CN103861112A - 基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物及其制备方法。本发明药物组合物将疏水性药物、光热治疗药物与核酸药物整合到聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物胶束载药系统中，实现了疾病的多方面多靶点治疗；与不用该聚合物纳米粒子载体的药物组合物相比，治疗效果明显提高。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物及其制备方法。
背景技术
纳米载药体系是指药物与纳米载体形成的、粒径介于1-1000nm之间的药物输送系统，包括纳米球、纳米囊、纳米粒子和纳米脂质体等。与其它药物载体相比，纳米载药体系具有以下显著优势：（1）超微小体积，可通过人体最小的毛细血管，不易被吞噬细胞迅速清除，延长了在循环系统中的存留时间；（2）到达网状内皮系统分布集中的肝、脾、肺、骨髓、淋巴等靶部位；（3）能穿透组织间隙并被细胞吸收，有利于透皮吸收和细胞内药效发挥；（4）药物可包埋或键合在纳米粒子内部，也可吸附或偶合在其表面；（5）利用纳米材料本身的生物可降解性、pH或温度敏感性等，达到药物控制释放的效果；（6）提高药物的生物利用度和降低毒副作用等。
纳米粒子是纳米载药体系中常用的一种选择，通常用作为药物载体的聚合物纳米粒子负载药物，从而得到纳米粒子药物组合物。但是，目前公开的纳米粒子药物组合物的制备方法所得到的纳米粒子药物组合物多为只能负载一种药物化合物的纳米粒子药物组合物。此种纳米粒子药物组合物治疗方式单一，无法解决药物耐受问题并且治疗效果欠佳。
发明内容
本发明的目的在于提出一种负载多种活性药物的基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物及其制备方法；该药物组合物将疏水性药物、光热治疗药物与核酸药物整合到一个纳米粒子体系中，实现了疾病的多方面多靶点治疗；尤其是当用于治疗肿瘤时，可进行肿瘤化疗、光热治疗与基因治疗的联合治疗。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物，包括聚合物纳米粒子载体和负载在该载体上的活性成分，其特征在于，所述聚合物纳米粒子载体为如以下式I所示的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的纳米粒子：
式I中，m为6-120的整数，n为6-120的整数，p为6-120的整数，q为6-120的整数，x为12-240的整数，y为12-240的整数；
所述活性成分包括疏水性药物、亲水性近红外染料和核酸药物。
上述药物组合物中，作为优选，基于所述聚合物纳米粒子载体的药物组合物的粒径为50～300nm、优选100～200nm;
在具体实施方案中，基于所述聚合物纳米粒子载体的药物组合物的平均粒径为50nm、100nm、150nm、200nm、250nm或300nm。
优选地，所述聚合物纳米粒子载体的重均分子量为4000-100000Da、优选6000-80000Da、更优选10000-50000Da;
在具体实施方案中，所述聚合物纳米粒子载体的重均分子量为4000、6000、8000、10000、12000、14000、16000、18000、20000、30000、40000、50000、60000、70000、80000、90000、100000Da。
优选地，所述疏水性药物为疏水性抗肿瘤药物；进一步优选地，所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、喜树碱、三尖杉酯碱和长春瑞宾中的任意一种或几种；
优选地，所述疏水性药物与所述聚合物纳米粒子载体的质量比为1：（1～1000）；优选为1：（10～100）；更优选为1：50；
优选地，所述亲水性近红外染料为心脏绿、IR-780碘化物和IR-808碘化物中的任意一种或几种；
优选地，所述亲水性近红外染料与所述聚合物纳米粒子载体的质量比为1：（1～1000）；优选为1：（10～100）；更优选为1：50；
所述核酸药物包括各种以核酸为有效成分的药物，例如DNA药物和RNA药物，优选为siRNA药物；进一步优选地，所述核酸药物为针对survivin基因的siRNA，更进一步优选地，所述针对survivin基因的siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.1所示，反义链序列如SEQ ID NO.2所示；
优选地，所述核酸药物与与所述聚合物纳米粒子载体的质量比为1：（1～1000）；优选为1：（50～500）；更优选为1：200。
第二方面，本发明提供了如第一方面所述的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）在过氧化苯甲酰的存在下，在第一有机溶剂中，使2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯和2-巯基乙醇接触，得到由以下式II所示的2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物：
式II中，m为6-120的整数，n为6-120的整数，p为6-120的整数，q为6-120的整数；
（2）在异辛酸亚锡的存在下，在第二有机溶剂中，使式II所示2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物与乳酸、乙交酯接触，得到式I所示的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物；
（3）在超声波辐射条件下，使第一溶液与亲水性近红外染料的水溶液混合并乳化，得到第一乳液；
所述第一溶液含有式I所示聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物和第三有机溶剂；
（4）将所述第一乳液与第一表面活性剂水溶液混合，并将所得混合后的物料与第二溶液混合并乳化，得到第二乳液；
所述第二溶液含有所述疏水性药物和第四有机溶剂；
（5）将所述第二乳液与第二表面活性剂水溶液混合，并除去所述第三有机溶剂和所述第四有机溶剂，而后离心并分离得到沉淀物；
（6）将所述沉淀物用水溶液溶解后与核酸药物混合，分离得到所述药物组合物。
上述步骤（1）中，作为优选，所述第一有机溶剂为二氯甲烷、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、甲基丁酮、二氯苯和甲基异丙酮中的任意一种或几种，优选四氢呋喃；
优选地，所述接触在惰性气氛下进行；进一步优选地，所述惰性气氛为氮气气氛或零族气氛，优选为氮气气氛；
优选地，所述2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯与所述寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯的摩尔比为（1～50）:1、优选为（5～25）:1、更优选为15:1；
优选地，所述2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯与所述甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的摩尔比为（1～15）:1、优选为（3～10）：1、更优选为5:1；
优选地，所述2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯与所述2-巯基乙醇的摩尔比为（20～200）:1、优选为（50～150）：1、更优选为100:1；
优选地，相对于1g2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯，所述过氧化苯甲酰的用量为（0.1～10）mg、优选为（0.5～5）mg、更优选为2mg，所述第一有机溶剂的用量为（1～20）ml、优选为（3～15）ml、优选为9ml；
优选地，所述接触的温度为65～85℃、优选为70～80℃、更优选为75℃；
优选地，所述接触的时间为5～15小时、优选为8小时。
上述步骤（2）中，作为优选，所述第二有机溶剂为甲苯或二甲苯，优选为甲苯；
优选地，所述接触在惰性气氛下进行；进一步优选地，所述惰性气氛为氮气气氛或零族气氛，优选为氮气气氛；
优选地，式II所示2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物与乳酸的摩尔比为（1～20）:1、优选为（5～15）:1、更优选为10:1；
优选地，所述乳酸和所述乙交酯的摩尔比为（1～10）:1、优选为（2～8）:1、更优选为5:1；
优选地，相对于1g式II所示2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物，所述异辛酸亚锡的用量为（0.01～2）ml、优选为（0.05～1）ml、更优选为（0.1-0.5）ml，所述第二有机溶剂的用量为（3～20）ml、优选为（5～15）ml、更优选为10ml；
优选地，所述接触的温度为100℃～200℃、优选为150℃；
优选地，所述接触的时间为15～30小时，优选为24小时。
作为优选的情况，上述步骤（1）和步骤（2）还分别包括在所得产物中加入乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物真空干燥的步骤；进一步优选地，在20-30℃下真空干燥24-48小时。
步骤（1）到步骤（2）的反应路线如以下反应式（A）所示：
反应式（A）中，m为6-120的整数，n为6-120的整数，p为6-120的整数，q为6-120的整数，x为12-240的整数，y为12-240的整数。
步骤（2）合成所得的式I所示聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物纳米粒子可以冻干保存。
上述步骤（3）中，作为优选，所述亲水性近红外染料为心脏绿、IR-780碘化物和IR-808碘化物中的任意一种或几种；
所述第三有机溶剂为能够溶解式I所示聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物，但不溶于水的有机溶剂；作为优选，所述第三有机溶剂为二氯甲烷、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、甲基丁酮、二氯苯和甲基异丙酮中的任意一种或几种；
优选地，所述第一溶液中，式I所示聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的含量为（5～100）mg/ml、优选为（20～40）mg/ml、更优选为30mg/ml；
优选地，所述亲水性近红外染料的水溶液中，所述亲水性近红外染料的含量为（0.1～100）mg/ml、优选为（0.1～10）mg/ml、更优选为1mg/ml；
优选地，所述第一溶液与所述亲水性近红外染料水溶液的体积比为1：（1～10）、优选为1：（2～8）、更优选为1:4；
优选地，所述混合的方式为：将所述亲水性近红外染料的水溶液加入到第一溶液中混合。
优选地，采用超声波进行乳化；
进一步优选地，所述超声波辐射的频率为20-25kHz、优选为22-23kHz，相对于每毫升接受超声波辐射的混合物料，超声波功率为10-190W、优选为（28.5～57）W、更优选为40W；
进一步优选地，所述乳化的温度为（1～99）℃、优选为（20～30）℃、更优选为25℃；
进一步优选地，所述乳化的时间为（1～30）分钟、优选为（3～10）分钟、更优选为5分钟。
上述步骤（4）中，对于所述疏水性药物的选择没有特殊的要求，可以根据所期望的药效和药物在水中的溶解度进行选择，例如，可以选择在水中的溶解度小于1g药物/100g水的药物作为疏水性药物；作为优选，所述疏水性药物为紫杉醇、喜树碱、三尖杉酯碱和长春瑞宾中的任意一种或几种；
所述第四有机溶剂为能够溶解所述疏水性药物，但不溶于水的有机溶剂；在优选的实施方案中，所述第四有机溶剂为二氯甲烷。
优选地，所述第一表面活性剂为聚乙烯醇、土温80、司盘和十二烷基磺酸钠中的任意一种或几种，优选为聚乙烯醇；所述第一表面活性剂的作用是提高第二乳液的稳定性，从而可以提高纳米粒子药物组合物的稳定性。
在本发明的一个具体实施方案中，选用聚乙烯醇作为第一表面活性剂；对于聚乙烯醇的选择没有特别的要求，可以为纳米粒子药物组合物制备领域常规的选择，例如，所述聚乙烯醇可以为医药级聚乙烯醇，其皂化度可以为70-95mol%，所述聚乙烯醇在25℃下的粘度可以为500-900mPa·s。符合上述要求的聚乙烯醇可以通过商购获得，例如可以购买自国药集团化学试剂有限公司的牌号为PVA-124的产品。
优选地，所述第一表面活性剂水溶液中，所述第一表面活性剂的含量为（0.6～6）wt%、优选为（2～4）wt%、更优选为3wt%；
优选地，所述第二溶液中，所述疏水性药物的含量为0.1mg/ml至饱和、优选为（0.1～10）mg/ml；
优选地，所述第一表面活性剂水溶液与第一乳液的体积比为（0.5～2）：1、优选为（0.8～1）：1；
优选地，所述第二溶液与第一乳液的体积比为（0.1～1）：1、优选为（0.4～0.6）：1；
优选地，所述第一乳液与第一表面活性剂水溶液混合的方式包括：在100-1200转/min的搅拌条件下，将所述第一乳液加入到所述第一表面活性剂水溶液中混合，且所述第一乳液加入的速度为0.1-3ml/min；所得混合后的物料与第二溶液混合的方式包括：在1000-1200转/min的搅拌条件下，将所述第二溶液加入到如上混合所得混合后的物料中，且所述第二溶液加入的速度为0.1-1ml/min。
优选地，采用超声波进行乳化；进一步优选地，所述超声波辐射的频率为20-25kHz、优选为22-23kHz，相对于每毫升接受超声波辐射的混合物料，超声波功率为10-190W、优选为（28.5～57）W、更优选为40W；
优选地，所述乳化的温度为（1～99）℃、优选为（20～30）℃、更优选为25℃；
优选地，所述乳化的时间为（1～30）分钟、优选为（3～10）分钟、更优选为5分钟。
上述步骤（5）中，作为优选，所述第二表面活性剂为聚乙烯醇、土温80、司盘和十二烷基磺酸钠中的任意一种或几种；所述第二表面活性剂的作用是提高所述沉淀物的稳定性，从而可以提高纳米粒子药物组合物的稳定性。
在本发明的一个具体实施方案中，选用聚乙烯醇作为第一表面活性剂；对于聚乙烯醇的选择没有特别的要求，可以为纳米粒子药物组合物制备领域常规的选择，例如，所述聚乙烯醇可以为医药级聚乙烯醇，其皂化度可以为70-95mol%，所述聚乙烯醇在25℃下的粘度可以为500-900mPa·s。符合上述要求的聚乙烯醇可以通过商购获得，例如可以购买自国药集团化学试剂有限公司的牌号为PVA-124的产品。
优选地，所述第二表面活性剂水溶液中，所述第二表面活性剂的含量为（0.3～3）wt%、优选为（0.6～1）wt%、更优选为1wt%；
优选地，所述第二表面活性剂水溶液与所述第二乳液的体积比为（2～20）：1、优选为（10～15）：1；
优选地，所述第二乳液与所述第二表面活性剂水溶液混合的方式包括：在100-1200转/min的搅拌条件下，将所述第二乳液加入到所述第二表面活性剂水溶液中，且所述第二乳液加入的速度为0.1-3ml/min；加入所述第二乳液后，可在100-1200转/min的搅拌条件下维持5-100min。
步骤（5）中，对于除去所述第三有机溶剂和所述第四有机溶剂的方法没有特别的限定，优选地，通过旋转蒸发的方式除去所述第三和第四有机溶剂；而后离心并分离得到沉淀物的过程中，离心速度可以为5000-15000g。
上述步骤（6）中，作为优选，所述沉淀物与水的重量比为1：（1～1000）、优选为1：（10～1000）、更优选为1:200；
所述核酸药物包括各种以核酸为有效成分的药物，例如DNA药物和RNA药物，优选为siRNA药物；进一步优选地，所述核酸药物为针对survivin基因的siRNA，更进一步优选地，所述针对survivin基因的siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.1所示，反义链序列如SEQ ID NO.2所示；
优选地，所述核酸药物与所述沉淀物的重量比为（0.001～1）：1、优选为（0.001～0.2）:1、更优选为0.005：1；
步骤（6）中，将所述沉淀物用水溶液溶解的过程没有特别的要求；但是为了获得较好的纳米粒子组合物的使用效果，优选的情况下，所述沉淀物用水溶液溶解后与核酸药物混合的方式包括：在100-1200转/min的搅拌条件下，将所述沉淀物和所述核酸药物加入到水中，然后，可在100-1200转/min的搅拌条件下维持5-100min。
步骤（6）中，对于分离纳米粒子药物组合物的方法没有限制，例如，可以通过离心然后收集沉淀的方法，所得沉淀即为所述纳米粒子药物组合物，离心的速度可以为5000-15000g。
本发明所述药物组合物的纳米粒子载体——聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物同时具有亲水和疏水两部分，亲水部分为2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯部分，疏水部分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物部分。这种两亲性衍生物在水溶液中可以自组装成纳米胶束，亲水片段形成外壳，疏水片段形成内核，构成独特的核-壳结构。这种纳米胶束作为药物载体，能够有效地延长药效，降低毒性，提高生物利用度和生物活性。由于聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)为阳离子共聚物且具有温度敏感的特性，因此聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物胶束载药系统可以实现药物控制释放和载带基因的功能。
本发明将亲水性近红外染料和疏水性药物包载在聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物胶束载药系统中，核酸药物吸附在该胶束载药系统的外表层。疏水性药物实现纳米化学药物治疗；亲水性近红外染料实现光热治疗，并且结合聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的温度敏感性质，实现光热治疗联动药物控制释放；核酸药物实现基因治疗。
本发明的基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物将将疏水性药物、光热治疗药物与核酸药物整合到一个纳米粒子体系中，可同时进行疾病的多方面多靶点治疗；与不用该聚合物纳米粒子载体的药物组合物相比，治疗效果明显提高。
附图说明
图1为实施例1中纳米粒子药物组合物的透射电镜图。
图2为实施例1中纳米粒子药物组合物的光散射示意图。
图3为实施例1中的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的核磁共振氢谱。
图4为实施例1中的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物纳米粒子在水溶液中的透光率随着温度变化图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步说明本发明的技术方案。
本文及以下实施例中所提到的聚合物纳米粒子的重均分子量是通过美国沃特斯515+2410的凝胶渗透色谱（GPC）测得的，溶剂为四氢呋喃。
对以下实施例中的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物进行核磁共振氢谱（瑞士，布鲁克公司，型号为AV400）检测，聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的核磁共振氢谱的检测条件包括：包括氯仿为内标，溶剂为氘代氯仿。
对以下实施例中所得到的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物纳米粒子进行动态光散射（Zetasizer NanoZS）、透射电镜（美国FEI,Tecnai G220S-TWIN，200kV）以及透光率（美国Perkin Elmer,Lambda950UV-spectrophotometer）测定观察。
实施例1本发明纳米粒子药物组合物的制备
按照以下步骤制备本发明的纳米粒子药物组合物：
（1）将3.049g的2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、0.855g的寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯、0.278g的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、17.25mg的2-巯基乙醇和8.9mg的过氧化苯甲酰溶解到30ml的四氢呋喃溶液中，在75℃，氮气保护下反应8小时；
在所得产物中加入300ml乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物在25℃下真空干燥36小时，得到2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物。
（2）将1.188g步骤（1）所得2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物溶解到7ml的甲苯溶液中，再将1.324g的乳酸、0.278g的乙交酯和0.3ml的异辛酸亚锡加入到上述甲苯溶液中，在150℃、氮气保护下反应24小时；
在所得产物中加入300ml乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物在25℃下真空干燥36小时得到聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物。
（3）将30mg步骤（2）所得聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物溶于1ml第三有机溶剂（二氯甲烷）中，得到第一溶液。将1mg的亲水性近红外染料（心脏绿）溶于1ml水中，得到亲水性近红外染料的水溶液。将250μl的亲水性近红外染料的水溶液加入1ml的第一溶液中，得到混合后的物料。在25℃下，将1ml的上述得到的混合后的物料用功率为40W且频率为23kHz的超声波辐射5分钟后，得到第一乳液。
（4）将第一表面活性剂（聚乙烯醇，皂化度为85mol%；在25℃下的粘度为700mPa·s）配制为浓度3wt%的水溶液，得到第一表面活性剂水溶液。在1000转/min的搅拌条件下，将1ml步骤（1）得到的第一乳液以1ml/min的速度加入到0.9ml第一表面活性剂水溶液中，得到混合后的物料。将0.125mg疏水性药物（紫杉醇）溶于1ml第四有机溶剂（二氯甲烷）中，得到第二溶液。在1100转/min的搅拌条件下，将0.25ml的上述得到的第二溶液以0.5ml/min的速度加入上述得到的混合后的物料中，得到用于超声的物料。在25℃下，将1ml上述得到的用于超声的物料用功率为40W且频率为23kHz的超声波辐射5分钟后，得到第二乳液。
（5）将第二表面活性剂（聚乙烯醇，皂化度为85mol%；在25℃下的粘度为700mPa·s）配制为浓度0.8wt%的水溶液，得到第二表面活性剂水溶液。在800转/min的搅拌条件下，将1ml步骤（2）得到的第二乳液以2ml/min的速度加入到12ml的上述第二表面活性剂水溶液中，然后在600-800转/min的搅拌条件下维持10min。在室温℃下，旋转蒸发除去第三有机溶剂（二氯甲烷）和第四有机溶剂（二氯甲烷），得到旋蒸后的产物。将旋蒸后的产物在13000g的离心速度下离心10分钟后，收集得到沉淀物。
（6）将得到的沉淀物（10mg左右）用2ml的水溶解后，加入0.05mg的核酸药物（siRNA，正义链序列为5’-GAAUUAACCCUUGGUGAAUTT-3’(SEQ ID NO：1)，反义链序列为5’-AUUCACCAAGGGUUAAUUCTT-3’(SEQ ID NO：2)，该siRNA能够沉默抗凋亡蛋白survivin基因的表达，从而抑制肿瘤细胞的生长），振荡混匀后室温放置30分钟，13000g的离心速度下离心10分钟后，收集沉淀，得到纳米粒子药物组合物。
经检测，所得到的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的重均分子量为14100Da。
在透射电镜下观察本实施例得到的纳米粒子药物组合物，结果如图1所示，说明得到的纳米粒子药物组合物为球形粒子，分散均匀，且无团聚现象，其粒径在100nm左右。
利用激光粒度仪测得本实施例得到的纳米粒子药物组合物的平均粒径为120.28±11.32nm（图2），分散度为0.104，zeta电位为18.36±0.28，表明该纳米粒子药物组合物的稳定性较好。
将本实施例得到的纳米粒子药物组合物冷冻干燥后用乙腈溶解，利用高效液相色谱检测可以看出本实施例得到的纳米粒子药物组合物同时具有心脏绿和紫杉醇的特征峰。并通过紫外分光光度计方法测得本实施例得到的纳米粒子药物组合物中含有siRNA，说明心脏绿和紫杉醇在本实施例得到的纳米粒子药物组合物中同时存在，且每克的本实施例得到的纳米粒子药物组合物中心脏绿的含量为0.2mg，紫杉醇的含量为0.08mg，siRNA的含量为0.04mg。
图3表示实施例1中的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的核磁共振氢谱。图3中在～5.2ppm处的信号对应于共聚物中位于丙交酯嵌段的-CHMe-O-基团中的CH质子；在～4.7ppm处的信号对应于共聚物中位于乙交酯嵌段的-CH2O-基团中的CH2质子；在～4.3ppm处的信号对应于共聚物中-CH2-OOC-基团中的CH2质子；在～3.6ppm和～3.4ppm处的信号分别对应于共聚物中-CH2-O-CH3基团中的CH2质子和CH3质子；在～2.1ppm处的信号对应于共聚物中与N或S相邻的烷基质子；
图4表示实施例1中的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物纳米粒子在水溶液中的透光率随着温度变化图。表明其在约39℃是发生相变，透光率急剧下降，证明该共聚物具有温度敏感的性质。
实施例2本发明纳米粒子药物组合物的制备
按照以下步骤制备本发明的纳米粒子药物组合物：
（1）将1.694g的2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、4.275g的寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯、1.415g的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、350mg的2-巯基乙醇和16.94mg的过氧化苯甲酰溶解到40ml的四氢呋喃溶液中，在85℃，氮气保护下反应15小时；
在所得产物中加入300ml乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物在30℃下真空干燥48小时，得到2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物。
（2）将2.432g步骤（1）所得2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物溶解到20ml的甲苯溶液中，再将2.651g的乳酸、2.164g的乙交酯和0.6ml的异辛酸亚锡加入到上述甲苯溶液中，在200℃、氮气保护下反应30小时；
在所得产物中加入300ml乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物在30℃下真空干燥48小时得到聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物。
（3）将20mg步骤（2）所得聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物溶于1ml第三有机溶剂（二氯甲烷）中，得到第一溶液。将0.1mg的亲水性近红外染料（心脏绿）溶于1ml水中，得到亲水性近红外染料的水溶液。将250μl的亲水性近红外染料的水溶液加入1ml的第一溶液中，得到混合后的物料。在20℃下，将1ml的上述得到的混合后的物料用功率为28.5W且频率为22kHz的超声波辐射3分钟后，得到第一乳液。
（4）将第一表面活性剂（聚乙烯醇，皂化度为70mol%；在25℃下的粘度为500mPa·s）配制为浓度2wt％的水溶液，得到第一表面活性剂水溶液。在100转/min的搅拌条件下，将1ml步骤（1）得到的第一乳液以0.1ml/min的速度加入到0.8ml第一表面活性剂水溶液中，得到混合后的物料。将0.1mg疏水性药物（紫杉醇）溶于1ml第四有机溶剂（二氯甲烷）中，得到第二溶液。在1000转/min的搅拌条件下，将0.25ml的上述得到的第二溶液以0.1ml/min的速度加入上述得到的混合后的物料中，得到用于超声的物料。在20℃下，将1ml上述得到的用于超声的物料用功率为28.5W且频率为22kHz的超声波辐射3分钟后，得到第二乳液。
（5）将第二表面活性剂（聚乙烯醇，皂化度为70mol%；在25℃下的粘度为500mPa·s）配制为浓度0.6wt%的水溶液，得到第二表面活性剂水溶液。在100转/min的搅拌条件下，将1ml步骤（2）得到的第二乳液以0.1ml/min的速度加入到10ml的上述第二表面活性剂水溶液中，然后在600-800转/min的搅拌条件下维持5min。在室温℃下，旋转蒸发除去第三有机溶剂(二氯甲烷)和第四有机溶剂（二氯甲烷），得到旋蒸后的产物。将旋蒸后的产物在5000g的离心速度下离心10分钟后，收集得到沉淀物。
（6）将得到的沉淀物（10mg左右）用2ml的水溶解后，加入0.01mg的核酸药物（siRNA，正义链序列为5’-GAAUUAACCCUUGGUGAAUTT-3’(SEQ ID NO：1)，反义链序列为5’-AUUCACCAAGGGUUAAUUCTT-3’(SEQ ID NO：2)，该siRNA能够沉默抗凋亡蛋白survivin基因的表达，从而抑制肿瘤细胞的生长），振荡混匀后室温放置30分钟，5000g的离心速度下离心10分钟后，收集沉淀，得到纳米粒子药物组合物。
经检测，所得到的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的重均分子量为6134Da。
其它各项检测图谱与实施例1的相应图谱类似。按照与实施例1相同的测量方法，利用激光粒度仪测得本实施例得到的纳米粒子药物组合物的粒径约为200nm；测得每克的本实施例得到的纳米粒子药物组合物中心脏绿的含量为0.02mg，紫杉醇的含量为0.06mg，siRNA的含量为0.008mg。
实施例3本发明纳米粒子药物组合物的制备
按照以下步骤制备本发明的纳米粒子药物组合物：
（1）将4.124g的2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、0.156g的寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯、0.415g的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、7.6mg的2-巯基乙醇和0.4mg的过氧化苯甲酰溶解到5ml的四氢呋喃溶液中，在65℃，氮气保护下反应5小时；
在所得产物中加入300ml乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物在20℃下真空干燥24小时，得到2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物。
（2）将1.754g步骤（1）所得2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物溶解到5ml的甲苯溶液中，再将0.587g的乳酸、0.059g的乙交酯和0.05ml的异辛酸亚锡加入到上述甲苯溶液中，在100℃、氮气保护下反应15小时；
在所得产物中加入300ml乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物在20℃下真空干燥24小时得到聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物。
（3）将40mg步骤（2）所得聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物溶于1ml第三有机溶剂（二氯甲烷）中，得到第一溶液。将10mg的亲水性近红外染料（心脏绿）溶于1ml水中，得到亲水性近红外染料的水溶液。将250μl的亲水性近红外染料的水溶液加入1ml的第一溶液中，得到混合后的物料。在30℃下，将1ml的上述得到的混合后的物料用功率为57W且频率为23kHz的超声波辐射10分钟后，得到第一乳液。
（4）将第一表面活性剂（聚乙烯醇，皂化度为95mol%；在25℃下的粘度为900mPa·s）配制为浓度4wt%的水溶液，得到第一表面活性剂水溶液。在1200转/min的搅拌条件下，将1ml步骤（1）得到的第一乳液以3ml/min的速度加入到1ml第一表面活性剂水溶液中，得到混合后的物料。将10mg疏水性药物（紫杉醇）溶于1ml第四有机溶剂（二氯甲烷）中，得到第二溶液。在1200转/min的搅拌条件下，将0.25ml的上述得到的第二溶液以1ml/min的速度加入上述得到的混合后的物料中，得到用于超声的物料。在30℃下，将1ml上述得到的用于超声的物料用功率为57W且频率为23kHz的超声波辐射10分钟后，得到第二乳液。
（5）将第二表面活性剂（聚乙烯醇，皂化度为90mol%；在25℃下的粘度为900mPa·s）配制为浓度1wt%的水溶液，得到第二表面活性剂水溶液。在1200转/min的搅拌条件下，将1ml步骤（2）得到的第二乳液以3ml/min的速度加入到15ml的上述第二表面活性剂水溶液中，然后在600-800转/min的搅拌条件下维持100min。在室温℃下，旋转蒸发除去第三有机溶剂（二氯甲烷）和第四有机溶剂（二氯甲烷），得到旋蒸后的产物。将旋蒸后的产物在15000g的离心速度下离心10分钟后，收集得到沉淀物。
（6）将得到的沉淀物(10mg左右)用2ml的水溶解后，加入2mg的核酸药物（siRNA，正义链序列为5’-GAAUUAACCCUUGGUGAAUTT-3’(SEQID NO：1)，反义链序列为5’-AUUCACCAAGGGUUAAUUCTT-3’(SEQID NO：2)，该siRNA能够沉默抗凋亡蛋白survivin基因的表达，从而抑制肿瘤细胞的生长），振荡混匀后室温放置30分钟，15000g的离心速度下离心10分钟后，收集沉淀，得到纳米粒子药物组合物。
经检测，所得到的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的重均分子量为48210Da。其它各项检测图谱与实施例1的相应图谱类似。按照与实施例1相同的测量方法，利用激光粒度仪测得本实施例得到的纳米粒子药物组合物的粒径约为200nm；测得每克的本实施例得到的纳米粒子药物组合物中心脏绿的含量为0.95mg，紫杉醇的含量为0.86mg，siRNA的含量为0.42mg。
实施例4本发明纳米粒子药物组合物的效果检测
将实施例1制得的载有多种药物的纳米粒子组合物作为实验药物；将心脏绿、紫杉醇与siRNA按照实施例1制得的纳米粒子组合物中这三种药物的质量比混合的药物混合物作为对照药物。
将黑色素瘤细胞（B16细胞系，购自ATCC，编号B16-F10）以每35mm内径的培养皿103个的密度分别接种于含有2ml的DMEM培养基(含10体积％的胎牛血清)的两个培养皿中，在37℃和5体积%的CO2浓度下培养24小时后，吸出培养基，将2ml溶有实验药物的培养基（以阿霉素计，药物浓度为0.17μmol/ml）加入其中一只培养皿中，将2ml溶有对照药物的培养基（以阿霉素计，药物浓度为0.17μmol/ml）加入另一只培养皿中，将上述2只培养皿在37℃和5%的CO2浓度下孵育12小时后，按照文献（Mingbin Zheng，等，ACS nano，2013，7：2056-67）中所述的光热治疗方法对上述2只培养皿中的细胞进行激光照射后在37℃和5%的CO2浓度下孵育12小时。按照文献(Qinghua Miao，等，生物材料(Biomaterials)，2010，31(28)：7364-75)中所述的CCK-8法检测细胞凋亡水平。结果发现：使用实验药物的培养皿中，细胞存活率为5.2±0.04%；使用对照药物的培养皿中，细胞存活率为32.4±1.8%。上述结果说明：与对照药物相比，实验药物对黑色素瘤细胞具有更强的促凋亡效果。
使用黑色素瘤细胞（B16细胞系，购自ATCC，编号B16-F10）和C57小鼠（C57系，购自北京维通利华公司），按照文献（Fariyal Ahmed，等.分子药物学(Molecular Pharmaceutics)，3，340-350）中的方法制备荷瘤裸鼠，待肿瘤长至0.5cm2大小时，将荷瘤裸鼠随机分为实验组荷瘤裸鼠和对照组荷瘤裸鼠，按照文献（同上）中的方法，经尾静脉，将溶有实验药物的磷酸盐缓冲液（以阿霉素计，给药量为3mg/kg体重）给药至实验组荷瘤裸鼠；将溶有对照药物的磷酸盐缓冲液（以阿霉素计，给药量为3mg/kg体重）给药至对照组荷瘤裸鼠。24小时后，按照文献（Mingbin Zheng，等，ACS nano，2013，7：2056-67）中所述的光热治疗方法对上述2组裸鼠进行激光照射。一周后，按照文献（Fariyal Ahmed，等.分子药物学(Molecular Pharmaceutics)，3，340-350）中的方法测定肿瘤的大小，其中，实验组荷瘤裸鼠的肿瘤大小平均为126mm3，对照组荷瘤裸鼠的肿瘤大小平均为4563mm3。上述结果说明：与对照药物相比，实验药物对黑色素瘤具有更强的抑制效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明，但本发明并不局限于上述，即不意味着本发明必须依赖上述才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种基于聚合物纳米粒子载体的药物组合物，包括聚合物纳米粒子载体和负载在该载体上的活性成分，其特征在于，所述聚合物纳米粒子载体为如以下式I所示的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的纳米粒子：
式I中，m为6-120的整数，n为6-120的整数，p为6-120的整数，q为6-120的整数，x为12-240的整数，y为12-240的整数；
所述活性成分包括疏水性药物、亲水性近红外染料和核酸药物。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，基于所述聚合物纳米粒子载体的药物组合物的粒径为50～300nm、优选100～200nm;
优选地，所述聚合物纳米粒子载体的重均分子量为4000-100000Da、优选6000-80000Da、更优选10000-50000Da;
优选地，所述疏水性药物为疏水性抗肿瘤药物；进一步优选地，所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、喜树碱、三尖杉酯碱和长春瑞宾中的任意一种或几种；
优选地，所述疏水性药物与所述聚合物纳米粒子载体的质量比为1：（1～1000）；优选为1：（10～100）；更优选为1：50；
优选地，所述亲水性近红外染料为心脏绿、IR-780碘化物和IR-808碘化物中的任意一种或几种；
优选地，所述亲水性近红外染料与所述聚合物纳米粒子载体的质量比为1：（1～1000）；优选为1：（10～100）；更优选为1：50；
优选地，所述核酸药物为DNA药物和/或RNA药物，优选为siRNA药物；进一步优选地，所述核酸药物为针对survivin基因的siRNA，更进一步优选地，所述针对survivin基因的siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.1所示，反义链序列如SEQ ID NO.2所示；
优选地，所述核酸药物与与所述聚合物纳米粒子载体的质量比为1：（1～1000）；优选为1：（50～500）；更优选为1：200。
3.如权利要求1或2所述药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）在过氧化苯甲酰的存在下，在第一有机溶剂中，使2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯和2-巯基乙醇接触，得到由以下式II所示的2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物：
式II中，m为6-120的整数，n为6-120的整数，p为6-120的整数，q为6-120的整数；
（2）在异辛酸亚锡的存在下，在第二有机溶剂中，使式II所示2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物与乳酸、乙交酯接触，得到式I所示的聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物；
（3）在超声波辐射条件下，使第一溶液与亲水性近红外染料的水溶液混合并乳化，得到第一乳液；
所述第一溶液含有式I所示聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物和第三有机溶剂；
（4）将所述第一乳液与第一表面活性剂水溶液混合，并将所得混合后的物料与第二溶液混合并乳化，得到第二乳液；
所述第二溶液含有所述疏水性药物和第四有机溶剂；
（5）将所述第二乳液与第二表面活性剂水溶液混合，并除去所述第三有机溶剂和所述第四有机溶剂，而后离心并分离得到沉淀物；
（6）将所述沉淀物用水溶液溶解后与核酸药物混合，分离得到所述药物组合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述第一有机溶剂为二氯甲烷、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、甲基丁酮、二氯苯和甲基异丙酮中的任意一种或几种，优选四氢呋喃；
优选地，所述接触在惰性气氛下进行；进一步优选地，所述惰性气氛为氮气气氛或零族气氛，优选为氮气气氛；
优选地，所述2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯与所述寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯的摩尔比为（1～50）:1、优选为（5～25）:1、更优选为15:1；
优选地，所述2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯与所述甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的摩尔比为（1～15）:1、优选为（3～10）：1、更优选为5:1；
优选地，所述2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯与所述2-巯基乙醇的摩尔比为（20～200）:1、优选为（50～150）：1、更优选为100:1；
优选地，相对于1g2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯，所述过氧化苯甲酰的用量为（0.1～10）mg、优选为（0.5～5）mg、更优选为2mg，所述第一有机溶剂的用量为（1～20）ml、优选为（3～15）ml、优选为9ml；
优选地，所述接触的温度为65～85℃、优选为70～80℃、更优选为75℃；
优选地，所述接触的时间为5～15小时、优选为8小时。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述第二有机溶剂为甲苯或二甲苯，优选为甲苯；
优选地，所述接触在惰性气氛下进行；进一步优选地，所述惰性气氛为氮气气氛或零族气氛，优选为氮气气氛；
优选地，式II所示2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物与乳酸的摩尔比为（1～20）:1、优选为（5～15）:1、更优选为10:1；
优选地，所述乳酸和所述乙交酯的摩尔比为（1～10）:1、优选为（2～8）:1、更优选为5:1；
优选地，相对于1g式II所示2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯-2-巯基乙醇共聚物，所述异辛酸亚锡的用量为（0.01～2）ml、优选为（0.05～1）ml、更优选为（0.1-0.5）ml，所述第二有机溶剂的用量为（3～20）ml、优选为（5～15）ml、更优选为10ml；
优选地，所述接触的温度为100℃～200℃、优选为150℃；
优选地，所述接触的时间为15～30小时，优选为24小时。
6.根据权利要求3-5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（2）还分别包括在所得产物中加入乙醚，沉淀出固体产物，再将所得固体产物真空干燥的步骤；
优选地，在20-30℃下真空干燥24-48小时。
7.根据权利要求3-6任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述亲水性近红外染料为心脏绿、IR-780碘化物和IR-808碘化物中的任意一种或几种；
优选地，所述第三有机溶剂为二氯甲烷、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、甲基丁酮、二氯苯和甲基异丙酮中的任意一种或几种；
优选地，所述第一溶液中，式I所示聚(2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯-co-寡聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯-co-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)-聚(乳酸-co-羟基乙酸)嵌段聚合物的含量为（5～100）mg/ml、优选为（20～40）mg/ml、更优选为30mg/ml；
优选地，所述亲水性近红外染料的水溶液中，所述亲水性近红外染料的含量为（0.1～100）mg/ml、优选为（0.1～10）mg/ml、更优选为1mg/ml；
优选地，所述第一溶液与所述亲水性近红外染料水溶液的体积比为1：（1～10）、优选为1：（2～8）、更优选为1:4；
优选地，采用超声波进行乳化；
进一步优选地，所述超声波辐射的频率为20-25kHz、优选为22-23kHz，相对于每毫升接受超声波辐射的混合物料，超声波功率为10-190W、优选为（28.5～57）W、更优选为40W；
进一步优选地，所述乳化的温度为（1～99）℃、优选为（20～30）℃、更优选为25℃；
进一步优选地，所述乳化的时间为（1～30）分钟、优选为（3～10）分钟、更优选为5分钟。
8.根据权利要求3-7任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述疏水性药物为紫杉醇、喜树碱、三尖杉酯碱和长春瑞宾中的任意一种或几种；
优选地，所述第一表面活性剂为聚乙烯醇、土温80、司盘和十二烷基磺酸钠中的任意一种或几种；
优选地，所述第一表面活性剂水溶液中，所述第一表面活性剂的含量为（0.6～6）wt%、优选为（2～4）wt%、更优选为3wt%；
优选地，所述第二溶液中，所述疏水性药物的含量为0.1mg/ml至饱和、优选为（0.1～10）mg/ml；
优选地，所述第一表面活性剂水溶液与第一乳液的体积比为（0.5～2）：1、优选为（0.8～1）：1；
优选地，所述第二溶液与第一乳液的体积比为（0.1～1）：1、优选为（0.4～0.6）：1；
优选地，采用超声波进行乳化；
进一步优选地，所述超声波辐射的频率为20-25kHz、优选为22-23kHz，相对于每毫升接受超声波辐射的混合物料，超声波功率为10-190W、优选为（28.5～57）W、更优选为40W；
进一步优选地，所述乳化的温度为（1～99）℃、优选为（20～30）℃、更优选为25℃；
进一步优选地，所述乳化的时间为（1～30）分钟、优选为（3～10）分钟、更优选为5分钟。
9.根据权利要求3-8任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述第二表面活性剂为聚乙烯醇、土温80、司盘和十二烷基磺酸钠中的任意一种或几种；
优选地，所述第二表面活性剂水溶液中，所述第二表面活性剂的含量为（0.3～3）wt%、优选为（0.6～1）wt%、更优选为1wt%；
优选地，所述第二表面活性剂水溶液与所述第二乳液的体积比为（2～20）：1、优选为（10～15）：1。
10.根据权利要求3～9任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述沉淀物与水的重量比为1：（1～1000）、优选为1：（10～1000）、更优选为1:200；
优选地，所述核酸药物为DNA药物和/或RNA药物，优选为siRNA药物；进一步优选地，所述核酸药物为针对survivin基因的siRNA，更进一步优选地，所述针对survivin基因的siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.1所示，反义链序列如SEQ ID NO.2所示；
优选地，所述核酸药物与所述沉淀物的重量比为（0.001～1）：1、优选为（0.001～0.2）:1、更优选为0.005：1。
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