CN1850991A - 猪附红细胞体pcr检测方法 - Google Patents
猪附红细胞体pcr检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1850991A CN1850991A CN 200610049619 CN200610049619A CN1850991A CN 1850991 A CN1850991 A CN 1850991A CN 200610049619 CN200610049619 CN 200610049619 CN 200610049619 A CN200610049619 A CN 200610049619A CN 1850991 A CN1850991 A CN 1850991A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pcr
- cell body
- red cell
- dna
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 title claims abstract description 10
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 241000579205 Mycoplasma suis Species 0.000 claims description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 4
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 2
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 claims description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 2
- AYRVGWHSXIMRAB-UHFFFAOYSA-M sodium acetate trihydrate Chemical compound O.O.O.[Na+].CC([O-])=O AYRVGWHSXIMRAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- -1 wherein Substances 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract 1
- 230000000881 depressing effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 201000001916 Hypochondriasis Diseases 0.000 description 1
- 108010064696 N,O-diacetylmuramidase Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种猪附红细胞体PCR检测方法,所用试剂包括PCR检测试剂盒,及含有目的基因片段重组质粒的阳性对照、阴性对照、Taq酶、GoldView DNA染料、溴酚蓝上样缓冲液,通过被检样品DNA提取、PCR扩增及扩增产物分析达到检测目的。本发明提供的方法可快速、准确地检测出被检样品中的附红细胞体,也可用于猪附红细胞体病的分子流行病学调查及疗效监测。本方法的模板DNA制备步骤简单费用低,可排除镜检时细菌和杂质颗粒的干扰,从而大大提高诊断准确率,降低假阳性率。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术,尤其涉及猪附红细胞体PCR检测方法。
背景技术
附红细胞体病是附红细胞体寄生在人或多种动物的红细胞表面、血浆和骨髓而引起的一种人畜共患病。过去国际上将附红细胞体列为立克次氏体,但是近年来根据16S rRNA基因序列分析,附红细胞体在分类上更接近于支原体属(Mycoplasma)。猪附红细胞体(Eperythrozoon suis,E.suis)是一种寄生于猪红细胞表面或游离于血浆的病原体,可引起新生仔猪和断奶仔猪虚弱和贫血,肥育猪生长缓慢,母猪繁殖障碍、受胎率低、不发情、流产和死胎等综合性症状,严重威胁着畜牧业的发展和人类健康。目前已经造成了巨大的经济损失,并呈范围扩大趋势,因而引起国内外学者的广泛关注。临床上该病的诊断方法主要以直接镜检为主,其中包括鲜血压片和涂片染色,但是假阳性率高。动物实验方法是确诊的手段,但所费时间太长,费用高。血清学方法包括间接血凝试验(IHA)、补体结合试验(CFT)或酶联免疫吸附试验(ELISA)等,由于附红细胞体病的抗体变化起伏较大,这些方法也不适用于该病诊断。Gwaltney等(1993)根据猪附红细胞体基因文库KSU一2克隆的序列资料,设计合成引物,首次建立了E.suis的PCR诊断方法。Messick等(1999)根据猪附红细胞体Illinois株16S rRNA基因的序列资料,设计合成了猪附红细胞体种特异性引物ES-f1、ES-f2、ES-r1、ES-r2,这些引物可以特异性地扩增出猪附红细胞体16S rRNA的基因片段,但是不能扩增到亲缘较近的几种支原体的基因片段。由此可见基于16S rRNA基因的PCR方法有很强的特异性。
发明内容
本发明提供一种猪附红细胞体的PCR检测方法,通过以下技术方案实现:
1.设置PCR检测试剂盒,该试剂盒包括:
(1)PCR试剂管:试剂管内含10×缓冲液,脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP),引物1,引物2,MgCl2,其中引物1和引物2分别具有SEQ ID NO 1和SEQ IDNO 2所示的核苷酸序列:
引物1(SEQ ID NO:1)5’>CGAGCATTATCCGGATTTATTG<3’
引物2(SEQ ID NO:2)5’>ACATGCTCCACCACTTGTTCAG<3’
(2)阳性对照:该对照为含有目的基因片段的重组质粒,是将扩增产物克隆至pUCm-T转化DH5-α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后获得阳性重组质粒,该质粒含猪附红细胞体403bp基因片段,具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列:
cgagcattat ccggatttat tgggcgtaaa ggaagcgtag gctgaagtgt gtatccattg 60
ttaaaagtac ttgcttaaca agtgttcgcg gtggagatta cacttctaga attagttaga 120
gggcactgga attcaatgtg tagtggtgga atacgtagat atattgagga acaccagagg 180
ctaaggcgag tgcctgggac ataattgacg ctgaggcttg aaagcgtggg tagcaaatgg 240
gattagatac cccagtagtc cacgccgtaa acgatgggta ttagtcattt gaatttaagt 300
tgagtgatgt agctaacgcg ttaaataccc cgcctgggta gtatatatgc aaatatgaaa 360
ctcaaagaaa ttgacgggga cctgaacaag tggtggagca tgt 403
(3)阴性对照,该对照为双重蒸馏水;
(4)Taq DNA聚合酶;
(5)GoldView DNA染料;
(6)溴酚蓝上样缓冲液(常规浓度)。
2.操作程序:
(1)被检样品DNA提取:取200μl无菌抗凝血液,Trizol试剂裂解后常规的酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,干燥后用三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸(Tris-EDTA TE)溶解,4℃保存备用;
(2)PCR扩增:在PCR检测试剂管中加入处理后的DNA样品,同时设阴阳性对照,每管加入Taq酶不少于0.2μl,混匀后稍离心,置PCR仪进行扩增,PCR反应循环条件:95℃ 5min,94℃ 60s,60℃ 30s,72℃ 60s,共35循环,最后在72℃后延伸7min。
(3)扩增产物分析:将PCR产物进行琼脂糖电泳,被检样品孔出现的电泳带与阳性对照和阴性对照比对,以判定样品为猪附红细胞体阳性或阴性。
发明的优点是提供了一种检测猪附红细胞体的标准方法,可快速、准确地检测出被检样品中的附红细胞体,也可用于猪附红细胞体病的分子流行病学调查及疗效监测。本方法的模板DNA制备步骤简单费用低,常规的方法需经溶菌酶、蛋白酶K、SDS(十二烷基硫酸钠)、CTAB(十六烷基三甲基溴化胺)等试剂处理,时间长费用高。本方法建立在分子生物学的基础上,可排除镜检时细菌和杂质颗粒的干扰,从而大大提高诊断准确率,降低假阳性率。
附图说明
图1为本发明方法获得的产物进行琼脂糖电泳结果。
图2为应用本发明进行附红细胞体病的流行病学调查结果。
具体实施例
本发明结合实施例作进一步说明。
实施例一
1.样品的采集:严格无菌采集可疑病猪的血样不少于500μl,4℃或冷冻保存;
2.被检样品DNA提取:取200μl无菌抗凝血液,加入100μl Trizol试剂,充分混匀后加入等体积的Tris饱和酚/氯仿混合液抽提,上清用2倍体积的无水乙醇沉淀2小时,70%的乙醇洗涤后干燥,沉淀用10-20μl TE缓冲液溶解后,4℃保存备用;
3.设置PCR检测试剂盒,该试剂盒包括:
(1)PCR试剂管:试剂管内含10×buffer,dNTP,引物1和引物2,MgCl2,其中引物1和引物2分别是按下述碱基序列由DNA合成仪合成的DNA片段:
引物15’>CGAGCATTATCCGGATTTATTG<3’
引物25’>ACATGCTCCACCACTTGTTCAG<3’
(2)阳性对照:该对照为含有目的基因片段的重组质粒,是将扩增产物克隆至pUCm-T转化DH5-α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后获得阳性重组质粒,该质粒含猪附红细胞体403bp基因片段,具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
(3)阴性对照,该对照为双重蒸馏水;
(4)Taq酶;
(5)GoldView DNA染料;
(6)溴酚蓝上样缓冲液(常规浓度)。
4.PCR扩增:在每个PCR检测试剂管中加入提取的DNA样品2μl,加入Taq酶0.2μl,同时设阴阳性对照。混匀后稍离心,置PCR仪进行扩增,PCR反应循环条件:95℃ 5min,94℃ 60s,60℃ 30s,72℃ 60s,共35循环,最后在72℃后延伸7min。
5.扩增产物分析:将琼脂糖溶于电泳缓冲液中,然后每100ml中加入5μl GoldView DNA染料,混匀后制胶。将样品扩增产物与溴酚蓝上样缓冲液混合,用微量移液器将样品依次加入加样孔内,恒压电泳。电泳完成后,放在透射紫外灯下观察,将样品孔出现的电泳带与阳性对照和阴性对照比对,判定被检样品为猪附红细胞体阳性或阴性。结果参见图1,其中1为阳性对照,2为阴性对照,3为被检样品阴性,4、5为被检样样品阳性。
实施例二
方法基本同实施例一,随机无菌采集猪血样,提取DNA,PCR扩增,结果参见图2,其中1为阳性对照,2为阴性对照,4、5、12、14、18为被检样品阴性,3、6、7、8、9、10、11、13、15、16、17为被检样样品阳性。阳性率为68.75%。
无需进一步详细阐述,相信采用前面所公开的内容,本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此,前面的实施方案应理解为仅是举例说明,而非以任何方式限制本发明的范围。
本发明涉及的序列
<120>猪附红细胞体PCR检测方法
<160>3
<170>DNA Star 5.0
<210>1
<211>22
<212>DNA
<213>猪附红细胞体(Eperythrozoon suis)
<220>
<221>RRNA
<400>1
cgagcattat ccggatttat tg 22
<210>2
<211>22
<212>DNA
<213>猪附红细胞体(Eperythrozoon suis)
<220>
<221>RRNA
<400>2
acatgctcca ccacttgttc ag 22
<210>3
<211>403
<212>DNA
<213>猪附红细胞体(Eperythrozoon suis)
<220>
<221>RRNA
<400>3
cgagcattat ccggatttat tgggcgtaaa ggaagcgtag gctgaagtgt gtatccattg 60
ttaaaagtac ttgcttaaca agtgttcgcg gtggagatta cacttctaga attagttaga 120
gggcactgga attcaatgtg tagtggtgga atacgtagat atattgagga acaccagagg 180
ctaaggcgag tgcctgggac ataattgacg ctgaggcttg aaagcgtggg tagcaaatgg 240
gattagatac cccagtagtc cacgccgtaa acgatgggta ttagtcattt gaatttaagt 300
tgagtgatgt agctaacgcg ttaaataccc cgcctgggta gtatatatgc aaatatgaaa 360
ctcaaagaaa ttgacgggga cctgaacaag tggtggagca tgt 403
Claims (3)
1.猪附红细胞体PCR检测方法,其特征是通过以下技术方案实现:
(1)被检样品DNA提取:取200μl无菌抗凝血液,Trizol试剂裂解后常规的酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,干燥后用三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸溶解,4℃保存备用;
(2)设置PCR检测试剂盒:由PCR试剂管、阳性对照、阴性对照、Taq酶、GoldView DNA染料、溴酚蓝上样缓冲液组成,其中,PCR试剂管含10×缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸、引物1、引物2及MgCl2,引物1和引物2具有的SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列:
SEQ ID NO 15’>CGAGCATTATCCGGATTTATTG<3’
SEQ ID NO 25’>ACATGCTCCACCACTTGTTCAG<3’;
(3)PCR扩增:在PCR试剂管中加入处理后的样品DNA,同时设阴、阳性对照,每管加入Taq酶不少于0.2μl,混匀后稍离心,置PCR仪进行扩增,PCR反应循环条件为95℃5min,94℃60s,60℃30s,72℃60s,共35循环,最后在72℃后延伸7min;
(4)扩增产物分析:将PCR产物进行琼脂糖电泳,被检样品孔出现的电泳带与阳性对照和阴性对照比对,以判定样品为猪附红细胞体阳性或阴性。
2.根据权利要求1所述的猪附红细胞体PCR检测方法,其特征是:所述步骤(3)中阳性对照为含有目的基因片段的重组质粒,通过将扩增产物克隆至pUCm-T转化DH5-α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后获得阳性重组质粒,该质粒含猪附红细胞体403bp基因片段,具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的猪附红细胞体PCR检测方法,其特征是:所述步骤(3)中阴性对照为双重蒸馏水。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2006100496197A CN100371461C (zh) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | 猪附红细胞体pcr检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2006100496197A CN100371461C (zh) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | 猪附红细胞体pcr检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1850991A true CN1850991A (zh) | 2006-10-25 |
CN100371461C CN100371461C (zh) | 2008-02-27 |
Family
ID=37132493
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB2006100496197A Expired - Fee Related CN100371461C (zh) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | 猪附红细胞体pcr检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100371461C (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101948914A (zh) * | 2010-07-05 | 2011-01-19 | 华中农业大学 | 温氏附红细胞体的环介导等温扩增检测方法 |
CN103160600A (zh) * | 2013-04-07 | 2013-06-19 | 四川汇博兽药科技有限公司 | 检测温氏附红细胞体的pcr试剂盒 |
CN103789430A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-14 | 浙江大学 | 一种快速检测血液中附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的试剂盒及应用 |
CN105018578A (zh) * | 2014-04-23 | 2015-11-04 | 中国农业科学院上海兽医研究所 | 鉴别猪源附红细胞体种类的试剂盒、方法及其应用 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101317879B (zh) * | 2008-07-08 | 2011-04-13 | 赵志敏 | 治疗牛、羊、猪附红细胞体疾病的药物 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5350672A (en) * | 1993-01-22 | 1994-09-27 | Kansas State University Research Foundation | Specific DNA primers and method to use same detect Eperythrozoon suis |
CN1696691A (zh) * | 2005-05-26 | 2005-11-16 | 上海交通大学 | 附红细胞体病快速鉴别诊断方法 |
-
2006
- 2006-02-27 CN CNB2006100496197A patent/CN100371461C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101948914A (zh) * | 2010-07-05 | 2011-01-19 | 华中农业大学 | 温氏附红细胞体的环介导等温扩增检测方法 |
CN101948914B (zh) * | 2010-07-05 | 2012-09-26 | 华中农业大学 | 一种环介导等温扩增方法在温氏附红细胞体体外检测中的应用 |
CN103160600A (zh) * | 2013-04-07 | 2013-06-19 | 四川汇博兽药科技有限公司 | 检测温氏附红细胞体的pcr试剂盒 |
CN103789430A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-14 | 浙江大学 | 一种快速检测血液中附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的试剂盒及应用 |
CN103789430B (zh) * | 2014-01-24 | 2015-05-20 | 浙江大学 | 一种快速检测血液中附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的试剂盒及应用 |
CN105018578A (zh) * | 2014-04-23 | 2015-11-04 | 中国农业科学院上海兽医研究所 | 鉴别猪源附红细胞体种类的试剂盒、方法及其应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN100371461C (zh) | 2008-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108823325B (zh) | 鸭疫里默氏菌Imp基因的应用及其PCR检测试剂盒和方法 | |
CN1850991A (zh) | 猪附红细胞体pcr检测方法 | |
CN107988405B (zh) | 一种印第安纳沙门氏菌pcr检测试剂盒及其非诊断性检测方法 | |
CN103898108A (zh) | 对河流弧菌o2,o4,o13,o15和o18特异的核苷酸及其应用 | |
CN1840703A (zh) | 动物水泡性疾病多重rt-pcr鉴别检测试剂及制备方法和应用 | |
CN101058830A (zh) | 猪瘟病毒荧光定量rt-pcr诊断试剂盒 | |
CN104630360A (zh) | Hps等温扩增快速检测用引物、试剂盒和检测方法 | |
CN105886663A (zh) | 一种锁核酸增敏的猪伪狂犬病毒野毒株荧光定量pcr的检测试剂盒 | |
CN102912037B (zh) | 猪传染性胃肠炎tge 的rt-lamp检测方法 | |
CN104789675A (zh) | 一种检测荷斯坦奶牛瘤胃微生物的方法 | |
CN109593883A (zh) | 猪圆环病毒多重实时荧光pcr检测引物对、探针、及制备的试剂盒 | |
CN1506468A (zh) | 嗜水气单胞菌的pcr检测试剂盒及其检测方法 | |
CN103993090A (zh) | 对普罗威登斯菌o31,o41,o42,o43和o50特异的核苷酸及其应用 | |
CN1814806A (zh) | 安氏隐孢子虫pcr检测试剂盒 | |
CN107312869B (zh) | Pcr-elisa法检测家蚕微孢子虫的试剂盒及其检测方法 | |
CN102876814B (zh) | 一种检测口蹄疫病毒的实时荧光rt-hda试剂盒及引物 | |
CN103773884A (zh) | 用于检测肺炎衣原体98KDa MOMP基因的引物组和探针及其应用 | |
CN102676690B (zh) | 猪瘟病毒核酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及其探针 | |
CN101984073A (zh) | 一种猪细菌的多重pcr检测方法 | |
CN105256041A (zh) | 对亲水气单胞菌o44,o24,o25和o28特异的核苷酸及应用 | |
CN101245367B (zh) | 一种检测弓形虫的半巢式pcr方法 | |
CN111719005A (zh) | 一种猫嗜血支原体pcr检测方法 | |
CN1743459A (zh) | 一种用于检测沙门氏菌核苷酸片段的引物和探针序列 | |
CN104611441B (zh) | 一种检测所有11种衣原体的定量pcr的引物、探针及试剂盒 | |
CN102417935B (zh) | 新城疫病毒核酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及探针 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20080227 Termination date: 20140227 |