明
图1:紫花前胡素的HPLC图
图2:样品的HPLC图
具体实施方式
以下实施例是为了进一步解释或说明本发明的内容,但不构成对本发明主旨和权利要求保护范围的限制。
实施例l
取紫花前胡素对照品适量,精密称定后,用甲醇溶解并定容50ml,过0.45μm滤膜,作为对照品溶液。
吸取上述对照品溶液,进行高效液相色谱测定。
流动相配制:
(1)PH=5的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液稀释10倍后,与乙腈按1∶1的体积比混合;
(2)按1000ml(1)混合液中加入2.88g十二烷基硫酸钠的比例向混合液中加入十二烷基硫酸钠.
检测条件:
柱温35℃,流速1.2ml/min 检测波长280nm,ODS柱250×4.6mm 5μm。
测得的HPLC图谱见图1。
结果测得紫花前胡素的保留时间为29.559分钟,理论板数为23111.537。结果良好。
图1中各色谱峰的参数见下表1。
表1 各色谱峰的参数
峰号 组分名 保留时间 浓度 面积 峰高 理论塔板 分离因子 |
1 1.872 0.00000 15894.0 1456.2 -- 0.0002 2.230 0.00000 114080.4 5680.9 231.914 0.0003 2.753 0.00000 5652.5 861.0 -- 2.4614 3.065 0.00000 11760.7 518.4 -- 1.3545 紫花前胡素 29.559 0.00000 68573.9 2450.0 23111.537 22.374 |
实施例2
精密吸取上述的对照品溶液2,4,6,8,10μl,按实施例1的色谱条件测定峰面积,以峰面积对进样量进行回归处理,进行线性关系试验。
结果测得线性回归方程为:y=66995x+27088,r=0.9998。说明本发明方法的线性关系良好。
实施例3
用微量注射器吸取上述的紫花前胡素对照品液10μl进样,重复进样5次。测得峰面积依次为2115765.9,2109336.0,2134522.9,2142488.5和2128115.8。平均峰面积为2126045.82,相对标准偏差RSD=0.636%。测定结果说明该方法有很好的精密度。
实施例4
取紫花前胡根药材原料10.0g,粉碎至60目的粉末,取粉末,精密称定后,在55℃、频率55KHZ下超声提取30分钟,溶媒为95%乙醇,提取两次,合并提取液,过滤,回收溶媒后残渣用甲醇溶解,定容至100ml,过0.45μm滤膜,作为供试品溶液。
采用高效液相色谱法进行测定
流动相配制:
(1)PH=5的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液稀释10倍后,与乙腈按1∶1的体积比混合;
(2)按1000ml(1)混合液中加入2.88g十二烷基硫酸钠的比例向混合液中加入十二烷基硫酸钠。
检测条件:
柱温35℃,流速1.2ml/min 检测波长280nm,ODS柱250×4.6mm 5μm。
结果测得药材中紫花前胡素的含量为0.6495%。测得的样品的HPLC图谱见图2。图2中,各峰对应的数据如下表2所示。
表2:各色谱峰对应的色谱参数
峰号 组分名 保留时间 浓度 面积 峰高 理论塔板 分离因子 |
1 23.391 0.00000 257671.4 10958.3 22564.712 0.0002 24.456 0.00000 1646541.6 61093.8 18993.940 0.0003 25.504 0.00000 112210.3 204.7 20766.079 1.9854 26.863 0.00000 18150.0 660.0 -- 1.6435 27.780 1.54008 721037.4 25354.9 22633.331 1.2646 紫花前胡素 29.457 6.49544 3041052.4 101907.5 22316.146 1.3827 31.121 0.00000 37996.2 1307.8 24523.622 1.2748 33.566 0.00000 99747.4 2871.5 1615.395 1.316 |
实施例5
精密称取已知紫花前胡素含量的紫花前胡药材粗粉3份,每份约0.5g,分别精密加入0.0482mg/mL的紫花前胡素对照品10,12,14mL,按实施例4样品测定同法进行,结果测得平均加样回收率为97.971%,RSD为0.908%。
实施例6
紫花前胡药材粗粉过60目,40℃干燥4h,取约0.5g,精密称定,按照实施例4相同方法制得供试品5份,每份取10μl进样。测得紫花前胡素的平均含量为0.6405%,RSD=0.822%,说明该方法具有很好的重现性。
实施例7
取新配制的紫花前胡素对照品溶液,进样10μl,以后每2h进样一次,共进样5次,各次的峰面积为2242841.5,2245106.6,2243692.4,2243090.4和2244825.2,RSD=2.206%,可见其峰面积基本不变,表明紫花前胡素在10h内有很好的稳定性。
已经根据优选实施例对本发明作了描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅仅为了举例说明本发明而已。在不偏离本发明的精神和范围的前提下,本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案,其均应被理解为在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1、一种检测紫花前胡素的方法,包括用高效液相色谱法测定样品中紫花前胡素的步骤,其特征在于所述的色谱为反相色谱,且流动相为磷酸盐缓冲溶液、乙腈和十二烷基硫酸钠的混合溶液。
2、根据权利要求1所述的方法,其中所述的反相色谱的固定相选自Shim-pack VP-ODS、Intersil ODS-2和Capcell Pakc-18。
3、根据权利要求1-2所述的方法,其中所述的磷酸盐缓冲溶液为pH值为5的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液。
4、根据权利要求1-3所述的方法,其中所述的流动相通过如下步骤配制而成:
(1)pH值为5的磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液稀释10倍后,与乙腈等体积混合;
(2)按1000毫升步骤(1)所得的混合液中加入1.5~4.5克、优选2~3克、更优选2.88克十二烷基硫酸钠的比例向混合液中加入十二烷基硫酸钠。
5、根据权利要求1-4所述的方法,其中测定的柱温为20~40℃,优选30~35℃。
6、根据权利要求1-5所述的方法,其中测定的流速为每分钟0.5~2毫升,优选每分钟1.0~1.5毫升。
7、根据权利要求1-6所述的方法,其中测定的检测波长为250~300纳米,优选为280纳米。
8、根据权利要求1-7所述的方法,其中所述的样品为紫花前胡的根、茎、叶、果实或其提取物。
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