CN1813894A - 复方丹参口腔崩解片及制备方法和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复方丹参口腔崩解片及制备方法和质量控制方法，它是由丹参450g、三七141g、冰片8g和适当辅料制备而成的；与现有技术相比，本发明口腔崩解片服用方便，吸收更快，生物利用度更高，消化道粘膜刺激作用小，其制备工艺有利于工业化大生产；本发明质量控制方法增加了丹酚酸B的含量测定和气相色谱法测定冰片的含量测定，使丹参的水溶性及脂溶性有效成分得到全面控制，其精密度高，重现性好，可操作性强，提高了复方丹参制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂的临床疗效。
Description
技术领域：本发明涉及一种复方丹参口腔崩解片及制备方法和质量控制方法，属于中药的技术领域。
背景技术：心脑血管病是当今世界范围内危害人类健康的主要疾病，寻找一种效果好、服用方便、利于普及以达到预防和治疗目的的心血管病药物，是目前急需解决的问题。现在国内市场上应用较多的有复方丹参片及复方丹参滴丸，复方丹参片在治疗心脑血管疾病方面有着肯定的疗效。而近几年来研究开发的新型固体速释制剂-口腔崩解片，在服用时可不用水辅助吞咽，能在口腔中1min内迅速崩解成细颗粒，借助吞咽动力，即可完成服药过程，与普通片剂相比，其吸收更快，生物利用度更高，消化道粘膜刺激作用小，且有利于工业化大生产。另外，现有的复方丹参片质量控制方法过于简单粗糙，不能全面考察和控制产品的质量，从而影响了药品的临床疗效；因此，现在急需寻找更理想的制备工艺和更稳定的质量控制方法。
发明内容：
本发明的目的在于：提供一种复方丹参口腔崩解片及制备方法和质量控制方法，本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种疗效好、服用方便、制备方法科学合理的工艺方法以及质量控制方法，能有效的控制和提高产品质量。
本发明是这样构成的：它是由丹参450g、三七141g、冰片8g和微晶纤维素100g、低取代羟丙基纤维素20g、交联聚维酮200g、阿司帕坦10g、硬脂酸镁5g制备而成的。
本发明所述的复方丹参口腔崩解片的制备方法：取丹参加8倍量乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在55～60℃时测相对密度为1.30±0.02的浸膏，备用；药渣加8倍量50％乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在55～60℃时测相对密度为1.35±0.02的浸膏，备用；药渣加8倍量水煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至在55～60℃时测相对密度为1.35±0.02的浸膏，与第一、二次乙醇回流提取的浸膏混合，于60℃±5℃干燥，粉碎，备用；冰片用β-环糊精包合，三七粉碎成细粉，过100目筛，与干浸膏粉、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素、β-环糊精包合物混合均匀，用95％乙醇制粒，干燥，干颗粒与阿司帕坦、硬脂酸镁、微晶纤维素混合均匀，压成1000片，包装，即得。
其中，冰片包合物的制备方法为：8g冰片溶于242.4ml 95％乙醇中，制成冰片的饱和醇溶液，48.48g β-环糊精溶于1212ml 55℃热水中，制成β-环糊精的饱和水溶液，将冰片饱和醇溶液加入在缓慢搅拌状态下的β-环糊精的饱和水溶液中，并继续搅拌30分钟，冷藏24小时，抽滤，滤渣用冷水冲洗，抽干后于40℃干燥，即得冰片包合物。
本发明所述的复方丹参口腔崩解片的质量控制方法：主要包括性状、检查，以及鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括以丹参酮IIA对照品、冰片对照品、三七对照药材、三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品为对照的薄层鉴别；含量测定包括以丹参酮IIA对照品、丹酚酸B对照品为对照和气相色谱含量测定方法。
丹参、冰片的鉴别方法是以丹参酮IIA对照品、冰片对照品为对照，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂的薄层鉴别方法；三七的鉴别方法是以三七对照药材、三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2为展开剂的薄层鉴别方法。
具体的说，鉴别方法包括以下项目的部分或全部：
(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
丹参的含量测定方法包括以甲醇∶水＝73∶27为流动相和以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相的高效液相测定方法；冰片的含量测定方法是以龙脑、异龙脑对照品为对照的气相色谱法。
具体的说，含量测定方法包括以下项目的部分或全部：
(1)丹参酮IIA 照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg；
(3)冰片 照中国药典2005版一部附录VI E中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
总的来说，本发明所述质量控制方法包括：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别：(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：崩解时限：取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取复方丹参口腔崩解片1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒；
其他 应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；
含量测定：(1)丹参酮IIA 照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg；
(3)冰片 照中国药典2005版一部附录VI E中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
心血管疾病基本病机是气虚血淤，心脉淤滞，因此益气活血应当是治疗心血管病的基本治法。本发明复方丹参制剂主要成分为丹参、三七、冰片。其中丹参苦中微寒，可治血通脉，又可祛淤养血；三七味甘微苦，为活血化淤之要药，可增加冠脉血流量；冰片性辛寒，为开窍醒神、清热止痛之上品。以上诸药配伍，有活血化淤，通经活络，理气止痛，醒神开窍之功效。用于心血管疾病可显著扩张冠状动脉，增加血流量，减少心肌耗氧量，改变血液流变性，对心血管疾病有很好的预防和治疗作用。
与现有技术相比，本发明口腔崩解片能在口腔中迅速崩解，服用方便，吸收更快，生物利用度更高，消化道粘膜刺激作用小，其制备工艺有利于工业化大生产；改剂成为口腔崩解片，能充分发挥其剂型优势，有利于患者用药。此外，本发明质量控制方法增加了水溶性主要有效成份丹酚酸B的含量测定和气相色谱法测定复方丹参口腔崩解片中冰片的含量测定，使丹参的水溶性及脂溶性有效成份得到全面控制，其精密度高，重现性好，可操作性强，提高了复方丹参制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂的临床疗效。
本申请人进行了一系列实验来选择本发明药物制剂的制备工艺和质量控制方法，以保证其科学、合理、可行，并具有良好的治疗效果。
一、制备工艺
本发明制剂为口腔崩解片，属复方丹参片的改剂型品种，因此在原复方丹参片的制备工艺基础上，结合口腔崩解片的剂型特点，选用各类辅料对制备工艺进行优化筛选，以确定最佳制备工艺。
1.提取工艺的选择与确定
复方丹参片质量标准收载于《中国药典》2000年版一部(现收载于《中国药典》2005年版一部)，标准收载了药材的提取方法，提取时间，浸膏密度等相关工艺参数，但未明确水提及醇提所用的溶剂用量，现以出膏量为指标对提取用水及提取用乙醇量进行了优化筛选，试验结果见表1。
表1提取用溶剂用量的选择
| 序号 | 溶剂用量(倍) | 出膏率(％) |
| 1 | 95％乙醇10 | 61.2 |
| 50％乙醇10 | ||
| 水10 | ||
| 2 | 95％乙醇8 | 58.8 |
| 50％乙醇8 | ||
| 水8 |
| 3 | 95％乙醇6 | 43.4 |
| 50％乙醇6 | ||
| 水6 |
结果表明，丹参用95％乙醇、50％乙醇及水提取时其溶剂最佳用量均为8倍量，采用此剂量的溶剂，能充分提取丹参中的脂溶性及水溶性有效成份。
2、制剂工艺的筛选
根据国内同类产品规格及临床用量，各类辅料的国内相关制剂应用情况，以颗粒流动性、可压性(硬度)，制得成品的崩解时限、稳定性等为筛选指标。
表2制剂处方筛选
| 组成 | 处方1 | 处方2 | 处方3 | 处方4 | 处方5 | 处方6 | |
| 浸膏量 | 1个处方丹参所提量 | 1个处方丹参所提量 | 1个处方丹参所提量 | 1个处方丹参所提量 | 1个处方丹参所提量 | 1个处方丹参所提量 | |
| 三七粉(g) | 141 | 141 | 141 | 141 | 141 | 141 | |
| 微晶纤维素(g) | 561 | 350 | 100 | -- | 200 | 100 | |
| 微粉硅胶(g) | 60 | -- | -- | -- | -- | -- | |
| 交联聚维酮(g) | 48 | 45 | 200 | 200 | 50 | 200 | |
| 甘露醇(g) | 50 | -- | -- | -- | -- | -- | |
| 交联羧甲基纤维素钠(g) | -- | -- | -- | -- | 50 | -- | |
| 羧甲基淀粉钠(g) | -- | -- | -- | 20 | -- | -- | |
| 低取代羟丙基纤维素(g) | 112 | 70 | 20 | 20 | 50 | 20 | |
| 硬脂酸镁(g) | 3 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | |
| 阿司帕坦(g) | 15 | 10 | 10 | 10 | 15 | 10 | |
| 评价指标及结果 | 颗粒流动性 | 良好 | 一般 | 一般 | 较差 | 良好 | 良好 |
| 颗粒可压性 | 良好 | 良好 | 一般 | 较差，粘冲 | 良好 | 良好 | |
| 片剂外观 | 棕色 | 棕色 | 棕色 | 棕色 | 棕色 | 棕色 | |
| 片面光洁度 | 良好 | 一般 | 不光洁 | 不光洁 | 一般 | 良好 | |
| 崩解时限 | ＜1min | ＞1min | ＞1min | ＞1min | ＞1min | ＜1min | |
| 口味 | 较好 | 一般 | 一般 | 一般 | 较好 | 较好 | |
处方1：称取处方量的浸膏，加入三七粉、1/3量的微晶纤维素，1/3量的低取代羟丙基纤维素，1/3量的交联聚维酮，混合，干燥，粉碎，与剩余的微晶纤维素、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素及微粉硅胶、甘露醇、阿司帕坦、硬脂酸镁、冰片包合物混合均匀，压片，所得片子外观、崩解等良好，但片重较大。
处方2：称取处方量的浸膏，烘干，粉碎，干浸膏粉与三七粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮及阿司帕坦混合均匀，用95％乙醇制粒，干燥，干颗粒中加入冰片包合物、硬脂酸镁，混匀，压片，所压片子崩解时限不合格。
处方3：称取处方量的浸膏与三七粉、微晶纤维素、交联聚维酮、阿司帕坦混合，干燥，粉碎，与低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁及冰片包合物混合，压片，所得片子片面不光洁，崩解时限超标。
处方4：称取处方量的浸膏，烘干，粉碎，干浸膏粉与三七粉、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、冰片包合物及阿司帕坦混合均匀，压片，所压片子崩解时限不合格，且有粘冲现象。
处方5：称取处方量的浸膏与三七粉、微晶纤维素、代取代羟丙基纤维素、阿司帕坦混合，干燥，粉碎，与交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、冰片包合物混合，压片，所得片子崩解时限超标。
处方6：称取处方量的浸膏，烘干，粉碎，干浸膏粉与三七粉、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素、冰片包合物混合均匀，用95％乙醇制粒，干燥，干颗粒与阿司帕坦、硬脂酸镁、微晶纤维素混合均匀，压片，所得片子各项指标均比较理想。
上述试验结果表明，采用处方6所得的成品各项指标均符合标准规定要求，因此复方丹参口腔崩解片采用处方6进行中试生产，三批中试产品的试验数据见下表：
表3三批中试产品的试验结果
| 批号 | |||
| 投料处方量(个) | 10 | 10 | 10 |
| 总投料量(kg) | |||
| 丹参投料量(kg) | 4.5 | 4.5 | 4.5 |
| 三七投料量 | 1.49 | 1.49 | 1.49 |
| 三七粉投料量(kg) | 1.41 | 1.41 | 1.41 |
| 冰片投料量(kg) | 0.08 | 0.08 | 0.08 |
| 微晶纤维素(kg) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 低取代羟丙基纤维素(kg) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 交联聚维酮(kg) | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 阿司帕坦(kg) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 硬脂酸镁(kg) | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 理论产量(片) | 10000 | 10000 | 10000 |
| 实际产量(片) | 8028 | 7632 | 8100 |
| 成品率(％) | 80.28 | 76.32 | 81.0 |
结论：本发明制剂三批中试产品试验结果表明，本发明制剂工艺基本合理，工艺稳定，成品收得率较高，所得成品经质量检验，结果表明均符合规定。
二、质量控制方法研究
1、样品及对照药来源
样品：本申请人自制，批号为：050101、050102、050103。
丹参酮II A对照品(中国药品生物制品检定所提供)，批号：110766-200416；
丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所提供)，批号：111562-200302；
2、含量限度
本发明制剂规格为0.73g，复方丹参口腔崩解片需要定量的三个含量指标，有两个都是采用高效液相色谱法测定，每片含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.2mg；每片含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于5.0mg；冰片含量测定采用气相色谱法测定，每片含冰片以龙脑(C10H18O)和异龙脑(C10H18O)的总和计，不得少于5.0mg。
3、性状
本发明制剂为口腔崩解片，由丹参浸膏粉、三七细粉与冰片加适量辅料经制粒后压片而成，丹参浸膏粉为淡黄色粉末，三七细粉为浅棕色粉末，所用辅料为白色或类白色，因此本发明制剂性状应为浅棕色片；气微，味甜，微苦。
4、鉴别
参考《中国药典》2005年版一部复方丹参片鉴别项下内容，用薄层的方法对本发明制剂主药丹参、冰片和三七进行鉴别。
(1)丹参、冰片的薄层鉴别
①提取溶剂的选择
a、取本发明制剂5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
b、取本发明制剂5片，研碎，加甲醇20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c、取本发明制剂5片，研碎，加乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
综合考虑上述三种提取溶剂，效果都行，考虑经济与习惯，选择乙醚作为提取溶剂。
②点样量的选择
经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl、10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。
③专属性实验
取缺丹参、冰片的阴性样品2.0g，同提取a项法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。
2、三七的薄层鉴别
①提取溶剂的选择
a、取[鉴别]①项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。
b、取[鉴别]①项下的备用药渣，加乙酸乙酯25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，无明显相同颜色的斑点。
c、取[鉴别]①项下的备用药渣，加丙酮25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，没有显现相应的斑点。故此方法不予考虑。
综合考虑上述三种提取溶剂，甲醇与乙酸乙酯作为提取溶剂方法可行，考虑经济与习惯，选择甲醇作为提取溶剂较好。
②点样量的选择
在三七鉴别实验中，经实验选择供试品溶液和对照品溶液各2μl、5μl进行点样，2μl时斑点分离较好，适合实验要求。5μl时的出现许多斑点，分离效果不好。所以本标准选择2μl作为供试品及对照品的点样量。
③专属性实验
取三七的阴性样品，照a法配制成阴性供试品溶液，展开后在缺三七的阴性样品中无三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品、三七对照药材对应处相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。
5、检查
(1)崩解时限 取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取本发明制剂1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒。
表4 崩解时限考察结果
| 批号 | 050101 | 050102 | 050103 |
| 时间(秒) | 30 | 28 | 31 |
(2)砷盐 按中国药典2000年版一部附录IX F砷盐检查法第一法进行检查，结果符合规定。
(3)重金属 按中国药典2000年版一部附录IX E重金属检查法第二法进行检查，结果符合规定。
(4)重量差异
本发明制剂重量大于0.3g，按2000年版中国药典一部规定片重差异应在±5％以内，取本发明制剂三批样品20片检查。
三批样品测定结果表明，片重差异均在规定范围之内。
(5)微生物限度
照微生物限度检查法(中国药典2000年版一部附录XIII)检查，三批样品的检查结果见下表。
表5 微生物限度检查结果
| 批号 | 050101 | 050102 | 050103 |
| 细菌数(个/g) | 符合规定 | 符合规定 | 符合规定 |
| 霉菌数(个/g) | 符合规定 | 符合规定 | 符合规定 |
| 大肠杆菌(个/g) | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 活螨(个/g) | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
6、含量测定
(一)丹参酮IIA的含量测定方法学研究
1、方法
(1)仪器与试药：
HP1100高效液相色谱仪，HP色谱工作站。
丹参酮IIA对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110766-200416)。
甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余为分析纯。
供试品(复方丹参口崩片)批号：050101、050102、050103。
(2)色谱条件：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(73∶27)为流动相，检测波长为274nm，流速1ml/min，理论板数按丹参酮IIA计(C19H18O3)应不低于2000。
色谱柱型号：Hypersil ODS25μmφ4.6×200mm。
(3)对照品溶液的配制：
取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
(4)供试品溶液的配制：
取本发明制剂20片，研细，取粉末约1.3g，精密称定，置具塞棕色量瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33KHz)15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。
(5)检测波长的选择：
量取丹参酮IIA对照品溶液在紫外分光光度计上测定紫外光谱图，在400～200nm波长范围内扫描，结果在274nm波长处有最大吸收峰，故选择274nm作为本发明制剂的检测波长。
2、提取条件的选择
(1)提取方法的比较
取本发明制剂20片，研细，取粉末约1.3g两份，精密称定，分别置具塞棕色量瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，一份超声处理(功率250W，频率33KHz)30分钟，另一份回流提取30分钟。放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，各取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
表6 提取方法的比较结果
| 方法 | 含量(mg/g) |
| 超声 | 0.59 |
| 回流 | 0.59 |
结果显示两者的提取结果差不多，因操作习惯，选用超声提取作为本实验的提取方法。
(2)提取溶剂选择：
取本发明制剂20片，研细，取粉末约1.3g三份，精密称定，分别置具塞棕色量瓶中，一份精密加入甲醇25ml，一份精密加入乙醇25ml，一份精密加入50％甲醇25ml，分别密塞，称定重量，分别超声处理(功率250W，频率33KHz)15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇、乙醇、50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，各取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
表7 提取溶剂的比较结果
| 溶媒 | 含量(mg/g) |
| 甲醇 | 0.60 |
| 乙醇 | 0.50 |
| 50％甲醇 | 0.45 |
结果显示甲醇提取的结果较大，因此选用甲醇溶液作为提取溶剂。
(3)提取时间选择：
取本发明制剂20片，研细，取粉末约1.3g三份，精密称定，分别置具塞棕色量瓶中，分别精密加入甲醇25ml，分别密塞，称定重量，分别超声处理(功率250W，频率33KHz)5、15、30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，各取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
表8 提取时间的比较结果
| 时间(min) | 含量(mg/g) |
| 10 | 0.58 |
| 30 | 0.59 |
| 60 | 0.59 |
结果显示超声提取15min时已提取完全，因此选用甲醇超声提取15min作为提取时间。
4、空白试验
取缺丹参阴性样品约0.9188g，照供试品溶液项下方法配制，按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上，无明显其它峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。
5、标准曲线的绘制
取丹参酮IIA对照品3.96mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分别置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，各进样10μl，测定峰面积，以浓度C为横坐标，峰面积为纵坐标，绘图得标准曲线，回归方程为：Y＝205.43+48.59X，r＝0.9995测定结果见下表。
表9 线性考察
| 浓度(μg/ml) | 23.76 | 31.68 | 39.60 | 47.52 | 55.44 |
| 峰面积 | 1381.42 | 1731.42 | 2110.16 | 2507.69 | 2917.49 |
结果表明丹参酮IIA在23.76μg/ml～55.44μg/ml范围内峰面积与浓度具有良好的线性关系。
6、精密度试验：取本发明制剂(批号：050101)按上法配制供试品溶液，重复进样5次，结果RSD为2.0％(n＝5)结果见下表。
表10 精密度试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 峰面积 | 1756.55 | 1753.66 | 1695.25 | 1786.95 | 1720.57 |
| 平均峰面积 | 1742.60 | ||||
| RSD(％) | 2.0 | ||||
7、重现性试验
按供试品配制方法配制5份供试品，分别测定每份样品含量，结果平均含量为0.58mg/g，RSD为2.70％(n＝5)结果见下表。
表11 重现性试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 含量(mg/g) | 0.60 | 0.60 | 0.57 | 0.57 | 0.57 |
| 平均含量(mg/g) | 0.58 | ||||
| RSD(％) | 2.70 | ||||
8、回收率试验
精密称取一已知含量的供试品(批号：050101)，分别添加丹参酮IIA对照品(浓度为0.45mg/ml)1ml，按上述的方法制成供试品溶液，依法进行测定，计算回收率，测定结果见下表。
表12 回收率试验结果
| 次数 | 样品原有量(mg) | 标样添入量(mg) | 实测量(mg) | 回收率(mg) | 回收率(％) |
| 1 | 0.404 | 0.45 | 0.40 | 0.444 | 98.67 |
| 2 | 0.406 | 0.45 | 0.41 | 0.449 | 99.78 |
| 3 | 0.401 | 0.45 | 0.38 | 0.433 | 96.22 |
| 4 | 0.401 | 0.45 | 0.39 | 0.437 | 97.11 |
| 5 | 0.391 | 0.45 | 0.36 | 0.423 | 94.00 |
| 平均回收率(％) | 97.16 | ||||
| RSD(％) | 2.30 | ||||
9、稳定性试验
取供试品溶液一份，每隔一定时间测定，测得丹参酮IIA的峰面积如下表，结果表明，供试品溶液在室温下放置24小时内稳定。测定结果见下表。
表13 稳定性试验结果
| 时间 | 0hr | 1hr | 3hr | 16hr | 21hr |
| 峰面积 | 1758.30 | 1727.02 | 1727.86 | 1781.50 | 1757.62 |
| 平均峰面积 | 1750.46 | ||||
| RSD(％) | 1.30 | ||||
10、三批样品的测定及含量限度的确定
按供试品溶液的配制方法，对十批样品进行含量测定，以确定其含量限度，十批样品的含量测定结果见下表。
表14 含量测定结果
| 测试药品 | 十批产品 | ||
| 样品批号 | 041201 | 041202 | 041203 |
| 含量(mg/片) | 0.41 | 0.40 | 0.41 |
| 样品批号 | 041204 | 041205 | 041206 |
| 含量(mg/片) | 0.42 | 0.40 | 0.42 |
| 样品批号 | 041207 | - | - |
| 含量(mg/片) | 0.40 | - | - |
| 样品批号 | 050101 | 050102 | 050103 |
| 含量(mg/片) | 0.40 | 0.39 | 0.39 |
最后确定其含量限度为0.2mg/片，应符合规定。
(二)丹酚酸B的含量测定方法学研究
1、方法
(1)仪器与试药：
HP1100高效液相色谱仪，HP色谱工作站。
丹酚酸B对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：111562-200302)。
乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余为分析纯。
(2)色谱条件：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10∶30∶1∶59)为流动相，检测波长为286nm，流速1ml/min，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000。
色谱柱型号：Hypersil ODS25μmφ4.6×200mm。
(3)对照品溶液的配制：
精密称取丹酚酸B对照品适量，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得。
(4)供试品溶液的配制：
取本发明制剂20片，研细，取粉末约0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理(功率300W，频率50KHz)30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(5)检测波长的选择：
量取丹酚酸B对照品溶液在紫外分光光度计上测定紫外光谱图，在400～200nm波长范围内扫描，结果在286nm波长处有最大吸收峰，故选择286nm作为本发明制剂的检测波长。相关图谱见附件图14-6。
2、提取条件的选择
(1)提取方法的比较
取本发明制剂20片，研细，取粉末约0.27g两份，精密称定，分别置50ml量瓶中，加水适量，一份超声处理(功率300W，频率50KHz)30分钟，另一份回流提取，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，各取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
表15 提取方法的比较结果
| 方法 | 含量(mg/g) |
| 超声 | 10.03 |
| 回流 | 9.65 |
结果显示两者的提取结果，超声提取比加热回流提取效率更高。因此选用超声提取作为实验的提取方法。
(2)提取溶剂选择：
取本发明制剂20片，研细，取粉末约0.27g两份，精密称定，分别置50ml量瓶中，一份加水适量，另一份加95％乙醇适量，都超声处理(功率300W，频率50KHz)30分钟，放冷，一份加水至刻度，另一份95％乙醇至刻度，摇匀，滤过，各取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
表16 提取溶剂的比较结果
| 溶媒 | 含量(mg/g) |
| 水 | 10.03 |
| 95％乙醇 | 1.11 |
结果显示水溶液提取的结果较大，因此选用水溶液作为提取溶剂。
(3)提取时间选择：
取本发明制剂20片，研细，取粉末约0.27g三份，精密称定，分别置50ml量瓶中，加水适量，分别超声处理(功率300W，频率50KHz)30、60、120分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，各取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
表17 提取时间的比较结果
| 时间(min) | 含量(mg/g) |
| 30 | 10.03 |
| 60 | 9.41 |
| 120 | 9.39 |
结果显示超声提取30分钟可提取完全，因此选用水溶液超声提取30分钟作为提取时间。
4、空白试验
取缺丹参的阴性样品约0.1945g，照供试品溶液项下方法配制，按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上，无明显其它峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。
5、标准曲线的绘制
精密称取丹酚酸B对照品6.15mg，置50ml容量瓶中，加水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分别置于10ml量瓶中，用水溶液稀释至刻度，各进样10μl，测定峰面积，以浓度C为横坐标，峰面积为纵坐标，绘图得标准曲线，回归方程为：Y＝8.351 X+104.36，r＝0.9998测定结果见下表。
表18 线性考察
| 浓度(μg/ml) | 36.90 | 49.20 | 61.50 | 73.80 | 86.10 |
| 峰面积 | 408.93 | 519.17 | 617.66 | 723.91 | 820.17 |
结果表明丹参素钠在36.90μg/ml～86.10μg/ml范围内峰面积与浓度具有良好的线性关系。
6、精密度试验：取本发明制剂(批号：050101)按上法配制供试品溶液，重复进样5次，结果RSD为4.31％(n＝5)结果见下表。
表19 精密度试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 峰面积 | 549.77 | 534.07 | 553.25 | 518.32 | 510.80 |
| 平均峰面积 | 531.24 | ||||
| RSD(％) | 4.13 | ||||
7、重现性试验
按供试品配制方法配制5份供试品，分别测定每份样品含量，结果平均含量为7.89mg/g，RSD为4.20％(n＝5)结果见下表。
表20 重现性试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 含量(mg/g) | 8.14 | 7.93 | 7.64 | 7.48 | 8.27 |
| 平均含量(mg/g) | 7.89 | ||||
| RSD(％) | 4.20 | ||||
8、回收率试验
精密称取一已知含量的供试品(批号：050101)，分别添加丹参素钠对照品(浓度为5.03mg/ml)1ml，按上述的方法制成供试品溶液，依法进行测定，计算回收率，测定结果见下表。
表21回收率试验结果
| 次数 | 样品原有量(mg) | 标样添入量(mg) | 实测量(mg) | 回收量(mg) | 回收率(％) |
| 1 | 4.40 | 5.03 | 9.37 | 4.97 | 98.81 |
| 2 | 4.30 | 5.03 | 9.30 | 5.00 | 99.40 |
| 3 | 3.11 | 5.03 | 8.02 | 4.91 | 97.61 |
| 4 | 2.85 | 5.03 | 7.75 | 4.90 | 97.42 |
| 5 | 3.20 | 5.03 | 8.10 | 4.90 | 97.42 |
| 平均回收率(％) | 98.13 | ||||
| RSD(％) | 0.93 | ||||
9、稳定性试验
取供试品溶液一份，每隔一定时间测定，测得丹参素钠峰面积如下表，结果表明，供试品溶液在室温下放置24小时内稳定。测定结果见下表。
表22 稳定性试验结果
| 时间 | 0hr | 15hr | 18hr | 21hr | 24hr |
| 峰面积 | 532.67 | 550.59 | 525.88 | 552.08 | 5388.6 |
| 平均峰面积 | 540.02 | ||||
| RSD(％) | 2.10 | ||||
10、三批样品的测定及含量限度的确定
按供试品溶液的配制方法，对十批样品进行含量测定，以确定其含量限度，十批样品的含量测定结果见下表。
表23 含量测定结果
| 测试药品 | 十批产品 | ||
| 样品批号 | 041201 | 041202 | 041203 |
| 含量(mg/片) | 5.86 | 5.51 | 5.44 |
| 样品批号 | 041204 | 041205 | 041206 |
| 含量(mg/片) | 5.81 | 5.94 | 5.72 |
| 样品批号 | 041207 | -- | -- |
| 含量(mg/片) | 5.39 | -- | -- |
| 样品批号 | 050101 | 050102 | 050103 |
| 含量(mg/片) | 5.5 | 5.4 | 5.6 |
最后确定其含量限度为5.0mg/片，应符合规定。
(三)冰片含量测定方法学研究
1、仪器与试药
仪器：HP6890气相色谱仪
对照品：龙脑，由中国药品生物制品检定所提供(10881-200202，含量测定用)。
异龙脑，由中国药品生物制品检定所提供(1512-200201，含量测定用)
试剂均为分析纯。
2、提取条件的选择：因本制剂中冰片采用适当工艺进行包和，故比较了不同的溶剂、提取方法以考察最佳的提取条件，结果见表24。
表24 提取方法比较结果
| 提取溶剂 | 提取方法 | 提取时间 | 龙脑与异龙脑含量之和(mg/ml) |
| 酯酸乙酯 | 回流 | 2小时 | 0 |
| 无水乙醇 | 回流 | 2小时 | 8.359 |
| 回流 | 45分钟 | 8.480 | |
| 回流 | 30分钟 | 8.714 | |
| 回流 | 15分钟 | 8.780 | |
| 超声 | 40分钟 | 8.802 | |
| 超声 | 30分钟 | 6.733 | |
| 超声 | 20分钟 | 7.404 |
结果显示采用回流方法进行提取时，当超过30分钟，随着回流时间的增加，含量越来越低，而采用超声处理时，超声时间对测定结果影响较大，且非一般的正相关关系，为保证方法的耐用性，根据试验结果，采用回流15分钟作为提取方法。
3、色谱条件：弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1。理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000。
在此色谱条件下龙脑、异龙脑、水杨酸甲酯与相邻色谱峰均能基线分离。
4、对照品溶液及供试品溶液制备同正文。
5、线性关系考察：精密量取龙脑对照品溶液(0.9148mg/ml)和异龙脑对照品溶液(0.7264mg/ml)各0.2、0.4、0.6、1、2ml至5ml量瓶中，加内标溶液稀释至刻度，摇匀。分别取2μl注入气相色谱仪，以对照品与内标量的比值为横坐标，对照品与内标峰面积的比值为纵坐标，得回归方程：Y＝0.6122X+0.0009，r＝1.0000(异龙脑)；Y＝0.621X-0.0008，r＝1.0000(龙脑)；显示异龙脑进样量在58.2ng～582ng，龙脑进样量在73.2ng～732ng范围内均有良好的线性关系。
表25 异龙脑线性关系考察结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 对照品与内标量之比 | 0.0839 | 0.1689 | 0.2525 | 0.4242 | 0.8491 |
| 对照品与内标峰面积比 | 0.0521 | 0.1041 | 0.1562 | 0.2604 | 0.5207 |
表26 龙脑线性关系考察结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 对照品与内标量之比 | 0.1132 | 0.2088 | 0.3141 | 0.5294 | 1.0584 |
| 对照品与内标峰面积比 | 0.0656 | 0.1312 | 0.1967 | 0.3279 | 0.6558 |
6、空白实验：取缺冰片阴性试验样品，按正文所述方法进样，结果在与龙脑与异龙脑相同位置无色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。
7、精密度：取供试品溶液，按正文所述色谱条件，重复进样6次，测定内标与异龙脑、龙脑峰面积，计算两者峰面积的比值，结果RSD分别为0.3％、1.1％(n＝6)，见表27。
表27 精密度试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD％ |
| 异龙脑与内标峰面积比 | 0.4775 | 0.4776 | 0.4782 | 0.4772 | 0.4753 | 0.4746 | 0.4766 | 0.3 |
| 龙脑与内标峰面积比 | 0.8110 | 0.8252 | 0.8310 | 0.8314 | 0.8332 | 0.8348 | 0.8311 | 1.1 |
8、稳定性：取供试品溶液，按正文所述色谱条件，间隔一定时间进样一针，测定内标与龙脑、异龙脑峰面积，计算两者峰面积的比值，显示供试品溶液在23小时内稳定，见表28。
表28 稳定性试验结果
| 时间(小时) | 0 | 4 | 8 | 14 | 18 | 23 | 平均值 | RSD(％) |
| 异龙脑与内标峰面积比 | 0.4775 | 0.4738 | 0.4745 | 0.4729 | 0.4740 | 0.4741 | 0.4739 | 0.3 |
| 龙脑与内标峰面积比 | 0.8110 | 0.8074 | 0.8391 | 0.8035 | 0.8057 | 0.8066 | 0.8124 | 1.6 |
9、重复性：取同一批号样品6份(批号：050101)，按正文方法测定并计算龙脑和异龙脑含量(mg/g)，结果龙脑和异龙脑的平均含量分别为5.72、3.20mg/g，RSD分别为0.2％、0.1％(n＝6)，见表29。
表29 重现性试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD％ |
| 异龙脑含量(mg/g) | 3.267 | 3.195 | 3.171 | 3.196 | 3.203 | 3.198 | 3.200 | 0.1 |
| 龙脑含量(mg/g) | 5.633 | 5.650 | 5.649 | 5.701 | 5.711 | 5.719 | 5.715 | 0.2 |
10、回收率：精密量取已知含量样品(批号：050101)6份，精密加入龙脑、异龙脑对照品适量，按正文方法测定并计算含量，结果显示平均回收率分别为100.4％、98.55％，RSD分别为1.5％、3.0％(见表30)。
表30 回收率试验结果
| 编号 | 样品中含量(ug) | 加入量(ug) | 测得量(ug) | 回收率％ | 平均回收率％ | RSD％ | |
| 异龙脑 | 1 | 0.8059 | 0.9080 | 1.7089 | 99.45％ | 100.4 | 1.5 |
| 2 | 0.8120 | 0.9080 | 1.7376 | 101.94％ | |||
| 3 | 0.8187 | 0.9080 | 1.7449 | 102.01％ | |||
| 4 | 0.8011 | 0.9080 | 1.7194 | 101.13％ | |||
| 5 | 0.8286 | 0.9080 | 1.7284 | 99.10％ | |||
| 6 | 0.8110 | 0.9080 | 1.7065 | 98.62％ | |||
| 龙脑 | 1 | 1.4391 | 1.1435 | 2.6005 | 101.57％ | 98.6 | 3.0 |
| 2 | 1.4499 | 1.1435 | 2.6110 | 101.54％ | |||
| 3 | 1.4619 | 1.1435 | 2.5840 | 98.13％ | |||
| 4 | 1.4305 | 1.1435 | 2.5243 | 95.65％ | |||
| 5 | 1.4797 | 1.1435 | 2.6203 | 99.75％ | |||
| 6 | 1.4482 | 1.1435 | 2.5304 | 94.64％ |
11、样品测定：按正文方法测定十批样品，结果见表31。
表31 样品测定结果
| 编号 | 批号 | 异龙脑(mg/片) | 龙脑(mg/片) |
| 1 | 041201 | 2.88 | 4.28 |
| 2 | 041202 | 2.69 | 4.01 |
| 3 | 041203 | 2.69 | 3.98 |
| 4 | 041204 | 2.87 | 4.26 |
| 5 | 041205 | 2.72 | 4.03 |
| 6 | 041206 | 2.60 | 2.92 |
| 7 | 041207 | 2.90 | 4.31 |
| 8 | 050101 | 2.29 | 3.73 |
| 9 | 050102 | 2.16 | 3.78 |
| 10 | 050103 | 2.18 | 3.72 |
根据测定结果，将限度定为本发明制剂每片含冰片以龙脑(C10H18O)和异龙脑(C10H18O)的总和计，不得少于5.0mg。
具体实施方式：
本发明的实施例1：丹参450g、三七141g、冰片8g、微晶纤维素100g、低取代羟丙基纤维素20g、交联聚维酮200g、阿司帕坦10g、硬脂酸镁5g
取丹参加8倍量乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30±0.02(55～60℃)的浸膏，备用；药渣加8倍量50％乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.35±0.02(55～60℃)的浸膏，备用；药渣加8倍量水煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35±0.02(55～60℃)的浸膏，与第一、二次乙醇回流提取的浸膏混合，于60℃±5℃干燥，粉碎，备用；冰片用β-环糊精包合，三七粉碎成细粉，过100目筛，与干浸膏粉、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素、β-环糊精包合物混合均匀，用95％乙醇制粒，干燥，干颗粒与阿司帕坦、硬脂酸镁、微晶纤维素混合均匀，压成1000片，包装，即得。
本发明的实施例2：质量控制方法包括以下部分或全部内容：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别：(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：崩解时限：取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取复方丹参口腔崩解片1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒；
其他应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；
含量测定：(1)丹参酮IIA 照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg；
(3)冰片 照中国药典2005版一部附录VI E中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
本发明的实施例3：质量控制方法可包括以下内容：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别：(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：崩解时限：取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取复方丹参口腔崩解片1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒；
其他 应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；
含量测定：(1)丹参酮IIA 照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)冰片 照中国药典2005版一部附录VI E中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32m m×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
本发明的实施例4：质量控制方法可包括以下内容：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别：取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：(1)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg；
(2)冰片 照中国药典2005版一部附录VI E中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
本发明的实施例5：质量控制方法可包括以下内容：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别：取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：(1)丹参酮IIA 照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg。
本发明的实施例6：质量控制方法可包括以下内容：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别：(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：崩解时限：取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取复方丹参口腔崩解片1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒；
其他 应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；
含量测定：冰片 照中国药典2005版一部附录VI E中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
本发明的实施例7：质量控制方法可包括以下内容：
性状：药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
检查：崩解时限：取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取复方丹参口腔崩解片1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒；
其他 应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；
含量测定：(1)丹参酮IIA 照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg。
Claims (9)
1.一种复方丹参口腔崩解片，其特征在于：它是由丹参450g、三七141g、冰片8g和微晶纤维素100g、低取代羟丙基纤维素20g、交联聚维酮200g、阿司帕坦10g、硬脂酸镁5g制备而成的。
2.如权利要求1所述的复方丹参口腔崩解片的制备方法，其特征在于：取丹参加8倍量乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在55～60℃时测相对密度为1.30±0.02的浸膏，备用；药渣加8倍量50％乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在55～60℃时测相对密度为1.35±0.02的浸膏，备用；药渣加8倍量水煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至在55～60℃时测相对密度为1.35±0.02的浸膏，与第一、二次乙醇回流提取的浸膏混合，于60℃±5℃干燥，粉碎，备用；冰片用β-环糊精包合，三七粉碎成细粉，过100目筛，与干浸膏粉、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素、β-环糊精包合物混合均匀，用95％乙醇制粒，干燥，干颗粒与阿司帕坦、硬脂酸镁、微晶纤维素混合均匀，压成1000片，包装，即得。
3.按照权利要求2所述的复方丹参口腔崩解片的制备方法，其特征在于：冰片包合物的制备方法为：8g冰片溶于242.4ml95％乙醇中，制成冰片的饱和醇溶液，48.48gβ-环糊精溶于1212ml55℃热水中，制成β-环糊精的饱和水溶液，将冰片饱和醇溶液加入在缓慢搅拌状态下的β-环糊精的饱和水溶液中，并继续搅拌30分钟，冷藏24小时，抽滤，滤渣用冷水冲洗，抽干后于40℃干燥，即得冰片包合物。
4.如权利要求1或2所述的复方丹参口腔崩解片的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法主要包括性状、检查，以及鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括以丹参酮IIA对照品、冰片对照品、三七对照药材、三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品为对照的薄层鉴别；含量测定包括以丹参酮IIA对照品、丹酚酸B对照品为对照和气相色谱含量测定方法。
5.按照权利4所述复方丹参口腔崩解片的质量控制方法，其特征在于：丹参、冰片的鉴别方法是以丹参酮IIA对照品、冰片对照品为对照，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂的薄层鉴别方法；三七的鉴别方法是以三七对照药材、三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2为展开剂的薄层鉴别方法。
6.按照权利要求4或5所述复方丹参口腔崩解片的质量控制方法，其特征在于：鉴别方法包括以下项目的部分或全部：
(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.按照权利4所述复方丹参口腔崩解片的质量控制方法，其特征在于：丹参的含量测定方法包括以甲醇∶水＝73∶27为流动相和以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相的高效液相测定方法；冰片的含量测定方法是以龙脑、异龙脑对照品为对照的气相色谱法。
8.按照权利要求4或7所述复方丹参口腔崩解片的质量控制方法，其特征在于：含量测定方法包括以下项目的部分或全部：
(1)丹参酮IIA照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg；
(3)冰片照中国药典2005版一部附录VIE中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
9.按照权利4所述复方丹参口腔崩解片的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法中的性状为：
药物显浅棕色至棕褐色，片面有散在棕色斑点；气芳香，味微苦；
鉴别为：
(1)取复方丹参口腔崩解片5片，研碎，加乙醚20ml，超声处理5分钟，滤过，药渣备用，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品、冰片对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以1％香草醛硫酸溶液，在110℃加热数分钟，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取(1)项下的备用药渣，加甲醇25ml，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25ml振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25ml洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述五种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2、10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1→10硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查为：
崩解时限：取10ml刻度试管，装入2ml蒸馏水，置37℃水浴中，取复方丹参口腔崩解片1片，放入试管内，立即计时，应在1分钟内溶散，并不得有大于二号筛孔径的颗粒；
其他应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；
含量测定为：
(1)丹参酮IIA照附录VID高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝73∶27为流动相；检测波长为274nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取约1.3g，精密称定，置棕色玻璃瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹参酮IIA计，不得少于0.20mg；
(2)丹酚酸B 照照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶甲醇∶甲酸∶水＝10∶30∶1∶59为流动相；检测波长为286nm；理论板数按峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂20片，精密称定，研细，取0.27g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含丹参以丹酚酸B计，不得少于5.0mg；
(3)冰片 照中国药典2005版一部附录VIE中气相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 30m×0.32mm×0.25μm的弹性石英毛细管柱HP-INNOWAX；程序升温：初始100℃，每分钟7℃升至160℃；载气流速：每分钟2.2ml；分流进样，分流比：15∶1；理论板数按龙脑峰计算，应不低于50000；
校正因子测定 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.20mg的溶液，作为内标溶液；另取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶解并稀释成每1ml分别含0.15mg、0.10mg的混合溶液，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法 取本发明制剂20片，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入内标溶液20ml，水浴回流15分钟，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，取2μl注入气相色谱仪，测定，按内标法计算，即得；
该复方丹参口腔崩解片每片含冰片以龙脑和异龙脑的总和计，不得少于5.0mg。
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