CN1748787A - 一种含p40分子或其基因的医药制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属医药制剂领域，涉及以p40分子或者编码p40分子的基因为有效成分、用于对抗白细胞介素－23(IL－23)引起的免疫反应的医药制剂。具体是以可溶性p40分子或者可表达并分泌p40分子的基因为有效成分，对抗由IL－23介导的对机体不利的免疫反应，可广泛用于例如治疗免疫反应异常亢进引起的免疫疾病如胶原病、多发性硬化、风湿性关节炎、溃疡性大肠炎、I型糖尿病、慢性甲状腺炎等。还可以用于抑制机体对移植物的排异反应。

Description

一种含P40分子或其基因的医药制剂

技术领域

本项发明涉及以p40分子或者编码p40分子的基因为有效成分、用于对抗白细胞介素-23(IL-23)引起的免疫反应的医药制剂。具体是以机体的可溶性p40分子或者可以表达并分泌p40分子的基因为有效成分，对抗由IL-23介导的对机体不利的免疫反应，可广泛用于例如治疗自身免疫疾病、缓和移植物排异反应等用途。本发明属于医药制剂领域。

背景技术

以往，使用免疫抑制剂是对抗对机体有害的免疫反应(如以自身脏器为攻击靶标的自身免疫疾病或脏器移植后的排异反应等)的唯一手段。这类免疫抑制剂中有对全部免疫反应有抑制作用的抗T淋巴细胞抗体和甾体类激素等制剂、也有对活化的T细胞有抑制作用的环孢子菌素等制剂。这些制剂的免疫抑制作用特异性不强，会导致机体的防御能力下降、对病毒和细菌的易感染性增强、进而使机会感染的可能性大大增高，所以临床使用免疫抑制剂都非常慎重。另外，已经证实长期使用免疫抑制剂会增加患恶性肿瘤的危险性。从医疗需要出发，免疫抑制剂是不可缺少的，但是另一方面已有的免疫抑制剂存在严重的副作用和危险性，因此，人们一直在尝试开发出以参与机体免疫反应的分子为作用靶点的特异性免疫抑制剂，但是，至今尚无理想成果。

由各种免疫细胞分泌的细胞因子在复杂而精细的免疫反应调控中具有重要的作用。而另一方面，这些能活化免疫细胞的细胞因子又与很多疾病有关。特别是自身免疫疾病患者，已经被证实其炎性细胞因子的分泌明显异常于正常健康人(非专利文献1)。这种细胞因子分泌异常被认为是自身免疫疾病的发病机理之一(非专利文献2)。因此，阻断这些细胞因子的受体信号传导通路，从而减弱异常免疫反应，是开发新的特异性免疫抑制剂的有效途径。

2000年，一种在T细胞介导的免疫反应中起中心作用的细胞因子--白细胞介素-23(IL-23)被发现(非专利文献3)。尽管IL-23与已知的白细胞介素12(IL-12)结构和功能相似，最近的研究表明，它与免疫反应的活化和异常有着更密切的关系。IL-23是由两个亚基(p19分子+p40分子)通过二硫键组成的二聚体，IL-12则是由p35与p40分子形成的二聚体(非专利文献4)，其p40亚基与IL-23的p40亚基相同。另外，IL-23受体是IL-12Rβ1与IL-23R构成的二聚体(非专利文献5)，IL-12受体则是由IL-12Rβ1与IL-12Rβ2构成的二聚体(非专利文献6)。因此IL-23受体和IL-12受体都有IL-12Rβ1亚基。另外，对IL-12与其受体的结合研究表明，p40分子与IL-12Rβ1相结合(非专利文献7)，并且推测p19分子与IL-23R、p35分子与IL-12Rβ2相结合。进一步的研究表明，虽然二者受体的细胞内信号传导都是利用JAK/STAT信号传导路径，但是有所不同，IL-23受体激活引起STAT-3活化，IL-12受体激活则引起STAT-4活化。总之，由于IL-23这一新的细胞因子及其受体与IL-12及其受体结构类似，因此推测IL-23在IL-12参与的免疫反应中也有重要作用，值得深入探讨。

风湿性关节炎、I型糖尿病、克隆病等脏器特异的自身免疫疾病现在认为大多是由于1型辅助细胞(Th1)和Th2功能之间的平衡被打破，从而自身反应性Th1细胞被活化而引起的。由于IL-12能增强Th1反应，因此在自身免疫疾病的发病上起着可能起重要作用。事实上，已经有报告表明，在自身免疫疾病模型鼠观察到，给予能阻断IL-12与其受体结合的抗p40单克隆抗体能抑制发病和减轻症状(非专利文献8)。由于新发现的IL-23也含有p40亚基，抗p40抗体也能阻断IL-23与其受体结合，因此不能排除IL-23在自身免疫疾病中也有重要的作用。现在已经证实，在自身免疫疾病模型--实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE：experimentalautoimmune encephalomyelitis)上，IL-23与其发病密切相关(非专利文献9)。这一模型小鼠的症状与人的多发性硬化症类似，是用髓鞘碱性蛋白或髓磷脂少突神经胶质细胞糖蛋白的肽片段对特定品系的小鼠进行免疫，诱导其发病。虽然抗p40抗体对于EAE也能发挥治疗作用(非专利文献10)，p35基因(非专利文献11)缺失或者IL-12Rβ2基因缺失的鼠(非专利文献12)，尽管其IL-12的生理功能已遭到破坏(这些鼠的IL-23功能正常)，但仍然患上了EAE。不过，对于不能只表达IL-23的p19遗传因子缺失鼠，未观察看到以单核淋巴细胞为主的的炎性细胞在脑内高度聚集、动物也未发现EAE症状。有意思的是，向p19基因缺失小鼠以腺病毒载体导入IL-23基因后，小鼠则易被诱导发病，产生EAE症状。(非专利文献9)。另外，p19转基因小鼠则呈现自身免疫疾病的症状，在其脑内观察到巨噬细胞向炎症部位的显著浸润(非专利文献13)。综上所述，IL-23会加强炎症性巨噬细胞和自身反应性T细胞的异常活化，与IL-12相比，它在自身免疫疾病的发病中担当着更加重要的角色。

IL-23与IL-12一样，能促进T细胞增殖、促进活化的T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)，在细胞免疫应答的激活中起着重要作用。这在基因缺失小鼠得到证实。对不能产生IL-12而能产生IL-23的p35基因缺失小鼠，或者既不能够产生IL-12也不能产生IL-23的p40基因缺失小鼠，两者的抗细菌感染等的能力显著减弱。而且，p40基因缺失鼠比p35基因缺失鼠的抗感染能力更弱，易发生感染死亡(非专利文献14)。这一现象表明，IL-23与IL-12都在细胞免疫应答中有重要的作用。另有研究表明，将导入IL-23基因的肿瘤细胞接种到动物体内，能活化杀伤性T细胞，从而完全排斥肿瘤(非专利文献15)，提示动物建立了肿瘤特异性的后天免疫，表明IL-23对细胞免疫反应具有促进作用。另外，导入IL-12基因的肿瘤也因为同样的机理能被宿主动物排斥，引起后天免疫(非专利文献16)。人们认为IL-23与IL-12一样，对细胞性免疫的活化都起着重要作用。

【非专利文献1】Shimozato，O et al.，Cytokine，8，99-105，1996

【非专利文献2】Skurkovich，SV et al.，Med.Hypotheses.，59，770-780.2002

【非专利文献3】Oppmann，B et al.，Immunity，13，715-725，2000

【非专利文献4】Gubler，U et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88，4143-4147，1991

【非专利文献5】Parham，C et al.，J.Immunol.，168，5699-5708，2002

【非专利文献6】Presky，DH et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93，14002-14007，1996

【非专利文献7】Presky，DH et al.，Ann.NY Acad.Sci.，795，390-393，1996

【非专利文献8】Fujihira，K et al.，Diabetes，49，1998-2006，2000

【非专利文献9】Cua，DJ et al.，Nature，421，744-748，2003

【非专利文献10】Leonard，JP et al.，J.Exp.Med.，181，381-386，1995

【非专利文献11】Gran，B et al.，J.Immunol.，169，7104-7110，2002

【非专利文献12】Zhang，G-X et al.，J.Immunol.，170，2153-2160，2003

【非特許文献13】Wiekowski，MT et al.，J.Immunol.，166，7563-7570，200

【非特許文献14】Holscher，C et al.，J.Immunol.，167，6957-6966，2001

【非特許文献15】Wang，Y-Q et al.，Int.J.Cancer，105，820-824，2003

【非特許文献16】Tasaki，K et al.，Cancer Gene Ther.，7，247-254，2000

发明内容

如上所述，IL-23参与自身免疫疾病等过度的异常免疫反应和细胞免疫反应的活化，通过特异性地阻断IL-23介导的免疫反应对免疫疾病进行治疗将是非常有效的手段。

本发明的目的是特异性地抑制特定的免疫反应。具体是使用可溶性p40分子特异性地阻断与自身免疫疾病中的过度免疫反应和脏器移植诱发炎症中的细胞免疫反应等密切相关的IL-23的活动。以往的非特异性免疫抑制剂对机体的全部免疫功能都有抑制作用，具有较大的缺陷，而本发明中的p40分子是基于机体本身存在的分子的结构用分子生物学进行合成、对IL-23介导的免疫反应有特异性抑制作用。与已有的免疫抑制剂不同，它可以在临床上发挥更大的作用。

因此，本发明是以p40分子或者编码p40分子的基因为有效成分、抑制由IL-23介导的免疫反应的医药制剂。

由于p40分子与IL-12Rβ1特异性分子结合，所以可溶性p40分子能阻断IL-12与其受体的结合。另外，有报道表明，p40二聚体比单体的阻断效果更好(Gillessen，S et al.，Eur.J.Immunol.，25，200-206，1995)。可溶性p40分子阻断IL-23与其受体结合的现象已经在不少研究中得到证实，包括p40分子对IL-23介导的免疫反应的抑制、对IL-23诱发的的IFN-γ产生的抑制以及对IL-23基因导入肿瘤后抗肿瘤作用的翻转，这些结果都进一步证实了p40分子对IL-23受体结合的阻断作用。表明p40分子或者编码p40分子基因可以有效成分用来制作抑制IL-23介导的免疫反应的医药制剂。

p40分子是构成树状细胞分泌的细胞因子IL-23亚基之一。具体地说，本发明中采用的p40分子是序列表1所示的第23至328氨基酸序列构成的人p40分子、或者是在序列表1所列氨基酸序列基础上，缺失、置换或者添加数个氨基酸残基而产生的与p40分子功能相同的蛋白质。这里所说的有着同样功能，是指具有与人p40分子的抑制IL-23介导的免疫反应作用。编号为1的序列中所示的第1至第22号的氨基酸是信号肽。

具体地说，本发明中采用的编码p40分子的基因是序列表1所示的第67号至第984号碱基的基因、或者是能编码具有与p40分子相同功能的p40分子的突变蛋白的基因。这里所说的有着同样功能，与上面的解释意义相同。这里所指的突变蛋白是在序列1所示的第23号至第328号的氨基酸序列基础上，缺失、置换和(或)添加1至数个氨基酸残基产生的。另外还包括，通过在严格条件下与含有序列1所示碱基序列的基因杂交而获得的、所编码分子与p40分子具有同样功能p40的突变体基因。这里所指的严格条件，比如在下列条件下进行杂交：在含6×SSPE，2×Denharts溶液、0.5％ SDS、0.1mg/ml鱼精DNA的杂交液中、65℃下，进行12小时Southern杂交。

另外，序列1中所示的第1号至第66号的碱基序列与编码信号肽序列相当。在本发明中，将编码p40分子的基因作为有效成分来使用时，通常是用病毒或者非病毒载体将基因导入，并表达、分泌基因产物。因此，上述的编码p40分子的基因的上游都附加编码信号肽的基因序列。编码信号肽的基因并不局限于序列1所示的第1号至第66号的序列，还可以使用编码其他常规信号肽的基因序列。

按照序列1所示的人p40分子的基因序列、采用众所周知的PCR法可以获得上述基因。按照Molecular Cloning 2nd Edt.，Cold SptingHarbor Laboratory Press(1989)等基本参考书去做，本行业中的人员，可以轻易掌握这类方法。例如部位特异性突变诱导法、PCR法或者通常的杂交法等都能轻易掌握。具体可以参照上述Molecular Cloning等基本参考书来进行操作。上述的p40分子也一样，使用上述本行业中众所周知的重组DNA法就能够轻易获得，也可以用常规蛋白质合成法来获得。

本发明中采用的p40分子通常可通过静脉内、皮下、肌肉内、局部、经直肠、经皮、经鼻等非经口方式施用。作为非经口方式施用的剂型可以是例如注射用水性剂或者油性剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂、气雾剂、坐剂、粘贴剂等。进一步，还可以配制成缓慢释放的丸剂埋入体内、或者用渗透泵等使其在体内缓慢释放。另外，也可以采用经口施用的方式，通常，以小胶囊或微脂粒等在消化道不易被分解的剂型施用。

这些制剂采用公众熟知的技术进行配制，可以含有制剂领域常规使用的无毒性、惰性载体或者赋形剂。另外，还可以根据需要采用常规的结合剂、稳定剂、缓冲剂、助溶剂等调和剂。

p40分子的施用剂量和施用次数因使用对象的症状、病历、年龄、体重、给药方式等而不同。例如，对于成人(体重60kg)，采用静脉内、经口等的方式施用时，通常为1日100～5,000mg，更好是400～2,000mg、最好是800～1,200mg的范围内酌情配制，可以一次或分成数次施用。

本发明中，在使用编码p40分子的基因时，如上所述，通常是在含有能表达并分泌p40分子的基因的病毒载体或者非病毒载体中使用。作为病毒载体，腺病毒、逆转录病毒等是有代表性的病毒载体。具体地说，例如，如无毒化的逆转录病毒、腺病毒、腺病毒伴随病毒、疱疹病毒、痘苗病毒、痘病毒、辛德毕斯病毒、脊髓灰质炎病毒、脊髓灰质炎病毒、仙台病毒、SV40、人类免疫缺陷病毒(HIV)等DNA病毒和一些RNA病毒。在这些病毒中，腺病毒的感染效率比起采用其它病毒要高得多、最好采用腺病毒类载体。

非病毒载体指能在哺乳动物体内表达目的基因的一些载体，例如pcDNA3.1，pZeoSV，pBK-CMV(Invitrogene公司，Strategene公司)，pCAGGS(Gene 108，193-200，1991)等载体。

为制备本发明所包括的医药制剂，须向上述各类载体中以可表达的方式插入上述基因或突变体。用于这些病毒载体或者非病毒载体的制备方法和施用方法都是利用本行业人员所熟知的技术，有很多文献或者实验指导书可以参考，如《实验医学分册》，基因治疗的基本技术，羊土社，日本，1996；《实验医学分册》，基因导入和表达的实验方法，羊土社，日本，1997；日本基因治疗学会编《基因治疗开发研究手册》，NTS，1999等。

这些被插入p40基因并能表达、分泌p40分子的病毒或者非病毒载体既可直接给药，也可以在医药制剂常规许可范围内加入赋形剂，制成溶液、悬浊液、胶体等剂型。给药方式，可以采用局部注射等形式。或通过静脉或者动脉进行系统给药。

本发明还包括向载体细胞导入上述基因使其表达、分泌p40，然后可以将这些细胞施用到人体。作为载体使用的细胞可以是例如：纤维芽细胞、肌肉芽细胞、末梢血细胞、各种干细胞、经放射线处理过的肿瘤细胞等。为了使用病毒载体或者非病毒载体将引入了遗传因子的细胞，例如、在LXSN(Miller，AD，Rosman，GJ，BioTechniques，7，980-990，1989)、MGF、α-SCG、PLJ、pEm(特表平6-503968号公报)等逆病毒载体的克隆化部位上插入p40分子的编码遗传因子，以使其能显现并分泌，然后，将DNA引入包装细胞、使用引入了p40分子编码遗传因子的细胞的培养上清液中含有的逆转录病毒，使细胞感染，就能将p40分子的编码引入了遗传因子的细胞。引入了遗传因子的细胞通常用半透过性聚合物等包裹、以精氨酸—聚-L-赖氨酸胶囊或者琼脂珠等形态来施用(Suzuki，R et al.，Cell Transplant.，11，787-797，2002；Al-Hendy，A et al.，Hum.Gene Ther.，7，61-70，1996)。

本发明的医药制剂对IL-23介导的免疫反应异常引起的免疫性疾病、例如胶原病、多发性硬化症、慢性关节风湿病、溃疡性大肠炎、I型糖尿病、慢性甲状腺炎等特别有效。另外对IL-23介导的移植器官排斥反应也很有效。本发明的医药制剂的优点是能特异性阻断IL-23介导的免疫反应。

为更详细地说明本发明，下面以实施例来进行说明。实施例并不对本发明构成任何限定。

实施例1

重组IL-23和p40分子的制作

从BALB/c小鼠皮下移植性肿瘤的细胞中提取总RNA，用RT-PCR法获得p19和p40的全长cDNA、并将其插入到动物细胞表达载体pcDNA3(Invitrogen公司)的克隆化部位(Eco RI/Bam HI)，两种cDNA之间由内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site，IRES)(Duke，GM etal.，J.Virol.，66，1602-1609，1992)连接。，IL-23表达载体是在CMV启动子的下游插入以p19/IRES/p40顺序排列的基因，p19与p40 cDNA一起由CMV启动子控制其转录。用于表达可溶性p40分子的载体中，只插入p40 cDNA，其转录由CMV启动子进行控制。用Lipofectin试剂(Invitrogen公司)将上述载体引入猴的肾细胞COS-7(American Type Culture Collection，ATCC)、培养48小时后回收培养上清液。用ELISA法(BioSource公司)确认该培养上清液中p40分子的存在。引入IL-23或p40基因的细胞培养上清中p40的浓度分别为6.56ng/ml、4.97ng/ml，在下面的实验中，将利用这些培养液中的IL-23和可溶性p40分子。

这里使用的小鼠编码p40分子的基因是序列表2中所示的碱基序列。序列2中的5’末端包含编码信号肽的碱基序列。

实施例2

p40抑制IL-23诱导脾细胞产生IFN-γ的作用

用Concanavalin A(5μg/ml、Sigma公司)刺激C57BL/6鼠的脾脏细胞，48小时后，回收活细胞，用磷酸盐缓冲液冲洗2次后，接种于24孔板上(2.5×10⁶个/孔)，加入含有IL-23的COS-7细胞培养上清进行培养，同时加入加入导入p40基因的COS-7细胞培养上清或未引入任何基因的COS-7细胞的培养上清。经过48小时培养后，回收培养上清，用ELISA法(eBioscience公司)测定其中IFN-γ的含量。

所得结果如图1所示。添加含p40分子的培养上清后，与添加不含p40分子的培养上清的组相比，IFN-γ的分泌发生了显著降低。表明p40分子显著抑制了IL-23诱导IFN-γ产生的作用。

实施例3

将 IL-23或p40基因导入细胞

将小鼠p19和p40 cDNA用IRES插入到逆转录病毒载体LXSN的克隆化位点(Eco RI/Bam HI)中。IL-23表达载体是在5’LTR下游插入以p19/IRES/p40顺序排列的基因片段，可溶性p40分子的表达载体中，只插入p40的cDNA。IL-23和p40的转录都由5’LTR进行控制。用Lipofectin试剂(Invitrogen公司)将上述表达载体引入包装细胞Psi-2(ATCC)后，用添加了G418(400μg/ml、Invitrogen公司)的培养液进行选择培养，然后用该培养上清液和多聚季胺(polybrene，8μg/ml、Aldrich公司)再进一步感染PA317细胞(ATCC)、用G418(400μg/ml、Invitrogen公司)选择培养，此PA317细胞培养上清液中的含逆转录病毒。用此上清感染小鼠结肠癌细胞(Colon26)，从而导入IL-23或p40基因，克隆化(Colon26/IL-23、Colon26/p40)后确认这些细胞中的p19、p35、p40基因的表达和培养上清液中p40分子的分泌量。(Colon26/IL-23、Colon26/p40的分泌量均为0.8～1.1ng/ml/1×10⁶/48小时)。另外，还确认了对显示肿瘤抗原的递呈有重要作用的主要组织相容性抗原H-2K/H-2D的表达，与亲株细胞无显著差别、另外，导入上述基因的细胞体外增殖速度也与亲株细胞相同。这里使用的小鼠p40基因是序列表2所示的碱基序列构成。序列2中所示的碱基序列的5’末端上包含的编码信号肽的序列。

实施例4

p40分子对导入IL-23基因后抗肿瘤效果的抑制作用

将Colon26/IL-23细胞(1×10⁶个)向同种BALB/c小鼠皮下接种后，长出的肿瘤在经过一段时间后全部退缩、最终完全消失。将Colon26/IL-23与母株Colon26以1∶1比例混和(总细胞数1×10⁶个)后给同类小鼠做皮下接种，肿瘤在经过一段时间后、最终肿瘤完全被排斥(图2)。但是，将Colon26/IL-23与Colon26/p40以1∶1的比例混和(总细胞数1×10⁶个)后给同类鼠做皮下接种，它的增殖与单接种亲株细胞(总细胞数1×10⁶个)时一样，长出的肿瘤并未受到排斥(图2)。表明，导入IL-23基因产生的抗肿瘤效果受到可溶性p40分子的抑制。

技术效果

如上所述，现已阐明，导入p40基因的COS-7细胞的培养上清对于由IL-23浓度性诱导脾细胞分泌IFN-γ的作用有显著抑制作用。另外，导入p40基因的Colon26细胞对Colon26/IL-23细胞的抗肿瘤效果有抑制作用。从上述事实可以推断，利用载体表达并分泌p40分子，所产生的可溶性p40分子能抑制IL-23介导的免疫反应。因此，使用p40分子或者编码p40分子基因可以抑制自身免疫疾病和移植器官排异反应等IL-23能参与的免疫反应，使得自身免疫疾病和过敏性疾病的预防和治疗成为可能，并为移植器官的顺利存活提供保障。

附图说明

图1.图中表示，导入p40基因的COS-7细胞的培养上清抑制IL-23浓度依赖性诱导脾细胞分泌IFN-γ的作用。

图2.图中表示，导入了p40基因的结肠癌colon26细胞抑制IL-23基因的抗肿瘤作用。

                        SEQUENCE LISTING

<110>  中华人民共和国复旦大学；日本国千叶县政府(Chiba Prefecture，Japan)

<120>  一种含p40分子或其基因的医药制剂

<130>  Fudan-20040812

<150>  JP2003 292937

<151>  2003-08-13

<160>  2

<170>  Patentln version 3.2

<210>  1

<211>  987

<212>  DNA

<213>  人(Homo sapiens)

<400>  1

atg tgt cac cag cag ttg gtc atc tct tgg ttt tcc ctg gtt ttt ctg        48

Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu

1               5                   10                  15

gca tct ccc ctc gtg gcc ata tgg gaa ctg aag aaa gat gtt tat gtc        96

Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val

            20                  25                  30

gta gaa ttg gat tgg tat ccg gat gcc cct gga gaa atg gtg gtc ctc       144

Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu

        35                  40                  45

acc tgt gac acc cct gaa gaa gat ggt atc acc tgg acc ttg gac cag       192

Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln

    50                  55                  60

agc agt gag gtc tta ggc tct ggc aaa acc ctg acc atc caa gtc aaa       240

Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys

65                  70                  75                  80

gag ttt gga gat gct ggc cag tac acc tgt cac aaa gga ggc gag gtt       288

Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val

                85                  90                  95

cta agc cat tcg ctc ctg ctg ctt cac aaa aag gaa gat gga att tgg       336

Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp

            100                 105                 110

tcc act gat att tta aag gac cag aaa gaa ccc aaa aat aag acc ttt       384

Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe

        115                 120                 125

cta aga tgc gag gcc aag aat tat tct gga cgt ttc acc tgc tgg tgg       432

Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp

    130                 135                 140

ctg acg aca atc agt act gat ttg aca ttc agt gtc aaa agc agc aga       480

Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg

145                 150                 155                 160

ggc tct tct gac ccc caa ggg gtg acg tgc gga gct gct aca ctc tct       528

Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser

                165                 170                 175

gca gag aga gtc aga ggg gac aac aag gag tat gag tac tca gtg gag       576

Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu

            180                 185                 190

tgc cag gag gac agt gcc tgc cca gct gct gag gag agt ctg ccc att       624

Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile

        195                 200                 205

gag gtc atg gtg gat gcc gtt cac aag ctc aag tat gaa aac tac acc       672

Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Lau Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr

    210                 215                 220

agc agc ttc ttc atc agg gac atc atc aaa cct gac cca ccc aag aac       720

Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn

225                 230                 235                 240

ttg cag ctg aag cca tta aag aat tct cgg cag gtg gag gtc agc tgg       768

Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp

                245                 250                 255

gag tac cct gac acc tgg agt act cca cat tcc tac ttc tcc ctg aca       816

Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr

            260                 265                 270

ttc tgc gtt cag gtc cag ggc aag agc aag aga gaa aag aaa gat aga       864

Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg

        275                 280                 285

gtc ttc acg gac aag acc tca gcc acg gtc atc tgc cgc aaa aat gcc      912

Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala

    290                 295                 300

agc att agc gtg cgg gcc cag gac cgc tac tat agc tca tct tgg agc      960

Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser

305                 310                 315                 320

gaa tgg gca tct gtg ccc tgc agt tag                                  987

Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Sto

                325

<210>  2

<211>  1008

<212>  DNA

<213>  小鼠(mouse)

<400>  2

atg tgt cct cag aag cta acc atc tcc tgg ttt gcc atc gtt ttg ctg      48

Met Cys Pro Gln Lys Leu Thr Ile Ser Trp Phe Ala Ile Val Leu Leu

1               5                   10                  15

gtg tct cca ctc atg gcc atg tgg gag ctg gag aaa gac gtt tat gtt      96

Val Ser Pro Leu Met Ala Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val

            20                  25                  30

gta gag gtg gac tgg act ccc gat gcc cct gga gaa aca gtg aac ctc     144

Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu

        35                  40                  45

acc tgt gac acg cct gaa gaa gat gac atc acc tgg acc tca gac cag     192

Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln

    50                  55                  60

aga cat gga gtc ata ggc tct gga aag acc ctg acc atc act gtc aaa     240

Arg His Gly Val Ile Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys

65                  70                  75                  80

gag ttt cta gat gct ggc cag tac acc tgc cac aaa gga ggc gag act     288

Glu Phe Leu Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr

                85                  90                  95

ctg agc cac tca cat ctg ctg ctc cac aag aag gaa aat gga att tgg      336

Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp

            100                 105                 110

tcc act gaa att tta aaa aat ttc aaa aac aag act ttc ctg aag tgt      384

Ser Thr Glu Ile Leu Lys Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys

        115                 120                 125

gaa gca cca aat tac tcc gga cgg ttc acg tgc tca tgg ctg gtg caa      432

Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln

    130                 135                 140

aga aac atg gac ttg aag ttc aac atc aag agc agt agc agt tcc cct      480

Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro

145                 150                 155                 160

gac tct cgg gca gtg aca tgt gga atg gcg tct ctg tct gca gag aag      528

Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys

                165                 170                 175

gtc aca ctg gac caa agg gac tat gag aag tat tca gtg tcc tgc cag      576

Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln

            180                 185                 190

gag gat gtc acc tgc cca act gcc gag gag acc ctg ccc att gaa ctg      624

Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu

        195                 200                 205

gcg ttg gaa gca cgg cag cag aat aaa tat gag aac tac agc acc agc      672

Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser

    210                 215                 220

ttc ttc atc agg gac atc atc aaa cca gac ccg ccc aag aac ttg cag      720

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

225                 230                 235                 240

atg aag cct ttg aag aac tca cag gtg gag gtc agc tgg gag tac cct      768

Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro

                245                 250                 255

gac tcc tgg agc act ccc cat tcc tac ttc tcc ctc aag ttc ttt gtt      816

Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val

            260                 265                 270

cga atc cag cgc aag aaa gaa aag atg aag gag aca gag gag ggg tgt      864

Arg Ile Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys

        275                 280                 285

aac cag aaa ggt gcg ttc ctc gta gag aag aca tct acc gaa gtc caa      912

Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln

    290                 295                 300

tgc aaa ggc ggg aat gtc tgc gtg caa gct cag gat cgc tat tac aat      960

Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn

305                 310                 315                 320

tcc tcg tgc agc aag tgg gca tgt gtt ccc tgc agg gtc cga tcc tag     1008

Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Sto

                325                 330                 335

Claims (6)

1.一种用于特异性阻断白细胞介素23(IL-23)介导的免疫反应的医药制剂，其特征是以p40分子或其基因为有效成分。

2.根据权利要求1所述的医药制剂，其特征为所述p40分子是由序列表1所示的第23至328氨基酸序列构成的人p40分子、或者是在序列表1所列氨基酸序列基础上，缺失、置换和(或)添加数个氨基酸残基而产生的与人p40分子功能相同的蛋白质。

3.根据权利要求1所述的医药制剂，其特征为所述的编码p40分子的基因是：具有序列表1所示的第67号至第984号碱基序列的基因、或者是编码具有与人p40分子相同功能的p40分子突变蛋白的基因，这里所指的突变蛋白是在序列1所示的第23号至第328号的氨基酸序列基础上，缺失、置换和(或)添加1至数个氨基酸残基产生的，或者通过在严格条件下与含有序列1所示碱基序列的基因杂交而获得的、所编码分子与人p40分子具有同样功能p40突变体基因。

4.根据权利要求1或3所述的医药制剂，其特征是编码p40分子的基因以可表达、分泌的形式构建到病毒或者非病毒载体中。

5.根据权利要求4所述的医药制剂，其特征是将所述的能表达、分泌p40分子的病毒或者非病毒载体导入到细胞中。

6.根据权利要求1到5所述的任一医药制剂，在制备预防或治疗由IL-23介导的免疫反应异常相关的免疫疾病或者抑制机体对移植器官的排异反应的药物中的用途。

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