CN1813775A - 淫羊藿苷在制备治疗冠心病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药新药研究开发领域，具体涉及淫羊藿苷在制备治疗冠心病药物中的应用。试验证明淫羊藿苷有明显的抗心肌缺血作用，且该有效化合物起效快，疗效确切，具有治疗冠心病心绞痛的医疗用途。本发明还提供了含有淫羊藿苷治疗冠心病的药物组合物及该药物组合物的药物剂型。
Description
技术领域
本发明属于中药新药研发领域，具体而言，涉及淫羊藿苷在制备治疗冠心病药物中的新用途。
背景技术
冠心病是严重危害人类健康的疾病，其发病率与死亡率逐年上升，其发病率之高，死亡人数之多，可谓触目惊心，号称“人类第一杀手”。为了攻克该病，西医西药作出了成绩，尤其在介入性治疗方面疗效突出，但是其副作用与复发率难以解决。为此我国医学家将希望寄托于中医中药上来。虽然治疗冠心病的中药新药不断问世，但总有不同程度的缺点，为此我们进行了本发明研究。
世界卫生组织对冠心病分为：原发性心脏骤停、心绞痛、心肌梗塞、缺血性心脏病中的心力衰竭、心律失常。冠心病心绞痛中医将其归为“胸痹”、“心痹”、“真心痛”等范畴，主要由于阴阳失调，气机逆乱，导致气滞血瘀，心脉痹阻，不通而痛。祖国医学认为，真阴真阳皆藏于肾；肾阳衰微可致心阳不足。
中药淫羊藿是传统的补肾壮阳药，具有补肾益阳之功效，肾阳上煦则心阳得养，心肾协调，便痰浊得化，心脉得通。经临床疗效表明，淫羊藿不仅能改善大部分病人的症状，缓解心绞痛，还能改善心电图。经药理研究证明淫羊藿有降血压、降血脂及改善“紫舌症”的作用，对气滞血瘀的患者疗效尤著。还有研究发现淫羊藿中淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷均有扩张脑血管、降低脑血流阻力、增加脑血流量，对于脑供血不足有治疗作用，见【刘崇铭，王敏，梁利春.沈阳药科大学学报.1995年第12卷第3期】。本发明人在发明专利【专利号：ZL01118319.5；申请国别：中国】中阐述淫羊藿总黄酮对麻醉犬在体急性心肌缺血所致损伤有明显的保护作用，说明淫羊藿总黄酮对冠心病有治疗作用，但淫羊藿苷是否具有治疗冠心病心绞痛的作用未见报道。鉴于此，本发明人在前期研究的基础上，通过大量的实验表明，淫羊藿苷具有明显的抗心肌缺血作用，且该有效化合物起效快，疗效确切，这说明淫羊藿苷具有治疗冠心病心绞痛的医药用途。
发明内容
本发明提供了淫羊藿苷在制备治疗冠心病的药物中的新应用。
本发明提供了含有淫羊藿苷的治疗冠心病的药物组合物。
本发明还提供了该药物组合物的给药途径及药物剂型。
淫羊藿苷为浅黄色粉末，分子式：C33H40O15，分子量：676.67，熔点：255-257℃，化学结构式：
本发明所述的淫羊藿苷在用于治疗冠心病时，可以单独使用，也可以含有淫羊藿苷的药物组合物的形式使用。
本发明人通过系列实验证实了淫羊藿苷具有治疗冠心病的作用。通过实验发现淫羊藿苷对垂体后叶素所致大鼠实验性心肌缺血有明显的预防保护作用，可不同程度降低大鼠心肌缺血所致T波的升高；对冠状动脉结扎致大鼠急性心肌缺血有明显的保护作用，可使心梗后心电图ST段抬高明显下降，降低血清中心肌酶的含量，同时降低血清丙二醛(MDA)的含量和升高超氧化物歧化酶(SOD)的活力，并能够有效的缩小心肌梗死范围；对麻醉犬实验性缺血心肌损伤有明显的保护作用，能明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)和心肌缺血范围(N-ST)，缩小经N-BT染色所显示的梗塞区，降低血清中心肌酶的含量，减少血清中MDA的含量，并能有效升高SOD的活力。
综上所述，淫羊藿苷具有明显的抗心肌缺血作用。该有效化合物起效快，疗效确切，具有治疗冠心病心绞痛的医疗用途。
为了研究淫羊藿苷治疗冠心病的作用机制，本发明人对淫羊藿苷进行了体外作用机理的研究。采用体外缺氧所致血管内皮细胞损伤模型，通过测定淫羊藿苷对缺氧损伤的血管内皮细胞的活性，测定细胞中MDA含量、SOD活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的活力，并对细胞进行Hoechst 33342荧光染色、电镜观察超微结构、流式细胞仪分析。实验结果表明淫羊藿苷能抑制缺氧引起的血管内皮细胞减少，减少缺氧条件下MDA的生成、降低LDH活力，并能提高SOD活力，荧光显微镜及电镜观察淫羊藿苷能减轻凋亡程度，流式细胞仪分析淫羊藿苷可减少凋亡细胞百分率，说明淫羊藿苷具有保护缺氧诱导的血管内皮细胞损伤的作用，其作用机制与抗脂质过氧物产生、降低LDH活力、提高SOD活力以及抗凋亡有关。
本发明还提供了以淫羊藿苷为活性成分用于治疗冠心病的药物组合物及其药物剂型。本发明提供的药物组合物可按本领域内已知方法制备，并可通过口服、舌下、经皮、肌肉或皮下、皮肤粘膜、尿道、阴道或静脉等途径给药。本发明提供的药物组合物的剂型可按本领域已知方法制备即以上述淫羊藿苷为有效活性成分，并包括了药剂学上可接受的其他辅料组分，其中所述的淫羊藿苷含量可以为1％～99.99％。本发明的药物制剂包括口服剂和非肠道给药制剂，其中口服剂包括胶囊剂、口服液、口嚼剂、丸剂、片剂、颗粒剂等，非肠道给药制剂包括注射液剂型及注射用冻干粉针剂型等。本发明的药物制剂还包括局部给药制剂，如霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。本发明所述的剂型并不限于此。
在制备口服制剂时可选用的辅型剂可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂。在制备冻干粉针剂可以通过无菌喷雾干燥、低温真空干燥、冷冻干燥等方法制备。各制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。
具体实施例
为了说明本发明治疗冠心病的有益效果，发明人利用淫羊藿苷完成了的主要药效学实验，但并不限于此。
实施例1淫羊藿苷对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响
实验材料和方法
1.药物及试剂
1.1受试药物：淫羊藿苷，含量大于90％。
1.2阳性对照药：消心痛(硝酸异山梨酯片)，北京双桥制药公司，批号：030905。
1.3造模剂：垂体后叶素注射液，南京新天生物化学制药有限公司，批号：020601
2.动物
Wistar大鼠，54只，雌雄各半，体重240-280g，中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证号：SCXK11-00-0006。
3.仪器
3.1BIOPAC系统16道生理记录仪：BIOPAC Systems，Inc；
3.2冷光单孔手术灯：上海医疗器械五厂；
3.3电子分析天平(AE100)：梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司。
3.4DT-00型电子天平：常熟双杰测试仪器厂
4.方法
将Wistar大鼠54只，雌雄各半，体重240-280g，随机分为6组，每组9只：分为正常组，模型组，淫羊藿苷三个剂量给药组：20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg；阳性药对照组：消心痛，剂量为3mg/kg；每天按1mL/100g大鼠连续灌胃给药7天，正常组和模型组给予同体积生理盐水，于第7日给药1h后腹腔注射戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉，并测心电图1min，作为给药前值，然后按1IU/kg经舌下静脉注射垂体后叶素造成急性心肌缺血模型，正常组给予同体积的生理盐水，分别记录15s、30s、1min、5min、10min、15min的心电图，为给药后值。比较各剂量组给药后的T波的变化、心率变化百分率。
5、统计学处理
数据以T波变化值、心率变化百分率进行t检验。
结果
1.淫羊藿苷对心肌缺血大鼠T波变化绝对值的影响
舌下静脉注射垂体后叶素后，与正常组比较，模型组在30s～15min T波变化绝对值明显升高，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.001)；与模型组比较，淫羊藿苷各剂量组、消心痛组在各时间点可不同程度的减轻T波的升高，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，以淫羊藿苷80mg/kg组效果明显。结果见下表1。
表1 淫羊藿苷对心肌缺血大鼠T波变化绝对值的影响(
x±s，n＝9)
| 组别 | 剂量mg/kg | 造模后各时间点T波变化绝对值(mV) | |||||
| 15s | 30s | 60s | 5min | 10min | 15min | ||
| 正常组模型组消心痛组淫羊藿苷 | 3204080 | 0.03+0.030.11+0.110.05+0.040.02+0.020.03+0.020.04+0.03 | 0.02+0.020.09+0.08△0.05+0.040.04+0.040.04+0.030.04+0.02* | 0.03+0.020.09+0.06△0.06+0.040.06+0.040.04+0.03*0.04+0.03* | 0.04+0.040.08+0.05△0.04+0.040.02+0.02*0.03+0.02*0.03+0.03 | 0.02+0.010.09+0.07△0.03+0.02*0.03+0.03*0.03+0.02**0.03+0.02* | 0.03+0.020.09+0.06△△△0.04+0.03*0.06+0.050.04+0.03*0.04+0.02* |
△P＜0.05，△△△P＜0.001与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较。
2.淫羊藿苷对心肌缺血大鼠心率变化百分率的影响
舌下静脉注射垂体后叶素后，与正常组比较，模型组在各时间点心率明显减慢，心率变化百分率增加，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)，与模型组比较，淫羊藿苷大剂量组在5min和10min时，心率变化率明显减小，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。结果见下表2。
表2 淫羊藿苷对心肌缺血大鼠心率变化百分率的影响(
x±s，n＝9)
| 组别 | 剂量mg/kg | 造模后各时间点心率变化率(％) | |||||
| 15s | 30s | 60s | 5min | 10min | 15min | ||
| 正常组模型组消心痛组淫羊藿苷 | 3204080 | 0.01+0.020.10+0.10△0.14+0.110.15+0.140.12+0.130.12+0.13 | 0.02+0.020.17+0.15△0.20+0.140.13+0.100.11+0.110.06+0.06 | 0.02+0.030.16+0.11△△0.18+0.110.15+0.060.14+0.120.08+0.05 | 0.05+0.030.29+0.06△△△0.27+0.120.25+0.060.24+0.100.19+0.05** | 0.09+0.030.30+0.05△△△0.25+0.110.27+0.040.12+0.050.25+0.04* | 0.12+0.050.32+0.06△△0.25+0.140.30+0.070.08+0.320.27+0.05 |
△P＜0.05，△△P＜0.001，△△△P＜0.001与正常组比较；*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较。
结论
淫羊藿苷对垂体后叶素所致大鼠实验性心肌缺血有一定的预防保护作用。
实施例2淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血的影响
实验材料和方法
1.药物
1.1受试药物：淫羊藿苷，含量大于90％。
1.2阳性药：长效心痛治，荷兰圣多纳大药厂，批号：00G11/1LG。
2.试剂
氨基甲酸乙酯(乌拉坦)：北京化学试剂公司，批号：031208。
3.动物
健康成年Wistar大鼠108只，雌雄各半，体重250～300g，中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证号：SCXK11-00-0006
4.仪器
4.1BIOPAC系统16道生理记录仪：BIOPAC Systems，Inc.生产。
4.2冷光单孔手术灯：上海医疗器械五厂生产。
4.3电子分析天平(AE100)：梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司。
4.4DT-00型电子天平：常熟双杰测试仪器厂。
5.实验方法
5.1实验分组
将Wistar大鼠108只，雌雄各半，随机分为6组，每组18只，分别为：假手术组，模型组，阳性药长效心痛治组，淫羊藿苷小剂量组(20mg/kg)，淫羊藿苷中剂量组(40mg/kg)和淫羊藿苷大剂量组(80mg/kg)。
5.2实验步骤
5.2.1腹腔注射乌拉坦(1000mg/kg)麻醉。
5.2.2腹部常规消毒，切口，十二指肠插管给药一次，给药体积均为5mL/kg，各组分别给予长效心痛治(3mg/kg)、淫羊藿苷20mg/kg、40mg/kg及80mg/kg，假手术组和模型组给予同体积的生理盐水。
5.2.3给药40min后，各组分别记录标准I、II导联心电图1min。
5.2.4胸部常规消毒，左锁骨中线第四肋间开胸，暴露心脏，距左冠状动脉前降支根部约2mm处结扎，送回心脏，关闭胸腔。
5.2.5记录I、II导心电图，以T波高耸伴或不伴有ST段抬高为结扎成功的标志。
5.2.6结扎冠脉15min后，记录各项指标，作为给药前值，然后经十二指肠再次给药，剂量同前。
5.2.7结扎后5小时，腹主动脉取血，留取血清，以备测血清酶。然后处死大鼠，称全心重量，将心室横切成4～5片，置于0.1％的NBT(用pH7.4～7.8的0.2mol/L Tris液配制)溶液中，37℃水浴10min，洗去多余的染料，梗死区不着色，非梗死区被NBT染为紫蓝色。剪下未被染色的心肌梗死区，滤纸吸干，称重，计算梗死心肌重量占全心重量的百分率。
6.实验数据的统计学处理
实验数据以均数±标准差(
x±s)表示，模型组与假手术组比较，其它各组与模型组比较，采用F检验和t检验进行统计分析，P＜0.05表示差异有显著统计学意义。
实验结果
1.淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血心电图的影响，结果见表3、4、5。
表3 淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血I导T波变化绝对
的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量mg/kg | 结扎时间 | |||
| 15min | 1h | 3h | 5h | ||
| 假手术组模型组阳性药淫羊藿苷 | 3204080 | 0.09±0.0750.50±0.14△△△0.34±0.15*0.42±0.120.31±0.20*0.46±0.13 | 0.08±0.060.54±0.18△△△0.30±0.10**0.39±0.14*0.20±0.120.45±0.14 | 0.06±0.090.45±0.11△△△0.20±0.11***0.20±0.15***0.23±0.15**0.30±0.11*** | 0.07±0.070.42±0.11△△△0.20±0.08***0.30±0.12*0.25±0.11*0.2±0.11*** |
△△P＜0.001，与假手术组比较；*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001与模型组比较
由上表可见，与假手术组比较，模型组在结扎后各时间点T波变化绝对值均升高，差异具有显著性(P＜0.001)；与模型组比较，阳性药组在结扎后显著降低T波变化绝对值，15min～5h差异具有显著性(P＜0.05～P＜0.001)，淫羊藿苷各剂量组均降低T波变化绝对值，其中小剂量组在结扎后1h～5h差异具有显著性(P＜0.05～P＜0.001)，中剂量组在结扎后15min～5h差异具有显著性(P＜0.05～P＜0.01)、大剂量组在给药后3h-5h差异具有显著性(P＜0.001)。
表4 淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血II导T波变化绝对值
的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量mg/kg | 结扎时间 | |||
| 15min | 1h | 3h | 5h | ||
| 假手术组模型组 | 0.06±0.070.19±0.16△△△ | 0.06±0.080.20±0.17△△△ | 0.09±0.120.27±0.20△△△ | 0.11±0.120.27±0.19△△△ | |
| 阳性药淫羊藿苷 | 3204080 | 0.06±0.04*0.10±0.040.12±0.090.08±0.04* | 0.08±0.05*0.08±0.05*0.11±0.080.10±0.07 | 0.08±0.06**0.10±0.05**0.08±0.04**0.07±0.06** | 0.07±0.05***0.10±0.06**0.07±0.04***0.08±0.04** |
△△△P＜0.001，与假手术组比较；*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001与模型组比较
由上表可见，与假手术组比较，模型组在给药后各时间点T波变化绝对值均升高，差异具有显著性(P＜0.001)；与模型组比较，阳性药组在结扎后15min～5h均降低T波变化绝对值，差异具有显著性(P＜0.05-P＜0.001)；淫羊藿苷各剂量组均降低T波变化绝对值，其中小剂量组在结扎后1h～5h差异具有显著性(P＜0.05～P＜0.01)，中剂量组在结扎后3h～5h差异具有显著性(P＜0.01～P＜0.001)，大剂量组在给药后15min、3h～5h差异具有显著性(P＜0.05～P＜0.01)。
表5 淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血心率的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 利量mg/kg | 药前值变化率 | 结扎时间 | |||
| 15min | 1h | 3h | 5h | |||
| 正常组模型组阳性组淫羊藿苷 | ----3204080 | 437±32％427±32％424±30％435±35％418±32％440±29 | 355±360.18±0.10380±320.11±0.07370±270.13±0.04373±320.15±0.09365±240.12±0.06386±38 | 357±130.18±0.07367±320.14±0.11358±280.15±0.07362±310.17±0.10353±310.15±0.07364±33 | 369±240.15±0.10367±440.15±0.13364±340.14±0.10370±290.15±0.11357±260.14±0.08372±40 | 389±300.11±0.09372±400.14±0.12373±430.12±0.10373±410.15±0.13367±310.12±0.08370±69 |
| ％ | 0.12±0.07 | 0.17±0.08 | 0.16±0.08 | 0.16±0.15 |
上述结果表明：与假手术组比较，模型组在给药后各时间点对心率没有明显影响；与模型组比较，其他各组对心率也没有明显影响。
2.淫羊藿苷对心肌梗死面积(MIS)的影响，结果见表6。
表6 淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血梗死面积的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 总面积 | 梗死区面积 | 梗死区面积/总面积 |
| 模型组阳性药组淫羊藿苷 | 3204080 | 759.91±114.10773.99±76.62736.64±58.43845.44±83.43779.13±77.88 | 245.76±51.31157.4±48.39***177.1±24.18***192.2±35.17***192.26±38.56** | 0.33±0.070.20±0.06***0.24±0.04**0.23±0.04***0.25±0.04** |
**P＜0.01 ***P＜0.001与模型组比较
上述结果表明：与模型组比较，阳性药及淫羊藿苷各给药组可明显编小心肌梗死面积，差异具有显著性(P＜0.01，P＜0.001)，中剂量组和阳性药组作用相当。
3.淫羊藿苷对冠脉结扎所致急性心肌缺血大鼠血清学指标的影响，结果见表7、8。
表7 淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血心肌酶的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 心肌酶(IU/L) | ||
| 肌酸磷酸激酶 | 乳酸脱氢酶 | 谷草转氨酶 | ||
| 正常组模型组阳性药组 | 3 | 3114.4±852.96154.4±2151.4△△4651.5±1035.2* | 1058.9±699.21836.8±540.8△△1596.7±339.3 | 306.8±116.6638.9±169.4△△610.1±169.0 |
| 淫羊藿苷 | 204080 | 4038.4±1046.1***4126.0±1141.5***3826.4±1274.4*** | 1317.9±365.9***1617.1±396.21450.6±445.0 | 521.7±216.0651.8±176.2594.7±219.9 |
△△P＜0.01，与假手术组比较；*P＜0.05 **P＜0.01与模型组比较
上述结果表明：与假手术组比较，模型组肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及谷草转氨酶(AST)含量均明显升高，差异具有显著性(P＜0.01)；与模型组比较，阳性药组及淫羊藿苷各剂量组可明显降低CK的含量，差异具有显著性(P＜0.05)。与模型组比较，淫羊藿苷小剂量组可明显降低LDH活力。阳性药与淫羊藿苷中、大剂量组对LDH和AST的含量没有明显的影响。
表8 淫羊藿苷对冠脉结扎所致大鼠急性心肌缺血(SOD、MDA)的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | SOD活力(U/mL) | MDA(nmol/L) |
| 假手术组模型组阳性药淫羊藿苷 | 3204080 | 99.71±17.4673.63±25.99△100.82±23.59*161.±15.72***159.±26.16***158.±18.54*** | 16.24±5.3327.12±12.37△11.65±7.62**9.19±5.41**8.66±3.22**10.36±4.15** |
△P＜0.05，与正常组比较，**P＜0.01，***P＜0.001与模型组比较。
上述结果表明：与假手术组比较，模型组超氧化物歧化酶(SOD)活力明显降低，丙二醛(MDA)的含量明显升高，差异具有显著性；与模型组比较，阳性药组与淫羊藿苷各组均可明显提高SOD活力(P＜0.001)，并明显降低MDA的含量，差异具有显著性(**P＜0.01)。
结论
淫羊藿苷经十二指肠给药后对冠脉结扎所致大鼠实验性心肌缺血有明显的防治作用。
实施例3淫羊藿苷对麻醉犬在体心脏急性心肌缺血的影响
实验材料和方法
1.药物及试剂
1.1受试药物：淫羊藿苷，含量大于90％。
1.2阳性药：盐酸地尔硫卓(Dil)，天津田边制药有限公司，批号：030103。
1.3试剂
硝基四氮唑蓝：上海化学试剂公司，批号：F20020508。
利多卡因注射液；北京益民药业公司，批号：20030804。
2.实验器材
2.116道生理记录仪：BIOPAC Systems，Inc。
2.2冷光单孔手术灯：751型，上海医疗器械五厂。
2.3电子分析天平：AE100，梅特勒—托利多仪器(上海)公司
2.4恒温水浴箱：余姚市东方电工仪器厂。
2.5离心机：TDL-5-A，上海安亭科学仪器厂。
2.6数码相机：COOLPIX4500，Nikon公司。
2.7图像分析软件：Project，microview公司。
3.实验动物
健康成年杂种犬，36只，体重12-17kg，雌雄兼用。北京市海淀区学院路通利实验动物养殖场，许可证编号：第024号总069号。
4.方法
4.1实验分组
随机分为6组，每组6只，分别为：假手术组(只穿线不结扎)，模型组，Dil组(5mg/kg)，淫羊藿苷小(5mg/kg)、中(10mg/kg)和大剂量细(20mg/kg)。
4.2心肌缺血模型建立
左冠状动脉前降支两步结扎法，于左冠状动脉前降支中下1/3处结扎，结扎时间为6小时。
4.3给药途径及时间
冠脉结扎15min后，十二指肠给药，假手术组和模型组给予等容量的生理盐水。
4.4实验步骤
4.4.1戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉。
4.4.2背位固定，颈部皮肤切开，气管插管，连接人工呼吸机。
4.4.3分离股静脉，插管以备补液及静脉取血用。腹部切口，分离十二指肠并插管，以备给药。
4.4.4犬右侧卧位，于左侧第四肋间开胸，暴露心脏，做心包术。于左冠状动脉前降支中、下1/3处穿线以备结扎。
4.4.5固定多点式心外膜电极标测心外膜心电图(EECG)，标测点16个。术毕，稳定15min后记录EECG，同时自股静脉取血，以备检测给药前的各项血清学指标。
4.4.6结扎冠状动脉15min后，经十二指肠给药，假手术组和模型组给予等容量生理盐水。记录给药后5、10、20、30、45、60、90、120、150、180、210、240、300、360min的EECG。并在360min静脉取血以备检测血清学指标。
4.4.7给药后360min，取出心脏，称全心重量及左心室重量。将左心室均匀横切成5片，N-BT染色，用数码相机对出现梗死的心肌进行照相，应用图像处理软件project测算梗死区心肌面积占心肌总面积的百分比，剪下梗死区心肌并称其重量，计算梗死区心肌重量占全心重量及左心室重量的百分率。
4.5观察指标
4.5.1心外膜心电图(EECG)
以EECG各标测点ST段升高总mV数(∑-ST)表示梗死程度，以ST段升高＞2mV的导联数(N-ST)表示梗死范围，各组进行统计学比较。
4.5.2心肌梗死范围的测定
进行大体标本形态学观察，采用N-BT染色显示梗死区(N-BT非染色区)与非梗死区(N-BT染色区)，剪下心肌梗死区并称重，计算梗死心肌占全心重量及左心室重量的百分率；应用图像处理软件project测算梗死区(N-BT非染色区)与非梗死区(N-BT染色区)面积，计算梗死区心肌面积占心肌总面积的百分比。
4.5.3心肌酶测定
抽取冠状动脉结扎前及结扎后360min的静脉血，测定血清中肌酸激酶(CK)、LDH、谷草转氨酶(AST)的水平。
4.5.4血清学指标的测定
抽取冠状动脉结扎前及结扎后360min的静脉血，测定其SOD活力及MDA的水平。
4.6数据处理
数据均以均数加减标准差(
x±s)表示，采用组间t检验进行统计分析。
实验结果
1、淫羊藿苷对犬心肌梗死程度(∑-ST)的影响(EECG)，结果见表9
表9 淫羊藿苷对实验性心肌梗死犬∑-ST(mV)的影响(
x±s，n＝6，标测点＝16个)
| 组别 | 药前值 | 药后时间(min) |
| 5 | 10 | 20 | 30 | 45 | 60 | 90 | ||
| 假手术组模型组盐酸地尔硫卓5mg/kg淫羊藿苷5mg/kg淫羊藿苷10mg/kg淫羊藿苷20mg/kg | 12.12±2.94％17.90±8.68％20.28±6.58％18.02±9.40％20.37±6.38％20.83±11.84％ | 10.85±3.39-0.09±0.3060.18±11.98△△2.69±1.02△△△54.72±21.501.81±0.9342.57±12.38*1.82±1.2350.08±17.111.59±0.9247.29±13.651.88±1.97 | 11.00±3.84-0.11±0.2158.03±9.26△△2.4±1.56△59.23±17.252.07±0.8340.32±14.48*1.83±1.6051.91±17.361.68±1.0444.82±12.701.81±2.11 | 11.27±4.07-0.08±0.3260.98±9.81△△2.73±1.59△△50.60±9.711.69±0.8041.19±15.33*1.94±1.7753.87±26.001.62±0.8345.57±17.791.75±2.04 | 11.92±4.64-0.03±0.3765.35±14.14△△3.12±2.01△31.76±7.77***0.86±1.18*49.58±20.932.66±2.6054.34±26.431.65±0.8045.75±15.75*1.83±2.09 | 13.35±5.820.13±0.5267.65±15.91△△3.40±2.04△26.21±6.97***0.59±1.17*48.67±21.472.57±2.6154.56±26.271.63±0.7650.45±17.932.10±2.34 | 13.82±6.590.17±0.5868.77±16.53△△3.50±2.02△△28.88±11.12***0.75±1.40*55.16±21.873.02±2.5648.98±23.801.37±0.71*47.09±15.01*2.06±2.52 | 14.71±5.960.25±0.5479.74±18.51△△4.08±2.35△△29.12±12.28***0.76±1.41*49.09±19.97*2.47±1.9644.96±23.23*1.17±0.79*42.32±14.98***1.88±2.69 |
| 组别 | 药前值变化率 | 药后时间(min) | ||||||
| 120 | 150 | 180 | 210 | 240 | 300 | 360 | ||
| 假手术组模型组盐酸地尔硫卓5mg/kg | 12.12±2.94％17.90±8.68％20.28±6.58％ | 16.21±6.120.42±0.6383.75±17.56△△4.17±2.63△30.65±11.86***0.83±1.39* | 16.12±7.320.45±0.8180.16±21.17△△3.94±2.99△28.31±10.70***0.64±1.08* | 16.79±5.780.52±0.7772.70±26.33△△3.47±3.0025.66±11.74***0.44±0.88 | 18.47±7.300.66±0.8568.70±30.12△△3.20±3.1125.22±15.46*0.34±0.75 | 19.45±6.460.74±0.8667.23±32.31△△3.12±3.1422.82±13.90*0.21±0.69 | 17.51±7.180.58±0.8560.96±31.47△2.58±2.7023.17±16.64*0.13±0.61 | 18.63±8.710.731.1759.53±34.42△2.54±3.2622.86±14.25*0.15±0.57 |
| 淫羊藿苷5mg/kg淫羊藿苷10mg/kg淫羊藿苷20mg/kg | 18.02±9.40％20.37±6.38％20.83±11.84％ | 50.17±17.37**2.63±1.9944.90±24.91*1.16±0.89*40.75±17.80***1.84±2.75 | 45.40±17.16*2.33±1.9845.31±22.99*1.28±1.0335.04±18.05***1.50±2.71 | 44.16±14.37*2.24±1.8741.97±24.271.05±0.9631.69±15.79**1.31±2.61 | 49.41±15.762.74±2.3440.38±23.241.01±0.9934.12±15.75*1.32±2.26 | 48.87±15.662.76±2.4535.65±21.540.75±0.9031.33±13.33*1.21±2.30 | 43.04±15.222.21±1.9134.78±22.700.71±0.9529.21±13.55*1.04±2.06 | 41.35±14.942.05±1.7635.14±21.170.73±0.8726.73±11.700.82±1.77 |
△P＜0.05，△△P＜0.01与假手术组比较；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与模型组比较
由上表可见，与假手术组比较，模型组在给药后各时间点∑-ST明显升高(p＜0.01或p＜0.001)，其变化百分率在给药后5～150min明显升高(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)；与模型组比较，盐酸地尔硫卓组在30～360min可明显降低∑-ST升高的毫伏数(P＜0.05或P＜0.001)，其变化百分率在30～150min可明显降低(P＜0.05)；淫羊藿苷各剂量组均不同程度的降低∑-ST升高的毫伏数及其变化百分率，淫羊藿苷5mg/kg组在5～30及90～180min，淫羊藿苷10mg/kg组在90～150min差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，淫羊藿苷20mg/kg组作用显著，作用时间也较长，在30、60～300min差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)。
2、对犬心肌梗死范围(N-ST)的影响(EECG)，结果见表10。
表10 淫羊藿苷对实验性心肌梗死犬N-ST(个)的影响(
x±s，n＝6，标测点＝16个)
| 组别 | 药后时间(min) | ||||||
| 5 | 10 | 20 | 30 | 45 | 60 | 90 | |
| 模型组盐酸地尔硫卓5mg/kg | 13.67±1.2112.17±3.87 | 13.67±2.1611.83±3.87 | 14.50±1.2211.50±3.78 | 13.67±1.636.17±2.99*** | 14.00±2.004.33±2.34*** | 13.83±2.146.33±3.88*** | 14.33±1.636.17±4.88*** |
| 淫羊藿苷5mg/kg淫羊藿苷10mg/kg淫羊藿苷20mg/kg | 9.50±1.87***10.50±3.999.83±2.93* | 8.83±2.93**10.83±3.9210.00±2.83* | 9.17±2.79***11.33±4.139.33±3.67** | 10.17±4.1210.00±4.4710.00±2.76* | 10.17±3.879.83±5.199.83±4.12* | 11.17±4.029.50±5.369.50±3.33* | 10.50±3.73*9.00±4.69*9.50±3.39* |
| 组别 | 药后时间(min) | ||||||
| 120 | 150 | 180 | 210 | 240 | 300 | 360 | |
| 模型组盐酸地尔硫卓5mg/kg淫羊藿苷5mg/kg淫羊藿苷10mg/kg淫羊藿苷20mg/kg | 15.00±0.896.17±4.02***10.67±3.78*8.17±5.49*8.33±4.59** | 14.17±1.475.33±3.14***10.17±4.368.50±5.82*6.83±4.62*** | 13.67±1.865.33±3.56***9.33±3.78*9.83±4.716.83±4.12*** | 13.67±2.164.67±3.33***10.50±3.678.67±5.247.33±4.08** | 12.33±3.144.17±4.02***10.17±4.267.17±5.567.00±4.00* | 11.50±4.765.00±5.599.83±4.317.33±5.175.83±3.92* | 11.00±4.054.33±4.80*9.33±4.637.67±4.805.17±3.76* |
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与模型组比较
由上表可知，与模型组比较，盐酸地尔硫卓组能够明显降低N-ST的点数，在30～240、360min差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.001)。淫羊藿苷各剂量组可明显降低N-ST的点数，淫羊藿苷5mg/kg组在5～20，90，120，180min，淫羊藿苷10mg/kg组在90～150min，淫羊藿苷20mg/kg组在5～360min差异均具有显著性(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)。
3、对犬心肌梗死范围的影响(N-BT染色、定量组织学测定)，结果见表11。
表11 淫羊藿苷对实验性心肌梗死犬心肌梗死范围的影响(
x±s，n＝6)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 梗死区重/全心重(％) | 梗死区重/心室重(％) | 梗死区/总面积(％) |
| 模型组盐酸地尔硫卓淫羊藿苷 | 551020 | 12.59±4.665.89±3.38*7.63±2.977.86±3.264.98±3.02* | 22.82±4.2611.66±7.62*14.89±4.89*12.74±4.69**8.79±4.54** | 24.08±3.987.63±3.73**16.29±4.67*14.56±2.39**9.11±4.96** |
*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较
由上表可知，与模型组比较，淫羊藿苷各剂量组、盐酸地尔硫卓组均明显缩小心肌梗死的面积，降低心肌梗死的重量，差异具有显著性(P＜0.05或p＜0.01或p＜0.001)，淫羊藿苷20mg/kg组作用明显，与盐酸地尔硫卓组作用相当。
4、对犬血清心肌三酶的影响，结果见表12。
表12 淫羊藿苷对实验性心肌梗死犬心肌酶(IU/L)的影响(
x±s，n＝6)
| 组别 | 剂量mg/kg | AST | LDH | CK | |||
| 药前 | 药后 | 药前 | 药后 | 药前 | 药后 | ||
| 假手术组模型组盐酸地尔硫卓淫羊藿苷 | 551020 | 52.5±60.832.8±14.828.0±4.018.8±10.329.8±11.919.2±5.0 | 51.5±56.4147.7±72.2△105.7±34.1109.7±56.8159.7±63.9124.0±67.0 | 110.0±361.035.7±11.799.3±75.061.3±25.272.5±33.643.7±7.2 | 117.5±32.2141.3±67.0319.0±149.4200.2±89.6227.7±91.0153.7±71.9 | 785.5±881.3444.3±364.7250.3±72.6347.7±187.2302.0±153.7264.0±40.5 | 871.5±1069.32612.7±1109.8△1672.7±504.7*2444.3±942.51979.7±445.9*1772.0±338.4* |
△P＜0.05与假手术组比较；*P＜0.05模型组比较
由上表可知，与假手术组比较，模型组在给药后AST、CK明显升高，差异具有显著性(P＜0.05)；与模型组比较，盐酸地尔硫卓组及淫羊藿苷中、大剂量组在给药后CK明显降低(P＜0.05)，但对AST及LDH无明显影响。
5、对犬血清SOD活力及MDA的影响，结果见表13。
表13 淫羊藿苷对实验性心肌梗死犬SOD、MDA的影响(
x±s，n＝6)
| 组别 | 剂量mg/kg | SOD(NU/mL) | MDA(nmol/mL) | ||
| 给药前 | 给药后 | 给药前 | 给药后 | ||
| 假手术组模型组盐酸地尔硫卓淫羊藿苷 | 551020 | 22.96±5.9021.01±2.4327.75±13.8927.90±16.4417.93±1.8319.63±2.56 | 23.12±6.3816.79±3.29△27.31±15.26*26.79±16.6011.88±8.6422.34±0.81* | 12.5±6.3315.3±5.6014.37±6.5413.43±5.3410.7±3.311.8±4.9 | 14.4±6.530.9±12.34△16.7±5.62*23.4±10.0518.30±8.6713.9±5.12* |
△P＜0.05与假手术组比较；*P＜0.05模型组比较
由上表可知，与假手术组比较，模型组SOD活力明显降低，(P＜0.01)；与模型组比较，盐酸地尔硫卓组、淫羊藿苷20mg/kg组能明显提高SOD的活力，差异具有显著性(P＜0.05)。与假手术组比较，模型组MDA的含量明显升高，与模型组比较，盐酸地尔硫卓组及淫羊藿苷各剂量组均能降低MDA的含量。
本实验结果表明：淫羊藿苷能明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)和心肌缺血范围(N-ST)，缩小经N-BT染色所显示的梗塞区，降低血清中心肌酶的含量，减少血清中MDA的含量，并能有效升高SOD的活力。可能的机制为稳定细胞膜，提高机体抗氧化能力，促进氧自由基清除等。
结论
淫羊藿苷有明显的抗急性心肌缺血损伤的作用。
Claims (4)
1、一种淫羊藿苷新的医疗用途，其特征是在制备治疗冠心病药物中的应用。
2、根据权利要求1所述的药物，其特征是含有淫羊藿苷的用于治疗冠心病的药物组合物。
3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征是该组合物可以通过口服、舌下、经皮、肌肉或皮下、皮肤粘膜、尿道、阴道或静脉等途径给药。
4、根据权利要求2和3所述的药物组合物，其特征在于该组合物可以以口服剂、注射剂及局部给药制剂形式存在，其中口服剂可以是胶囊剂、口服液、口嚼剂、丸剂、片剂、颗粒剂等，注射剂可以是注射液剂型及注射用冻干粉针剂型等，局部给药制剂包括包括霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101574339B (zh) * | 2008-05-05 | 2011-06-01 | 周亚伟 | β-脱水淫羊藿素在制备防治心脑血管疾病药物中的应用 |
| CN108379282A (zh) * | 2018-05-25 | 2018-08-10 | 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 | 一种药物及其用途 |
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2005
- 2005-02-03 CN CN 200510004885 patent/CN1813775A/zh active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |