CN1780816A

CN1780816A - 2＂－羟基烟草胺及其制造方法,及血管紧张素转换酶抑制剂、降压剂及健康食品

Info

Publication number: CN1780816A
Application number: CNA2004800117876A
Authority: CN
Inventors: 青柳康夫
Original assignee: Japan Science and Technology Agency
Current assignee: Japan Science and Technology Agency
Priority date: 2003-05-07
Filing date: 2004-03-22
Publication date: 2006-05-31
Also published as: JP2004331556A; KR20060008987A; WO2004099133A1; EP1623974A1; US20070043018A1

Abstract

提供具有ACE抑制活性的2”－羟基烟草胺、该2”－羟基烟草胺的制造方法，以及以该2”－羟基烟草胺为有效成分的血管紧张素转换酶抑制剂、降压剂、以及含有该新物质的健康食品。2”－羟基烟草胺的制造方法是从荞麦试样得到萃取液，接着，通过使用了阴离子交换树脂的离子交换色谱法得到具有血管紧张素转换酶抑制活性的组分。

Description

2”一羟基烟草胺及其制造方法，及血管紧张素转换酶抑制剂、降压剂及健康食品

技术领域

本发明涉及具有ACE抑制活性的新物质、该新物质或者该新物质的含有物的制造方法，以及作为有效成分含有该新物质的降压剂、以及含有该新物质的健康食品。

背景技术

作为生物体内的升压系统之一的、人的重要的血压调节系统己知的血管紧张肽原酶-血管紧张素类中，当血管紧张素转换酶(Angiotensin IConverting Enzyme以下简称为ACE。)与血管紧张素I作用，产生具有强血压升高作用的血管紧张素-II，因此，具有抑制ACE活性的作用的物质在作为降压剂治疗原发性高血压症等中被实用化。可是，这些药剂不能避免头晕、站起时眩晕、恶心、口渴、过度镇静等副作用。

1971年由Noma等[M.Noma et at.，Tetrahedron Letters，No.22，pp2017-2020(1971)]从烟叶中萃取了的烟草胺(nicotianamine)是用下述式(2)表示的天然的化合物，其不用担心产生副作用的同时，还具有抑制ACE活性的作用，具有降低血压作用的可能性很高。可是，在特开平5-246865号公报(专利文献1)公开了用水或热水萃取大豆得到萃取液，用合成吸附树脂分离、采取该萃取液的烟草胺的烟草胺制造方法。

荞麦自古就被认为是营养价值高，优良的健康食品，对于荞麦的营养成分，蛋白质含量比其他谷类高，其氨基酸值是92，与精白米的65和小麦的41比较非常高，含在荞麦中的蛋白质是优良蛋白质。另外，有报告，荞麦除了食物纤维比其他的谷物多之外，荞麦蛋白质还有食物纤维的作用，可抑制胆固醇吸收等作用。在荞麦的功能成分中，自古就已知有通过与维生素C的协同作用强化毛细血管的芦丁，但最近的研究成果中，离析鉴定出含有芦丁的大量多酚，它们抗氧化作用的功能性受到了关注。

关于血管紧张肽原酶-血管紧张素类和荞麦的关系，有报告说，荞麦热水萃取物或荞麦蛋白质水解物具有ACE抑制功能，认为荞麦的降血压作用是由于芦丁或肽类的缘故。

进而，在特开平5-97798号公报(专利文献2)公开了一种天然的新物质，即，对于荞麦，将脱壳种子或荞麦粉用水或热水进行萃取的萃取液通过凝胶过滤的柱色谱进行分馏，进行制备具有ACE抑制活性的组分的操作，对于得到的组分用吸附柱色谱进行分馏，制备ACE抑制活性强的组分，进而，通过凝胶过滤的柱色谱分馏该组分，进行制备ACE抑制活性强的组分的操作，得到用下述式(3)表示的、具有ACE抑制活性，具有降压作用的可能性高的天然的新物质。

这些具有ACE抑制活性的天然化合物是有效地用于降血压剂、健康食品等方面的可能性高的化合物，但不能说对具有ACE抑制活性的新物质进行了充分的探索，还需要对具有ACE抑制活性的新物质进行进一步地探索。

发明内容

因此，本发明的目的在于提供具有ACE抑制活性的新物质、该新物质或者该新物质的含有物的制造方法，以及作为有效成分含有该新物质的血管紧张素转换酶抑制剂、降压剂及含有该新物质的健康食品。

本发明者们精心地进行了研究的结果发现，进行通过用萃取溶剂萃取荞麦粉、荞麦皮、荞麦茎叶、荞麦芽、苦荞麦粉、苦荞麦皮、苦荞麦茎叶、荞麦汤等的荞麦试样来得到萃取液的萃取工序，接着，对该萃取液，进行通过使用阴离子交换树脂的离子交换色谱法的分离精制得到具有ACE抑制活性的组分的分离精制工序而得到的物质，是具有ACE抑制活性的新物质，且该新物质是2”-羟基烟草胺，从而完成本发明。

即，本发明(1)在于提供用下述式(1)表示的2”-羟基烟草胺。通过采取这样的结构，本发明(1)可起到提供具有ACE抑制活性的新物质的效果。

另外，本发明(2)在于提供2”-羟基烟草胺的制造方法，其进行用萃取用溶剂萃取荞麦试样得到萃取液的萃取工序，接着，进行通过对该萃取液，进行通过使用阴离子交换树脂的离子交换色谱法的分离精制而得到具有血管紧张素转换酶抑制活性的组分的分离精制工序。通过采取这样的构成，本发明(2)可起到能制造具有ACE抑制活性的2”-羟基烟草胺的效果。

本发明(3)在于提供上述本发明(2)所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法，其中上述萃取用溶剂是乙醇水溶液。通过采取这样的构成，本发明(3)除了起到上述发明(2)的效果，还起到提高萃取工序的萃取能力的效果。

本发明(4)在于提供上述本发明(2)或(3)所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法，其在进行浓缩上述萃取液得到浓缩液的浓缩工序后，对该浓缩液进行上述分离精制工序。通过采取这样的构成，本发明(4)除了起到上述发明(2)或(3)的效果，还起到可减少分离精制工序的样品的体积量的效果。

另外，本发明(5)在于提供上述发明(2)～(4)的任何1项所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法，其中进行2次以上上述分离精制工序。通过采取这样的构成，本发明(5)除了起到上述发明(2)～(4)的任何1项的效果，还起到可减少含在得到的生成物中的夹杂物的效果。

另外，本发明(6)在于提供上述发明(2)～(5)的任何1项所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法。其对上述萃取液或上述浓缩液，进行通过使用阳离子交换树脂的离子交换色谱法，得到滞留在阳离子交换树脂中的滞留物，得到洗脱出该滞留物的洗脱液的洗脱工序，接着，对该洗脱液进行上述分离精制工序。通过采取这样的构成，本发明(6)除了起到上述发明(2)～(5)的任何1项的效果，还起到可以除去未滞留在阳离子交换树脂的物质，所以可减少含在得到的生成物中的夹杂物的效果。

另外，本发明(7)在于提供上述发明(2)～(6)的任何一项所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法。其在上述萃取工序或上述浓缩工序后，对得到的萃取液或上述浓缩液，用1种或2种以上的有机溶剂进行1次或2次以上的萃取，作为萃取液或上述浓缩液而得到的水层。通过采取这样的构成，本发明(7)除了起到上述发明(2)～(6)的任何1项的效果，还起到通过进行脱酯可以减少含在得到的生成物中的夹杂物的效果。

本发明(8)在于提供上述发明(2)～(7)的任何1项所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法。其进行上述分离精制工序后，进而，对于具有上述血管紧张素转换酶抑制活性的组分进行重结晶操作，进行离析结晶的离析工序。通过采取这样的构成，本发明(8)除了起到上述发明(2)～(7)的任何1项的效果，还起到可得到纯度高的2”-羟基烟草胺的效果。

本发明(9)在于提供上述发明(8)所记载的2”-羟基烟草胺的制造方法。其在上述离析工序中，用于重结晶操作的溶剂是乙醇水溶液。通过采取这样的构成，本发明(9)除了起到上述发明(8)的效果，还起到可增加由于重结晶操作得到的2”-羟基烟草胺量的效果。

本发明(10)在于提供血管紧张素转换酶抑制剂，其作为有效成分含有上述发明(1)的2”-羟基烟草胺。

本发明(11)在于提供降血压剂，其作为有效成分含有上述发明(1)的2”-羟基烟草胺。

另外，本发明(12)在于提供健康食品，其含有上述发明(1)的2”-羟基烟草胺。

附图说明

图1是表示本发明的新物质的¹H-NMR测定谱图。

图2是表示本发明的新物质的¹³C-NMR测定谱图。

图3是表示本发明的新物质的¹H-¹HCOSY谱图。

图4是表示本发明的新物质的¹³C-¹HCOSY谱图。

图5是表示来自本发明新物质的FAB(Fast Atom Bombardment：快速原子撞击法)-MS的、m/z320(M+H)⁺的正极产物离子谱图。

具体实施方式

以下说明本发明的实施方式，但本发明不受这些实施方式的限制。本发明的2”-羟基烟草胺的(以下，也称为新物质)具有以下的理化学性质。

<¹H-NMR>

{在重水液中将(TMSP)作为内标物质进行测定，270MHZ括弧内是多重性、耦合常数及归属}

本发明的新物质的¹H-NMR峰是δ2.05～2.3ppm(2H，m，H-2′)、δ2.4～2.85ppm(2H，m，H-3)、δ3.25～3.53ppm(2H，m，H-1”and H-1’)、δ3.85ppm(1H，dd，J＝4.78Hz，J＝8.42Hz，H-3’)、δ3.92～4.15ppm(2H，m，H-4)、δ4.01ppm(1H，d，J＝3.3 Hz，H-3”)、δ4.42～4.48ppm(1H，m，H-2”)、δ4.77ppm(1H，t，J＝9.57Hz，H-2)，¹H-NMR测定谱表示在图1中。

<¹³C-NMR>

{在重水液中将(TMSP)作为内标物质进行测定，68MH_Z括弧内是归属}

本发明的新物质的¹³H-NMR峰是δ23.9ppm(C-3)、δ27.6ppm(C-2’)、δ51.2ppm(C-1”)、δ53.4ppm(C-4)、δ54.1ppm(C-1’)、δ60.5ppm(C-3”)、δ62.4ppm(C-3’)、δ68.3ppm(C-2”)、δ69.7ppm(C-2)、δ173.3ppm(C-4”)、δ174.9ppm(C-4’)、δ176.0ppm(C-1)，¹³C-NMR测定谱表示在图2中。

<¹H-¹HCOSY及¹³C-¹HCOSY>

另外，本发明的新物质，通过¹H-¹HCOSY可得到图3所示的¹H-¹HCOSY谱，通过¹³C-¹HCOSY可得到图4所示的¹³C-¹H COSY谱。

<MS>

通过FAB(Fast Atom Bombardment)-MS、ESI(Electrospray Ionization：电喷雾离子化)-MS测定本发明新物质的质谱时，在FAB-MS中，在m/z＝320可看到弱的(M+H)的峰。另外，即使在ESI-MS中也可确认m/z＝320是(M+H)的峰。

<高分解能MS>

另外，通过高分解能FAB-MS，(M+H)离子的峰是m/z＝320.1458，与由C₁₂H₂₂O₇N₃计算的质量数320.1458一致，分子式决定为C₁₂H₂₁O₇N₃。

<其他的理化学性质>

本发明的新物质虽然对茚三酮反应显示阳性，但可通过Cu²⁺离子抑制茚三酮反应。另外，本发明的新物质具有溶解于水、稀酸、稀碱等的性质。另外，使用6N HCl在110℃下将本发明的新物质水解16小时，使用氨基酸自动分析计检测氨基酸时，通常几乎检测不出氨基酸，显示复杂组成的分解产物。另外，本发明的新物质的熔点是275～280℃。比旋光度是[α]_D ^23.5＝-40°(C＝0.4g/100ml；溶剂是水)、[α]_D ^23.5＝-34.5°(C＝0.2g/100ml；溶剂是1N HCl溶液)。另外，使用n-丁醇∶醋酸∶水＝4∶1∶2的混合展开溶剂的硅胶载体的薄层色谱法(TLC)分析中，Rf值是0.03、在使用n-丙醇∶氨＝7∶3的混合展开溶剂的TLC中，显示Rf值为0.06的单一的点。

本发明的新物质通过由FAB-MS、ESI-MS得到的光谱的分子量是319，从高分解能MS得到的光谱，可明确是C₁₂H₂₁O₇N₃的分子式。由于对于茚三酮反应显示阳性，所以推定是氨基酸或肽，由于在氨基酸检测中显示复杂组成的分解产物，所以推定不是肽而是非蛋白质性的氨基酸，由于Cu²⁺离子抑制了茚三酮反应，所以推定是α-氨基酸。综合本物质的¹H-NMR、¹³C-NMR、¹H-¹H COSY、¹³C-¹H COSY得到的光谱的解析和上述各种数据的解析结果，推定本物质是烟草胺的2’或2”-羟基衍生物。在来自FAB-MS的m/z＝320(M+N)正离子的生成物离子光谱(图5)中，除了来自氮杂环丁烷环的m/z＝56的峰之外，确认了与烟草胺一致的m/z＝114，128，186，201的峰。另外，在m/z＝245，191等的峰显示了在2”位上存在着羟基。由此，确定了本发明的新物质的结构是2”-羟基烟草胺。

<荞麦试样>

以下说明制造本发明的新物质的方法。作为原料的荞麦试样，不仅是作为植物派生的天然的非加工样品，且使用了荞麦的加工食品等的加工物，只要含有本发明的新物质就可以使用，作为天然的非加工样品，可举出荞麦粉、荞麦皮、荞麦植物茎叶及荞麦芽、苦荞麦等，作为加工物，可举出荞麦汤等。其中，荞麦粉最适宜使用。这些荞麦试样也可以直接以原来的形状在萃取工序中使用，但也可以在粉碎后在萃取工序中使用。

<萃取用溶剂>

制造本发明的新物质的方法的萃取工序是用萃取用溶剂将荞麦试样萃取得到萃取液的工序，作为萃取用溶剂可举出水、温水、乙醇水溶液、甲醇水溶液、稀酸等的溶剂。其中，优选的是乙醇水溶液，进而，在该乙醇水溶液中，乙醇的浓度优选的是60～80容量％。

<萃取工序的顺序>

萃取工序是用上述萃取用溶剂萃取上述荞麦试样来得到萃取液的工序，作为萃取方法，可使用公知的方法对此没有特别限制，可举出将萃取用溶剂和荞麦试样混合萃取、过滤，滤液作为萃取液而得到的方法、将萃取用溶剂和植物试样混合萃取后，离心分离，得到的上清液作为萃取液的方法等。进行萃取工序时，作为萃取用溶剂的温度没有特别限制，但例如在乙醇水溶液时，由于50～100℃的萃取能力优良，所以是理想的。另外，每重量1kg荞麦试样的萃取用溶剂的体积越多萃取效率越好，但优选的是10倍容积左右。萃取的条件·次数等可根据试样适宜地设定，也可加入萃取用溶剂进行萃取，进行多次得到萃取液的操作。另外，用乙醇水溶液萃取后，进而，对得到的萃取液用己烷、醋酸乙酯、乙醚等进行萃取得到水层，将水层作为萃取液的方法等，也可在用上述萃取用溶剂的萃取工序后，用1种或2种以上的有机溶剂进行1次或2次以上的萃取，得到水层作为萃取液也是可能的。作为这样的有机溶剂，可举出己烷、醋酸乙酯、乙醚、石油醚等。

<浓缩工序>

制造本发明的新物质的方法还可以是在进行浓缩上述萃取工序得到的萃取液而得到浓缩液的浓缩工序后，对该浓缩液进行下述的分离精制工序的方法。在浓缩工序中，通过旋转蒸发器等浓缩装置浓缩萃取液而得到浓缩液。另外，对得到的浓缩液，用乙醚或己烷进行萃取得到水层，接着，对该水层用醋酸乙酯萃取，将水层作为浓缩液得到的方法等，除了浓缩工序外，也可使用1种或2种以上的有机溶剂进行萃取，得到浓缩液。作为这样的有机溶剂，可使用“萃取工序的顺序”举出的有机溶剂。

<洗脱工序>

另外，制造本发明的新物质的方法，可以是对由上述萃取工序得到的萃取液或上述浓缩工序得到的浓缩液，通过使用了阳离子交换树脂的离子交换色谱法得到在阳离子交换树脂中滞留的滞留物后，进行洗脱该滞留物而得到洗脱液的洗脱工序，接着，对于该洗脱液进行下述的分离精制工序的方法。在洗脱工序中，滞留在阳离子交换树脂中的滞留物，优选吸附在阳离子交换树脂中的吸附物。

<洗脱工序的柱用树脂>

在进行使用了阳离子交换树脂的离子交换色谱法时，作为填充在柱的阳离子交换树脂，没有特别限制，但优选的是Amberlite IR-120(Rohm andHaas社制)或Dowex 50(The Dow Chemical社制)类的强阳离子性交换树脂。

<洗脱用的洗脱剂>

作为洗脱用的洗脱剂，可举出氨、吡啶、氢氧化钠、氢氧化钾等的电解质水溶液。在这些电解质中，特别优选的是氨。另外，作为洗脱剂中的电解质的浓度，优选的是0.5～2.0mol/L。

<洗脱工序的顺序>

洗脱工序是将经过萃取工序得到的萃取液或经过浓缩工序得到的浓缩液，用注射器法、阀回路法(valve loop)等公知的方法注入到填充了阳离子交换树脂的柱中，将含在该萃取液或该浓缩液的阳离子带电荷的物质滞留在柱中得到滞留物，接着，使洗脱用洗脱剂通过柱中，洗脱滞留物得到洗脱液。此时，对得到的洗脱液测定ACE抑制活性，在该洗脱液的多个组分中，能够取出具有ACE抑制活性的组分作为洗脱液。对于这样得到的洗脱液，通过进行下述的分离精制工序取出具有ACE抑制活性的组分。

<分离精制工序>

含在上述萃取液、上述浓缩液或上述洗脱液的新物质具有滞留或者吸附在阳离子交换树脂中的性质，所以表明是阳离子带电荷的物质。制造本发明的新物质的方法的分离精制工序是将含在上述萃取液、上述浓缩液或洗脱液的阳离子带电荷的物质的本发明新物质，通过用阴离子交换树脂的离子交换色谱法的分离精制，得到具有血管紧张素转换酶抑制活性组分的工序。

<柱用树脂>

在进行使用了阴离子交换树脂的离子交换色谱法时，作为填充在柱中的阴离子交换树脂，没有特别限制，但优选的是Dowex l(Ten Dow Chemical社制)等的强阴离子性交换树脂。这些阴离子交换树脂，作为醋酸型使用。

<分离精制工序的洗脱液>

作为洗脱液，可举出醋酸、甲酸、盐酸、氨、吡啶等的电解质的水溶液。

<分离精制工序的顺序>

分离精制工序是通过用公知的方法将经过萃取工序得到的萃取液注入到填充了阳离子交换树脂的柱及填充了阴离子交换树脂的柱中，对用水洗涤或用上述洗脱用电解质水溶液洗脱得到的组分测定ACE抑制活性，得到具有ACE抑制活性的组分来进行的。ACE抑制活性的测定可用Cushman和Cheung的方法等公知的方法进行。

<离析工序>

在制造本发明的新物质的方法中，可以通过将经过以上的工序得到的具有ACE抑制活性的组分，用旋转蒸发器、喷雾干燥、冻结干燥等公知的干燥装置干固后，得到粉末状的物质的方法等公知的方法，从具有ACE抑制活性的组分得到粉末状的本发明的2”-羟基烟草胺。可是，优选从具有ACE抑制活性的组分得到粉末状的新物质，进一步进行重结晶操作，进行离析结晶的离析工序，得到无色结晶的新物质。作为用于重结晶操作的溶剂，可举出丙酮水溶液、甲醇水溶液、水、乙醇水溶液等的可溶解本发明的新物质的溶剂，但由于乙醇水溶液容易进行重结晶操作，所以是理想的。在该乙醇水溶液中，将乙醇水溶液作为100重量％时，乙醇浓度通常是10～80容量％，优选的是30～60容量％。对乙醇水溶液的重结晶操作的温度条件没有特别限制，但可采用在70～100℃下溶解粉末状的2”-羟基烟草胺，在-10～10℃下进行重结晶的方法。

用制造上述本发明的新物质的方法得到的新物质具有在上述的<¹H-NMR>、<¹³C-NMR>、<¹H-¹H COSY及¹³C-¹H COSY>、<MS>、<高分解能MS>、<其他的理化学性质>中记载的理化学的性质。

本发明的2”-羟基烟草胺可作为ACE抑制剂的有效成分。即，可将本发明的2”-羟基烟草胺与赋形剂、润滑剂、结合剂、赋香剂等药典所承认的载体一起，用常法作成口服用的片剂、胶囊剂、糖片、粉末或细粒·颗粒剂、溶解在水溶液中的溶剂等，得到ACE抑制剂，该ACE抑制剂可作为降血压剂使用。上述ACE抑制剂或降血压剂可作为口服或作为注射剂使用于静脉注射等。

本发明的2”-羟基烟草胺可作为各种饮食品的加工材料进行添加，将面包、洋点心、饼干、小甜饼干、点心类、荞麦、面条、中华面等的面类、天麸罗、油炸食品等的熟制品类作成健康食品。进而，通过将本发明的2”-羟基烟草胺溶解添加到果汁、咖啡、可可、乌龙茶、绿茶、健康饮料等的饮料类，制成健康食品。

向本发明的健康食品添加本发明的2”-羟基烟草胺的添加量没有特别限制，但对于面包、点心、面、熟制品类等的食品，优选的是10mg以上/100g，另外，对于饮料，优选的是加入5mg以上/100g。另外，本发明的2”-羟基烟草胺也可作为健康食品、医药品直接利用。

实施例

以下，举出实施例更具体地说明本发明，但这仅是个例子，本发明不受其限制。

实施例1

<萃取工序>

在荞麦粉2kg中加入70％乙醇8升，在室温下放置1夜萃取。用滤纸过滤，作为第1萃取液。进而，将对于残渣用相同量的70％乙醇萃取，用滤纸过滤得到萃取液的操作进行2次，得到第2萃取液及第3萃取液。

<浓缩工序>

收集第1萃取液、第2萃取液及第3萃取液，作为萃取液，使用旋转蒸发器将该萃取液浓缩到约2升。

使用分液漏斗用己烷萃取浓缩液，得到己烷层和水层1。在根据己烷层和水层1的下述的<ACE抑制活性的测定>测定ACE抑制活性时，ACE抑制活性存在于水层1中，在己烷层未看到活性，在水层1中残存活性。接着，用醋酸乙酯萃取该水层1得到醋酸乙酯层和水层2。根据醋酸乙酯层和水层2的下述(ACE抑制活性的测定)测定ACE抑制活性时，ACE抑制活性存在于水层2，对于醋酸乙酯层上未看到活性，活性残存在水层2中。将该水层2作为浓缩液，进行以下的分离精制工序。

<洗脱工序>

将阳离子交换树脂Amberlite IR-120(H⁺)填充到柱中，用水充分地洗涤，平衡化。作为洗脱液，配制浓度1mol/L的氨水溶液。将存在抑制活性的上述浓缩液作为样品直接注入到上述阳离子交换树脂Amberlite IR-120(H⁺)的柱中，水洗非吸附组分后收集。另外，吸附组分是将浓度1mol/L的NH₄OH水溶液作为洗脱用的洗脱剂进行洗脱，得到洗脱液。用旋转蒸发器将各个的组分浓缩到干固，溶解到一定量的水中，根据下述的<ACE抑制活性的测定>测定ACE抑制活性时，仅在洗脱液存在活性。由此，判明活性成分是阳离子带电荷的物质。

<分离精制工序>

将阴离子交换树脂Dowexlx4填充到柱中，充分水洗、平衡化。作为洗脱液，配制0.3mol/L的醋酸水溶液。使用氨水将上述洗脱液调节成pH8，直接注入到上述阴离子交换树脂Dowexlx4的柱中。将纯水、上述洗脱液顺序通到柱，得到多个组分。对于该多个组分，根据下述的<ACE抑制活性的测定>测定ACE抑制活性，得到具有ACE抑制活性的组分。接着，对具有该ACE抑制活性的组分，重复2次阴离子交换树脂Dowexlx4的柱的离子交换色谱法，精制具有ACE抑制活性的组分。其结果，得到具有强的ACE抑制活性的物质的组分，用旋转蒸发器干固时，得到具有强的ACE抑制活性的物质85mg。

<离析工序>

对于具有上述强的ACE抑制活性的物质85mg，进行使用水-乙醇混合液(含有乙醇40容量％)的2次重结晶操作，离析44mg的无色结晶。对于这样离析的无色结晶，进行¹H-NMR测定、¹³C-NMR测定、¹H-¹H COSY测定、¹³C-¹H COSY测定、MS测定、高分解能MS测定等时，得到上述图1～图5所示的光谱的同时，说明了该无色结晶是具有记载在上述的<其他的理化性质>的理化性质的新物质。可认为该新物质是2”-羟基烟草胺。

<ACE抑制活性的测定>

ACE活性的测定按照Cushman & Cheung的方法如下进行。

(1)试剂的配制

(i)将本发明的新物质，即无色结晶1.60mg、0.8mg、0.4mg加入到水100ml中，分别配制本发明的新物质的浓度50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L的试样液1、试样液2、试样液3。

(ii)配制硼酸浓度0.2mol/L的缓冲液(pH8.3)。

(iii)将Hippuryl-L-histidyl-L-leucine溶解到上述的缓冲液中，使之成为7mmol/L浓度，配制基质溶液。

(iv)配制2mol/L的Nacl水溶液。

(v)ACE使用来自Sigma公司的兔肺的冷冻干燥品，将该ACE 1IU加入到上述缓冲液6.67ml中，配制ACE活性150mIU/ml的酶溶液。

(2)反应组成液

(i)基质溶液；500μl

(ii)2mol/L Nacl溶液；400μl

(iii)试样液1～3；分别是30μl

(iv)水；40μl

(v)酶溶液；30μl

(3)反应条件

将上述反应组成液的(i)、(ii)、(iii)及(iv)混合后，不用预先培育，加入(v)的酶溶液，在37℃下反应30分钟(培育)。接着加入1mol/L的盐酸500μl，停止反应。然后，用醋酸乙酯3ml萃取游离了的马尿酸。用离心蒸发器蒸发干固萃取液，溶解到水1ml中，用分光光度计测定228nm的吸光度。将测定了的吸光度作为ODs(对于使用了试样液1～3的反应分别是ODsl、ODs2及ODs3)。

(4)对照测定

使用水30μl代替上述的(3)的反应液的(iii)试样液，其他与(3)完全相同的条件下进行反应，将得到的228nm的吸光度作为Odc。

(5)空白测定

混合上述的反应组成液的(i)～(iV)，在37℃下反应30小时，用1mol/LHCI停止反应后，加入(V)的酶液。与(3)相同地用醋酸乙酯萃取它。以后的操作是与(3)相同的。将得到的228nm的吸光度作为ODb。

(6)表示ACE抑制率50％(IC50)的本发明的新物质的浓度的决定

用下述式(4)求出Ods1、Ods2、Ods3的抑制率，

ACE抑制率(％)＝{1-(Ods-ODb)/(ODc-ODb)}×100(4)

通过图表外插法决定表示抑制率50％(IC50)的本发明的新物质的浓度。其结果，显示抑制率50％(IC50)的ACE抑制活性的本发明的新物质的浓度是0.08μmol/L。

比较例1

在(1)试剂例的配制中，除了将烟草胺1.51mg、0.76mg、0.38mg加入到水100ml，分别调节成烟草胺的浓度为50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L的试样液4、试样液5、试样液6，将该试样液4～6作为(2)反应组成液的(iii)试样液，在(3)的反应条件下使用以外，其他都与实施例1相同地进行<ACE抑制活性的测定>的测定。其结果，作为试样液4～6的吸光度的Ods(ODs4、ODs5及ODs6)，从实施例1求出的ODc和ODb和上述式(4)得到，显示抑制率50％(IC50)的ACE抑制活性的烟草胺浓度是0.085μmol/L。

从以上进行的实施例1及比较例的结果显示，本发明的新物质2”-羟基烟草胺的ACE抑制活性的IC50是0.08μM，与同样条件下的烟草胺的IC50、0.085μM几乎相等或者具有更强的抑制活性。

产业上的可利用性

本发明的2”-羟基烟草胺具有ACE抑制活性。另外，制造本发明的新物质的方法，可以起到制造具有ACE抑制活性2”-羟基烟草胺的效果。进而，通过含有本发明的2”-羟基烟草胺作为有效成分，可以作为血管紧张素转换酶抑制剂、降压剂，通过含有本发明的2”-羟基烟草胺作为有效成分，可以作为健康食品。

Claims

1.一种用下述式(1)表示的2”-羟基烟草胺。

2.一种2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，进行用萃取用溶剂萃取荞麦试样得到萃取液的萃取工序，接着，再对该萃取液，进行由使用了阴离子交换树脂的离子交换色谱法进行分离精制得到具有血管紧张素转换酶抑制活性的组分的分离精制工序。

3.根据权利要求2所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，上述萃取用溶剂是乙醇水溶液。

4.根据权利要求2或3所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，在浓缩上述萃取液得到浓缩液的浓缩工序后，对该浓缩液进行上述分离精制工序。

5.根据权利要求2～4中任意1项所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，进行2次以上所述分离精制工序。

6.根据权利要求2～5中任意1项所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，对上述萃取液或上述浓缩液，进行通过使用了阳离子交换树脂的离子交换色谱法，得到滞留在阳离子交换树脂中的滞留物，并洗脱出该滞留物而得到洗脱液的洗脱工序，接着，对该洗脱液进行上述分离精制工序。

7.根据权利要求2～6中任意1项所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，在上述萃取工序或上述浓缩工序后，对得到的萃取液或浓缩液，用1种或2种以上的有机溶剂进行1次或2次以上的萃取，作为萃取液或浓缩液得到水层。

8.根据权利要求2～7中任意1项所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，进行上述分离精制工序后，进一步，对具有上述血管紧张素转换酶抑制活性的组分进行重结晶操作，并进行离析结晶的离析工序。

9.根据权利要求8所述的2”-羟基烟草胺的制造方法，其特征是，在上述离析工序中，用于重结晶操作的溶剂是乙醇水溶液。

10.一种血管紧张素转换酶抑制剂，其作为有效成分含有上述权利要求1所述的2”-羟基烟草胺。

11.一种降血压剂，其作为有效成分含有上述权利要求1所述的2”-羟基烟草胺。

12.一种健康食品，其含有上述权利要求1所述的2”-羟基烟草胺。