CN1684976A - 乳酸菌产生的抗菌性物质 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可用于食品保存等的具有由Ile－Thr－Ser－Ile－Ser－Leu－Cys－Thr－Pro－Gly－Cys－Lys－Thr－Gly－Val－Leu－Met－Gly－Cys－Asn－Leu－Lys－Thr－Ala－Thr－Cys－Asn－Cys－Ser－Val－His－Val－Ser－Lys的氨基酸序列构成的一级结构的新型抗菌性肽(细菌素)。其由新型乳酸乳球菌菌株61－14(FERM BP－08492)产生。

Description

乳酸菌产生的抗菌性物质
技术领域
本发明属于可用于食品保鲜等的抗菌性物质的技术领域，尤其是关于新型乳酸菌株和利用该菌株产生的新型抗菌性肽。
背景技术
作为乳酸菌产生的抗菌性物质，乳酸等有机酸、过氧化氢、二乙酰等小分子已为人们知道。其他，还知道存在有由肽构成的抗菌性物质，例如可举出，乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)产生的乳链菌素(Nisin)A(J.Am.Chem.Soc.1971 Sep 8；93(18)：4634-5)、乳链菌素Z(Eur.J.Biochem.1991 Nov 1；201(3)：581-4)等。但是，乳链菌素类仅限于乳链菌素A、Z被报道在自然界存在。
将乳酸菌产生的抗菌性物质用于防止食品变质或腐败，从无损品质地保存食品、提供安全食品的观点看，是重要的技术。这种抗菌性物质可以说是在和耐受菌作战。即，针对对应于食品种类的多样化而出现的广泛的菌种，可有效抑制其繁殖的新的抗菌性物质的开发一直为人们所寻求。
本发明的目的在于，提供不同于以往所知的抗菌剂的抗菌图谱(对增殖抑制对象的多个菌种的抗菌力的差异)、可用于食品保鲜等的新的抗菌性物质。
发明内容
本发明人着眼于乳酸菌产生的抗菌性物质进行了大量研究，其结果是，发现了属于芽孢杆菌(Bacillus)属、微球菌(Micrococcus)属、李斯特式菌(Listeria)属、片球菌(Pediococcus)属、肠球菌(Enterococcus)属、乳球菌(Lactococcus)属、乳酸杆菌(Lactobacillus)属、明串珠球菌(Leuconostoc)属的，可产生对导致食品劣化的微生物具有抗菌性(即，具有抑制感受性革兰氏阳性菌的活性)的物质的新的乳酸菌株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)，并对该抗菌性物质(肽)进行了精制、鉴定，阐明了其一级结构，并推定了高级结构，从而完成本发明。
因此，本发明提供了具有由下述氨基酸序列(序列1)构成的一级结构的抗菌性肽：
1               5                   10                  15
Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu
            20                  25                  30
Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr Cys Asn Cys Ser Val His Val
    34
Ser Lys
进而，根据本发明，提供了作为上述抗菌性肽的前体肽的由下述氨基酸序列(序列2)构成的肽：
            -20                 -15                 -10
Met Ser Thr Lys Asp Phe Asn Leu Asp Leu Val Ser Val Ser Lys Thr
         -5             -1  1               5
Asp Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro
10                  15                  20                  25
Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr
                30
Cys Asn Cys Ser Val His Val Ser Lys
此外，根据本发明，提供了编码上述各肽的DNA。尤其作为优选的编码上述前体肽的DNA的例子是由下述核苷酸序列(序列4)构成的DNA：
atg agt aca aaa gat ttc aac tta gat ttg gta tct gtt tca aaa aca gat tct ggc gct 60
tca aca cgt att acc agc att tcg ctt tgt aca cca ggt tgt aaa aca ggt gtt ctg atg 120
gga tgt aac ctg aaa aca gca act tgt aat tgt agc gtt cac gta agc aaa taa 174
进而，根据本发明，提供了产生上述抗菌性肽的乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)新型菌株，即，61-14菌株(FERM BP-08492)。
本发明，进而提供含有上述抗菌性肽作为有效成份的食品保存剂。
附图说明
图1将本发明的抗菌性肽(乳链菌素Q)的一级氨基酸序列和以往所知的乳链菌素Z的一级氨基酸序列进行比较显示。
图2显示用于调查本发明的抗菌性肽(乳链菌素Q)作为食品保存剂的可利用性而进行的实验结果的一个例子。
具体实施方式
由本发明得到的抗菌性物质是由从河水中新分离得到的乳酸乳球菌生产的新型多肽(细菌素(bacteriocin))，可以认为是由不同于以往所知的乳链菌素A或乳链菌素Z的氨基酸序列构成的新型的乳链菌素类。
以下，通过新型菌株的分离及其特性分析、由该菌株产生抗菌性肽及编码该肽的DNA序列的测定、以及对食品的保存性试验等，详细说明本发明的
实施方式。
(1)乳酸菌的分离方法
为研究乳酸菌的天然野生菌株，以各种河流水为分离源，在GYP白垩琼脂培养基中进行混合稀释平板培养。接着，进行以抗菌活性为指标的筛选。即，在MRS培养基上使菌落繁殖后，以枯草杆菌(Bacillus subtilis)IAM12118覆盖上层，分离出观察到上层繁殖被抑制而产生抗菌带的菌株。
(2)分离菌株的性质分析
筛选结果是，发现具有优异抗菌活性的菌株。该菌株是从福冈县田川市的彦山川流域、在东大桥收集到的河水中分离得到的。进行研究了革兰氏染色、过氧化氢酶试验、运动性试验、细胞形态观察、糖类发酵试验、乳酸产生量、产生的乳酸旋光性、葡萄糖的气体产生试验。菌株的特性是，兼性厌氧性、革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、无运动性、细胞的形态为椭圆形、L乳酸产生菌、同型发酵菌。此外，还具有D-木糖营养性、乳糖营养性、蔗糖营养性。含有它们的59种糖营养性试验(API系统)的结果是，鉴定为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)，并命名为61-14菌株。该61-14菌株目前保藏在特许生物保藏中心，保藏号为FERM BP-08492)(FERM P-18994：原保藏日2002年9月4日)。
(3)抗菌性试验
为探讨61-14菌株是否在液体培养基中产生抗菌性物质，在MRS液体培养基中培养16小时后，离心分离，回收上清，并将其PH调整为6后，过滤灭菌。进行2倍梯度稀释，用于试验。将梯度稀释液10μl置于已接种指标菌的琼脂培养基上。抗菌活性，若将观察到明显抗菌圈的倍率作为X时，为X×1000/10(A.U./ml)。将试验结果与乳链菌素Z的情况进行比较，示于表1。如表1所示，61-14菌株所产生的抗菌性物质的抗菌活性的类型明显不同于乳链菌素Z。此外，根据本发明，此处将61-14菌株(FERM BP-08492)所产生的抗菌性物质(抗菌性肽)称为乳链菌素Q。
                              表1抗菌活性测定
指标菌  乳链菌素Q(A.U./ml)  乳链菌素Z(A.U./ml)
凝结芽孢杆菌JCM2257T     102,400     102,400
枯草芽孢杆菌JCM2504T     3,200     6,400
环状芽孢杆菌JCM2154T     3,200     3,200
微球菌luteus(Micrococcus luteus)IF012708     200     400
无害李斯特菌ATCC33090T     400     1,600
戊糖片球菌JCM5885     200     400
粪肠球菌JCM5803T     200     400
乳酸乳球菌乳酸亚种ATCC19435T     400     800
乳酸乳球菌乳脂亚种TUA1344L     400     400
植物乳杆菌ATCC14917T     200     800
Sakei乳杆菌sakei亚种(Lactobacillus sakei subsp.Sakei)JCM1157T     25,600     ≥204,800
肠膜明串株菌肠膜亚种JCM6124T     12,800     3,200
(4)抗菌性物质的产生及精制方法
先期培养分离株61-14菌株，将先期培养液8ml接种入1L的MRS(oxoid(オキソイド)公司制)液体培养基中，30℃培养18小时后，离心分离，回收上清。可回收1L培养上清，活性为1.28×104(A.U./ml)。在上清中加入以2-丙醇充分浸渍了的安伯来特(アンバ一ライト)XAD-16(sigma公司制)20g，然后振荡3小时以吸附上清。
将其装柱(200ml容量)，以水100ml、40％乙醇100ml、70％2-丙醇100ml(TFA 0.1％)、100％2-丙醇50ml进行洗脱。检测到活性最强的部分是70％2-丙醇100ml(TFA 0.1％)，该洗脱馏分的活性为1.64×106(A.U./ml)。将该洗脱馏分以离心蒸发器(speedback evaporator)浓缩，然后以20mM磷酸钠缓冲液调整最终体积为50ml。将SP-琼脂糖阳离子交换色谱树脂(法玛西亚公司制)装柱(16ml容量)，加入浓缩样品50ml，并以20mM磷酸钠缓冲液进行平衡。然后用含有0.25、0.5、0.75、0.1M NaCl的磷酸钠缓冲液，以流速100ml/小时，进行洗脱。
测定各洗脱馏分的抗菌活性，活性最强的0.25M NaCl洗脱馏分的活性为2.62×105(A.U./ml)。将洗脱总量50ml中的10ml供给反相HPLC(柱：法玛西亚公司制的Pep RPC HR 5/5)。作为流动相是，使用乙腈的浓度梯度(直线梯度0～100％)，1ml/min流速，1毫升/馏分，共分为30个馏分。以UV(UV 220，280nm)作为监测器。测定30个馏分样品的抗菌活性，并将抗菌活性强且保留时间为12分～13分的馏分浓缩，再在相同条件下供给反相HPLC。得到具有单峰和强抗菌活性的保留时间为9～11分钟的馏分。此外，用凝结芽孢杆菌JCM2257T作为抗菌活性的指标菌。
(5)N末端氨基酸序列测定
对如上述得到的抗菌性物质，使用利用了Edman(エドマン)降解法的氨基酸测序仪(SHIMADZU PSQ-1U protein sequencer)，进行N末端分析。结果是，肽序列的N末端鉴定为Ile，接下来的氨基酸未能鉴定出来。显示，从N末端开始的第二个氨基酸在一级结构上虽然是Thr，但却被特殊氨基酸所修饰。
(6)DNA序列测定
用MagExtractor-Genome-(TOYOBO)，从分离株FERM BP-08492(Lactococcus lactis)中提取全基因组DNA。浓度为60.5ng/μl。接着，进行聚合酶链式反应(PCR)，此时使用的PCR引物是根据乳链菌素A及乳链菌素Z前驱体结构基因周围的核苷酸序列而设计的，由以下脱氧核糖核苷酸序列构成。cgt tcg aag aaa cta caa aat aaa tt(序列号5)及cca tgt ctg aac taa caa aat act at(序列号6)。使用Premix Taq DNA聚合酶(Ex-Taq TAKARA)，进行PCR。以94℃30秒、51℃30秒、72℃60秒，进行30个循环的延伸反应。
然后，使用来源于pUC 18的T载体，进行TA克隆。使用DNA LigationKit Ver.2(TAKARA)，将PCR扩增片断插入到T载体。用该连接产物，采用电穿孔法转化E.coli JM109。以LB培养基培养转化体8小时后，用MagExtractor-Plasmid-(TOYOBO)提取质粒。将该质粒作为测序反应的模板。将荧光标记引物热循环测序试剂盒(Thermo Sequense fluorescent labeledprimer cycle sequencing kit)(法玛西亚公司制)用于测序。测序反应如下进行：95℃孵育5分钟后，以95℃30秒、55℃30秒、72℃1分钟，进行15个循环，再以95℃30秒、72℃1分钟，进行15个循环。
结果是，得到序列4的碱基序列(核苷酸序列)。若和编码乳链菌素Z前体肽的基因比较，则其18号碱基为T而不是C，24号碱基为G而不是A，42号碱基为G而不是A，45号碱基为G而不是A，47号碱基为A而不是C，54号碱基为A而不是T，57号碱基为T而不是C，60号碱基为A而不是T，64号碱基为C而不是A，69号碱基为C而不是T，75号碱基为A而不是C，78号碱基为T而不是C，87号碱基为A而不是T，96号碱基为C而不是A，111号碱基为A而不是T，113号碱基为C而不是T，123号碱基为T而不是A，130号碱基为A而不是C，156号碱基为T而不是C，157号碱基为A而不是G。
和乳链菌素Z比较，对肽序列产生影响的碱基不同，即，因47号碱基不同，第8位氨基酸残基Lys变为Thr；因64号碱基不同，第2位氨基酸残基Pro变为Thr；因113号碱基不同，第15位氨基酸残基Ala变为Val；因130号碱基不同，第21位氨基酸残基Met变为Leu；因157号碱基不同，第30位氨基酸残基Ile变为Val(参照图1)。图1中，虽然显示为乳链菌素Q，但根据本发明，其是FERM P-18994所产生的抗菌性肽的前体肽的氨基酸序列(序列号2)，其中，由I(异亮氨酸：Ile)开始C末端侧的34个氨基酸残基构成的部分，是作为抗菌性肽最终发挥作用的肽的一级结构的氨基酸序列(序列号1)，连接N末端周围的部分成为前导肽的氨基酸序列。如此，本发明的抗菌性肽(乳链菌素Q)，是与已知的乳链菌素Z完全不同的物质。
此外，编码乳链菌素Q(乳链菌素Q前体肽)碱基序列并不限于序列号4的DNA序列，考虑到密码子的多义，是包含全部可以编码由序列2的氨基酸序列所构成的乳链菌素Q的DNA序列。
(7)通过MALDI-TOF MS分析对高级结构的推测
和乳链菌素Z比较，由于乳链菌素Q的DNA序列与其类似，N末端附近存在特殊结构，因而暗示，乳链菌素Q和乳链菌素Z的高级结构有类似的可能性。因此，如下所示推测乳链菌素Q的高级结构。即，具有如下氨基酸序列构成的一级结构：
1               5                   10                  15
Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu
            20                  25                  30
Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr Cys Asn Cys Ser Val His Val
    34
Ser Lys
2号位的苏氨酸被修饰为2，3-双脱氢酪酯(2，3-didehydrobutyrine)，5号、33号位的丝氨酸都各自被修饰为2，3-双脱氢丙氨酸(2，3-didehydroalanine)，3号位的丝氨酸被修饰为丙氨酸，8号、13号、23号、25号位的苏氨酸都各自被修饰为2-氨基丁酸(Abu)，与此同时，3号位和7号位通过Ala-S-Cys的硫醚键结合形成羊毛硫氨酸(lanthionine)，8号位和11号位通过Abu-S-Cys的硫醚键结合形成3-甲基羊毛硫氨酸(3-methyl lanthionine)，13号位和19号位通过Abu-S-Cys的硫醚键结合形成3-甲基羊毛硫氨酸，23号位和26号位通过Abu-S-Cys的硫醚键结合形成3-甲基羊毛硫氨酸，25号位和28号位通过Abu-S-Cys的硫醚键结合形成3-甲基羊毛硫氨酸(序列号3)。
由如上述推测的序列3的氨基酸序列计算出分子量的理论值，该值为3327.43。因此，使用可测定精确分子量的MALDT-TOF MS(PE BiosystemsVoyager System 4025)，测定分子量。由于在测定的样品中添加质子，因此，测定值比实际分子量大1Da。测定的结果是，观察到两个峰，即，对应于乳链菌素Q中所含的蛋氨酸被氧化后的物质的3345.890Da的峰，和被认为对应于乳链菌素Q分子量测定值的3328.50Da的峰。该分子量测定值，与理论值3327.43Da+1Da＝3328.43Da相差在0.1％以内，和理论值几乎一致。该结果暗示，乳链菌素Q为推测的结构。
(8)作为食品保存剂的适用性试验
为研究本发明的抗菌性肽(乳链菌素Q)作为食品保存剂的适用性，确认了在可被作为食品中的pH范围的pH4～7下，进行蒸馏甑杀菌处理(110℃、10分钟)的情况下的抗菌活性。
<乳链菌素Q粗精制>
将乳酸乳球菌61-14株(FERM BP-08492)在MRS(Difco)培养基10ml中于30℃培养24小时。将培养菌液接种于100ml MRS培养基(含有2％碳酸钙)中，于30℃培养24小时。再将该培养菌液接种于1L MRS培养基(含有2％碳酸钙)中，培养16小时后，离心分离，回收上清。在上清中加入20g安伯来特(アンバ一ライト)XAD-16(sigma公司制)(在2-丙醇中充分膨润后，以蒸馏水洗净)，浸渍16小时，进行吸附。将其装柱，以蒸馏水700ml、40％乙醇500ml清洗，并以100％2-丙醇洗脱。将洗脱馏分置于旋转蒸发器中干燥固化。再将干固物置于50ml Britton-Robinson宽范围缓冲液(pH3.94)中，于4℃溶解16小时。将所得溶液作为原液。
<抗菌性试验方法>
使用Sakei乳杆菌sakei亚种JCM1157T作为指标菌。指标菌添加样品后，接种于MRS培养基，使终浓度为4×105个/ml，再在96孔板(Nunc制)中于30℃静置培养24小时后，测定630nm的吸光度。当观察到指标菌的繁殖时，吸光度增加。
将乳链菌素Q调整到各pH值后，于110℃高压灭菌10分钟。将各pH样品进行2倍梯度稀释，并在各个稀释阶段进行抗菌性试验。
<结果>
试验结果示于图2。在各pH值，以和蒸馏甑杀菌条件相同的条件，进行研究后，鉴于即使进行了稀释，也有增殖抑制效果，因而确认，能够用于要进行蒸馏甑程度的加热处理的食品原料，以及非加热的食品原料。
(9)食品保存性试验
针对本发明的抗菌性肽(乳链菌素Q)对米饭的效果，进行了研究。于121℃对MRS培养基(DIFCO公司制)灭菌15分钟后，接种61-14株(FERMBP-08492)，于37℃培养15小时后，除去菌体，制得冷冻干燥制品。此外，作为对照，使用便宜且被广泛利用得市售保鲜提高剂、食醋制剂和乳酸。
将米水洗、吸水后，接种来自米的枯草芽孢杆菌孢子100个/g，依据表2所示，添加乳链菌素Q、食醋制剂和乳酸，进行蒸饭。饭熟后冷却，放入灭菌杯中，于30℃进行48小时的保存试验。对于各样品，使用标准琼脂培养基(荣研化学株式会社制)，测定一般长菌数。其结果示于表3。
表2
样品1 样品2 样品3
乳链菌素Q 0.3％ 乳酸0.5％ 食醋制剂0.5％
表3
样品1 样品2 样品3 无添加
100 500 240000 1000000
                            (个/g)
通过添加乳链菌素Q，得到良好的保鲜提高效果。此外，官能检查的结果显示，添加乳链菌素Q的部分，和添加乳酸或食醋的部分比较，风味和味道都较好。由此，可以知道，乳链菌素Q不会影响食品的品质，能够产生保鲜提高的效果。
产业上的可利用性
根据本发明，提供了作为食品保存剂等有用的新的抗菌性物质。
序列表
<110>福冈县(Fukuoka Prefectural Government)
<110>圆元谦二(Kenji，Sonomoto)
<120>乳酸菌产生的抗菌性物质
<150>JP P2002-278901
<151>2002-09-25
<160>6
<210>1
<211>34
<212>PRT
<213>乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)FERM BP-08492
<400>1
                5                   10                  15
Ile Thr Ser Ile Ser Leu cys Thr Pro Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu
            20                  25                  30
Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr Cys Asn Cys Ser Val His Val
    34
Ser Lys
<210>2
<211>57
<212>PRT
<213>乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)FERM BP-08492
<220>
<221>PROPEP
<222>-23..-1
<400>2
            -20                 -15                 -10
Met Ser Thr Lys Asp Phe Asn Leu Asp Leu Val Ser Val Ser Lys Thr
        -5              -1  1               5
Asp Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro
10                  15                  20                  25
Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr
                30
Cys Asn Cys Ser Val His Val Ser Lys
<210>3
<211>34
<212>PRT
<213>乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)FERM BP-08492
<220>
<221>CHAIN
<222>1..34
<223>乳链菌素Q
<221>MOD_RES
<222>2
<223>2，3-DIDEHYDROBUTYRINE
<221>MOD_RES
<222>3
<223>Ala
<221>MOD_RES
<222>8
<223>Abu
<221>MOD_RES
<222>13
<223>Abu
<221>MOD_RES
<222>23
<223>Abu
<221>MOD_RES
<222>25
<223>Abu
<221>MOD_RES
<222>33
<223>2，3-DIDEHYDEOALANINE
<221>THIOETH
<222>3..7
<223>Ala-S-Cys LANTHIONINE
<221>THIOETH
<222>8..11
<223>Abu-S-Cys BETA-METHYLLANTHIONINE
<221>THIOETH
<222>13..19
<223>Abu-S-Cys BETA-METHYLLANTHIONINE
<221>THIOETH
<222>23..26
<223>Abu-S-Cys BETA-METHYLLANTHIONINE
<221>THIOETH
<222>25..28
<223>Abu-S-Cys BETA-METHYLLANTHIONINE
<400>3
1               5                   10                  15
Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu
            20                  25                  30
Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr Cys Asn Cys Ser Val His Val
    34
Ser Lys
<210>4
<211>174
<212>DNA
<213>乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)FERM BP-08492
<220>
<221>mat_peptide
<222>70..171
<400>4
atgagtacaa aagatttcaa cttagatttg gtatctgttt caaaaacaga ttctggcgct    60
tcaacacgta ttaccagcat ttcgctttgt acaccaggtt gtaaaacagg tgttctgatg    120
ggatgtaacc tgaaaacagc aacttgtaat tgtagcgttc acgtaagcaa ataa          174
<210>5
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>source
<222>1..24
<223>合成结构
<400>5
tcgaagaaac tacaaaataa att    23
<210>6
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>source
<222>1..24
<223>合成结构
<400>6
tgtctgaact aacaaaatac tat    23

Claims (7)

1.抗菌性肽，其特征在于，具有由下述氨基酸序列(序列1)构成的一级结构：
1                 5                  10                  15
Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu
             20                  25                  30
Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr Cys Asn Cys Ser Val His Val
     34
Ser Lys。
2.权利要求1所述的抗菌性肽的前体肽，其特征在于，由下述氨基酸序列(序列2)构成：
            -20                 -15                 -10
Met Ser Thr Lys Asp Phe Asn Leu Asp Leu Val Ser Val Ser Lys Thr
        -5              -1   1               5
Asp Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ile Thr Ser Ile Ser Leu Cys Thr Pro
10                  15                  20                  25
Gly Cys Lys Thr Gly Val Leu Met Gly Cys Asn Leu Lys Thr Ala Thr
                30
Cys Asn Cys Ser Val His Val Ser Lys
3.DNA，其特征在于，编码权利要求1所述的肽。
4.DNA，其特征在于，编码权利要求2所述的肽。
5.如权利要求4所述的DNA，其特征在于，由下述核苷酸序列(序列3)构成：
atg agt aca aaa gat ttc aac tta gat ttg gta tct gtt tca aaa aca gat tct ggc gct 60
tca aca cgt att acc agc att tcg ctt tgt aca cca ggt tgt aaa aca ggt gtt ctg atg 120
gga tgt aac ctg aaa aca gca act tgt aat tgt agc gtt cac gta agc aaa taa 174
6.乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)61-14菌株(FERM BP-08492)，其特征在于，产生权利要求1的抗菌性肽。
7.食品保存剂，其特征在于，含有权利要求1的抗菌性肽作为有效成分。
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication