CN102558126B

CN102558126B - 2-取代色原酮类化合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102558126B
Application number: CN201010591886.3A
Authority: CN
Inventors: 俞培忠; 孙雨伟; 章瑶
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2010-12-16
Filing date: 2010-12-16
Publication date: 2014-03-05
Anticipated expiration: 2030-12-16
Also published as: CN102558126A

Abstract

本发明属药物领域，涉及如下通式的2-取代色原酮类化合物及其制备方法和用途，本发明的2-取代基的色原酮类化合物经体外抗HBV活性试验，结果证实，所述的2-取代基的色原酮类化合物具有显著的抗HBV作用，且有效浓度低，细胞毒性小。本发明的2-取代基的色原酮类化合物可进一步制成药物组合物，用于治疗或预防乙肝病毒感染。尤其是用于抑制乙肝病毒表面抗原和e抗原的复制。本发明的药物组合可经鼻、经口、透皮、非肠道、静脉或肌肉注射给药。

Description

2-取代色原酮类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属药物领域，涉及2-取代色原酮类化合物及其制备方法和用途，尤其用于治疗或预防乙肝病毒感染中的用途。

背景技术

现有技术公开了乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的发病率高、危害性大的慢性传染性疾病。据报道，目前全世界乙型肝炎病毒（HBV）感染者至少有3.5亿人，我国人群中HBsAg携带率为9.75%，超过1亿人。在HBV感染者中，约25%最终死于重症慢性肝病、肝硬化和原发性肝癌。我国每年因肝病而死亡的患者约60万，其中1/2为肝癌，给我国造成人才和经济上的巨大损失。

由于乙肝病情的复杂性，在强调综合治疗的同时，目前认为最关键的治疗是病原治疗，即能清除乙肝病毒（HBV）的抗病毒治疗，因为病毒的持续感染是病变进展的根本原因，所以对于活动性慢性乙型肝炎患者，抗病毒治疗是一重要的治疗措施，也是治疗的核心。目前，用于慢性乙肝治疗的药物主要有如下三类：①干扰素(IFN)类，该干扰素(IFN)类是具有广谱抗病毒和免疫调节作用的细胞因子，但其药物适应症和安全性范围非常有限，而且不良反应较多；②核苷类或核苷酸类：包括拉米夫定、阿德福韦、替比夫定和恩替卡韦等，该类药物均可明显抑制HBV DNA的复制，降低血清中HBV DNA水平，促进血清转氨酶正常化，增加HBeAg血清转换率和HBeAg清除率，促进肝脏组织学改善，是目前乙肝治疗的主流，但核苷类似物长期抗乙肝治疗所面临的最重要问题之一是治疗过程中HBV的耐药性，实践显示，目前所有口服核苷类似物治疗过程中均可出现耐药性，已有报道发现拉米夫定与阿德福韦或恩替卡韦的多药耐药株(Yim et al., 2006)，另外这类药物服用成本高，对广大低收入人群是个很大的负担；③中药提取物：包括苦参碱、猪苓多糖、甘草酸等免疫调节药和中药制剂，但所述药物尚无抗乙型肝炎病毒(HBV)的确切证据，用于乙肝治疗的中药复方主要以保护肝脏功能、改善症状、防止肝纤维化为主。

椭圆叶花锚(Halenia eplliptica D. Don)为龙胆科(Gentianaceae)花锚属植物，据《全国中草药汇编》记载，其性味寒苦，功能清热利湿，平肝利胆，主治急性黄疸型肝炎、胆囊炎、胃炎等(全国中草药汇编，1973)，在藏药中是一味治疗黄疸的药物，是藏医药系统中用于治疗肝胆系统疾病的常用植物药之一，泛称“藏茵陈”(西藏常用中草药，1971)。

椭圆叶花锚临床用于治疗小儿急性黄疽性和小儿急性乙型肝炎，并取得了较好的疗效(陈大勋等，1984，1987)。药理实验认为椭圆叶花锚其及其所含^口山酮苷，对四氯化碳所引起的实验性肝损伤有促进恢复的作用，能促进肝细胞再生，增加肝细胞内的糖元和核糖核酸(张经明等，1984)，进一步的实验认为，椭圆叶花锚煎剂及其所含花锚苷和去甲氧基花锚苷有明显的保肝作用，可促进蛋白质的合成，促进肝细胞的再生，加速坏死组织的修复，是该植物抗肝炎的两种主要有效成分(孙洪发等，1987)，也有认为可能是齐墩果酸(杨慧玲等，2004)。

国内外对椭圆叶花锚化学成分有系统的研究主要有孙洪发 (80年代)和石建功(2004年)课题组，前者发现了许多^口山酮苷类成分，并认为是抗肝炎的活性成分(孙洪发等，1987)，后者以CCl₄诱导的大鼠肝损伤为模型，以体内吸收分布特点为指导，对椭圆叶花锚中的活性成分进行了研究，则证明椭圆叶花锚中的^口山酮苷类成分在消化、吸收和代谢过程中能够转化为^口山酮苷元，因此, 认为花锚中^口山酮苷类成分的活性主要是通过转化为^口山酮苷元来实现(高洁等，2004)，所以认为其中真正起作用的成分可能是^口山酮苷元，而Mikhailova等人的研究发现^口山酮苷元具有促胆汁排泄等作用(Mikhailova TM, 2004)。这些研究反映了椭圆叶花锚的2大特点：(1)该植物中具有活性的主要成分是^口山酮苷元，(2) 这些^口山酮苷元与保肝或治疗黄疸型肝炎的作用有关。

综上所述，目前所有关于椭圆叶花锚具有抗肝炎作用的依据都是建立在四氯化碳引起的实验性肝损伤和临床治疗黄疽性肝炎的基础上的，对其活性成分的研究也集中在其主要成分^口山酮苷及其苷元上。至今尚未见有关色原酮类化合物抗乙肝病毒的报道。

发明内容

本发明的目的是提供2-取代色原酮类化合物及其制备方法。

本发明的进一步目的是提供2-取代色原酮类化合物的药用用途，尤其是在制备治疗或预防乙肝病毒感染药物中的用途。

本发明的2-取代色原酮类化合物，具有如下通式结构：

其中，取代基团R₁、R₂可以是且不局限于羟基、烷氧基、羰(醛)基、羧基、烷基或含卤素的取代基。

本发明中，色原酮类化合物苯环上的取代基R₂的个数为0~4个。

本发明中，色原酮类化合物上的取代基团R₁为甲基。

本发明的色原酮类化合物可以通过提取分离的方法从植物椭圆叶花锚中得到。

本发明的2-甲基色原酮类化合物也可以通过下述合成方法制备获得，具体合成路线为：

其中，8-羟基-2-甲基色原酮(1)：白色无定形粉末，HRESIMS m/z: 175.0394 (calcd for C₁₀H₇O₃, 175.0395)；IR v _max (KBr) cm^–1: 3447, 2959, 2736, 2655, 1634, 1566, 1496, 1388, 1371, 1298, 1191, 1154, 1022, 991, 814, 733, 537；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 10.41 (1H, br, OH-8), 7.39 (1H, dd, J = 6.6, 2.6 Hz, H-5), 7.21 (2H, m, H-6 and H-7), 6.20 (1H, s, H-3), 2.39 (3H, s, CH₃-2)；¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆): δ 177.2 (C-4), 166.5 (C-2), 146.6 (C-8), 145.7 (C-8a), 125.0 (C-6), 124.4 (C-4a), 118.9 (C-7), 114.1 (C-5), 109.8 (C-3), 20.1 (CH₃-2)。

其中，8-甲氧基-2-甲基色原酮(2)：白色无定形粉末，HRESIMS m/z: 213.0527 (calcd for C₁₁H₁₀O₃Na, 213.0528)；IR v _max (KBr) cm^–1: 3451, 2926, 1646, 1581, 1491, 1391, 1367, 1274, 1196, 1144, 1059, 807, 748；¹H NMR (400 MHz, acetone-d ₆): δ 7.59 (1H, dd, J = 6.8, 2.7 Hz, H-5), 7.34 (2H, m, H-6 and H-7), 6.16 (1H, s, H-3), 3.99 (3H, s, OCH₃-8), 2.42 (3H, s, CH₃-2)；¹³C NMR (100 MHz, acetone-d ₆): δ 177.6 (C-4), 167.0 (C-2), 149.8 (C-8), 147.7 (C-8a), 125.5 (C-6), 125.5 (C-4a), 116.6 (C-5), 115.4 (C-7), 110.9 (C-3), 56.7 (OCH₃-8), 20.4 (CH₃-2)。

本发明涉及的2-取代基的色原酮类化合物经体外抗HBV活性试验，结果证实，所述的2-取代基的色原酮类化合物具有显著的抗HBV作用，且有效浓度低，细胞毒性小。本发明的实施例中，优选8-羟基-2-甲基色原酮(1)和8-甲氧基-2-甲基(2) 进行体外抗HBV活性试验，结果证实，所述化合物具有显著的抗HBV活性。

本发明涉及的2-取代基的色原酮类化合物可进一步制成药物组合物，用于治疗或预防乙肝病毒感染。尤其是用于抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的复制。

本发明涉及的药物组合可经鼻、经口、透皮、非肠道、静脉或肌肉注射给药。

具体实施方式

实施例1 提取化合物

椭圆叶花锚(Halenia eplliptica D. Don)(地上部分5kg)粉碎后用95%酒精渗漉5天。减压浓缩为酒精浸膏，悬浮于水后分别用石油醚和乙酸乙酯萃取。水部位浓缩后加95%酒精醇沉，滤去沉淀，清夜经大孔树脂Diaion HP 20柱层析, 水-乙醇梯度洗脱(0%-95%)为五个部位。

20%酒精洗脱部位，反复经凝胶Sephadex LH-20柱层析(水-甲醇梯度洗脱，0%-20%)和反相C-18硅胶柱层析(30%甲醇)洗脱，得到化合物1(8-羟基-2-甲基色原酮）。

95%酒精洗脱部位，反复经凝胶Sephadex LH-20柱层析(水-甲醇梯度洗脱，0%-20%)和反相C-18硅胶柱层析(55%甲醇)洗脱，得到化合物2(8-甲氧基-2-甲基色原酮）。

实施例2 提取化合物

椭圆叶花锚(Halenia eplliptica D. Don)(地上部分5kg)粉碎后用95%酒精渗漉5天。减压浓缩为酒精浸膏，悬浮于水后分别用石油醚和乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯部位经硅胶柱层析（氯仿-丙酮1:0梯度洗脱至0:1）。

氯仿洗脱部位经反复硅胶柱层析(氯仿洗脱)得到化合物2(8-甲氧基-2-甲基色原酮）。

氯仿-丙酮(5:1)洗脱部位经反复硅胶柱层析(氯仿-丙酮6:1洗脱)得到化合物1(8-羟基-2-甲基色原酮)。

实施例3 体外抗HBV活性试验

应用Hep G₂2.2.15细胞株，已每孔10′10⁵个细胞接种于96孔板，培养基为DMEM，生长液含10%胎牛血清、100单位/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2 mmol/L L-谷氨酰胺，5% CO₂孵箱中37^oC培养，本发明化合物药物溶解于二甲亚砜中，分别稀释到100、50和25μg/mL，细胞培养48小时后，换成含药物的培养液，继续培养9天(每2天换液一次)，收集上清液用ELISA方法检测HBsAg和HBeAg，相同条件下以不含药物的培养液上清液作为对照，以拉米夫定(3TC)为阳性对照，同时用上述细胞株，用MTT法测定药物的细胞毒性。结果证实8-羟基-2-甲基色原酮(1)和8-甲氧基-2-甲基(2)具有显著的抗HBV作用，且有效浓度低，细胞毒性小，表1是2-甲基色原酮抗HBV活性结果。

表1.

Claims

1.2-取代色原酮类化合物在制备治疗或预防乙肝病毒感染药物组合物中的用途，所述的化合物是8-羟基-2-甲基色原酮或8-甲氧基-2-甲基色原酮。

2.按权利要求1的用途，其特征在于，所述的药物组合物抑制乙肝病毒表面抗原和e抗原的复制。

3.按权利要求2的用途，其特征在于，所述的药物组合物经鼻、经口、透皮、静脉或肌肉注射给药。