CN1696691A - 附红细胞体病快速鉴别诊断方法 - Google Patents

附红细胞体病快速鉴别诊断方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1696691A
CN1696691A CN 200510026213 CN200510026213A CN1696691A CN 1696691 A CN1696691 A CN 1696691A CN 200510026213 CN200510026213 CN 200510026213 CN 200510026213 A CN200510026213 A CN 200510026213A CN 1696691 A CN1696691 A CN 1696691A
Authority
CN
China
Prior art keywords
eperythrozoon
blood
eperythrozoonosis
inclusion
iodine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN 200510026213
Other languages
English (en)
Inventor
华修国
崔立
朱建国
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN 200510026213 priority Critical patent/CN1696691A/zh
Publication of CN1696691A publication Critical patent/CN1696691A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种附红细胞体病快速鉴别诊断方法,采用快速鲜血镜检三步法进行检测。首先采取被测对象的末梢血液滴于载玻片上,再滴加生理盐水稀释后进行镜检,观察是否能找到附红细胞体,然后在发现红细胞体的血滴中加滴盐酸或醋酸,观察在红细胞破裂后是否存在运动速度加快,运动范围增大的附红细胞体,进行进一步的判别;在上述确定有附红细胞体的血滴中,再滴加一滴碘溶液,观察附红细胞体运动是否停止并不再恢复活动力,也不被碘着色,即可完全确定附红细胞体是否存在,完成附红细胞体病的鉴别诊断。本发明根据附红细胞体所具有的特性,能快速、准确的进行动物和人的附红细胞体病的鉴别诊断。

Description

附红细胞体病快速鉴别诊断方法
技术领域
本发明涉及一种人畜共患疾病—附红细胞体病快速鉴别诊断方法,可用于动物和人的附红细胞体病的诊断,属于动物医学和医学诊断的技术领域。
背景技术
附红细胞体病是由专性血液寄生生物—附红细胞体寄生于人和动物红细胞表面、血浆及骨髓引起的,以贫血、黄疸、发热为基本征候的一种重要的人畜共患传染病。由于该病分布范围广、多呈隐性感染、感染宿主多,给人的健康和畜牧业的发展造成巨大的危害。
附红细胞体病已成为国内外广泛关注的全球性新型人畜共患病,但由于附红细胞体是条件致病菌,隐性感染率高、产生抗体的能力不确实等本身特点,较大地限制了该病血清学检测方法的应用。目前常规的检测方法是用血液压片,显微镜直接观察,其方法虽然简单,但受制于很多因素,观察结果带有一定的主观性,容易出现假阳性。以至于许多学者对国内附红细胞体如此高的发病率提出质疑(张家铮,2003河南畜牧兽医2003第24卷第1期)。
近年来发展起来的分子生物学检测方法如PCR(聚合酶链式反应)、核酸杂交等已开始应用到该病的检测诊断中。但特异敏感的检测诊断方法急需完善,包括IHA试验(间接血凝试验)、补体结合试验和ELISA(酶联免疫吸附)。因抗体的产生与病原数量的增多(而不是与感染发生的时间)只有暂时的相关性(孙荣华,2004中国兽医寄生虫病第12卷第1期),意味着抗体的产生呈波浪形。即使数次急性发作后,抗体滴度也只能在一定时间内维持较高水平,之后便会下降到阈值以下,表明假阴性是常见的。吴文德(2002广西畜牧兽医18卷2期)介绍了PCR技术检测附红细胞体的情况,根据16SrRNA基因设计引物,Berent等1998年用于猫附红体检测,Brinson等2001年用于狗附红体检查,特异性和敏感性高,可用于流行病学调查和临床检查。王君玮(2003中国动物检疫第20卷第7期)介绍了Gwaltney等1993年报道的检测猪附红细胞体的PCR方法,该法按照E.wenyonii附红体16SrRNA设计引物(5`-A G A G T T T G A T CT T G  G C T C A G-3`;5`-C G G T T A C C T T G T  T A C G A C TT-3`)对末梢血进行PCR扩增可以检查E.Wenyonii感染及E.suis感染的家畜。此法能否用于人的附红体感染或发病的诊断尚需进行试验。这些方法都存在检测时间长和成本高等问题。因此,目前国内外尚无一种快速、简便、准确、可靠的检测附红细胞体的方法。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的缺陷,提供一种附红细胞体病快速鉴别诊断方法,能快速、简便、准确、可靠的检测附红细胞体,以满足畜牧业生产和医学临床诊断的需求。
为实现这样的目的,本发明采用快速鲜血镜检三步法进行检测。首先采取被测对象的末梢血液滴于载玻片上,再滴加生理盐水稀释后进行镜检,观察是否能找到附红细胞体,然后在发现红细胞体的血滴中加滴盐酸或醋酸,观察在红细胞破裂后是否存在运动速度加快,运动范围增大的附红细胞体,进行进一步的判别;在上述确定有附红细胞体的血滴中,再滴加一滴碘溶液,观察附红细胞体运动是否停止并不再恢复活动力,也不被碘着色,即可完全确定附红细胞体是否存在,完成附红细胞体病的鉴别诊断。
本发明方法的具体步骤如下:
第一步,鲜血悬滴镜检:采取可疑病畜或病人被测对象的末梢血液,滴一滴鲜血于载玻片上,再按1∶1~1.5比例滴加生理盐水稀释,以降低血浆粘度,避免红细胞重叠,有利于观察附红细胞体活动。镜检时先在显微镜下找到红细胞,先在显微镜下找到红细胞,然后调节微调旋钮,观察是否有附红细胞体附着在红细胞表面,血浆中是否有游离的附红细胞体,进行初步判别。
如有附红细胞体感染,调节微调旋钮,即能清楚地看到附着在红细胞表面地附红细胞体,同时也能在显微镜下观察到游离于血浆中的附红细胞体。
第二步,酸性溶液活力测定:附红细胞体具有运动性,这有别于其他病原体。在第一步鲜血悬滴镜检的基础上,在发现附红细胞体的血滴中加一滴0.5~1%盐酸或1~5%醋酸(也可用其它酸性溶液或重蒸水),显微镜下可观察到红细胞破裂溶血,此时,附红细胞体并不因红细胞的破裂而运动活力受到影响,相反表现出活动更活泼,运动速度加快,运动范围增大的特点,作摆动、扭转、翻滚、上升、下降等运动。由此可将附红细胞体与其它病原体区别开来,完成进一步的判别。
第三步,碘制动测定:在第二步活力测定镜检时,当显微镜下观察到附红细胞体作摆动、扭转、翻滚、上升、下降等运动后,在上述血滴中滴加一滴0.05~0.1%碘溶液后,可观察到附红细胞体运动即停止。此时,即使用PBS(磷酸盐缓冲液)或生理盐水洗涤,附红细胞体活动力也不恢复,也不被碘着色。附红细胞体这一固有特性是别于其它血液寄生病原微生物,具有重要的鉴别诊断意义。由此即可完全确定附红细胞体的存在,完成附红细胞体病的鉴别诊断。
本发明根据附红细胞体所具有的特性,采用鲜血镜检三步法进行快速检测,第一可初步判断血液是否存在附红细胞体;第二步可将附红细胞体同其它血液寄生微生物区别;第三步后即可完全确定附红细胞体是否存在,完成附红细胞体病的鉴别诊断。本发明方法操作简单、灵敏、准确、快速,三个步骤仅需一小时就能完成,而传统血清学和分子生物学方法均需一天以上方能完成。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。以下实施例的作用应被理解为是对发明的注释,而并非对本发明的任何方式的限制。
实施例1
在兽医门诊收治的20例可疑附红细胞体病患犬中,分别于犬前臂静脉采血,滴一滴于载玻片上,加1∶1生理盐水稀释后。显微镜镜下可见附红细胞体多为环形、球形、短杆状、哑铃形或星状闪光小体附着于红细胞表面,或游离于血浆中。轻度感染者每个红细胞表面附着1-5个附红细胞体,中度感染者为6-8个,重度感染者可达20个以上。在滴加等量的0.9%盐酸溶液后,可见附红细胞体在显微镜下作摆动、扭转、翻滚、上升、下降等运动。再滴加等量0.1%碘溶液后,附红细胞体立即停止活动,用PBS或生理盐水洗涤后,附红细胞体活动力也不恢复,也不被碘着色。最后确诊为附红细胞体病病犬18只。用IHA试验、补体结合试验和ELISA方法检测对照,结果完全一致。
实施例2
在犬附红细胞体病流行期间,分别从7位同患犬有长期接触的兽医门诊医生和护理人员指尖无菌采血,滴一滴于载玻片上,加1∶1.2生理盐水稀释。显微镜下可见附红细胞体多为环形、球形、短杆状、哑铃形或星状闪光小体附着于红细胞表面,或游离于血浆中。轻度感染者每个红细胞表面附着1-5个附红细胞体,中度感染者为6个以上。在滴加等量的1%盐酸溶液后,可见附红细胞体在光镜下作摆动、扭转、翻滚、上升、下降等运动。再滴加等量0.1%碘溶液后,附红细胞体立即停止活动,用PBS或生理盐水洗涤后,附红细胞体活动力也不恢复,也不被碘着色。最后确诊附红细胞体感染者3人。用IHA试验、补体结合试验和ELISA方法检测对照,结果完全一致。

Claims (1)

1、一种附红细胞体病快速鉴别诊断方法,其特征在于包括以下步骤:
1)采取被测对象的末梢血液,滴一滴于载玻片上,再按1∶1~1.5的比例滴加生理盐水稀释血液后进行镜检,先在显微镜下找到红细胞,然后调节微调旋钮,观察是否有附红细胞体附着在红细胞表面,血浆中是否有游离的附红细胞体,进行初步判别;
2)在上述发现红细胞体的血滴中加一滴0.5~1%盐酸或1~5%醋酸,在显微镜下观察到红细胞破裂溶血,根据附红细胞体不因红细胞的破裂而运动活力受到影响,相反表现出运动速度加快,运动范围增大的特点,将附红细胞体与其它病原体区别开来,完成进一步的判别;
3)在上述确定有附红细胞体的血滴中,滴加一滴0.05~0.1%碘溶液,观察附红细胞体运动是否停止,若停止,再用磷酸盐缓冲液或生理盐水洗涤,若附红细胞体活动力不恢复,也不被碘着色,即可确定附红细胞体的存在,完成附红细胞体病的鉴别诊断。
CN 200510026213 2005-05-26 2005-05-26 附红细胞体病快速鉴别诊断方法 Pending CN1696691A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200510026213 CN1696691A (zh) 2005-05-26 2005-05-26 附红细胞体病快速鉴别诊断方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200510026213 CN1696691A (zh) 2005-05-26 2005-05-26 附红细胞体病快速鉴别诊断方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1696691A true CN1696691A (zh) 2005-11-16

Family

ID=35349509

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200510026213 Pending CN1696691A (zh) 2005-05-26 2005-05-26 附红细胞体病快速鉴别诊断方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1696691A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100371461C (zh) * 2006-02-27 2008-02-27 浙江大学 猪附红细胞体pcr检测方法
CN101948914A (zh) * 2010-07-05 2011-01-19 华中农业大学 温氏附红细胞体的环介导等温扩增检测方法
CN111296337A (zh) * 2020-03-24 2020-06-19 上海海洋大学 一种快速无伤鉴别三角帆蚌卵子成熟度的方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100371461C (zh) * 2006-02-27 2008-02-27 浙江大学 猪附红细胞体pcr检测方法
CN101948914A (zh) * 2010-07-05 2011-01-19 华中农业大学 温氏附红细胞体的环介导等温扩增检测方法
CN101948914B (zh) * 2010-07-05 2012-09-26 华中农业大学 一种环介导等温扩增方法在温氏附红细胞体体外检测中的应用
CN111296337A (zh) * 2020-03-24 2020-06-19 上海海洋大学 一种快速无伤鉴别三角帆蚌卵子成熟度的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Radonjic et al. Diagnosis of Trichomonas vaginalis infection: The sensitivities and specificities of microscopy, culture and PCR assay
Weerakoon et al. Cell-free DNA as a diagnostic tool for human parasitic infections
Inês et al. Efficacy of parasitological methods for the diagnosis of Strongyloides stercoralis and hookworm in faecal specimens
Evans et al. Criteria for the diagnosis of vaginal candidosis: evaluation of a new latex agglutination test
CN1696691A (zh) 附红细胞体病快速鉴别诊断方法
Overtoom et al. A first report of pulmonary melioidosis in Cambodia
El-Sayed et al. Acanthamoeba DNA can be directly amplified from corneal scrapings
Valadkhani et al. Molecular diagnosis of trichomoniasis in negative samples examined by direct smear and culture
Leber Intestinal amebae
Parija Hydatid fluid as a clinical specimen for the etiological diagnosis of a suspected hydatid cyst
Ikpeama et al. Prevalence of Vulvo-Vaginitis and Risk Factors Among Women of Reproductive Age in Port Harcourt
Salh et al. Evaluation of direct microscopy and culture method for detection of Trichomonas vaginalis in vaginal discharge and urine samples
Taylor et al. P787 Trichomonas vaginalis positivity rates by HIV status among women in a clinical study
Ullah et al. The Public Health and Clinical Importance of Amoebiasis
CN1265200C (zh) 一种检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸及其制备方法
Alazzawi et al. Study of Epidemiological Factors According to the Positive Response of Igg of Patients Infected with Blastocytsis hominis in Diyala province, Iraq
Dhari et al. Detection of Biofilm Producing Bacteria causing Co-infections with Leishmania Ulcers and their Relation with Matrix metalloproteinase-13 Enzyme
Shevchenko et al. Informative value of diaskintest in screening of genitourinary tuberculosis
Kadhim et al. Epidemiological and Biochemical changes of patients infected with Blastocystis hominis and Irritable bowel syndrome
Malakar et al. Encephalitis with JE, dengue and malaria in a tertiary care hospital of upper Assam
Bansal et al. Clinical and laboratory evidence of Trichomonas vaginalis infection among women of reproductive age in rural area of Malwa region of Punjab
Kock et al. P3-S7. 07 Detection of Trichomonas vaginalis in HIV positive women in Pretoria, South Africa
Mehlhorn et al. Landmarks in the Discovery of Blastocystis stages
Bhandari et al. Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases
Mardani-Kateki et al. Molecular detection of Pneumocystis jiroveci in wild rats in southwest of Iran.

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication