CN1650901A - 从纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞原料药的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从一种纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞药物的方法，属于天然产物药理活性和分离与提纯天然产物方法。其处方是丹参12％、三七3％、川芎9％、红花8％、牛膝8％、人参12％、黄芪12％、五味子7％、淫羊藿10％、葛根7％、何首乌7％、肉桂5％。其工艺将丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方原料，用超临界流体二氧化碳萃取剂，萃取丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物挥发油成分，再将气态二氧化碳萃取剂与植物成分分离，精馏后备用。积极效果是纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞药物的方法采用先进的大孔树脂吸附有效成分并使用气相指痕光谱定量，保证药品的稳定性和高质量。

Description

从纯中药制剂中提取具有改善急性 心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞原料药的方法

(一)技术领域

本发明涉及纯中药制剂的萃取有效成份的方法。其商品名为“三参通脉”。

(二)背景技术

在本发明问世之前治疗心肌供血不足的药物较多，如复方丹参片、地奥心血康等针对抗缺氧和抗心肌梗塞作用的药物，再提高一个层次的疗效或比速效救心丸更快的药物不多见。

(三)发明内容

技术方案包括处方新工艺、工艺流程图及各种毒理、药理综述。

技术解决方案是：

本发明的目的公开一种在纯中药药剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞药物的方法及提供一种高纯度的原料药。

将丹参12％、三七3％、川芎9％、红花8％、牛膝8％、人参12％、黄芪12％、五味子7％、淫羊藿10％、葛根7％、何首乌7％、肉桂5％。将丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物浸入二氧化碳中，当二氧化碳处于临界压力、临界温度时，利用物理性质介于液体与气体之间的双重特性，将丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物的挥发油和其它成分萃取、溶解在二氧化碳中，再与气态二氧化碳分离，从而获取纯化制品。在使用二氧化碳超临界萃取技术的同时，本发明将丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物的其它成分，用65％乙醇提取出来后，通过大孔树脂柱，用大孔树脂吸附，再用乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱，再次将植物制品分离纯化，喷雾干燥，用气相层析法进行指痕图谱成分定量测定后，制成工艺和成分稳定的标准原料药。

药理实验表明，本发明的方法能显著延长小鼠存活时间，延长小鼠存活时间呈剂量依赖关系。大剂量复方制品与模型对照组比较，均能明显延长小鼠存活时间80％和136.8％。大剂量复方制品组使豚鼠ST段上移，不论自身对照或组间对照均有显著性差异。复方制品小、大剂量组与生理盐水组比较，对豚鼠T波增高均有显著抑制。结扎猫的冠脉后，心电图立即出现各种心肌缺血异常，结扎3小时后，生理盐水组梗塞心肌重量占心室肌总重量的16.48±2.98％。复方制品小、大剂量组分别为9.34±1.61％和10.99±1.51％，与生理盐水组比较均有显著性差异。复方制品大剂量组增显著增加猫冠脉血流量，增加离体兔心冠脉流量，且随着剂量的增加，作用增强，给药30分钟内流量增加最明显，复方制品小、中、大三个剂量组对离体兔的心率均呈减慢作用，其中大剂量组作用最明显。复方制品使离体兔心收缩振幅显著减少，同时张力增加，三个剂量组呈剂量依赖关系。

为了验证和重复本发明增加冠脉血流量制品的药理活性，对100例心肌缺血，并服用硝酸甘油不明显的患者，按照国际心脏病学会，及世界卫生组织临床命名标准化联合专题组制定的“缺血性心脏病的命名，及诊断标准”，进行临床观察和安全性考查。在观察期间，未发现毒副作用及不良反应，治疗后，患者血、尿常规及肝功能等指标亦无异常改变。本发明进行100例临床观察，对服用不同剂量硝酸甘油患者的心绞痛的显效率和总有效率分别为44％、87％，其疗效明显优于对照药硝酸甘油，对心电图的总有效率达68％，与硝酸甘油相近，但其显效率明显高于硝酸甘油，说明该药对心电图的疗效仍好于硝酸甘油对照组。

复方制剂中提取纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞药物的方法采用先进的大孔树脂吸附有效成份并使用气相指痕光谱定量，保证药品的稳定性和高质量。

本发明的创造性通过临床毒理、药理来体现，下面仅提供部分资料，实审时再提供更多的资料。

(四)附图说明

图1本发明的工艺流程图。

图2复方制品对脑垂体后叶素所致豚鼠心电图的对抗作用。

图3结扎猫冠脉前降支后的心电图。

图4复方制品对离体免心的作用。

其工艺流程描述如下：

(1)本发明处方：丹参120g、三七30g、川芎90g、红花80g、牛膝80g、人参120g、黄芪120g、五味子70g、淫羊藿100g、葛根70g、何首乌70g、肉桂50g。

(2)溶剂：超临界萃取溶剂为二氧化碳其余为65％乙醇。

(3)挥发油：棕色油状物。

提取液：棕色液体。

(4)物理参数

超临界萃取的压力为1～10MPa，温度20-50℃；65％乙醇回流提取的压力为常压，温度为85℃；减压回收的压力为真空度0.02～0.04MPa，温度为80-85℃；树脂吸附的压力为常压，温度为常温；喷雾干燥的压力为常压，温度为80-85℃。

(5)操作过程

①12味药材破碎成直径1～2cm的小块，然后用二氧化碳超临界萃取设备提取挥发油，得挥发油(1)。

②提取挥发油后的药材，加3倍量65％乙醇回流提取3小时，滤过，得滤液(2)；药渣加2倍量65％乙醇回流提取2小时，滤过，得滤液(3)；药渣再加1倍量65％乙醇回流提取1小时，滤过，得滤液(4)。

③合并滤液(2)、(3)、(4)，静置，取上清液，得提取液(5)。

④减压回收提取液(5)，得浓缩液(6)。

⑤浓缩液(6)中加1倍量水，常温静置6小时，吸取上清液用大孔树脂进行吸附。

⑥用65％乙醇洗脱吸附在树脂上的化学成分于乙醇中，得洗脱液(7)。

⑦将洗脱(7)进行喷雾干燥，得药粉，再加入挥发油(1)，即得。

(五)具体实施方式

丹参120g、三七30g、川芎90g、红花80g、牛膝80g、人参120g、黄芪120g、五味子70g、淫羊藿100g、葛根70g、何首乌70g、肉桂50g。

将12种植物复方原料，用超临界流体二氧化碳萃取剂，萃取12种植物挥发油成分，再将气态二氧化碳萃取剂与植物成份分离，精馏后备用，将二氧化碳超临界萃取后的12种植物复方原料，每100kg分别加入300kg、200kg、100kg、65％的乙醇，在85℃条件下，回流提取3小时，2小时，1小时，合并乙醇提取的滤液，在85℃条件下，回收乙醇，并将滤液浓缩，将每100kg浓缩滤液，加入100kg水，在常温条件下，静置6小时，吸附上清液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％的乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇，在85℃条件下，喷雾干燥，用气相层析测定仪器，进行指痕图谱成分定量测定后，制成标准原料药。

本发明的创造性通过毒理、药理临床来体现，实审时补充提供，现简介如下：

       从纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足

          抗缺氧、抗心肌梗塞原料药的方法药理作用

丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品灌胃给药，能显著延长小鼠耐缺氧存活时间，对异丙肾上腺素引起的心脏耗氧量增加的小鼠，其抗缺氧作用尤为明显。本品十二指肠给药，能显著对抗脑垂体后叶素诱发的豚鼠ST段上移和T波抬高，具有抗急性心肌缺血作用；对麻醉开胸猫能显著缩小结扎冠脉前降支所致的心肌梗塞范围，增加冠脉血流量，但对血压和心率无明显影响。本品对离体兔心有增加冠脉流量、抑制心肌收缩力和减慢心率作用。

试验目的  根据本方剂的功能主治，观察复方制品对急性心肌缺血，结扎冠脉所致的心肌梗塞范围，在体或离体冠脉血流量及缺氧作用的影响。

一、抗缺氧作用

受试药物：丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品临用前，用蒸馏水配成0.2g/ml和0.6g/ml浓度备用。

硫酸异丙肾上腺注射液：0.5mg/ml，批号：860804。

动物雄性小白鼠体重20±2g.每组10只。

1.对小鼠常压耐缺氧的影响

方法：取健康的小鼠50只，按体重随机分为5组。空白对照组灌胃给予生理盐水；复方制品小、大剂量组分别灌服7.2g/kg和6g/kg；每天一次，连续7天，给药容积均为0.36ml/10g。于末次给药后45min，分别将小鼠放入容积相等的250ml广口瓶内密闭，瓶内放入钠石灰10g，瓶塞涂匀凡士林。以呼吸停止为指标，记录动物的存活时间，各给药组与空白对照组t检验，评价药物的作用。

结果：如表1所示，给药组能显著延长小鼠存活时间(P＜0.05～0.001)，复方制品延长小鼠存活时间呈剂量依赖关系。

2.对异丙肾上腺素性小鼠耐缺氧的影响

方法：取健康的小鼠60只，按体重随机分为空白对照、模型对照、复方制品小、大剂量、空白对照和模型对照组灌服生理盐水，其余各组给药途径，剂量、容积和给药天数，均与上述常压耐缺氧实验相同。于末次给药后15min，除空白对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组腹腔注射异丙肾上腺素溶液10mg/kg，30min后，按上述方法分别将小鼠放入密闭的广口瓶内，观察小鼠的存活时间。

结果：如表2所示，模型对照组与空白对照组比较，显著缩短小鼠存活时间(P＜0.001)，提示异丙肾上腺素引起的心脏耗氧量增加的小鼠，明显降低其耐缺氧能力。复方制品小、大剂量组与模型对照组比较，均能明显延长小鼠存活时间(P＜0.001)，分别延长80％和136.8％。

二、复方制品对脑垂体后叶素所致豚鼠心肌缺血的影响

受试药物：丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品用蒸馏水稀释配成0.33g/ml溶液备用。

垂体后叶素注射液：10μ/ml，临用前，用生理盐水稀释成1μ/ml备用。

动物：豚鼠体重245-285g，雌雄兼用。

仪器：双道心电图机，C_2a型，意大利产；慢速匀速电动注射器，F135型，英国Palmer厂产。

方法：向豚鼠腹腔注射乌拉坦(1.0～1.2g/kg)麻醉后，剥离一侧颈静脉，插入一塑料管，另一端联接于慢速电动注射器，以0.02ml/min匀速向静脉内持续注入生理盐水，以防血凝。将针状电极插入豚鼠四肢及V₃皮下位置上，标定电压为1cm＝1mV。待心电图稳定后，从颈静脉注入垂体后叶素0.5μ/kg，立即将电动注射器注射速度调至0.6ml/min，持续1min，然后将速度调回0.02ml/min。垂体后叶素注入后，用心电示波器观察心电图变化，并随时记录之。然后，将豚鼠随机分组，于注入垂体后叶素后20min，分别由十二指肠给予如下药物：(1)对照组：注入生理盐水；(2)复方制品小、大剂量组：分别注入2.0、6.0g/kg；给药容积均为0.6ml/100g。给予上述药物40min时，即给予垂体后叶素1h时，重复注入同剂量的垂体后叶素，记录心电图。比较两次给予垂体后叶素后V₃心电图T波和ST段的差异变化，用t检验评价药物的抗心肌缺血作用。

结果

1.对ST段上移的对抗作用

生理盐水组前后两次给予垂体后叶素自身对照，ST段的变化无显著性差异(P＞0.05)。小剂量复方制品组给药后ST段上移明显受到抑制(P＜0.01)，但与生理盐水组比较，没有显著性差异(P＞0.05)。大剂量复方制品组给药后ST段上移，不论自身对照或组间对照均有显著性差异(P＜0.01)(表3、图2)。

2.对T波抬高的对抗作用

生理盐水组，前后两次给予垂体后叶素自身对照，T波变化无显著性差异(P＞0.05)。复方制品小、大剂量组与生理盐水组比较，T波增高均被显著抑制(P＜0.01)。(表3、图2)

三、复方制品对结扎猫冠脉所致心肌梗塞的影响

受试药物及试剂

1.丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品配制同实验二。

2.氯化硝基四氮唑兰，批号900103。

动物：杂种猫体重2.2～4.0kg，雌雄兼用。

仪器：SJ-42多导生理记录仪

方法：将猫用戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉后，切开气管，连接人工呼吸机维持呼吸。四肢皮下插入心电图电极，连于多导生理记录仪。将猫随机分组，描记正常心电图后，经十二指肠分别注入如下药物。(1)对照组：注入生理盐水；(2)复方制品小、大剂量组：分别注入1g/kg和3g/kg；给药容积均为0.3ml/100g。给药后，即行开胸，暴露心脏，剪开心包，将心包膜缝合于胸壁开口处，细心剥离冠脉前降支左分支，并于给药后30min，用丝线结扎左分支根部，关闭胸腔。随时描记心电图。结扎后3h，处死猫，摘取心脏，剃除心房及心室脂肪组织，只保留心室，用生理盐水洗净后，横断剪成0.3～0.4cm厚园形心肌片6片，滤纸吸干，放入用磷酸缓冲液(pH7.4)配制的0.1％氯化硝基四氮唑兰溶液中，37℃温育15min。然后将未染色心肌与染成紫兰色心肌用手术剪分开，分别称重。以未染色心室肌重占全心室肌重的％表示，进行组间t检验，评价药物的抗心肌梗塞作用。

结果：如图3所示，结扎冠脉后心电图立即出现各种心肌缺血异常心电图改变。结扎后3h，生理盐水组梗塞心肌重量占心室肌总重量的16.48±2.98％。复方制品小、大剂量组分别为9.34±1.61％及10.99±1.51％，与生理盐水组比较均有显著性差异(P＜0.01)(表4)

四、复方制品对麻醉猫血压、心率及冠脉血流量的影响

受试药物：丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品配制同实验二。

动物：杂种猫体重2.8～4.2kg，雌雄兼用。

仪器：多导生理记录仪，ST-42型，激光多普勒流量计，PF₂型，瑞典产。小动物人工呼吸器，英国Palmer厂产。

方法：猫腹腔注射戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉后，在人工呼吸条件下沿胸骨左缘剪断2～5肋骨，拉开胸腔，暴露心脏。剪开心包，将剪开的心包膜缝合于胸壁开口处。将针状心电图电极插于四肢皮下，通过描记心电图计数心率。把充满含肝素生理盐水的胶管的动脉套管插入股动脉，胶管的另一端连接压力换能器，描记股动脉血压。待血压及心电图稳定后，将流量计探头放于左冠状动脉前降支下1/3固定的同一部位，测其血流量。测试条件20℃，4HRZ，0.25S。取健康的猫随机分为对照组、复方制品小、大剂量组各组给药剂量、容积和给药途径与实验三相同，从十二指肠分别注入药物后15、30、45和60min，描记血压、心电图曲线，同时并测定冠脉血流量，给药各组与生理盐水组之间进行t检验，评价药物作用。

结果：

1.对心率的影响  如表5所示，各组给药前后心电图基本无变化，从心电图上反映的心率各组间亦无显著性差异(P＞0.05)，提示复方制品对麻醉猫心率无明显影响。

2.对血压的影响  给药后各组血压随着时间的推移，均逐渐略有下降，但各组各时间内与给药前比较均无显著性差异，给药各组与生理盐水组比较亦无显著性差异(P＞0.05)，提示复方制品对麻醉猫血压无明显影响(表6)。

3.对冠脉血流量的影响  由表7可见，复方制品小剂量组与生理盐水组比较，冠脉血流量虽有所增加，但无显著性差异(P＞0.05)。复方制品大剂量组能显著增加冠脉血流量23.4～27.0％(P＜0.05～0.01)。

五、复方制品对离体兔心的影响

受试药物  丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品使用时用滤纸滤过两次。用蒸馏水稀释配成100mg/ml和333.3mg/ml溶液备用。

动物  家兔体重1.8～2.4kg，雌雄兼用。

仪器  二道生理记录仪，LMS-2A型，离体心脏灌注装置，英国Palmer厂产。

方法  取健康家兔随机分组，每组8只。击头致昏后，立即摘取心脏，按Langendorff法用95％O₂+5％CO₂的Locke溶液灌注离体兔心，温度37℃±0.5℃。心尖部用兔心夹夹住后，通过丝线连接于拉力换能器(JH-1B-100)上，用二道生理记录仪描记心肌收缩振幅、心率变化曲线。待心脏搏动稳定后，测定心脏30s内的流出量、心率和收缩振幅，为给药前的正常值。然后，向与心脏连接的胶管内分别注入下列药物：(1)阴性对照组：注入生理盐水；(2)复方制品组：分别注入30mg、100mg或300mg；给药容积均为0.3ml。给药后，立即收取30s内流量，并记录心率及收缩振幅。比较给药前、后上述三项指标值有无显著性差异，用t检验评价药物的作用。

结果

1.对离体兔心冠脉流量的影响  复方制品有显著增加冠脉流量作用，且随着剂量的增加，作用增强。给药后30s内流量增加最明显，与给药前比较，小、中、大三个剂量组分别平均增加1.2、2.0、5.3ml(P＜0.01)。生理盐水对冠脉流量无影响(表8、图4)

2.对离体兔心心率的影响  复方制品的三个剂量组对离体兔心的心率均呈减慢(P＜0.01)，其中大剂量组作用最明显(表9)

3.对离体兔心心肌收缩的影响  生理盐水对离体兔心收缩振幅无影响。其他各给药组均使收缩振幅显著减小(P＜0.01)，同时张力增加，复方制品三个剂量组呈剂量依赖关系。(表10、图4)

结论

1.小鼠灌胃给予复方制品7.1、21.6g/kg·d，连续给药7天，能显著延长小鼠耐缺氧的存活时间；对异丙肾上腺素引起心脏耗氧量增加的小鼠，其抗缺氧作用尤强。

2.从豚鼠十二指肠注入复方制品2.0、6.0g/kg，能显著抑制垂体后叶素诱发的ST段上移和T波增高，并呈剂量依赖关系，提示制品具有抗急性心肌缺血作用。

3.给麻醉开胸猫十二指肠注入复方制品1.0、3.0g/kg，显著缩小结扎冠脉前降支所致的心肌梗塞范围，提示制品具有抗心肌梗塞作用。

4.给麻醉开胸猫十二指肠注入上述剂量的复方制品能显著增加冠脉血流量，持续1小时以上，但对血压和心率无明显影响。

5.复方制品对离体兔心能显著增加冠脉流量，减慢心率，抑制心肌收缩力。

表1  复方制品对小鼠常压耐缺氧的影响

药物	剂量(g/kg·d)	动物数(n)	动物存活时间(min， X±SD)
				生理盐水	-	10	35.36±6.99
复方制品	7.2×7	10	43.21±9.42*
				复方制品	21.6×7	10	63.10±15.34***

与生理盐水比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001

表2  复方制品对异丙肾上腺素性小鼠耐缺氧的影响

组别	剂量(g/kg·d)	动物数(n)	动物存活时间(min， X±SD)
				空白对照	-	10	35.36±6.99
模型对照	-	10	21.63±4.10+++
				复方制品	7.2×7	10	38.93±6.33***
复方制品	21.6×7	10	51.21±14.53***

与模型对照比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001与空白对照比较+++P＜0.001

表3复方制品对脑垂体后叶素所致豚鼠心电图ST-T波的影响( X±SD)

药物	剂量(g/kg)	动物数(n)	ST段上移最大值(mm)		T波增高最大值(mm)
							药前	药后	药前	药后
			生理盐水	-	11	5.45±1.51					5.00±1.26*	12.27±4.69	12.36±4.25*
复方制品	2.0	12					6.16±2.25	4.17±1.80***△	10.58±4.25	7.08±3.15***△△
			复方制品	6.0	10	5.40±2.07					3.10±0.99***△△△	11.50±3.54	6.20±2.20***△△△

与给药前比较，*P＞0.05、**P＜0.05、***P＜0.01

与生理盐水组比较，△P＞0.05、△△P＜0.05、△△△P＜0.01

·正常、给药前、给药后

A.生理盐水组(6.0ml/kg)

B.复方制品小剂量组(2.0ml/kg)

C.复方制品大剂量组(6.0ml/kg)

·注：A正常心电图(结扎前)B、C、D结扎后心电图

表4复方制品对结扎猫冠脉所致心肌梗塞的影响( X±SD)

药物	剂量(g/kg)	动物数(n)	心室肌总重(g)	梗塞心肌重(g)	梗塞心肌/心室肌(％)
						生理盐水	-	8	9.66±1.35	1.59±0.36	16.48±2.9
复方制品	1.0	6	8.87±0.88	0.98±0.17	10.99±1.51***
						复方制品	3.0	6	9.98±1.58	0.94±0.25	9.34±1.61***

表5复方制品对麻醉开胸猫心率的影响( X±SD)

药物	剂量(g/kg)	动物数(n)	心率(次/min， X±SD)
								给药前	给药后
			15	30	45	60(min)
							生理盐水		-	6	196.3±25.6	187.7±26.1	178.2±12.4	198.6±25.1	205.7±21.3
复方制品	1.0	6	194.2±28.8	185.0±27.5	182.0±13.5	201.7±26.0		210.0±19.7
							复方制品		3.0	6	207.0±29.3	195.0±35.4	181.0±11.6	195.0±29.8	216.0±22.8

表6复方制品对麻醉开胸猫颈动脉血压的影响

药物	剂量(g/kg)	动物数(n)	血压(mmHg， X±SD)
								给药前	给药后
			15	30	45	60(min)
							生理盐水		-	6	125.0±15.5	125.7±20.9	118.3±14.1	120.0±16.1	116.4±13.5
复方制品	1.0	6	116.0±18.1	112.5±18.2	110.2±17.7	10 8.3±15.3		106.8±14.2
							复方制品		3.0	6	117.7±18.4	115.5±17.0	112.8±14.6	111.3±15.3	110.8±14.6

表7复方制品对麻醉开胸猫冠脉血流量的影响

药物	剂量(g/kg)	动物数(n)	冠脉血流量(ml/min， X±SD)
								给药前	给药后
			15	30	45	60(min)
							生理盐水		-	6	25.5±3.2	24.8±2.8(-2.7)	25.2±3.4(-1.2)	25.4±2.9(-0.4)	25.8±2.6(1.2)
复方制品	1.0	6	25.2±2.8	24.4±2.2(-3.1)	26.8±2.6(6.4)	27 6±3.1(9.5)		27.8±3.2(10.3)
							复方制品		0.6	6	24.8±2.1	25.2±2.6(1.6)	31.5±3.6*(27.0)	34.2±3.8**(37.9)	30.6±2.8*(23.4)

与生理盐水比较*P＜0.01、**P＜0.01；与给药前比较，(  )增减冠脉血流量％

·A.生理盐水、B.复方制品小剂量、C.复方制品中剂量、D.复方制品大剂量

表8复方制品对离体兔心冠脉流量的影响( X±SD)

药物	剂量(mg)	动物数(n)	冠脉流量(ml/30s， X±SD)
						给药前	给药后	变化值
			生理盐水	-	8				10.9±2.8	10.9±2.8	0
复方制品	30	8				10.3±2.9	11.5±2.9	+1.2±0.9**
			复方制品	100	8				12.1±2.4	14.2±2.9	+2.0±0.7**
复方制品	300	8				11.0±2.2	16.3±2.2	+5.3±1.8**

与给药前比较，**P＜0.01

表9复方制品对离体兔心心率的影响

药物	剂量(mg)	动物数(n)	心率(次/30s， X±SD)
						给药前	给药后	变化值
			生理盐水	-	8				61.7±8.4	61.7±8.4	0
复方制品	30	8				60.5±8.8	57.8±7.7	-2.7±1.7**
			复方制品	100	8				63.1±9.6	61.2±9.5	-1.9±0.9**
复方制品	300	8				59.5±9.5	55.2±8.8	-4.3±1.1**

与给药前比较，**P＜0.01

表10复方制品对离体兔心收缩振幅的影响

药物	剂量(mg)	动物数(n)	心肌收缩振幅(mm， X±SD)
						给药前	给药后	变化值
			生理盐水	-	8				11.3±2.9	11.3±2.9	0
复方制品	30	8				13.2±3.6	10.6±2.5	-2.7±1.7**
			复方制品	100	8				12.4±2.7	8.7±2.5	-3.9±1.1**
复方制品	300	8				12.6±2.6	5.6±2.0	-7.0±2.3**

与给药前比较，**P＜0.01

复方制品临床观察：丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方增加冠状血流量的制品(观察组)，该制品具改善心肌供血不足，预防和辅助治疗胸痹、冠心病引起的胸闷、心悸、气短、喘息等症。对100例冠心病心绞痛服用扩冠药硝酸甘油，而胸痛、心悸、气短等症状改善不明显的患者进行了临床疗效观察和安全性考查。

根据国际心脏病学会和协会及世界卫生组织临床命名标准化联合专题组制定的《缺血性心脏病的命名及诊断标准》，制定如下诊断标准：

劳累性心绞痛：系由于运动或其他增加心肌耗氧量的情况下，诱发的短暂胸痛发作，休息或舌下含服硝酸甘油后疼痛常可迅速消失。

(1)初发型劳累性心绞痛：患者过去未发生过心绞痛，现发病在一个月以内者；或有过稳定型心绞痛已数月不发生心绞痛而又发生心绞痛者。

(2)稳定型劳累性心绞痛：患者每日、每周疼痛发作的次数及诱发疼痛的劳累和情绪因素大致相同，疼痛的性质、部位亦无大变化。疼痛持续时间多在3～5分钟，不超过10分钟，病程在一个月以上者。

心电图疗效评定标准：

1.显效：心电图恢复到“大致正常”或达到“正常心电图”。

2.有效：S-T段降低，以治疗后回升0.05mV以上，但未达正常水平，在主要导联倒置T波变浅(达25％以上)或T波由平坦变直立，房室或室内传导阻滞改善者。

3.无效：心电图基本与治疗前相同。

4.加重：S-T段较治疗前降低0.05mV以上，在主要导联倒置T波加深(达25％以上)，或直立T波变平坦、平坦T波变倒置，以及出现异位心律、房室传导阻滞或室内传导阻滞。

观察结果：

(一)观察组与对照组心绞痛疗效比较

从表11可见，观察组心绞痛的显效率、总有效率分别为44％、87％，而对照组对心绞痛的显效率、总有效率则分别为26.7％、65％。经X²检验，其显效率有显著性差异，P＜0.05；总有效率有非常显著差异，P＜0.001，明显优于对照组药物。

表11两组心绞痛疗效比较

组别	例数	显效		有效		无效		显效率	总有效率
										例	％	例	％	例	％
		观察组	100	44	44.0	43	43.0									13	13.0	44.0*	87.0***
对照组	60							16	26.7	23	38.3	21	35.0	26.7	65.0

注：*P＜0.05、***P＜0.001

(二)观察组与对照组心电图疗效比较

从表12可见，观察组心电图的显效率和总有效率分别为28％、68％，而对照组分别为5％、61.7％。经X²检验，其显效率有非常显著性差异，P＜0.001；而总有效率无显著性差异，P＞0.05。

表12两组心电图疗效比较

组别	例数	显效		有效		无效		显效率	总有效率
										例	％	例	％	例	％
		观察组	100	28	28.0	40	40.0									32	32.0	28.0***	68.0
对照组	60							3	5.0	34	56.7	23	38.3	5.0	61.7

注：***P＜0.001

(三)观察组与对照组硝酸甘油减停率比较

从表13可见，观察组硝酸甘油高剂量组减停率为74.1％，中剂量组为92.3％，低剂量组为95.7％，说明观察组药物对服用高、中、低不同剂量硝酸甘油的患者有较为明显的减停作用，但三种剂量之间经统计学处理无显著性差异，P＞0.05。与对照组相同剂量减停率比较，亦无显著性差异，P＞0.05。提示两组对服用不同剂量硝酸甘油的减停率相近。

表13两组服用不同剂量硝酸甘油减停率比较

组别	服用剂量	服用例数	停药例数	减量例数	不变或加量例数	减停率％
							观察组	高	27	6	14	7	74.1
中	26	15	9	2	92.3
						低		47	43	2	2	95.7
对照组	高	24	2	12	10								58.3
						中	11	4	4	3	72.7
	低	25	23	1	1							96.0

(四)观察组治疗前后血脂测值比较

从表14可见，观察组患者治疗前血浆总胆固醇，甘油三脂平均测值与治疗后平均测值比较，均有非常显著性差异，P＜0.01或P＜0.001。提示观察组药物有降低血浆总胆固醇和甘油三脂的作用。

表14观察组治疗前后血脂测值( X±SD)比较

组别	例数	胆固醇(mmoL/L)		甘油三酯(mmoL/L)
						治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
		观察	100	5.72±0.89	5.40±0.76**					2.00±0.85	1.57±0.69***

注：**P＜0.01、***P＜0.001

(五)观察组治疗前后血压测值的比较

从表15可见，观察组治疗前后收缩压，经T检验，有显著性差异，P＜0.05，而舒张压，无显著性差异，P＞0.05。提示观察组药物有一定的调节收缩压的作用。

表15观察组治疗前后血压测值( X±SD)比较

组别	例数	收缩压		舒张压
						治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
		观察	100	18.33±2.12	17.77±1.76*					11.23±1.25	10.97±1.11

注：**P＜0.05

(六)安全性、毒副作用及不良反应

观察组药物疗程期间未发现毒副作用及不良反应。治疗后患者血、尿常规及肝功能等指标亦无异常改变，说明使用该药是安全可靠的。

(七)讨论

1.对12种植物复方增加冠脉血流量制品进行100例临床观察对服用不同剂量硝酸甘油患者的心绞痛的显效率和总有效率分别为44％、87％，其疗效明显优于对照组药物。对心电图的总有效率达68％，与对照组相近，但其显效率明显高于对照组，说明该药对心电图的疗效仍好于对照组。

2.复方制品能明显改善心绞痛以外的其他临床症状，心悸不宁和气短的疗效优于对照组。

3.复方制品能使患者明显减少服用硝酸甘油的剂量，但高、中、低剂量组之间没有明显差别，并与对照组亦无明显差别。

4.复方制品有一定的降低血总胆固醇、甘油三脂和调节收缩压的作用。

结论：丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方制品经临床观察证明对服用扩冠药硝酸甘油，而心绞痛症状改善不明显的患者服用该药则可取得较明显效果，同时该药对心电图及心悸不宁、气短等有显著改善作用，还有一定的降脂和调节血压作用。

             从纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足

            抗缺氧、抗心肌梗塞原料药的方法药效学实验研究

本发明灌胃给药，能显著延长小鼠耐缺氧存活时间，对异丙肾上腺素引起的心脏耗氧量增加的小鼠，其抗缺氧作用尤为明显。本品十二指肠给药，能显著对抗脑垂体后叶素诱发的豚鼠ST段上移和T波抬高，具有抗急性心肌缺血作用；对麻醉开胸猫能显著缩小结扎冠脉前降支所致的心肌梗塞范围，增加冠脉血流量，但对血压和心率无明显影响。本品对离体兔心有增加冠脉流量、抑制心肌收缩力和减慢心率作用。本品上述的抗缺氧和抗心肌梗塞作用明显优于复方丹参片或地奥心血康。

试验目的：根据本方剂的功能主治，观察复方制品对急性心肌缺血，结扎冠脉所致的心肌梗塞范围，在体和离体冠脉血流量及缺氧作用的影响，并以复方丹参片或地奥心血康作阳性对照药。

一、抗缺氧作用

受试药物

1.本发明：每ml含生药量1.0g。临用前，用蒸馏水配成0.2g/ml和0.6g/ml浓度备用。

2.复方丹参片：广州白云山制药总厂中药厂产品，每片0.25g，批号：930804。将片剂研磨成细粉后，用蒸馏水配成0.05g/ml混悬液备用。

3.地奥心血康胶囊：中科院成都生物研究所制药厂产品，每粒100mg，批号：941202。用蒸馏水配成5mg/ml混悬液备用。

4.硫酸异丙肾上腺注射液：上海第十制药厂产品，0.5mg/ml，批号：860804。

动物：昆明种雄性小白鼠由中国医科大学实验动物中心提供(合格证：辽实质合字3号，辽实条合字1号)，体重20±2g，每组10只。

(一)对小鼠常压耐缺氧的影响

方法：取健康的小鼠50只，按体重随机分为5组。空白对照组灌胃给予生理盐水；复方制品大、小剂量组分别灌服7.2g/kg和21.6g/kg；复方丹参片组灌服1.8g/kg；在奥心血康组灌服0.18g/kg，每天一次，连续7天，给药容积均为0.36ml/10g。天末次给药后45min，分别将小鼠放入容积相等的25ml广口瓶内密闭，瓶内放入钠石灰10g，瓶塞涂匀凡士林。以呼吸停止为指标，记录动物的存活时间，各给药组空白对照组之间进行t检验，评价药物的作用。

结果  如表1所示，各给药组除地奥心血康无抗缺氧作用外，均能显著延行小鼠存活时间(P＜0.05-0.001)，复方制品延长小鼠存活时间呈剂量依赖关系，且与复方丹参片组比也有显著性差异(P＜0.05>，说明本品抗氧作用优于复方丹参片。

(二)对异丙肾上腺素性小鼠耐氧的影响

方法  取健康的小鼠60只，按体重随机分为空白对照、模型对照、复方制品小、大剂量、复方丹参片和地奥心血康等6组。除空白对照和模型对照级灌服生理盐水外，其余各组给药途径，剂量、容积和给药天数，均与上述常压耐缺氧实验相同。于末次给药后15min，除空白对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组腹腔注射异丙肾上腺素溶液10mg/kg，30min后，按上述方法分别将小鼠放入密闭的广口瓶内，观察小鼠的存活时间。

结果  如表2所示，模型对照组与空白对照组比较，显著缩短小鼠存活时间(P＜0.01)，提示异丙肾上腺素引起的心脏耗氧量增加的小鼠，明显降低其耐缺氧能力。复方制品小、大剂量组与模型对照组比较，均能明显延长小鼠存活时间(P＜0.001)，分别延长80％和136.8％；复方丹参片和地奥心血康仅延长24.5％和31.7％。本品对心脏耗氧量增加情况下的抗氧能力，明显强于后两种药物(P＜0.001)。

二、本发明以脑垂体后叶素所致豚鼠心肌缺血的影响

1.复方制品：沈阳飞龙保健品有限公司提供，每ml含生药量1.0g，批号：9401105。另用蒸馏水稀释配成0.33g/ml溶液备用。

2.复方丹参片：广州白云山制药总厂中药厂产品，每片0.25g，批号：930804。蒸馏水浸泡后，配成0.2g/ml混悬液备用。

3.地奥心血康胶囊：中科院成都生物研究所制药厂产品，每粒100mg，批号：941202。用蒸馏水配成0.02g/ml混悬液备用。

4.垂体后叶素注射液：沈阳市生物化学制药厂产品，10u/ml，批号：941101。临用前，用生理盐水稀释成1μ/ml备用。

动物  豚鼠由沈阳医学院动物室提供(合格证：辽实质合字4号，辽实条合字13号)，体重245-285g，雌雄兼用。

仪器  双道心电图机，C2a型，意大利产；慢速匀速电动注射器，F135型，英国Palme厂产。

方法  向豚鼠腹腔注射乌拉坦(1.0-1.2g/kg)麻醉后，剥离一侧颈静脉，插入一塑料管，另一端联接于慢速电动注射器，以0.32ml/min匀速向静脉内持续注入生理盐水，以防血凝。将针状电极插入豚鼠四肢及V3皮下位置上，标定电压为1cm＝1mv。待心电图稳定后，从颈静脉注入垂体后叶素0.5u/kg，立即将电动注射器注射速度调至0.6ml/min，持续1min，然后将速度调回0.02ml/min。垂体后叶素注入后，用心电示波器观察心电图变化，并随时记录之。然后，将53只豚鼠随机分为5组，于注入垂体后叶素后20min，分别由十二指肠给予如下药物：(1)对照组；注入生理盐水；(2)复方制品小、大剂量组：分别注入2.0、6.0g/kg(3)复方丹参片组；注入1.2g.kg；(4)地奥心血康组：注入0.12g/kg，给药容积均为0.6ml/100g。给予上述药物40min时，即给予垂体后叶素1h时，重复注入同剂量的垂体后叶素，记录心电图，比较两次给予垂体后叶素后V3心电图T波和ST段的差异变化，用t检验评价药物的抗心肌缺血作用。

结果：

1.以ST段上移的以抗作用

生理盐水组前后两次予垂体后叶素自身对照，ST段的变化无显著性差异(P＞0.05)。小剂量复方制品组给药后ST段上移明显受到抑制(P＜0.05)，但与生理盐水组比较，没有显著性差异(p＞0.05)。大剂量复方制品组给药后ST段上移，不论自身对照或组间对照均有显著性差异(P＜0.01).复方丹参片和地奥心血康也有相似的抗急性心肌缺血作用(表3、图2)。

2.对T波抬高的以抗作用

生理盐水组前后两次给予垂体后叶素自身对照，T波变化无显著性差异(P＞0.05)。复方制品小、大剂量组与生理盐水组比较，T小组增高均被显著抑制(P＜0.01)。复方丹参片和地奥心血康也有相似的抗急性心肌缺血作用(表3、图2)。

三、复方制品对结扎猫冠脉所致心肌梗塞的影响

1.复方制品、复方丹参片的配制同实验二。

2.氯化硝基四氮唑兰：上海前进试剂厂产品，批号：900103。

动物  杂种猫购于沈阳市动物市场，体重2.2-4.0kg，雌雄兼用。

仪器  将猫用戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉后，切开气管，连接人工呼吸机维持呼吸。四肢皮下插入心电图电极，连于多导生理记录仪。将26只猫随机分为4组，描记正常心电图后，经十二肠分别注入如下药物。(1)对照组：注入生理盐水；(2)复方制品小、大剂量组：分别注入1g/kg和3g/kg；(3)复方丹参片组：注入0.6g/kg，给药容积均为0.3g/100g。给药后，即行开胸，暴露心脏，剪开心包，将心包膜缝合于胸壁开口处，细心剥离冠脉前降支左分支，并于给药后30min，用丝线结扎左分去根部，关闭胸腔。随时描记心电图。结扎后3h，处死猫，摘取心脏，剃除心房及心室脂肪组织，只保留心室，用生理盐水洗净后，横断剪成0.3-0.4cm厚园形心肌片6片，滤纸吸干，放放入用磷酸缓冲液(PH7.4)配制的0.1％氯化硝基四氮唑兰溶液中，37℃温育15min。然后，将末染色心肌与染成紫兰色心肌用手术剪分开，分别称重。以末染色心室肌重占全心室肌重的％表示，进行组间t检验，评价药物的抗心肌梗塞作用。

结果  如图3所示，结扎冠脉后心电图立即出现各种心肌缺血异常心电图改变。结扎后3h，生理盐水组梗塞心肌重量占心室肌总重量的16.48±2.98％。复方制品小、大剂量组分别为9.34±1.61％及10.99±1.51％，与生理盐水组比较均有显著性闭差异(P＜0.01)。复方丹参片也有相似的结果(表4)。复方制品大剂量组与复方丹参片组比较，有显著性差异(P＜0.05)，前者抗心肌梗塞作用优于后者。

四、复方制品对麻醉猫血压、心率及冠脉血流量的影响

受试药物  复方制品、复方丹参片的配制同实验二。

动物  杂种猫购于沈阳市动物市场，体重2.8-4.2kg，雌雄兼用。

仪器  多导生理记录仪，ST-42型，上海医用仪器厂生产。激光多普勒流量计，PF2型，瑞典产。小动物人工呼吸器，英国Palmer厂产。

方法  猫腹腔注射戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉后，在人工呼吸条件下沿胸骨左缘剪断2-5肋骨，拉开胸腔，暴露心脏。剪开心包，将剪开的心包膜缝合于胸壁开口处。将针状心电图电极插于四肢皮下，通过描入股动脉，胶管的另一端连接压力换能器，描记股动脉血压。待备压及心电图稳定后，将流量计探关放于左冠状动脉前降支下1/3固定猫24只，随机分为对照组、复方制品小、大剂量组复方丹参片4组。各组给药剂量、容积和给药途径与实验三相同，从十二肠分别注入药物后15、30、45和60min，描记血压、心电图曲线，同时并测定冠脉搏、血流量，给药务组与生理盐水组之间进行t检验，评价药物作用。

结果：

1.对心率的影响  如表5所示，各组给药前后心电图基本无变化，从心电图上反映的心率各组间亦无显著性差异(P＞0.05)，提示复方制品对麻醉猫心率明显影响。

2.对血压的影响确良给药后各组血压随着时间的推移，均逐渐略有下降，但各组各时间内与给药比较均无显著性差异，给药各组与生理盐水组比较亦无显著性差异(P＞0.05)，提示复方制品对麻醉猫血压无明显影响(表6)。

3.对冠脉血流量的影响  由表7可见，复方制品小剂量组与生理盐水组比较，冠脉血流量虽有所增加，但无显著性差异(P＞0.05)。复方制品大剂量组能显著增加冠脉血流量23.4-27.0％(P＜0.05～0.01)。复方丹参片也有相似的作用，且与复方制品无显著性差异。

五、复方制品对离体兔心的影响

1.复方制品：每ml含生药量1.0g，使用时用滤纸滤过两次。用蒸馏水稀释配成100mg/ml和333.3mg/ml溶液备用。

2.复方丹参片：用蒸馏水浸泡后，过滤，配成。

3.地奥心血康胶囊；用蒸馏水溶解后，过滤，配成5mg/ml溶液备用。

动物家兔购于沈阳医学院动物室(合格证；辽实质合字4号，辽实条合字13号)，体重1.8-2.4kg，雌雄兼用。

仪器  二道生理记录仪，LMS-2A型，成都仪器厂产。离体心脏灌注装置，英国Palemer厂产。

方法  取健康家兔48只，随机分为6组，每组8只。击头致昏后，立即摘取心脏，按Langendorff法用95％+5％CO2的Locke溶液灌注离体兔心，温度37°±0.5℃。心尖部用兔心夹夹住后，通过丝线连接于拉力换能器(JH-1B-100)上，有二道生理记录仪描记心肌收缩振幅、心率变化曲线。待心脏捕动稳定后，然后，向与心脏连接的胶管内分别注入下列药物；(1)阴性对照组：注入生理盐水；(2)复方制品组：分别注入30mg，100mg或300mg；(3)阳性对照组：分别注入复方丹参片60mg或地奥心血康1.5mg，给药容积均为0.3ml。给药后，立即收取30s内流量，并记录心率及收缩振幅。比较给药前、后上述三项指标值勤有无显著性差异，用t检验评价药物的作用。

结果：

1.对离体兔心冠脉流量的影响  复方制品有显著增加冠脉流量作用，且随着剂量的增加，作用增强。给药后30s流量组分别平均增加1.2、2.0、5.3ml(P＞0.01)。复方丹参片也有相似增加冠脉流量作用(P＜0.01)，但在奥心血康可使冠脉血量显著减少(P＜0.01)。生理盐水对冠脉流量无影响(表8、图4)。

2.对离体兔心心率的影响  复方制品的三个剂量组对离体兔心的心率均呈减慢作用(P＜0.01)，其中大剂量组作用最明显。复方丹参片和地奥心血康也有相似的减慢心率作用(表9)。

3.对离体兔心心肌收缩影响  生理盐水对离体兔心收缩振幅无影响。地奥心血康地给药后30s内，收缩振幅略增加，以后振幅逐渐减小。其他各给药组均使收缩振幅显著减小(P＜0.01)，同时张力增加，复方制品三个剂量组呈剂量依赖关系。(表10、图4)

结论：

1.小鼠灌胃给予复方制品7.2、21.6g/kg·d，连续给药7天，能显著延长小鼠耐缺氧的存活时间；对异丙肾上腺素引起心脏耗氧量增加的小鼠，其抗缺氧作用尤强，本品抗缺氧作用明显优于复方丹参片和地奥心血康。

2.从豚鼠十二肠注入复方制品2.0、6.0g/kg，能显著抑制垂体后叶素诱发的ST段上移和T波增高，并呈剂量依赖关系，提示本品具有抗急性心肌缺血作用。复方丹参片和地奥心血康也有相似的抗心肌缺血作用。

3.给麻醉开胸猫十二指肠注入复方制品1.0、3.0g/kg，显著缩小结扎冠脉前降支所致的心肌梗塞范围，提示本品具有抗心肌梗塞作用，其作用优于复方丹参片。

4.给麻醉开胸猫十二肠注入上述剂量的复方制品，能显著增加冠脉血流量，持续1小时以上，但对血压和心率无明显影响。复方丹参片也有相似的作用。

5.本发明对离体兔心能显著增加冠脉流量，减慢心率，抑制心肌收缩力。复方丹参片亦有相似的作用，而地奥心血康在增加心肌收缩力的同时，显著减少冠脉流量。

         从纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足

            抗缺氧、抗心肌梗塞原料药的方法研究综述

随着人民生活水平的不断提高，膳食结构改善，人们对饱和脂肪酸和胆固醇的摄入量大幅度增加，促使冠心病发病率和死亡率不断增加，严重地影响人们身体健康和正常生活。但通常情况，冠心病患者只在病情发作期间重视治疗，对未病先防和日常保健却往往忽视，对减少冠心病的发病和死亡带来不利影响。为此，研制对心肌供血不足具有改善作用，可以预防和辅助治疗冠心病的保健新药，为人类健康服务，将具有深远的社会意义。

1.制备工艺的研究

2.制剂稳定性的考察

我们通过对连续三批的本发明样品二年的稳定性考察，各项指标均符合制剂稳定性方面的要求。

3.与治疗作用有关的主要药效学试验研究

我们进行了本发明对小鼠耐缺氧作用的研究、对脑垂体后叶素所致豚鼠心肌缺血的影响、对结扎猫冠脉所致心肌梗塞的影响、对麻醉猫血压、心率及冠脉血流量的影响、对离体兔心的影响、对血瘀大鼠血液流变学的影响，并以复方丹参片、地奥心血康作为对照药，结果表明：

(1)小鼠灌胃给予本发明7.2、21.6g/kg·d，连续给药7天，能显著延长小鼠耐缺氧的存活时间；对异丙肾上腺素引起心脏耗氧量增加的小鼠，其抗缺氧作用尤强。本品抗缺氧作用明显优于复方丹参片和地奥心血康。

(2)从豚鼠十二指肠注入本发明2.0、6.0g/kg，能显著抑制垂体后叶素诱发的ST段上移和T波增高，并呈剂量依赖关系，提示本品具有抗急性心肌缺血作用。复方丹参片和地奥心血康也有相似的抗心肌缺血作用。

(3)给麻醉开胸猫十二指肠注入本发明1.0、3.0g/kg，显著缩小结扎冠脉前降支所致的心肌梗塞范围，提示本品具有抗心肌梗塞作用，其作用优于复方丹参片。

(4)给麻醉开胸猫十二指肠注入上述剂量的本发明，能显著增加冠脉血流量，持续1小时以上，但对血压和心率无明显影响。复方丹参片也有相似的作用。

(5)本发明对离体兔心能显著增加冠脉流量，减慢心率，抑制心肌收缩力。复方丹参片亦有相似的作用，而地奥心血康在增加心肌收缩力的同时，显著减少冠脉流量。

(6)对大鼠灌胃给予本发明3.6、10.8g/kg，每天一次，连续5天，能显著降低血瘀大鼠全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积，并加速血沉时间，且呈一定的量效关系。复方丹参片也有相似的改善血液流变学作用。

4.动物急性毒性、长期毒性研究

(1)急性毒性研究：本发明小鼠灌胃给药LD50及期限95％平均可信限为139.70±6.98g(生药)/kg。

(2)长期毒性研究：大鼠灌胃给予本发明8.75、17.5和35g(生药)/kg，每天一次，连续8周。结果表明，对大鼠体征行为、生长发育、血象、肝肾功能等均无明显的蓄积毒性反应。脏器系数及病理组织学检查亦无异常改变，提示临床用药安全。

5.临床研究

以辽宁省中医研究院为组长单位，以辽宁省丹东市中医院、辽宁省沈阳市第七人民医院为协作单位，对本发明进行了临床研究。结果表明：本发明对服用扩冠药硝酸甘油而胸痛(心绞痛)症状改善不明显的患者，服用该药则取得较明显的结果，其显效率和总有效率分别为44％、87％；对心电图的总有效率为68％；对心悸不宁、气短等有显著改善作用；能使患者明显减少服用硝酸甘油的剂量；还有一定的降脂和调节血压作用。说明该药是一种治疗冠心病心绞痛疗效较好的药物。

通过本发明临床观察，未发现毒副作用及不良反应。

Claims (2)

1.从纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞药物的方法，其特征在于将以下12位天然产物丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂，采用先进的大孔树脂吸附有效成份，并使用气相指痕光谱定量。其重量百分比为由丹参12％、三七3％、川芎9％、红花8％、牛膝8％、人参12％、黄芪12％、五味子7％、淫羊藿10％、葛根7％、何首乌7％、肉桂5％。将丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物复方原料，用超临界流体二氧化碳萃取剂，萃取丹参、三七、川芎、红花、牛膝、人参、黄芪、五味子、淫羊藿、葛根、何首乌、肉桂植物挥发油成分，再将气态二氧化碳萃取剂与植物成份分离，精馏后备用，将二氧化碳超临界萃取后的12种植物复方原料，每100kg分别加入300kg、200kg、100kg、65％的乙醇，在85℃条件下，回流提取3小时，2小时，1小时，合并乙醇提取的滤液，在85℃条件下，回收乙醇，并将滤液浓缩，将每100kg浓缩滤液，加入100kg水，在常温条件下，静置6小时，吸取上清液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％的乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，在85℃条件下，喷雾干燥，用气相层析测定仪器，进行指痕图谱成分定量测定后，制成标准原料药。

2.按照权利要求所述1从纯中药制剂中提取具有改善急性心肌供血不足抗缺氧抗心肌梗塞药物的方法，其特征在于所述的原料药可以制备成片剂、丸剂、胶囊、口服液及针剂。

Images