CN1687049A - 穿心莲内酯磺化衍生物及其药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了具有抗菌、消炎、解热作用的11种穿心莲内酯磺化衍生物及含有它们的药物组合物，其疗效显著、化学性质稳定、水溶性好，质量标准明确可控，用于制备冻干粉针、注射液或口服制剂，治疗肺炎、支气管炎、扁桃体炎、细菌性痢疾等疾病。

Description

穿心莲内酯磺化衍生物及其药物组合物

技术领域

本发明涉及具有抗菌、消炎、解热作用的穿心莲内酯磺化衍生物及含有它们的药物组合物。

背景技术

穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees)为爵床科穿心莲属植物，别名一见喜、斩蛇草、苦草、橄榄莲，原产于印度，我国广东福建等地区也广泛栽培。化学和药理实验表明穿心莲的活性成分为以穿心莲内酯为代表的二萜类化合物及葡萄糖苷衍生物，穿心莲内酯结构为：

分子式：C₂₀H_mO₅，为无色方型或长方型结晶，m.p.230-232℃，[α]_D ²⁰-126°(c0.2，H₂O)。味极苦，可溶于甲醇、乙醇、丙醇、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚，难溶于水及石油醚。因穿心莲内酯不溶于水，给制备注射液带来了困难。目前，已有多种方法被用来转化穿心莲内酯成各种衍生物，以改善穿心莲内酯的水溶性。本申请发明人曾申请过“水溶性穿心莲内酯磺化工艺”(专利号ZL01131382.x.)，其中对穿心莲内酯磺化衍生物的结构认定是错误的，实际上穿心莲内酯磺化后生成的总磺化物是一混合物，因而难以制定质量标准，并影响到产品的质量控制。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何从“水溶性穿心莲内酯磺化工艺”(专利号ZL01131382.x.)中得到的混合物(即总磺化物)中，分离出穿心莲内酯磺化后生成的各种衍生物，即穿心莲内酯的各种磺化衍生物，鉴定其化学结构，研究并筛选出具有优良抗菌、消炎、解热作用的结构明确的穿心莲内酯磺化衍生物，包括由结构明确的穿心莲内酯磺化衍生物组成的混合物，以及含有它们与药学上可用载体的药物组合物。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案：

下述通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物：

                        通式(I)

通式(I)中R₁、R₂各自独立地选自-H、-SO₃H；R₃为羟基时，R₄为-ONa，或者R₃＝R₄＝-O-；

            通式(II)

通式(II)中R₁、R₂各自独立地选自-H、-SO₃H；R₃为R体的H或S体的H；R₄为S体的甲基。

所述通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物的混合物是指通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物可以任意组配，即选自通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物中的二种或二种以上，可达到11种。

前述通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物，其中

            通式(I)

             R1       R2         R3      R4

化合物₁     H        SO₃H     OH      ONa

化合物₂     SO₃H    H         OH      ONa

                                  R3＝R4

化合物₃     SO₃H    SO₃H       O

化合物₄     H        SO₃H       O

化合物₅     SO₃H    H           O

            通式(II)

             R1       R2        R3             R4

化合物6      H        H        

化合物7      H        SO₃H   

化合物8      SO₃H    H       

化合物9      H        H       

化合物10     H        SO₃H   

化合物11     SO₃H     H      

上述通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物，其中混合物是指选自通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物中的二种或二种以上混合物。其中较好的混合物是指选自化合物1、化合物4、化合物5、化合物8中的二种或二种以上混合物。

本发明通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与药学上可接受载体组成。

本发明通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与注射用水组成。

本发明通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与甘露醇冻干粉针辅料组成。

本发明通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与口服制剂辅料组成。

本发明提供新的穿心莲内酯磺化衍生物，同时提供含有它们的药物组合物在制备抗菌，消炎，解热，抗病毒药物中的应用。

本发明以穿心莲内酯为原料，采取磺化工艺，制备了一系列新的穿心莲内酯磺化衍生物，这些磺化物衍生物结构明确，具有良好的抗菌，消炎，解热，抗病毒活性，制成各类制剂后化学成份明确、质量可控、制剂稳定，对肺炎，支气管炎等上呼吸道感染有很好的治疗作用。与穿心莲内酯以及穿心莲内酯总磺化物相比，这些穿心莲内酯磺化衍生物单体水溶性好、纯度高，且质量可控。

本发明包括从穿心莲内酯总磺化物中分离得到上述十一种穿心莲内酯磺化衍生物，均为首次获得的新成分，具有良好的水溶性、稳定性，可制成各种制剂，尤其适用于制备静脉注射剂。十一种穿心莲内酯磺化衍生物均具有良好的抗菌、消炎、解热作用。

穿心莲内酯总磺化物的制备方法参见发明专利ZL01131382.x.穿心莲内酯磺化衍生物的分离、纯化方法：取穿心莲内酯总磺化物50g，加水50mL使完全溶解，过滤，样品液上预先处理好的D101型大孔树脂柱，依次用水、10％、20％、30％、40％、50％、80％、90％的乙醇进行梯度洗脱，初步分成六个段[F1(10％)，F2(20％)，F3(30％)，F4(40％-50％)，F5(80％)，F6(90％)]后上硅胶H、ODS(反相柱)及Sephadex LH-20(凝胶)柱等进行分离纯化，最终得到十一个化合物。F1段通过ODS柱，20％～25％的甲醇进行洗脱，得化合物1(穿心莲内酯19-硫酸酯，16-羧酸钠盐)和化合物2(穿心莲内酯3-硫酸酯，16-羧酸钠盐)；F2段通过ODS柱，用30％～40％的甲醇进行洗脱后得化合物3(3，19-二硫酸酯穿心莲内酯)和化合物5(3-硫酸酯穿心莲内酯)；F3段用氯仿-甲醇(6∶1)反复三次上硅胶H柱进行分离，经Sephadex LH-20进行纯化，得化合物4(19-硫酸酯穿心莲内酯)；F5和F6段用氯仿-甲醇(9∶1)反复三次进行硅胶柱层析，得化合物6(8(12)-环氧穿心莲内酯(8S，12S))和化合物9(8(12)-环氧穿心莲内酯(8S，12R))的混合物，再经过HPLC进行制备的化合物6和化合物9的纯品；F4段浓缩后反复用硅胶H柱分离三次，用氯仿-甲醇(6∶1～4∶1)进行洗脱，经Sephadex LH-20进行纯化，并结合HPLC制备型柱进行制备，最终得化合物7(8(12)-环氧，19-硫酸酯，穿心莲内酯(8S，12S))，化合物8(8(12)-环氧，3-硫酸酯，穿心莲内酯(8S，12S))，化合物10(8(12)-环氧，19-硫酸酯，穿心莲内酯(8S，12R))和化合物11(8(12)-环氧，3-硫酸酯，穿心莲内酯(8S，12R))。

具体实施方式

实施例1

用穿心莲内酯磺化工艺制备穿心莲内酯总磺化物(参见ZL0131382.x.)：。

穿心莲内酯的提取：

取穿心莲1000g，加入90％以上浓度的乙醇5000ml，冷浸，第一次72小时，第二次24小时，将冷浸液抽至回流罐中，按穿心莲叶投料量计算，加入15-18％活性炭，回流2小时；回流脱色后的液体过滤，滤液浓缩至尚有10％左右乙醇时放出，静止24小时结晶，将粗结晶用乙醇连续浸泡两次，每次时间不低于6小时，过滤，将结晶加入8倍量乙醇，加热溶解后，静止24小时过滤得白色结晶，将结晶真空干燥得穿心莲内酯。

穿心莲内酯的磺化：

取无水乙醇1000ml，置反应瓶中，缓缓滴加硫酸600ml，搅匀后，加入1000g穿心莲内酯，搅拌均匀，室温放置72小时。置水浴中加入乙醇1000ml，搅匀，调pH至7.0，加入乙醇，至含醇量达80％，静止24小时，加入少量活性炭，过滤，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥即得穿心莲内酯的总磺化物。

实施例2

化合物1、化合物2的分离、纯化

(高效硅胶板及硅胶H是青岛海洋化工厂生产；C18(ODS柱)为默克公司产品；所有试剂均为分析纯。下同。)

取穿心莲内酯总磺化物50g加水50ml溶解，过滤后上预先处理好的D101大孔树脂柱，依次用水、10％、20％、30％、40％、50％、80％、90％的乙醇进行梯度洗脱。

取D101大孔树脂柱的10％乙醇洗脱液，浓缩后上ODS柱，先用20％甲醇洗脱，再用25％甲醇洗脱。

20％甲醇洗脱液浓缩后用甲醇重结晶，过滤，结晶真空干燥(60℃)得化合物1。25％甲醇洗脱液浓缩后甲醇重结晶，过滤，结晶真空干燥(60℃)得化合物2。

化合物1的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，14，19-三羟基-8(9)，12(13)-赖百当二烯-16-羧酸钠，19-硫酸酯。

无色针晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₁O₈SNa，分子量：493.11；mp：230-232℃；[α]_D ²⁴-62.0(c 0.1，MeOH).

ESI-MS：493[M+Na]⁺

¹H-NMR(CD₃OD)δ：6.45(1H，dd.J＝4.8Hz，7.8Hz，H-12)，4.58(1H，dd，J＝4.8Hz.7.5Hz，H-14)，3.67(1H，dd，J＝11.1，7.7Hz，H-15)，3.50(1H，dd，J＝11.1，4.9Hz，H-15)，4.18(2H，q，J＝10.2Hz，H-19)，3.25(1H，dd，J＝11.1，5.1Hz，H-3)，3.0(1H，dd，J＝17.3，7.9Hz，H-11)，2.73(1H，dd，J＝17.3，4.9Hz，H-11)，1.54(3H，s，H-17)，1.19(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-20)

¹³C-NMR(CD₃OD)

δ：19.7(C-17)，20.5(C-20)，21.2(C-6)，23.4(C-18)，27.4(C-11)，28.6(C-2)，35.7(C-7)，36.7(C-1)，40.0(C-10)，43.5(C-4)，53.7(C-5)，67.3(C-15)，70.9(C-19)，72.0(C-14)，80.0(C-3)，129.2(C-8)，134.8(C-13)，139.6(C-9)，141.5(C-12)，175.9(C-16).

化合物2的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，14，19-三羟基-8(9)，12(13)-赖百当二烯-16-羧酸钠，3-硫酸酯无色针晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₁O₈SNa，分子量：493.11；mp：242-244℃；[α]_D ²⁴：-53.0(c 0.1，MeOH).

ESI-MS：493[M+Na]⁺

¹H-NMR(CD₃OD)δ：6.46(1H，dd，J＝4.8Hz，7.8Hz，H-12)，4.60(1H，dd，J＝2.8Hz，9.0Hz，H-14)，4.16(2H，q，J＝6Hz，H-19)，3.67(1H，dd，J＝11.1，7.7Hz，H-15)，3.50(1H，dd，J＝11.1，4.9Hz，H-15)，3.26(1H，dd，J＝11.1，4.6Hz，H-3)，3.0(1H，dd，J＝10.4，4.8Hz，H-11)，2.73(1H，dd，J＝10.4，2.8Hz，H-11)，1.54(3H，s，H-17)，1.20(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-20)；

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：19.7(C-17)，20.6(C-20)，21.2(C-6)，23.3(C-18)，27.4(C-11)，28.6(C-2)，35.7(C-7)，36.7(C-1)，39.9(C-10)，43.4(C-4)，54.0(C-5)，67.1(C-15)，70.8(C-19)，72.0(C-14)，88.1(C-3)，129.3(C-8)，134.6(C-13)，139.5(C-9)，141.5(C-12)，175.9(C-16).

实施例3

化合物3、化合物5的分离、纯化

取实施例2中D101大孔树脂柱20％的乙醇洗脱液，浓缩后上ODS柱，先用30％甲醇洗脱，再用35-40％甲醇洗脱。30％甲醇洗脱液浓缩后用甲醇重结晶，过滤，结晶真空干燥(60℃)得化合物3。

35-40％甲醇洗脱液浓缩后甲醇重结晶，过滤，结晶真空干燥(60℃)得化合物5。

化合物3的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，14，19-三羟基-8(9)，12(13)-赖百当二烯-15，16-内酯-19-硫酸酯。

无色针晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₁₁S₂，分子量：510；mp：251-253℃；[α]_D ²⁴：-27.0(c 0.1，MeOH).

IR_max ^KBrcm^-1：3437(OH)，1759，1669(C＝C-C＝O)，1630，1637(C＝C)，1293，1254，1204，1068，995，972，436，418；

ESI-MS：511[M+H]⁺，350[M-SO₃H]⁺，430[M-SO₃H-SO₃H]⁺；

¹H-NMR(CD₃OD)δ：6.74(1H，m，H-12)，5.07(1H，dd，J＝1.4Hz，4.5Hz，H-14)，4.49(1H，dd，J＝10.2，6.2Hz，H-15)，4.15(1H，dd，J＝10.2，2.3Hz，H-15)，4.36(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.05(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.0(1H，dd，J＝12.2，4.4Hz，H-3)，3.27(1H，dd，J＝17.7Hz，4.9Hz，H-11)，3.12(1H，dd，J＝17.7，5.0Hz，H-11)，1.62(3H，s，H-17)，1.27(3H，s，H-18)，1.17(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)

δ：19.8(C-17)，20.2(C-20)，21.8(C-6)，23.6(C-18)，25.8(C-2)，29.2(C-11)，35.8(C-7)，36.6(C-1)，40.0(C-10)，43.0(C-4)，54.0(C-5)，66.8(C-14)，71.0(C-19)，76.0(C-15)，86.8(C-3)，129.1(C-13)，130.5(C-8)，138.0(C-9)，149.5(C-12)，172.7(C-16)

化合物5的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，14，19-三羟基-8(9)，12(13)-赖百当二烯-15，16-内酯-3-硫酸酯。

无色针晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₈S，分子量：430；mp：159-161℃；[α]_D ²⁴：-36.0(c 0.1，MeOH).

IR_max ^KBrcm^-1：3414(OH)，1749，1670(C＝C-C＝O)，1470，1427(C＝C)，1254，1230，1218，1197，1060，1033，966，981，，922，832，582；

ESI-MS：429[M-H]⁺，349[M-SO₃H]⁺，412[M-H₂O]⁺；

¹H-NMR(CD₃OD)δ：6.72(1H，m，H-12)，5.06(1H，dd，J＝1.4Hz，4.5Hz，H-14)，4.49(1H，dd，J＝10.2，62Hz，H-15)，4.15(1H，dd，J＝10.2，2.3Hz，H-15)，4.36(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.05(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.04(1H，dd，J＝1.8，4.4Hz，H-3)，3.26(1H，dd，J＝17.6Hz，5.2Hz，H-11)，3.10(1H，dd，J＝17.6，5.0Hz，H-11)，1.61(3H，s，H-17)，1.22(3H，s，H-18)，1.03(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：19.8(C-17)，20.6(C-20)，20.7(C-6)，23.1(C-18)，25.7(C-2)，29.0(C-11)，35.4(C-7)，36.3(C-1)，39.8(C-10)，44.3(C-4)，53.9(C-5)，64.1(C-14)，66.9(C-19)，76.0(C-15)，87.9(C-3)，129.2(C-13)，130.4(C-8)，137.9(C-9)，149.3(C-12)，172.6(C-16).

实施例4

化合物4的分离、纯化

取实施例2中D101大孔树脂柱30％的乙醇洗脱液，浓缩后反复三次上硅胶H柱进行分离，洗脱溶剂均为氯仿-甲醇(6∶1)，再经Sephadex LH-20进行纯化，甲醇重结晶得化合物4。

化合物4的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，14，19-三羟基-8(9)，12(13)-赖百当二烯-15，16-内酯-19-硫酸酯。

类白色或淡黄色粉末，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₈S，分子量：430；mp：166-168℃；[α]_D ²⁴：-48.0(c 0.1，MeOH).

UVλ_max ^MeOH nm：227；

IR_max ^KBrcm^-1：3431(OH)，1734，1636(C＝C-C＝O)，1541，1457(C＝C)，1214，1070，983；436，418；

ESI-MS：429[M-H]⁺，349[M-SO₃H]⁺，412[M-H₂O]⁺；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：6.74(1H，m，H-12)，5.06(1H，d，J＝4.8Hz，H-14)，4.48(1H，dd，J＝10.2，6.2Hz，H-15)，4.15(1H，dd，J＝10.2，2.3Hz，H-15)，3.20(1H，dd，J＝17.6，5.0Hz，H-11)，3.08(1H，dd，J＝17.6，5.2Hz，H-11)，1.60(3H，s，H-17)，1.14(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)

δ：19.9(C-17)，20.5(C-20)，21.2(C-6)，23.4(C-18)，28.6(C-2)，29.1(C-11)，35.7(C-7)，36.8(C-1)，40.0(C-10)，43.5(C-4)，53.6(C-5)，66.9(C-14)，71.0(C-19)，76.1(C-1 5)，79.8(C-3)，129.2(C-13)，130.5(C-8)，138.1(C-9)，149.6(C-12)，172.7(C-16).

实施例5

化合物6、化合物9的分离、纯化

取实施例2中D101大孔树脂柱80％～90％的乙醇洗脱液，浓缩后用氯仿-甲醇(9∶1)作洗脱溶剂，反复三次进行硅胶柱层析，洗脱液再经HPLC进行制备，色谱条件为：色谱柱：phe-nomenex C18-ODS(250mm×10.0mm 5μm)；流动相为：甲醇∶水(30∶70)，流速：2ml/min时，制备得化合物6；流动相为：甲醇∶水(45∶55)，流速：2ml/min时，制备得化合物9。

化合物6的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，19-二羟基-8(12)环氧-13(14)-赖百当烯-15，16-内酯。

无色针晶，易溶于甲醇、丙酮，微溶于氯仿，不溶于乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₅，分子量：350.1；mp：210-212℃；[α]_D ²⁴：-16.4(c 0.1，MeOH).

IR_max ^KBrcm^-1：3489，3425cm^-1(OH)，1758，1650cm^-1，(C＝C-C＝O)，1450，1380(C＝C)，1223，1196，1083，1031，1019，988，963，846；

ESI-MS：349[M-H]⁺，301[M-CH₂OH-H₂O]⁺，257[M-H₂O-CH₂OH-CO₂]⁺；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：7.43(1H，t，J＝1.5Hz，H-14)，4.85(2H，m，H-15)，4.80(1H，t，J＝6.7Hz，H-12)，4.03(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.46(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.21(1H，dd，J＝4.7，11.9Hz，H-3)，2.18(1H，dd，J＝11.3，12.2Hz，H-11)，1.64(1H，t，J＝10.2Hz，H-11)，1.20(3H，s，H-18)，

1.19(3H，s，H-17)，0.90(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：39.1(C-1)，28.3(C-2)，81.2(C-3)，43.7(C-4)，57.7(C-5)，22.0(C-6)，41.1(C-7)，83.3(C-8)，59.4(C-9)，37.0(C-10)，29.7(C-1 1)，72.0(C-12)，137.1(C-13)，148.4(C-14)，72.4(C-15)，174.8(C-16)，21.8(C-17)，23.5(C-18)，65.0(C-19)，15.9(C-20).

化合物9的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，19-二羟基-8(12)环氧-13(14)-赖百当烯-15，16-内酯

为白色粉末，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₈S，分子量：430；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：7.46(1H，m，H-14)，4.86(2H，m，H-15)，4.60(1H，m，H-12)，3.80(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，3.60(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，4.03(1H，m，H-3)，1.22(3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：40.3(C-1)，25.1(C-2)，87.9(C-3)，44.3(C-4)，54.3(C-5)，37.2(C-6)，19.8(C-7)，84.3(C-8)，58.0(C-9)，36.8(C-10)，33.8(C-11)，72.3(C-12)，138.4(C-13)，147.0(C-14)，74.2(C-15)，175.0(C-16)，31.9(C-17)，23.4(C-18)，64.0(C-19)，16.6(C-20).

实施例6

化合物7、化合物8的分离、纯化

取实施例2中D101大孔树脂柱的40％～50％的乙醇洗脱液，浓缩后反复三次上硅胶H柱，每次均用氯仿-甲醇(6∶1～4∶1)进行梯度洗脱，经Sephadex LH-20进行纯化，得化合物7，8的混合物，再经HPLC进行制备，色谱条件：色谱柱：Waters Novapak C18(40mm×150mm.6μm)，流动相为甲醇∶水∶磷酸(30∶70∶0.2)时，得化合物7；流动相为甲醇∶水∶磷酸(40∶60∶0.2)时，得化合物8.

化合物7的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，19-二羟基-8(12)环氧-13(14)-赖百当烯-15，16-内酯-19硫酸酯。

无色针晶，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚

分子式：C₂₀H₃₀O₈S，分子量：430；mp：255-257℃；[α]_D ²⁴：-18.4(c 0.1，MeOH).

ESI-MS：429[M-H]⁺，301[M-CH₂OH-H₂O-SO₃H]⁺；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：7.43(1H，t，J＝1.5Hz，H-14)，4.85(2H，m，H-15)，4.83(1H，m，H-12)，4.20(1H，d，J＝10.2Hz，H-19)，4.15(1H，d，J＝10.2Hz，H-19)，3.21(1H，dd，J＝4.7，11.9Hz，H-3)，1.22(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：39.5(C-1)，27.9(C-2)，80.0(C-3)，43.5(C-4)，57.9(C-5)，23.0(C-6)，41.4(C-7)，83.5(C-8)，59.5(C-9)，37.1(C-10)，29.7(C-11)，71.9(C-12)，137.2(C-13)，148.5(C-14)，72.4(C-15)，174.9(C-16)，21.6(C-17)，23.3(C-18)，71.0(C-19)，15.5(C-20).

化合物8的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，19-二羟基-8(12)环氧-13(14)-赖百当烯-15，16-内酯-3硫酸酯。

为白色粉末，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₈S，分子量：430；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：7.43(1H，m，H-14)，4.86(2H，m，H-15)，4.56(1H，m，H-12)，4.03(1H，m，H-19)，3.60(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，4.56(1H，m，H-3)，1.20(3H，s，H-18)，1.19(3H，s，H-17)，0.93(3H，s，H-20)¹³C-NMR(CD₃OD)δ：39.1(C-1)，25.1(C-2)，88.2(C-3)，44.3(C-4)，58.1(C-5)，23.2(C-6)，41.1(C-7)，83.2(C-8)，59.1(C-9)，36.8(C-10)，29.7(C-11)，71.9(C-12)，137.2(C-13)，148.4(C-14)，72.4(C-15)，174.8(C-16)，21.6(C-17)，23.4(C-18)，64.0(C-19)，15.3(C-20).

实施例7

化合物10、化合物11的分离、纯化

取实施例中D101大孔树脂柱的40％～50％的乙醇洗脱液，浓缩后反复三次上硅胶H柱，用氯仿-甲醇(6∶1～4∶1)进行梯度洗脱，洗脱液经HPLC制备型柱进行纯化，色谱条件：色谱柱Waters Novapak C18(40mm×150mm.6μm)，先用流动相为水∶乙腈∶0.05M磷酸(58∶12∶30)；再用流动相为水∶乙腈∶0.05M磷酸(30∶40∶30)。

流动相为水∶乙腈∶0.05M磷酸(58∶12∶30)时，得化合物10；流动相为水∶乙腈∶0.05M磷酸(30∶40∶30)时，得化合物11。

化合物10的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，19-二羟基-8(12)环氧-13(14)-赖百当烯-15，16-内酯。

无色针晶，易溶于甲醇、丙酮，微溶于氯仿，不溶于乙醚和石油醚。

分子式：C₂₀H₃₀O₅，分子量：350.1；mp：210-212℃；[α]_D ²¹：-21.4(c 0.1，MeOH).

IR_max ^KBrcm^-1：3489，3425cm^-1(OH)，1758，1650cm^-1，(C＝C-C＝O)，1450，1380(C＝C)，1223，1196，1083，1031，1019，988，963，846；

ESI-MS：349[M-H]⁺，305[M-CO₂-H]⁺；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：7.46(1H，m，H-14)，4.85(2H，m，H-15)，4.66(1H，m，H-12)，4.05(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.46(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.35(1H，dd，J＝4.9，11.6Hz，H-3)，2.37(1H，dd，J＝13.2，6.8Hz，H-11)，2.07(1H，td，J＝10.2Hz，H-11)，1.22(3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20).

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：40.4(C-1)，28.4(C-2)，81.5(C-3)，43.5(C-4)，53.7(C-5)，37.2(C-6)，19.5(C-7)，84.4(C-8)，59.6(C-9)，36.9(C-10)，33.9(C-1 1)，74.3(C-12)，138.5(C-13)，146.5(C-14)，72.4(C-15)，175.0(C-16)，32.0(C-17)，23.5(C-18)，65.2(C-19)，17.0(C-20).

化合物11的理化性质和波谱数据

化学中文名称：3，19-二羟基-8(12)环氧-13(14)-赖百当烯-15，16-内酯。

无色针晶，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚

分子式：C₂₀H₃₀O₈S，分子量：430；mp：255-257℃；[α]_D ²¹：-18.4(c 0.1，MeOH).

IR_max ^KBrcm^-1：3489，3425cm^-1(OH)，1758，1650cm^-1，(C＝C-C＝O)；

ESI-MS：429[M-H]⁺，301[M-CH₂OH-H₂O-SO₃H]⁺，；

¹H-NMR(CD₃OD)

δ：7.41(1H，m，H-14)，4.84(2H，m，H-15)，4.64(1H，m，H-12)，4.28(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，3.14(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，3.24(1H，dd，J＝4.7，11.6Hz，H-3)，2.39(1H，dd，J＝13.2，6.8Hz，H-11)，2.07(1H，td，J＝10.2Hz，H-11)，1.20(3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20)；

¹³C-NMR(CD₃OD)δ：40.4(C-1)，28.4(C-2)，81.5(C-3)，43.5(C-4)，53.7(C-5)，37.2(C-6)，19.5(C-7)，84.4(C-8)，59.6(C-9)，36.9(C-10)，33.9(C-11)，74.3(C-12)，138.5(C-13)，146.5(C-14)，72.4(C-15)，175.0(C-16)，32.0(C-17)，23.5(C-18)，65.2(C-19)，17.0(C-20)..

实施例8

一、动物急性毒性试验

1.试验目的：测定化合物1、2、3、4、5、7、8、化合物4与化合物5的组合物经静脉一次给药小鼠的急性反应和死亡情况。

2.试验材料：

2.1试验药物

化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8、化合物4与化合物5的组合物，浓度均为0.1g/ml，由江西青峰药业有限公司提供。批号：20030806。

2.2受试动物

ICR小鼠，体重18-20g，雌雄各半，由江西青峰药业有限公司实验动物中心供给。实验动物使用许可证号：SKYX(赣)2003-0001

3.试验条件：

给药前后，实验小鼠雌雄分笼，全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20±2℃、湿度：45％-65％。

4.试验方法及结果：

4.1方法：取ICR小鼠180只，体重18-20g，雌雄各半。随机均分为9组，每组20只。对照组：0.9％氯化钠注射液。样品组：100mg/ml的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8、化合物4与化合物5的组合物。样品组分别一次给小鼠尾静脉注射25ml/kg，对照组给予等量的09％氯化钠注射液。连续观察两周，记录受试小鼠行为、活动、摄食量、体重、粪便、死亡等情况，未死亡小鼠于两周后处死进行尸检。

4.2试验结果：

组别	给药容积(ml/kg)	动物数(只)	死亡动物数(只)	最大给药量(mg/kg)	相当于临床用药倍数
						对照组	25.0	20	0	/	/
样品组
						化合物1	25.0	20	0	2500	600
化合物2	25.0	20	0	2500	600
						化合物3	25.0	20	0	2500	600
化合物4	25.0	20	0	2500	600
						化合物5	25.0	20	0	2500	600
化合物7	25.0	20	0	2500	600
						化合物8	25.0	20	0	2500	600
化合物与化合物5组合物	25.0	20	0	2500	600
						100mg/ml×25ml/kg                 (2500mg/kg+250mg/60kg)

按2500mg/kg(100mg/ml×25ml/kg)剂量静脉一次给药的20只小鼠，当天见小鼠毛色光滑、活动、摄食、粪便色泽与质地正常，与对照组比较无明显差异；且两周内无死亡及其它异常现象发生，两组同时处死后进行尸检，各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)经肉眼观察未见异常改变，与对照组比较无明显差异。

4.3试验结论：

经静脉一次给药的最大给药量试验结果表明：160只小鼠给药后均无明显的毒性反应，两周内亦无死亡。因此，化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8、化合物4与化合物5组合物，一次经静脉给药的小鼠最大给药量为2500mg/kg，按临床成人每日用量250mg/60kg计算，则相当于临床成人用量的600倍。

二、药效学研究

1.材料

1.1药物：化合物1、化合物4、化合物5、化合物8、化合物4与化合物5的组合物，由江西青峰药业有限公司提供，批号：20030816，高剂量：300mg/kg，中剂量：150mg/kg，低剂量：75mg/kg，每次均新鲜配制。

注射用炎琥宁(14-脱羟-11.12-二脱氢穿心莲内酯-3.9-二琥珀酸半酯钾钠盐)，重庆药友制药有限责任公司，批号：20030509。

1.2动物：小鼠，体重22-25g；Wistar大鼠，体重150-200g；家兔2.5-3.0kg，均雌雄兼用，由江西青峰药业有限公司实验动物中心提供。动物使用许可证：SKYX(赣)2003-0001。

1.3试剂：内毒素10EU/支，中国药品生物制品检定所；2.4-二硝基苯酚，上海化学试剂厂，批号：20030312；营养琼脂，中国药品生物制品检定所。

1.4菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌，均由江西医学院提供。

1.5试验环境：温度：25±3℃，湿度：45-65％。

2.实验方法及结论

2.1解热作用

2.1.1对内毒素致家兔发热的影响

实验前2天每日测家兔体温1次，挑选体温在38.0-39.5℃，且自身体温变化小于0.3℃的家兔85只，2.5-3.0kg，雌雄各半，随机分为17组，每组5只，一组于家兔左耳组织缘静脉注射生理盐水，二组于家兔左耳缘静脉注射炎琥宁150mg/kg，三至十七组分别于家兔左耳静脉注射化合物1、化合物4、化合物5、化合物8及化合物4与化合物5的组合物，高剂量：300mg/kg，中剂量：150mg/kg，低剂量：75mg/kg，各组注射容积均为5ml/kg。于给药前测量一次体温作零日时基础体温，给药后立即于家兔右耳缘静脉注射内毒素200EU/kg，测量给药后1h、2h、3h、4h、6h时的体温。(见下表)

体温升高(℃)

	剂量	1h	2h	3h	4h	6h
							生理盐水对照组	/	1.58±0.18	1.72±0.22	1.68±0.16	1.28±0.15	0.88±0.16
注射用炎琥宁	150	0.72±0.16	1.10±0.22	1.52±0.24	1.25±0.28	1.23±0.23
							化合物1	300	0.18±0.12	0.22±0.15	0.20±0.14	0.16±0.11	0.15±0.12
150	0.58±0.21	0.62±0.18	0.52±0.23	0.48±0.13	0.42±0.11
						75		1.23±0.25	1.25±0.26	0.95±0.19	0.82±0.20	0.52±0.15
化合物4	300	0.23±0.15	0.31±0.13	0.46±0.17	0.69±0.16								0.51±0.13
						150	0.62±0.22	0.68±0.19	0.46±0.12	0.36±0.13	0.32±0.11
	75	1.18±0.23	1.25±0.26	0.86±0.22	0.68±0.20							0.43±0.12
						化合物5	300	0.32±0.18	0.45±0.22	0.58±0.25	0.39±0.20		0.30±0.16
150	0.68±0.23	0.79±0.22	0.86±0.17	0.48±0.19	0.36±0.18
							75	1.16±0.23	1.28±0.27	0.88±0.22	0.62±0.19	0.48±0.13
化合物8	300	0.26±0.16	0.48±0.21	0.62±0.22	0.72±0.19								0.38±0.12
						150	0.57±0.22	0.66±0.18	0.71±0.22	0.49±0.14	0.45±0.12
	75	1.12±0.25	1.15±0.26	0.78±0.24	0.46±0.16							0.38±0.15
						化合物4与化合物5的组合物	300	0.25±0.17	0.46±0.21	0.64±0.22	0.49±0.18		0.36±0.16
150	0.63±0.23	0.76±0.19	0.78±0.21	0.52±0.17	0.49±0.16
							75	1.21±0.26	1.32±0.28	0.88±0.24	0.76±0.16	0.58±0.17

2.1 2结果显示：化合物1、化合物4、化中物5、化合物8、化合物4与化合物5的组合物300mg/kg及150mg/kg，对内毒素所致的家兔发热均有良好的解热作用，75mg/kg对解热作用不明显。

2.2抗炎作用

2.2.1对蛋清致大鼠足肿的影响

大鼠85只，180-210g，雌雄各半，随机分为17组，每组5只，一组静脉注射生理盐水，二组静脉注射炎琥宁200mg/kg，三、四、五组分别静脉注射化合物1，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，六、七、八组分别静脉注射化合物4，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，九、十、十一组分别静脉注射化合物5，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，十二、十三、十四分别静脉注射化合物8，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，十五、十六、十七组分别静脉注射化合物4与化合物5的组合物，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，各组注射容积均为0.1ml/10g。给药前用记号笔标记大鼠右踝关节浸水边界，排水容积法测量1次致炎前大鼠右足排水容积，给药后立即于大鼠右后脚掌SC新鲜蛋清0.1ml/只。测量给药后1h、2h、3h、5h时的大鼠足排水容积。(见下表)

组别	剂量(mg/kg)	排水容积
						1h	2h	3h	5h
		生理盐水对照组	/	0.75±0.20	0.78±0.15					0.58±0.09	0.36±0.08
注射用炎琥宁	200					0.56±0.11	0.59±0.08	0.42±0.07	0.33±0.05
		化合物1	400	0.25±0.08	0.27±0.06					0.23±0.07	0.15±0.05
200	0.55±0.07					0.55±0.07	0.43±0.04	0.30±0.07
			100	0.76±0.13	0.72±0.13				0.56±0.08	0.36±0.05
化合物4	400					0.28±0.07	0.29±0.06	0.23±0.07			0.16±0.05
		200	0.53±0.07	0.54±0.07	0.46±0.04				0.32±0.07
	100					0.78±0.14	0.75±0.13	0.58±0.08		0.39±0.05
		化合物5	400	0.26±0.08	0.28±0.07				0.23±0.07		0.16±0.05
200	0.60±0.06					0.65±0.08	0.53±0.06	0.48±0.05
			100	0.86±0.12	0.82±0.13				0.63±0.07	0.43±0.04
化合物8	400					0.23±0.07	0.25±0.08	0.22±0.07			0.18±0.06
		200	0.57±0.07	0.54±0.07	0.41±0.06				0.36±0.05
	100					0.72±0.12	0.73±0.12	0.63±0.07		0.42±0.04
		化合物4与化合物5的组合物	400	0.24±0.07	0.26±0.08				0.23±0.07		0.19±0.06
200	0.55±0.07					0.53±0.07	0.48±0.06	0.42±0.04
			100	0.73±0.12	0.75±0.12				0.64±0.07	0.48±0.05

2.2.2结论：化合物1、化合物4、化合物5、化合物8以及化合物4与化合物5的组合物有良好的抗炎作用。

2.3抗菌试验：

2.3.1体外抑菌试验：

用生理盐水将化合物1、化合物4、化合物5、化合物8、化合物4与化合物5的组合物配成2％的注射液，微孔滤膜过滤除菌后作初始浓度，再用注射用生理盐水减半稀释至1/2、1/4、1/8、1/6、1/32浓度。用注射用生理盐水将注射用炎琥宁配制成2％注射液，过滤除菌后作初始浓度，再用生理盐水减半稀释至1/2、1/4、1/8、1/16、1/32浓度，分别吸取1ml于无菌试管内，加入9ml营养琼脂，摇匀，接种细菌后于37℃恒温培养箱内培养24h观察。

	1/4	+	+	+
					1/8	+	+	+
	1/16	+	+	+
					1/32	+	+	+
	化合物4与化合物5组合物	1/1	-	-					-
1/2					-	-	-
		1/4	+	+				+
1/8					+	+	+
		1/16	+	+				+
1/32					+	+	+

2.3.2结果：化合物1、化合物4、化合物5、化合物8、化合物4与化合物5的组合物均有较强的抗菌作用。

实施例9

化合物1-11的稳定性试验

1、仪器与试剂

仪器TV-1800SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

试剂均为分析纯；样品由江西青峰药业有限公司提供。

2、恒温加速试验法：将化合物1-11样品放置在37-40℃恒温加速实验箱内，在0个月、1个月、2个月、3个月、6个月间隔时间取样，按下述方法测定含量。

3、测定方法

3.1对照品(化合物1-11，纯度均在99％以上)溶液的配制：精密称取在105℃干燥至恒重的对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液。

3.2样品(化合物1-11)溶液的配制：精密称取样品50mg，置50ml容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度、摇匀。

3.3测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置于10ml量瓶中，置20℃水浴中，精密加入2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液2ml摇匀，再精密加入氢氧化钾溶液(1.22g→100ml)2ml，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，放置5分钟，以相应的试剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)在540nm的波长处分别测定吸收度，计算。

恒温加速试验结果

结论：经6个月的恒温加速试验证明：化合物1-11化学性质稳定。

实施例10

称取化合物4.25g，用注射用水约800ml溶解，加0.1％活性炭搅拌10分钟，滤过，加注射用水至1000ml，滤过，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至4.5-6.5，灌封(小容量注射剂，规格为2ml/支、5ml/支、10ml/支)，100℃，30分钟灭菌，澄明度检查、包装、即得。

用法用量：肌内注射：成人一次50-100mg，一日2-3次，小儿酌减或遵医嘱。静脉滴注：一日250-500mg，加入5％葡萄糖注射液或氯化钠注射液250-500ml中滴注；小儿酌减或遵医嘱。

实施例11

称取化合物4、化合物5，各1g，用葡萄糖等渗溶液约800ml溶解，加0.1％活性炭搅拌10分钟，滤过，加葡萄糖等渗溶液至1000ml，滤过，用10％氢氧化钠溶解调节pH值至4.5-6.5，灌封(大容量注射液，规格为50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)100℃，30分钟灭菌，澄明度检查、包装、即得。

用法用量：静脉滴注：一日250-500mg。小儿酌减或遵医嘱。

实施例12

称取化合物4.25g，加注射用水600ml，搅拌溶解，加入25g甘露醇，搅拌溶解后，加注射用水至1000ml，混匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，所得溶液分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，盖塞，放入冻干机中，按照设计的冻干曲线进行冷冻干燥，得化合物4冻干粉针(每支50mg)。

用法用量：肌内注射：成人一次50-100mg，一日2-3次，小儿酌减或遵医嘱，静脉滴注：一日250-500mg，加入5％葡萄糖注射液或氯化钠注射液250-500ml中滴注，小儿酌减或遵医嘱。

实施例13

称取化合物4.25g，用注射用水约800ml溶解，加0.1％活性炭搅拌10分钟，滤过，加注射用水至1000ml，滤过，加入蔗糖200g搅拌溶解后，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至4.5-6.5，滤过，滤液灌装于10ml玻瓶中，100℃，30分钟灭菌，澄明度检查、包装、即得。

用法用量：口服：一次1支，一日三次。

Claims (9)

1、下述通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物：

通式(I)

通式(I)中R₁、R₂各自独立地选自-H、-SO₃H；R₃为羟基时，R₄为-ONa，或者R₃＝R₄＝-O-；

通式(II)

通式(II)中R₁、R₂各自独立地选自-H、-SO₃H；R₃为R体的H或S体的H；R₄为S体的甲基。

2、权利要求1通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物，其中

                    通式(I)

         R1        R2        R3       R4

化合物1  H         SO₃H     OH       ONa

化合物2  SO₃H     H         OH       ONa

                                 R3＝R4

化合物3  SO₃H     SO₃H         O

化合物4  H         SO₃H         O

化合物5  SO₃H     H             O

通式(II)

         R1        R2        R3                                                R4

化合物6  H         H         

                                    

化合物7  H         SO₃H     

                                      

化合物8  SO₃H     H         

                                      

化合物9  H         H                                                

化合物10 H         SO₃H     

                                      

化合物11 SO₃H     H         

                                      

3、权利要求1的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物，所述混合物是指通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物可以任意组配。

4、权利要求2的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物，所述混合物是指选自通式(I)、(II)表示的穿心莲内酯磺化衍生物中的二种或二种以上混合物。

5、权利要求4的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物，所述混合物是指选自化合物1、化合物4、化合物5、化合物8中的二种或二种以上混合物。

6、含权利要求1的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与药学上可接受载体组成。

7、权利要求6的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与注射用水组成。

8、权利要求6的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与甘露醇冻干粉针辅料组成。

9、权利要求6的通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物的药物组合物，主要由通式(I)、(II)穿心莲内酯磺化衍生物或其混合物与口服制剂辅料组成。