CN1850277A - γ－聚谷氨酸－顺铂复合物、制备及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及γ－聚谷氨酸－顺铂复合物，并提供该γ－聚谷氨酸－顺铂复合物的制备方法以及该复合物的用途，属于生物医药技术领域。本发明提供的γ－聚谷氨酸－顺铂复合物是指顺铂与聚谷氨酸供价结合的聚合物，其中的键合是通过聚谷氨酸的羧基基团与顺铂的氯原子基团之间实现。本发明的复合物具有一种新型的抗肿瘤效果，且制备方法也是简单易行、成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，并提供该γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法以及该复合物的用途，属于生物医药技术领域。
背景技术
γ-聚谷氨酸(γ-PGA)是由微生物合成的一种细胞外高分子量聚合物，由谷氨酸的α-氨基和γ-羧基缩合而成。Ivanovics等人首次发现炭疽芽孢杆菌的荚膜中含有γ-PGA(Ivanovics G，Bruchner V.Immunit atsforch.1937，90，304～318)，随后Bovarnick等人发现有些芽孢杆菌属细菌能够通过发酵培养积累γ-PGA(Bovarnick M，JBiol Chem.1942，145：415)。发酵培养积累的γ-PGA分子量范围从10kD～2000kD，可以制成不同的分子量应用于各种不同领域。
γ-PGA其分子链上存在大量的游离羧基(-COOH)，易与一些药物结合生成较稳定的复合物，在体内可被溶酶体降解为内源性谷氨酸，并释放出药物，是一种理想的药物载体；且不易产生积蓄和毒副作用，已被广泛应用于缓释以及靶向药物载体。
聚谷氨酸在医药上有广泛的应用，主要作为药物的缓释、靶向载体和外用药物的载体。聚谷氨酸作为生物可降解高分子聚合物，主要用于药物释放和送达载体及非永久性植入装置，它除了可满足一般物理、化学性能要求外，还可满足生物相容性要求。如Cell Therapeutics公司(CTI)开发的抗肿瘤药物——聚谷氨酸-紫杉醇[PG-TXL(CT22103)]，该产品用水溶性生物可分解的聚合体载体以增加紫杉醇输送到肿瘤部位的能力，小鼠在注射剂量为120mg/kg的PG-TXL时，可使肺癌细胞减少75％，而仅用紫杉醇(paclitaxel)只能使肺癌细胞减少58％。同时PG-TXL比紫杉醇更能抗肿瘤细胞的耐药。
但是目前国外所用的药物载体——γ-聚谷氨酸都是通过化学合成获得的，合成步骤复杂、产量低、因而成本极高，不利于产业化。因此，我们的发明目的之一就是要发明一种生产高效、低成本的作为药物载体的γ-聚谷氨酸方法。
顺铂(Cisplatin，Cis-diammin-odichloroplatinum II，CDDP)，化学名为(Z)-二氨二氯铂。顺铂是细胞毒性剂，其作用原理是：与DNA双链碱基形成交联，结果引起DNA链间交联，影响DNA的模板功能，进而抑制DNA和RNA的合成。其主要特点是抗癌作用显著，抗癌活性强，是临床最常用的抗癌药物之一。它主要用于卵巢癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞癌、食管癌、精原细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤等。然而，顺铂溶解度低、无靶向性、毒性大，因此在临床应用上仍受到很大限制。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种药物载体γ-聚谷氨酸与顺铂通过离子键结合形成γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，这样不但可以改善顺铂在水中溶解度，而且顺铂的毒性也大大降低。更为重要的一点是：该发明的复合物具有一种新型的抗肿瘤效果，即利用肿瘤组织所特有的EPR效应使其具有一定的被动靶向效果。
本发明的目的之二在于提供一种简单易行、成本低廉的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法。
本发明的目的之三在于提供该γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的用途。
本发明提供的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物是指顺铂与聚谷氨酸供价结合的聚合物。其中的键合是通过聚谷氨酸的羧基基团与顺铂的氯原子基团之间实现。这样通过羧基和顺铂形成新的配合物，从而将顺铂载于高分子侧链上，其通式为：
其中：m是5～50的正整数；
γ-PGA是小分子γ-聚谷氨酸聚合物，分子量为5kD～100kD。
本发明提供的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物中顺铂与小分子γ-聚谷氨酸的结构关系为：
n是40～800的正整数。
本发明提供的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其中小分子γ-聚谷氨酸聚合物的分子量进一步优选为20kD～80kD。
本发明提供的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其中小分子γ-聚谷氨酸聚合物的分子量再一步优选为35kD～60kD。
在详细介绍本发明的技术方案前对几个术语进行界定：
本发明所述的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)包括大分子γ-聚谷氨酸和小分子γ-聚谷氨酸两种：
其中大分子γ-聚谷氨酸指的是分子量为1000kD～2000kD，具有以下结构特征：
另外，小分子γ-聚谷氨酸指的是适用于药物载体的γ-聚谷氨酸，分子量为5kD～100kD，可由上述大分子γ-聚谷氨酸(γ-PGA)发酵降解而得，也可通过国外市场直接购买而得，本发明中用到的小分子γ-PGA对照品是从美国Sigama公司购买而来。
顺铂为(Z)-二氨二氯铂(CDDP)，具有以下结构特征：
本发明所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，是将小分子γ-聚谷氨酸和顺铂溶解于双蒸水中，搅拌使其充分反应，经分离纯化得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物。
本发明所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，是将顺铂与硝酸银溶于双蒸水中，反应后去沉淀，再将小分子γ-聚谷氨酸加入上清溶液搅拌，充分反应，经分离纯化得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物。
本发明所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，其中小分子γ-聚谷氨酸由大分子γ-聚谷氨酸经酸降解法制备而得，或者也可以通过国外市场上直接购买而得(美国Sigma公司)。
本发明所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，其中大分子γ-聚谷氨酸可以通过市场直接购买而得，也可以利用生物工程方法通过芽孢杆菌发酵(Bacillus Licheniformis ATCC 9945a)获得大量γ-PGA，并降解发酵所得的γ-聚谷氨酸，使之达到用作药物载体合适的分子量范围，然后用该载体与抗肿瘤药物顺铂结合，形成聚谷氨酸-顺铂复合物。发酵培养基组分为：麦芽糖50g/l，酵母膏10g/l，谷氨酸钠30g/l，NaCl 10g/l，KH2PO4 5g/l，MgSO4·7H2O 0.5g/l。经分离纯化得γ-聚谷氨酸，通过发酵制得的γ-聚谷氨酸。采用的γ-聚谷氨酸分离纯化方法包括有机溶剂沉淀法等。利用高速离心的方法除去发酵液中的菌体，在上清中加入低级醇类，如乙醇、甲醇，也可以是丙酮，加入量为发酵液的2-5倍，沉淀得到大分子γ-聚谷氨酸。蒸馏水溶解沉淀物，微滤除去不溶物，透析去除小分子物质，经冷冻干燥得大分子γ-聚谷氨酸白色粉末结晶。用酸降解法可以制备小分子γ-聚谷氨酸。
本发明的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物中所用的γ-聚谷氨酸为小分子γ-聚谷氨酸，称取上述制备的大分子γ-聚谷氨酸粉末，配成2％的γ-聚谷氨酸溶液，与等体积的0.05N HCl混合均匀或直接调pH2～3，高温高压(121℃，0.1MPa)10～30分钟或沸水浴30～100分钟，立即冰浴冷却，并调pH 7～8，然后透析并冷冻干燥，得到小分子γ-聚谷氨酸白色粉末结晶。
本发明得到的小分子γ-聚谷氨酸具有以下特点：
1、通过SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳等方法证明该产品的分子量为5kD～100kD。
2、本产品分子量小、体积小、活泼基多、易与药物结合形成较稳定的复合物。
本发明还提供了γ-聚谷氨酸-顺铂复合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明进一步提供了γ-聚谷氨酸-顺铂复合物在制备抗人类卵巢癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、前列腺癌和膀胱癌药物中的应用。
顺铂在小分子γ-聚谷氨酸上的加载程度可表示为：顺铂结合于载体上的总质量占复合物总质量的百分数(w/w)。
顺铂必须能够通过在该天然分子上已经存在的官能团连接到聚合物上，但不得改变药剂的活性。在下面给出的例子中，顺铂当处于未结合形式时是难溶于水的，而经过结合之后，则表现出在溶解度上的大大改善。此外，顺铂结合到聚谷氨酸上之后预期也将表现出许多优点。例如，药代动力学和在作用部位的保持性均比未结合的游离顺铂有很大的改善，效果提高。
本发明聚谷氨酸-顺铂复合物可通过将生物活性顺铂直接连接到上述的小分子γ-聚谷氨酸上来制备。即通过聚谷氨酸的羧基基团与顺铂的氯原子基团实现连接。具体连接反应为聚谷氨酸羧基上的氢原子与顺铂上的氯原子进行取代反应，从而生成聚谷氨酸-顺铂复合物。
现已发现，必须从复合物中除去未反应的顺铂，以确定本发明复合物的高效果、低毒性。未反应的顺铂可通过透析除去。经冷冻干燥后，得到聚谷氨酸-顺铂复合物白色粉末结晶。
为测定加载到聚谷氨酸上的药物量，可以用分光光度法来测定。具体是：顺铂能够与邻苯二胺(OPDA)沸水浴时反应生成浅蓝色溶液，并可在703nm处测定其OD值，绘出顺铂的标准曲线，从而计算出顺铂的含量。
本发明提供γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，是利用药物载体γ-聚谷氨酸与具有较好抗癌性能的顺铂通过离子键结合形成γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，这样不但顺铂水中溶解度可以得到很好的改善，而且顺铂的毒性也大大降低。更为重要的一点是：该发明的复合物具有一种新型的抗肿瘤效果，即利用肿瘤组织所特有的EPR效应使其具有一定的被动靶向效果。
本发明所提供一种γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法也是简单易行、成本低廉。
附图说明
图1为本发明发酵得到的γ-聚谷氨酸利用Nexus 670傅立叶红外光谱仪测定的红外图谱。
图2为本发明发酵得到的γ-聚谷氨酸利用AVANCE 500MHZ核磁共振仪测定的13C核磁共振图谱。
图3为本发明发酵得到的γ-聚谷氨酸利用AVANCE 500MHZ核磁共振仪测定的1H核磁共振图谱。
图4为聚谷氨酸琼脂糖凝胶电泳图。1号为γ-聚谷氨酸分子量标准品(购自美国Sigma公司)，分子量为97kD；2号也为γ-聚谷氨酸分子量标准品，分子量为13kD；3号为本发明的小分子γ-聚谷氨酸；4号为本发明的大分子γ-聚谷氨酸，即未降解对照。
图5为PGA-CDDP作用卵巢癌细胞OVCAR-324小时的细胞毒性实验图
图6为PGA-CDDP作用肝癌细胞BEL-740248小时的细胞毒性实验图。
图7为PGA-CDDP作用乳腺癌细胞Bcap-37 24小时的细胞毒性实验图。
图8为PGA-CDDP作用乳腺癌细胞Bcap-37 48小时的细胞毒性实验图。
图9为PGA-CDDP作用乳腺癌细胞Bcap-37 72小时的细胞毒性实验图。
图10为从存活率角度考察PGA-CDDP在正常昆明小鼠体内毒性实验图。
图11为从体重变化角度考察PGA-CDDP在正常昆明小鼠体内毒性实验图。
图12为从存活率角度考察PGA-CDDP在BALB/C雌性裸鼠体内抗肿瘤实验图。
图13为从体重变化角度考察PGA-CDDP在BALB/C雌性裸鼠体内毒性实验图。
图14为PGA-CDDP抑制肿瘤的实验图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行详细说明：
实施例1
(1)γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备
称取11.4mg硝酸银和20mg顺铂，溶于10ml双蒸水中，静置24小时，离心去沉淀，并过0.22μm滤膜进一步除去不溶物小颗粒，然后加入小分子γ-聚谷氨酸白色粉末结晶75mg，并调pH至7-8，于37℃避光搅拌反应48小时，然后对双蒸水透析24小时除去未结合的游离顺铂。将透析液冷冻干燥，得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物白色粉末结晶。通过此方案获得的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其中顺铂比γ-聚谷氨酸分子个数比约为25∶1，也就相当于m＝25。下面所叙述的实施例中用到的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物均为用此法制备而来。
称取11.4mg硝酸银和30mg顺铂，溶于10ml双蒸水中，静置24小时，离心去沉淀，并过0.22μm滤膜进一步除去不溶物小颗粒，然后加入小分子γ-聚谷氨酸白色粉末结晶75mg，并调pH至7-8，于37℃避光搅拌反应72小时，然后对双蒸水透析16小时除去未结合的游离顺铂。将透析液冷冻干燥，得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物白色粉末结晶。通过此方案获得的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其中顺铂比γ-聚谷氨酸分子个数比约为50∶1，也就相当于m＝50。此方法获得的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，虽然顺铂含量高，但考虑到成本问题故不采纳次法获得的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物。
称取10mg顺铂，溶于10ml双蒸水中，然后加入小分子γ-聚谷氨酸白色粉末结晶75mg，于室温静置24小时，然后对双蒸水透析24小时除去未结合的游离顺铂。将透析液冷冻干燥，得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物白色粉末结晶。通过此方案获得的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其中顺铂比γ-聚谷氨酸分子个数比约为5∶1，也就相当于m＝5。此法顺铂结合率低，故不予考虑。
(2)聚谷氨酸-顺铂复合物中顺铂含量的测定
将(1)中的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物白色粉末折合顺铂3～12μg溶于0.6ml双蒸水中，与0.6ml邻苯二胺(OPDA)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液(1.2mg/ml)混合，经沸水浴反应10分钟，立即在703nm处测其紫外吸收值，复合物中顺铂含量由标准工作曲线法标定。
实施例2
(1)生物发酵法获得大分子γ-聚谷氨酸
将芽孢杆菌(Bacillus licheniformis ATCC 9945a)经37℃斜面活化，斜面培养基：蛋白胨10％，氯化钠5％，酵母膏5％，琼脂20％，活化11小时。
种子培养：将活化菌种接入种子培养基，37℃、210r/min培养11h。种子培养基：蛋白胨10％，氯化钠5％，酵母膏5％。
发酵培养基：麦芽糖50g/l，酵母膏10g/l，谷氨酸钠30g/l，NaCl10g/l，KH2PO4 5g/l，MgSO4·7H2O 0.5g/l，装液量200ml/1000ml摇瓶，115℃灭菌20分钟。灭菌结束后，冷却，按5％接种量接种上述芽孢杆菌(Bacillus licheniformis ATCC 9945a)，37℃摇瓶培养，转速220r/min，在上述条件下进行摇瓶发酵实验，培养48h。
发酵结束后，发酵液加蒸馏水稀释4倍，用盐酸调发酵液pH至3左右，16000r/min、20min离心去菌体，然后将上清液pH调至8左右，再加入3倍体积冰无水乙醇，搅拌得聚谷氨酸沉淀。将沉淀重新溶解在蒸馏水中，超滤除去不溶物，然后反复透析除去小分子物质，最后将溶液冷冻干燥得白色粉末状物质，此白色物质即为γ-聚谷氨酸，产量可达到30g/l。
(2)小分子γ-PGA的制备
称取实施例2(1)获得的大分子γ-聚谷氨酸白色粉术，配成2％的大分子γ-聚谷氨酸溶液。取2％的大分子γ-聚谷氨酸溶液5ml与等体积的0.05N HCl混合均匀，沸水浴20分钟，立即冰浴冷却，并调pH至7-8终止反应。并通过1％的琼脂糖凝胶电泳鉴定降解产物的分子量，为20kD-100kD。通过琼脂糖凝胶电泳图可以看出，本发明的小分子γ-PGA分子量在97kD与13kD之间。由乌氏黏度计测定本发明小分子γ-PGA分子量在35kD-60kD。由小分子制备γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的方法同实施例1。
实施例3
小分子γ-聚谷氨酸的大量制备
称取大分子γ-聚谷氨酸白色粉末，配成2％的大分子γ-聚谷氨酸溶液，直接调pH 2～3。当高温高压(121℃，0.1MPa)分别作用15、20和30分钟后，立即冰浴冷却，并调pH 7～8，经透析、冷冻干燥得小分子γ-聚谷氨酸白色粉末结晶。并由乌氏黏度计测定本发明小分子γ-PGA分子量在80kD-100kD、35kD-60kD和5kD-20kD。小分子γ-聚谷氨酸制备γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的方法同实施例1。
实施例4
γ-聚谷氨酸-顺铂复合物对人卵巢癌OVCAR-3体外细胞毒性
将γ-聚谷氨酸-顺铂复合或游离顺铂溶于RPMI 1640培养基中(含胎牛血清20％)，用针头滤器过滤灭菌，加入上述培养基共100μl于96孔细胞培养板，每孔含细胞1×104个，使其呈一定浓度梯度。聚谷氨酸-顺铂复合物折合顺铂浓度为0～160μg/ml，每个浓度做4个复孔，以未加药组作为对照组。将上述细胞于二氧化碳培养箱中培养24小时后，每孔加入20μl浓度为5mg/ml的MTT缓冲液，继续培养5小时，小心吸出细胞培养板孔中的上清液，每孔加200μl二甲基亚砜。轻轻震摇10分钟于酶标仪上测其570nm处的吸光值。
每个浓度的4个复孔的吸光值以对照组吸光值的均值为标准计算出平均值(作为细胞存活率)后，对药物浓度作图。从实验结果发现：同等剂量条件下，PGA-CDDP要比游离的CDDP的体外细胞毒性要低；表明PGA-CDDP杀伤肿瘤细胞的生物学活性并未丧失。这是因为PGA-CDDP具有缓释的生物学特点。
实施例5
γ-聚谷氨酸-顺铂复合物对人肝癌细胞BEL-7402体外细胞毒性
同实施例4，将γ-聚谷氨酸-顺铂复合物溶于DMEM培养基中，含小牛血清10％。聚谷氨酸-顺铂复合物折合顺铂浓度为0～25μg/ml。实验结果表明：同等剂量条件下，PGA-CDDP要比游离的CDDP的体外细胞毒性要低；表明PGA-CDDP杀伤肿瘤细胞的生物学活性并未丧失。PGA-CDDP对人肝癌细胞BEL-7402有杀伤作用。
实施例6
γ-聚谷氨酸-顺铂复合物对人乳腺癌Bcap-37体外细胞毒性
同实施例4，将细胞于二氧化碳培养箱中分别培养24、48和72小时，检测γ-聚谷氨酸-顺铂复合物对人乳腺癌Bcap-37细胞系的杀伤作用。实验结果表明：同等剂量条件下，PGA-CDDP要比游离的CDDP的体外细胞毒性虽然要低，表明PGA-CDDP杀伤人乳腺癌Bcap-37细胞系的生物学活性并未丧失。
实施例7
γ-聚谷氨酸-顺铂复合物体内毒性
昆明小白鼠共20只，每只20g左右，雌雄各半，随机分成两组，每组10只。一组注射游离顺铂，另一组注射聚谷氨酸-顺铂复合物。给药方法为尾静脉注射，注射剂量为5mg/kg，共给药三次，分别于第0、5和10天给药。每天记录小鼠的存活情况和体重变化情况。结果见图10和图11。
从图10可以看出游离CDDP对正常小鼠毒性非常大，15天后小鼠死亡90％。而PGA-CDDP对小鼠没有毒性，30天后存活率仍为100％。
图11是从正常小鼠体重变化的角度来考察药物的体内毒性。我们发现：游离CDDP组小鼠体重在原有的基础上逐渐减少；表明游离CDDP对小鼠毒性大；而PGA-CDDP组小鼠体重在原有的基上是逐渐增加的，表明其对小鼠毒性低。
实施例8
γ-聚谷氨酸-顺铂复合物在人类移植瘤模型中的作用
BALB/C雌性裸鼠，4周龄，20g左右，人乳腺癌细胞Bcap-37。细胞于体外培养，培养基为DMEM，加10％小牛血清，37℃，5％CO2的培养箱中培养。裸鼠于腋下注射乳腺癌Bcap-37细胞，每只5×106个细胞，7天后成瘤，随机分3组，每组6只；第一组为生理盐水对照组，第二组为游离顺铂对照组，第三组为γ-聚谷氨酸-顺铂复合物组。给药方法为尾静脉注射，注射剂量为4mg/kg(折合成顺铂浓度)，共给药2次，分别于第0、和5天给药。每天记录小鼠的存活情况和体重变化情况。结果见图12和图13。
从图12可以看出PGA-CDDP能够延长荷瘤裸鼠的存活时间。而CDDP由于其毒性大的原因，并未能起到延长荷瘤裸鼠的存活时间的作用。
PGA-CDDP在荷瘤裸鼠体内毒性研究结果表明：注射PGA-CDDP荷瘤裸鼠的体重并未减少而是有逐渐增加的趋势(如图13)，因而PGA-CDDP毒性是很低的；而注射游离CDDP荷瘤裸鼠的体重有很明显的降低趋势，可见游离CDDP对荷瘤裸鼠毒性很大。
实施例9
γ-聚谷氨酸-顺铂复合物在人类移植瘤模型中的作用
同实施例8，建立人乳腺癌细胞Bcap-37裸鼠肿瘤模型。随机分3组，每组8只荷瘤裸鼠。第一组为PBS对照组，第二组为γ-聚谷氨酸-顺铂复合物给药组，剂量4mg/kg(折合成顺铂浓度)，第三组为γ-聚谷氨酸-顺铂复合物给药组，剂量12mg/kg(折合成顺铂浓度)。
给药方法均为尾静脉注射，共给药3次，分别于第0、2和4天给药。每天记录裸鼠肿瘤体积变化情况。结果见图14。
从图中可以看出：γ-聚谷氨酸-顺铂复合物对肿瘤有明显的抑制作用。
Claims (9)
1.一种γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其特征在于通式为：
其中：m是5～50的正整数；
γ-PGA是小分子γ-聚谷氨酸聚合物，分子量为5kD～100kD。
2.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其特征在于顺铂与小分子γ-聚谷氨酸的结构关系为：
或
n是40～800的正整数。
3.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其特征在于小分子γ-聚谷氨酸聚合物的分子量为20kD～80kD。
4.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，其特征在于小分子γ-聚谷氨酸聚合物的分子量为35kD～60kD。
5.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，其特征在于将小分子γ-聚谷氨酸和顺铂溶解于双蒸水中，搅拌使其充分反应，经分离纯化得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物。
6.如权利要求1所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，其特征在于将顺铂与硝酸银溶于双蒸水中，反应后弃沉淀，再将小分子γ-聚谷氨酸加入上清溶液搅拌，充分反应，经分离纯化得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物。
7.如权利要求5或者6所述的γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的制备方法，其特征在于小分子γ-聚谷氨酸由大分子γ-聚谷氨酸经酸降解法制备而得，而大分子γ-聚谷氨酸是通过生物发酵法制备而得，发酵培养基组分为：麦芽糖50g/l，酵母膏10g/l，谷氨酸钠30g/l，NaCl10g/l，KH2PO45g/l，MgSO4·7H2O 0.5g/l。
8.γ-聚谷氨酸-顺铂复合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.γ-聚谷氨酸-顺铂复合物在制备抗人类卵巢癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、前列腺癌和膀胱癌药物中的应用。
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|---|---|---|---|---|
| CN104815335A (zh) * | 2015-04-13 | 2015-08-05 | 南京泛太化工医药研究所 | 一种水溶性聚谷氨酸-顺铂复合物及其制备方法与应用 |
| CN108186672A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-06-22 | 中国药科大学 | α－聚谷氨酸－顺铂复合物的制备及应用 |
| CN110191713A (zh) * | 2016-12-19 | 2019-08-30 | 生物领先公司 | 包含聚γ-谷氨酸的用于缓解特应性皮肤症状的组合物 |
-
2006
- 2006-03-03 CN CNA2006100243530A patent/CN1850277A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104815335A (zh) * | 2015-04-13 | 2015-08-05 | 南京泛太化工医药研究所 | 一种水溶性聚谷氨酸-顺铂复合物及其制备方法与应用 |
| CN110191713A (zh) * | 2016-12-19 | 2019-08-30 | 生物领先公司 | 包含聚γ-谷氨酸的用于缓解特应性皮肤症状的组合物 |
| CN108186672A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-06-22 | 中国药科大学 | α－聚谷氨酸－顺铂复合物的制备及应用 |
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