CN107890441B - 一种提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种提取物及其制备方法与应用。本发明以灵芝对红花和丹参进行生物转化，获得的发酵产物经提取获得的提取物能够抑制衰老成纤维细胞中β‑半乳糖苷酶的产生，提高成纤维细胞衰老过程中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的基因表达，具有抵抗皮肤衰老的效果，该效果经验证显著(p<0.05)优于现有的植物提取物或它们的组合。

Description

一种提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种提取物及其制备方法与应用。
背景技术
现代社会，随着经济文明的发展，手机、电脑、电视等电子设备，在人类生活中已经称为生活的组成部分，不可或缺，而这些电子设备的辐射，正在不断的加速人类皮肤细胞的衰老；同时随着制冷设备的普及应用，及环境的污染，造成臭氧层的严重破坏，导致太阳辐照到地表的强度加强，从而引起人类皮肤的衰老问题也日益严重。
皮肤的衰老现象主要表现在两个方面：1.皮肤组织衰退。皮肤的厚度随着年龄的增加而有明显改变。人的表皮20岁时最厚，以后逐渐变薄，到老年期颗粒层可萎缩至消失，棘细胞生存期缩短。表皮细胞核分裂增加，故黑色素亦增多，以致老年人的肤色多为棕黑色。由于老化细胞附着于表皮角质层，使皮肤表面变硬，失去光泽。真皮在30岁时最厚，以后渐变薄并伴有萎缩。皮下脂肪减少，并由于弹力纤维与胶原纤维发生变化而渐失皮肤弹性和张力，更进一步导致皮肤松弛与皱纹产生。2.生理功能低下。皮脂腺、汗腺功能衰退，汗液与皮脂排除减少，皮肤逐渐失去昔日光泽而变得干燥。血液循环功能减退以补充皮肤必要的营养，因此老年人皮肤伤口难愈合。
人们不断的研制各类抑制皮肤衰老的制剂，其中以中医理论为基础的中药学称为研究热点之一。中医膏方为中医药文化的重要遗产，已有非常悠久的历史。传统膏方从诞生至今，已有近千年的历史，在延缓衰老方面，颇有研究。研究发现，中药材在发挥延缓衰老方面的效果存在以下亟待解决的问题，1、有显著效果的中药材，往往存在资源稀缺的问题；2、资源丰富的药材又往往存在，效果不够显著，或量效比过大，不方便使用的问题。
因此，筛选出具有协同作用的、常见的资源丰富的中药材用以制备具有抗衰老作用的产品，具有非常重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种提取物及其制备方法与应用，本发明提供的提取物能够抑制衰老成纤维细胞中β-半乳糖苷酶的产生，提高成纤维细胞衰老过程中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的基因表达，具有抵抗皮肤衰老的效果。
本发明提供的发酵产物，以红花、丹参、水和灵芝液态菌种制得。。
本发明以灵芝对红花和丹参进行生物转化，发酵产物包括经转化的红花、丹参和灵芝菌丝。经验证，发酵产物中含有多种生物活性物质，能够抑制β-半乳糖苷酶的产生，促进Ⅰ型胶原蛋白基因和Ⅲ型胶原蛋白基因的表达。发酵基质中，红花与丹参的质量比为(1～99)：(1～99)。所述红花与丹参的质量之和与水的质量比为1：(1.5～2.5)。作为优选，发酵基质中，红花与丹参的质量比为(70～90)：(10～30)。在本发明实施例中，所述红花与丹参的质量比为(1～19)：(9～1)。一些具体实施例中，所述红花与丹参的质量比为1：9。一些具体实施例中，所述红花与丹参的质量比为19：1。一些具体实施例中，所述红花与丹参的质量比为4：1。
本发明中，所述的用灵芝进行微生物转化为将灵芝进行双态发酵培养法微生物转化，即将灵芝通过液态发酵培养方式培养获得液态菌种，之后接种至由红花、丹参和水制成的固态培养基中进行固态发酵培养。在本发明实施例中，所述菌种为灵芝液态菌种，接种量为1％～10％。一些具体实施例中，所述菌种为的接种量为1％。一些具体实施例中，所述菌种为的接种量为10％。一些具体实施例中，所述菌种为的接种量为5％。
本发明中，采用的灵芝菌种隶属菌物界担子菌门，层菌纲，灵芝菌科，灵芝菌属。本发明所涉及的灵芝菌，为广布种，是现代技术中已知菌种，并可以从商业途径获得。
本发明发酵产物的制备方法包括：将红花与丹参粉碎后，与水混合，接种灵芝液态菌种，10℃～35℃发酵5～18天，制得所述发酵产物。
本发明实施例中，所述基质为将红花与丹参粉碎后，与水混合、灭菌制得。所述粉碎的粒度为为10目～60目。一些具体实施例中，粒度为40目～60目。一些具体实施例中，粒度为25目～35目。
本发明实施例中，所述灵芝液态菌种的制备方法为：将灵芝菌种接种于液体培养基于10℃～35℃培养5～15天得灵芝液态菌种。
一些具体实施例中，所述灵芝液态菌种的制备方法为：将灵芝菌种(接种量为2％)接种于液体培养基于29℃～35℃培养5天得灵芝液态菌种。
一些具体实施例中，所述灵芝液态菌种的制备方法为：将灵芝菌种(接种量为2％)接种于液体培养基于10℃～25℃培养15天得灵芝液态菌种。
一些具体实施例中，所述灵芝液态菌种的制备方法为：将灵芝菌种(接种量为2％)接种于液体培养基于10℃～35℃培养8～10天得灵芝液态菌种。
本发明中，所述液体培养基的制备方法为：每千克土豆与5kg水混合，煮汁，汁液中加入20wt％的葡萄糖，5wt％的蛋白胨，1wt％的磷酸二氢钾，126℃灭菌30分钟，冷却即得。
本发明中，基质接种灵芝液态菌种后的发酵为固态发酵。一些实施例中，发酵的条件为29℃～35℃发酵5天。一些实施例中，发酵的条件为10℃～15℃发酵18天。一些实施例中，发酵的条件为22℃～29℃发酵12天。
本发明提供的发酵产物的制备方法，利用灵芝液态菌种对红花和丹参进行生物转化，所得发酵产物包括经转化的红花、丹参和灵芝菌丝。
本发明提供的提取物的制备方法包括：将本发明所述的发酵产物经煎煮获得提取液，所述提取液经浓缩后与丙二醇和/或甘油混合，85℃～95℃保温30min。
本发明实施例中所述煎煮的溶剂为水或乙醇水溶液，所述溶剂的质量为所述发酵产物的6～18倍；所述煎煮的温度为40℃～95℃；时间为1～3h；所述煎煮的次数为2次。所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为10％。本发明中，当煎煮次数大于1次时合并提取液。
所述浓缩前还包括，将提取液于4℃～10℃静置10～28h的步骤。
本发明实施例中，浓缩至质量为所述发酵产物的1～1.1倍。
一些实施例中，所述煎煮的溶剂为体积分数为10％的乙醇水溶液，所述溶剂的质量为所述发酵产物的18倍；所述煎煮的温度为40℃；时间为3h。
在此实施例中，所述浓缩前还包括，将提取液于5℃静置28h的步骤。所述浓缩至质量为所述发酵产物的1.1倍。
一些实施例中，所述煎煮的溶剂水，所述水的质量为所述发酵产物的6倍；所述煎煮的温度为95℃；时间为1h。
在此实施例中，所述浓缩前还包括，将提取液于10℃静置10h的步骤。所述浓缩至质量与所述发酵产物相等。
一些实施例中，所述煎煮的溶剂水，所述水的质量为所述发酵产物的12倍；所述煎煮的温度为80℃；时间为2h。所述煎煮的次数为2次。
在此实施例中，所述浓缩前还包括，将提取液于4℃静置24h的步骤。所述浓缩至质量与所述发酵产物相等。
一些实施例中，提取液经浓缩后，浓缩液与2/11质量的丙二醇混合。
一些实施例中，提取液经浓缩后，浓缩液与3/10质量的丙二醇混合。
一些实施例中，提取液经浓缩后，浓缩液与3/20质量的丙二醇和3/20质量的甘油混合。
本发明实施例中，所述85℃～95℃保温30min后，还包括加入防腐剂及调节pH值至4～6的步骤。
所述防腐剂为苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯和苯氧乙醇中的至少一种，本发明实施例中，所述防腐剂为苯甲酸。所述防腐剂的添加量为浓缩液的2‰。
所述pH的调节采用乳酸、柠檬酸和盐酸中的至少一种。本发明实施例中，调节pH值采用的是柠檬酸。
本发明所述制备方法制得的提取物。
β-半乳糖苷酶明显增加，是成纤维细胞衰老的重要标志。本发明所述制备方法获得的提取物经过细胞实验证实，能够具有抑制衰老细胞中β-半乳糖苷酶产生的效果；且本发明提供的提取物的效果显著(p<0.05)优于现有的植物提取物或它们的组合。
本发明所述提取物在制备抑制β-半乳糖苷酶水平的制剂中的应用。
Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白基因表达的减少程度，是衡量衰老成纤维细胞衰老程度的重要指标，通过对Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量的影响进行比较，结果显示，本发明提供的提取物能够提高纤维细胞中的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白基因表达量。且本发明提供的提取物的效果显著(p<0.05)优于现有的植物提取物或它们的组合。
本发明所述提取物在制备促进Ⅰ型胶原蛋白基因和/或Ⅲ型胶原蛋白基因的表达的制剂中的应用。
本发明所述提取物在制备延衰和/或抗皱的产品中的应用。
一种延衰和/或抗皱的化妆品，包含本发明所述提取物和化妆品基质。
所述化妆品为精华液、化妆水、润肤乳、面霜、眼霜、面膜或洁面乳。
所述化妆品中本发明所述提取物的质量分数为2％。
一种延衰精华液，由以下质量分数的组分制得：
Figure BDA0001481147590000051
一种抗皱水，由以下质量分数的组分制得：
Figure BDA0001481147590000052
本发明以灵芝对红花和丹参进行生物转化，获得的发酵产物经提取获得的提取物能够抑制衰老成纤维细胞中β-半乳糖苷酶的产生，提高成纤维细胞衰老过程中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的基因表达，具有抵抗皮肤衰老的效果，该效果经验证显著(p<0.05)优于现有的植物提取物或它们的组合。
附图说明
图1提取物对β-半乳糖苷酶数的影响；
图2提取物对I型胶原蛋白mRNA的相对表达水平的影响；
图3提取物对III型胶原蛋白mRNA的相对表达水平的影响。
具体实施方式
本发明提供了一种提取物及其制备方法与应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
本发明所涉及的灵芝菌，为广布种，是现代技术中已知菌种，并可以从商业途径获得。本专利在市场上随机购买了两种菌种，菌中1：保存于中国工业微生物菌种保藏中心的中华灵芝，编号：CICC 14049；菌种2：保存于中国农业微生物菌种保藏中心的灵芝，编号：ACCC 50819。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
1、液态发酵培养
液体培养基：取1kg土豆，加入5kg水，煮汁，汁液中加入20wt％的葡萄糖，5wt％的蛋白胨，1wt％的磷酸二氢钾，126℃灭菌30分钟，冷却即得；
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种2％的上述菌种1，于29℃～35℃发酵培养5天得灵芝液态菌种；
2、固态发酵培养
取红花100g，丹参900g，粉碎为40～60目，加1.5～2.5倍质量的水，灭菌后，接种1％的灵芝菌液态菌种，于29℃～35℃条件下，发酵5天，之后高温灭活；
3、提取配制
加18倍质量的10％的乙醇水水溶液，40℃条件下，煎煮3小时，取提取液，5℃条件下，静置28小时，过滤，滤液浓缩至1100g，加入丙二醇200g，加热至85℃～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体成品。
实施例2
1、液态发酵培养
液体培养基：取1kg土豆，加入5kg水，煮汁，汁液中加入20wt％的葡萄糖，5wt％的蛋白胨，1wt％的磷酸二氢钾，126℃灭菌30分钟，冷却即得；
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种2％的上述菌种2，于10℃～16℃发酵培养15天得灵芝液态菌种；
2、固态发酵培养
取红花950g，丹参50g，粉碎为40～60目，加1.5～2.5倍质量的水，灭菌后，接种10％的灵芝菌液态菌种，于10℃～15℃条件下，发酵18天，之后高温灭活；
3、提取配制
加6倍质量的水，在温度为：95℃条件下，煎煮1小时；取提取液，10℃条件下，静置10小时，过滤，滤液浓缩至1000g，加入丙二醇300g，加热至85℃～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体成品。
实施例3
1、液态发酵培养
液体培养基：取1kg土豆，加入5kg水，煮汁，汁液中加入20wt％的葡萄糖，5wt％的蛋白胨，1wt％的磷酸二氢钾，126℃灭菌30分钟，冷却即得；
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种2％的上述菌种2，于18℃～28℃发酵培养8～10天得灵芝液态菌种；
2、固态发酵培养
取红花800g，丹参200g，粉碎为25～35目，加1.5～2.5倍质量的水，灭菌后，接种5％的灵芝菌液态菌种，于22℃～29℃条件下，发酵12天；之后高温灭活；
3、提取配制
加12倍质量的水，在温度为：80℃条件下，煎煮2小时；取提取液，4℃条件下，静置24小时，过滤，按上述煎煮、过滤步骤再次提取，过滤，合并两次滤液，并浓缩至1000g，加入丙二醇150g，甘油150g，加热至85℃～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体成品。
对比例1
制备植物提取物：取红花800g，丹参200g，加12质量倍数的水煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置24小时，过滤，滤液浓缩至1100g，加入丙二醇200g，加热至85～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸1g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体成品。
对比例2
制备红花植物提取物：1000g红花加12质量倍数的水，煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置24小时，过滤，滤液浓缩至1100g，加入丙二醇200g，加热至85℃-95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体红花提取物成品。
制备丹参植物提取物：1000g茯苓加12质量倍数的水煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置24小时，过滤，滤液浓缩至1100g，加入丙二醇200g，加热至85℃～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体丹参提取物成品。
制备灵芝菌提取物：1000g灵芝加12质量倍数的水煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置24小时，滤过，滤液浓缩至1100g，加入丙二醇200g，加热至85℃～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体灵芝提取物成品。
对比例3
粉碎为25～35目，加1.5～2.5倍质量的水，灭菌后，接种5％的灵芝菌液态菌种，加12质量倍数的水，80℃条件下，煎煮2小时；取提取液，4℃条件下，静置24小时，过滤，按上述煎煮、过滤步骤再次提取，过滤，合并两次滤液，并浓缩至1000g，加入丙二醇150g，甘油150g，加热至85℃～95℃，保温30分钟，加入苯甲酸2g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至4～6，搅匀，灌装，得液体成品。
效果验证
一、测定抑制β-半乳糖苷酶产生的方法如下：
1、实验方法：培养纤维细胞于96孔板，培养24h后，用一定浓度(2％)的待测样品(实施例1～3的提取物、对比例1～3的提取物)处理成纤维细胞，24小时之后，加入300μM的H2O2刺激实验组细胞，2小时后，换入新鲜培养剂，放入CO2培养箱，实验中每个药物设置6个平行孔。当细胞生长至80％融合状态时，吸除细胞培养液，用PBS洗涤一次，加入β-半乳糖苷酶染色固定液，固定10min。吸除固定液，用PBS洗涤三次，每次3min，配置并加入染色工作液，用封口膜密封孔板，放置37℃培养箱中孵育24h。使用正置显微镜拍照，选取连续5个视野范围内的细胞，胞质被染为浅至深蓝色的细胞即是衰老细胞。吸除β-半乳糖苷酶染色液，用PBS洗涤两次，每孔加入中性红染液复染，染色3min，将染液吸除干净并加入适量PBS。使用正置显微镜拍照，选取连续5个视野范围内的细胞，分别计数被染上红色和蓝色的细胞，并计算染色阳性率。
2、β-半乳糖苷酶染色实验具体步骤：
(1)吸除细胞培养液，用PBS洗涤一次，加入200μLβ-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定10min。
(2)吸除细胞固定液，用PBS洗涤2次，每孔加入300μL染色工作液和200染色缓冲液(pH＝6)。
(3)用封口膜将其密封好，放入37℃培养箱孵育。
(4)吸除β-半乳糖苷酶染色液，用PBS洗涤2次，然后可以镜检。
3、中性红染液复染：
(1)每孔加入300μL中性红染色液，静置3min。
(2)吸除中性红染色液(可循环使用)，用PBS洗涤1次，每孔加入少量PBS。
染色完毕进行显微镜下观察及拍照，选取连续5个视野范围内的细胞，统计阳性细胞(蓝色)及阴性细胞(红色)数，计算阳性细胞所占的百分率，即细胞阳性率。
4、评价方法
β-半乳糖苷酶明显增加，是成纤维细胞衰老的重要标志，取各实施例的植物提取物及各对比实施例的植物提取物分别进行抑制β-半乳糖苷酶产生实验，统计各平行组β-半乳糖苷酶阳性数的平均值，数值越小，对β-半乳糖苷酶的抑制效果越好，抑制皮肤衰老的功效越优秀。
各提取物的β-半乳糖苷酶产生抑制的效果如图1所示。
测试结果分析：
由图1可知，正常成纤维细胞群中，β-半乳糖苷酶的阳性数为28，双氧水刺激后，β-半乳糖苷酶的阳性数为48；2％的实施例1、2、3的提取物处理后，双氧水刺激产生的β-半乳糖苷酶的阳性数量依次为31、28、26；2％的对比例1植物提取物处理后，双氧水刺激产生的β-半乳糖苷酶的阳性数量为37；对比例2中2％的红花提取物、2％丹参提取物、2％灵芝提取物处理后，双氧水刺激产生的β-半乳糖苷酶的阳性数量依次为43、42、40。对比例3中提取物处理后双氧水刺激产生的β-半乳糖苷酶的阳性数量为35。
得出结论：A、红花、丹参、灵芝提取物具有抑制衰老细胞中β-半乳糖苷酶产生的效果；B、红花、丹参、灵芝提取物在抑制衰老细胞中β-半乳糖苷酶产生的效果上，具有协同作用；C、经过微生物转化后，抑制衰老细胞中β-半乳糖苷酶产生的效果上，显著(p<0.05)优于未经过微生物转化发制得的提取物(对比例1、对比例3)；D、实施例1～3制得的提取物中，实施例3制得的提取物对β-半乳糖苷酶产生的抑制作用最为明显，显著优于实施例1～2的效果。
二、测试促进Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白基因表达的实验如下：
1、实验方法：
实验分组及药物处理：包括空白对照组、过氧化氢组(模型组)、2％实施例组、2％对比例组。细胞在培养皿中生长2～4d至80％左右融合度时，换新鲜培养进行处理。2％实施例组和2％对比实施例组分别加入相应浓度的植物提取物，24小时之后，各组换新鲜的完全培养基，除了空白对照组添加相应的溶剂外，其他组添加300μM H2O2，处理2小时后，进行细胞总RNA的提取，所示浓度均为加入培养基后终浓度，通过实时定量PCR技术进行胶原蛋白ⅠmRNA和胶原蛋白ⅢmRNA的相对含量检测。
2、评价方法
Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白基因表达的减少程度，是衡量衰老成纤维细胞衰老程度的重要指标，通过各组提取物对Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量的影响进行比较，含量高的说明该提取物有促进相应胶原蛋白基因的表达能力，从而达到抑制衰老的效果，在皮肤抗衰老效果上表现尤为突出。
实验结果见图2、图3
由图2可知，以正常成纤维细胞群中，Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量为1，则双氧水刺激后，Ⅰ型胶原蛋白mRNA的相对含量为0.2，Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量为0.3；2％的实施例1、2、3植物提取物处理后，经双氧水刺激的成纤维细胞群，Ⅰ型胶原蛋白mRNA的相对含量依次为1.1、1.2、1.5，Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量依次为1.0、0.9、1.2；2％的对比例1植物提取物处理后，经双氧水刺激的成纤维细胞群，Ⅰ型胶原白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量依次为0.8、0.6；2％的红花提取物、2％丹参提取物、2％灵芝提取物处理后，经双氧水刺激的成纤维细胞群，Ⅰ型胶原蛋白mRNA的相对含量依次为0.4、0.5、0.6，Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量依次为0.4、0.5、0.5；2％的对比例3提取物处理后，经双氧水刺激的成纤维细胞群，Ⅰ型胶原白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对含量依次为0.7、0.7。
得出结论：A、红花、丹参、灵芝提取物，具有提高衰老细胞中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的相对表达水平的功效；B、红花、丹参、灵芝提取物，在提高衰老细胞中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达水平的效果上，具有协同作用；C、经过微生物转化后，本发明提供的提取物在提高衰老细胞中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达水平的效果上，显著(p<0.05)优于未经过微生物转化制得的植物提取物(对比例1、对比例3)；D、实施例1～3制得的提取物中，实施例3制得的提取物对Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达水平的促进作用最为明显，显著优于实施例1～2的效果。
实施例4延衰精华液的制备
Figure BDA0001481147590000121
该延衰精华液的制备按本领域常规制备，具体为：按配比称量好上述物料，先把卡波U20分散在丁二醇中，然后加水分散；同时升温到60℃，分散完全后，加入透明质酸钠，继续分散；分散完成后，将A相所有组分分散到水中并同时升高温度到85℃，搅拌均匀；预先把D相增溶好；将A相冷却到45℃后，加入B相，搅拌均匀后，加入C、D相各组分；搅拌均匀后出料，pH控制在5.0～7.5。
肌肤饱满调查测试，30周岁至45周岁女性30人，使用本精华8周，反馈：明显有效20人，一般有效8人，无效2人。
实施例5抗皱水
Figure BDA0001481147590000122
Figure BDA0001481147590000131
该抗皱水的制备按本领域常规制备，具体为：按配比称量好上述物料，先把A相卡波U21分散在水中，搅匀，然后加入用甲基丙二醇分散好的透明质酸钠,搅拌均匀后加入C相,加热升温到85℃～90℃，搅拌均匀；加入B相，搅拌均匀，搅拌下冷却至45℃～50℃；加入D相，搅拌均匀出料。
淡化皱纹调查测试，30周岁至45周岁女性30人，使用本抗皱水8周，反馈：明显有效21人，一般有效6人，无效3人。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (14)

1.一种发酵产物，其特征在于，以红花、丹参、水和灵芝液态菌种经发酵制得；所述红花与丹参的质量比为(1～19)：(9～1)；所述红花与丹参的质量之和与水的质量比为1：(1.5～2.5)；所述灵芝液态菌种的接种量为1％～10％；
所述发酵的条件为10℃～35℃发酵5～18天。
2.权利要求1所述发酵产物的制备方法，其特征在于，包括：
将红花与丹参粉碎后，与水混合，接种灵芝液态菌种，10℃～35℃发酵5～18天，制得所述发酵产物。
3.根据权利要求2所述的发酵产物的制备方法，其特征在于，所述灵芝液态菌种的制备方法为：将灵芝菌种接种于液体培养基于10℃～35℃发酵培养5～15天得灵芝液态菌种。
4.一种提取物的制备方法，其特征在于，包括：
将权利要求1所述的发酵产物经煎煮获得提取液，
所述提取液经浓缩后与丙二醇和/或甘油混合，85℃～95℃保温30min。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述煎煮的溶剂为水或乙醇水溶液，所述溶剂的质量为所述发酵产物的6～18倍；所述煎煮的温度为40℃～95℃；时间为1～3h；所述煎煮的次数为2次。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩至质量为所述发酵产物的1～1.1倍。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述85℃～95℃保温30min后，还包括加入防腐剂及调节pH值至4～6的步骤。
8.权利要求4～7任一项所述制备方法制得的提取物。
9.权利要求8所述的提取物在制备抑制β-半乳糖苷酶水平的制剂中的应用。
10.权利要求8所述的提取物在制备促进Ⅰ型胶原蛋白基因和/或Ⅲ型胶原蛋白基因的表达的制剂中的应用。
11.权利要求8所述的提取物在制备延衰和/或抗皱的产品中的应用。
12.一种延衰和/或抗皱的化妆品，其特征在于，包含权利要求8所述的提取物和化妆品基质。
13.一种延衰精华液，其特征在于，由以下质量分数的组分制得：
Figure FDA0002373867130000021
14.一种抗皱水，其特征在于，由以下质量分数的组分制得：
Figure FDA0002373867130000022
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