CN1660048A - 一种具有美容养颜作用的霜剂 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种具有美容养颜作用的霜剂，特别是一种在化妆品中加入生物制剂和中药成分的具有美容养颜作用的霜剂，它包括已知化妆品的主料和化装品附料，其特征是：它的主要成分中还包括α－甘露聚糖肽10％－20％、珍珠粉80％－90％。所述的成分包括有α－甘露聚糖肽10％－20％、珍珠粉10％－70％、茶多酚10－80％。所述的成分包括有α－甘露聚糖肽10％－30％、珍珠粉10％－30％、茶多酚10％－40％、玻璃酸钠10％－30％。这种具有美容养颜作用的霜剂，它根据皮肤衰老发生的机理，从各个不同的侧面，科学组方，研制一种对抗和延缓皮肤衰老的进程，最终达到对皮肤营养、保湿、抗皱、美白、消斑和养颜等功效的化妆品。
Description
所属技术领域
本发明属于一种具有美容养颜作用的霜剂，特别是关于一种在化妆品中加入生物制剂和中药成分的具有美容养颜作用的霜剂。
背景技术
青少年的皮肤白皙细腻，红润光泽，富有弹性，随着年龄的增长，皮肤开始自然衰老，加之精神、营养、内分泌、药物及紫外线照射等作用，可加速皮肤的老化，表现为面色萎黄粗糙，弹性减退，皮肤萎缩，皱纹显现及色素沉着等。皮肤衰老的原因很多，但其主要原因是与自由基对皮肤的损害有着密切关系。前述皮肤老化因素可在体内产生大量自由基，通过过氧化作用，最后造成细胞组织功能及细胞形态结构损害，表现为皮肤变性、萎缩、粗糙无光、弹性减退、出现皱纹。
皮肤衰老的特征与机理：①皮肤衰老的实质是皮肤细胞增殖、代谢能力衰退；②皮肤组织的细胞外基质，主要是胶原，弹性蛋白，粘多糖及结构糖蛋白等结缔组织，也包括类脂质及某些天然保湿因子，它们维持着皮肤的屏障功能与水合作用。随着皮肤的衰老，这些细胞外基质在含量上和质量上也发生改变；③紫外线引起的光性老化被证明是皮肤衰老最为主要的因素。紫外线能引起表皮层维生素A的含量下降，另外紫外辐射时，有自由基对组织细胞的损害以及蛋白水解酶对结缔组织的降解等问题；离子和低能辐射产生的活性氧自由基对皮肤脂质、蛋白质、生物膜有损害作用；④环境污染引起皮肤过敏炎症反应，可加速皮肤衰老的进程。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有美容养颜作用的霜剂，它根据皮肤衰老发生的机理，从各个不同的侧面，科学组方，研制一种在化妆品中加入生物制剂和中药成分的具有美容养颜作用的霜剂，对抗和延缓皮肤衰老的进程，最终达到对皮肤营养、保湿、抗皱、美白、消斑和养颜等功效的化妆品。
本发明的技术方案是：设计一种具有美容养颜作用的霜剂，它包括已知化妆品的主料和化装品附料，其特征是：它的主要成分中还包括α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉80％-90％。
所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉10％-70％、茶多酚10-80％。
所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-30％、珍珠粉10％-30％、茶多酚10％-40％、玻璃酸钠10％-30％。
所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉10％-30％、茶多酚10％-20％、玻璃酸钠10％-20％、抗氧化清除自由基的中药10％-30％。
所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉5％-20％、茶多酚5％-10％，玻璃酸钠10％-20％、抗氧化清除自由基的中药10％-30％、抗紫外线辐射的中药10％-40％。
所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉5％-10％、茶多酚1％-20％、玻璃酸钠5％-20％、抗氧化清除自由基的中药10％-20％、抗紫外线辐射的中药15％-30％、抗炎抗过敏的中药15％-30％。
所述的抗氧化清除自由基的中药有：五味子、当归、冬虫夏草、绿茶、银杏、丹参、厚朴、大枣、太子参、酸枣仁、地黄；所述的抗紫外线辐射的中药有：柴胡、黄芩、川芎、人参、灵芝、三七、万年青；所述的抗炎抗过敏的中药有：葛根、黄芩、枳实、甘草、乌梅、地龙、丹皮、紫河车、黄芪、汉防己、丝瓜藤、石苇、麻黄、苍术、浮萍、夜交藤、白蒺藜。
所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉300g、玻璃酸钠200g、五味子30g、当归30g、冬虫夏草30g、绿茶25g、银杏40g、丹参20g、厚朴20g、大枣35g、太子参30g、酸枣仁20g、地黄20g。
所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉130g、茶多酚100g、玻璃酸钠135g、五味子20g、当归10g、冬虫夏草10g、绿茶25g、银杏30g、丹参20g、厚朴20g、大枣35g、太子参30g、酸枣仁20g、地黄20g、柴胡35g、黄芩20g、川芎30g、人参20g、灵芝25g、三七25g、万年青40g。
所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉100g、茶多酚100g、玻璃酸钠85g、五味子15g、当归10g、冬虫夏草10g、绿茶20g、银杏20g、丹参10g、厚朴10g、大枣15g、太子参20g、酸枣仁20g、地黄20g、柴胡20g、川芎15g、人参30g、灵芝25g、三七30g、万年青45g、葛根5g、黄芩10g、枳实5g、甘草20g、乌梅15g、地龙10g、丹皮20g、紫河车10g、黄芪10g、汉防己10g、丝瓜藤15g、石苇5g、麻黄5g、苍术5g、浮萍15g、夜交藤10g、白蒺藜10g。
本发明特点是：α-甘露聚糖肽是一种生物反应调节剂，能快速渗入皮肤内部，对局部微环境进行调节，使细胞内外环境处于平衡状态，维持细胞正常的代谢和功能，增强皮肤的抗感染、抗过敏及应激功能等；珍珠粉含有大量角壳蛋白、微量元素及多种氨基酸，能提高SOD、GSP-PX的活性，加速清除细胞因过氧化产生的自由基，抑制由自由基引起的生物膜脂质过氧化反应(自由基能损伤蛋白质，主要是通过修饰氨基酸残基，引起蛋白质结构和构象的改变，造成肽链断裂、聚合和交联，使胶原蛋白僵硬，失去弹性和膨胀性，使皮肤出现皱纹。)。另外，珍珠粉还能促进皮肤的创伤修复过程，增强皮肤细胞对营养物质的通透性，改善皮肤层的贮水功能，使水分在皮肤细胞内外呈衡态分布等；茶多酚具有与蛋白质、多糖、生物碱结合的能力，令人产生收敛的感觉，对皮肤有很好的附着能力，可使粗大的毛孔收缩，使松弛的皮肤绷紧而减少皱纹，还可减少油腻性皮肤皮脂的过度分泌。茶多酚还有很强的抗氧化能力，对UVA和UVB有很强的过滤作用，减少紫外线对皮肤的损伤，能抑制酪氨酸酶的活性，减少黑色素细胞的代谢强度，减少黑色素的形成，具有皮肤美白作用，对病毒、细菌、真菌等多种微生物，特别是对皮肤致病菌有抑制能力，有消炎的作用，并能促进细胞新陈代谢，培养皮肤活力，使其保持年轻细腻；玻璃酸钠具有保水、减缓角质细胞分化、清除自由基作用等功能；人参、茯苓能提高SOD活性，清除自由基，与柴胡同有抗紫外线辐射的作用，以阻止皮肤老化，有利于皮肤再生与修复；葛根、黄芩均能不同程度抗炎症、抗过敏、提高免疫功能，以减少自由基产生，清除皮肤老化或黑斑的诱发因素。
具体实施方式
由于本发明将α-溶血链球菌菌种搭载返回式太空飞行器(宇宙飞船或返回式卫星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射线、交变磁场、高真空、高热深冷等因素的综合作用，使菌株的DNA双链结构断裂，基因组发生重排，从而产生新的菌株。返回地面后，对经过太空搭载的菌株进行培养和筛选，通过研究其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、遗传稳定性、中试生产指标等内容，优选出其中的正变异、遗传特性稳定的菌种，经培养发酵后得到治疗溃疡性结肠炎的药物。该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。
特别是α-溶血链球菌D33菌株经太空搭载诱变，地面上的筛选、分离和纯化后，选育出发酵单位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高产、优质菌株T33株。通过中国科学院微生物研究所对T33菌株及D33菌株的全细胞蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析和菌株的基因组DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比较，可以证明空间诱变及地面筛选出的T33菌株其基因有变异。该突变菌株在遗传上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比国家标准(80％)提高3至5倍，西安市药品检验所送样测定达到271.6％，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上。该菌种经过神舟系列飞船航天搭载太空诱变，由北京中科院微生物所和西北大学生物系对菌种进一步筛选培养育种形成遗传性质稳定，变异特征明显的高产高效菌种。该菌种每发酵单位中α-太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽含量提高了几倍以上。(见附件材料
1：陕西省科学技术厅陕西省科学技术成果鉴定证书材料
附件材料2：太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株经“神舟三号”飞船搭载公证书。
附件材料3：太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株经“神舟三号”飞船搭载返回地面筛选报告
附件材料4：中国科学院微生物所关于“神舟三号”飞船搭载太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株与地面对照菌的形态生理生化鉴定报告书
附件材料5：中国科学院微生物所关于“神舟三号”飞船搭载太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株与地面对照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鉴定报告书
附件材料6：陕西省药品检验所“神舟三号”太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽口服液检测报告
附件材料7：科技查新报告复印件
附件材料8：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种保藏受理通知书)
本发明菌种选育：在α-溶血链球菌生长规律的基础上，选定较合适生长时期的菌种，采用平皿生长的菌落、浸入其它物质中的菌悬液、带菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭载“神舟三号”宇宙飞船。在太空轨道(近地点高度200公里、远地点高度350公里)进行了6天零18小时的在轨飞行。太空的特殊条件主要体现为微重力、高真空、高辐射、交变磁场等特殊环境。在外层空间飞行的菌种被置于一个与地球上的生态环境完全不同的环境中，主要包括来自磁场俘获的电子、质子及低能重粒子；来自银河系的宇宙射线如质子、粒子及更重的高能重粒子；来自太阳磁暴的质子及重粒子等。这些粒子作用于微生物细胞核中的DNA双链结构，可导致双链断裂。微重力、高真空环境可使DNA的碱基序列发生重组，即基因组的重组和变异。变异后产生的新菌株，其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、中试生产指标等均会发生不同程度的变化。在宇宙飞船返回地面后，经过进一步筛选，仅优选出其中0.2％的正变异且遗传特性稳定的菌株，经培育制成生产菌种。这种经航天搭载诱变后选育出的菌种已经在在2003年12月29日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。
实验及中试生产结果表明，经空间诱变后的新型太空菌种在遗传特性上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比国家标准(80％)提高3至5倍，西安市药品检验所送样测定达到271.6％，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上，发酵周期大大缩短。
制备方法：
太空诱变菌种生产甘露聚糖肽的制备过程：
本发明所述的太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽是由以下方法制备：太空菌种制备---一级发酵---二级发酵-----发酵液提纯，最终生产出甘露聚糖肽。
①太空菌种制备：
以经过空间诱变育种精心选育的α-溶血链球菌作为生产菌种。
A.斜面种子培养基：牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％，琼脂3％，绵羊血8％；pH7.4。
斜面种子培养基灭菌温度121℃，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。
启封菌种冷冻管，用无菌肉汤培养基稀释，在无菌条件下接入血斜面，接种后置38℃恒温培养30小时。
B.肉汤种子培养基：牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％；pH7.4。
肉汤种子培养基灭菌温度121℃，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。
将培养好的斜面菌种在无菌条件下按9％接种量，接入肉汤种子培养基内，38℃恒温培养30小时。
②发酵过程：
发酵培养基：牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％。
发酵培养基灭菌温度121℃，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。
A.一级发酵罐：将优良的肉汤菌种在无菌条件下按10％接种量，接入一级种子罐，在29℃恒温培养30小时，罐压不超过0.02Mpa，通气量以能翻动培养液为宜，连续充分搅拌。
B.二级发酵罐：将一级发酵培养液在无菌条件下按20％接种量，接入发酵罐，在29℃恒温培养70小时，罐压不0.02Mpa，灭活放罐。
灭活采用加温使发酵液温度达到100℃，保温60分钟，冷却静置。
③提取过程：
a、发酵液进行浓缩，使浓缩液体积与发酵液体积比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。
b、发酵液的浓缩液加入80-99％乙醇，体积量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分搅拌静置后，离心去除上清液，沉淀用蒸馏水溶解，调pH5.0，得到溶解液并将溶解液静置。
c、再将溶解液离心去除杂质得到上清液，准确量取清液体积，按上清液体积计算出所需乙醇量，调pH值，将乙醇缓慢加入到上清液中，并充分搅拌，静置后离心去除上清液得到沉淀物。
d、沉淀物再用蒸馏水溶解，调pH，离心，上清液再加乙醇沉淀。这样的工艺反复操作至中间检测合格为止，得到的沉淀物为太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽粗品。真空干燥3-8小时，即得到太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽产品。
上述方法得到的产品的检验：
[性状]本品为白色或微黄色无定形粉末；无臭、无味。
本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。
比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录vI E)，比旋度为+70℃至+80℃。
[鉴别]1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，摇匀，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，数分钟后，界面呈紫红色。
2、取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，取约10ul点于滤纸上，晾干，用无水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解后。加0.2mol/L醋酸钠溶液1.5ml与乙醇100ml，混匀即得。置暗处保存，可使用数月)中浸泡5分钟，取出，用70％乙醇溶液冲洗，置还原液(取碘化钾5g，硫代硫酸钠5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L盐酸液2.5ml，随加随搅拌，临用时配)中浸泡5分钟，取出，用70％乙醇溶液冲洗，置品红业硫酸试液中浸泡约30分钟，取出，用焦亚硫酸钠溶液(取焦亚硫酸钠0.4g，加盐酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，冲洗，晾干，在滤纸片点样处应呈紫红色。
3、取供试品和对照品适量，分别加氯化钠注射液制成每1ml中含1mg的溶液作为供试品溶液和对照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性测定法试验，供试品和对照品管应均无溶血发生。
[检查]1、酸度：取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录VIH)，pH值应为3.0-5.0。
2、吸收度：取本品，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录VIA)，在260nm的波长处，其吸收度不得大于0.25，在280nm的波长处，其吸收度不得大于0.20。
3、总氮量：取本品，照氮测定法(中国药典2000年版二部附录VIID第二法测定。按干燥品计算，含总氮量应为0.8-2.0％。
4、免疫原性：取供试品和对照品适量，分别加氯化钠注射液制成每1ml中含10mg的溶液，再分别用磷酸盐缓冲液制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀释液作为供试品溶液和对照品溶液，依法检查(附甘露聚糖肽免疫原性测定法)，供试品不溶血管的最低浓度应不得高于对照品相应浓度的一倍以上。
5、干燥失重 取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版二部附录VIIIL)。
6、重金属 取本品，在1.0g，依法检查(中国药典2000年版VIIIH)含重金属不得过百万分之二十。
7、异常毒性 取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含0.5mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版附录XIC)。按静脉注射法给药，应符合规定(供注射用)。
[含量测定]
1.对照品溶液的制备
精密称取经105℃干燥至恒重的D-甘露糖对照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。摇匀；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，摇匀。每1ml中含甘露糖500ug。
2.供试品溶液备
取本品适量，精密称定，加水溶解制成每1ml中含40ug的溶液。
3.标准曲线的制备
精密称取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，摇匀，冲入硫酸4.5ml，摇匀，放置于室温，以0管为空白。照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)在490nm的波长处测定吸收度。以甘露糖ug数对相应的吸收度，计算回归方程。
4.测定法
精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线制备项下自“再加3％苯酚溶液1.0ml”起依法操作，测定吸收度，由回归方程计算甘露糖含量。
甘露聚糖肽免疫原性测定法(补体结合法)；
1、试液
A.酸盐缓冲液(pH7.2)
取氯化钠8.5g、磷酸氢二钠0.565g及磷酸二氢钾0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸镁溶液1ml，摇匀。
B.1％羊红细胞悬液
羊血红细胞的制备：由绵羊颈静脉无菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸钠8.0g、氯化钠4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000ml使溶解，100℃灭菌30分钟)的无菌容器中，4℃保存。
1％羊血红细胞悬液的制备：取上述羊血红细胞适量，用氯化钠注射液洗涤三次，每次离心5分钟(2000转/分)，取压积羊血红细胞，用氯化钠注射液制成1％羊血红细胞悬液。取悬液，用氯化钠注射液稀释20倍制成供试品溶液，另取等量悬液加水稀释20倍作为空白溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，在541nm的波长处测定，其吸收度应为0.65-0.70，如超出限度应调节1％羊红细胞悬液的浓度。
C.溶血素及致敏羊血红细胞
溶血素的制备：取上述压积羊血红细胞，用氯化钠注射液制成25％羊血红细胞悬液。取家兔1只，静脉注射上述羊血红细胞悬液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分离血清，56℃。30分钟灭活，分装，0℃以下保存。
溶血素单位的测定：取溶血素适量，加磷酸盐缓冲液分别制成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀释液，各取0.1ml置试管中，加1％羊血细胞悬液0.1ml，摇匀，加稀释度为1∶30的豚鼠血清(补体)0.2ml及磷酸盐缓冲液0.2ml，摇匀，37℃保温30分钟，完全溶血管的最高稀释度为1单位溶血素。
致敏羊血红细胞的制备：临用前，将2％的羊血红细胞悬液与2单位溶血索等体积混合，37℃保温15分钟即得。
补体：取三只以上的豚鼠，心脏采血，离心分离血清，0℃以下保存。
补体单位的测定：取补体适量，加磷酸盐缓冲液，分别制成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀释液，各取0.2ml置试管中，加0.2ml磷酸盐缓冲液，摇匀，37℃保温30分钟后，分别加致敏羊血红细胞0.2ml，摇匀，37℃再保温30分钟。完全溶血管的最高稀释度为1单位的补体。
抗体：取甘露聚糖肽对照品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含10mg的对照品溶液免疫家兔，隔日采用耳静脉注射对照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射后三日采血，离心分离血清，56℃下30分钟灭活，分装，0℃以下保存(临用前，需56℃30分钟再次灭活)。
抗体单位的测定：取抗体适量，加磷酸盐缓冲液分别制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128的稀释液，各取0.1ml置试管中，加甘露聚糖肽对照品溶液0.1ml及2单位补体0.2ml，摇匀，于4-8℃放置4小时以上，置37℃保温30分钟，不溶血管的最高稀释度为1单位抗体。同时设抗原(不加抗体，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、抗体(不加抗原，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、补体(不加抗原，抗体，以0.2ml磷酸盐缓冲液代替)对照管，以上三种对照管应全溶血；另设的致敏羊血红细胞(不加抗原、抗体和补体，以0.4ml磷酸盐缓冲液代替)对照管应不溶血。
2、免疫原性测定法
取甘露骤糖肽对照品与供试品适量，照药品项下的规定制成不同浓度的对照品溶液和供试品溶液，各取0.1ml置试管中，加入2单位抗体0.1ml及2单位补体0.2ml。摇匀，于4-8℃放置4小时以上，置37℃保温30分钟，加入致敏羊血红细胞0.2ml，摇匀，37℃再保温30分钟。观察各管的溶血情况，不溶血管的最低浓度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同时设抗原(不加抗体，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、抗体(不加抗原，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、补体(不加抗原、抗体、以0.2ml磷酸盐缓冲液代替)对照管，以上三种对照管应全溶血：另设的致敏羊血红细胞(不加抗原、抗体和补体，以0.4ml磷酸盐缓冲液代替)对照管应不溶血。
实施例1：取上述药物α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉300g、玻璃酸钠200g、五味子30g、当归30g、冬虫夏草30g、绿茶25g、银杏40g、丹参20g、厚朴20g、大枣35g、太子参30g、酸枣仁20g、地黄20g。制备时将以上中药浓煎两次→合并药汁→过滤→与α-甘露聚糖肽、珍珠粉、茶多酚、玻璃酸钠混匀→加入适当辅料→搅拌均匀使成为O/W型霜剂→质检合格→分装、成品。
具体生产过程和辅料成分比例按照中华人民共和国药典2000版一部霜剂的制备工艺(见国家药典委员会编，化学工业出版社出版)和化妆品标准执行。
其它实施例与实施例1生产过程完全相同，辅料加入也相同，只是药物组方不同。
实施例2的药物组方是：所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉130g、茶多酚100g、玻璃酸钠135g、五味子20g、当归10g、冬虫夏草10g、绿茶25g、银杏30g、丹参20g、厚朴20g、大枣35g、太子参30g、酸枣仁20g、地黄20g、柴胡35g、黄芩20g、川芎30g、人参20g、灵芝25g、三七25g、万年青40g。
实施例3的药物组方是：所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉100g、茶多酚100g、玻璃酸钠85g、五味子15g、当归10g、冬虫夏草10g、绿茶20g、银杏20g、丹参10g、厚朴10g、大枣15g、太子参20g、酸枣仁20g、地黄20g、柴胡20g、川芎15g、人参30g、灵芝25g、三七30g、万年青45g、葛根5g、黄芩10g、枳实5g、甘草20g、乌梅15g、地龙10g、丹皮20g、紫河车10g、黄芪10g、汉防己10g、丝瓜藤15g、石苇5g、麻黄5g、苍术5g、浮萍15g、夜交藤10g、白蒺藜10g。
本发明所述这种具有美容养颜作用的霜剂的皮肤刺激性试验：选2.5-3.0kg健康家兔6只，每只兔子背部左右对称选3处剃毛2.5cm2，以自身对照试验法进行，每次涂0.5g霜剂或空白基质，每天两次，左侧或右侧随机给药，观察并记录24h、72h后皮肤的反应现象。结果表明：涂药24h、72h后未见皮肤发红、发疹、水疱等局部刺激反应，说明本发明所述美容养颜霜剂是绝对安全，无任何不良反应的。
动物药效学研究
皮肤皱纹是人体衰老常见的征象之一。皮肤组织的主要成分为胶原蛋白，而胶原蛋白中特有的羟脯氨酸含量的多少及皮肤中其他一些氨基酸的含量多少与皮肤衰老密切相关。
1 实验材料
1.1 试剂
本发明所述六种霜剂、α-甘露聚糖肽由本公司提供；玉兰油营养菁华霜为市售商品；乙二醇：山东省化学研究所；丙酮：常州市万达试剂厂产；苯甲醇：上海试剂一厂产；氢氧化钠：中国化学试剂三厂；柠檬酸：中国化工站试验厂；氯化钠：青岛四方区化学试剂厂产；柠檬酸钠：沈阳试剂一厂；正辛酸：北京化工厂；三氯化肽：日本产；硫二甘醇：日本产；巯基乙酸：上海第二军医大学制药厂；定量滤纸约9cm：杭州新华造纸厂。
1.2 仪器
40型无级调速电动搅拌机：江苏江阴科研器械厂出品；B70-30型电动吸引器：上海医院设备厂出品；202-2型电热干燥箱：上海市上海县实验仪器厂出品；835型氨基酸自动分析仪：日本产。
1.3 动物：昆明种小鼠由第四军医大学实验动物中心提供。
2 方法与结果
取昆明种小鼠90只，雌雄各半，体重为18-22g，按性别和体重随机分成9组，分别为：空白对照组，本发明所述第一种霜剂组，本发明所述第二种霜剂组，本发明所述第三种霜剂组，本发明所述第四种霜剂组，本发明所述第五种霜剂组，本发明所述第六种霜剂组，α-甘露聚糖肽粉组，玉兰油营养菁华霜组。将各供试品2g以水调糊，分别均匀涂抹在各组小鼠背部，涂抹面积4cm×3cm，每日一次，连续35天。于末次涂抹后24小时，将各组小鼠背部受试区的毛剃去(以免毛发中的蛋白质干扰)并将该区的皮肤剪下，清除皮肤脂肪等组织后，蒸馏水冲洗滤纸拭干，置37℃烘箱中干燥24小时，取出剪碎并以丙酮脱脂48小时，然后用高速匀浆器打成匀浆，再置37℃烘箱中干燥24小时，即成供测定用的样品。取样品40mg，在110℃下盐酸水解，80℃水浴中蒸发脱酸，再加0.02mol/L盐酸溶解后，用日本产835-50型氨基酸自动分析仪进行羟脯氨酸等多种氨基酸含量的测定。结果见表1、2。
表1各种霜剂对小鼠皮肤羟脯氨酸含量的影响
| 组别 | 动物数 | 羟脯氨酸含量(g/100g) |
| 空白对照组本发明所述第一种霜剂组本发明所述第二种霜剂组本发明所述第三种霜剂组本发明所述第四种霜剂组本发明所述第五种霜剂组本发明所述第六种霜剂组α-甘露聚糖肽粉组玉兰油营养菁华霜组 | 101010101010101010 | 1.46±0.142.10±0.26**2.17±0.40**2.23±0.45**2.31±0.4***235±0.57***2.40±0.47***1.55±0.171.67±0.25 |
注：与空白对照组比较**P＜0.10，***P＜0.001。
表2各种霜剂对小鼠皮肤甘、谷、脯氨酸含量(g/100g)的影响
| 组别 | 动物数 甘氨酸 谷氨酸 脯氨酸 |
| 空白对照组本发明所述第一种霜剂组本发明所述第二种霜剂组本发明所述第三种霜剂组本发明所述第四种霜剂组本发明所述第五种霜剂组本发明所述第六种霜剂组α-甘露聚糖肽粉组玉兰油营养菁华霜组 | 10 8.91±1.14 9.99±0.82 3.57±0.4010 10.10±0.6** 11.47±0.97* 4.02±0.16*10 10.17±0.43** 11.51±1.20* 4.11±0.23*10 10.23±0.57** 12.10±0.89** 4.24±0.29**10 10.31±0.88*** 12.21±1.13** 4.30±0.37**10 10.40±0.69*** 12.40±1.42** 4.41±0.39**10 10.47±0.75*** 12.81±1.64** 4.45±0.65**10 8.95±1.21 10.04±0.21 3.60±0.2110 8.93±0.65 10.13±0.64 3.59±0.46 |
注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表1、2的实验数据表明：本发明所述的六种霜剂能使小鼠皮肤中羟脯氨酸、甘氨酸、谷氨酸及脯氨酸的含量显著升高，且随着配方的加强，上述氨基酸的含量也随之逐渐升高。应用α-甘露聚糖肽和玉兰油营养菁华霜的小鼠，其皮肤中上述氨基酸的含量仅有细微的升高，与空白对照组相比无显著差异。上述实验结果表明：本发明所述的六种霜剂在减少皱纹形成、延缓皮肤衰老进而达到美容养颜的功效上显著优于单用α-甘露聚糖肽和玉兰油营养菁华霜。
本发明所述的霜剂的疗效验证：刘某某，女，38岁，干部。诉每年春天脸部经常会出现红色，米粒大的痘痘，很难消失，考虑可能与花粉等过敏原有关。近一年来，面部皮肤晦暗，毛孔粗大，还出现黄褐色斑块，日晒后色斑明显加重。曾用过几种祛斑美白产品，但效果不佳。用本发明所述美容养颜霜剂，每日两次，于早晚洁面后涂于面部。20天后，自觉皮肤紧绷有弹性，触之柔滑细腻，肤色较以前有光泽，色斑颜色变淡，面积比用药前淡化了约4cm2，继续用药2个月(2个疗程)，皮肤红润白嫩，富有光泽，柔滑细腻，色斑消失。
随访一年色斑无复发，春季面部皮肤未见过敏反应出现。
本发明所述霜剂的疗效统计：志愿受试者50例，男17例，女33例，年龄最小者17岁，最大者67岁，平均年龄34.76岁。干性皮肤41例，其中鱼鳞病4例，中性皮肤6例和油性皮肤3例。每例受试者使用本发明所述美容养颜霜剂，每日早晚洁面后各用0.5g左右涂于颜面轻轻柔搽，连续使用一个月(一个疗程)。效果判定标准：优：自觉舒适、客观体征(干燥、鳞屑、红斑等)消失；良：自觉不适和客观体征(干燥、鳞屑、红斑等)消失≥2/3；差：使用前后未见明显改变。结果：50例中，效果判定优者46例，占92％；鱼鳞病受试者4例，使用后皮肤症状缓解，效果判定良者4例，占8％，总有效率为100％。全部受试者无1例出现不良反应。
另外对268例黄褐斑患者的治疗资料进行统计如下：268例受试者均为女性，年龄最小的20岁，最大的48岁，平均年龄36.5岁。病程最短6个月，最长16年。妊娠后起病138例，化妆品引起62例，伴肝病16例，余为原因不明。其中部分病例伴有月经不调。每例受试者使用本发明所述美容养颜霜剂，每日早晚洁面后各用0.5g左右涂于颜面轻轻柔搽，连续使用2个月。效果判定标准：治愈：黄褐斑完全消失，皮肤颜色正常；显效：黄褐斑消失50％以上；有效：黄褐斑减少不足50％，斑块颜色变浅；无效：色斑消失不及20％或变化不明显者。结果：治愈104例，占38.88％；显效82例，占30.55％；有效52例，占19.44％；无效30例，占11.2％，统计总有效率为88.8％。
Claims (10)
1、一种具有美容养颜作用的霜剂，它包括已知化妆品的主料和化装品附料，其特征是：它的主要成分中还包括α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉80％-90％。
2、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉10％-70％、茶多酚10-80％。
3、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-30％、珍珠粉10％-30％、茶多酚10％-40％、玻璃酸钠10％-30％。
4、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉10％-30％、茶多酚10％-20％、玻璃酸钠10％-20％、抗氧化清除自由基的中药10％-30％。
5、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉5％-20％、茶多酚5％-1％，玻璃酸钠10％-20％、抗氧化清除自由基的中药10％-30％、抗紫外线辐射的中药10％-40％。
6、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述的成分包括有α-甘露聚糖肽10％-20％、珍珠粉5％-10％、茶多酚10％-20％、玻璃酸钠5％-20％、抗氧化清除自由基的中药10％-20％、抗紫外线辐射的中药15％-30％、抗炎抗过敏的中药15％-30％。
7、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述的抗氧化清除自由基的中药有：五味子、当归、冬虫夏草、绿茶、银杏、丹参、厚朴、大枣、太子参、酸枣仁、地黄；所述的抗紫外线辐射的中药有：柴胡、黄芩、川芎、人参、灵芝、三七、万年青；所述的抗炎抗过敏的中药有：葛根、黄芩、枳实、甘草、乌梅、地龙、丹皮、紫河车、黄芪、汉防己、丝瓜藤、石苇、麻黄、苍术、浮萍、夜交藤、白蒺藜。
8、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉300g、玻璃酸钠200g、五味子30g、当归30g、冬虫夏草30g、绿茶25g、银杏40g、丹参20g、厚朴20g、大枣35g、太子参30g、酸枣仁20g、地黄20g。
9、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉130g、茶多酚100g、玻璃酸钠135g、五味子20g、当归10g、冬虫夏草10g、绿茶25g、银杏30g、丹参20g、厚朴20g、大枣35g、太子参30g、酸枣仁20g、地黄20g、柴胡35g、黄芩20g、川芎30g、人参20g、灵芝25g、三七25g、万年青40g。
10、根据权利要求1所述的一种具有美容养颜作用的霜剂，其特征是：所述霜剂中含药成分是每1000g药中含有α-甘露聚糖肽200g、珍珠粉100g、茶多酚100g、玻璃酸钠85g、五味子15g、当归10g、冬虫夏草10g、绿茶20g、银杏20g、丹参10g、厚朴10g、大枣15g、太子参20g、酸枣仁20g、地黄20g、柴胡20g、川芎15g、人参30g、灵芝25g、三七30g、万年青45g、葛根5g、黄芩10g、枳实5g、甘草20g、乌梅15g、地龙10g、丹皮20g、紫河车10g、黄芪10g、汉防己10g、丝瓜藤15g、石苇5g、麻黄5g、苍术5g、浮萍15g、夜交藤10g、白蒺藜10g。
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