CN114272195B - 一种抗紫外线和蓝光损伤的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化妆品技术领域，公开了一种抗紫外线和蓝光损伤的组合物及其制备方法和应用。本发明抗紫外线和蓝光损伤的组合物中包含茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物和双歧杆菌发酵产物溶胞物。这种组合物由茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物和双歧杆菌发酵产物溶胞物组成，该组合物中各组分协同效应良好，能够增强表皮内聚力和皮肤细胞再生，有效的防护紫外线和蓝光，且该提取物性质温和、易于吸收、无刺激，特别符合人们对化妆品安全有效、零负担的要求，可广泛应用于皮肤护理化妆品，可满足当下美容潮流的需要。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体是涉及一种抗紫外线和蓝光损伤的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
中波紫外线(简称UVB)可以直接作用于DNA，使其发生突变造成DNA损伤，UVB与长波紫外线(简称UVA，波长320～420nm，又称为长波黑斑效应紫外线)产生的活性氧簇(ROS)可以间接损伤细胞核及线粒体DNA，导致细胞功能异常或凋亡。紫外线(简称UV)照射产生的ROS可氧化损伤蛋白质及脂质，引起相应功能及结构的异常。紫外线照射还会影响皮肤色素代谢：即刻反应为黑素的反应性合成增加及其重新分布；迟发反应为黑素细胞数目增加及活力升高。因此，长时间紫外线照射会导致皮肤晒黑、提早衰老、面黄、起斑、出皱纹甚至发生癌变。
蓝光是一种波长在400-500nm之间具有相对较高能量的光线，对应光谱包括蓝色(400-450nm)和紫色(450-500nm)部分，而处于400-480nm之间的短波蓝光是具有相对较高能量的光线，该波长内的蓝光会使眼睛内的黄斑区毒素量增高，严重威胁我们的眼底健康。太阳辐射是蓝光的主要来源，蓝光的强度是到达地球表面紫外线的两到三倍，是可见光谱的一部分；并且蓝光普遍存在于手机、电脑、投影仪、激光笔、LED显示器、荧光灯、LED灯、电影屏幕等。光学专家指出，蓝光具极高能量，它可以轻易穿透皮肤保护，造成肌肤产生更多自由基，是肌肤衰老罪魁祸首之一。最近，保护长时间上网的人免受蓝光伤害已经成为一种美容潮流。然而，市面上大多数用于光防护的组合物都是针对紫外线造成的影响，同时兼具紫外线和蓝光防护的组合物很少。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述背景技术的不足，提供一种抵抗紫外线和蓝光损伤、修复屏障的组合物及其制备方法及应用，所述组合物由茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物和双歧杆菌发酵产物溶胞物组成，该组合物中各组分协同效应良好，能够增强表皮内聚力和皮肤细胞再生，有效的防护紫外线和蓝光，且该提取物性质温和、易于吸收、无刺激，特别符合人们对化妆品安全有效、零负担的要求，可广泛应用于皮肤护理化妆品，满足当下美容潮流的需要。
为达到本发明的目的，本发明抗紫外线和蓝光损伤的组合物中包含茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物和双歧杆菌发酵产物溶胞物。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为1-2：1-2：5-10。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为1-2：1-2：5。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为2：2：5。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为1：2：5。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为2：1：5。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述茵陈蒿花提取物的制备方法为：将日本茵陈蒿花粉碎，向粉碎后的日本茵陈蒿花粉末中分别加入1，3-丙二醇溶液，浸润，水浴，温度为40-55℃时加入纤维素酶，搅拌，升温至40-60℃微波处理，超声水浴回流提取，过滤，得到茵陈蒿花提取液。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述茵陈蒿花提取物的制备方法为：将日本茵陈蒿花粉碎，向粉碎后的日本茵陈蒿花粉末中加入2-5倍量的体积分数40-60％的1，3-丙二醇溶液，浸润1-4小时，水浴，温度为45-53℃时加入纤维素酶，所加入的酶总质量占原料总质量的7-20％，搅拌，升温至51-58℃微波处理，超声水浴回流提取2-5小时，重复2-5次，过滤，得到茵陈蒿花提取液。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述假交替单胞菌发酵产物提取物的制备方法为：向培养容器中依次加入去离子水、pH 7-8的磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入假交替单胞菌，在20-30℃条件下，培养5-15天，离心分离上清液。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述假交替单胞菌发酵产物提取物的制备方法为：向培养容器中依次加入2-4倍量去离子水、0.5-2.5倍量pH 7-8且浓度为0.25-0.45mmol/L的磷酸盐缓冲溶液、1-4倍量的浓度为20-60wt％的葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入假交替单胞菌，在25-37℃条件下，培养5-13天，离心分离上清液。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述双歧杆菌发酵产物溶胞物的制备方法为：向培养容器中依次加入去离子水、pH 7-8的磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入双歧杆菌，在室温条件下，无氧条件培养5-15天；加入N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，搅拌，静置分离上清液。
优选地，在本发明的一些实施例中，所述双歧杆菌发酵产物溶胞物的制备方法为：向培养容器中依次加入2-5倍量去离子水、0.5-1.5倍量pH 7-8且浓度为0.25-0.45mmol/L的磷酸盐缓冲溶液、1-4倍量的浓度为25-60wt％的葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入双歧杆菌，在25-37℃条件下，无氧条件培养5-13天，加入原料总质量3-10％的N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，搅拌0.5-4h，静置分离上清液。
茵陈蒿(Artemisia capillaris Thunb.)是菊科，蒿属半灌木状草本植物，植株有浓烈的香气。主根明显木质，茎单生或少数，高可达120厘米，红褐色或褐色，基生叶密集着生，常成莲座。茵陈蒿富含维生素C和维生素B，并含有人体所需的多种微量元素和20余种氨基酸，具有很好的保健功能。因为它富含丰富的维生素和矿物质，具有强大的生命力，一整个冬天过去还能够继续成活，又被称作四季蒿。它富含β-胡萝卜素和各种维生素，本发明所得茵陈蒿花提取物可消除活性氧，有效防止皮肤老化。
假交替单胞菌，原产地为中国。杆状，不形成微胞囊和芽孢，大多数以极生鞭毛运动，是一种生活在海岸线以及海洋中的革兰氏阴性菌。本发明方法所得假交替单胞菌发酵产物提取物富含多种蛋白多糖和胞外多糖，能够高效保湿，促进表皮再生，增强皮肤结构的完整性。
双歧杆菌属(Bifidobacterium)是一种革兰氏阳性细菌属，细胞呈杆状，一端有时呈分叉状，严格厌氧，广泛存在于人和动物的消化道、阴道和口腔等生物环境中。双歧杆菌属的细菌是人和动物肠道菌群的重要组成成员之一，可以作为益生菌而用在食品、医药和饲料方面。本发明所得双歧杆菌发酵产物溶胞物含有代谢产物、细胞质成分、细胞壁组分和多糖复合物，能特异性地支持皮肤自身的保护和修复机制，因此能抵抗紫外线及蓝光造成的损伤。
另一方面，本发明还提供了一种前述抗紫外线和蓝光损伤的组合物的制备方法，所述方法为：将茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物混合，均质，加入澄清剂，静置后离心过滤，减压浓缩，得到一种抵抗紫外线和蓝光损伤、修复屏障的组合物。
进一步地，在本发明的一些实施例中，所述减压浓缩是浓缩至原重量的1/6-1/2；优选地，在本发明的一些实施例中，所述过滤是用0.1-1.0μm的微滤膜过滤。
再一方面，本发明还提供了一种前述抗紫外线和蓝光损伤的组合物的应用，所述应用为：将抗紫外线和蓝光损伤的组合物用于化妆品或化妆品添加剂。
又一方面，本发明还提供了一种化妆品，所述化妆品中包含前述抗紫外线和蓝光损伤的组合物。
优选地，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物占化妆品的质量百分比为0.5-5％。
优选地，所述化妆品为水剂、乳剂、喷雾、膏霜、凝胶剂或面膜。
又一方面，本发明还提供了一种抵抗紫外线和蓝光损伤、修复屏障的组合物的精华液，所述精华液包含前述抗紫外线和蓝光损伤的组合物、水、甘油、丁二醇、双丙甘醇、赤藓醇、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、对羟基苯乙酮、精氨酸、聚甲基硅倍半氧烷、C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、泛醇、乙基己基甘油、卡波姆、甘草酸二钾和EDTA二钠。
蓝光照射通过诱导ROS产生，导致皮肤细胞中I型胶原蛋白合成减少，MMPI合成增多，从而进一步降解胶原蛋白，诱导皮肤光老化产生。当皮肤受到蓝光照射后细胞受到损伤产生大量ROS，会造成细胞内很多活性物质发生变性。本发明制备的茵陈蒿花提取物能够直接抑制ROS造成损伤产生的炎症因子COX-2的释放，减轻炎症，抵御蓝光灼伤/晒伤细胞，减少细胞因紫外线/蓝光而发生DNA甲基化和蛋白质羰基化；本发明双歧杆菌溶胞产物能够抑制IL-10的分泌且提高IL-12的分泌，调控真皮细胞的DNA修复过程，且能减弱由于COX-2分泌造成的损伤细胞周围的免疫细胞聚集，增强茵陈蒿花提取物的作用；而本发明中假交替单胞杆菌发酵产物提取物能够激活桥粒芯蛋白-3，促进I型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的生成，对活性氧造成真皮层损伤有较好的修复作用，本发明将其与本发明所得茵陈蒿花提取物以及双歧杆菌溶胞产物复配后，发现其能够明显提高溴脱氧腺苷的含量，因此三者复配后能增强表皮内聚力和皮肤细胞再生，对抵抗蓝光损伤有优异的效果。
附图说明
图1是本发明实施例中不同组合物对细胞DNA修复的实验结果；
图2是本发明实施例中的皮肤弹性测试结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
此外，下面所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。而且，本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
一种抵抗紫外线和蓝光损伤、修复屏障的组合物，制备工艺如下：
(1)将日本茵陈蒿花粉碎；
(2)向粉碎后的日本茵陈蒿花粉末中分别加入3倍量的50％的1，3-丙二醇溶液，浸润2小时。水浴，温度为48℃时加入纤维素酶，所加入的酶总质量占原料总质量的10％，搅拌20分钟，升温至55℃微波处理10分钟，超声水浴回流提取3小时，重复3次，过滤，得到茵陈蒿花提取液
(3)向培养容器中依次加入3倍量去离子水、1倍量pH 7-8且浓度为0.35mmol/L的磷酸盐缓冲溶液、3倍量的浓度为50wt％的葡萄糖水溶液，得发酵底物。向所述发酵底物中加入双歧杆菌，在室温条件下，无氧条件培养10天；加入原料总质量5％的N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，搅拌2小时，静置分离上清液；
(4)向培养容器中依次加入5倍量去离子水、1.5倍量pH7-8且浓度为0.35mmol/L的磷酸盐缓冲溶液、3倍量的浓度为30-50wt％的葡萄糖水溶液，得发酵底物。向所述发酵底物中加入假交替单胞菌，在25℃条件下，培养10天，离心分离上清液；
(5)将步骤(2)、(3)、(4)得到的三种液体混合，均质，加入澄清剂，静置后离心20分钟，用孔径0.1-1.0μm的微滤膜过滤，减压浓缩，浓缩至原重量的1/3，得到一种抵抗紫外线和蓝光损伤、修复屏障的组合物。
实施例2
不同比例茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物复配对人皮肤成纤维细胞抵抗蓝光辐射氧化损伤的试验：将茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物按照下表比例进行复配，得到组合物1-12，对比例1-3，复配比例如表1所示，所示比例数值为茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物。
表1组合物1-12，对比例1-3中三种成分复配比例
| 组合物组成(体积比) | |
| 组合物1 | 1:1:5 |
| 组合物2 | 1:2:5 |
| 组合物3 | 2:1:5 |
| 组合物4 | 2:2:5 |
| 组合物5 | 1:1:8 |
| 组合物6 | 1:2:8 |
| 组合物7 | 2:1:8 |
| 组合物8 | 2:2:8 |
| 组合物9 | 1:1:10 |
| 组合物10 | 1:2:10 |
| 组合物11 | 2:1:10 |
| 组合物12 | 2:2:10 |
| 对比例1 | 1:0:0 |
| 对比例2 | 0:1:0 |
| 对比例3 | 0:0:1 |
注：各组中茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物浓度分别相同，不同的是添加比例。
在本发明上述的组合物及对比例中，组合物对蓝光造成氧化损伤试验测试方法和结果如下：
本发明通过测量组合物对暴露于蓝光照射的人成纤维细胞中活性氧化物质水平来判断。通过LED组成的蓝光源在415nm和470nm处产生应激。通过荧光探针在细胞水平上测定由这种暴露产生的活性氧化物质(ROS)。
(1)将培养物中的正常人皮肤成纤维细胞通过在特定培养基稀释至0.1％体积，使用0.1％质量分数组合物1-12，对比例1-3中的组合物进行预处理，每天两次，而将对照培养物维持在未处理条件下。24小时后，将对照培养物和经处理的培养物的一部分暴露于HEV蓝光(415和470nm，在3mW/cm2下持续18分钟)，而将其他部分维持为避光保护。在该暴露之后，再次将组合物1-12，对比例1-3中的组合物每天应用两次，持续24小时。然后，再次重复对蓝光的暴露，接着进行ROS检测的测试。
(2)将细胞在荧光探针(CellROX绿色试剂，赛默飞)的存在下于37℃放置30分钟。固定和冲洗后，在落射荧光显微镜(ZeissAxiovert 200M显微镜)下观察细胞。基于所获得的照片，借助于Volocity图像分析软件(PerkinElmer,Inc.)进行荧光强度的定量，该荧光强度与存在的ROS的量成比例。实验结果如表2所示。
表2组合物对蓝光造成氧化损伤试验测试
上述试验结果表明，测试例1-12组合物，都能够大幅度减少人皮肤成纤维细胞在蓝光照射后产生ROS的效果，具有较为优异的抵御蓝光效果。但相同条件下组合物比例不同，对ROS的减少量也会有影响，其中组合物4、2、3的ROS减少效果相对较好。
实施例3
不同比例茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物复配对人皮肤外植体细胞抵抗紫外线/蓝光辐射诱导蛋白质羰基化的试验，采用DNPH比色法进行，结果如表3所示。
(1)试样前处理：取一定量的人皮肤外植体细胞，加入1％质量分数的各组合物样品，实验组分别置于紫外线和HEV蓝光照射下放置6h，空白组不加样品，处理完毕后在冰的生理盐水中漂洗，加入一定量冰的HEPES缓冲液，做成质量分数为10％的匀浆，HEPES缓冲液pH值为7.4。将匀浆液以l500g的转速，离心15min，取上清，并转入10ml的离心管中，加0.1kg/L的硫酸链霉素溶液于上清液中，使之终浓度为0.0l kg/L，即硫酸链霉素溶液与上清的体积比为1：9。室温放置10min后，以11000g的转速，离心10min，取上清。
(2)蛋白质羰基化测定：在100μl的上清液中加入400μl的10mmol/L的DNPH(用2mol/L的HCL溶解)。将各个反应体系置于黑暗中放置l h，每隔10min搅拌1次。加入500μl0.2kg/L的三氯乙酸(TCA)溶液,以12000g的转速，离心15min，弃上清。得到的沉淀用1ml乙醇和乙酸乙脂混合物(V/V＝1：1)洗涤3次，最后的沉淀用1.25ml，6mol/L的盐酸胍溶解(37℃，水浴15mitt)。12000g，离心15rain，取上清。选取Biuret法在紫外可见分光光度计370nm下测定其吸光值。
(3)以荧光变化率为实验结果，计算方式如下：
变化率＝(吸实验组-吸空白组)/吸空白组*100％
吸实验组：实验组的吸光值
吸空白组：空白组的吸光值
表3抵抗紫外线/蓝光辐射诱导蛋白质羰基化的试验结果
| 测试项 | 紫外线辐照(％) | HEV蓝光辐照(％) |
| 组合物1 | 58.1 | 32.9 |
| 组合物2 | 64.9 | 35.3 |
| 组合物3 | 63.6 | 34.5 |
| 组合物4 | 66.3 | 35.7 |
| 组合物5 | 50.5 | 28.6 |
| 组合物6 | 55.6 | 31.8 |
| 组合物7 | 53.8 | 31.2 |
| 组合物8 | 59.5 | 33.8 |
| 组合物9 | 48.9 | 26.9 |
| 组合物10 | 51.3 | 30.1 |
| 组合物11 | 52.7 | 30.2 |
| 组合物12 | 57.7 | 32.4 |
| 对比例1 | 34.7 | 17.9 |
| 对比例2 | 31.8 | 15.7 |
| 对比例3 | 36.4 | 20.3 |
表3试验结果表明，测试例1-12组合物，能够有效减弱由于紫外线及蓝光造成的蛋白质羰基化，其中组合物4、2、3的减弱相对较好。因此可以判断茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物三者组合能够有效抑制紫外线和蓝光的损伤。
实施例4
不同比例茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物复配对人皮肤外植体细胞抵抗紫外线/蓝光辐射诱导的促炎介质环氧合酶-2(COX-2)的试验，试验结果如表4所示。
试验方法如下：将1％质量分数各组合物局部应用于暴露于HEV光(5.76J/cm2)下的人皮肤外植体(25岁供体)上，每天2小时，持续3天，空白组不加任何组合物。采用双抗体夹心法测定人皮肤外植体细胞中环氧合酶-2(COX-2)水平。用纯化的人环氧合酶-2(COX-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入环氧合酶-2(COX-2)，再与HRP标记的环氧合酶-2(COX-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的环氧合酶-2(COX-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，以实验组和空白组吸光度的变化率作为实验结果，计算方式如下：
变化率＝(吸实验组-吸空白组)/吸空白组*100％
吸实验组：实验组的吸光值
吸空白组：空白组的吸光值
表4抵抗紫外线/蓝光辐射诱导的促炎介质环氧合酶-2试验结果
| 测试项 | HEV蓝光辐照(％) |
| 组合物1 | 27.9 |
| 组合物2 | 30.3 |
| 组合物3 | 29.8 |
| 组合物4 | 30.7 |
| 组合物5 | 23.6 |
| 组合物6 | 26.8 |
| 组合物7 | 26.2 |
| 组合物8 | 28.8 |
| 组合物9 | 21.9 |
| 组合物10 | 25.1 |
| 组合物11 | 25.2 |
| 组合物12 | 27.4 |
| 对比例1 | 16.8 |
| 对比例2 | 14.6 |
| 对比例3 | 19.1 |
表4所示结果表明，测试例1-12组合物，能够有效降低COX-2的表达，降低炎症反应的产生，其中组合物4、2、3的减弱相对较好。因此可以判断茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物三者组合能够有效抑制紫外线和蓝光的损伤。
实施例5
不同组合物对细胞DNA修复的实验：溴脱氧尿苷(BrdU)是一种胸苷类似物。BrdU在DNA中的含量代表了DNA的修复程度。采用牛乳房皮肤模型，在乳房皮肤上使用1％质量分数的组合物，空白组不添加任何组合物，用HEV蓝光持续照射3小时，测量溴脱氧尿苷(BrdU)的含量。实验结果如附图1所示。
附图1的实验结果表明，茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物三者组合能够加强细胞DNA损伤的修复。
实施例6
人体功效测试：在具体实施方式中，本发明提供了一种抵抗紫外线和蓝光损伤、修复屏障的组合物的精华液的配方工艺，具体配方如表5所示。
表5含本发明组合物的精华液配方
按表5所示添加组合物4、2、3，分别制得精华液样品1-3。
实施例7
MTT细胞毒性测试：在96well multi plate(corning)中按照1X104cells/well的密度接种含有10％牛血清的DMEM培养基和角质形成细胞(HaCaT)各100μL，培养24小时后换成无血清培养基。在无血清培养基中分别加入上述实施例中组合物4、2、3进行处理后培养24小时。之后去除培养基，用20μL的MTT溶液进行处理，在37℃下使其反应2小时。在去除MTT溶液的细胞中加入200μL异丙醇，轻轻地震荡30min，完全溶解结晶甲臜，在570nm处测定吸光度，根据如下公式计算细胞存活率。
对照组不加入样品进行试验。细胞毒性相关结果如表6所示。
表6MTT细胞毒性测试结果
实施例8
安全性测试(人体皮肤斑贴试验)：选取15名年龄为20-50岁之间的无皮肤病过敏史的健康受试者，选用合格的斑试器，以封闭式斑贴试验方式，取约15μL样品1-3的样品滴于斑试器内，外用专用胶带贴覆于受试者背部，每个受试者贴20个斑试器，分别贴试样品1-3的肌底液样品，24小时后除去受试物，去除后分别于0.5、6、12、24、48小时观察皮肤反应，按照《护肤品卫生规范》中皮肤反应等级标准记录其结果。
试验结果：人体皮肤斑贴试验结果显示所有受试者通过斑贴试验，在0.5、6、12、24、48小时观察皮肤反应，其中0例出现皮肤红斑、丘疹、水疱等不良反应，说明本发明的产品安全，无刺激。
实施例9
皮肤弹性测试：由于蛋白质的羰基化会导致胶原纤维硬化，以及皮肤组织柔软性丧失，进而导致肌肤弹性丧失，所以通过检测HEV蓝光照射后皮肤的弹性变化反映出组合物对蓝光的修复作用，选取45名30-55周岁女性志愿者，分为三组，每天暴露于HEV蓝光下一段时间后(每天最少4小时)，在使用测试样品1、2、3前和连续使用化妆品28天后测定其面部皮肤弹性。受试对象在选定部位每天使用2次精华液，清洁面部皮肤后，擦干，用手将精华液涂抹在面部皮肤上，连续使用四周。受试对象在测试期间不使用其他产品。以相对于测试前的变化量为实验结果，变化量高，说明皮肤的柔软度改善情况越好，数据取平均值，具体如附图2所示。
由附图2可知茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物三者组合可以改善皮肤的弹性，缓解蓝光辐射对人成纤维细胞造成的蛋白质羰基化影响。
实施例10
皱纹检测，以改善眼部皱纹功效评价，测试人数：45人；受试部位：眼部；选取45名年龄在18-60岁、眼部有明显皱纹的志愿者(妊娠或哺乳妇女除外)，分为3组，分别使用样品1-3，每天早晚各使用一次，分别在产品使用前、使用后2W、使用后4W用Antera 3D(Miravex,Ireland)测量眼角皱纹总体尺寸。受试者需清洁面部，在温度为21±1℃、相对湿度为50±5％的实验室中静坐20min，再进行眼角皱纹总体尺寸的测定，每个区域平行测定3次，取平均值；通过眼角皱纹总体尺寸的增减率评估改善眼部皱纹的功效，眼角皱纹总体尺寸降低越多，效果越好。
眼角皱纹总体尺寸增减率＝(使用后眼角皱纹总体尺寸-使用前眼角皱纹总体尺寸)÷使用前眼角皱纹总体尺寸×100％)，结果取平均值，实验结果如表7所示。
表7眼角皱纹总体尺寸增减率(％)
| 样品1 | 样品2 | 样品3 | |
| 使用前 | 0 | 0 | 0 |
| 2W | -15.9 | -15.6 | -14.7 |
| 4W | -20.4 | -18.5 | -17.8 |
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (16)
1.一种抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中包含茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物和双歧杆菌发酵产物溶胞物；所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为1-2：1-2：5-10；所述茵陈蒿花提取物的制备方法为：将日本茵陈蒿花粉碎，向粉碎后的日本茵陈蒿花粉末中分别加入1，3-丙二醇溶液，浸润，水浴，温度为40-55℃时加入纤维素酶，搅拌，升温至40-60℃微波处理，超声水浴回流提取，过滤，得到茵陈蒿花提取液；所述假交替单胞菌发酵产物提取物的制备方法为：向培养容器中依次加入去离子水、pH 7-8的磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入假交替单胞菌，在20-30℃条件下，培养5-15天，离心分离上清液；所述双歧杆菌发酵产物溶胞物的制备方法为：向培养容器中依次加入去离子水、pH 7-8的磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入双歧杆菌，在室温条件下，无氧条件培养5-15天；加入N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，搅拌，静置分离上清液。
2.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为1-2：1-2：5。
3.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为2：2：5。
4.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为1：2：5。
5.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物中茵陈蒿花提取物：假交替单胞菌发酵产物提取物：双歧杆菌发酵产物溶胞物的体积比为2：1：5。
6.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述茵陈蒿花提取物的制备方法为：将日本茵陈蒿花粉碎，向粉碎后的日本茵陈蒿花粉末中加入2-5倍量的体积分数40-60％的1，3-丙二醇溶液，浸润1-4小时，水浴，温度为45-53℃时加入纤维素酶，所加入的酶总质量占原料总质量的7-20％，搅拌，升温至51-58℃微波处理，超声水浴回流提取2-5小时，重复2-5次，过滤，得到茵陈蒿花提取液。
7.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述假交替单胞菌发酵产物提取物的制备方法为：向培养容器中依次加入2-4倍量去离子水、0.5-2.5倍量pH 7-8且浓度为0.25-0.45mmol/L的磷酸盐缓冲溶液、1-4倍量的浓度为20-60wt％的葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入假交替单胞菌，在25-30℃条件下，培养5-13天，离心分离上清液。
8.根据权利要求1所述的抗紫外线和蓝光损伤的组合物，其特征在于，所述双歧杆菌发酵产物溶胞物的制备方法为：向培养容器中依次加入2-5倍量去离子水、0.5-1.5倍量pH 7-8且浓度为0.25-0.45mmol/L的磷酸盐缓冲溶液、1-4倍量的浓度为25-60wt％的葡萄糖水溶液，得发酵底物，向发酵底物中加入双歧杆菌，在室温条件下，无氧条件培养5-13天，加入原料总质量3-10％的N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，搅拌0.5-4h，静置分离上清液。
9.权利要求1-8任一项所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物的制备方法，其特征在于，所述方法为：将茵陈蒿花提取物、假交替单胞菌发酵产物提取物、双歧杆菌发酵产物溶胞物混合，均质，加入澄清剂，静置后离心过滤，减压浓缩，得到一种抗紫外线和蓝光损伤的组合物。
10.权利要求9所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物的制备方法，其特征在于，所述减压浓缩是浓缩至原重量的1/6-1/2。
11.权利要求9所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物的制备方法，其特征在于，所述过滤是用0.1-1.0μm的微滤膜过滤。
12.权利要求1-8任一项所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物的应用，其特征在于，所述应用为：将权利要求1-8任一项所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物用于制备化妆品或化妆品添加剂。
13.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品中包含权利要求1-8任一项所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物。
14.根据权利要求13所述的化妆品，其特征在于，所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物占化妆品的质量百分比为0.5-5％。
15.根据权利要求13所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品为水剂、乳剂、喷雾、膏霜、凝胶剂或面膜。
16.一种抗紫外线和蓝光损伤的精华液，其特征在于，所述精华液中包含权利要求1-8任一项所述抗紫外线和蓝光损伤的组合物、水、甘油、丁二醇、双丙甘醇、赤藓醇、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、对羟基苯乙酮、精氨酸、聚甲基硅倍半氧烷、C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、泛醇、乙基己基甘油、卡波姆、甘草酸二钾和EDTA二钠。
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| GR01 | Patent grant | ||
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