CN110090167B - 用于紫外损伤修复的生物多糖及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于紫外损伤修复的生物多糖及其应用。具体地，本发明提供了一种β‑葡聚糖的用途，用于制备一制剂或组合物，所述制剂或组合物用于预防和/或修复紫外损伤。所述β‑葡聚糖能够非常有效地预防和/或修复紫外损伤。所述β‑葡聚糖有明显修复紫外线对皮肤造成的损伤、加速受损皮肤修复的作用，并且和防晒剂结合使用具有协同效应，进一步起到增强预防和/或治疗修复紫外损伤的作用。

Description

用于紫外损伤修复的生物多糖及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及用于紫外损伤修复的生物多糖及其应用。

背景技术

1969年，Albert Kligman首先提出除了人体固有的衰老因素以外，阳光的暴露也会引起皮肤损伤和衰老。最近，在欧洲和中国的两个流行病学研究提供了两个不同人种背景下的人群，都显示了皮肤老化和日光暴露之间的显著关联。对于高加索人而言，无论年龄多大，日光暴露不仅仅引起皮肤的下垂，还与色素失常的患病率有很强的联系。对中国人而言，日光暴露也对很多面部衰老的指标有显著的影响。

UV辐射对于皮肤老化的影响已经广为人知，光老化一词也强调了其成因和结果之间的关系。紫外线不仅仅破坏最外层的皮肤细胞，同时还能导致真皮细胞坏死和代谢紊乱，细胞内杂质无法代谢出去，令肌肤出现晒斑，丧失弹性，提早衰老，变得敏感，出现皱纹，而且皮肤损伤后刺痛瘙痒难忍，抓挠出血，皮肤本身的抗病和抵抗能力减弱，甚至水肿，渗出，形成毛囊炎，疖等难以治愈的皮肤病。

然而，现有技术中的防晒化妆品多以防紫外线为主，例如一些高SPF值和PA的防晒产品。这些广谱的防晒化妆品虽然能够较大程度保护肌肤免受紫外线伤害，却无法对晒伤部分肌肤进行修护。

因此，本领域迫切需要开发一种能有效修复紫外损伤的产品和方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种能有效预防和/或修复紫外损伤的产品和方法。

本发明的另一目的是提供一种用于预防和/或修复紫外损伤的生物多糖及其应用。

本发明的第一方面，提供了一种β-葡聚糖的用途，用于制备一制剂或组合物，所述制剂或组合物用于预防和/或修复紫外损伤。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖为β-D-葡聚糖。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖为β-1,3-葡聚糖，优选地，具有β-1,6-分支的β-1,3-葡聚糖。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的结构如式I所示，

其中，l为0-50的整数，较佳地0-10，更佳地0-3，更佳地1-2，更佳地1；m为≥0的整数，较佳地为0-19，较佳地为0-4，更佳地为0-1，更佳地为0；n为≥3的整数，较佳地为30-60000，更佳地100-10000。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分支度(DB)为0.02-0.8，较佳地0.1-0.5，较佳地0.25-0.4。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的侧链的单糖单元的平均数量≤20，较佳地≤5，较佳地≤3，更佳地≤1.5，更佳地为1。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖包括具有三螺旋立体结构的β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述三螺旋立体结构的β-葡聚糖的含量为80％，90％，95％，按β-葡聚糖的总摩尔量计。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的β-1,3-主链为三螺旋立体结构的主体。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的β-1,6-分支位于三螺旋立体结构的外侧。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量可以为5kD-35000kD；10kD-30000kD；50kD-25000kD；100kD-20000kD；200kD-18000kD；400kD-16000kD；500kD-14000kD；1000kD-12000kD；2000kD-4000kD；3000kD-5000kD；4000kD-6000kD；5000kD-7000kD；6000kD-8000kD；7000kD-9000kD；或者8000kD-10000kD。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述香菇β-葡聚糖为每5个β-1,3-的主链，带有2个β-1,6-的分支，且每个分支1个葡萄糖残基的β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖具有良好的稳定性。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖呈固态形式或液态形式，如β-葡聚糖固体颗粒或粉末、或β-葡聚糖水溶液。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖颗粒或粉末的粒径≤20mm，较佳地0.001-10mm，更佳地0.01-5mm，更佳地0.1-2mm。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖为完全水溶的β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)具有良好的水溶性和/或天然可溶性。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度≥0.0001g，较佳地0.01-50g，更佳地0.1-10g。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度可以为0.1-100g；0.2-90g；0.5-80g；1-50g；或者，所述溶解度可以为0.1-0.3g；0.2-0.4g；0.3-0.5g；0.4-0.6g；0.5-0.7g；0.6-0.8g；0.7-0.9g；0.8-1g；或者1-3g；2-4g；3-5g；4-6g；5-7g；6-8g；7-9g；或8-10g。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液为β-葡聚糖在水中的溶液，即β-葡聚糖水溶液。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(水)溶液粘度大；较佳地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000mPa·s，更佳地500-2000mPa·s。

在另一优选例中，所述质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃)粘度可以为50-10000mPa·s；100-9000mPa·s；200-8000mPa·s；300-7000mPa·s；400-6000mPa·s；450-5000mPa·s；500-5000mPa·s；550-4000mPa·s；600-3000mPa·s；650-2000mPa·s；或700-1500mPa·s。

在另一优选例中，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖的水溶液具有高澄清度或高透光率，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；

在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液具有良好的稳定性。

在另一优选例中，所述制剂或组合物含有(a)β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述制剂或组合物含有(a)裂褶菌β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述制剂或组合物含有0.0001-99wt％、优选0.001-99wt％、优选0.002-30wt％、优选0.005-10wt％、优选0.01-3wt％、更优选0.02-1wt％的β-葡聚糖，按制剂或组合物的总重量计。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖在所述制剂或组合物中的质量浓度为≥1μg/mL，具体可以为1μg/mL-200mg/mL，或者1μg/mL-5mg/mL，或者1μg/mL-1mg/mL。

在另一优选例中，所述紫外损伤为紫外线对皮肤造成的损伤，较佳地，紫外线对人皮肤造成的损伤。

在另一优选例中，所述紫外损伤包括紫外线照射造成的皮肤皱纹加深、色素沉着以及加速皮肤老化。

在另一优选例中，所述紫外损伤包括UVA和/或UVB对皮肤的损伤。

在另一优选例中，所述紫外损伤包括紫外线造成的晒伤、晒红、皮肤松弛、衰老、皱纹。

在另一优选例中，所述修复包括修复紫外线对皮肤造成的损伤，加速受损皮肤的修复，阻止或者延缓皮肤光老化。

在另一优选例中，所述制剂或组合物还用于减小皮肤炎症水平、修复受损皮肤、增强皮肤免疫力或主动防御功能。

在另一优选例中，所述组合物或制剂的剂型为固体剂型、半固体剂型、或液体剂型，如溶液、凝胶、膏霜、乳液等。

在另一优选例中，所述组合物为药物组合物或化妆品组合物，较佳地为外用药物剂型。

在另一优选例中，所述制剂为外用制剂或透皮制剂(如外用溶液剂、软膏剂、贴剂等)。

在另一优选例中，所述制剂或组合物包括化妆品、食品、医疗器械或药品，具体化妆品可以为功效型化妆品。

本发明的第二方面，提供了一种防晒修护组合物，所述防晒修护组合物包括以下组分：

(a)β-葡聚糖；

(b)防晒剂；以及

(c)药学上或化妆品学上可接受的载体。

在另一优选例中，以所述防晒修护组合物的重量百分比计，所述组合物包括以下组分：

(a)0.001-99wt％、优选0.002-30wt％、优选0.005-10wt％、优选0.01-3wt％、更优选0.02-1wt％的β-葡聚糖；

(b)0.005-10wt％、优选0.05-8wt％、更优选0.5-5wt％的防晒剂；和

(c)药学上或化妆品学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖和防晒剂在所述防晒修护组合物中的重量比为1:20-20:1，较佳地1:10-10:1。

在另一优选例中，所述防晒剂包括：紫外线屏蔽剂、紫外线吸收剂、或其组合。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物含有紫外线屏蔽剂；优选地，以所述防晒修护组合物的重量百分比计，所述紫外线屏蔽剂的加入量为0.05-10wt％。

在另一优选例中，所述紫外线屏蔽剂选自下组：氧化锌、二氧化钛、硅酸盐、硫酸钡、硬脂酸锌、或铁、锆、硅、锰、铝和铈氧化物、或其组合。

在另一优选例中，所述紫外线屏蔽剂的颗粒的平均直径低于100nm，优选为5-50nm，特别是15-30nm。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物含有紫外线吸收剂；优选地，以所述防晒修护组合物的重量百分比计，所述紫外线吸收剂的加入量为0.05-10wt％。

在另一优选例中，所述紫外线吸收剂选自下组：水杨酸酯类、二苯甲酮类、丙-1,3-二酮类、苯并三唑类、取代丙烯腈类、三嗪类、或其组合，具体地，包括二乙基氨基羟基苯甲酰苯甲酸己酯、乙基己基三嗪酮、甲氧基肉桂酸乙基己酯、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪、水杨酸2-乙基己酯、水杨酸4-异丙基苄基酯、水杨酸高薄荷基酯、2,4,6-三苯氨基-(对羰-2’-乙基-1’-己氧基)-1,3,5-三嗪和辛基三嗪酮、2-羟基-4-甲氧基二苯酮-5-磺酸等。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物还含有受损皮肤修复成分，其中，所述受损皮肤修复成分包括选自下组的成分：维生素E、神经酰胺、维生素B5、或其组合；

在另一优选例中，所述防晒修护组合物还含有美白成分，其中，所述美白成分包括选自下组的成分：烟酰胺、阿魏酸及其衍生物、传明酸、曲酸、白藜芦醇、或其组合；

在另一优选例中，所述防晒修护组合物还含有抗氧化衰老成分，其中，所述抗氧化衰老成分包括选自下组的成分：视黄醇、视黄醇酯、β-蜕皮激素、生育酚衍生物、或其组合。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物还含有保湿成分，其中，所述保湿成分包括选自下组的成分：海藻提取物、透明质酸钠、芦荟提取物、芦芭胶油、聚乙二醇、木糖醇、山梨醇、海藻糖、或其组合。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合，优选地，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物中的β-葡聚糖具有选自下组一个或多个特征：

(1)所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％；

(2)所述β-葡聚糖具有良好的水溶性、复溶性和/或天然可溶性；

(3)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)在25℃水中的溶解度≥0.0001g/100g水，较佳地0.01-50g/100g水，更佳地0.1g-10g/100g水；

(4)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)的水溶液具有高澄清度或高透光率；优选地，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；

(5)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)的水溶液粘度大；优选地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000，更佳地600-2000mPa·s；

(6)所述β-葡聚糖的水溶液具有良好的稳定性；和/或

(7)所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。

在另一优选例中，药学上或化妆品学上可接受的载体为水。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物采用粉(或是压实的粉)、乳剂、凝胶、精华素、膏霜、贴剂、或面膜的形式。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物选自下组：日霜、晚霜、晒后霜、精华素、面膜、防晒乳、防晒露、防晒霜、防晒液、防晒粉、防晒喷雾、防晒啫喱、隔离霜、隔离乳、隔离露、BB霜、洗发水、护发素、爽肤水。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物用于预防和/或修复紫外损伤。

本发明的第三方面，提供了如本发明第二方面所述的防晒修复组合物的用途，用于制备具有防晒功能的化妆品。

本发明的第四方面，提供了一种化妆品，所述的化妆品中包括：作为活性成分的β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述化妆品具有防晒修复的功效。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合，较佳地为裂褶菌β-葡聚糖。

本发明的第五方面，提供了一种组合物产品，所述组合物产品包括：

(1)第一组合物，所述第一组合物含有(a)第一活性成分，所述第一活性成分为β-葡聚糖；和(b)药学上可接受的载体；以及

(2)第二组合物，所述第二组合物为防晒剂。

在另一优选例中，所述防晒剂包括紫外线屏蔽剂、紫外线吸收剂、或其组合。

在另一优选例中，所述组合物用于预防和/或修复紫外损伤。

在另一优选例中，所述组合物产品为化妆品或药物。

在另一优选例中，所述组合物产品还含有美白剂、保湿剂、抗氧化剂、延缓衰老药物、或其组合。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合，优选地，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物中的β-葡聚糖具有选自下组一个或多个特征：

(1)所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％；

(2)所述β-葡聚糖具有良好的水溶性、复溶性和/或天然可溶性；

(3)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)在25℃水中的溶解度≥0.0001g/100g水，较佳地0.01-50g/100g水，更佳地0.1g-10g/100g水；

(4)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)的水溶液具有高澄清度或高透光率；优选地，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；

(5)所述β-葡聚糖(固体颗粒或粉末)的水溶液粘度大；优选地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000，更佳地600-2000mPa·s；

(6)所述β-葡聚糖的水溶液具有良好的稳定性；和/或

(7)所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。

本发明的第六方面，提供了一种预防和/或修复紫外损伤的方法，包括步骤：(a)给需要的对象施用β-葡聚糖、或本发明第二方面所述的防晒修护组合物、或本发明第四方面所述的化妆品、或本发明第五方面所述的组合物产品。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述的对象为哺乳动物(如人)。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了实施例1中制备的裂褶菌β-葡聚糖的傅里叶变换红外光谱图。

图2显示了HacaT-细胞迁移实验(12h)结果。

图3显示了HacaT-细胞迁移实验量化图。

图4显示了裂褶菌β-葡聚糖的紫外修复效果图。

图5显示了裂褶菌β-葡聚糖与防晒修复乳的协同修复效果图。

图6显示了裂褶菌β-葡聚糖和酵母β-葡聚糖的紫外修复效果图。

图7显示了裂褶菌β-葡聚糖和燕麦β-葡聚糖的紫外修复效果图。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，β-葡聚糖，尤其是具有天然可溶性、高分子量、高粘度的β-葡聚糖(如裂褶菌β-葡聚糖)，能够非常有效地预防和/或修复紫外损伤。实验表明，β-葡聚糖有明显修复紫外线对皮肤造成的损伤，加速受损皮肤的修复，并且和防晒剂结合使用具有协同效应。在此基础上，完成了本发明。

术语说明

除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。

如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。

如本文所用，术语“完全水溶”指所述固态形式的β-葡聚糖，可以在水中完全溶解成为β-葡聚糖水溶液，即在25℃100g水中β-葡聚糖的溶解度≥0.0001g，较佳地0.01-50g，更佳地0.1g-10g。

如本文所用，术语“天然可溶性”指天然状态的β-葡聚糖本身所具有的、在水中完全溶解形成水溶液的性质。所述“天然状态的β-葡聚糖”，是指使用天然方法生产得到(如生物发酵)的β-葡聚糖，所述β-葡聚糖没有经过任何化学改性、并且没有经过任何物理的和/或化学的和/或生物的方法将其长链分子打断而降低其分子质量。在另一优选例中，本发明β-葡聚糖为天然状态的β-葡聚糖。

β-葡聚糖

β-葡聚糖是一种天然多糖，在自然环境中可以找到相当多种类的β-葡聚糖，通常存在于特殊种类的细菌、酵母菌、真菌(灵芝)的细胞壁中，也可存在于高等植物种子的包被中。β-葡聚糖的生产方法主要有两种，其一是从燕麦等谷物或蘑菇等子实体真菌中直接提取；其二是通过真菌或细菌的液体发酵，经由对发酵液进行提取加工，以获得β-葡聚糖。

如本文所用，“本发明β-葡聚糖”、“本发明生物多糖”可互换使用，主要是指本发明第一方面所述的β-葡聚糖，所述β-葡聚糖选自下组：裂褶菌β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖、小核菌β-葡聚糖、灰树花β-葡聚糖、侧耳多糖、蘑菇β-葡聚糖、酵母β-葡聚糖、燕麦β-葡聚糖、或其组合；优选地裂褶菌β-葡聚糖。

如本文所用，“裂褶菌β-葡聚糖”指来源于裂褶菌的β-葡聚糖。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的结构如式I所示。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量≥2kD，较佳地2kD-40000kD，更佳地20kD-20000kD。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的分子量可以为5kD-35000kD；10kD-30000kD；50kD-25000kD；100kD-20000kD；200kD-18000kD；400kD-16000kD；500kD-14000kD；1000kD-12000kD；2000kD-4000kD；3000kD-5000kD；4000kD-6000kD；5000kD-7000kD；6000kD-8000kD；7000kD-9000kD；或者8000kD-10000kD。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖的纯度≥70％，较佳地≥90％，更佳地≥95％，更佳地≥99％。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖具有良好的稳定性。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖呈固态形式或液态形式，如β-葡聚糖固体颗粒或粉末、或β-葡聚糖水溶液。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖颗粒或粉末的粒径≤20mm，较佳地0.001-10mm，更佳地0.01-5mm，更佳地0.1-2mm。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)具有良好的水溶性和/或天然可溶性。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度≥0.0001g，较佳地0.01-50g，更佳地0.1-10g。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(颗粒或粉末)在25℃水(100g)中的溶解度可以为0.1-100g；0.2-90g；0.5-80g；1-50g；或者，所述溶解度可以为0.1-0.3g；0.2-0.4g；0.3-0.5g；0.4-0.6g；0.5-0.7g；0.6-0.8g；0.7-0.9g；0.8-1g；或者1-3g；2-4g；3-5g；4-6g；5-7g；6-8g；7-9g；或者8-10g。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液为β-葡聚糖在水中的溶液，即β-葡聚糖水溶液。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖(水)溶液粘度大；较佳地，质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃时)粘度≥40mPa·s，更佳地100-10000mPa·s，更佳地500-2000mPa·s。

在另一优选例中，所述质量浓度为0.5％的β-葡聚糖水溶液(25℃)粘度可以为50-10000mPa·s；100-9000mPa·s；200-8000mPa·s；300-7000mPa·s；400-6000mPa·s；450-5000mPa·s；500-5000mPa·s；550-4000mPa·s；600-3000mPa·s；650-2000mPa·s；或者700-1500mPa·s。

在另一优选例中，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖的水溶液具有高澄清度或高透光率，所述质量浓度为1％的β-葡聚糖水溶液的透光率≥50％，较佳地≥80％，较佳地≥85％，更佳地≥95％；

在另一优选例中，所述β-葡聚糖溶液具有良好的稳定性。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖来源于高等植物或者各种细菌、真菌。

本发明的实施例具体以裂褶菌的发酵产物为例，但不限于此。

防晒剂

如本文所用，“防晒剂”是一类防止紫外线照射的物质。所述防晒剂包括紫外线屏蔽剂和紫外线吸收剂。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物含有紫外线屏蔽剂；优选地，以所述防晒修护组合物的重量百分比计，所述紫外线屏蔽剂的加入量为0.05-10wt％。

在另一优选例中，所述紫外线屏蔽剂选自下组：氧化锌、二氧化钛、硅酸盐、硫酸钡、硬脂酸锌、或铁、锆、硅、锰、铝和铈氧化物、或其组合。

在另一优选例中，所述紫外线屏蔽剂的颗粒的平均直径低于100nm，优选为5-50nm，特别是15-30nm。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物含有紫外线吸收剂；优选地，以所述防晒修护组合物的重量百分比计，所述紫外线吸收剂的加入量为0.05-10wt％。

在另一优选例中，所述紫外线吸收剂选自下组：水杨酸酯类、二苯甲酮类、丙-1,3-二酮类、苯并三唑类、取代丙烯腈类、三嗪类、或其组合，具体地，包括二乙基氨基羟基苯甲酰苯甲酸己酯、乙基己基三嗪酮、甲氧基肉桂酸乙基己酯、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪、水杨酸2-乙基己酯、水杨酸4-异丙基苄基酯、水杨酸高薄荷基酯、2,4,6-三苯氨基-(对羰-2’-乙基-1’-己氧基)-1,3,5-三嗪和辛基三嗪酮、2-羟基-4-甲氧基二苯酮-5-磺酸等。

在另一优选例中，所述防晒剂的含量为0.005-10wt％、优选0.05-8wt％、更优选0.5-5wt％，按防晒修护组合物的总重量计。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖和防晒剂在所述防晒修护组合物中的重量比为1:20-20:1，较佳地1:10-10:1。

制剂或组合物

本发明提供一种用于预防和/或修复紫外损伤的制剂或组合物，所述制剂或组合物含有(a)β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述制剂或组合物含有(a)裂褶菌β-葡聚糖；以及任选的(b)药学上、化妆品学上、或器械类可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述制剂或组合物含有0.001-99wt％、优选0.002-30wt％、优选0.005-10wt％、优选0.01-3wt％、更优选0.02-1wt％的β-葡聚糖(优选地裂褶菌β-葡聚糖)，按制剂或组合物的总重量计。

在另一优选例中，所述β-葡聚糖在所述制剂或组合物中的质量浓度为≥1μg/mL，具体可以为1μg/mL-200mg/mlL，或者1μg/mL-5mg/mL，或者1μg/mL-1mg/mL。

本发明所述制剂或组合物中的“活性成分”是指本发明所述的β-葡聚糖(优选地裂褶菌β-葡聚糖)。

本发明所述的“活性成分”、制剂和/或组合物可用于预防和/或修护紫外损伤。

“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情或症状，而不至于产生严重的副作用。

“药学上或化妆品学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。

“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。

在另一优选例中，本发明β-葡聚糖可与大分子化合物或高分子通过非键合作用形成复合物。

在另一优选例中，本发明β-葡聚糖可通过化学键与大分子化合物或高分子相连接。所述大分子化合物可以是生物大分子如高聚糖、蛋白、核酸、多肽等。

本发明的活性成分、制剂或组合物的施用方式没有特别限制，较佳地为外敷。

在另一优选例中，所述制剂或组合物还用于减小皮肤炎症水平、修复受损皮肤、增强皮肤免疫力或主动防御功能。

在另一优选例中，所述组合物或制剂的剂型为固体剂型、半固体剂型、或液体剂型，如溶液、凝胶、膏霜、乳液等。

在另一优选例中，所述组合物为药物组合物或化妆品组合物，较佳地为外用药物剂型。

在另一优选例中，所述制剂为外用制剂或透皮制剂(如外用溶液剂、软膏剂、贴剂等)。

在另一优选例中，所述制剂或组合物包括化妆品、食品、医疗器械或药品，具体化妆品可以为功效型化妆品。

使用制剂或组合物时，是将安全有效量的本发明组合物施用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～10000mg，较佳地10～2000mg，更佳地20～1000mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明制剂或组合物可以单独给药，或者与其他治疗药物联合给药(如配制在同一药物组合物中)。

本发明药物组合物也可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式和剂量保持不变，而同时或随后使用本发明药物组合物。药物联用也包括在重叠的时间段使用本发明药物组合物与其它一种或几种已知药物。当本发明药物组合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，本发明药物组合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。

防晒修护组合物

紫外线不仅仅破坏最外层的皮肤细胞，同时还能导致真皮细胞坏死和代谢紊乱，皮肤接受过多的紫外线照射，皮肤组织细胞会产生氧化应激，产生过量的活性氧簇ROS，破坏细胞膜的完整性和细胞内的抗氧化系统，进一步引起细胞炎症。

本发明提供了一种防晒修护组合物，所述防晒修护组合物包括以下组分：

(a)β-葡聚糖；(b)防晒剂；以及(c)药学上或化妆品学上可接受的载体。

在另一优选例中，以所述防晒修护组合物的重量百分比计，所述组合物包括以下组分：

(a)0.001-99wt％、优选0.002-30wt％、优选0.005-10wt％、优选0.01-3wt％、更优选0.02-1wt％的β-葡聚糖；

(b)0.005-10wt％、优选0.05-8wt％、更优选0.5-5wt％的防晒剂；和

(c)药学上或化妆品学上可接受的载体。

具体地，防晒修护组合物如本发明第二方面所述。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物采用粉(或是压实的粉)、乳剂、凝胶、精华素、膏霜、油剂、棒剂、贴剂、或面膜的形式。

在另一优选例中，所述防晒修护组合物选自下组：日霜、晚霜、晒后霜、精华素、面膜、防晒乳、防晒露、防晒霜、防晒液、防晒粉、防晒喷雾、防晒啫喱、隔离霜、隔离乳、隔离露、BB霜、洗发水、护发素、爽肤水。

本发明的组合物中还可加入附加辅剂、添加剂、赋形剂、或载体，其中包括温和的表面活性剂、油类、乳化剂、高脂肪成分、珠光蜡、稠度剂、增稠剂、聚合物、鳌合剂聚硅氧烷化合物、脂肪、蜡、稳定剂、生物活性成分、除臭剂、去头屑剂、成膜剂、膨胀剂、抗氧剂、无机着色颜料、水溶助剂、防腐剂、驱虫剂、增溶剂、香精油、着色剂等。

适用的温和性(即特别是与皮肤相容的)表面活性剂地典型实例是脂肪醇聚二醇醚硫酸盐，硫酸单甘酯、单-和/或二烷基磺基琥珀酸酯，脂肪酸羟乙磺酸盐、脂肪酸肌氨酸盐、脂肪酸牛磺酸盐、脂肪酸谷氨酸盐、α-烯烃磺酸盐、醚羧酸、烷基低聚糖苷、脂肪酸葡糖胺、烷基酰氨基甜菜碱和/或蛋白质脂肪酸缩聚物，蛋白质脂肪酸缩聚物中优选值得一提的是其基于小麦蛋白。

两性离子表面活性剂也可用作乳化剂。术语两性离子表面活性剂是指其分子中含有至少一个季铵基和至少一个羧酸根和磺酸根的表面活性化合物。适用的乳化剂还有两性表面活性剂。两性表面活性剂是分子中除C8/18烷基或酰基之外还含有至少一个游离氨基和至少一个-COOH或-SO₃H基从而可形成内盐的表面活性化合物。除两性表面活性剂之外，还可采用季铵乳化剂。

可采用高脂肪成分，例如羊毛脂和卵磷脂，以及聚乙氧基化或酰化羊毛脂和卵磷脂衍生物，多元醇脂肪酸酯，单甘酯和脂肪酸烷醇酰胺，其中脂肪醇烷醇酰胺还可用作泡沫稳定剂。

典型的珠光蜡中值得一提的如下：亚烷基二醇酯，特别是二硬脂酸乙二醇酯；脂肪酸烷醇酰胺，特别是椰油脂肪酸二乙醇酰胺；偏甘酯，特别是硬脂酸单甘酯；可由羟基取代羧酸与含6-22个碳原子脂肪醇形成的多价酯，特别是酒石酸长链酯；脂肪成分，例如脂肪醇，脂肪酮，脂肪醛，脂肪醚和脂肪碳酸酯；脂肪酸如硬脂酸、羟基硬脂酸或二十二烷酸。

稠度剂优选采用含12-22个碳原子的脂肪醇或羟基脂肪醇，优选含16-18个碳原子，以及其他偏甘酯、脂肪酸或羟基脂肪酸。还可采用这些成分与烷基低聚糖苷和/或具有相同链长的脂肪酸-N-甲基葡糖酰胺和/或聚甘油-聚-12-羟基硬脂酸酯的混合物。

适用的增稠剂例如有：二氧化硅气凝胶(亲水硅酸)，多糖，特别是黄原胶，瓜尔胶，琼脂，藻酸盐和纤基乙酸钠，羧甲基纤维素和羟乙基纤维素，以及脂肪酸高分子聚乙二醇单酯和二酯，聚丙烯酸酯，聚丙烯酰胺，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，表面活性剂例如乙氧基化脂肪酸甘油酯，脂肪酸与多元醇如季戊四醇或三羟甲基丙烷形成的酯，脂肪醇乙氧基化物的窄带分布同系物，或烷基低聚葡糖苷，以及电解质如氯化钠或氯化铵。

适用的阳离子聚合物例如有：阳离子纤维素衍生物，例如季铵化羟乙基纤维素，阳离子淀粉，二烯丙基铵盐和丙烯酰胺的共聚物，季铵化乙烯基吡咯烷酮/乙烯基咪唑聚合物，聚二醇和胺的缩聚产物，季铵化胶原多肽，例如月桂基二甲基铵羟丙基水解胶原，季铵化小麦多肽，聚乙烯亚胺，阳离子聚硅氧烷聚合物，例如酰氨基甲基聚硅氧烷，己二酸和二甲基氨基羟丙基二乙烯三胺的共聚物，丙烯酸和二甲基二烯丙基氯化铵的共聚物，聚氨基聚酰胺。

适用的含硅化合物例如是二甲基聚硅氧烷，甲基苯基聚硅氧烷，环聚硅氧烷，以及经氨基、脂肪酸、醇、聚醚、环氧、氟、糖苷和/或烷基改性的含硅化合物，其在室温下成液态和树脂态。适用的的还有硅甲基聚硅氧烷，其为链长平均含200-300二甲基硅氧烷单元的聚二甲基硅氧烷与氢化硅酸酯的混合物。对适用的挥发性聚硅氧烷的详细综述可参见Todd等人在《化妆品和盥洗用品》91，27(1976)中所述内容。

所列举的典型脂肪是甘油酯，可采用天然蜡用作蜡成分，例如小烛树蜡、巴西棕榈蜡、野漆树蜡、西班牙草蜡、软木蜡、guaruma蜡、稻米油蜡、甘蔗蜡、小冠巴西棕榈蜡、褐煤蜡、蜂蜡、紫胶蜡、鲸蜡、羊毛蜡、burzel脂肪、纯地蜡、地蜡、矿脂、石蜡、微晶蜡、经化学改性的蜡(硬蜡)，例如褐煤酸酯蜡，sasot蜡、氢化西蒙得木蜡，以及合成蜡，例如聚亚烷基蜡和聚乙二醇蜡。

脂肪酸金属盐可用作稳定剂，例如硬脂酸或蓖麻油酸的镁盐、铝盐和/或锌盐。

一般认为生物活性成分例如有：生育酚、乙酸生育酚酯、棕榈酸生育酚酯、抗坏血酸、脱氧核糖核酸、视黄醇、没药醇、尿囊素、植烷三醇、泛醇、果酸、氨基酸、神经酰胺、假性神经酰胺、香精油、植物提取物和维生素复合物。

除基本防晒成分之外，还可含有抗氧剂类二级防晒成分，发现其可中止光化学反应链，该反应是由UV辐射透入皮肤引发的。这类成分的典型实例有：氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、酪氨酸、色氨酸)及其衍生物，咪唑类(如咪唑丙烯酸)及其衍生物，肽如D，L-肌肽、D-肌肽、L-肌肽及其衍生物(例如鹅肌肽)，类胡萝卜素，胡萝卜素(例如α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、菌脂色素)及其衍生物，绿原酸及其衍生物，脂酮酸及其衍生物(例如二氢脂酮酸)，金硫葡糖，丙基硫氧嘧啶和其他硫醇(例如thioredoxin、谷胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸、胱胺，以及它们的葡基、正乙酰基、甲基、乙基、丙基、戊基、丁基和月桂基、棕榈酰基、油基、γ-亚油基、胆甾醇基和甘油基酯)，以及它们的盐，硫代二丙酸二月桂基酯，硫代二丙酸二硬脂酸酯，硫代二丙酸及其衍生物(酯、醚、肽、脂类、核苷酸、核苷及其盐)，以及少量相容剂量(例如pmol-μmol/kg)的磺基肟(sulfoximine)化合物(例如丁硫堇(buthionin)磺基肟、高半胱氨酸磺基肟、丁硫堇(butionin)砜、戊-、己-、庚硫堇磺基肟)，还有(金属)螯合剂(例如α-羟基脂肪酸、棕榈酸、肌醇六磷酸、乳铁蛋白)，α-羟基酸(例如柠檬酸、乳酸、苹果酸)，腐黑酸，没食子酸，没食子提取物，胆红素，bifiverdin，EDTA，EGTA及其衍生物，不饱和脂肪酸及其衍生物(γ-亚油酸、亚麻酸、油酸)，叶酸及其衍生物，ubichinon和ubichinol及其衍生物，维生素C及其衍生物(例如棕榈酸抗坏血酸基酯，抗坏血酸基磷酸镁、乙酸抗坏血酸基酯)，生育酚及其衍生物(例如乙酸维生素E)，维生素A及其衍生物(棕榈酸维生素A)，以及安息香树脂的苯甲酸松(koniferyl)脂，芸香亭酸及其衍生物，α-葡基芸香苷，阿魏酸，亚糠基glucitol，肌肽，丁羟基甲苯，丁羟基苯甲醚，去甲二氢愈创木酸，去甲二氢愈创木酸，三羟基丁酰苯，尿酸及其衍生物，甘露糖及其衍生物，超氧化歧化酶，锌及其衍生物(例如氧化锌、硫酸锌)，硒(selen)及其衍生物(例如硒-甲硫氨酸)，1,2-二苯乙烯及其衍生物(例如氧化二苯乙烯，反式氧化二苯乙烯)，以及这些成分适用于本发明的衍生物(盐、酯、醚、糖、核苷酸、核苷、肽和脂类)。

用于改善流动特性的还可采用水溶助剂，例如乙醇、异丙醇或乙醇。此时适用的的多元醇优选含2-15个碳原子和至少2个羟基。多元醇中还可含有功能基特别是氨基，或经N改性。

辅剂和附加成分的总含量可占制剂重量的1-50wt％，优选为5-40wt％。

在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种用于预防和/或修护紫外损伤的防晒修护组合物，所述防晒修护组合物包括：β-葡聚糖、防晒剂和去离子水。

本发明的主要优点包括：

(a)本发明β-葡聚糖，尤其是具有天然可溶性、高分子量、高粘度的β-葡聚糖(如裂褶菌β-葡聚糖)，能够非常明显有效地修复紫外线对皮肤造成的损伤，加速受损皮肤的修复，阻止或者延缓皮肤光老化。

(b)本发明β-葡聚糖修复紫外损伤的副作用非常低，不破坏皮肤表面菌群生态平衡，不会伤害患者皮肤或使其产生耐药性。

(c)本发明β-葡聚糖不仅可以用于预防和/或修复紫外损伤，还可增强皮肤主动防御功能，激发细胞基础免疫功能，同时预防过度炎症，具有双向免疫调节功能，可以抗菌、消炎和修复皮肤，预防和/或治疗皮肤黏膜炎症或其他皮肤炎性疾病、干燥、红血丝、过敏、炎症、细纹、色斑、出油等。

(d)本发明β-葡聚糖与防晒剂结合，可以进一步增强预防和/或治疗修复紫外损伤，具有协同作用。

(e)本发明β-葡聚糖为纯天然来源的生物多糖，具有完全可溶性或天然可溶性，并且未经过任何化学和/或物理的改性或修饰。

(g)本发明β-葡聚糖具有极佳的稳定性，能够与大多数物质共存而保持其活性，因而应用领域广泛，可与其他防晒剂或者护肤品结合使用，在预防和修复紫外损伤的同时，改善肤质。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、β-葡聚糖的获得以及测定

本实施例仅以裂褶菌发酵获得的β-葡聚糖为例，但不限于此。

一、裂褶菌菌种发酵液的获得

下述实施例中的发酵液通过发酵裂褶菌菌种(裂褶菌Schizophyllum communeFr—1003，产品目录：

38548^TM，购于美国模式菌种收集中心[ATCC])，具体如下：

1、裂褶菌菌种活化：将马铃薯200g/L、葡萄糖30g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L制成平板培养基，把裂褶菌菌种接种到该平板培养基上，于25℃恒温培养箱内培养7天得到平板菌丝体；

2、种子活化：将马铃薯淀粉100g/L、葡萄糖40g/L、酵母浸膏2g/L、酵母浸粉2g/L、水制成的液体培养基装入摇瓶，装液量为1/3，取步骤1所得的平板菌丝体接种该摇瓶，于25℃恒温摇床内160rpm震荡培养培养7天，作为种子液；

3、发酵培养：将葡萄糖50g/L、蔗糖50g/L、黄豆粉(山东招远市温计食品有限公司)5g/L、酵母浸粉2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、七水合硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硝酸钾6g/L和水制成的发酵培养基加入发酵罐中121℃灭菌15分钟，再将步骤2所得的种子液接种上述发酵罐中，25℃恒温300rpm搅拌4Lpm通气发酵培养8天，得到裂褶菌发酵液。

二、β-葡聚糖的分离纯化及β-葡聚糖溶液的制备

(1)将上述第一部分得到的裂褶菌发酵液与4倍体积的蒸馏水混合，60℃下浸煮8h，得到浸煮液；

(2)将步骤(1)得到的浸煮液在4,000rpm离心5min，取上清液；将上清液用300目的滤布负压过滤，取滤出清液待用，即为浸煮清液；

(3)将步骤(2)过滤后的浸煮清液加热至50℃，向其中同时加入200目的木质活性炭及8～16目的椰壳活性炭，每种活性炭的添加体积为浸煮清液体积的1％。于50℃，350rpm条件下持续搅拌4h，冷却后待用，得到混合有活性炭的浸煮清液；再将混合有活性炭的浸煮清液依次使用300目滤布及SCP-321#滤板(孔径大小约1.5μm)进行负压抽滤，取过滤后的清液待用；

(4)将Solarbio脂肪酶(L8070，酶活力100～400U/mg)溶于生理磷酸盐缓冲液中，按10U/mL的酶用量，将脂肪酶溶液加入步骤(3)制备的滤液中，搅拌均匀后40℃酶解2h；再将Solarbio中性蛋白酶(Z8030，酶活力>60U/mg)溶于生理磷酸盐缓冲液中，按60U/mL的酶用量，将中性蛋白酶溶液加入上述酶解液中，搅拌均匀后，40℃酶解2h。酶解结束后90℃水浴加热30min，以灭酶活，再以SCP-321#滤板(孔径大小约1.5μm)进行负压抽滤，取过滤后的清液待用；

(5)将步骤(4)过滤后的清液快速与95％浓度的食用乙醇混合(体积比为1：3)，搅拌，直至得到析出物；再将析出物重新溶解至原体积，后快速与95％浓度的食用乙醇混合(体积比为1：3)，搅拌，直至得到析出物；

(6)将步骤(5)得到的析出物置于带孔托盘中，使用电热烘箱40℃烘干，直至恒重，得干燥产物；

(7)将上述步骤(6)得到的β-葡聚糖干燥物粉碎，称取粉碎物5g，溶解于1,000mL超纯水中，维持600rpm搅拌2h，直至β-葡聚糖充分溶解，得到β-葡聚糖溶液；将上述β-葡聚糖溶液使用5μm滤膜进行负压抽滤，即可得到浓度为0.5％的高粘度、高透光率的β-葡聚糖溶液。

该质量浓度为0.5％的β-葡聚糖溶液在600nm波长(以分光光度计检测)下的透光率可以达到90％，40℃时粘度可达600mPa·s以上。

三、β-葡聚糖的鉴定与检测

1、β-葡聚糖的红外光谱鉴定

对上述0.5％的β-葡聚糖溶液进行鉴定，具体按照《中华人民共和国药典》(2010版)二部附录IV中方法C使用红外光谱法，将105℃烘干后的样品，使用傅里叶变换红外光谱仪进行全波长扫描。结果上述实施例1第二部分步骤(7)得到的0.5％溶液为β-葡聚糖溶液。

与酵母β-葡聚糖行业标准QBT 4572-2013中酵母β-葡聚糖的红外光谱图对比，官能团位置基本吻合。如图1所示，主要的官能团位置为：

1)3301cm^-1附近有较强，较宽的吸收峰(糖类O-H键伸缩振动吸收峰)

2)2921cm^-1附近有较弱的吸收峰(糖类C-H键伸缩振动吸收峰)

3)886cm^-1附近有较弱的吸收峰(糖类β构型特征振动吸收峰)

4)1076cm^-1附近有较强的吸收峰(糖类C-OH，C-O-C伸缩振动吸收峰)

傅里叶变换红外光谱测试结果表明，本实施例得到的产物为β-葡聚糖。

2、β-葡聚糖的含量检测

对上述实施例1第二部分步骤(6)得到的干燥产物进行β-葡聚糖定量检测，具体按照酵母β-葡聚糖行业标准QBT 4572-2013中酵母β-葡聚糖含量测定方法，将得到的β-葡聚糖干燥物样品研磨至直径1.0mm左右后进行。结果产物中β-葡聚糖含量为99.23％。

3、β-葡聚糖溶液的激素检测

对上述0.5％的β-葡聚糖溶液进行48项激素测定，具体按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章2.4雌三醇等7种组分第一法高压液相色谱-二极管阵列检测器法和GB/T24800.2-2009化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法进行。结果上述实施例1第二部分步骤(7)得到的0.5％β-葡聚糖溶液中，未检出上述激素(结果见表1)。

表1 48项激素测定

4、β-葡聚糖溶液的粘度测定

按照实施例1第二部分步骤(7)的方法，配制0.3％、0.5％、0.8％、1.0％(质量体积比)的β-葡聚糖水溶液，于25℃时分别检测动力粘度。结果详见表2，随着β-葡聚糖含量的提高，各样品的粘度也递增，分别为472、740、2150和3100mPa·s。

取市售分散性(不溶于水)酵母β-葡聚糖颗粒(购自Wellmune公司)，准确称取2g，加入去离子水混合，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖混悬液，于25℃时检测动力粘度。结果该1.0％的酵母β-葡聚糖混悬液的动力粘度为0mPa·s(见表2)。

取市售可溶性酵母β-葡聚糖粉末(购自Wellmune公司)，准确称取2g，加入去离子水溶解，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖水溶液，于25℃时检测动力粘度。结果该1.0％的酵母β-葡聚糖水溶液的动力粘度为0mPa·s(见表2)。

上述动力粘度的测定方法如下：

(1)取200mL上述溶液样品，置于250mL烧杯中；

(2)将盛有上述溶液/混合液样品的烧杯置于水浴锅中，25℃保温1h；

(3)使用旋转粘度计，检测25℃下各样品的动力粘度。

5、β-葡聚糖溶液的透光率测定

按照实施例1第二部分步骤(7)的方法，配制0.3％、0.5％、0.8％、1.0％(质量体积比)的β-葡聚糖水溶液，于600nm波长处测定溶液透光率，结果如见表2所示，各样品的透光率分别为96.5％、93.1％、87.5％和81.1％。

取市售1.0％的燕麦β-葡聚糖溶液(购自Symrise公司)，于600nm波长处测定溶液透光率，结果透光率为59.7％(见表2)。

取市售分散性酵母β-葡聚糖颗粒，准确称取2g，加入去离子水混合，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖混悬液，于600nm波长处测定混悬液透光率，结果透光率仅为1.3％(见表2)。

取市售可溶性酵母β-葡聚糖粉末，准确称取2g，加入去离子水溶解，并定容至200mL，得到质量体积比为1.0％的酵母β-葡聚糖水溶液，于600nm波长处测定溶液透光率，结果透光率为68.4％(见表2)。

上述透光率的测定方法如下：

(1)取10mL上述溶液样品置于离心管中；

(2)1000rpm低速离心1min，以去除气泡(两种酵母β-葡聚糖溶液/悬液无气泡，未经离心处理)；

(3)小心取3mL至1cm玻璃比色皿内，避免气泡；

(4)使用分光光度计，以去离子水作为空白参照(去离子水的透光率为100％计)，于600nm波长处测定样品透光率。

6、β-葡聚糖溶液的稳定性测定

按照实施例1第二部分步骤(7)的方法，配制0.5％、0.8％、1.0％(质量体积比)的β-葡聚糖水溶液，加入防腐剂后，室温(未避光)放置24个月，观察溶液稳定性，并检测溶液动力粘度和透光率。结果，上述三种溶液状态均十分稳定，其粘度和透光率变化不大，其中透光率甚至有所提高(见表2)。

取市售1.0％的燕麦β-葡聚糖溶液，室温(未避光)放置24个月，观察溶液稳定性，并检测溶液动力粘度和透光率。结果，该1.0％的燕麦β-葡聚糖溶液状态十分不稳定，室温放置3个月后就有固形物析出，导致其粘度和透光率无法检测(见表2)。

表2各种β-葡聚糖溶液动力粘度数据

注：a为市售分散性酵母β-葡聚糖颗粒(不溶于水)，b为市售可溶性酵母β-葡聚糖粉末。

实施例2、细胞划痕实验

1、HacaT细胞复苏，隔天换液；

2、2-3天后，HacaT细胞密度达到80％-90％，此时对HacaT细胞进行传代(1皿可传5-6皿)；

3、2-3天后，HacaT细胞接板，细胞密度为2×10⁵个/ml，48h后，细胞密度长至70％左右，用1ml蓝枪头在接种的6孔板上进行纵向划线，每孔纵向划三条平行线。

4、划线后，每孔加入含有不同浓度的实施例1中制备的裂褶菌β-葡聚糖(0μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml和100μg/ml)的完全培养基，每组浓度设三个平行。

5、12h后，在显微镜下拍照。

结果如图2和图3所示，裂褶菌β-葡聚糖促进HacaT-细胞(角化细胞)增殖和迁移，随着β-葡聚糖浓度的增加，HacaT-细胞(角化细胞)的增殖和迁移的速度加快。因此，β-葡聚糖具有促进角质层修复的功能。

实施例3裂褶菌β-葡聚糖修复紫外损伤的动物实验

1、紫外照射前半个小时，将其中3只大鼠的左耳涂抹3％甘油，右耳涂抹1mg/ml实施例1中制备的裂褶菌β-葡聚糖；

2、紫外照射半个小时后，将上述3只大鼠的左耳涂抹3％甘油，右耳涂抹1mg/ml裂褶菌β-葡聚糖。接下来，每天两次将上述三只大鼠的左耳涂抹甘油，右耳涂抹1mg/ml裂褶菌β-葡聚糖；

3、观察大鼠耳朵的炎症状态，并拍照记录。

结果如图4所示，大鼠耳朵由于紫外辐射造成的严重炎症，其表现为耳朵红肿，毛细血管扩张。实验结果显示涂抹甘油的大鼠的左耳炎症更加严重，红肿保持时间长，炎症消退时间慢。而涂抹1mg/ml裂褶菌β-葡聚糖的大鼠的右耳炎症水平低且炎症消退时间快。结果表明，涂敷裂褶菌β-葡聚糖的大鼠耳部皮肤可有效预防及修复由紫外造成的皮肤炎症和角质层受损情况，有效预防及修复紫外损伤。

实施例4裂褶菌β-葡聚糖与防晒修复乳协同修复紫外损伤的动物实验

1、紫外照射前半个小时，将其中3只大鼠的左耳涂抹适量防晒修复乳(品牌：曼秀雷敦)，右耳涂防晒修复乳后继续涂抹一次1mg/ml实施例1中制备的裂褶菌β-葡聚糖；

2、紫外照射半个小时后，将上述3只大鼠的左耳涂抹防晒修复乳，右耳涂抹1mg/ml裂褶菌β-葡聚糖。接下来，每天两次将大鼠的左耳涂抹防晒修复乳，右耳涂抹1mg/ml裂褶菌β-葡聚糖；

3、观察大鼠耳朵的炎症状态，并拍照记录。

结果如图5所示，对比大鼠的左右耳，单纯使用防晒修复乳的大鼠的左耳红肿情况以及炎症水平都比大鼠的右耳严重。结果表明，与单独使用防晒修复乳和单独使用裂褶菌β-葡聚糖相比，裂褶菌β-葡聚糖与防晒修复乳组合后，两者具有协同作用，对紫外造成的皮肤炎症以及角质层受损的修复效果明显更好，更有效快速地修复紫外线对皮肤造成的损伤。

实施例5酵母β-葡聚糖和燕麦β-葡聚糖修复紫外损伤的动物实验

1、将6只Wistar大鼠分成两组，每组3只；

组一：大鼠右耳涂抹0.1％裂褶菌β-葡聚糖，左耳0.1％酵母β-葡聚糖

组二：大鼠右耳涂抹0.1％裂褶菌β-葡聚糖，左耳0.1％燕麦β-葡聚糖

2、将其麻醉后，紫外照射前，按照上述涂抹各个样品于大鼠双耳，然后紫外照射半个小时候，再次涂抹；

3、接下来每天按照步骤2涂抹两次，观察小鼠双耳的变化并拍照记录。

结果如图6所示，组一的3只大鼠的左耳涂抹酵母β-葡聚糖并不能及时有效的修复紫外造成的皮肤损伤，而相较于酵母β-葡聚糖，裂褶菌β-葡聚糖的紫外修复能力具有明显优势。如图7所示，组二的3只大鼠也是呈现相同的趋势，相较于燕麦β-葡聚糖，裂褶菌β-葡聚糖的紫外修复能力具有明显的优势，具体表现在涂敷有裂褶菌β-葡聚糖的右耳炎症以及红肿消退速度快。

讨论

本发明首次发现，β-葡聚糖具有显著的预防和/或修复紫外损伤的功效，尤其是本发明实施例1中制备的高粘度、高分子质量的裂褶菌β-葡聚糖。本发明发现β-葡聚糖的预防和/或修复紫外损伤的活性与其分支度高低、侧链的葡萄糖数量、立体结构、分子量均有关系。酵母葡聚糖的分支度不定，主链上随机延伸出由β-1,6-糖苷键构成的侧链，侧链的葡萄糖数量较大且不定，多的可高达上百个。酵母葡聚糖侧链长度长，容易形成严密的网状结构，对预防和/或修复紫外损伤效果不如裂褶菌β-葡聚糖。裂褶菌β-葡聚糖分支度适中，侧链仅一个葡萄糖残基。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (5)

1.一种β-葡聚糖的用途，其特征在于，用于制备组合物，所述组合物用于预防和/或修复紫外损伤和促进角化细胞的增殖和迁移从而修复角质层；

其中所述β-葡聚糖为裂褶菌β-葡聚糖；

质量浓度为0.5%的所述β-葡聚糖水溶液在25℃的粘度为650-2000mPa∙s；

所述裂褶菌β-葡聚糖通过裂褶菌菌种Schizophyllum commune Fr—1003，产品目录为ATCC^®38548^TM发酵获得；所述β-葡聚糖的分子量为3000kD-6000kD，并且所述β-葡聚糖包括具有三螺旋立体结构的裂褶菌β-葡聚糖；

所述β-葡聚糖在100g水中25℃下的溶解度为0.5-10g；和

质量浓度为1%的所述β-葡聚糖的水溶液在600nm波长处测定的透光率≥80%。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为药物组合物或化妆品组合物。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物中，所述β-葡聚糖为唯一的预防和/或修复紫外损伤和促进角化细胞的增殖和迁移从而修复角质层的活性成分。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述β-葡聚糖的分子量为3000kD-5000kD。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述紫外损伤包括UVA和/或UVB对皮肤的损伤。

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