CN101260077B

CN101260077B - 喹啉-2-酮类衍生物，其药物组合物及其用途

Info

Publication number: CN101260077B
Application number: CN200810058290XA
Authority: CN
Inventors: 陈纪军; 程辟; 张泉; 江志勇; 张奉学; 马云保; 罗杰; 周俊; 张雪梅
Original assignee: Tropical Medicine Institute Guangzhou University Of Chinese Medicine; Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Tropical Medicine Institute Guangzhou University Of Chinese Medicine; Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2008-04-17
Filing date: 2008-04-17
Publication date: 2011-06-15
Anticipated expiration: 2028-04-17
Also published as: CN101260077A

Abstract

式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮，含有式(I)化合物的用于治疗乙型肝炎的药物组合物，由化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮及药学上可接受的载体组成，上述三种药物化合物的制备方法，及其在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和治疗乙型肝炎药物中的应用。

Description

喹啉-2-酮类衍生物,其药物组合物及其用途

技术领域：

本发明属于药物化合物和药物技术领域，具体地说，涉及一类6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮化合物，其化合物作为活性成分的治疗乙型肝炎的药物组合物，其制备方法，以及该药物组合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和抗乙型肝炎药物中的应用

背景技术：

乙型肝炎是严重危害人体健康的病毒性传染疾病。据世界卫生组织报道，全球有超过20亿人为乙型肝炎病毒携带者，其中约3亿人为慢性终身感染并发病。这些慢性肝炎的病人易转成慢性肝炎，是肝硬化、肝癌的主要病因。乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的公共卫生问题，而且治疗慢性肝炎的费用是相当昂贵的，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿～500亿人民币。近年来HBV疫苗免疫、各种抗病毒药物的应用在控制HBV感染取得了一定的效果，但同时也导致HBV变异株出现，HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎(CHBV)增多，停药后HBV易反弹，而且费用高。为了有效地控制HBV，需要研制不同类型的临床治疗药物。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)属DNA嗜肝病毒科，主要是通过血液制品、母婴和性接触等途径传播，且易转成慢性肝炎，是引发肝硬化、肝癌的主要病因之一。乙型肝炎病毒的复制过程涉及5步：结合、侵入、转录、翻译、基因复制和包装。

研究报道一些中草药具有抗HBV活性，如叶下珠、白花蛇舌草等能抑制体外HBsAg和HBeAg的分泌，具有抗HBV作用，他们不良反应相对较小，可长期服用。其中一些植物的提取物对HBV DNA有不同程度的抑制作用。黄芩甙、苦参素对HBsAg和HBeAg具有体外抑制作用。

我国研制的联苯双酯是在人工合成五味子丙素过程中发现的一种具有降酶作用和治疗肝炎的有效成分。甘草甜素制剂强力新甘草甜素注射液对病毒性肝炎患者有减轻症状、抗炎和降低转氨酶等作用。强力新的换代产品甘利欣为甘草酸二铵左旋化合物，疗效强于强力新。他们主要降低转氨酶。

目前国际公认的疗效较好的抗乙肝病毒药物主要为核苷类药物如拉米夫定(lamivudine)、阿地福韦酯(adefovir dipivoxiil)、恩替卡韦(enticavir)、替比夫定(tibivudine)。这些药物在体外或体内实验中，对HBV病毒有抑制作用。其作用机制为药物进入细胞内成为三磷酸化合物，通过底物的竞争，对病毒的聚合酶或反转录酶抑制，最终抑制病毒DNA的合成、病毒的增殖。因短期使用仅有暂时效果，适合长期用药。但经过长期的治疗后，病毒可能出现变异和耐受性，而且停药后，病毒反弹高。

为控制乙型肝炎的蔓延，医学界还研究出有效的乙型肝炎疫苗，对公众进行免疫注射，主要用于预防，获得了良好的效果。但对已感染HBV则无效。

另外治疗慢性乙型肝炎采用的药物是α-干扰素(IFN)，其作用主要是免疫调节。但干扰素治疗慢性乙型肝炎有其制约因素：其一，它从未获得真正成功，除非病人在治疗前已出现对HBV的实质性免疫反应。其二，在干扰素诱导的HBeAg血清转换之前，肝炎活动的突然一过性加重，表现为ALT升高，可导致肝硬化病人发生肝功能衰竭，偶尔出现死亡。

综上所述，抗肝炎药物有非常大的市场需求，但是现在临床应用的抗肝炎药物普遍存在耐药性的问题，成功地开发出能解决药物的耐药性，临床效率高且毒副作用较小的新一代抗乙型肝炎的药物，将具有很强的市场竞争力和市场前景。

迄今，现有技术中没有6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮化合物的报道，以及6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮三种化合物作为有效成分的药物组合物的报道，也没有该三种化合物或其药物组合物应用在制备或治疗乙型肝炎药物中的报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮化合物，以及此类化合物用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中含有式(I)6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮及药用载体和/或赋形剂，提供该药物组合物的制备方法，该化合物或其药物组合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-喹啉-2-酮(6-chloro-3-(2-hydroxyethyl)-quinolin-2(1H)-one)

其中R表示H或2-F或2-Cl即化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮。

优选的化合物为其中R表示2-F或2-Cl。

治疗乙型肝炎的药物组合物，含有式(I)化合物和药学上可接受的载体。

式(I)化合物的制备方法，包括以5-氯-2-氨基-二苯酮(R＝H)或5-氯-2-氨基-2’-氟-二苯酮(R＝2-F)或5-氯-2-氨基-2’-氯-二苯酮(R＝2-Cl)为起始原料，在碱性条件下与1，4-丁内酯发生氨基化/Knoevenagel缩合反应得到I的粗产物，粗产物经硅胶柱层析，CHCl3/CH3OH(97∶3)洗脱得到6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮。

本发明制备含6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮等三种药物的具体方法是：氮气保护下向50mL两口圆底烧瓶加入2-氨基-5-氯-二苯酮或2-氨基-5-氯-2’-氟-二苯酮或2-氨基-5-氯-2’-氯-二苯酮(1mmol)和经过无水处理的THF 5mL，搅拌下冷却至0℃，氮气保护下滴加LiHMDS(6-甲基-2硅胺基锂)的THF(四氢呋喃)溶液7.5mL(1M in THF)，0℃下继续搅拌30分钟，随后滴加1，4-丁内酯(387mg，4.5mmol)，滴加完毕将反应体系控制在0℃下反应30分钟随后升温至室温反应30分钟，加入水5mL，室温下搅拌24小时。反应完毕后将反应液倒如50mL冰水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得到的粗产品经硅胶柱层析，CHCl3/CH3OH(97∶3)洗脱得到6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮或6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮等三个化合物，加入可药用载体和/或赋形剂即可。合成示意图如下：

本发明同时提供了本发明药物化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮在制备抗乙型肝炎抑制剂药物中和制备抗乙型肝炎药物中的应用。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可接受的药用载体是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。

具体实施方式：

为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的试验例来说明本发明式(I)化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮等三种药物的药理作用结果，但不以此试验例来限定本发明。

试验例1：化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮对Hep G2.2.15细胞的药物毒性和对HBsAg、HBeAg分泌的抑制作用

1材料和方法

1.1材料：化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮分别以5-氯-2-氨基-二苯酮、5-氯-2-氨基-2’-氟-二苯酮和5-氯-2-氨基-2’-氯-二苯酮为起始原料，在碱性条件下与1，4-丁内酯发生氨基化/Knoevenagel缩合反应得到。拉米夫定(lamivudine)(葛兰素史克制药(苏州)有限公司，国药准字H20030581)；HepG2.2.15细胞(引自广州空军医院)；高糖DMEM(GIBICO)；G418(GIBICO)；胎牛血清(天津血研所)；L-谷氨酰胺(AMRESCO)；青霉素，链霉素(石药集团中诺药业有限公司)。

1.2Hep G2.2.15细胞，用高糖DMEM液培养，培养液添加10％胎牛血清，0.03％L-谷氨酰胺，100mg/L G418，10⁵IU/L青酶素，100mg/L链霉素，5％NaCO₃调pH至6.8-7.0。

1.3仪器：酶标仪Bio-RAD 680(美国)；CO₂培养箱Thermo Forma3310(美国)；倒置生物显微镜XD-101型(南京)等。

1.4实验过程：用胰蛋白酶将Hep G2.2.15细胞消化，用添加了0.03％L-谷氨酰胺，100mg/L G418，100IU青酶素，100IU链霉素的高糖DMEM液制成单细胞悬液，每孔按3×10⁵×0.1mL^-1分种于96孔板，0.1mL/孔，24h后换用含2％的胎牛血清，380μg/mL的含药培养液，每种药物设四个药物浓度，每个浓度设三孔，四倍稀释，同时设三孔不加药物的细胞对照组及一孔空白细胞组，并以拉米夫定做阳性药物对照；7d后收集上清，用ELISA法测定HBsAg和HBeAg的分泌情况。同时用MTT法测定药物对细胞的毒性。

1.5药物对细胞半数毒性浓度(CC₅₀)的测定：根据Mosmann建立的MTT法检测药物的细胞毒性(Y.Nakajima，Y.Saton，M.Katsumata，K.Tsujiyama，Y.Ida，and J.Shoji，Phytochemistry 1994，36，119-127)。具体方法是：向吸去上清的细胞孔中加入0.4mg/mLMTT，0.1mL/孔，37℃5％CO₂培养4h，去上清，每孔加入0.1mL二甲基亚砜，孵育10min，在酶标仪上测定溶液在490nm下的吸光度值。药物对细胞的破坏百分率η_destroy＝(A_{细胞对照组}-A_{供试样品组})/(A_{细胞对照组}-A_空白组)×100，50％毒性浓度(CC₅₀)为实验孔存活细胞为对照孔50％时的药物浓度。CC₅₀＝Anti 1g[(C₅₀-＜50％破坏率的百分数)/(＞50％破坏率的百分数-＜50％破坏率的百分数)×C+1g B]，A：破坏率大于50％的药物浓度；B：破坏率小于50％的药物浓度；C＝1g A-1g B。

1.6药物对细胞半数抑制浓度的测定采用酶联免疫法(ELISA)测定。药物对HBsAg、HBeAg的抑制百分率η_inhibitory＝(A_{细胞对照组}-A_{供试样品组})/A_{细胞对照组}-A_空白组)×100，50％抑制浓度(IC₅₀)为HBsAg或HbeAg以抑制率为50％时的药物浓度，计算方法同CC₅₀。

2.结果：最终结果以选择指数(SI，为评价药物临床应用前景的参数，SI＝CC₅₀/IC₅₀)来评价，其中SI＞2为无毒有效，1＜SI＜2为有毒有效，SI＜1为有毒无效。具体结果见表1、表2和表3：

表1含有式(I)的三种化合物对Hep G2.2.15细胞的毒性作用

表2.含有式(I)的三种化合物对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg分泌的抑制作用

表3.含有式(I)的三种化合物对Hep G2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的抑制效果

3.结论：实验结果显示，化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮在体外对Hep G2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg有一定的抑制作用。

以下通过实施例来进一步阐明本发明的制备方法及药物组成。

实施例1：化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮的制备：

化合物6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮合成和分离：

以6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮的合成分离过程为例：氮气保护下向50mL两口圆底烧瓶加入2-氨基-5-氯-二苯酮(1mmol，231mg)和经过无水处理的THF 5mL，搅拌下冷却至0℃，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液7.5mL (1M in THF)，0℃下继续搅拌30分钟，随后滴加1，4-丁内酯(387mg，4.5mmol)，滴加完毕将反应体系控制在0℃下反应30分钟随后升温至室温反应30分钟，加入水5mL，室温下搅拌24小时。反应完毕后将反应液倒如50mL冰水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得到的粗产品经硅胶柱层析，CHCl₃/CH₃OH(97∶3)洗脱得到白色固体6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮255mg，得率85％。6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮均参照此方法合成。

6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮的结构数据：

熔点用北京泰克仪器有限公司的X-4数字显示显微熔点仪测定；旋光经SEPA-300仪测定；红外光谱用Bruker Tensor 27型红外光谱仪测定，采用KBr压片；质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定，采用FAB-MS技术；核磁共振谱(¹H NMR和¹³C NMR)用BrukerAM-400超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛海洋化工厂出品的200-300目和10-40μm硅胶作为柱层析材料；薄层层析用青岛海洋化工厂出品的硅胶板指导分离，展开剂为CHCl₃/CH₃OH(97∶3)。

结构如图所示：

分子式：C₁₇H₁₄ClNO₂

分子量：300

性状：白色无定型粉末(氯仿)

IR(KBr)v_max：3423，1659，1611，1485，1441，1408，1372cm^-1。

FAB-MS(m/z)：300[M+1]⁺(100)。

¹H NMR(C₅D₅N)δ：12.05(s，1H，NH)，7.58-7.47(m，4H)，7.36-7.28(m，3H)，6.67(d，J＝2.3Hz，1H)，4.53(t，J＝5.5Hz，1H，OH)，3.41(dd，J＝13.8，7.1Hz，2H)，2.49-2.44(m，2H)。

¹³C NMR(C₅D₅N)δ：161.6，147.3，136.3，135.5，129.6，129.3，128.8(overlapped)，128.7(overlapped)，128.3，125.4，125.1，121.5，117.0，59.3，32.1。

分子式：C₁₇H₁₃ClFNO₂

分子量：318

性状：白色无定型粉末(氯仿)

IR(KBr)v_max：3383，1662，1488，1447，1411，1370cm^-1。

FAB-MS(m/z)：318[M+1]⁺(100)。

¹H NMR(C₅D₅N)δ：12.13(s，1H，NH)，7.62-7.36(m，6H)，6.68(s，1H)，4.56(t，J＝5.4Hz，1H，OH)，2.56-2.38(m，4H)。

¹³C NMR(C₅D₅N)δ：161.3，159.8，157.4，141.3，136.3，131.3，131.2，129.7，125.8，125.2，125.2，124.3，122.5，120.8，117.3，59.0，32.4。

分子式：C₁₇H₁₃Cl₂FNO₂

分子量：334

性状：白色无定型粉末(氯仿)

IR(KBr)v^max：3421，1650，1488，1471，1432，1409cm^-1。

FAB-MS(m/z)：334[M+1]⁺(100)，316(33)。

¹H NMR(C₅D₅N)δ：2.14(s，1H，NH)，7.69-7.36(m，6H)，6.56(s，1H)，4.55(t，J＝5.6Hz，1H)，3.42-3.37(m，2H)，2.56-2.48(m，1H)，2.31-2.29(m，1H)。

¹³C NMR(C₅D₅N)δ：161.5，144.4，136.4，134.0，131.8，131.2，130.6，130.5，129.7，129.6，127.8，125.8，124.2，120.4，117.2，58.8，32.3。

实施例2：

按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，用少量的DMSO溶解后，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例3：

按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，用少量的DMSO溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

实施例4：

将所合成得到的6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为9∶1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

实施例5：

按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为5∶1的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例6：

按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按常规口服液制法制成口服液。

实施例7：

按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为5∶1的比例加入赋形剂，制成胶囊。

实施例8：

按实施例1的方法先制得6-氯-3-(2-羟乙基)-4-苯基喹啉-2-酮、6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氟-苯基)-喹啉-2-酮和6-氯-3-(2-羟乙基)-4-(2-氯-苯基)-喹啉-2-酮，按其与赋形剂重量比为3∶1的比例加入赋形剂，制成胶囊。

Claims

1.式(I)化合物：

其中R表示2-F或2-Cl。

2.治疗乙型肝炎的药物组合物，含有式(I)化合物和药学上可接受的载体，

其中R表示H或2-F或2-Cl。

3.式(I)化合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用，

其中R表示H或2-F或2-Cl。