CN1673232A - 抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的受体dr5单克隆抗体（ad5－10）及其制法与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的受体DR5(death receptor5，)胞外区的单克隆抗体(AD5－10)；还提供该单克隆抗体的制备方法、轻链和重链可变区的氨基酸序列、以及它的治疗肿瘤和艾滋病的用途。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)受体(death receptor 5，DR5)的单克隆抗体(命名为AD5-10)、产生该抗体的杂交瘤细胞株和抗体重链与轻链的氨基酸序列及其制备方法与用途，特别是应用基因工程技术制备重组DR5的胞外区，免疫动物后，制备鼠抗人DR5单克隆抗体的方法及其性质和用途。本发明的鼠抗人DR5单克隆抗体、及其Fab和F(ab’)2可单独或与TRAIL或与其它抗癌药物联合应用，对多种肿瘤和艾滋病具有特别显著的治疗作用。该单克隆抗体的基因也可与适当的载体连接，用于肿瘤和艾滋病的基因治疗。
技术背景
死亡受体(death receptor)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因超家族的成员，特点是具有富含Cys的胞外结构域(extracellulardomian)[1]和胞内的死亡结构域DD(death domain)。死亡结构域赋予死亡受体诱导细胞凋亡的功能，但有时也介导其它生物学功能或对抗凋亡。TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducingligand，TRAIL)(Wiley SR，Schooley K，Smolak P，et al.，Identification and characterization of a new member of the TNFfamily that induces apoptosis，Immunity，1995，3：673-682)与其死亡受体结合，可以激活死亡受体途径和线粒体途径两条细胞死亡信号传导途径，杀死多种肿瘤细胞，而对大多数正常细胞没有毒副作用。感染了人类免疫缺陷病毒(HIV)的T淋巴细胞对TRAIL及其受体介导的细胞毒作用敏感性增加[3]。这些研究结果表明TRAIL及其受体的研究在癌症和艾滋病的治疗方面具有诱人的应用前景。
至今已发现TRAIL有5种不同的受体分子，即DR4(death receptor4，也称TRAIL-R1)、DR5(death receptor 5，也称TRAIL-R2，TRICK2或KILLER)、DcR1(decoy receptor 1，也称TRID，TRAIL-R3或LIT)、DcR2(也称TRAIL-R4或TRUNDD)和Osteoprotegerin(OPG)。DR4和DR5含有胞内死亡结构域，可以传导凋亡信号。DcR1通过糖肌醇磷脂(GPI)锚定于细胞表面，其传导信号所必需的死亡结构域完全缺失。因此，DcR1可作为一个受体阻止TRAIL与死亡受体的结合。DcR2的具有不完整的死亡结构域，不能传导凋亡信号，也可作为一个诱骗受体与死亡受体竞争性地与TRAIL结合。Osteoprotegerin是一个分泌型的TRAIL受体，可与TRAIL结合并抑制其功能。
研究表明抗DR4或抗DR5的单克隆抗体不仅能杀死肿瘤细胞，而且对正常细胞没有毒性。但DR4和DR5的胞外区部分具有多个抗原表位，对于不同单克隆抗体所识别的抗原表位与该抗体生物学活性之间的关系，目前的技术尚无法确定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体的单克隆抗体(AD5-10)，该单克隆抗体的轻链和重链可变区分别具有如序列表中所述的氨基酸序列。
本发明的第二个目的在于提供一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体的单克隆抗体(AD5-10)的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供一种能产生抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的单克隆抗体(AD5-10)的杂交瘤细胞株。本发明的第四个目的在于提供一种所述的单克隆抗体(monoclonalantibody)，其亚型为IgG3κ。
本发明的第五个目的在于提供一种所述的单克隆抗体在体外可以诱导多种肿瘤细胞的凋亡；
本发明的第六个目的在于提供一种所述的单克隆抗体在裸鼠体内可以抑制人移植瘤的形成和生长。
本发明的第七个目的在于提供一种所述的单克隆抗体在特定的细胞系中可激活不同于TRAIL所激活的信号途径。
本发明的第八个目的在于提供一种所述的单克隆抗体与TRAIL具有协同作用，显著提高杀伤肿瘤细胞的活性。
本发明的第九个目的在于提供一种所述的单克隆抗体的完整分子、Fab、F(ab’)2或用基因工程技术构建的重组单链抗体(ScFv)、人鼠嵌合抗体以及改型抗体可应用于研制治疗肿瘤和/或艾滋病的新型药物。
本发明的第十个目的在于提供一种所述的单克隆抗体与适当的载体连接，可应用于研制治疗肿瘤和艾滋病的基因治疗药物。
本发明的第十一个目的在于提供一种所述的单克隆抗体与8-氯腺苷或Act D等化疗药物联用，可加强对肿瘤细胞的杀伤作用，降低化疗药物的使用剂量，显著提高疗效，降低治疗的毒副作用。
为了完成本发明的目的，本发明提供一种鼠源单克隆抗体，其轻链和重链可变区的氨基酸序列包括：序列号1的轻链可变区(VL)的氨基酸序列，和序列号2的重链可变区(VH)的氨基酸序列。
所述单克隆抗体的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：
CDR1(24位到39位氨基酸)：Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val HisSer Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
CDR2(55位到61位氨基酸)：Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
CDR3(94位到102位氨基酸)：Phe Gln Ser Thr His Val Pro HisThr
所述单克隆抗体的重链可变区CDR11、CDR22和CDR33的氨基酸序列分别为
CDR11(31位到35位氨基酸)：Asp Phe Ser Met Asn
CDR22(50位到66位氨基酸)：Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu ProThr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly
CDR33(99位到101位氨基酸)：Ile Asp Tyr
本发明还提供一种肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的单克隆抗体的制备方法，该单克隆抗体，其轻链和重链可变区的氨基酸序列包括：序列号1的轻链可变区(VL)的氨基酸序列，和序列号2的重链可变区(VH)的氨基酸序列，该方法包括以下步骤：
以人DR5 cDNA为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增DR5胞外区的cDNA，并克隆入原核表达载体，获得表达质粒；
重组表达质粒转化大肠杆菌后，经筛选获得表达DR5胞外区的工程菌，进行发酵培养，提取重组DR5胞外区蛋白；
以重组DR5胞外区蛋白免疫小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，制备杂交瘤细胞，经筛选获得产生该单克隆抗体(AD5-10)的杂交瘤细胞株。
经过本发明的方法获得的杂交瘤细胞株，已于2004年7月16日保存在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”的杂交瘤细胞株，分类名称为BALB/c小鼠杂交瘤细胞，其编号为：1192。
本发明所述的杂交瘤细胞株能够产生单克隆抗体，其单克隆抗体免疫球蛋白的亚型是IgG3κ。
另外，该杂交瘤细胞株产生单克隆抗体命名为AD5-10，该抗体与TRAIL均可和DR5结合，并结合与DR5不同结合的位点。
本发明杂交瘤细胞株产生在体外具有强烈的杀伤肿瘤细胞作用的单克隆抗体AD5-10。该单克隆抗体AD5-10与TRAIL或其它化疗药物具有协同杀伤肿瘤细胞的作用，以及在体内可抑制人移植瘤在裸鼠体内的形成和生长。
所述杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体AD5-10诱导胱天蛋白酶(caspase)依赖的和不依赖的两条细胞凋亡信号传递途径，并在特定的细胞细胞系中可激活与TRAIL不同的信号途径。
本发明还提供本发明所述的鼠源单克隆抗体AD5-10的IgG在制备治疗肿瘤和/或艾滋病的药物的用途；以及该鼠源单克隆抗体，其Fab或F(ab’)2或其80％的同源序列在制备用于治疗肿瘤和/或艾滋病的重组单链抗体药物中的应用。
另外，本发明还提供所述的鼠源单克隆抗体，其Fab、F(ab’)2或其80％的同源序列与人IgG的Fc融合，制备鼠-人嵌合抗体，在用制备治疗肿瘤和/或艾滋病的药物中的应用。
本发明进一步提供一种本发明的单克隆抗体的全长或其80％的同源序列制备的改型单克隆抗体。
最后，本发明还提供一种所述的鼠源单克隆抗体的Fab、F(ab’)2或其80％的同源序列与药学上可接受的载体连接，在制备肿瘤和/或艾滋病的基因治疗药剂中的应用。
由此可见，在本发明中，采用基因工程等现代生物学技术和方法，提供了TRAIL受体DR5胞外区重组可溶性蛋白的制备方法，进而使用此重组蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术，获得了一种抗TRAIL受体DR5的单克隆抗体(AD5-10)，通过cDNA克隆的方法获得了其重链和轻链可变区的氨基酸序列，证明其为一个新型的、尚未报道的抗DR5单克隆抗体，其亚型为IgG3κ。在体外，该单克隆抗体具有强烈诱导多种肿瘤细胞凋亡的能力；在裸鼠体内，该单克隆抗体具有显著抑制人肿瘤细胞形成肿瘤和抑制肿瘤细胞生长的生物学活性；首次证明该单克隆抗体与TRAIL具有协同作用，促进肿瘤细胞凋亡；也可与其它抗癌药物联用，在体内外杀死肿瘤细胞，加强化疗药物的疗效，降低化疗药物的剂量进而降低其毒副作用。因此，该单克隆抗体在抗肿瘤和抗艾滋病的新型药物的研制中有着重要的意义。
换言之，本发明涉及一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的单克隆抗体(AD5-10)，该单克隆抗体的重链和轻链可变区具有如序列表中所述的氨基酸序列。
本发明还涉及一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体的单克隆抗体(AD5-10)的制备方法，它包括以下步骤：
以含有人DR5全长cDNA的质粒为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的胞外区cDNA；
将此cDNA克隆入原核表达载体，得到DR5胞外区表达质粒；
重组表达质粒DNA转染大肠杆菌后，获得表达DR5胞外区的工程菌；
表达DR5胞外区的工程菌经发酵、诱导和分离纯化，获得重组DR5胞外区多肽；
以此蛋白免疫小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选后获得一株能产生抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为AD5-10。
经过本发明的方法获得的杂交瘤细胞株，已于2004年7月16日保存在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”的杂交瘤细胞株，分类名称为BALB/c小鼠杂交瘤细胞，其编号为：1192。
本发明还涉及该单克隆抗体在制备抗肿瘤和艾滋病药物中的应用。该单克隆抗体及其基因工程衍生物可用于研制适用于治疗多种肿瘤和/或艾滋病的药物。
换言之，本发明以含有人DR5全长cDNA的质粒为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的胞外区cDNA；将此cDNA克隆入原核表达载体，得到DR5胞外区表达质粒；重组表达质粒DNA转化大肠杆菌后，获得表达DR5胞外区的工程菌；表达DR5胞外区的工程菌经发酵、诱导和分离纯化，获得重组DR5胞外区蛋白；以此蛋白免疫小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞，经筛选后获得一种能产生抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为AD5-10；该方法中所述的表达质粒是pET15-b，所述的大肠杆菌是BL21(DE3)。
本发明的DR5单克隆抗体Ig的亚型是IgG3κ，能与DR5特异性结合；并可和TRAIL同时与DR5结合，增强其诱导肝癌和肺癌等肿瘤细胞凋亡的功能，表明该DR5单克隆抗体与TRAIL具有协同作用，促进DR5传递细胞凋亡信号；
体外的研究表明，该DR5单克隆抗体可杀死白血病、肝癌和肺癌等肿瘤细胞，杀伤力呈剂量依赖关系；
体内的研究表明，该DR5单克隆抗体能强烈地抑制人白血病、肝癌和肺癌等肿瘤细胞在裸鼠体内生长和肿瘤形成，与对照相比，抑制率可达80％左右；且抑瘤期长，停药后未见明显的反弹现象。
本发明之DR5单克隆抗体的毒性试验结果表明，该单克隆抗体以150mg/kg的剂量腹腔注射小鼠，未见动物死亡。继续观察1月及2月后，未见小鼠食欲、皮毛、活动等异常。组织学分析未见引起小鼠肝脏等器官病理性变化，表明该单克隆抗体安全、有效、无毒副作用。
本发明的优点与效果是以重组DR5胞外区重组多肽免疫动物采用杂交瘤技术，获得了一株前人没有报道的抗DR5单克隆抗体。该单克隆抗体具有全新的重链和轻链抗原互补区(CDR)氨基酸序列，其免疫球蛋白属于IgG3κ亚型。该单克隆抗体在体外可诱导多种肿瘤细胞凋亡，但对正常人淋巴细胞无任何杀伤作用。在体内具有强烈的抑制人肝癌、肺癌和白血病细胞生长和形成肿瘤的生物学活性，对正常小鼠的肝脏等器官无任何毒副作用。显示了该发明可发展为安全、有效的抗肿瘤和抗艾滋病的新型基因工程药物。
本发明与已有的国内外类似专利产品相比，其重链和轻链可变区氨基酸序列是未见报道的新的抗体序列，且其免疫球蛋白属于IgG3κ亚型，可与TRAIL非竞争性地与DR5结合，协同增强其抗肝癌、肺癌和白血病等肿瘤的效果。这些结果均是本领域技术人员所意想不到的。
附图说明
图1是显示AD5-10与其抗原人DR5的结合情况。A图显示AD5-10与DR5胞外区蛋白的结合，呈典型的单位点结合模式，Kd＝0.3nM，数据处理采用GraphPad软件；B图显示AD5-10与TRAIL的另一个死亡受体无交叉反应。
图2是显示AD5-10在体外杀伤肿瘤细胞的活性。A图显示以不同浓度的AD5-10处理人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞8小时的细胞存活率；B图显示以不同浓度的AD5-10处理肝细胞癌SMMC-7721细胞24小时的细胞存活率；C图显示以不同浓度的AD5-10处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞24小时的细胞存活率；D图显示不同浓度的AD5-10处理人神经胶质瘤U251细胞24小时的细胞存活率。以上细胞存活率采用MTS试剂盒(Promega公司)测定。E图显示以100ng/ml的AD5-10处理Jurkat细胞1小时的Annexin-V、PI双染的流式细胞仪测定结果。
图3是显示AD5-10在裸鼠体内抑制人移植肿瘤形成及生长的活性。A图显示AD5-10抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠体内形成肿瘤，CTX为化疗药物环磷酰胺；B图显示AD5-10抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠体内形成肿瘤的生长。
图4是显示AD5-10在Jurkat细胞中激活Caspase级联并导致PARP(poly ADP-ribose polymerase)降解的活性。
图5是显示AD5-10在体外对正常人外周血淋巴细胞存活的影响。实验中选用了人重组可溶性TRAIL和化疗药物作为对照，处理时间为24小时。细胞存活率采用MTS试剂盒(Promega公司)测定。
具体实施方式
实验例1
酶联免疫法(ELISA)测定AD5-10与其抗原的特异结合。以在大肠杆菌中表达的重组人DR5或DR4包被酶标板，用5％的脱脂封闭，加入不同浓度的AD5-10 37℃4小时，加入辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠IgG二抗37℃1小时，加入显色底物，30分钟后加入2M硫酸终止反应测定OD值。
实验例2
MTS法测定AD5-10在体外对肿瘤细胞的杀伤力以及对正常人外周血淋巴细胞的影响。将对数生长期的肿瘤细胞或新分离的正常人外周血淋巴细胞加入96孔细胞培养板中，加入不同浓度的AD5-10或重组可溶性TRAIL及化疗药物等，处理一定时间后，加入MTS试剂，反应2-4小时，测定OD值(波长492nm)。以无细胞孔的OD值为“0”，细胞存活率等于处理孔的OD值与为处理孔OD值的比值。
实验例3
Annexin-V、PI双染流式细胞仪检测AD5-10诱导Jurkat细胞凋亡。处于对数生长期的Jurkat细胞106用100ng/ml的AD5-10处理1小时(同时做不处理的对照)，离心收集细胞，用PBS洗2遍，加入Annexin-V和PI冰浴30分钟，上流式细胞仪检测。
实验例4
AD5-10的体内肿瘤杀伤活性。裸鼠(BALB/c nude mice)皮下注射SMMC-7721细胞106/只。早期治疗组(n＝10)从接种第2日开始给药，检测AD5-10抑制肿瘤形成的活性；晚期治疗组(n＝10)从接种第8日开始给药，检测AD5-10抑制肿瘤生长的活性，剂量均为15mg/kg。阴性对照组(n＝8)给生理盐水。化疗药物对照组(n＝5)给环磷酰胺(CTX)，剂量为60mg/kg。以上给药途径均为腹腔注射。3周后，处死裸鼠，取肿瘤称重。
实验例4
Western blot实验检测AD5-10激活caspase级联并引起PARP(poly ADP-ribose polymerase)的降解。对数生长期的Jurkat细胞用100ng/ml的AD5-10处理0，15，30，60分钟，收集细胞，裂解，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，将凝胶上的蛋白转到PVDF膜上，加入特定的抗体进行杂交，加入相应的辣根过氧化物酶标记的二抗，加入发光底物显影。
实验例5
AD5-10基因cDNA克隆。提取AD5-10杂交瘤细胞的总RNA并以之为模板按IgG恒定区和信号肽区保守序列设计引物进行逆转录PCR(RT-PCR)，产物连入pMD18-T载体，经测序获得基因cDNA序列。根据cDNA序列可推导出蛋白的氨基酸序列。
序列表
<110>中国医学科学院基础医学研究所
<120>抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的受体DR5单克隆抗体(AD5-10)及其制法与用途
<130>
<160>2
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>23
<212>PRT
<213>鼠
<400>1
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu
1 5 10 15
Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val
16 20 25 30
His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
31 35 40 45
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
46 50 55 60
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
61 65 70 75
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val
76 80 85 90
Tyr Phe Cys Phe Gln Ser Thr His Val Pro His Thr Phe Gly Gly
91 95 100 105
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
106 110 113
<210>2
<211>23
<212>PRT
<213>鼠
<400>2
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1 5 10 15
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16 20 25 30
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Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr
46 50 55 60
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61 65 70 75
Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp
76 80 85 90
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Val Arg Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
91 95 100 105
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
106 110 112
13
Claims (17)
1 一种鼠源单克隆抗体，其轻链和重链可变区的氨基酸序列包括：序列号1的轻链可变区(VL)的氨基酸序列；序列号2的重链可变区(VH)的氨基酸序列。
2 根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：
CDR1的24位到39位氨基酸：Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His SerAsn Gly Asn Thr Tyr Leu His
CDR2的55位到61位氨基酸：Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
CDR3的94位到102位氨基酸：Phe Gln Ser Thr His Val Pro His Thr
3 根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体的重链可变区CDR11、CDR22和CDR33的氨基酸序列分别为
CDR11的31位到35位氨基酸：Asp Phe Ser Met Asn
CDR22的55位到66位氨基酸：Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro ThrTyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly
CDR33的99位到101位氨基酸：Ile Asp Tyr。
4 一种肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
以人DR5 cDNA为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增DR5胞外区的cDNA，并克隆入原核表达载体，获得表达质粒；
重组表达质粒转化大肠杆菌后，经筛选获得表达DR5胞外区的工程菌，进行发酵培养，提取重组DR5胞外区蛋白；
以重组DR5胞外区蛋白免疫小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，制备杂交瘤细胞，经筛选获得产生该单克隆抗体(AD5-10)的杂交瘤细胞株。
5 一种如权利要求4所述的方法获得的杂交瘤细胞株，其特征在于所述该杂交瘤细胞株是于2004年7月16日保存在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”的杂交瘤细胞株，分类名称为BALB/c小鼠杂交瘤细胞，其编号为：1192。
6 如权利要求5所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生单克隆抗体，其单克隆抗体免疫球蛋白的亚型是IgG3κ。
7如权利要求5所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生单克隆抗体AD5-10，该抗体与TRAIL均可和DR5结合，并结合与DR5不同结合的位点。
8 如权利要求5所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生在体外具有强烈的杀伤肿瘤细胞作用的单克隆抗体AD5-10。
9 如权利要求8所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体AD5-10与TRAIL或其它化疗药物具有协同杀伤肿瘤细胞的作用。
10 如权利要求8所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生在体内可抑制人移植瘤在裸鼠体内的形成和生长的单克隆抗体AD5-10。
11 如权利要求8所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体AD5-10诱导胱天蛋白酶依赖的和不依赖的两条细胞凋亡信号传递途径。
12 如权利要求8所述的杂交瘤细胞株，其特征在于所述杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体AD5-10在特定的细胞细胞系中可激活与TRAIL不同的信号途径。
13 如权利要求1所述的鼠源单克隆抗体AD5-10的IgG在制备治疗肿瘤和/或艾滋病的药物的用途。
14 根据权利要求1所述的鼠源单克隆抗体，其Fab或F(ab’)2或其80％的同源序列在制备用于治疗肿瘤和/或艾滋病的重组单链抗体药物中的应用。
15 如权利要求1所述的鼠源单克隆抗体，其Fab、F(ab’)2或其80％的同源序列与人IgG的Fc融合，制备鼠-人嵌合抗体，在制备治疗肿瘤和/或艾滋病的药物中的应用。
16 一种根据权利要求1所述的单克隆抗体的全长或其80％的同源序列制备的改型单克隆抗体。
17 一种如权利要求1所述的鼠源单克隆抗体的Fab、F(ab’)2或其80％的同源序列与药学上可接受的载体连接，在制备肿瘤和/或艾滋病的基因治疗药剂中的应用。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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