CN1796381A

CN1796381A - 治疗b型肝炎的化合物及其医药组合物

Info

Publication number: CN1796381A
Application number: CN 200410104164
Authority: CN
Inventors: 李连滋; 张秀凤; 叶俊邦
Original assignee: Industrial Technology Research Institute ITRI
Current assignee: Belks Biotechnology Co ltd
Priority date: 2004-12-30
Filing date: 2004-12-30
Publication date: 2006-07-05
Anticipated expiration: 2024-12-30
Also published as: CN100415731C

Abstract

本发明提供了一种用于治疗B型肝炎的化合物，其包括含有结构式I或II的化合物，本发明还涉及一种治疗B型肝炎的医药组合物，其包括有效量的前述化合物；本发明另外还提供一种用于治疗B型肝炎的药物组合，其包括：有效量的前述化合物，以及医药上可接受的佐药、载体或赋型剂。

Description

治疗B型肝炎的化合物及其医药组合物

技术领域

本发明提供一种可治疗B型肝炎的化合物、医药组合物及药物组合，该化合物为天然植物成分类黄酮素所衍生的化合物。

背景技术

在台湾每年约有五千多人死于肝癌，五千多人死于肝硬化和慢性肝炎。自二十世纪八十年代年以来，癌症为国人十大死因第一位，其中肝癌一直位居国人男性癌症死因第一位，女性癌症死因第二位，所以肝病可以说是台湾地区最常见的本土病。

病毒性肝病是指病毒所引起的肝病，包括急慢性肝炎、肝硬化、肝癌。在台湾，以病毒性肝病所引起的肝病危害最广。目前有多种病毒可以引起肝炎，其中主要表现为肝脏病变的有五种，即A、B、C、D、E型肝炎病毒(也可称为甲、乙、丙、丁、戊型肝炎)，其中B、C、D型肝炎病毒会导致慢性肝炎、肝硬化，甚至肝癌。在台湾，又以B型肝炎的罹患率与死亡率最高。目前全世界约有三亿七千五百万人感染B型肝炎，多半分布于亚洲，其中有数百万人因此引发肝癌。在美国，B型肝炎的发生率以华裔组群居多，比率高达15％，其它美国人只占0.3％。在中国，台湾，韩国，越南出生的成年人患有B型肝炎的比率约在10-20％。

B型肝炎是经由含有B型肝炎病毒的血液或体液透过皮肤或粘膜进入体内而感染，其途径包括输血、打针、血液透析、针灸、刺青、纹眉、穿耳洞、共享牙刷或刮胡刀以及性行为等。如果孕妇是B型肝炎携带者，有可能在分娩时将病毒传染给新生儿，而这种垂直感染曾经是国内最重要的B型肝炎感染途径。

B型肝炎感染后不一定有症状出现，所以需要靠抽血检查做正确的诊断。首先要检验B型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)及表面抗体(Anti-HBs)，若血中HBsAg呈现阳性反应，表示可能是B型肝炎携带者，应该再进一步追踪检查。反之，若血中HBsAg呈阴性反应，而且Anti-HBs呈阳性反应，表示体内已有抵抗B型肝炎病毒的免疫力。

HBsAg呈现阳性反应者，应该再检验B型肝炎病毒的e抗原(HBeAg)及e抗体(Anti-HBe)。若血中HBeAg呈现阳性反应，表示患者体内的B型肝炎病毒仍在旺盛制造，较易引发肝炎，具高传染性；反之，若血中HBeAg呈阴性反应，且Anti-HBe呈现阳性反应，则情况相反，应定期检查肝功能。

目前对B型肝炎治疗效果较好的是干扰素。干扰素可以抑制B型肝炎病毒的活性，改善肝脏发炎情况及降低GOT、GPT数值。不过B型肝炎病毒的表面抗原仍然存在，并不会消失，而且有部份病人在停药之后又会复发。干扰素的副作用，最常见的就是出现类似感冒的症状(发烧，头痛，全身肌肉、骨头酸痛等)，一般是出现在注射干扰素的第一周，之后就会消失。然而，并非所有的B型肝炎病人都适合干扰素的治疗，而且干扰素治疗的效果也不尽相同；另外，尚有一种新的治疗用药“肝安能(Zeffix)”，此药是目前唯一治疗慢性B型肝炎的口服用药，服用此药需有条件限制，并不是所有B型肝炎患者及携带者都适合，必须经专科医师确定患者目前B型肝炎正处于发病时期才建议使用，肝安能可改善肝脏发炎与纤维化，但其缺点是抗药性病毒的产生，会使患者发生具危险性的急性肝炎，再者，使用此药亦可能产生罕见的副作用，例如导致骨胳肌溶解，继而可能引发横膈膜溶解，影响到呼吸功能等。因此目前急需开发一种更有效且副作用低的B型肝炎治疗用药。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种包括具有下列式I结构的化合物，

式I；

其中R₁-R₅、R’₁-R’₅为氢(H)、甲氧基(OMe)或乙氧基(OEt)，该化合物可用于制备治疗B型肝炎的药物。

本发明的目的还在于提供一种具有式II结构的化合物，

式II；

其中R₁-R₄、R’₁-R’₅为氢(H)、甲氧基(OMe)或乙氧基(OEt)，该化合物可用于制备治疗B型肝炎的药物。

本发明的目的还在于提供一种用于治疗B型肝炎的医药组合物，其包括有效量的式I或II结构的化合物。

本发明的目的还在于提供一种用于治疗B型肝炎的药物组合(套组)，其包括：有效量的式I或II结构的化合物；以及医药上可接受的佐药、载体或赋型剂。

本发明提供的一种用于治疗B型肝炎的化合物，其为具有式I结构的化合物，其中R₁-R₅、R’₁-R’₅为氢(H)、甲氧基(OMe)或乙氧基(OEt)。

上述具有式I结构的化合物可用于制备治疗B型肝炎的药物，该化合物包括，但不限于以下，例如：

甲基化漆黄素(Fisetin Me)

甲基化黄芩黄素(Baicalein Me)

甲基化槲黄素(Quercetin Me)

甲基化桑色素(Morin Me)

甲基化7，8-二羟基黄酮(7，8-Dimethoxyflavone)

以及

桔皮素(CPB，Tangeretin)

本发明还提供一种用于治疗B型肝炎的化合物，其为具有下列式II结构的化合物，其中R₁-R₄、R’₁-R’₅为氢(H)、甲氧基(OMe)或乙氧基(OEt)。

上述具有结构式II的化合物可用于制备治疗B型肝炎的药物，该化合物包括，但不限于以下，例如：

甲基化柚皮素(Naringenin Me)

以及

黄烷酮(Flavanone)

其中上述化合物均可以由天然植物萃取(例如：黄烷酮、CPB)或由黄酮素以二甲基硫酸甲基化制得，或以二乙基硫酸酯进行乙基化制得。

本发明还提供一种用于治疗B型肝炎的医药组合物，其包括有效量的式I或II结构的化合物。

所述的医药组合物，其可为静脉、肌肉、上皮、腹腔、吸入、口含、口服或经皮等给药剂型，以食品、饮品、药品、试剂或营养补充品等形式施用；该医药组合物也可为粉末状、颗粒状、锭状、液状、胶状或膏状等形式，施用时的方式依欲治疗的疾病、病症或症状的类型决定。

本发明还提供一种用于治疗B型肝炎的药物组合(套组)，其中包括：有效量的式I或II结构的化合物；以及医药上可接受的佐药、载体或赋型剂。

所述药物组合，其可进一步包含，例如，但不限于：使用说明或盛装容器。

所述的药物载体可能包含惰性成分，该惰性成分不会与本发明的化合物发生实质反应。可利用常规技术，如描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA.中的方法制备所述的药物组合；用于非口服施药的适当药物载体包含，例如，无菌水、生理食盐水、抑菌食盐水(包含约0.9％mg/ml苯基醇的食盐水)、磷酸缓冲液食盐水、汉克溶液、林格式乳糖液及其它相似载体。

“有效量”指该化合物剂量在提供给对象后能获得有益的结果，或者，该化合物的剂量在体内或体外能获得预期的活性。以肿瘤为例，相对于未接受治疗的对象而言，有益的临床结果包含减少肝炎病毒数量、降低肝炎病毒成长速率、减少肝炎相关的症状程度，及/或延长寿命及/或提高治疗对象的生活品质。提供给对象的精确剂量必须依疾病的种类、程度或症状及对象个体体质来决定，如一般的健康状况、年龄、性别、体重及对药物的忍受度。剂量也与肝炎的程度、严重性及种类有关。本领域技术人员可依据前述或其它因子来决定适当的剂量。

附图说明

图1：本发明的化合物抑制B型肝炎病毒的功效。

具体实施方式

以下结合附图详细说明本发明，但不限定本发明的实施范围。实施例一、桔皮素(CPB，Tangeretin)的制备

取市售500克青皮粉碎至粉状，加入1500毫升正己烷，加热至摄氏60度进行搅拌萃取，两小时后进行过滤，滤渣依上述条件再加入1500毫升正己烷(两次)进行二萃及三萃后滤液合并，再以减压旋转浓缩仪蒸回收分离正己烷，得油状浸膏19.2克。浸膏加入100毫升正己烷溶解后，再以每次50毫升的80％甲醇水溶液萃取三次，收集甲醇水溶液后合并，再以减压旋转浓缩仪蒸除溶剂，得浸膏4.1克，再加入甲醇10毫升，加热溶解，冷却后放置隔夜待结晶析出，之后过滤固体，以5毫升甲醇清洗后烘干，得1.04克85％纯度的CPB(Tangeretin)结晶，再以硅胶管柱进行纯化以丙酮∶正己烷＝1∶1进行冲提，得0.79克99％纯度的桔皮素结晶。以核磁共振(NMR)确认结构(氢谱3.884ppm 3H，3.957ppm 6H，3.957ppm 6H，4.030ppm 3H，4.109ppm3H，6.609ppm 1H，7.023ppm 2H，7.876ppm 2H)。

实施例二、甲基化槲黄素(3，3’，4’，5，7-Pentamethoxyflavone)的制备

取槲黄素(Quercetin，3，3’，4’，5，7-Pentahydroxyflavone)0.3克加入甲醇10毫升，常温25℃搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二甲基硫酸酯，控制酸碱值于pH 11至13之间，以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去甲醇，加入50毫升水及50毫升乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层，加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再将硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1混合溶液冲提纯化制得产品3，3’，4’，5，7-Pentamethoxyflavone 0.34克(收率92％)。以核磁共振确认结构(氢谱3.887ppm 3H；3.899ppm 3H；3.953ppm 3H；3.959ppm 3H；3.965ppm 3H；6.324ppm 1H；6.486ppm 1H；6.971ppm 1H；7.692ppm 2H)。

实施例三、甲基化桑色素(2’，3，4’，5，7-Pentamethoxyflavone)的制备

取桑色素(Morin，2’，3，4’，5，7-Pentahydroxyflavone)0.3克加甲醇10毫升，常温50℃搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二甲基硫酸酯，并控制酸碱值于pH 11至13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去甲醇后加入50毫升水及50毫升乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1冲提纯化得产品2’，3，4’，5，7-Pentamethoxyflavone 0.31克(84％收率)。以核磁共振确认结构(氢谱3.809ppm 3H；3.833ppm 3H；3.847ppm 3H；3.867ppm 3H；3.958ppm 3H；6.338ppm 1H；6.431ppm 1H；6.582ppm 2H；7.372ppm 1H)。

实施例四、甲基化漆黄素(3，3’，4’，7-Tetramethoxyflavone)的制备

取漆黄素(Fisetin，3，3’，4’，7-Tetrahydroxyflavone)0.03克加甲醇4毫升，常温50℃搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二甲基硫酸酯，并控制酸碱值于pH 11至13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去甲醇后加入30毫升水及30毫升乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1冲提纯化得产品3，3’，4’，7-Tetramethoxyflavone 0.031克(86％收率)。以核磁共振确认结构(氢谱3.929ppm 3H；3.973ppm 3H；4.017ppm 6H；6.956ppm 1H；7.042ppm 2H；7.771ppm 2H；8.207ppm 1H)。

实施例五、甲基化黄芩黄素(5，6，7-Trimethoxyflavone)的制备

取黄芩黄素(Baicalein，5，6，7-Trihydroxyflavone)0.03克加甲醇4毫升，常温50℃搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二甲基硫酸酯，并控制酸碱值于pH 11至13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去甲醇后加入30毫升水及30毫升乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1冲提纯化得产品5，6，7-Trimethoxyflavone 0.032克(92％收率)。以核磁共振确认结构(氢谱3.970ppm 3H；4.032ppm 3H；4.044ppm 3H；6.718ppm 1H；6.861ppm 1H；7.561ppm 3H；7.934ppm 2H)。

实施例六、甲基化7，8-二羟基黄酮(7，8-Dimethoxyflavone)的制备

取7，8-二羟基黄酮(7，8-Dihydroxyflavone)0.3克加甲醇10毫升，常温50℃搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二甲基硫酸酯，并控制酸碱值于pH 11至13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去甲醇后加入50毫升水及50毫升的乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1冲提纯化得产品7，8-Dimethoxyflavone 0.33克(98％收率)。以核磁共振确认结构(氢谱4.010ppm 3H；4.052ppm 3H；6.770ppm 1H；7.054ppm 1H；7.535ppm3H；7.965ppm 3H)。

实施例七、甲基化柚皮素(4’，5，7-Trimethoxyflavanone)的制备

取柚皮素(Naringenin，4’，5，7-Trihydroxyflavanone)0.3克加甲醇10毫升，50℃搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二甲基硫酸酯，并控制酸碱值于pH 11至13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去甲醇后加入50毫升水及50毫升乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1冲提纯化得产品4’，5，7-Trimethoxyflavanone 0.21克(61％收率)以核磁共振确认结构(氢谱3.691ppm 2H；3.780ppm 3H；3.822ppm 3H；3.878ppm 3H；6.304ppm 1H；6.884ppm 3H；7.322ppm 1H；7.472ppm 2H)。

实施例八、甲基化槲黄素(3，3’，4’，5，7-Pentaethoxyflavone)的制备

取槲黄素(Quercetin，3，3’，4’，5，7-Pentahydroxyflavone)0.1g加乙醇6毫升，常温25度C搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二乙基硫酸酯，并控制酸碱值于11-13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去乙醇后，加入10毫升水及15毫升之乙酸乙酯，萃取分相，取乙酸乙酯层，加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝1；1冲提纯化得产品3，3’，4’，5，7-Pentaethoxyflavone0.11g(75％收率)核磁共振氢光谱(1.2-1.7ppm 15H；4.0-4.3ppm 10H；6.324ppm 1H；6.486ppm 1H；6.971ppm 1H；7.64ppm 1H；7.801ppm 1H)。

实施例九、甲基化桑色素(2’，3，4’，5，7-Pentamethoxyflavone)的制备

取桑色素(Morin，2’，3，4’，5，7-Pentahydroxyflavone)0.1g加乙醇6毫升，升温50度C搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二乙基硫酸酯，并控制酸碱值于11-13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去乙醇后加入10毫升水及15毫升的乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2冲提纯化得产品2’，3，4’，5，7-Pentaethoxyflavone 0.12g(82％收率)核磁共振氢光谱(1.1-1.7ppm 15H；4.0-4.3ppm 10H；6.358ppm 1H；6.422ppm 1H；6.591ppm 2H；7.401ppm 1H)。

实施例十、甲基化漆黄素(3，3’，4’，7-Tetramethoxyflavone)的制备

取漆黄素(Fisetin，3，3’，4’，7-Tetrahydroxyflavone)0.01g加乙醇1毫升，升温50度C搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二乙基硫酸酯，控制酸碱值于11-13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去乙醇后加入10毫升水及10毫升的乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2冲提纯化得产品3，3’，4’，7-Tetraethoxyflavone 0.012g(86％收率)核磁共振氢光谱(1.2-1.7ppm 12H；4.1-4.4ppm 8H；6.912ppm 1H；7.052ppm 2H；7.783ppm 1H；7.822ppm 1H；8.194ppm 1H)。

实施例十一、甲基化黄芩黄素(5，6，7-Trimethoxyflavone)的制备

取黄芩黄素(Baicalein，5，6，7-Trihydroxyflavone)0.01g加乙醇1毫升，升温50度C搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二乙基硫酸酯，并控制酸碱值于11-13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去乙醇后加入10毫升水及10毫升的乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2冲提纯化得产品5，6，7-Triethoxyflavone 0.011g(84％收率)核磁共振氢光谱(1.2-1.8ppm 9H；4.1-4.3ppm 6H；6.682ppm 1H；6.821ppm 1H；7.583ppm3H；7.943ppm 2H)。

实施例十二、甲基化7，8-二羟基黄酮(7，8-Dimethoxyflavone)的制备

取7，8-二羟基黄酮(7，8-Dihydroxyflavone)0.06g加乙醇4毫升，升温50度C搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二乙基硫酸酯，并控制酸碱值于11-13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去乙醇后加入10毫升水及10毫升之乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1冲提纯化得产品7，8-Dimethoxyflavone 0.064g(88％收率)核磁共振氢光谱(1.4-1.6ppm 6H；4.2-4.4ppm 4H；6.801ppm 1H；7.205ppm 1H；7.592ppm 3H；7.945ppm 3H)。

实施例十三、甲基化柚皮素(4’，5，7-Trimethoxyflavanone)的制备

取柚皮素(Naringenin，4’，5，7-Trihydroxyflavanone)0.1g加乙醇6毫升，50度C搅拌，交叉循环滴加45％氢氧化钠及二乙基硫酸酯，并控制酸碱值于11-13之间，并以高效液相层析仪监视分析至反应完全，减压浓缩除去乙醇后加入50毫升水及50毫升的乙酸乙酯萃取分相，取乙酸乙酯层加入无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩得粗产品，再以硅胶管柱用乙酸乙酯∶正己烷＝1；2冲提纯化得产品4’，5，7-Triethoxyflavanone 0.11g(83％收率)核磁共振氢光谱(1.2-1.6ppm 9H；3.9-4.2ppm 6H；6.195ppm 2H；6.924ppm 3H；7.345ppm 1H；7.492ppm 2H)。

实施例十四、本发明的化合物对抗B型肝炎的功效

本实施例为检测上述八种本发明的化合物抑制B型肝炎病毒功效的细胞试验，实施方式如下：(1)选用含有B型肝炎病毒的细胞株(HePG2.215)，以DMEM培养基(Gibco公司出品)在37℃及5％CO2的条件下进行培养；(2)将不同浓度的本发明的化合物加入步骤(1)细胞株中进行培养四天；(3)分别于第二、四天，将步骤(2)的细胞培养液收集，进行离心(2000xg2分钟)；以及(4)将步骤(3)离心的上清液部份利用市售药物组合进行B型肝炎病毒表面抗原(HBs)及e抗原(HBe)抑制的测试，结果如图1所示，发现本发明的化合物的确可以有效抑制B型肝炎病毒表面抗原(HBs)及e抗原(HBe)，其中又以桔皮素(CPB，Tangeretin)、甲基化7，8-二羟基黄酮及甲基化黄芩黄素三种效果最佳(甲基化槲黄素及黄烷酮的结果未显示)。

由上述实验结果可得知，本发明的化合物的确具有抑制B型肝炎病毒的功效，因而可以用来治疗B型肝炎，本发明的化合物由天然植物萃取或由黄酮素以二甲基硫酸甲基化制得，对人体的副作用低，取得容易，深具新一代B型肝炎用药的发展潜力。

虽然本发明已以优选实施例方式披露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟悉此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种更动与润饰，因此，本发明的保护范围，应以权利要求所界定的范围为准。