CN1683363A - 一种从茶叶中提取儿茶素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从茶叶中提取儿茶素的方法。先将茶叶粉碎成粉末，加入75％乙醇，在恒温水浴中搅拌浸提，冷却过滤，滤液蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液；在茶多酚提取液中加入氯仿萃取除去咖啡因，得到水溶液；在所得的水溶液中再用乙酸乙酯萃取，除去水相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品；将儿茶素粗提品经过层析分离得到儿茶素纯品。本发明所选用的溶剂价廉、毒性小、易于回收、无残留，所得样品纯度高达到95％以上，成本低、时间短、操作简单。
Description
技术领域
本发明涉及生化技术领域，具体的说涉及一种从茶叶中提取儿茶素的方法。
背景技术
茶叶中茶多酚类化合物含量高，而其中主要含有儿茶素类化合物。儿茶素具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗畸变、降血压、降血脂、降血糖、防辐射等多种保健功能，社会对儿茶素的需求量很大，虽然儿茶素的提取方法多种多样，但其提取分离纯化成本均较高，使得儿茶素纯品的价格昂贵，且订购时间长，限制了其在医药、日用化工、食品油脂工业领域和实验室研究中的应用。
发明内容
本发明的目的是针对现有儿茶素提取方法成本高的问题，提供一种新的从茶叶中提取儿茶素的方法，本发明的提取方法所选用的溶剂价廉，毒性小，易于回收，无残留，所得样品纯度高、成本低，提取时间短、操作简单。
本发明的从茶叶中提取儿茶素的方法，具体如下所示：先将茶叶粉碎成粉末，加入75％乙醇，在80～90℃的恒温水浴中搅拌浸提，冷却后过滤，滤液蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液；在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液；在所得的水溶液中再用等量乙酸乙酯萃取5次，除去水相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品；将儿茶素粗提品经过层析分离得到儿茶素纯品。
上述层析分离具体步骤如下所示：将儿茶素粗提品溶于蒸馏水中配成质量百分数为20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份；对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮；将经浓缩除去丙酮后的溶液，加入甲醇和水的体积比为1∶1溶液的溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25，用100倍的80％甲醇水溶液作为洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。
上述的在80～90℃的恒温水浴中搅拌浸提的时间为60分钟。
本发明的有益效果：本发明应用多次萃取、二次柱层析的方法连续提取分离得到三种儿茶素单体，选用的溶剂价廉，毒性小，易于回收，无残留，所得样品纯度高达到95％以上、成本低、时间短、操作简单。
具体实施方式
实施例1：
将绿茶叶子分选除杂，用粉碎机粉碎，取100g，加入1000ml的75％乙醇，在85℃的恒温水浴中，提取三次。第一次提取(固液比为1∶10)，浸提60分钟；滤渣再提取三次(固液比为1∶3)，每次30分钟，将三次提取液合并，用抽滤方法过滤，蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液。滤渣可作饲料。在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液。在所得的水溶液中再用等量的乙酸乙酯反复萃取5次，最后除去水相，合并酯相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品。
柱层析：将儿茶素粗提品重新溶于蒸馏水中配成20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份。对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮。将经浓缩除去丙酮后的溶液，加甲醇/水(1∶1)溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，用100倍的80％甲醇/水洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。将单体儿茶素冷冻干燥后，分别得儿茶素EGCG、GCG、ECG单体纯品。将干燥后的各单体儿茶素粉碎，得EGCG、GCG、ECG单体儿茶素纯品分别为3.1g、2.1g、0.5g，装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达95％以上。
实施例2
将茶叶鲜叶在60℃下烘干后，分选除杂，用粉碎机粉碎，取100g，加入1000ml的75％乙醇，在85℃的恒温水浴中，提取三次。第一次提取(固液比为1∶10)，浸提60分钟；滤渣再提取三次(固液比为1∶3)，每次30分钟，将三次提取液合并，用抽滤方法过滤，蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚乙醇浓缩提取液。滤渣可作饲料。在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液。氯仿萃取液可用于提取咖啡因。在所得的水溶液中再用等量的乙酸乙酯反复萃取5次，最后除去水相，合并酯相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品。
柱层析：将冷冻干燥后得儿茶素粗提品重新溶于蒸馏水中配成20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份。对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮。将经浓缩除去丙酮后的溶液，加甲醇/水(1∶1)溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，用100倍的80％甲醇/水洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。将单体儿茶素冷冻干燥后，分别得儿茶素EGCG、GCG、ECG单体纯品。将干燥后的各单体儿茶素粉碎，得EGCG、GCG、ECG单体儿茶素纯品分别为2.6g、1.8g、0.6g，装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达95％以上。
实施例3
取茶多酚总含量为85％以上的茶叶提取物25g，加入250ml的75％乙醇，在85℃的恒温水浴中，提取三次。第一次提取(固液比为1∶10)，浸提30分钟；滤渣再提取三次(固液比为1∶3)，每次20分钟，将三次提取液合并，用抽滤方法过滤，蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚乙醇浓缩提取液。在茶多酚提取液中加入等量的氯仿萃取除去咖啡因，如此反复萃取5次，以便将咖啡因除净，得到水溶液。氯仿萃取液可用于提取咖啡因。在所得的水溶液中再用等量的乙酸乙酯反复萃取5次，最后除去水相，合并酯相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品。
柱层析：将冷冻干燥后得儿茶素粗提品重新溶于蒸馏水中配成20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份。对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮。将经浓缩除去丙酮后的溶液，加甲醇/水(1∶1)溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱(样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25)，用100倍的80％甲醇/水洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素。将单体儿茶素冷冻干燥后，分别得儿茶素EGCG、GCG、ECG单体纯品。将干燥后的各单体儿茶素粉碎，得EGCG、GCG、ECG单体儿茶素纯品分别为2.5g、1.3g、0.5g，装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达95％以上。
Claims (3)
1、一种从茶叶中提取儿茶素的方法，其特征在于先将茶叶粉碎成粉末，加入75％乙醇，在80～90℃的恒温水浴中搅拌浸提，冷却后过滤，滤液蒸馏浓缩回收乙醇，得茶多酚提取液；在茶多酚提取液中加入氯仿萃取除去咖啡因，得到水溶液；在所得的水溶液中再用乙酸乙酯萃取，除去水相，酯相经减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后得儿茶素粗提品；将儿茶素粗提品经过层析分离得到儿茶素纯品。
2、根据权利要求1所述的从茶叶中提取儿茶素的方法，其特征在于所述的层析分离具体如下所示：将儿茶素粗提品溶于蒸馏水中配成质量百分数为20％的溶液，过滤，上Sephadex LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25，先以5倍于儿茶素粗品水溶液的纯水洗脱，然后依次以10倍的体积分数为30％，40％，50％，60％，70％，80％的丙酮梯度洗脱，洗脱速度均为3ml/min，按儿茶素粗品水溶液的原体积为一个单位流份，逐一收集60％以后的丙酮流份；对所收集到的每个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，流份再经浓缩除去丙酮；将经浓缩除去丙酮后的溶液，加入甲醇和水的体积比为1∶1溶液的溶解配成20％的溶液，再过Sephadex LH-20柱，样品固体重与吸附剂重量之比为1∶25，用100倍的80％甲醇水溶液作为洗脱剂洗脱，洗脱速度为3ml/min，以9ml为一个单位流份，逐一收集各流份，各个流份在UV278nm，柱温为25℃条件下作HPLC分析，将分别含有EGCG、GCG、ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得儿茶素单体EGCG、GCG和ECG。
3、根据权利要求1或2所述的从茶叶中提取儿茶素的方法，其特征在于所述的在80～90℃的恒温水浴中搅拌浸提的时间为60分钟。
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