CN1776419A - 蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法，采用高效液相色谱法，得出了蟾酥类特有的蟾毒色胺类及蟾毒配基类化学指纹图谱；利用高效液相色谱仪，UV检测器，色谱工作站，取待测蟾酥样品25mg，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.2μm滤膜即得蟾酥类供试品溶液。将待测蟾酥供试品溶液，在分析柱，流动相：甲醇(A)－缓冲液，进行梯度洗脱，进样量20μl，保留时间90min，即得到蟾酥类各自特有的化学指纹图谱，并对所有特征峰全部或大部分进行化学归属。本方法能准确地测出蟾酥类的高效液相色谱指纹图谱，从而为鉴别蟾酥的真伪和制定蟾酥药材和蟾酥注射液质量标准提供可靠的科学依据。

Description

蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法

技术领域：

本发明涉及中药指纹图谱技术，确切地说它是蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法。

背景技术：

中药蟾酥《中国药典》鉴别项下试管反应检蟾毒色胺类和蟾毒配基类，这一方法不能有效地鉴别蟾酥的真伪；又用TLC法以对照药材及脂蟾毒配基和华蟾酥毒基对照品进行鉴别，这一方法缺乏专属性和先进性。对蟾酥类尚没有科学、有效、先进的鉴别方法。而科学、有效、先进的鉴别方法对蟾酥的应用极为重要。

发明内容：

本发明的目的是提供一种用高效液相色谱指纹图谱鉴别蟾酥类的方法，并可将蟾酥高效液相色谱指纹图谱作为蟾酥质量控制及真伪鉴别的指标。

本发明是这样实现的：在大量采集不同来源、不同产地蟾酥样品的基础上，采用高效液相色谱法，得出了蟾酥类特有的蟾毒色胺类及蟾毒配基类化学指纹图谱；方法为利用高效液相色谱仪，UV检测器，色谱工作站，取待测蟾酥样品25mg，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.2μm滤膜即得蟾酥类供试品溶液。将待测蟾酥供试品溶液，在分析柱Phenyl-Hexyl(4.6×250mm，5μm)，流动相：甲醇(A)-缓冲液(B，一定配比的庚烷磺酸钠或辛烷磺酸钠、柠檬酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液组成)，进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长296nm，进样量20μl，保留时间90min，即得到蟾酥类各自特有的化学指纹图谱(包括蟾毒色胺类和蟾毒配基类特征峰)，并对所有特征峰全部或大部分进行化学归属。

本方法能准确地测出蟾酥类的高效液相色谱指纹图谱，从而为鉴别蟾酥的真伪和制定蟾酥药材和蟾酥注射液质量标准提供可靠的科学依据。

附图说明：

图1为中华蟾酥(中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans耳后腺的干燥分泌物)对照用HPLC指纹图谱。

A.中华蟾酥北方品；B.中华蟾酥中原品；C.中华蟾酥南方品

5-羟色胺(1)，N‘-甲基5-羟色胺(2)，蟾毒色胺(3)，蟾毒色胺内盐(4)，日蟾毒它灵(5)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，蟾毒它灵(8)，远华蟾毒精(9)，华蟾毒它灵(10)，蟾毒灵(11)，脂蟾毒配基(12)，华蟾毒精(13)

图2黑眶蟾酥(黑眶蟾蜍Bufo melanostictus耳后腺的干燥分泌物)对照用HPLC指纹图谱。

5-羟色胺(1)，N‘-甲基5-羟色胺(2)，蟾毒色胺内盐(4)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，19-羟基蟾毒灵(7’)，蟾毒它灵(8)，蟾毒灵(11)，脂蟾毒配基(12)

图3华西蟾酥(华西大蟾蜍Bufo bufo andrewsi耳后腺的干燥分泌物)对照用HPLC指纹图谱。

5-羟色胺(1)，N‘-甲基5-羟色胺(2)，蟾毒色胺内盐(4)，日蟾毒它灵(5)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，蟾毒它灵(8)，远华蟾毒精(9)，华蟾毒它灵(10)，蟾毒灵(11)

图4花背蟾酥(花背蟾蜍Bufo raddei耳后腺的干燥分泌物)对照用HPLC指纹图谱。

蟾毒色胺(3)，蟾毒色胺内盐(4)，日蟾毒它灵(5)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，远华蟾毒精(9)，南美蟾毒精(9’)，蟾毒灵(11)

具体实施方式：

利用高效液相色谱仪，UV检测器，色谱工作站，取待测蟾酥样品25mg，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1hr，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.2μm滤膜即得蟾酥类供试品溶液。将待测供试品溶液，在分析柱Phenyl-Hexyl(4.6×250mm，5μm)，流动相：甲醇(A)-缓冲液(B，一定配比的庚烷磺酸钠或辛烷磺酸钠、柠檬酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液组成)，按下表条件梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长296nm，进样量20μl，保留时间90min，即得到蟾酥类各自特有的化学指纹图谱(包括蟾毒色胺类和蟾毒配基类特征峰)，并对所有特征峰全部或大部分进行化学归属。

梯度洗脱程序：

时间(min)	A(％)	B(％)
			0304090100	1212506012	8888504088

Claims (1)

1.蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法，使用高效液相色谱仪、UV检测器以及相应的色谱工作站，其特征在于：采用4.6×250mm，5μmPhenyl-Hexy分析柱，流动相：甲醇做为A-一定配比的庚烷磺酸钠或辛烷磺酸钠、柠檬酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液组成的缓冲液做为B，按以下程序梯度洗脱，

梯度洗脱程序：   时间(min)   A(％)   B(％)   0304090100   1212506012   8888504088 流速为1.0ml/min，检测波长296nm，蟾酥类供试品溶液，精密称定蟾酥细粉25mg，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，进样量20μl，保留时间90min，即得到蟾酥类各自特有的化学指纹图谱，包括蟾毒色胺类和蟾毒配基类特征峰，并对所有特征峰全部或大部分进行化学归属，通过该方法能快速准确地鉴别不同来源的蟾酥类，可作为蟾酥及蟾酥注射液质量控制的标准。

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