CN1861192A - 负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制法 - Google Patents
负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1861192A CN1861192A CNA2006100387984A CN200610038798A CN1861192A CN 1861192 A CN1861192 A CN 1861192A CN A2006100387984 A CNA2006100387984 A CN A2006100387984A CN 200610038798 A CN200610038798 A CN 200610038798A CN 1861192 A CN1861192 A CN 1861192A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- camptothecine
- microsphere
- high molecular
- carried
- molecular nano
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 115
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 title claims abstract description 97
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 title claims description 99
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 6
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 title claims description 6
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 45
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims abstract description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 59
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 55
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- HAWSQZCWOQZXHI-FQEVSTJZSA-N 10-Hydroxycamptothecin Chemical compound C1=C(O)C=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 HAWSQZCWOQZXHI-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 37
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 30
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims description 30
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 21
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 20
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 20
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 18
- FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 7-Ethyl-10-Hydroxy-Camptothecin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CC)=C(CN3C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=C33)=O)C3=NC2=C1 FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 claims description 14
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 11
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 9
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 9
- 229920000469 amphiphilic block copolymer Polymers 0.000 claims description 8
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 8
- VHXNKPBCCMUMSW-FQEVSTJZSA-N rubitecan Chemical compound C1=CC([N+]([O-])=O)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VHXNKPBCCMUMSW-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 8
- 229950009213 rubitecan Drugs 0.000 claims description 8
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims description 4
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims description 4
- FUXVKZWTXQUGMW-FQEVSTJZSA-N 9-Aminocamptothecin Chemical compound C1=CC(N)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 FUXVKZWTXQUGMW-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000229 biodegradable polyester Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004622 biodegradable polyester Substances 0.000 claims description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 claims description 3
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 claims description 3
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 7
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 abstract description 3
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 abstract 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 30
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 5
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N ε-Caprolactone Chemical compound O=C1CCCCCO1 PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 4
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229920000762 poly(caprolactone)-poly(ethylene glycol)-poly(caprolactone) Polymers 0.000 description 3
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- KSBAEPSJVUENNK-UHFFFAOYSA-L tin(ii) 2-ethylhexanoate Chemical compound [Sn+2].CCCCC(CC)C([O-])=O.CCCCC(CC)C([O-])=O KSBAEPSJVUENNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical class OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 208000006268 Sarcoma 180 Diseases 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000247 postprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- -1 CPT carboxylic acid salt Chemical class 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N Diethylenetriamine Chemical compound NCCNCCN RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- WBOHXLDSPBIPTP-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethyl-1,8-naphthyridin-4-amine Chemical compound CN(C1=CC=NC2=NC=CC=C12)C WBOHXLDSPBIPTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- UKLDJPRMSDWDSL-UHFFFAOYSA-L [dibutyl(dodecanoyloxy)stannyl] dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)O[Sn](CCCC)(CCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC UKLDJPRMSDWDSL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002047 solid lipid nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
一种负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，它是以可生物降解的高分子纳米微球为药物载体，负载至少一种喜树碱类的药物，所述的可生物降解的高分子可以是聚酯或聚酯与聚乙二醇形成的两亲嵌段共聚物。本发明的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，药物载体为颗粒状，其直径为60nm－800nm，负载于其中的喜树碱类药物占负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物总质量的质量百分比可高达30％。可用于静注。本发明公开了其制法。
Description
技术领域
本发明涉及喜树碱类药物，更具体而言，是涉及负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制备方法。
发明背景
喜树碱(CPT)是一种从中国喜树中提取出来的一种具有细胞毒性的生物碱，它的作用对象为细胞的拓扑异构酶I(Top I)，通过阻止切开的DNA链的再结合，喜树碱可以有效的杀灭肿瘤细胞。尽管喜树碱和其很多衍生物在体外肿瘤模型实验中展现出明显的抗肿瘤效果，然而这类药物在水或者各种生物相容的有机溶剂中溶解度都极低，因此不尽人意的溶解性大大制约了它们的实际应用。为解决喜树碱类药物的溶解性问题，人们不得不使用药效低、毒副作用大的羟基喜树碱(HCPT)或CPT羧酸盐水溶液，或者通过化学改性得到溶解性改善的喜树碱类前药(prodrug)，如已经上市的伊立替康(Irinotecan，CPT-11，1994美国上市，用于治疗结直肠癌)和拓扑替康(Topotecan，1996美国上市，用于卵巢癌的治疗)等。但是前药能否在体内完全分解为有效成分在很大程度上影响了该药的效果，而且病人在药物代谢方面的个体差异也导致这些前药在用于各类病人时药效差别极大。在现有的一些解决非水溶性药物输送问题的技术中，使用高分子纳米药物载体在载药量，制剂的稳定性，生物相容性以及“被动靶向”效果等方面均体现出明显的优势(参见I.Brigger，C.Dubernet，P.Couvreur，Adv.Drug Del.Rev.，54，2002，631-651)。因此，开发一个负载喜树碱类药物的高性能纳米药物载体对于进一步充分发挥喜树碱类抗肿瘤药物药效具有重大意义。
过去的几年中，人们一直在努力寻找用于输送喜树碱药物的高性能药物载体。Ertl B和Shenderova A分别报道了通过传统的乳化挥发法制备以聚乙交丙交酯(PLGA)微球为载体的CPT和HCPT的药物输送体系(参见Ertl B，Platzer P，Wirth M，and et al.，J.Controlled Release 61，1999，305-317；A.Shenderova，T.Burke，S.Schwendeman，Pharm.Res.14，1997，1406-1414.)，由于CPT和HCPT在PLGA中的溶解度过低，因此在他们得到的微球载药量并不高，且负载的药物大部分以微晶的形式存在。这种载药体系主要目的是用于喜树碱或羟基喜树碱的缓释，同时利用高分子水解产生的微酸环境来稳定CPT的内酯环。由于微球的尺寸过大，这类体系无法做为静注剂型，因此其实际应用受到了限制。之后，Yang等人采用固体脂质体纳米粒子(Solid Lipid Nanoparticles，SLN，参见S.Yang，J.Zhu，Y.L，and et al.，Pharm.Res.16，1999，751-757；Yang S.，Lu L，Cai Y，and et al.，J.Controlled Release 59，1999，299-307)负载了CPT，并且分别考察了经静注和口服后，CPT在小鼠体内的分布情况。结果表明，CPT经过SLN负载后，血液中的半衰期得到了明显延长，组织中的药物浓度也有所提高，而且相比于原药，CPT-SLN对脑部有显著的靶向性。不过由于喜树碱类物质与脂质的亲和性较差，该体系的载药量也不高(＜5％)，此外制备过程中还需要加入表面活性剂poloxamer 188，为其生物安全性带来了隐患。为了提高喜树碱类药物的负载效率，Zhang等利用了7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)在碱性水溶液中溶解度大幅增加，而酸化后打开的内酯环又能够可逆地重新闭合这一特性，制备了高载药效率的SN-38脂质体制剂，并且取得了良好的体外和体内抗肿瘤效果(参见J.Zhang，T.Xuan，M.Parmar，and et al.，Intl.J.Pharm.270，2004，93-107)。但是，脂质体成本高，自身性质不够稳定，在体内容易降解和崩解，大量脂质物质在体内可能产生毒副作用，这些都成为制约喜树碱脂质体实际应用的因素。2004年，Okano等人以部分水解的聚天冬氨酸(PAsp)与聚乙二醇(PEG)的嵌段共聚物为材料，用高温乳化分散法制备了负载CPT的高分子胶束(参见P.Opanasopit，M.Yokoyama，M.Watanabe，and et al.，Pharm.Res.21，2004，2001-2008)。他们的结果显示，部分水解后的PAsp与CPT间相互作用得到了加强，能够获得令人满意的负载效果，载药量达到20％，载药效率最高可达70％。但是他们的研究中载体材料制备过程复杂，成本较高，负载过程在80℃高温的水中超声进行，有可能对药物和载体材料带来不利的影响。此外，聚氨基酸在体内应用时的抗原性也是值得重视的问题。
综上所述，尽管在非水溶性喜树碱药物负载与输送体系的研究中已经取得了一些振奋人心的成果，但由于喜树碱药物独特的溶解性，和各种载体材料的亲和性过低以及强烈的自聚集倾向，至今仍然无法采用常规的载体材料和工艺制备在载体尺寸，载药量，制备成本，稳定性及生物相容性等方面均令人非常满意的喜树碱载药体系。
发明内容
本发明的目的是针对喜树碱类药物的特点，提供可以用于注射，静脉滴注或者口服的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制备方法。
为实现上述目的，本发明充分利用了喜树碱类药物在碱性条件下开环形成水溶性很好的开环形式而在酸性条件下又能够可逆闭环这一殊性，以可生物降解高分子为主要载体材料，通过本发明公布的方法，制备具有较高载药量和高载药效率的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物。
本发明的技术方案如下：
一种负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，它是以可生物降解的高分子纳米微球为药物载体，负载至少一种喜树碱类的药物，所述的可生物降解的高分子可以是聚酯或聚酯与聚乙二醇形成的两亲嵌段共聚物。
上述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，所述的喜树碱类药物包括：喜树碱、10-羟基喜树碱(HCPT)、9-氨基喜树碱(9-AC)、9-硝基喜树碱(9-NC)、7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)等。
上述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，所述的可生物降解的高分子，选自下列聚合物中的一种或多种混和：聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(乙交一丙交酯)(PLGA)、聚己内酯(PCL)或聚(丙交酯一己内酯)，或者上述可生物降解聚酯与聚乙二醇(PEG)形成的两亲嵌段共聚物。优选的可生物降解的高分子是上述可生物降解的聚酯与聚乙二醇(PEG)形成的两亲嵌段共聚物。
上述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，药物载体为颗粒状，其直径为60nm-800nm，负载于其中的喜树碱类药物的量占负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物总质量的1％-30％。
一种制备上述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，它基本上由下列步骤组成：
步骤1.将喜树碱类药物溶解于适量碱性水溶液中，得到水溶液W1，
步骤2.将步骤1得到的W1分散于溶有适量稳定剂的有机溶液O1中，通过搅拌、超声或乳匀等手段得到乳液E1，所述的有机溶液O1可以是乙酸乙酯溶液或二氯甲烷溶液，所述的稳定剂为生物相容的两亲物质或可生物降解的两亲高分子。
步骤3.将步骤2得到的E1分散于含有盐酸或醋酸和适量上述的可生物降解高分子的有机溶液O2中，得到分散液E2，所述的有机溶液O2可以是丙酮或二氯甲烷溶液，
步骤4.将步骤3得到的分散液E2与水或含有适量稳定剂的水溶液W2混和，通过搅拌、超声或乳匀等手段分散均匀，所述的水溶液W2中的稳定剂可以是Poloxamer 188或聚乙烯醇(PVA)，
步骤5.将步骤4得到的分散液加热减压，除去有机溶剂，过滤、透析或离心除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到本发明的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的水分散液。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其中所述的溶有喜树碱类药物碱性水溶液W1中喜树碱类药物的浓度范围为5mg/mL-200mg/mL。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，所述的有机溶液O1与溶有喜树碱类药物碱性水溶液W1的体积比为2∶1-10∶1。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，所述的有机溶液O1中含有浓度为10mg/mL-200mg/mL的稳定剂，所述稳定剂为生物相容的两亲物质或可生物降解的两亲高分子，包括但不局限于：含有羧基的聚己内酯(如DTPA-PCL-DTPA和Citric-PCL)，聚己内酯(PCL)或聚(丙交酯-己内酯)等聚酯与聚乙二醇(PEG)形成的两亲嵌段共聚物(如PCL-PEG-PCL，PCLLA-PEG-PCLLA等)。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，所述的有机溶液O2与有机溶液O1的体积比为1∶1-100∶1，优选的是2∶1-10∶1。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，有机溶液O2中，可生物降解高分子的浓度为0.1mg/mL-500mg/mL，优选的是2mg/mL-200mg/mL，有机溶液O2中含有酸的浓度为0.0001mol/L-0.1mol/L，所说的酸包括盐酸、醋酸等。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，水溶液W2与有机溶液O2的体积比为1∶1-100∶1，优选2∶1-20∶1，水溶液W2为pH＜8、含有0-50％生物相容或可生物降解稳定剂的水溶液，所述稳定剂包括：poloxamer系列乳化剂或PVA。
上述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，制得的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物以水分散液的方式储藏或使用，或者进一步经过冷冻干燥成为能够再次分散的冻干粉储藏或使用。
本发明的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物载药量可以达到30％以上，负载效率高于85％，稳定性好。在合适的制备条件下，得到的载药纳米微球尺寸小于300nm，且无须添加其它稳定剂，适合于静脉注射。通过本发明公布的方法制备的负载喜树碱类药物的高分子纳米微球具有明显的缓释特点(参见图3)，制备的负载于高分子纳米微球的羟基喜树碱类药物具有比羟基喜树碱自由药更强的体外抗肿瘤活性(参见表1)，而且体内抗肿瘤效果也得到了增强(参见表2)。
本发明的制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法简单易行，制备成本较低，通过改变制备中所用的高分子材料及其浓度、溶剂及用量、药物浓度等参数，可以实现对负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物载药纳米微球的载药量、尺寸等性质的调节，具有良好的可控性。
附图说明
图1为羟基喜树碱载药纳米微球在水分散液中粒径随储存时间变化图。
图2为SN-38，空白微球和SN-38载药微球的红外图谱。
图3为羟基喜树碱载药纳米微球的体外释放曲线。
具体实施方式
下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但是这些实施例并不限制本发明的保护范围。
制备例1：聚(丙交酯-己内酯)-聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)两亲嵌段共聚物(PCLLA-PEG-PCLLA)的制备
在装有适量聚乙二醇(PEG)的聚合管中加入计算量的己内酯(CL，美国Aldrich公司)和丙交酯(LA，美国Aldrich公司)以及0.1％(w/w)的辛酸亚锡，其中PEG的数均分子量根据对产物的要求不同，分别为6000或10000不等，但是并不仅限于以上几种分子量。在真空下封管并将其放入130℃反应48小时。反应得到的粗产物用氯仿溶解后沉淀于大量冷甲醇中以除去未反应的单体和其他低分子量的物质，然后将沉淀物收集用水洗涤数次后减压干燥，得到PCLLA-PEG-PCLLA三嵌段聚合物。对应PEG分子量为6000和10000，得到的聚合物分别命名为PCLLA-PEG6K-PCLLA和PCLLA-PEG10K-PCLLA。以上得到的共聚物数均分子量均为50000(通过核磁共振图谱计算)。
制备例2：聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯两亲嵌段共聚物(PCL-PEG-PCL)的制备
在装有适量聚乙二醇(PEG)的聚合管中加入计算量的己内酯(CL，美国Aldrich公司)以及0.1％(w/w)的辛酸亚锡，其中PEG的数均分子量根据对产物的要求不同，分别为2000，6000，10000不等，但是并不仅限于以上几种分子量。在真空下封管并将其放入130℃反应48小时。反应得到的粗产物用氯仿溶解后沉淀于大量冷甲醇中以除去未反应的单体和其他低分子量的物质，然后将沉淀物收集用水洗涤数次后减压干燥，得到PCL-PEG-PCL三嵌段聚合物。对应PEG分子量为2000，6000和10000，得到的聚合物分别命名为PCL-PEG2K-PCL，PCL-PEG6K-PCL和PCL-PEG10K-PCL。以上得到的共聚物数均分子量均为50000(通过核磁共振图谱计算)。
制备例3：二乙撑三胺五乙酸-聚己内酯-二乙撑三胺五乙酸(DTPA-PCL-DTPA)的制备
按照文献(CH Paik et al.，Journal of Nuclear Medicine，Vol 24，Issue 12 1158-1163)制备二乙撑三胺五乙酸(DTPA)双酸酐。制得的DTPA双酸酐经纯化干燥后置于干燥器中保存。在玻璃封管中加入计算量的乙二醇(美国Aldrich公司)，在辛酸亚锡催化下，通过开环聚合制备分子量为2000的α，ω-双羟基聚己内酯。在装在100mL三颈瓶上的滴液漏斗中加入一定量α，ω-双羟基聚己内酯的无水DMF溶液(30％)，向三颈瓶内加入过量的DTPA双酸酐和催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，用适量无水二甲基甲酰胺(DMF)在70℃下搅拌溶解，通氮气30min以除去体系中的氧气。待溶解完全后，将温度升至90℃，缓慢滴加α，ω-双羟基聚己内酯的DMF溶液，反应48h，得到的产物先沉淀于乙醚中，干燥后用乙酸乙酯溶解，过滤除去未反应的酸酐后，滤液沉淀于大量冷乙醚中，然后将沉淀物收集用热水洗涤数次后减压干燥，得到DTPA-PCL-DTPA(平均分子量为2800)。
制备例4：端基为柠檬酸的聚己内酯(Citric-PCL)的制备
将适量研磨并干燥过的苹果酸(美国Aldrich公司)，加入三颈瓶中，加入少量DMF搅拌溶解，再加入少量三乙胺助溶和催化剂二月桂酸二丁基锡。将计算量的己内酯加入滴液漏斗中。体系通氮气除氧，油浴加热至80℃后，以每秒一滴的速度加入己内酯，加完后反应6-8小时。反应后将生成物沉淀到水中(水中加入适量HCl)，反复2-3次，得到白色粉末，真空干燥48h，得到Citric-PCL聚合物，产物的数均分子量为1500。
实施例1：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物的制备
先将30mg PCLLA-PEG10K-PCLLA溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCL的丙酮中得到PCLLA-PEG10K-PCLLA的丙酮溶液O2。另将7mg HCPT溶解于100μLNaOH水溶液中(NaOH浓度为0.3mol/L)，得到亮黄色水溶液W1。与溶有20mgDTPA-PCL-DTPA的500μL乙酸乙酯溶液O1混合，用探头式超声仪(microsonix XL-200)分散至均相后得到E1。将E1在搅拌下加入O2，体系逐渐成为散射淡蓝色光的分散液E2。将E2与20mL水W2(用HCl调至pH＝5)混和，得到散射淡蓝色光的载药纳米粒子分散液，减压除去有机溶剂，用600nm滤膜过滤除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到载药纳米粒子的水分散液。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为256nm。通过紫外分光光度计测得该药物载体的载药量为10.4％，载药效率高于85％。以下实施例中如无特别说明，则对载药微球的基本性质表征与此实施例中相同。稳定性实验结果表明微球在水分散液中非常稳定，参见图1。
实施例2：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物的制备
将30mg PCL-PEG10K-PCL溶解于10mL含有10μL 1.0mol/L HCL的丙酮中得到O2。其余过程同实施例1。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为162nm。该药物载体的载药量为9.8％，载药效率高于85％。
实施例3：负载于高分子纳米微球的HCPT药物的制备
先将30mg PCLLA-PEG10K-PCLLA溶解于2mL含有10μL 1.0mol/L HCL的丙酮中得到O2。其余过程同实施例1。用滤纸过滤除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到载药纳米粒子的水分散液。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为495nm。通过紫外分光光度计测得该药物载体的载药量为11.6％。
实施例4：负载于高分子纳米微球的HCPT药物的制备
先将30mg PCLLA-PEG10K-PCLLA溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCL的丙酮中得到O2。另将10mg HCPT溶解于100μL 0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到W1，其余过程同实施例1。得到的载药纳米微球载药量为15.0％，负载效率为90％，平均粒径为261nm。
实施例5：负载于高分子纳米微球的HCPT药物的制备
先将30mg聚己内酯(PCL，平均分子量50000，Sigma公司)溶解于15mL含有10μL 0.15mol/L HCL的丙酮中得到O2。另将0.5mg HCPT溶解于100μL 0.03mol/L的NaOH水溶液中，得到的亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg Citric-PCL的1mL二氯甲烷溶液O1混合，用探头式超声仪(microsonix XL-200)将上述混合液分散至均相后得到E1，在搅拌下将E1加入O2，体系逐渐成为散射淡蓝色光的分散液即E2。将E2与60mL 5％Poloxamer 188水溶液W2(用HCl调至pH＝5)混和，得到散射淡蓝色光的载药纳米粒子分散液，减压除去有机溶剂，用600nm滤膜过滤除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到载药纳米粒子的水分散液。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为63nm。通过紫外分光光度计测得该药物载体的载药量为1％，载药效率高于85％。
实施例6：负载于高分子纳米微球的SN-38药物的制备
先将30mg PCLLA-PEG10K-PCLLA溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCl的丙酮中得到O2。另将7mg SN-38溶解于100μL 0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到的亮黄色水溶液W1。将10mg DTPA-PCL-DTPA溶解于1mL乙酸乙酯溶液混合得到O1，将W1和O1混合并用探头式超声仪(microsonix XL-200)分散至均相后得到E1，在搅拌下将E1加入O2，体系逐渐成为散射淡蓝色光的分散液E2。将E2与60mL水W2(用HCl调至pH＝5)混和，得到散射淡蓝色光的载药纳米粒子分散液，减压除去有机溶剂，用600nm滤膜过滤除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到载药纳米粒子的水分散液。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为215nm。通过紫外分光光度计测得该药物载体的载药量为14.6％，载药效率92％。从图2显示的红外图谱可以看出，负载后没有新的吸收峰出现。
实施例7：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物的制备
先将30mg PCLLA-PEG6K-PCLLA溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCl的丙酮中得到O2。另将5mg CPT溶解于100μL0.3mol/L的NaOH水溶液中得到W1，其余操作同实施例1。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为228nm。通过紫外分光光度计测得该药物载体的载药量为8.1％，载药效率89％。
实施例8：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物的制备
先将30mg PCL(分子量50000，Sigma公司)溶解于1mL含有10μL 1.0mol/L HCl的乙酸乙酯中得到O2。另将5mg喜树碱溶解于100μL 0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到的黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg PCL-PEG6K-PCL的500μL二氯甲烷溶液O1混合，用探头式超声仪(microsonix XL-200)分散至均相后得到E1，在搅拌下将E1加入O2，体系逐渐成为散射淡蓝色光的分散液E2。将E2与20mL 5％PVA水溶液W2(用HCl调至pH＝5)混和，并且通过乳匀分散均匀，减压除去有机溶剂，用600nm滤膜过滤除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到载药纳米粒子的水分散液。通过动态光散射技术测得微球平均粒径为515nm。通过紫外分光光度计测得该药物载体的载药量为8.0％，载药效率88.7％。
实施例9：负载于高分子纳米微球的羟基喜树碱药物的制备
先将30mg PCLLA-PEG10K-PCLLA溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCL的丙酮中得到PCLLA-PEG10K-PCLLA的丙酮溶液O2。另将7mg HCPT溶解于100μL 0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg DTPA-PCL-DTPA的200μL三氯甲烷溶液O1混合，分散至均相后得到E1。其余操作同实施例1。该药物载体的载药量为11.6％，载药效率高于90％。平均粒径为266nm。
实施例10：负载于高分子纳米微球的羟基喜树碱药物的制备
先将30mg PLGA(50∶50，数均分子量40000，Sigma公司，下同)溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L醋酸的丙酮中得到PLGA的丙酮溶液O2。另将7mg HCPT溶解于100μL0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mgDTPA-PCL-DTPA的500μL乙酸乙酯溶液O1混合，分散至均相后得到E1。除了W2是2％的PVA水溶液20mL外，其余制备条件同实施例1。该药物载体的载药量为9.7％，载药效率高于85％。平均粒径为324nm。
实施例11：负载于高分子纳米微球的SN-38药物的制备
先将30mg PLGA溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCl的丙酮中得到PLGA的丙酮溶液O2。另将15mg SN-38溶解于100μL0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg PCL-PEG10K-PCL的200μL二氯甲烷溶液O1混合，分散至均相后得到E1。采用的W2为1％的polaxomer 188水溶液400mL，其余操作同实施例1。该药物载体的载药量为20.6％，载药效率高于85％。平均粒径为379nm。
实施例12：负载于高分子纳米微球的SN-38药物的制备
先将30mg PCL(分子量50000，Sigma公司，下同)溶解于5mL含有10μL 1.0mol/LHCl的丙酮中得到PLGA的丙酮溶液O2。另将15mg SN-38溶解于100μL 0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg PCL-PEG10K-PCL的200μL二氯甲烷溶液O1混合，分散至均相后得到E1。采用的W2为1％的PVA水溶液10mL，其余操作同实施例1。该药物载体的载药量为21.2％，载药效率高于87％。平均粒径为405nm。
实施例13：负载于高分子纳米微球的SN-38药物的制备
先将30mg PLA(分子量20000，Sigma公司)溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCl的丙酮中得到PLGA的丙酮溶液O2。另将7mg SN-38溶解于100μL 0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg PCL-PEG10K-PCL的100μL二氯甲烷溶液O1混合，分散至均相后得到E1。采用的W2为1％的polaxomer 188水溶液500mL，其余操作同实施例1。该药物载体的载药量为11.0％，载药效率高于85％。平均粒径为395nm。
实施例14：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物的制备
先将30mg PCL溶解于5mL含有10μL 1.0mol/L HCl的丙酮中得到PLGA的丙酮溶液O2。另将15mg CPT溶解于100μL0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg DTPA-PCL-DTPA的200μL二氯甲烷溶液O1混合，分散至均相后得到E1。采用的W2为1％的PVA水溶液400mL，其余操作同实施例1。该药物载体的载药量为21.0％，载药效率高于85％，平均粒径为377nm。
实施例15：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物的制备
先将50mg PLGA溶解于1mL含有10μL 1.0mol/L HCl的丙酮中得到PLGA的丙酮溶液O2。另将30mg CPT溶解于200μL0.3mol/L的NaOH水溶液中，得到亮黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg DTPA-PCL-DTPA的2mL二氯甲烷溶液O1混合，分散至均相后得到E1。采用的W2为0.01％的PVA水溶液400mL，将E1在高速搅拌下与W2混和均匀，所用滤膜孔径为3μm，其余操作同实施例1。该药物载体的载药量为29.7％，载药效率高于85％。平均粒径为839nm。
实施例16：负载于高分子纳米微球的喜树碱药物制备
先将30mg PLGA溶解于1mL含有1.0×10-5mol/L醋酸的二氯甲烷中得到O2。另将20mg喜树碱溶解于100μL 0.5mol/L的NaOH水溶液中，得到的黄色水溶液W1。将W1与溶有20mg PCL-PEG2K-PCL的500μL二氯甲烷溶液O1混合，用探头式超声仪(microsonix XL-200)分散至均相后得到E1，在搅拌下将E1加入O2，体系逐渐成为散射淡蓝色光的分散液E2。将E2与20mL 5％PVA水溶液W2(用HCl调至pH＝5)混和，并且通过乳匀分散均匀，减压除去有机溶剂，用600nm滤膜过滤除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物后，得到载药纳米粒子的水分散液。通过动态光散射技术测得微球的平均粒径为575nm。载药量为9.0％，载药效率高于90％。
实施例17：负载于高分子纳米微球的9-氨基喜树碱药物的制备
除所用药物为9-AC外，其余步骤同实施例1。得到的微球的平均粒径为275nm，载药量为8.7％，载药效率高于85％。
实施例18：负载于高分子纳米微球的9-AC药物的制备
除所用药物为9-AC外，其余步骤同实施例3。得到的微球的平均粒径为512nm，载药量为10.9％，载药效率高于85％。
实施例19：负载于高分子纳米微球的9-硝基喜树碱(9-NC)药物的制备
除所用药物为9-NC外，其余步骤同实施例1。得到的纳米粒子直径为233nm，载药量为10.2％，载药效率高于90％。
实施例20：负载于高分子纳米微球的9-NC药物的制备
除所用药物为9-NC外，其余步骤同实施例3。得到的微球的平均粒径为488nm，载药量为11.0％，载药效率高于90％。
实施例21：负载于高分子纳米微球的羟基喜树碱药物的冻干粉剂制备
按照实施例1中所述操作制备纳米微球的水分散液，在该分散液中加入200mg葡萄糖，在Freezone 6冻干机上冷冻干燥48小时，得到浅黄色的疏松冻干粉。用蒸馏水再分散后，得到的纳米微球尺寸为276nm，适合于静脉注射。
实施例22：负载于高分子纳米微球的羟基喜树碱药物的体外释放
将实施例1中制备的纳米微球分散液稀释至相当于HCPT浓度100μg/mL，取稀释液2mL放置于透析袋中于400mL水中透析，在预定时间取4mL释放介质，通过HPLC测定其中的羟基喜树碱浓度，得到HCPT载药纳米微球的体外释放曲线。从图3可以看到负载于其中的药物表现出持续稳定的释放特性。
实施例23：负载于高分子纳米微球的羟基喜树碱药物的抗肿瘤效果测试
1.细胞株为人胃癌细胞BGC-823。通过MTT法测定了实施例1中制备的纳米微球对BGC-823细胞的体外杀伤效果(如表1所示)。从表1可以看到制备的HCPT载药纳米微球对BGC-823细胞具有较强的体外杀伤力。
2.选用18-22克雌性ICR小鼠及生长良好的7-11天的Sarcoma 180瘤种，将瘤种接种于小鼠右侧腋部皮下，约4.5-5×106细胞/只，接种24小时后随机分笼，每组5只。分别按照2mg/kg，4mg/kg和8mg/kg的HCPT剂量给小鼠尾静脉注射负载HCPT的纳米粒子，另外药物对照组按照8mg/kg给药，空白载体对照组按照纳米粒子质量浓度80mg/kg的剂量静注，阴性对照组注射生理盐水。给药时间为接种后的第二天和第五天。第8天处死动物，称体重、瘤重，计算各组平均瘤重以及肿瘤抑制率并进行T检验，结果如表2所示。
可以看出，采用本专利公布的方法，可以将溶解性很差的喜树碱类药物已其有效的闭环形式负载于生物相容的高分子纳米微球中，由此得到的药物能够利用药物载体的被动靶向特性以及缓释特性，在较低的药物用量下便可以获得比自由药物更好的抗肿瘤效果。本发明所述的负载于高分子纳米微球的其它喜树碱类药物，如SN-38或CPT等也具有类似的良好的抗肿瘤效果。
表1.HCPT载药纳米微球对人胃癌BGC-823体外细胞毒性实验结果。
| 浓度a(μg/mL) | 抑制率％ | ||
| 空白载体 | HCPT | 载药纳米微球 | |
| 124 | -8.3N/T24.4 | 10.118.931.8 | 27.748.174.0 |
a：空白载体的浓度与负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物组的浓度相对应，考虑到载药量为10％，故载体组的浓度分别为10，20，40μg/mL。
表2.负载于高分子纳米微球的HCPT药物对接种了Sarcoma-180的小鼠的抑瘤效果
| 制剂 | 肿瘤质量x±SD(g) | 抑制率(％) | P |
| 阴性对照组空白纳米微球HCPT冻干粉剂8mg/kg负载于纳米微球药物4mg/kg(HCPT eq)负载于纳米微球药物2mg/kg(HCPT eq) | 1.1±0.211.01±0.370.36±0.070.22±0.130.70±0.13 | N.A.8.267.380.036.4 | N.A.N.A.＜0.01＜0.01＜0.01 |
Claims (10)
1.一种负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，其特征是：它是以可生物降解的高分子纳米微球为药物载体，负载至少一种喜树碱类的药物，所述的可生物降解的高分子可以是聚酯或聚酯与聚乙二醇形成的两亲嵌段共聚物。
2.根据权利要求1所述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，其特征是：所述的喜树碱类药物是喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、拓扑替康或伊立替康。
3.根据权利要求1所述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，其特征是：所述的可生物降解的高分子，选自下列聚合物中的一种或多种混和：聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(乙交-丙交酯)(PLGA)、聚己内酯(PCL)或聚(丙交酯-己内酯)，或者上述可生物降解聚酯与聚乙二醇(PEG)形成的两亲嵌段共聚物。
4.根据权利要求1所述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物，其特征是：药物载体为颗粒状，其直径为60nm-800nm，负载于其中的喜树碱类药物占负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物总质量的1％-30％。
5.一种制备权利要求1所述的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其特征是它基本上由下列步骤组成：
步骤1.将喜树碱类药物溶解于碱性水溶液中，得到水溶液W1，
步骤2.将步骤1得到的水溶液W1分散于溶有稳定剂的有机溶液O1中，通过搅拌、超声或乳匀手段得到乳液E1，所述的有机溶液O1是乙酸乙酯溶液或二氯甲烷溶液，所述的稳定剂是生物相容的两亲物质或可生物降解的两亲高分子，
步骤3.将步骤2得到的乳液E1分散于含有盐酸或醋酸和上述的可生物降解高分子的有机溶液O2中，得到分散液E2，所述的有机溶液O2是丙酮或二氯甲烷溶液，
步骤4.将步骤3得到的分散液E2与水或含有稳定剂的水溶液W2混和，通过搅拌、超声或乳匀等手段分散均匀，所述的水溶液W2中的稳定剂是Poloxamer 188或聚乙烯醇，
步骤5.将步骤4得到的分散液加热减压，除去有机溶剂，然后过滤、透析或离心除去未包裹的药物沉淀和高分子聚集物，得到负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的水分散液。
6.根据权利要求5所述的制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其特征是：步骤1所述的溶有喜树碱类药物碱性水溶液W1中喜树碱类药物的浓度范围为5mg/mL-200mg/mL。
7.根据权利要求5所述的制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其特征是：所述的有机溶液O1与溶有喜树碱类药物碱性水溶液W1的体积比为2∶1-10∶1，所述的有机溶液O1中含有浓度为10mg/mL-200mg/mL的稳定剂。
8.根据权利要求5所述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其特征是：所述的有机溶液O2与有机溶液O1的体积比为1∶1-100∶1，有机溶液O2中，可生物降解高分子的浓度为0.1mg/mL-500mg/mL，有机溶液O2中含有酸的浓度为0.0001mol/L-0.1mol/L。
9.根据权利要求5所述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其特征是：所述的水溶液W2与有机溶液O2的体积比为1∶1-100∶1，水溶液W2为pH＜8、含有0-50％生物相容或可生物降解稳定剂的水溶液，所述稳定剂包括：poloxamer系列乳化剂或聚乙烯醇。
10.根据权利要求5所述制备负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物的方法，其特征是：制得的负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物以水分散液的方式储藏或使用，或者进一步经过冷冻干燥成为能够再次分散的冻干粉储藏或使用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2006100387984A CN1861192A (zh) | 2006-03-13 | 2006-03-13 | 负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2006100387984A CN1861192A (zh) | 2006-03-13 | 2006-03-13 | 负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1861192A true CN1861192A (zh) | 2006-11-15 |
Family
ID=37388778
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2006100387984A Pending CN1861192A (zh) | 2006-03-13 | 2006-03-13 | 负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1861192A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104352449A (zh) * | 2014-12-08 | 2015-02-18 | 河北科技大学 | 一种无突释效应的伊立替康微球及其制备方法 |
| CN106177987A (zh) * | 2016-08-17 | 2016-12-07 | 上海交通大学 | 小分子‑高分子轭合物自组装载药纳米颗粒及其制备方法 |
| CN110302171A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-10-08 | 山东大学 | 一种瘤内注射用sn-38-plga缓释微球及其制备方法和应用 |
| CN112107690A (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-22 | 浙江工业大学 | 一种喜树碱类药物纳米粒的制备方法 |
-
2006
- 2006-03-13 CN CNA2006100387984A patent/CN1861192A/zh active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104352449A (zh) * | 2014-12-08 | 2015-02-18 | 河北科技大学 | 一种无突释效应的伊立替康微球及其制备方法 |
| CN106177987A (zh) * | 2016-08-17 | 2016-12-07 | 上海交通大学 | 小分子‑高分子轭合物自组装载药纳米颗粒及其制备方法 |
| CN106177987B (zh) * | 2016-08-17 | 2020-06-12 | 上海交通大学 | 小分子-高分子轭合物自组装载药纳米颗粒及其制备方法 |
| CN110302171A (zh) * | 2019-07-12 | 2019-10-08 | 山东大学 | 一种瘤内注射用sn-38-plga缓释微球及其制备方法和应用 |
| CN112107690A (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-22 | 浙江工业大学 | 一种喜树碱类药物纳米粒的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lee et al. | The use of cholesterol-containing biodegradable block copolymers to exploit hydrophobic interactions for the delivery of anticancer drugs | |
| Yu et al. | Enzyme sensitive, surface engineered nanoparticles for enhanced delivery of camptothecin | |
| CN104530256B (zh) | 透明质酸维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备和用途 | |
| CN1961962B (zh) | 两亲性三嵌段共聚物-紫杉醇键合药及其合成方法 | |
| CN106317416A (zh) | 一种双pH响应的两亲性共聚物及其制备方法和用途 | |
| CN103006539A (zh) | 一种聚合物胶束药物组合物及其制备方法 | |
| Shuai et al. | Self-assembling poly (ethylene glycol)-block-polylactide-cabazitaxel conjugate nanoparticles for anticancer therapy with high efficacy and low in vivo toxicity | |
| CN103656653A (zh) | 基于透明质酸载药纳米粒的聚电解质复合物及其制备方法和应用 | |
| US11931456B2 (en) | Pharmaceutical compositions containing mixed polymeric micelles | |
| CN101007174A (zh) | 一种生物降解高分子－多西紫杉醇键合药及其制备方法 | |
| CN1698899A (zh) | 以壳聚糖或其衍生物作为药物载体的新型药物组合物 | |
| CN102198085B (zh) | 三嵌段聚合物负载紫杉烷类药物的胶束和冻干制剂、制法及应用 | |
| CN1861192A (zh) | 负载于高分子纳米微球的喜树碱类药物及其制法 | |
| CN105949467B (zh) | 一种pH敏感两亲性接枝共聚物POEAd-g-MPEG、制备方法及其应用 | |
| CN102225204B (zh) | 抗肿瘤的pH敏感缓释植入剂及制备方法 | |
| CN103861112A (zh) | 基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物及其制备方法 | |
| CN111743861B (zh) | 靶向三阴性乳腺癌的低氧响应手性药物胶束及其制备方法 | |
| WO2008035229A2 (en) | Compositions and methods for ph targeted drug delivery | |
| CN109265658B (zh) | 一种基于阿魏酸聚合物的载药纳米粒及其制备方法和应用 | |
| CN101632834A (zh) | 疏水药物肿瘤靶向传递的磁性纳米载体及其制备方法 | |
| CN110214145B (zh) | CP-iRGD多肽、iDPP纳米粒、载药复合物及其制备方法和应用 | |
| CN1919181A (zh) | 两亲性荧光靶向纳米胶束及其制备方法 | |
| CN1626082A (zh) | 载有喜树碱的聚乙二醇－聚(丙交酯－己内酯)纳米粒子及其制备方法 | |
| CN105688225A (zh) | 一种生物降解高分子-多西紫杉醇键合药及其制备方法 | |
| CN110917149A (zh) | 一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物胶束冻干制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |