CN1824244A - 乙肝解毒中药制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种乙肝解毒中药制剂的质量控制方法，该质量控制方法保证了乙肝解毒中药制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

Description

乙肝解毒中药制剂的质量控制方法

技术领域：

本发明涉及乙肝解毒中药制剂的质量控制方法，属于药品技术的领域。

技术背景：

乙型肝炎是危害当今人民身体健康的一种常见病，乙肝解毒制剂由黄柏、草河车、黄芩、大黄、胡黄连、土茯苓、黑矾、贯众共八味药组成；具有清热解毒，疏肝利胆的功效，用于治疗乙型肝炎，辨证属于肝胆湿热内蕴者。其中“乙肝解毒胶囊”在部颁中药成方制剂第一册有记载，该药物在临床上应用多年，在治疗肝区热痛，全身乏力，口苦咽干，头晕耳鸣或面红耳赤，心烦易怒，大便干结，小便少而黄，舌苔黄腻，脉滑数或弦数等症方面取得比较满意的治疗效果，但经我们研究发现，“乙肝解毒胶囊”存在质量控制标准简单落后，产品质量不易控制的缺点。黄柏、大黄和黄芩均为乙肝解毒制剂中起主要作用的药物，而现有制剂质量标准中并没有对以上药物进行含量或鉴别研究，故现有质量控制方法不能有效控制乙肝解毒制剂的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。

为有效控制产品质量，我们建立了乙肝解毒制剂的新的质量控制方法，该方法采用照薄层色谱法对大黄和黄芩进行鉴别，采用高效液相色谱法对盐酸小檗碱成分进行含量测定。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种乙肝解毒的中药制剂的质量控制方法，所述乙肝解毒的中药制剂是口服制剂，优选的是胶囊剂、片剂或颗粒剂。

本发明的乙肝解毒制剂其配方和制法如下：

按照重量组份计算：它主要由黄柏20-100份、草河车20-100份、黄芩20-100份、大黄20-100份、胡黄连20-100份、土茯苓40-150份、黑矾20-100份、贯众200-400份制备而成。

优选的是，按照重量组份计算：它主要由黄柏58份、草河车58份、黄芩58份、大黄58份、胡黄连58份、土茯苓87份、黑矾58份、贯众290份制备而成。

以上组成可制成药物制剂1000剂，所述1000剂指，制成的成品药物制剂，如制成胶囊制剂1000粒，片剂1000片，颗粒剂1000g，液体制剂1000ml等，

以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤为单位，或以吨为单位。

本发明的制剂的制备方法可以采用以下方法：

通过将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、片剂、口服液、糖浆、颗粒剂。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，还可以是高纯度提取物，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。

优选的制备方法如下：土茯苓、黑矾粉碎成细粉，其余黄柏等六味，加水煎煮两次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入上述粉末混匀，再按照制剂学常规技术用不同的方法制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。

本发明的制剂，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成抗栓制剂的载体，如：苯甲酸或钾盐、甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、尼泊尔甲酯、尼泊尔乙酯、尼泊尔丙酯、尼泊尔丁酯、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司盘-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料等。

本发明提供的是针对以上乙肝解毒制剂的质量控制方法，为控制乙肝解毒制剂的质量。针对其特点及本发明配方，我们提供了如下质量控制方法：

对性状进行观察，对内容物大黄和黄芩进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的盐酸小檗碱进行含量测定。

其中对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

对内容物大黄和黄芩进行鉴别，步骤是

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm。石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一。

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加甲醇超声提取，滤过，滤液蒸干，加水溶解，再加盐酸，置水浴中加热，立即冷却，用乙醚提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10-50∶5-20∶0.1-5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置具塞锥形瓶中，加甲醇超声提取，滤过，滤液挥干，残渣加水溶解，用乙醚提取，合并水层，以水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝1-10∶1-10∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，预平衡10-60分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5-5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。

对含有的盐酸小檗碱进行含量测定，步骤是

盐酸小檗碱采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH1-6)＝10-50∶5-30∶100-200为流动相；检测波长为200-500nm；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；分别精密称取胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密加入甲醇-水-盐酸＝50-100∶10-30∶0.5-5的混合溶液，超声提取，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

优选的方法是

性状：步骤如下：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

鉴别：步骤如下：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm。石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一。

(2)分别取胶囊剂、片剂1-5g，或取颗粒剂5-15g，加甲醇10-100ml超声10-100分钟，滤过，取滤液3-10ml，蒸干，加水5-30ml使溶解，再加盐酸0.5-5ml，置水浴中加热10-60分钟，立即冷却，用乙醚提取1-5次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各3-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10-50∶5-20∶0.1-5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂1-5g，或取颗粒剂5-15g，置具塞锥形瓶中，加甲醇10-100ml超声10-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水10-50ml溶解，用乙醚提取1-6次，合并水层，以水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤1-5次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液各3-25μl，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝1-10∶1-10∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，预平衡10-60分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5-5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

检查：步骤如下：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。

含量测定：步骤如下：

盐酸小檗碱采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH1-6)＝10-50∶5-30∶100-200为流动相；检测波长为200-500nm，理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，应不低于3000；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱0.01-0.1mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；分别精密称取胶囊剂、片剂0.5g，或取颗粒剂5.0g，精密加入甲醇-水-盐酸＝50-100∶10-30∶0.5-5的溶液10-100ml，超声处理10-60分钟，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-25μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

本发明的方法是经过研究得到的，本发明认为，黄柏为本制剂中发挥作用的主要药物，其中盐酸小檗碱又是黄柏的主要有效成分。故本制剂应对黄柏中盐酸小檗碱的含量进行测定。黄柏中盐酸小檗碱的含量测定方法中，文献报道较多的有分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。经我们研究发现，本制剂采用分光光度法和薄层扫描法对盐酸小檗碱进行含量测定时，其专属性不强，相对标准偏差均较高效液相色谱法大，测定结果不稳定，故本发明采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。由于本发明制剂中土茯苓、黑矾以药粉入药，由于黑矾为矿物药，故本发明只对制剂土茯苓进行显微鉴别。另外，本发明还对大黄和黄芩药材进行薄层鉴别研究，并选择以大黄素对照品为对照，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10-50∶5-20∶0.1-5为展开剂鉴别制剂大黄药材；以黄芩苷对照品为对照，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝1-10∶1-10∶0.5-5∶0.5-5为展开剂鉴别制剂中黄芩药材。结果其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。故采用本发明质量控制方法可有效控制这种乙肝解毒的中药制剂的质量，从而保证该制剂的临床疗效。

本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。

一、盐酸小檗碱含量测定方法研究

1、供试品溶液制备方法研究：

由于盐酸小檗碱易溶于甲醇、甲醇-水-盐酸等溶剂，样品处理过程中采用甲醇、甲醇-水-盐酸(60∶35∶5)、甲醇-水-盐酸(80∶19∶1)的溶剂提取，测定结果见下表：

提取溶剂	含量
		甲醇	0.1085
甲醇-水-盐酸(60∶35∶5)	0.1354
		甲醇-水-盐酸(80∶19∶1)	0.1782

试验结果表明，用甲醇-水-盐酸(80∶19∶1)为提取剂干扰小，因此质量标准正文选用甲醇-水-盐酸(80∶19∶1)为提取剂。

2、流动相的选择：

流动相1：以甲醇、乙腈、0.05mol/L磷酸二氢钠不同比例的混合溶液为流动相。

流动相2：以乙腈、四氢呋喃、0.05mol/L磷酸二氢钾不同比例的混合溶液为流动相。

流动相3：以0.02mol/L磷酸盐缓冲液、乙腈不同比例的混合溶液为流动相。

结果：以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH1-6)＝10-50∶5-30∶100-200为流动相；阴性样品色谱图在盐酸小檗碱位置处无假阳性峰，盐酸小檗碱和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即在该条件下盐酸小檗碱与其他组分分离完全。

3、重现性试验

取本品，按本发明中盐酸小檗碱含量测定项下供试液制备方法分别制备5份供试液，进样，测定峰面积，计算结果列入下表。结果表明，该试验重现性良好。

进样次数	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								含量(％)	0.1808	0.1793	0.1912	0.1937	0.1888	0.1868	3.42

4、回收率试验

精密称取已测定含量的制剂(平均含量0.1868％)适量，加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按质量标准(修订)正文中含量测定方法处理样品。分别制备5份，测定(图10)，结果见下表。平均回收率为99.26％，RSD为1.49％。

试验份数	样品量(mg)	含盐酸小檗碱(mg)	加入盐酸小檗碱(mg)	测得量(mg)	回收率(％)	平均回收率(％)	RSD％
								12345	0.37430.38650.38240.38030.4512	0.69910.72190.71430.71030.8429	0.53	1.22970.24241.23160.24720.3682	100.198.297.6101.399.1	99.26	1.49

5、盐酸小檗碱是黄柏中的主要有效成分，盐酸小檗碱的含量测定方法中文献报道较多有紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。经我们研究发现，本制剂采用紫外分光光度法及薄层扫描法对牡丹皮中丹皮酚进行含量测定，其专属性不强，误差大，测定结果不稳定，相对标准偏差均较高效液相色谱法大，故本发明采用高效液相色谱法测定丹皮酚的含量，以下是本发明制剂采用高效液相色谱法与紫外分光光度法及薄层扫描法测定结果比较(n＝5)：

样品	高效液相色谱法		紫外分光光度法		薄层扫描法
							含量(％)	RSD(％)	含量(％)	RSD％)	含量(％)	RSD％)
	123	0.45100.43980.4480	1.081.250.91	0.45980.41870.4003	3.243.342.47	0.45220.42080.4057							3.152.683.25

二、大黄薄层鉴别研究

以大黄素对照品制备对照品溶液。

供试品溶液制备方法一：取药物用甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，再加盐酸1ml，置水浴中加热后立即冷却，用乙醚提取，乙醚液蒸干，残渣加氯仿制得供试品溶液。同法制备缺大黄药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法二：取药物用乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩物以乙醚提取，乙醚层用5％碳酸钠溶液萃取，取水层酸化后，以氯仿提取、浓缩制得供试品溶液。同法制备缺大黄药材的阴性供试品溶液。

展开剂选择：分别以正己烷、乙酸乙酯和甲酸不同比例的混合溶液；以正己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：结果表明，方法一取样量较小，简单易操作。另外以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10-50∶5-20∶0.1-5为展开剂，分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰。最佳展开剂为：正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)。

三、黄芩薄层鉴别研究

以黄芩苷对照品制备对照品溶液。

供试品溶液制备方法一：取药物用甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解后，用乙醚提取，取水层，以水饱和的正丁醇提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇制得供试品溶液。同法制备缺黄芩药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法二：取药物用甲醇超声处理，滤过，即得得供试品溶液。同法制备缺黄芩药材的阴性供试品溶液。

展开剂选择：分别以醋酸乙酯、丁酮、甲酸、水不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法一制备供试品溶液，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝1-10∶1-10∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1.2∶1)。

本发明的优点在于：本发明的质量控制方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1：

性状：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

鉴别：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm；石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一；

(2)分别取胶囊剂、片剂2.0g，或取颗粒剂10.0g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，取滤液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液10μl，对照液4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝30∶10∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；

(3)分别取胶囊剂、片剂2.0g，或取颗粒剂10.0g，置具塞锥形瓶中，加甲醇40ml超声30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，取水层，以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液各5μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1.2∶1为展开剂，预平衡30分钟，展开，展距约12cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

检查：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

含量测定：

盐酸小檗碱采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH3)＝28∶12∶164为流动相；流速：1.2ml/min，温度：45℃，检测波长为430nm。理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，应不低于3500；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱0.04mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；分别取胶囊剂、片剂0.5g，或取颗粒剂5.0g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇-水-盐酸＝80∶19∶1的溶液25ml，称定重量，密塞，超声处理30分钟，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

实施例2：

性状：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

鉴别：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm。石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一。

(2)分别取胶囊剂、片剂5g，或取颗粒剂15g，加甲醇100ml超声100分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸5ml，置水浴中加热60分钟，立即冷却，用乙醚提取5次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝50∶5∶5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂5g，或取颗粒剂15g，置具塞锥形瓶中，加甲醇100ml超声60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水50ml溶解，用乙醚提取6次，合并水层，以水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤5次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液各3μl，分别点于同一以含10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝10∶1∶5∶0.5为展开剂，预平衡60分钟，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

检查：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。

含量测定：

盐酸小檗碱采用高效液相色谱法，色谱柱为C8柱，以乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH6)＝10∶30∶200为流动相；检测波长为200nm，理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，应不低于3000；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱0.01mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；分别精密称取胶囊剂、片剂0.5g，或取颗粒剂5.0g，精密加入甲醇-水-盐酸＝100∶10∶0.5的溶液100ml，超声处理60分钟，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

实施例3：

性状：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

鉴别：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm。石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一。

(2)分别取胶囊剂、片剂1g，或取颗粒剂5g，加甲醇10ml超声10分钟，滤过，取滤液3ml，蒸干，加水5ml使溶解，再加盐酸0.5ml，置水浴中加热10分钟，立即冷却，用乙醚提取1次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10∶20∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂1g，或取颗粒剂5g，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml超声10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml溶解，用乙醚提取1次，合并水层，以水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤1次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液各25μl，分别点于同一以含1％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝10∶1∶0.5∶5为展开剂，预平衡10分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

检查：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。

含量测定：

盐酸小檗碱  采用高效液相色谱法，色谱柱为C4柱，以甲醇∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH1)＝50∶5∶100为流动相；检测波长为500nm，理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，应不低于3000；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱0.1mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；分别精密称取胶囊剂、片剂0.5g，或取颗粒剂5.0g，精密加入甲醇-水-盐酸＝50∶30∶5的溶液10ml，超声处理10分钟，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

Claims (8)

1、一种乙肝解毒制剂的质量控制方法，其特征在于，包括对性状进行观察，对内容物大黄和黄芩进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的盐酸小檗碱进行含量测定。

2、权利要求1的方法，其特征在于，所述乙肝解毒制剂是口服制剂。

3、权利要求2的方法，其特征在于，所述口服制剂是胶囊、片剂、口服液、糖浆或颗粒剂。

4、权利要求1的方法，其特征在于，所述乙肝解毒由如下重量份的中药原料制成：黄柏20-100份、草河车20-100份、黄芩20-100份、大黄20-100份、胡黄连20-100份、土茯苓40-150份、黑矾20-100份、贯众200-400份。

5、权利要求1的方法，其特征在于，所述乙肝解毒由如下重量份的中药原料制成：黄柏58份、草河车58份、黄芩58份、大黄58份、胡黄连58份、土茯苓87份、黑矾58份、贯众290份。

6、权利要求1的方法，其特征在于，其中对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

对内容物大黄和黄芩进行鉴别，步骤是

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm。石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一。

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加甲醇超声提取，滤过，滤液蒸干，加水溶解，再加盐酸，置水浴中加热，立即冷却，用乙醚提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10-50∶5-20∶0.1-5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置具塞锥形瓶中，加甲醇超声提取，滤过，滤液挥干，残渣加水溶解，用乙醚提取，合并水层，以水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝1-10∶1-10∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，预平衡10-60分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5-5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。

对含有的盐酸小檗碱进行含量测定，步骤是

盐酸小檗碱  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH1-6)＝10-50∶5-30∶100-200为流动相；检测波长为200-500nm；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇溶解，即得对照品溶液；分别精密称取胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密加入甲醇-水-盐酸＝50-100∶10-30∶0.5-5的混合溶液，超声提取，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

7、权利要求1的方法，其特征在于，

其中对性状进行观察，步骤如下：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

对内容物大黄和黄芩进行鉴别，步骤如下：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm。石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一。

(2)分别取胶囊剂、片剂1-5g，或取颗粒剂5-15g，加甲醇10-100ml超声10-100分钟，滤过，取滤液3-10ml，蒸干，加水5-30ml使溶解，再加盐酸0.5-5ml，置水浴中加热10-60分钟，立即冷却，用乙醚提取1-5次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各3-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝10-50∶5-20∶0.1-5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂1-5g，或取颗粒剂5-15g，置具塞锥形瓶中，加甲醇10-100ml超声10-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水10-50ml溶解，用乙醚提取1-6次，合并水层，以水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤1-5次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液各3-25μl，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝1-10∶1-10∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，预平衡10-60分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5-5％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤如下：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。

对含有的盐酸小檗碱进行含量测定，步骤如下：

盐酸小檗碱  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH1-6)＝10-50∶5-30∶100-200为流动相；检测波长为200-500nm，理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，应不低于3000；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱0.01-0.1mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；分别精密称取胶囊剂、片剂0.5g，或取颗粒剂5.0g，精密加入甲醇-水-盐酸＝50-100∶10-30∶0.5-5的溶液10-100ml，超声处理10-60分钟，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-25μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。

8、权利要求1的方法，其特征在于，步骤如下：

对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：产品内容物为为灰黑色或深褐色粉末；味苦；

对于片剂：药物显灰黑色或深褐色；味苦；

对于颗粒剂：产品为灰黑色或深褐色的颗粒；

对内容物大黄和黄芩进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒类圆形或圆多角形，直径8～48μm，脐点裂缝状、三叉状、十字状或星状，大粒层纹明显；复粒由2～4分粒组成，草酸钙针晶长40～180μm，直径约至5μm；石细胞较多，淡棕色或无色、呈短圆形、类方形、类多角形、长方形或类三角形，边缘稍不平整或有尖突，直径25～28μm，壁厚8～48μm，有的厚薄不匀，孔沟大多细密并分枝，胞腔宽狭不一；

(2)分别取胶囊剂、片剂2.0g，或取颗粒剂10.0g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，取滤液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液10μl，对照液4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸＝30∶10∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；

(3)分别取胶囊剂、片剂2.0g，或取颗粒剂10.0g，置具塞锥形瓶中，加甲醇40ml超声30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，取水层，以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，继用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试液及对照液各5μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1.2∶1为展开剂，预平衡30分钟，展开，展距约12cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗绿色的斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的盐酸小檗碱进行含量测定，步骤是：

盐酸小檗碱  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇或乙腈∶四氢呋喃∶0.05mol/L磷酸二氢钾(0.7％三乙胺，磷酸调pH3)＝28∶12∶164为流动相；流速：1.2ml/min，温度：45℃，检测波长为430nm。理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，应不低于3500；精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱0.04mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；分别取胶囊剂、片剂0.5g，或取颗粒剂5.0g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇-水-盐酸＝80∶19∶1的溶液25ml，称定重量，密塞，超声处理30分钟，放冷，用提取液补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、片剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于1mg/g、颗粒剂中含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.1mg/g。