CN108752477A - tNOX抗体及其组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种tNOX抗体及其组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用，所述tNOX抗体组合物包括tNOX抗体和免疫细胞。tNOX抗体可以定位癌细胞，并为免疫细胞提供抗体结合的信号；具有Fc结合受体的免疫细胞借此结合定位在肿瘤细胞上，并被激活，从而释放杀伤因子，杀死癌细胞。tNOX抗体及其组合物制备方法简单且治疗癌细胞的周期短，在实体瘤治疗中有很大的应用价值。

Description

tNOX抗体及其组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种tNOX抗体及其组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用。

背景技术

定位癌细胞上的靶点是研发抗癌药物的前提。一个好的靶点必须首先具备特异性，最理想的状态是绝对特异，也就是靶分子只在癌细胞上表达而不在正常细胞上表达；可惜这样情形十分罕见，绝大多数的情形是相对特异，即正常细胞上也有，但是其表达水平要远低于癌细胞；更理想的靶点是一种分子在所有种类的癌细胞上表达，而不在任何正常细胞上表达，包括干细胞；表达在细胞膜表面的靶点，不仅可以成为小分子药物的攻击对象，还可以是抗体药物的作用对象，相比于细胞内靶点，挖掘潜力更大。理想的靶点药物是实现精准治疗癌症的最基础也是最重要的前提。

免疫排斥反应中有一种是依赖抗体的、细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)。很多细胞表面表达结合抗体Fc区段的受体的免疫细胞都有可能参与这样的过程。以NK细胞为例，NK细胞表达CD16分子，CD16是IgG Fc的受体，一旦自体IgG结合了抗原，其Fc区域就会与NK细胞的CD16结合，如果结合的亲和力足够强，其结果便是NK细胞被激活，释放细胞毒性物质，如穿孔蛋白(perforin)和颗粒酶(granzyme)，将被IgG标记的细胞杀死。很多抗体治疗癌症即使不是全部、也至少是部分依赖这个作用。间接法体外测定NK细胞活性的试验依据的也是这个原理。

肿瘤相关NADPH氧化酶(tNOX)，也称作Ecto-NOX disulfide-thiol exchanger 2(ENOX2)，是一种还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶，同时又有催化巯基-二硫键交换的活力。ENOX1普遍存在于各类细胞，而tNOX只表达在各种癌细胞膜表面(MorreDJ et al.,Free Radical Res.2003；37:795–808)。tNOX可以从癌细胞表面脱落下来并稳定地存在于癌症患者的血液和尿液中，并且针对不同器官来源癌细胞，tNOX在双向电泳上的结果显示差异，据此，人们发展了通过测定血液中tNOX的方法来早期诊断癌症的发生和发生的器官(Brandon Hostetler et al.,Clin Proteom(2009)5:46–51)。但是，利用tNOX的绝对特异性和普遍性的特征，用tNOX的抗体精确标记癌细胞，诱发免疫效应细胞介导的细胞毒性的研究却从未尝试过。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供了一种tNOX抗体及其组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用，解决了癌症不能有效精准治疗的难题。

本发明所解决的技术问题通过以下技术方案来实现：

一种tNOX抗体在制备肿瘤细胞药物中的应用。

tNOX抗体可以单独使用，直接将tNOX抗体注射肿瘤局部或静脉回输以达到杀伤肿瘤的目的。

优选的，所述肿瘤细胞药物还包括tNOX抗体组合物，所述tNOX抗体组合物包括tNOX抗体和免疫细胞。

优选的，所述tNOX抗体的制备方法为：选择全长的人tNOX cDNA序列重组表达tNOX，用于制备tNOX抗体。

优选的，所述tNOX抗体的制备方法为：将肿瘤细胞的培养液进行分离纯化操作得到tNOX，用于制备tNOX抗体。

优选的，所述tNOX抗体的制备方法为：体外合成tNOX的寡聚肽半抗原，将所述寡聚肽半抗原连接到载体蛋白上作为全抗原免疫动物，得到tNOX抗体。

优选的，所述tNOX抗体组合物的制备方法包括以下步骤：

S1：免疫动物，得到多个tNOX抗体的细胞株，分别制备tNOX单克隆抗体；

S2：分别体外培养免疫细胞和肿瘤细胞；

S3：在tNOX抗体存在的环境下，将免疫细胞作用于肿瘤细胞，筛选出介导免疫细胞杀灭肿瘤细胞效果最佳的抗体细胞株；

S4：扩增培养S3中得到的抗体细胞株，大规模制备tNOX抗体；

S5：将S4中得到的tNOX抗体和S2中得到的免疫细胞进行混合得到tNOX抗体组合物。

更优选的，在S2中，所述免疫细胞为NK细胞。

更优选的，在S2中，所述免疫细胞为同源的、半同源的或者异源的免疫细胞。

更优选的，所述tNOX抗体识别癌细胞表面tNOX分子后与所述免疫细胞株上的Fc受体连接。

上述tNOX抗体含有Fc的结构，可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体；

上述tNOX抗体可以是人源化的，也可以是非人源化的抗体；

上述tNOX抗体和免疫效应细胞上的Fc受体的连接可以是直接的同源识别，也可以是间接的连接。

上述免疫细胞可以直接来自于外周血，也可以进一步经过体外培养。

与现有技术相比，本发明具有如下优点或者有益效果：

本发明公开了一种tNOX抗体及其组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用，tNOX抗体可以定位癌细胞，并为免疫细胞提供抗体结合的信号；具有Fc结合受体的免疫细胞借此结合定位在肿瘤细胞上，并被激活，从而释放杀伤因子，杀死癌细胞。tNOX抗体及其组合物制备方法简单且治疗癌细胞的周期短，在实体瘤治疗中有很大的应用价值。

附图说明

利用附图对本发明作进一步说明，但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制。

图1为本发明实施例中tNOX抗体组合物的工作原理图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1

本实施例公开了tNOX抗体组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用。本应用以小鼠肿瘤为对象，tNOX抗体组合物包括tNOX抗体和免疫细胞。该应用的具体步骤如下：

(1)制备tNOX抗体：选择全长的人tNOX cDNA序列重组表达tNOX，免疫小鼠，获得tNOX单克隆抗体库，分别制备抗体；

(2)分别体外培养小鼠NK细胞和小鼠肿瘤细胞；

(3)在各种tNOX抗体存在的环境下，将小鼠NK细胞作用于小鼠肿瘤细胞，筛选出介导NK细胞杀灭肿瘤细胞效果最佳的单抗细胞株；

(4)将筛选得到的抗体细胞株体外培养，制备tNOX抗体；

(5)免疫细胞株和tNOX抗体进行混合得到tNOX抗体组合物。

用同源癌细胞接种小鼠致瘤后，将得到的tNOX抗体组合物每隔三天，直接注射到小鼠肿瘤内部，通过彩超观察肿瘤情况，21天后发现肿瘤细胞块明显缩小，疗效显著。

实施例2

本实施例公开了tNOX抗体组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用，与实施例1相比，唯一区别在于：制备tNOX抗体的方法不同。本实施例中tNOX抗体的制备方法为：将肿瘤细胞的培养液进行分离纯化操作得到tNOX，由此制备抗体。

实施例3

本实施例公开了tNOX抗体组合物在制备肿瘤细胞药物中的应用，与实施例1相比，唯一区别在于：制备tNOX抗体的方法不同。本实施例中tNOX抗体的制备方法为：体外合成tNOX抗体的寡聚肽半抗原，将所述寡聚肽半抗原连接到载体蛋白上作为全抗原免疫小鼠，得到tNOX抗体。

该实施例中tNOX抗体组合物的工作原理图如图1所示，癌细胞相关抗原tNOX的抗体单独存在或与免疫效应细胞共存的条件下，可以诱导细胞毒性效应以杀灭癌细胞。并且tNOX抗体可以定位癌细胞，并为免疫细胞提供抗体结合的信号；具有Fc结合受体的免疫细胞借此结合定位在肿瘤细胞上，并被激活，从而释放杀伤因子，杀死癌细胞。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.tNOX抗体在制备肿瘤细胞药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞药物还包括tNOX抗体组合物，所述tNOX抗体组合物包括tNOX抗体和免疫细胞。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述tNOX抗体的制备方法为：选择全长的人tNOX cDNA序列重组表达tNOX，用于制备tNOX抗体。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述tNOX抗体的制备方法为：将肿瘤细胞的培养液进行分离纯化操作得到tNOX，用于制备tNOX抗体。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述tNOX抗体的制备方法为：体外合成tNOX的寡聚肽半抗原，将所述寡聚肽半抗原连接到载体蛋白上作为全抗原免疫动物，得到tNOX抗体。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述tNOX抗体组合物的制备方法包括以下步骤：

S1：免疫动物，得到多个tNOX抗体的细胞株，分别制备tNOX抗体；

S2：分别体外培养免疫细胞和肿瘤细胞；

S3：在tNOX抗体存在的环境下，将免疫细胞作用于肿瘤细胞，筛选出介导免疫细胞杀灭肿瘤细胞效果最佳的抗体细胞株；

S4：扩增培养S3中得到的抗体细胞株，大规模制备tNOX抗体；

S5：将S4中得到的tNOX抗体和S2中得到的免疫细胞进行混合得到tNOX抗体组合物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在S2中，所述免疫细胞为NK细胞。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在S2中，所述免疫细胞为同源的、半同源的或者异源的免疫细胞。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述tNOX抗体识别癌细胞表面tNOX分子后与所述免疫细胞株上的Fc受体连接。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述连接为同源识别的直接连接。