CN1746298B - 人工重组的h7亚型流感病毒和应用 - Google Patents

人工重组的h7亚型流感病毒和应用 Download PDF

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Abstract

人工重组的H7亚型流感病毒和应用，在国内，虽然高致病性的H7亚型流感病毒还没有分离到，但是也曾分离到过一株自然分离株H7亚型LPAIV。人工重组的H7亚型流感病毒，其组成包括：H7亚型禽流感病毒A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)的HA和NA基因，所述的人工重组的H7亚型流感病毒还包括流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS，保藏号CCTCC-V200415。该病毒对我国流行的H7N2禽流感病毒具有特异免疫性，具有高滴度鸡胚适应性，对鸡及鸡胚无致病力。

Description

人工重组的H7亚型流感病毒和应用
所属技术领域：
本发明涉及一株人工重组的流感病毒，该病毒的制备和应用。
背景技术
禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)是禽类及一些哺乳动物的呼吸系统疾病的重要病原。AIV在分类学上属于：病毒界(Vira)----正粘病毒科(Orthomyxoviridae)----流感病毒属(Influenza Virus A and B)----禽流感病毒(avian influenza virus)。
根据表面蛋白抗原性不同，禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)被分为15个血凝素(HA)和9个神经氨酸酶(NA)亚型。H7亚型AIV 1878年首次在意大利出现，该“真性鸡瘟”的病原是A/Chicken/Brescia/1902(H7N7)，其是禽流感历史上第一次文字记载的HPAIV，后来人们又分离到多株H7亚型AIV，神经氨酸酶亚型主要为N1、N2、N3、N7等，其中HPAIV占据一定的比例。在国内，虽然高致病性的H7亚型流感病毒还没有分离到，但是也曾分离到过一株自然分离株H7亚型LPAIV，而且对于高致病性的H7亚型病毒的高度危害，我们深信不疑。为了防止那可能发生的危害，做好高效力的H7亚型的流感疫苗，做好技术储备刻不容缓。但由于现地分离的野毒株鸡胚适应性较差，致使现行预储备的疫苗存在成本高、疫苗免疫期短等缺点。
发明内容：
本发明的目的是提供一种人工重组的H7亚型流感病毒、该病毒的制备方法和应用，该病毒对我国流行的H7N2禽流感病毒具有特异免疫性，具有高滴度鸡胚适应性，对鸡及鸡胚无致病力。
本发明的目的是这样实现的
一种人工重组的H7亚型流感病毒，其组成包括：H7亚型禽流感病毒A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)的HA和NA基因，所述的病毒上还重组有流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS，保藏号CCTCC-V200415。
上述的人工重组的H7亚型流感病毒，HA和NA基因具有序列表SEQ IDNo.4和SEQ ID No.6所述的序列，6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS具有序列表SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所述的序列，该病毒对我国流行的H7N2禽流感病毒具有特异免疫性，具有高滴度鸡胚适应性，对鸡及鸡胚无致病力。
上述的人工重组的H7亚型流感病毒的制备方法，包括以下步骤：
a.共感染-使两个病毒基因组发生重组：流感病毒A/PR/8/34(PR8)(H1N1)与经紫外线处理过的H7N2亚型AIV国内分离株A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)共同接种10日龄鸡胚尿囊腔；
b.筛选-除去表面基因来源于PR8病毒的病毒：在上述特定的人工条件下收获的尿囊液，与倍比稀释的抗PR8的血清混合，室温下孵育之后接种鸡胚尿囊腔，收获后，对鸡胚尿囊液进行血凝活性检测，收获血清稀释度最低并且具有血凝活性的样品用于第二轮筛选；
c.稀释纯化-除去内部基因来源于H7N2病毒：同上方法筛选得到的病毒在鸡胚上进行3代有限克隆纯化，利用片段特异性引物RT-PCR鉴定并经过序列分析筛选HA和NA来自于H7N2、6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M及NS来自PR8的重组病毒。
上述的人工重组的H7亚型流感病毒，作为防制动物和人类H7亚型流感的疫苗株，应用于疫苗防制。
该病毒HA和NA基因来自H7N2亚型禽流感病毒A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)，6个内部基因来自PR8病毒；该病毒与我国H7N2亚型禽流感病毒流行株抗原性一致，并且具有良好的鸡胚适应性；作为防制H7亚型动物流感的疫苗株。
本发明的优点：
1.本发明Re-3以我国禽流感病毒H7N2为HA和NA基因供体，因此，该病毒与我国曾流行的H7N2亚型禽流感病毒抗原性一致。以此为疫苗株生产的疫苗，将对H7N2亚型禽流感病毒流行株产生良好的特异保护性。
2.本发明Re-3含有鸡胚高滴度适应株PR8的6个内部基因，病毒生长滴度与野毒相比，可提高10倍左右，以此为疫苗株生产疫苗，可大大降低疫苗生产成本，提高疫苗质量。
流感病毒A/PR/8/34(H1N1)(PR8)是实验室鸡胚适应株，即该病毒可在鸡胚内生长至很高滴度，这种鸡胚适应性由病毒的6个内部基因决定。另外，当两个流感病毒共同感染一个细胞或鸡胚时，可发生基因互换，从而产生新的基因重组病毒。因此，通过遗传重组方法，可将PR8病毒6个内部基因和流行株的HA、NA基因的进行重组而获得一个新的重组病毒，该重组病毒具有与HA和NA基因供体毒株一致的抗原性，同时还具有PR8病毒的鸡胚高滴度生长特性。
它是以H7N2亚型禽流感病毒A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)和A/PR/8/34(H1N1)(PR8)共同接种鸡胚，应用PR8的抗血清对鸡胚培养物进行2轮抗体筛选后、继续在鸡胚上进行有限稀释克隆纯化3代获得的、经测序确证含有H7N2的表面基因HA和NA，同时拥有PR8的6个内部基因PB2，PB1，PA，NP，M及NS的重组病毒。该病毒鸡胚生长滴度比自然分离株H7N2提高10倍左右，是理想的H7N2亚型禽流感疫苗株。
本发明的具体实施方式：
实施例1：
一种人工重组的H7亚型流感病毒，其组成包括：H7亚型禽流感病毒A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)的HA和NA基因，所述的病毒上还重组有流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号CCTCC-V200415，保藏日2004年9月6日。
实施例2：
实施例1所述的人工重组的H7亚型流感病毒，HA和NA基因具有序列表SEQ ID No.4和SEQ ID No.6所述的序列，6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS具有序列表SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所述的序列(附后)，该病毒对我国流行的H7N2禽流感病毒具有特异免疫性，具有高滴度鸡胚适应性，对鸡及鸡胚无致病力。]
实施例3：
实施例1或2所述的人工重组的H7亚型流感病毒的制备方法，包括以下步骤：
a.共感染-使两个病毒基因组发生重组：流感病毒A/PR/8/34(PR8)(H1N1)与经紫外线处理过的H7N2亚型AIV国内分离株A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)共同接种10日龄鸡胚尿囊腔；
b.筛选-除去表面基因来源于PR8病毒的病毒：在上述特定的人工条件下收获的尿囊液，与倍比稀释的抗PR8的血清混合，室温下孵育之后接种鸡胚尿囊腔，收获后，对鸡胚尿囊液进行血凝活性检测，收获血清稀释度最低并且具有血凝活性的样品用于第二轮筛选；
c.稀释纯化-除去内部基因来源于H7N2病毒：同上方法筛选得到的病毒在鸡胚上进行3代有限克隆纯化，利用片段特异性引物RT-PCR鉴定并经过序列分析筛选HA和NA来自于H7N2、6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M及NS来自PR8的重组病毒。
实施例4：
上述的人工重组的H7亚型流感病毒，作为防制动物和人类H7亚型流感的疫苗株，应用于疫苗防制。
基因序列附后。
Figure G2004100438633D00061
Figure G2004100438633D00071
Figure G2004100438633D00091
Figure G2004100438633D00101
Figure G2004100438633D00121
Figure G2004100438633D00191
Figure G2004100438633D00261

Claims (2)

1.一株人工重组的H7亚型流感病毒，其组成包括：H7亚型禽流感病毒A/Chicken/HeBei/1/02(H7N2)的HA和NA基因，其特征是：所述的人工重组的H7亚型流感病毒还包括流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS，保藏号CCTCC-V200415。
2.一种权利要求1所述的人工重组的H7亚型流感病毒，在制备防治动物和人类H7亚型流感的疫苗方面的应用。
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CN101624580B (zh) * 2009-07-21 2011-11-23 华中农业大学 一种表达人工修饰合成的甲型h1n1流感病毒ha-na-m1基因的重组杆状病毒
CN104164408B (zh) * 2013-05-15 2016-12-28 普莱柯生物工程股份有限公司 抗鸡新城疫、传染性支气管炎和禽流感疫苗组合物及制备
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CN108913701B (zh) * 2018-08-13 2020-08-28 中国动物卫生与流行病学中心 一种提高h7n9亚型禽流感疫苗毒株增殖滴度的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1442485A (zh) * 2003-04-11 2003-09-17 中山大学 鉴定并发细菌感染对禽流感病毒感染致病性影响的方法及装置

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1442485A (zh) * 2003-04-11 2003-09-17 中山大学 鉴定并发细菌感染对禽流感病毒感染致病性影响的方法及装置

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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唐秀英.H7亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫原性评估.中国预防兽医学报26 1.2004,26(1),8-9.
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田国彬
陈化兰
马文军
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