CN1777808A - 活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法、作为该评价方法的评价试样的经处理抗原性物质的生成装置 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种评价活化气体使各种抗原性物质失活的性能的评价方法，它是包括使抗原性物质和活化气体反应，获得经处理抗原性物质的步骤(S101)；使针对该抗原性物质的抗体与该经处理抗原性物质发生反应，测定该经处理抗原性物质相对于该抗体结合活性的步骤(S103)，该方法可以准确而简便地评价各种活化气体使各种抗原性物质失活的性能。

Description

活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法、 作为该评价方法的评价试样的经处理抗原性物质的生成装置

技术领域

本发明涉及活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法。更详细的内容是本发明涉及通过作为使哺乳类动物产生变应反应的物质的抗原性物质和活化气体反应，使抗原性物质失活由此评价活化气体的性能的方法。

此外本发明还涉及经活化气体处理的抗原性物质的生成装置。更详细的内容是本发明涉及作为使抗原性物质失活的活化气体性能评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，其中该装置具备容器。

背景技术

近年来，随着居住环境的变化，迫切需要除去造成包括人在内的哺乳动物的花粉症，哮喘、皮肤先天性过敏症、结膜炎等变应性疾病原因的花粉、壁虱、壁虱粪便以及室尘等空气中的有害悬浮物质，营造健康、舒适的生活。

为了满足这一需求，开发了能有效除去形成上述变应性疾病原因的抗原性物质(过敏源)，并且使用各种过滤器和吸尘方式的空气净化器(例如参照特开平8-173843号公报)。

但是，在这样的空气调节装置中，由于是吸入气氛中的空气，通过过滤器吸附或者过滤有害的悬浮物质的方法，所以由于长期使用，必需要进行更换过滤器等的维护保养，并且由于过滤器的特性不完善，所以有时候得不到令人满意的性能。

并且在这样的空气调节装置中，例如，当以捕集花粉为目的时，花粉是在形成花粉症原因的抗原性蛋白质存在状态下，以物理方法而被捕集到捕集过滤器中而残留下来的。这种经物理方法而被捕集的花粉，很容易从捕集过滤器脱落，所以在开始运转时、停止运转时或者是更换过滤器时，存在着有可能引起被捕集的花粉再次飞散的问题。另外，即使能够把花粉自身捕集到捕集过滤器中，而粒子直径比花粉更小的抗原性蛋白质有可能通过捕集过滤器，因此也会导致不能从根本上除去抗原性物质的问题。

同时在各种过滤器的基础上，又开发了通过加热处理使抗原性物质变性的花粉处理装置(例如参照特开平7-807号公报)。

但是在这种空气调节装置中，加热处理需要消耗大量能源，存在着会增加家庭电费支出，同时会给地球环境带来不良影响的问题。而且当在夏天或在高温地区使用这种空气调节装置时，室内温度会明显上升，存在着使人感觉不舒服的问题。因此也存在着不能将其与冷气装置一起使用的问题。

在各种过滤器的基础上，又开发了通过进行紫外线照射，使杉树花粉症抗原失活的装置(例如参照特开平6-154298号公报)。

但是在这种空气调节装置中，进行紫外线照射需要消耗大量能源，存在着会增加家庭电费支出，同时会给地球环境带来不良影响的问题。而且根据上述文献中所述，由杉树花粉而引起的试样的抗体价时，必需进行最低强度也在1.3mW/cm²或其以上、50秒或其以上的紫外线照射。使杉树花粉症抗原失活的能力低，因此很难说它是一种具有实用意义的技术。

在各种过滤器的基础上，又开发了通过进行紫外线照射，产生臭氧的空气净化器(例如参照特开2000-111106号公报)。

但是在这种空气调节装置中，进行紫外线照射需要消耗大量能源，存在着会增加家庭电费支出，同时会给地球环境带来不良影响的问题。而且臭氧会释放到周围气氛中，在某些条件下，会对包括人在内的哺乳动物活体造成不良影响。

在所有这些空气调节装置中，没有能够根据因不同人而具有个体差异的变应反应的抗原性物质种类，而对抗原性物质进行不同处理的问题，也都没有完全解决。于是对应于不同种类的抗原性物质，各种除去方法或使其失活方法的效果不同这一问题也没有得以解决。

根据上述现状，本发明的课题在于提供对各种活化气体使各种抗原性物质失活的性能进行评价的方法，该方法对于实现一种空气调节装置是必要的，所述空气调节装置通过活化气体可以有效除去抗原性物质和/或使其失活，所述活化气体的种类和/或用量与因个体不同而具有差异的抗原性物质的种类和/或用量相对应。

本发明的另一个课题是提供经处理抗原性物质的生成装置，该装置在上述评价方法中，可以均匀而简便地生成作为评价试样的、通过活化气体进行处理的经处理抗原性物质。

发明内容

为了解决上述课题，本发明人努力研究摸索为确立使抗原性物质失活的活化气体性能的评价方法。

结果本发明人发现，通过在容器中散布抗原性物质，使含有所散布抗原性物质的溶液悬浮在容器中的状态下，使抗原性物质与活化气体发生反应，通过该反应，可以简便获得均匀的、经活化气体处理的抗原性物质。

而且本发明人还发现，通过使用这种经处理抗原性物质，可以准确而简便地评价活化气体使抗原性物质失活的性能。

也就是本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法包括使抗原性物质和活化气体发生反应，得到经处理抗原性物质的步骤；和使针对该抗原性物质的抗体与该经处理抗原性物质发生反应，测定这种经处理抗原性物质相对于该抗体结合活性的步骤。

本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，是如下所述的方法，其包括使抗原性物质和活化气体发生反应，得到经处理抗原性物质的步骤；使针对该抗原性物质的抗体与这种经处理抗原性物质发生反应，测定这种经处理抗原性物质相对于该抗体的结合活性的步骤；和将这种经处理抗原性物质的结合活性与该抗原性物质相对于该抗体的结合活性进行比较的步骤。

其中，获得这种经处理抗原性物质的步骤优选包括使悬浮在空中的该抗原性物质和该活化气体进行反应的步骤。

同时，在进行该反应的步骤中，优选包括在容器中散布含有该抗原性物质溶液的步骤、使所散布的含有该抗原性物质的溶液悬浮在该容器中的步骤、和向该容器中导入该活化气体的步骤。

在获得这种经处理抗原性物质的步骤中，优选通过对该抗原性物质施加振动和/或冲击使该抗原性物质悬浮在空中的步骤。

在该悬浮步骤中，优选包括将该抗原性物质设置在具有挠曲性的试样台上的步骤和对该试样台施加振动和/或冲击的步骤。

这里的悬浮步骤是把前述抗原性物质设置在选自被褥、毛毯、坐垫、枕头、垫子、海绵、布、纸、苯乙烯泡沫的一种或以上具有挠曲性的试样台上的步骤以及通过对前述试样台进行敲打和/或振动，对前述试样台施加振动和/或冲击的步骤。

该获得经处理抗原性物质的步骤，优选包括使该抗原性物质和含有选自含正离子的气体、含负离子的气体、含自由基的气体、臭氧气体、硝酸气体的一种或一种以上气体反应的步骤。

该获得经处理抗原性物质的步骤，优选包括使选自杉树花粉和/或壁虱粉尘中所含的抗原性物质、杉树花粉、壁虱粉尘的1种或其以上的物质与活化气体反应，得到经处理抗原性物质的步骤。

该测定步骤优选包括通过ELISA法和/或ELISA抑制法，使针对该抗原性物质的抗体和该经处理抗原性物质发生反应，测定该经处理抗原性物质对于该抗体结合活性的步骤。

另外该测定步骤，还优选包括向除人以外的保有产生针对该抗原性物质的抗体的细胞的动物进行皮内反应试验和/或结膜反应试验，使该抗体和该经处理抗原性物质反应，测定该经处理抗原性物质对于该抗体结合活性的步骤。

作为本发明活化气体的抗原性物质失活的性能评价试样所使用的经处理抗原性物质的生成装置，具备有容器、向该容器中散布抗原性物质的装置和在该容器内发生或导入该活化气体的装置。

本发明还提供作为评价活化气体使抗原性物质失活的性能试样的经处理抗原性物质的生成装置，该装置具备容器、向该容器中封入抗原性物质的装置和在该容器内发生或导入该活化气体的装置。

上述任意一种本发明的经处理抗原性物质的生成装置中，优选容器含有部分透明材质或者全部是透明材质。

附图的简单说明

图1是表示本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法的流程略图。

图2是列举一例说明作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质生成装置的略图。

图3是列举另一例说明作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质生成装置的略图。

图4是列举又一例说明作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质生成装置的略图。

图5是列举又一例说明作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质生成装置的略图。

图6是列举又一例说明作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质生成装置的略图。

图7是举例说明本发明中所用离子发生元件结构的略图

图8A和8B是表示由离子发生元件生成的正离子和负离子的质谱。

图9A和9B是表示关于通过含有正负两种离子的气体对杉树抗原性物质进行处理时和未进行处理时，抗原性物质与花粉症患者19～40的血清IgE抗体变应反应关系的图表。

图10A和10B是表示关于通过含有正负两种离子的气体对杉树抗原性物质进行处理时和未进行处理时，抗原性物质与花粉症患者41～60的血清IgE抗体变应反应关系的图表。

图11是表示关于通过含有正负两种离子的气体对杉树抗原性物质进行处理时和未进行处理时，Cry j 1和Cry j 2与其单克隆抗体反应性关系的图表。

图12是表示通过酶联免疫吸附抑制法，对用含正负两种离子的气体对杉树抗原性物质进行处理和未进行处理时，抗原性物质和花粉症患者血清IgE抗体变应反应性关系的图表。

图13是表示活化气体中正负两种离子的各种浓度与来源于杉树花粉的抗原性物质的反应失活率关系的图表。

图14是举一例说明用于实施使抗原性物质失活方法的装置的略图，是具有使臭氧浓度降低的设施的装置。

图15是表示对抗原性物质(壁虱抗原性物质)进行离子处理时以及未进行处理时，与壁虱过敏患者a～r的血清IgE抗体变应反应关系的图表。

图16是表示实施使抗原性物质失活方法的装置的略图，其是具备鼓风机和回收过滤器的装置。

图17是表示实施使抗原性物质失活方法的装置的略图，其是具备鼓风机和回收容器的的装置。

图18是表示在正负两种离子的空间平均浓度(3000个/cm³)下，通过酶联免疫吸附抑制法，对壁虱粉尘进行离子处理时和未进行处理时，抗原性物质和壁虱过敏患者的血清IgE抗体变应反应性关系的图表。

图19是表示在正负两种离子的空间平均浓度(10000个/cm³)下，通过酶联免疫吸附抑制法，对壁虱粉尘进行离子处理时和未进行离子处理时，抗原性物质和壁虱过敏患者的血清IgE抗体变应反应性关系的图表。

实施本发明的最佳方案

以下以实施方案更详细说明本发明的情况。

<抗原性物质>

本说明书中，所谓抗原性物质是杉树、丝柏树、猪菜等的花粉类和壁虱等生物，壁虱等生物的粪便或室尘等的室内悬浮物等中所包含的物质，通过作用于包括人在内的哺乳动物活体，产生抗原抗体反应之一的变应反应而诱发变应性疾病的物质。

该抗原性物质通常是由蛋白质或糖蛋白质构成的物质，但是在本说明书中，对其形状或大小，并没有特别的限定，通常可以认为是包括这些蛋白质和糖蛋白质自身为分子形状的物质，或者是它们聚集形成粒子形状的物质，或抗体反应部位为其分子状物质一部分的物质(也可以称之为抗原决定簇或表位)等等。

上述抗原性物质，可以是杉树花粉自身或杉树花粉中所包含的抗原性物质(杉树抗原性物质)。上述抗原性物质，还可以是壁虱粉尘自身或壁虱粉尘中所含的抗原性物质(壁虱抗原性物质)。

以形成杉树花粉症病因的抗原性物质为例，在抗原性物质中，除了作为杉树花粉症的病因物质而众所周知的Cry j 1蛋白质以及Cry j 2蛋白质以外，还包括Cry j 1蛋白质以及Cry j 2蛋白质的表位，还包括含有大量Cry j 1蛋白质以及Cry j 2蛋白质的杉树花粉中的粒状物(又被称为乌氏体和orbicle)，还包括杉树花粉自身。

壁虱抗原性物质是壁虱自身体内所包含的物质，但在一般生活环境中，与壁虱自身相比，更多情况下是由壁虱粉尘中所含的物质而产生问题。这里所说的壁虱粉尘，是指含有壁虱自身和壁虱尸体以及壁虱身体的一部分、壁虱的食物和排泄物以及脱蜕外皮和卵等的微粒状物质。本发明中的抗原性物质，也包括这样的壁虱粉尘。

<抗体反应部位>

本说明书中，所谓抗体反应部位，是指抗原性物质中所含的特定部位，表示与抗体结合的部位。通常该抗体反应部位发生变性或受到破坏(分解)时，抗原性物质就不能与抗体结合，因此可以抑制变应反应。

<活化气体>

本说明书中，所谓活化气体，是指能够对抗原性物质产生某种化学反应和/或物理作用的气体。就活化气体的具体例子而言，没有特别限定，可以列举含有正离子的气体、含有负离子的气体、同时含有正负离子的气体、含有臭氧的气体、含有硝酸气的气体、含有自由基的气体等等。除此之外，在针对抗原性物质的活化气体中，估计还有各种组成的气体。但是对于这些活化气体，可以采用后述的本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法去发现。

此外如后述的，同时含有正负离子的气体作为活化气体作用于抗原性物质，具有使该抗原性物质失活的功能，这并不是众所周知的现象，而是本发明人采用本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法，是首次发现的现象。

<抗原性物质失活>

本说明书中，所谓抗原性物质失活的意义是指消除或降低抗原性物质的作为抗原性物质活性。也就是消除或降低抗原性物质与抗体反应的能力。

其中，本发明人认为由活化气体引起的抗原性物质失活的机理是通过该活化气体攻击构成抗原性物质的蛋白质，特别是其抗体反应部位，使该蛋白质变性或破坏而使抗原性物质失活。

如后述的，由本发明人采用本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法而首次发现的现象，使同时含有正负离子的气体作为活化气体作用于抗原性物质，具有使该抗原性物质失活的功能。这种失活功能，是通过使正离子和负离子作用于抗原性物质而实现的。

虽然是以往不曾知晓的，但是如果按照本发明人的观点，通过使用同时含有正离子和负离子的气体，与分别单独使用含有正离子的气体或含有负离子的气体相比，可以对于抗原性物质发挥特别的失活效果。可以认为如果按照本发明人的观点，使用这些同时存在正负离子的气体，通过后述的化学反应，产生活性物质，该活性物质对于构成抗原性物质的蛋白质，特别是其抗体反应部位进行攻击，使该蛋白质变性或破坏(分解)，而使抗原性物质失活。

也就是在本说明书中，所谓使抗原性物质失活，可以更详细地定义为通过上述使抗原性物质变性或破坏(分解)不仅可以消除抗原性物质，还包括减少气氛气体中单位体积的该抗原性物质的量，或者是降低该抗原性物质的抗体反应部位与抗体反应性。

其中测定抗原性物质反应失活率(或者是残存活性)的方法(或者是定义方法)，有很多种，可以根据抗原性物质种类以及活化气体的种类，选择适当方法。就这类测定方法而言，并没有特别的限定，如可以使用酶联免疫吸附抑制法。按照这种方法，测定经活化气体处理过的抗原性物质显示50％抑制的浓度时，与未经活化气体处理的抗原性物质50％抑制的浓度相比，其50％的抑制浓度如果在5倍或其以上时，则残存活性为20％(也就是反应失活率为80％)。

同时判断反应失活率究竟达到何种程度，活化气体中才具有相对于抗原性物质的失活能力时，要视活化气体种类和抗原性物质的种类不同而异，可以根据适当阈值进行判断。例如，虽然没有特别限定，但是使用含有正负离子的气体作为活化气体时，可以使用来源于杉树花粉的抗原性物质作为抗原性物质。

<活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法>

图1是表示本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法的流程略图。

本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法是基本具备如下步骤的评价方法：使抗原性物质和活化气体反应，得到经处理抗原性物质的步骤(S101)；使针对该抗原性物质的抗体与该经处理抗原性物质进行反应，测定该经处理抗原性物质对于该抗体结合活性的步骤(S103)。在本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法中，如图1的流程图所示，在继获得上述经处理抗原性物质的步骤(S101)和测定经处理抗原性物质的结合活性的步骤(S103)之后，还优选具有把该经处理抗原性物质的结合活性与该抗原性物质对于所述抗体结合活性进行比较的步骤(S105)。

通过采用这种与对比试样进行对比的评价方法，具有能够准确而简便、并且可以对该活化气体对该抗原性物质的失活能力进行定量评价的优点。其中在对该抗原性物质(通常多数情况下，可以认为是使用未经活化气体处理的抗原性物质)对于该抗体的结合活性进行比较时，该抗原性物质对于该抗体的结合活性，可以采用预先测定的测定值，或者也可以采用每次实施本发明评价方法进行测定的测定值。从评价结果的准确性方面考虑，优选采用每次实施本发明评价方法时的测定值，但是为了简便而迅速得到评价结果，优先使用预先测定的测定值。

其中，获得该经处理抗原性物质的步骤，优选包括使悬浮于空中的抗原性物质与该活化气体进行反应的步骤。

这样通过使活化气体与悬浮在空中的抗原性物质反应，可以使抗原性物质和活化气体在均匀状态下进行反应，具有通过调节抗原性物质的悬浮时间，就会有能很容易调节抗原性物质和活化气体反应时间的优点。而且为了使抗原性物质悬浮在空中，可以对含有活化气体的气氛气体进行搅拌或使其流动，就能使抗原性物质飞起来，而悬浮在空中；或者是简单使抗原性物质以一定距离落下而使其悬浮在空中。

进行该反应的步骤，优选包括在容器中散布该抗原性物质的步骤，使含有该散布抗原性物质的溶液在该容器中悬浮的步骤以及向该容器中导入该活化气体的步骤。

这样，通过向容器中散布含有抗原性物质的溶液，可以防止抗原性物质毫无意义的扩散，具有容易将容器内抗原性物质浓度保持在一定范围内的优点。其中，容器可以优选密闭系容器，但也可以是具有部分开放口的半密闭系容器。

通过这样使散布的含有该抗原性物质的溶液悬浮在容器中，即使在通过搅拌含有活化气体的气氛气体或使其流动促使抗原性物质飞起来的时候，可以防止抗原性物质毫无意义的扩散，具有容易将容器内抗原性物质浓度保持在一定范围内的优点。

并且通过这样向容器内导入活性气体的方法，由于可以防止活化气体毫无意义的扩散，因此具有可以在抗原性物质浓度保持一定范围内的容器中，使浓度范围一定的活化气体与抗原性物质均匀进行反应的优点。

其中，由于抗原性物质被包含在溶液之中，所以当向容器中散布含有抗原性物质的溶液时，优选使用喷雾器进行喷雾。这是由于它可以喷出粒径微小而均匀的溶液，能使抗原性物质与活化气体的反应更加均匀地进行。

另外本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法中的获得前述经处理抗原性物质的步骤，优选包括对前述抗原性物质施加振动和/或冲击，使前述抗原性物质悬浮在空中的步骤。该悬浮步骤优选包括将前述抗原性物质设置在具有挠曲性的试样台上的步骤、和对试样台施加振动和/或冲击的步骤。其中前述具有挠曲性的试样台是选自被褥、毛毯、坐垫、枕头、垫子、海绵、布、纸、苯乙烯泡沫的一种或以上。此外对前述试样台施加振动和/或冲击的步骤，优选敲打和/或振动上述试样台而对试样台施加振动和/或冲击的方法。

在获得该经处理抗原性物质的步骤中，优选包括使该抗原性物质和选自含有正离子的气体、含有负离子的气体、含有自由基的气体、臭氧气体、硝酸气体的一种或以上气体反应的步骤。其中，特别优选获得该经处理抗原性物质的步骤是使抗原性物质与含有正负两种离子的气体进行反应的步骤。

关于该含有正负两种离子的气体，如后述，由本发明人首次明确了它具有使来源于杉树花粉的抗原性物质失活的功能，并且期待它具有使其它抗原性物质失活的功能。此外，对于臭氧气体、硝酸气体、含有自由基的气体，由于它们也是气态物质，所以可以通过使用本说明书中的评价方法，评价其对抗原性物质的失活能力。

该测定步骤，优选包括通过ELISA法和/或ELISA抑制法使针对该抗原性物质的抗体和该经处理抗原性物质进行反应，测定该经处理抗原性物质对于该抗体结合活性的步骤。

这样，通过ELISA法和/或ELISA抑制法，可以准确而简便地测定经处理抗原性物质对于抗体的结合活性。

例如如上所述通过酶联免疫吸附抑制法，测定经活化气体处理的抗原性物质显示50％抑制的浓度时，可以把该50％抑制浓度与未经活化气体处理的抗原性物质的50％抑制浓度进行对比。这时，如果所述50％抑制浓度达到5倍时，把其残存活性定为20％，(即反应失活率为80％)。

该测定步骤，优选包括通过对除人以外的，具有针对该抗原性物质的抗体产生细胞的动物进行皮内反应试验和/或结膜反应试验，使该抗体和该经处理抗原性物质进行反应，测定该经处理抗原性物质相对于该抗体结合活性的步骤。

这样通过对除人以外的，具有针对该抗原性物质的抗体产生细胞的动物进行皮内反应试验和/或结膜反应试验，还具有可以在更接近人的活体内状态条件下，测定经处理抗原性物质相对于抗体结合活性的优点。其中如后序实施例中所述，虽然对人进行皮内反应试验以及结膜反应试验，但是如果使用小鼠、大鼠和兔子等除人以外的哺乳动物进行能在人体内进行的活体试验时，远比用人实施试验容易得多。这一点，在医学、药学、农学、生物学、生物化学、分子生物学等领域中是一个技术性的常识。

<经处理的抗原性物质的生成装置>

作为本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，包括有容器、向该容器内散布抗原性物质的装置和在该容器内发生或导入该活化气体装置。此外本发明的经处理抗原性物质的生成装置，也可以具备容器、向该容器内封入抗原性物质的装置和在该容器内发生或导入该活化气体的装置。

通过使用这样的装置，可以很容易在均匀状态下，使活化气体与抗原性物质发生反应，生成高品质的、非常适合用作活化气体使抗原性物质失活的性能评价试样的经处理抗原性物质。进一步优选本发明的经处理抗原性物质的生成装置，具备使抗原性物质在该容器内悬浮的装置。通过容器的存在可以防止活化气体和抗原性物质的扩散，所以即使通过对含有活化气体的气氛气体进行搅拌或使其流动，使抗原性物质飞起来悬浮在容器内，抗原性物质和活化气体的浓度也能保持在一定范围之内。

其中，优选该容器具有部分透明材质或者全部是透明材质。

这样，由于是一部分或全部是透明材质的容器，能够通过目视观察容器内部抗原性物质的悬浮状态，所以具有容易调节抗原性物质和活化气体反应条件的优点。

图2是表示另一例生成作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的、经处理抗原性物质的装置略图。

图2所示的装置，具备有作为容器的半密闭型的圆筒型容器1027。还具有作为散布抗原性物质装置的喷雾器1024和注入口1028。具有作为使抗原性物质在容器内悬浮装置的半密闭型圆筒型容器1027，由于其具有一定高度，所以在其内部必然会形成抗原性物质悬浮的状态。而且具备有离子发生元件1021，作为向该容器中导入同时含有正离子1022、负离子1023的气体作为活化气体的装置。

图2所示装置中，除此之外还示出了通过活化气体处理的抗原性物质的回收容器1025和含有活化气体的气氛气体排气口1026。

图3是表示又一例生成作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质的装置略图。

图3所示的装置，具备有作为容器的半密闭型圆筒型容器1037。还具备有作为散布抗原性物质的装置的注入口1038。还具有作为使抗原性物质在容器内悬浮装置的半密闭型容器1037，由于其具有一定高度，所以在其内部必然会形成抗原性物质悬浮的状态。而且具备有离子发生元件1031，作为向该容器内导入含有正负两种离子的气体作为活化气体的装置。

图4是表示又一例生成作为本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价试样的经处理抗原性物质的装置略图。

图4所示的装置，具备有作为容器的密闭型圆筒型容器1047。还具备有作为对抗原性物质进行散布的装置的开闭式盖1048。还具有作为使抗原性物质在容器内悬浮的装置的密闭型圆筒容器1047，由于其具有一定高度，所以通过沿长度方向使其竖立，或沿长度方向使其反复翻转，在其内部必然会形成抗原性物质悬浮的状态。而且具备有离子发生元件1041，作为向该容器内导入含有正负两种离子的气体作为活化气体的装置。

图4所示的装置中，除此之外还示出有抗原性物质1049、施加电压的电极1042、电介质1043、接地电极1044。

图5是表示又一例生成作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质的装置略图。

图5所示的装置，具备有作为容器的密闭型圆筒型容器1057。还具备有作为对抗原性物质1053进行散布的装置的开闭式盖1058。还具有使抗原性物质1053悬浮于容器内装置的风扇1059。并且具备有离子发生元件1051，作为向该容器内导入含有正负两种离子1052的气体作为活化气体的装置。

图6是表示又一例生成作为本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价试样的经处理抗原性物质的装置略图。

图6所示的装置，具备有作为容器的密闭型圆筒型容器1067。还具备有作为对抗原性物质1063进行散布的装置的开闭式盖1068。还具有作为使抗原性物质1063在容器内悬浮装置的风扇1069，以及只能透过活化气体而不能透过抗原性物质的过滤器1065。并且具备有离子发生元件1061，作为向该容器内导入含有正负两种离子1062的气体作为活化气体的装置。

<离子发生元件>

作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质的生成装置中所使用的离子发生元件，是能够发生正离子和负离子的元件，优选能够通过如后述的电冲击而直接使抗原性物质的变应反应失活的元件。

对于这种离子发生元件的安装部位没有特别限定，但通常优选安装在使抗原性物质失活的装置的通风道上。这是因为由离子发生元件所发生的正负两种离子会在短时间内消失，所以设计时要保证能使这些正负两种离子有效地扩散到空气中。离子发生元件的设置个数，可以是一个，也可以是两个或两个以上。

作为这种离子发生元件，可以使用已知的通过放电机理而发生正负两种离子的离子发生元件。特别是选择的离子发生元件在向空气中输送正负离子时，要使得在使正离子和负离子作用于抗原性物质的气氛气体中，正负两种离子的浓度分别达到10万个/cm³或其以上。而且在本说明书中，所谓离子浓度的意义是指小离子浓度，作为该小离子浓度的测定方法，可以采用使临界迁移率达到1cm³/V·秒，通过空气离子计数器(ダン科学制空气离子计数器(商品号为83-1001B))进行测定的值。

其中所说的放电机理，是具有用电极夹持绝缘体的结构，在一侧施加交流的高电压，同时使另一侧电极接地，通过施加高压电，在接地电极附近的空气层中形成等离子区放电，对空气中的水分子和氧分子进行电离或离解而生成正负两种离子的机理。在这种放电机理中，使施加电压侧的电极形状为板状或网状，使接地侧电极为网状时，如果施加高电压，则电场在接地侧电极的网端面部位集中，引起表面放电，形成等离子体区域。如果空气流入该等离子体区域，就可以生成正负两种离子。

作为具有这种放电机理的元件，可以列举如表面放电元件、电晕放电元件、等离子区放电元件等等、但是也并不局限于这几种元件。另外在放电元件的电极形状和材质方面，也不受上述形状和材质的限定，可以从所有形状、材质的元件中进行选择。

图7是表示本发明中所用的离子发生元件的一个结构例略图。

作为这种离子发生元件，更具体的是优选如图7所示，用施加电压的板状电极7002和接地的网状电极7004夹持电介质7003，通过高压电源7001交替对板状电极施加正极和负极电压，使电场在网状电极的网端面集中，引起等离子区放电，形成等离子体区域7005，生成正负两种离子结构的元件。

为了发生并输送这些正负两种离子所需要的外加电压，随离子发生元件的结构不同而异，但是作为电极间的峰间值(peak to peak)电压范围可以是2～10kV，优选3～7kV。

<通过含有正负两种离子的气体使抗原性物质失活>

本发明人使用作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质的生成装置，通过本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法，如后面的实施例中所述，发现了含有正负两种离子的气体具有使抗原性物质失活的功能。

但是本发明并不局限于正负离子，还可以以各种气体或气体浓度作为对象而使用。

可以认为通过使用含有正负两种离子的气体而使抗原性物质失活的机理，不仅是如上所述的基于化学反应的机理，而且还包括通过离子发生元件中的电冲击对抗原性物质的抗体反应部位进行变性或破坏而导致失活的机理。

也就是可以认为抗原性物质的抗体反应部位，在产生正负两种离子时由于施加电压而引起的等离子区放电自身的作用，也会产生变性或受到破坏，在这种电冲击下，抗原性物质和抗体的结合能力也会丧失，从而使抗原性物质失活。

这样，通过本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法，是可以通过电冲击和/或化学反应对抗原性物质的抗体反应部位进行变性或破坏，从而使抗原性物质失活的方法，特别是通过电冲击和化学反应二者的协同作用，可以得到使抗原性物质有效失活的结果。

<含有正负两种离子的气体的输出方法>

本发明人通过本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法，如后述的，发现了在使用含有正负两种离子的气体作为活化气体时，究竟应优选使用怎样的方法作为输出含正负两种离子气体的方法。

也就是本发明中所使用的正负两种离子，主要是通过离子发生元件的放电现象而发生的，通常，通过交替施加正负电压，几乎可以同时发生正负两种离子，并将其输送到空气中。但是本发明的输送正负两种离子的方法，并不局限于此，还可以首先在一定时间内只施加正负电压中的任意一种电压，只输出正负离子中的任意一种离子，然后再施加一定时间的相反电压，输出具有与已输出离子相反电荷的离子。

其中，发生并输出该正负两种离子所必需的外加电压，随电极结构不同而异，但是作为电极间的峰间值电压范围可以是2～10kV，优选3～7kV。

另外，本发明中所用的正离子和负离子，优选在相对湿度为20～90％，更优选相对湿度在40～70％的条件下发生。如后述的正负两种离子的发生，与空气中的水分子存在相关。也就是当相对湿度低于20％时，不能适当进行由以离子为中心的水分子而引起的凝聚作用，离子之间容易引起再结合，所以所发生的离子寿命变短。而当相对湿度超过90％时，由于水分在离子发生元件表面结露，离子的发生效率明显降低，而且所发生的离子也因凝聚作用的过度进行，而被许多水分子包围，故而使离子的重量增加得太多，有可能在没有向远处输送的状态下，就产生沉降。因此，如上所述在湿度极低或湿度极高的状态下发生离子都是不理想的。

作为本发明正负两种离子的输出方法，不仅有前面叙述的采用放电现象的方法，还可以采用能够发出紫外线和电子射线装置等的方法。

<正负两种离子的鉴定>

本发明中，当使用含有正负两种离子的气体作为活化气体时，正离子和负离子能以存在于放电元件表面的氧分子和/或水分子为原料而发生。如果按照这种发生方法，由于不需要特别的原料，而在成本方面有利。不仅如此，原料自身没有有害性，不会产生其它有害离子和物质，所以是优选的。

其中，通过上述离子发生元件的放电现象而发生的正负两种离子的组成，作为正离子，主要是通过等离子区放电，使空气中的水分子电离，生成氢离子H⁺，该氢离子H⁺在溶剂化能的作用下，与空气中的水分子进行凝聚，形成H₃O⁺(H₂O)_n(n为0或自然数)。其中如果换一种表示方法，作为正离子表述的H₃O⁺(H₂O)_n(n为0或自然数)则可以表述为H⁺(H₂O)_n(n为自然数)，也表示相同的离子。

图8A和8B是表示由离子发生元件生成的正离子和负离子的质谱。

从图8A中，可以观察到的最小峰位于分子量19的位置，后面的峰出现在相对于该分子量19顺次加上相当于水分子量18的位置，由此表明水分子进行了凝聚。也就是该结果表明在分子量为1的氢离子H⁺上，分子量为18的水分子与其形成一个整体，进行水合。另一方面作为负离子，通过等离子区放电，空气中的氧分子或水分子进行电离，生成氧离子O₂ ^-，该氧离子O₂ ^-在溶剂化能的作用下，与空气中的水分子凝聚形成O₂ ^-(H₂O)_m(m为0或自然数)。从图2(b)中，可以观察到的最小峰位于分子量32的位置，后面的峰出现在相对于该分子量32顺次加上相当于水分子量18的位置，由此表明水分子进行了凝聚。也就是该结果表明在分子量为32的氧离子O₂ ^-上，分子量为18的水分子与其形成一个整体，进行水合。

并且输送到空间的这些正负两种离子包围了悬浮在空气中的抗原性物质，可以推断在抗原性物质表面，正负两种离子通过下面的化学反应(1)～(2)生成活性种类的过氧化氢H₂O₂、二氧化氢(hydrogendioxide)HO₂或羟基自由基·OH。

          ...(1)

           ...(2)

可以这样理解，象这样正负两种离子作用生成的过氧化氢H₂O₂、二氧化氢HO₂或羟基自由基·OH，对抗原性物质的抗体部位进行变性或破坏(分解)，使得抗原性物质和抗体的结合能力丧失，可以有效地使空气中的抗原性物质失活。

在上述说明中，分别以作为正离子的H₃O⁺(H₂O)_n(n为0或自然数)，作为负离子的O₂ ^-(H₂O)_m(m为0或自然数)为中心进行了叙述，但是本发明中的正负离子并不受它们的限定。以上述两种正负离子为主，作为正离子，还可以列举N₂ ⁺、O₂ ⁺等；作为负离子可以列举NO₂ ^-、CO₂ ^-等。即使含有这些离子也可以期待获得相同的效果。

实施例

下面通过实施例更详细说明本发明的情况，但是本发明不受这些

实施例的限定。

<杉树花粉>

从在广岛县丰町生长的日本杉树(Cryptomeria japonica)的树枝上采集杉树花粉。采集过程中采用装有网布的吸尘器，然后进行过筛收集花粉。收集后采用-30℃的冰箱进行保存。

<杉树抗原性物质>

把杉树花粉80g在20mM PBS(pH7.4)3.2L中，于4℃下，搅拌4小时后，以6000rpm的转速进行30分钟的离心分离。离心分离后，在上清中加入硫酸铵，并使其最终浓度达到80％饱和，以6000rpm的转速，进行30分钟的离心分离。离心分离后，反复进行6次6小时的透析处理，再以10000rpm的转速，进行30分钟的离心分离。离心分离后，对所得上清进行冷冻干燥，作为杉树抗原性物质。本说明书中，把杉树抗原性物质记作CJP。

<用Folin-Lowry法进行的蛋白量测定>

[试剂的组成]

A液：         以1N的苯酚试剂作为酸溶液

B液：         2％，        Na₂CO₃

              0.1N         NaOH

C液：         0.5％，      CuSO₄·5H₂O

              1％          柠檬酸钠

D液           B∶C＝50∶1(v/v)的混合液

[测定方法]

将样品0.2ml和D液1ml混合，放置10分钟。接着加入A液0.1ml放置30分钟后，测定其在750nm处的吸光率。还用BSA制成标准系列，并用相同顺序制备校正曲线，将样品的蛋白量作为BSA换算量进行定量。

<杉树抗原性物质的散布、回收>

把从杉树花粉提取的杉树抗原性物质(蛋白浓度200ng/ml)在正负离子的照射下，用喷雾器进行散布。在散布容器的底部设置回收皿，可以只回收不与容器壁面接触而经离子处理的抗原。用1.5小时散布8ml溶液(含杉树抗原性物质)。

<实施例1>

本实施例是采用杉树花粉的抗原性物质，确认经正负两种离子作用引起抗原性物质的变应反应降低的情况。

其中图2是列举一例说明作为评价本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的试样的经处理抗原性物质生成装置的略图。图8A、8B是表示由图2所示装置中设置的离子发生元件生成的正离子和负离子的质谱。

首先在图2所示的装置中，作为离子发生元件1021，使用的是长37mm，宽15mm的平板状表面放电元件。并且通过在电极间交替施加正和负的电压，使得在表面电极部分引起表面放电，由在大气压下的放电等离子区，同时生成并输出正离子1022和负离子1023。所加电压的电极间的峰间值电压范围是3.3kV～3.7kV。在该电压范围，不会产生对人体有害水平的臭氧。在内径为150mm、长度为370mm的丙烯酸酯制的半密闭型的圆筒容器1027中，安装固定4个这样的离子发生元件，在该容器的一侧设置散布抗原物质溶液的注入口1028，在该容器的另一侧设置抗原性物质液体的回收容器1025。

当使用从杉树花粉中提取的抗原物质作为抗原物质时，杉树花粉是从在广岛县丰町生长的日本杉树(Cryptomeria japonica)的树枝上采集的。采集过程中采用装有网布的吸尘器，然后进行过筛收集花粉。收集后采用-30℃的冰箱进行保存。从杉树花粉中提取抗原物质的方法是把杉树花粉80g在20mM PBS(pH7.4)3.2L中，于4℃下，搅拌4小时，然后以6000rpm的速度进行30分钟的离心分离。离心分离后，在上清中加入硫酸铵，并使其最终浓度达到80％饱和，以6000rpm的转速，进行30分钟的离心分离。离心分离后，反复进行6次6小时的透析处理，再以10000rpm的转速，进行30分钟的离心分离。离心分离后，对所得上清进行冷冻干燥，作为抗原物质液。

把供试验的抗原物质液8ml放入到喷雾器1024中，与图2所示装置的散布抗原性物质用的注入口1028连结。同一装置的抗原物质液的回收容器1025，设置在半密闭型圆筒容器1027的底部。喷雾器与空气压缩机连结，通过压缩空气(流量5L/分钟)从注入口1028散布供试验的抗原性物质。散布量，为8.0ml(散布时间为90分钟)。通过回收容器捕集90分钟内沉降在半密闭型圆筒容器底部的抗原性物质。被喷雾的抗原性物质，在空气中经90秒钟自然落下，与空气中的正离子1022和负离子1023作用。

通过ELISA法对与从花粉症患者采集的血清IgE抗体的反应性进行测定。其中正负两种离子的浓度是按照如上所述的从设置有离子发生元件1021的半密闭型圆筒容器1027的散布抗原性物质液体用的注入口1028处，通过空气压缩机以5L/分钟的流量输入空气，在抗原性物质液体回收容器1025中设置ダン科学制造的空气离子计数器(商品号为83-1001B)测定该空间的正负两种离子的总浓度。空间气氛的温度为25℃，相对湿度为60％RH。可以推断，如图8A、8B所示，被输出的正离子为H₃O⁺(H₂O)_n(n为0或任意自然数)，负离子为O₂ ^-(H₂O)_m(m为0或任意自然数)，该正负两种离子，通过前述化学反应(1)和(2)生成过氧化氢H₂O₂、二氧化氢HO₂或羟基自由基·OH。

把离子发生元件1021不工作时的状态定为未处理状态，对该元件分别施加电极间的峰间值电压是3.3kV～3.7kV的电压，输出正负两种离子，研究使半密闭型圆筒容器1027内部的正负两种离子的浓度达到正负两种离子分别为10万个/cm³时，抗原性物质和IgE抗体的变应反应性降低的情况。结果如图9A、9B和图10A、10B所示。

图9A、图9B是表示用含有正负两种离子的气体，对杉树抗原性物质进行处理时和未处理时，抗原性物质与花粉症患者19～40的血清IgE抗体的变应反应关系的图表。

图10A、图10B是表示用含有正负两种离子的气体，对杉树抗原性物质进行处理时和未处理时，抗原性物质与花粉症患者41～60的血清IgE抗体的变应反应关系的图表。

如图9A、9B和图10A、10B所示，可以确认离子发生元件不工作时(也就是不发生正负离子的状态下)和正负两种离子的浓度分别达到10万个/cm³时，花粉患者的血清IgE抗体的反应性(结合性)在花粉患者42人中，有33人的血清IgE抗体反应性呈现出显著的降低。

在用喷雾器散布后，不使离子发生元件工作的未处理时，以及对该元件分别施加电极间的峰间值电压为3.3kV～3.7kV的电压，并输出正负离子，使半密闭型圆筒容器1027内的正负离子浓度分别达到10万个/cm³时，对Cry j 1和Cry j 2单克隆抗体和血清IgE抗体的反应性降低情况进行了研究。把结果如图11所示。

图11是表示用含有正负离子的气体对杉树抗原性物质进行处理时及未处理时，Cry j 1和Cry j 2与其单克降抗体反应性关系的图表。

可以确认当离子发生元件不工作时(也就是不发生正负离子的状态)和正负两种离子分别达到10万个/cm³时，花粉患者的血清IgE抗体的反应性(结合性)，在进行离子处理时，Cry j 1和Cry j 2单克降抗体的血清IgE抗体反应性呈现出显著的降低。

为了对经离子处理和未经离子处理的杉树抗原性物质与花粉症患者血清IgE的反应性区别进行定量评价，采用ELISA抑制法进行了实验。

具体是把喷雾后回收的杉树抗原性物质放入到离心分离机(Centriprep YM-10)中，以2500rpm的转速进行离心浓缩。再把该浓缩液放到离心分离机(ULTRA FLEE-MC)中，以7000rpm转速进行离心浓缩。对浓缩的离子处理杉树抗原性物质和未经处理的杉树抗原性物质，从蛋白质浓度11μg/ml反复进行8次5倍稀释。分别将稀释的各抗原性物质50μl和10倍稀释的患者血清IgE 50μl混合，在4℃下预孵育一夜。

在ELISA用96-孔板上施加用碳酸氢盐缓冲液(Bicarbonatebuffer)稀释到1μg/ml的杉树抗原性物质(也可以不进行散布)，每孔加50μl，静止放置2小时。用洗涤缓冲液(Washing buffer)对板进行3次洗涤，然后施加封闭缓冲液(Blocking buffer)300μl，在4℃下静止放置一夜。对板进行3次洗涤后，分别向每孔加入经预孵育的试样50μl，静止放置4小时。

对板进行3次洗涤后，施加经(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST稀释1000倍的生物素标记的抗人IgE，每孔50μl，静止放置2.5小时。对板进行3次洗涤后，施加经(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST稀释1000倍的碱性磷酸酶标记的链霉抗生物素50μl，在室温下静止放置1.5小时。

对板进行4次洗涤后，施加AttophosTM底物缓冲液，每孔50μl，在遮光状态下放置至发色。通过CytoTMF luorII测定荧光强度。对未使离子发生元件工作的未处理时、以及向该元件中分别施加作为电极间的峰间值电压是3.3kV～3.7kV的电压，输出正负两种离子，使半密闭型圆筒容器1027内正负两种离子的浓度分别达到10万个/cm³时，花粉患者的血清IgE抗体的反应性(结合性)进行了研究。其结果如图12所示。

图12是表示在用含有正负两种离子的气体处理杉树抗原性物质时及未处理时，通过酶联免疫吸附抑制法，测定抗原性物质和花粉症患者的血清IgE抗体变应反应性关系图。

当离子发生元件不工作时(也就是不发生正负离子的状态)，50％抑制所必需的杉树抗原性物质量为2.53×10³pg；与此相反，当正负两种离子浓度分别为10万个/cm³时，50％抑制所必需的杉树抗原性物质量为1.34×10⁴pg，可以确认其反应失活率为81％。

通过结核菌素用注射器，分别把用0.9％NaCl对经离子处理和未经离子处理的杉树花粉抗原性物质稀释到蛋白浓度为0.5μg/ml的稀释液0.02ml注射到杉树花粉症患者的前臂内侧皮内，约15分钟后测定出现的红斑、肿胀部分的长径和短径，通过其平均直径评价反应性。结果如表1所示。

表1

	皮内反应试验		结膜反应试验
					未处理	离子处理	未处理	离子处理
	患者A	+++	+	-					-
患者B					+++	+	+	-
	患者C	+++	+	+					-
患者D					+++	+	+	-
	患者E	+++	+	+					-
患者F					+++	+	+	-

把红斑＜10mm的记为-，把红斑为10-20mm的记为±，把红斑为20-30mm、肿胀部分＜10mm的记为+，把红斑为30-40mm、肿胀部分为10-14mm的记为++，把红斑＞40mm、肿胀部分＞15mm、并且肿胀部分出现伪足的记为+++。如表1所示，在离子发生元件不工作的未处理情况(也就是不产生正负离子的状态)下，和在正负两种离子浓度分别达到10万个/cm³的情况下，可以确认花粉症患者的皮内反应性呈现显著的降低。

再通过移液器把用0.9％NaCl对经离子处理和未经离子处理的杉树抗原性物质稀释到蛋白浓度为0.5μg/ml的稀释液5μl滴入到杉树花粉患者的眼中，大约15分钟后，观察作为结膜反应的半月襞，眼睑皮以及球结膜的充血，发痒程度，流泪等情况。判定时，把完全看不到充血的情况定为-，把稍微可以看到充血的具有痒感的情况定为±，把球结膜的上部或下部一侧出现充血的定为+，把球结膜的上部和下部都出现充血的定为++，把整个球结膜中出现充血的定为+++，把眼睑出现浮肿的定为++++。把观察结果如表1所示。

如表1所示，在离子发生元件不工作的未处理情况(也就是不产生正负离子的状态下)，和在正负两种离子浓度分别达到10万个/cm³的情况下，可以确认花粉症患者的结膜反应性呈现显著的降低。

<实施例2>

使用上述酶联免疫吸附(ELISA)法中患者19的血清IgE作为抗体，使抗原性物质(杉树抗原性物质)浓度(作为蛋白质浓度)分别为100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml的4种浓度，按照与上述相同的操作(也就是装置采用上述图3所示的装置；进行离子处理时，正负离子浓度分别为10万个/cm³)，通过酶联免疫吸附法分别求出未处理的杉树抗原性物质和经离子处理的杉树抗原性物质的荧光强度。并且通过该荧光强度，根据下述计算式(3)求出变应反应的反应失活率。把结果如表2所示。

表2

抗原性物质浓度(ng/ml)	100	200	400	800
					反应失活率(％)	94	83	78	56

反应失活率％＝(1-C/D)×100             ...(3)

C：经离子处理的杉树抗原性物质的荧光强度

D：未经处理的杉树抗原性物质的荧光强度

接着，以上述抗原性物质的浓度为200ng/ml的情况作为基准进行选择，在离子浓度和抗原性物质浓度之间存在以下关系的前提下，求出不同正负离子浓度与反应失活率的关系。也就是可以认为如果反应失活率一定，那么在离子浓度和抗原性物质浓度之间就存在一定关系，例如设离子浓度一定，将抗原性物质浓度减到一半的状态，与设抗原性物质浓度一定，将离子浓度增加到2倍的状态下，可以得到相同的反应失活率。因此以上述抗原性物质浓度为200ng/ml的两个点为基准，把不同正负离子浓度与反应失活率的关系出示在图13中。也就是图13中，正负离子浓度为2.5万个/cm³、5万个/cm³、10万个/cm³、20万个/cm³的数据，分别对应于上述酶联免疫吸附法中的抗原性物质浓度800ng/ml、400ng/ml、200ng/ml、100ng/ml时的数据(图13的横坐标表示正负离子的不同浓度)。

如图13明确所示，如果正负离子浓度增加，则反应失活率也提高，特别是如果正负离子浓度分别为5万个/cm³，则反应失活率可以达到78％左右，可以获得稳定的抗原性物质失活的效果。另外如果正负离子浓度分别为10万个/cm³，则反应失活率可以达到83％，如果进一步使正负离子浓度分别为20万个/cm³，则反应失活率可以达到94％，可以期待有效抑制花粉症和壁虱过敏等变应性疾病。

在实施例1和实施例2中，作为活化气体使用了含有正负两种离子的气体；作为抗原性物质使用了来源于杉树花粉的抗原性物质，但是如果通过使用本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能的评价方法，对于其它种类的活化气体和其它种类的抗原性物质，也同样可以准确而简便地对活化气体使抗原性物质失活的性能进行评价。

另外在实施例1和实施例2中，使用如图2所示的作为本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，生成了经处理抗原性物质，即使使用如图3～图6所示的装置生成经处理抗原性物质，也同样可以准确而简便地对活化气体使抗原性物质失活的性能进行评价。

<实施例3>

本实施例是使用壁虱粉尘的抗原性物质，确认通过正负两种离子的作用使抗原性物质失活的情况。以下参照图14和图15进行说明。

图14是实施通过正离子和负离子作用使抗原性物质失活方法的装置略图。图15是表示通过酶联免疫吸附(ELISA)法对壁虱抗原性物质(简称为Derf)与患者a～r共计18名的血清IgE反应性进行评价的图。图14的装置，与图2的装置一样，具有图7所示的离子发生元件，通过该元件输出的正离子和负离子的质谱如图8A、8B所示。

<实施使抗原性物质失活方法的装置>

首先本实施例中所用的图14所示的装置与图2所示的装置是一样的(因此，图2和图14中标有相同参照符号的部分表示相同部分或相当部分)，只是在具备降低臭氧浓度的装置这一点上有所不同。也就是图14所示的装置中，一侧的排气口1026和喷雾器1024是通过过滤器1029连结的。该过滤器1029包含有活性炭和分子筛，具有除去在圆筒型密闭容器1027中所发生的臭氧的作用。因此该圆筒型密闭容器1027中的臭氧浓度可以维持在0.025ppm或其以下。

在图14所示的装置中，与图2的装置一样，抗原性物质1038由注入口1028喷入，然后自然落下到回收容器1025上，在这期间暴露在正负两种离子中，并受到其作用。

<壁虱粉尘和抗原性物质>

作为抗原性物质，使用由壁虱粉尘中提取的抗原性物质。壁虱粉尘以一般存在于家庭中的壁虱粉尘为对象，通过安装有网布的吸尘器，从坐垫与绒毯中收集。

为了从壁虱粉尘中提取抗原性物质，把壁虱粉尘0.1g置于20mM的磷酸缓冲溶液(PBS，pH7.4)15ml中，在4℃的温度条件下，搅拌16小时后，使其通过膜过滤器(0.2μm)把得到的物质作为壁虱抗原性物质。该壁虱抗原性物质中还含有抗原性物质Derf1和Derf2。

<通过Folin-Lowry法进行的蛋白质定量>

把含有壁虱抗原性物质的溶液0.2ml和下述D液1ml混合，放置10分钟。接着加入下述A液0.1ml，放置30分钟后，测定其在750nm处的吸光率。再用牛血清蛋白质(BSA)制备标准系列，按照相同顺序制备校正曲线，作为BSA换算量，对壁虱抗原性物质的蛋白质的量进行定量。结果其蛋白质浓度为94.1ng/ml。其中所用的各种试剂如下：

(试剂)

A液：以1N的苯酚试剂作为酸溶液。

B液：2％Na₂CO₃+0.1N的NaOH

C液：0.5％CuSO₄·5H₂O+1％柠檬酸钠

D液：B液∶C液＝50∶1(v/v)

<抗原性物质的喷雾与回收>

将这样得到的含有抗原性物质即壁虱抗原性物质的溶液(蛋白质浓度为200ng/ml)8ml放入到喷雾器1024中，连结到图14中所示装置的抗原性物质溶液喷雾用的注入口1028上。另一方面为了能够回收含有所喷雾抗原性物质的溶液，在圆筒型密闭容器1027的底部设置回收容器1025。

将喷药雾化器与空气压缩机连结，通过压缩空气(流量为5L/分钟)从注入口1028对抗原性物质1038进行喷雾。喷雾量为8.0ml(喷雾时间90分钟)。90分钟后，通过回收容器1025回收沉降在圆筒型密闭容器1027底部的抗原性物质。喷雾的抗原性物质1038通过圆筒型容器1027自然落下约需要90秒钟。

喷雾和回收该抗原性物质1038，是在使离子发生元件1021工作时(即进行离子处理时)和使其不工作时(即不处理时)，进行两遍。

使离子发生元件1021工作，使正离子和负离子作用于抗原性物质时，其气氛中(也就是圆筒型密封容器1027中)的正负两种离子浓度是如下求出的：从由设置离子发生元件1021的圆筒型密闭容器1027的抗原性物质溶液喷雾用的注入口1028，通过空气压缩机，使空气以5L/分钟的流量流过，在抗原性物质溶液的回收容器1025上设置アンデス电气制造的空气离子计数器(商品号为ITC-201A)测定正负两种离子的浓度。结果对该离子发生元件1021分别施加电极间的峰间值电压为3.3kV～3.7kV的电压时，圆筒型密闭容器1027内气氛中的正负两种离子浓度分别达到10万个/cm³。空间气氛的其它条件是温度为25℃，相对湿度为60％RH。可以推断，如图8A、8B所示，被输出的正离子为H₃O⁺(H₂O)_n，(n为0或自然数)，负离子为O₂ ^-(H₂O)_m(m为0或自然数)，该正负两种离子，通过前述化学反应(1)～(2)生成过氧化氢H₂O₂、二氧化氢HO₂以及羟基自由基·OH。

<通过酶联免疫吸附(ELISA)法进行反应性的评价>

接着通过酶联免疫吸附法测定这样收集得到的壁虱抗原性物质和从壁虱过敏患者a～r采集的血清IgE抗体的反应性。对于抗原性物质，通过对经如上所述的正负离子作用的处理物质(离子处理壁虱抗原性物质)和未处理物质(未经处理的壁虱抗原性物质)进行比较，评价其反应性。

具体做法是在酶联免疫吸附用96孔板(ELISA用96-孔板)上施加用碳酸氢钠缓冲液(Bicarbonate buffer)稀释到0.1μg/ml的离子处理壁虱抗原性物质和未处理的壁虱抗原性物质，每孔50μl。同时用碳酸氢钠缓冲液从200μg/ml开始，对人IgE标准(human IgE standard)反复进行5次2倍稀释，将稀释物分别添加到孔中，每孔50μl，在室温下静止放置2小时。用洗涤用缓冲溶液(Washing Buffer)对板进行3次洗涤，然后施加封闭用的缓冲液(Blocking buffer)300μl，在4℃下静止放置一夜。

静止放置一夜后，对板进行3次洗涤，向每孔加入经用(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST对壁虱过敏患者的血清稀释20倍，并进行1小时孵育的物质50μl/孔，静止放置4小时。对板进行3次洗涤后，施加经(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST稀释1000倍的生物素标记抗人IgE，每孔50μl，静止放置2小时。

该静止放置后，对板进行4次洗涤，然后施加经(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST稀释1000倍的碱磷酸酶标记链霉抗生物素50μl，在室温下静止放置1小时。对板进行5次洗涤后，施加Attophos(注册商标)底物缓冲液，每孔50μl，在遮光状态下放置至发色。通过分光光度计(Cyto(注册商标)FluorII)测定其荧光强度。结果如图15所示。

如图15所示，可以确认，对未使离子发生元件1021工作时(也就是不发生正负两种离子的未处理状态)以及正负两种离子浓度分别达到10万个/cm³时，壁虱过敏患者血清IgE抗体和壁虱抗原性物质的反应性(结合性)在壁虱过敏患者a～r的所有18人中，经前述处理的抗原和上述患者的血清IgE抗体的反应性显著降低(荧光强度越低，表示反应性越低)。其中所用的各种试剂如下所示：

(试剂)

碳酸氢钠缓冲溶液：100mM的NaHCO₃(pH 9.2～9.5)，

磷酸缓冲溶液(PBS)：用蒸馏水把4g的NaCl、0.1g的Na₂HPO₄·12H₂O、1.45g的KCl、1g的KH₂PO₄定溶到500ml，

PBST：PBS+0.5％吐温-20(Tween-20)，

封闭用缓冲溶液：PBS+3％脱脂乳+1％BSA，

洗涤用缓冲溶液：用蒸馏水把43g的Na₂HPO₄·12H₂O、3.6g的NaH₂PO₄、263g的NaCl、15ml的吐温-20(Tween-20)定容到3L。

<反应失活率>

使用上述酶联免疫吸附(ELISA)法中的患者a～r的血清IgE作为抗体，通过酶联免疫吸附法分别求出未处理的壁虱抗原性物质和经离子处理的壁虱抗原性物质的荧光强度，并且用该荧光强度，根据下述计算式(4)求出变应反应的反应失活率。把结果出示在下述表3中。

表3

患者	荧光强度
			未处理	离子处理
	平均	平均
			患者a	1903.333	1355.330
患者b	977.333	734.667
			患者c	890.333	633.333
患者d	1541.667	819.333
			患者e	790.333	472.667
患者f	982.667	742.000
			患者g	1565.667	1101.330
患者h	3100.333	2354.670
			患者i	3524.667	2505.000
患者j	1665.000	915.000
			患者k	1808.000	1274.670
患者l	1232.333	830.000
			患者m	662.000	368.333
患者n	439.667	292.333
			患者o	661.333	508.000
患者p	2658.667	1395.670
			患者q	607.667	460.000
患者r	1448.000	884.667

反应失活率％＝(1-E/F)×100         ...(4)

E：经离子处理的壁虱抗原性物质的荧光强度

F：未经处理的壁虱抗原性物质的荧光强度

表3表明患者a～r的平均反应失活率为57.8％，可以期待获得有效抑制壁虱变应性疾病的效果。

<实施例4>

本实施例中，直接使用壁虱粉尘，确认通过正负离子作用处理的壁虱粉尘(其中所含的抗原性物质)的失活情况。参照以下图11～13进行说明。其中通过Folin-Lowry法对壁虱粉尘中所含的壁虱抗原性物质中的蛋白质量进行定量的操作与实施例3相同。

<壁虱粉尘的扩散与回收>

壁虱粉尘的扩散与回收采用如图16所示的装置进行(其中图16中注明有与其它图相同参照符号表示相同部分或相当部分)。也就是该装置由安装有鼓风机1033和操作用窗口1034的密闭箱1030组成，在该鼓风机1033的空气喷出口处设置离子发生元件1021。

首先使离子发生元件1021工作，与此同时使鼓风机1033工作。其条件为将该离子发生元件1021的电极间的峰间值电压调节至90V，以使正负两种离子的空间平均浓度分别达到3000个/cm³，并将该鼓风机1033的送风量调至2m³/分钟。

该密闭箱1030中的正负两种离子的空间平均浓度，是通过アンデス电气公司制造的空气离子计数器(商品号为ITC-201A)分别测定该密闭箱中心附近的相互距离50cm或其以上的5个点的正负两种离子的浓度，使正负两种离子的平均值分别达到3000个/cm³。另外该密闭箱1030中的空间气氛温度为25℃，相对湿度为60％RH。可以推断，如图8A、8B所示，被输出的正离子为H₃O⁺(H₂O)_n(n为0或自然数)，负离子为O₂ ^-(H₂O)_m(m为0或自然数)，该正负两种离子，通过前述化学反应(1)～(2)生成过氧化氢H₂O₂、二氧化氢HO₂和羟基自由基·OH。

本发明中的所谓正负两种离子的空间平均浓度，是指具有一定体积的整个空间的平均浓度，例如可以通过离子计数器(例如アンデス电气公司制造的空气离子计数器(商品号为ITC-201A))分别测定在有适当空气滞留的室内中心附近，相互距离50cm或其以上的5个点的正负两种离子的浓度，然后通过求出该5个点的平均浓度进行测定。

接着使离子发生元件1021和该鼓风机1033暂时停止工作，然后在该密闭箱1030中设置担载壁虱粉尘(2g)的物品1032，再一次在与上述相同的条件下，使离子发生元件1021和鼓风机1033工作。

接着通过操作窗口1034，使用扩散工具1035敲打物品1032，使壁虱粉尘1031扩散(散布或悬浮)。其中，作为物品1032，可以列举被褥、毛毯、绒毯、草褥子、枕头、坐垫、靠垫等等。本实施例中采用了坐垫。作为扩散工具1035，可以列举敲打被褥的拍子、掸子、扫帚等等。本实施例中使用了敲打被褥的拍子。作为扩散操作，除了敲打物品1032以外，还可以采用抖动或使其坠落的方法。本实施例中是采用敲打被褥用的拍子作为扩散工具1035，对物品1032坐垫用力进行敲打，时间为5分钟，总计敲打次数为20次。

接着对坐垫敲打结束后，使设置在该密闭箱1030上部的空吸泵1037工作，通过回收过滤器1036抽吸收集密封箱1030中的粉尘，抽吸收集时间为30分钟。

经过30分钟后，接着使空吸泵1037停止工作，再次用扩散工具1035的拍子对物品1032坐垫敲打5分钟，共敲打20次。然后再次使空吸泵1037工作，通过回收过滤器1036抽吸收集密闭箱1030中的粉尘，抽吸时间为30分钟。

对按照上述操作，通过2次抽吸收集，用回收过滤器1036收集到的粉尘量进行称重的结果为0.7mg。

以上操作是使离子发生元件1021工作，使正离子和负离子作用于粉尘的操作(也就是把这样处理得到的物质称为离子处理壁虱粉尘，把从其中提取的物质称为离子处理壁虱抗原性物质)，为了进行比较，还进行除了使离子发生元件1021不工作以外，其它操作完全与上述相同的操作，收集壁虱粉尘(即把该比较用的粉尘称为未处理的壁虱粉尘，把从其中提取的物质称为未处理的壁虱抗原性物质)。

此外，作为进行该项操作所使用的装置，除了上述图16中所示的装置以外，还可以使用各种装置，例如如图17(与图16相同的符号表示相同部分或相当部分)所示，设置回收容器1025替代图16中的空吸泵1037和回收过滤器1036，收集自然落下的粉尘。

<通过酶联免疫吸附抑制法进行评价>

为了对经离子处理的壁虱抗原性物质和未经处理的壁虱抗原性物质与壁虱过敏患者的血清IgE的反应性进行定量评价，通过酶联免疫吸附抑制法进行确认。

具体是从扩散后回收的壁虱粉尘中提取的壁虱抗原，放入到离心分离机(Centriprep YM-10)中，以2500rpm的转速进行离心浓缩。再把该浓缩液放到离心分离机(ULTRA FLEE-MC)中，以7000rpm转速进行离心浓缩。对浓缩的离子处理壁虱抗原性物质和未经处理的壁虱抗原性物质，从蛋白质浓度7.66μg/ml反复进行11次5倍稀释。分别将稀释的抗原性物质50μl和10倍稀释的患者血清IgE 50μl混合，在4℃下预孵育一夜。

在酶联免疫吸附用96孔板(ELISA用96-孔板)上施加用碳酸氢钠缓冲溶液(Bicarbonate buffer)稀释到1μg/ml的壁虱抗原性物质(也可以是没有进行喷雾的物质)，每孔50μl，静止放置2小时。用洗涤用缓冲溶液(Washing Buffer)对板进行3次洗涤，然后施加封闭用缓冲液(Blocking buffer)300μl，在4℃下静止放置一夜。

静止放置一夜后，对板进行4次洗涤，分别向每孔提供经预孵育的试样50μl，静止放置4小时。对板进行5次洗涤后，施加经(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST稀释1000倍的生物素标记抗人IgE，每孔50μl，静止放置2.5小时。

静止放置后，对板进行3次洗涤，施加经(3％脱脂乳+1％BSA)/PBST稀释1000倍的碱磷酸酶标记链霉抗生物素50μl，在室温下静止放置1.5小时。对板进行4次洗涤后，施加Attophos(注册商标)底物缓冲溶液，每孔50μl，在遮光状态下放置至发色。通过分光光度计(Cyto(注册商标)FluorII)测定其荧光强度。其中，试剂，只要是没有特别事先说明，可以使用与上述相同的各种试剂。

对未使离子发生元件工作的未处理时(也就是未经处理的壁虱抗原性物质)、以及使该元件工作，并使正负两种离子的空间平均浓度分别达到3000个/cm³条件下进行处理时(也就是经离子处理的壁虱抗原性物质)，对抗原性物质与壁虱过敏患者的血清IgE抗体的反应性(结合性)进行了研究。其结果如图18所示。

如图18所示，未处理的壁虱抗原性物质，其50％抑制(壁虱抗原性物质对血清IgE抗体的反应性降低到50％)所必需的壁虱抗原性物质量为500ng/ml；与此相反，经离子处理的抗原性物质，其50％抑制所必需的壁虱抗原性物质量为500ng/ml，可以确认其反应失活率为74％。其中反应失活率可以通过与上述化学式(1)相同的化学式求出。

这样就可以确认正负两种离子不仅直接对抗原性物质发生作用，而且其作用还涉及到含有抗原性物质的壁虱粉尘。并且可以确认当正负两种离子的空间平均浓度分别达到3000个/cm³时，能够发挥使抗原性物质失活的效果。

<实施例5>

本实施例中，正负两种离子的空间平均浓度分别为10000个/cm³(该离子发生元件1021的电极间峰间值电压为100V，该鼓风机1033的送风量为8m³/分钟)，除此之外其它完全按照与实施例4相同的操作，确认正负两种离子对于壁虱粉尘的作用。结果如图19所示。

如图19所示，未处理的壁虱抗原性物质，其60％抑制(壁虱抗原性物质对血清IgE抗体的反应性降低到60％)所必需的壁虱抗原性物质量为345ng/ml；与此相反，经离子处理的壁虱抗原性物质，其60％抑制所必需的壁虱抗原性物质量为3823ng/ml，可以确认其反应失活率为91％。其中反应失活率同样可以通过上述计算式(1)求出。

这样就可以确认当正负两种离子的空间平均浓度分别为10000个/cm³时，能发挥使抗原性物质失活的效果。

如果对图18和图19进行比较，虽然存在着50％抑制和60％抑制的差异，但是可以认为根据图18判断50％抑制和60％抑制时的反应失活率大致相同，所以可以确认，空间平均浓度越高反应失活率越高。

这样如果按照本发明方法，通过使正负两种离子作用，能够有效地使抗原性物质失活，所以可以期待有效降低由这种抗原性物质引起的花粉症和壁虱过敏等各种变应性疾病。

同时，通过在空气调节装置内部或外部使用本发明方法或装置，可以输送使抗原性物质失活的空气以及有可能通过放出上述离子的作用而直接使悬浮在空气中的抗原性物质失活。

在上述各实施方案中，特别着重对花粉和壁虱中所含的过敏源进行了说明，可以认为即使对于除花粉和壁虱以外的霉等中所含有的变应原，以本发明为依据的空气净化装置，也可以发挥效果。

这次公开的实施方案和实施例在所有方面均为示例，不应将其视为限定。本发明范围不是上述说明，而是如权利要求所示，包括与权利要求相等的意义和在其范围内的所有修改。

产业上的实用性

如下所示，通过使用本发明的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法和装置，可以准确而简便地对各种活化气体使各种抗原性物质失活的性能进行评价。

Claims (16)

1.活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，它具备使抗原性物质和活化气体发生反应，获得经处理抗原性物质的步骤，使相对于前述抗原性物质的抗体和前述经处理抗原性物质发生反应，测定前述经处理抗原性物质相对于前述抗体的结合活性的步骤。

2.活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，它具备使抗原性物质和活化气体发生反应，获得经处理抗原性物质的步骤，使相对于前述抗原性物质的抗体和前述经处理抗原性物质发生反应，测定前述经处理抗原性物质相对于前述抗体结合活性的步骤，将前述经处理抗原性物质的结合活性与前述抗原性物质相对于前述抗体的结合活性进行比较的步骤。

3.根据权利要求1中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，获得前述经处理抗原性物质的步骤包括使悬浮在空中的前述抗原性物质和前述活化气体进行反应的步骤。

4.根据权利要求3中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，使前述反应进行的步骤包括在容器中散布含有前述抗原性物质的溶液的步骤，使前述散布的含有前述抗原性物质的溶液在前述容器中悬浮的步骤和向前述容器中导入前述活化气体的步骤。

5.根据权利要求3中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，获得前述经处理抗原性物质的步骤包括通过对前述抗原性物质施加振动和/或冲击，使前述抗原性物质悬浮在空中的步骤。

6.根据权利要求5中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，前述进行悬浮的步骤包括把前述抗原性物质设置在具有挠曲性的试样台上的步骤和对前述试样台施加振动和/或冲击的步骤。

7.根据权利要求5中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，前述进行悬浮的步骤包括把前述抗原性物质设置在选自被褥、毛毯、坐垫、枕头、垫子、海绵、布、纸、苯乙烯泡沫的一种或以上材料的具有挠曲性的试样台上的步骤和通过敲打和/或振动前述试样台，对前述试样台施加振动和/或冲击的步骤。

8.根据权利要求2中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，获得前述经处理抗原性物质的步骤，包括使悬浮在空中的前述抗原性物质和前述活化气体发生反应的步骤。

9.根据权利要求1中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，获得前述经处理抗原性物质的步骤，包括使前述抗原性物质和选自含有正离子的气体、含有负离子的气体、含有自由基的气体、臭氧气体、硝酸气体等的一种或以上的气体反应的步骤。

10.根据权利要求1中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，获得前述经处理抗原性物质的步骤，包括选自杉树花粉和/或壁虱粉尘中所含的抗原性物质、杉树花粉、壁虱粉尘的一种或一种以上的物质与活化气体进行反应而获得经处理抗原性物质的步骤。

11.根据权利要求1中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，前述测定步骤包括通过ELISA法和ELISA抑制法，使相对于前述抗原性物质的抗体与前述经处理抗原性物质进行反应，测定前述经处理抗原性物质相对于前述抗体的结合活性的步骤。

12.根据权利要求1中所述的活化气体使抗原性物质失活的性能评价方法，其中，前述测定步骤包括通过对除人以外的，具有相对于前述抗原性物质的抗体产生细胞的动物进行皮内反应试验和/或结膜反应试验，使前述抗体和前述经处理抗原性物质反应，测定前述经处理抗原性物质相对于前述抗体的结合活性的步骤。

13.作为活化气体使抗原性物质失活的性能评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，其具备容器，向前述容器中散布抗原性物质的装置和在前述容器内发生或导入前述活化气体的装置。

14.根据权利要求13中所述的作为活化气体使抗原性物质失活的性能评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，其中，前述容器含有部分透明材质或者全部是透明材质。

15.作为活化气体使抗原性物质失活的性能评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，其包括容器，把抗原性物质封入到前述容器内的装置和在前述容器内发生或导入前述活化气体的装置。

16.根据权利要求15中所述的作为活化气体使抗原性物质失活的性能评价试样的经处理抗原性物质的生成装置，其中，前述容器含有部分透明材质或者全部是透明材质。

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