CN1655669A - 核酸构建体及其生产改良的种子油组合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物遗传学领域，其中提供了与脂肪酸合成途径中多个基因的协同调节相关的重组核酸分子、构建体和其它物质。特别是，本发明的物质与在脂肪酸合成途径中能够同时提高特定基因的表达以及同时抑制特定的其它基因的表达相关，本发明也提供整合了这些物质的植物，特别是整合了这些构建体的植物，其中该植物显示出改变的种子油组合物。

Description

核酸构建体及其生产改良的种子油组合物的方法
技术领域
本发明涉及重组核酸分子、构建体以及与脂肪酸合成途径中对多个基因进行协同调节相关的其它物质。本发明特别涉及在脂肪酸合成途径中能够促进某些基因表达同时又能够抑制另一些基因表达的相关的物质，本发明也涉及整合这些物质的植物，特别是整合这些构建体的植物，这样的植物具有改良的种子油组合物。
背景技术
植物油用途广泛，通过生物合成或天然植物来源获得新的植物油组合物以及获得这些油组合物的改良方法是需要的，根据油用途的不同，需要各种不同的脂肪酸成分。植物特别是其种子中合成大量油的品种是食用油和工业油的重要来源，种子油几乎都是由甘油三酯组成，其中的脂肪酸被酯化到甘油的三个羟基上。
大豆油通常含有约16-20％的饱和脂肪酸：13-16％的棕榈酸酯和3-4％的硬脂酸，参见Gunstone et al.，The Lipid Handbook，Chapman &Hall，伦敦(1994)。为了满足市场的需求，大豆油已经经过不同的培育方法进行了改良，但是还没有一种大豆油能够满足不同消费者的需求，如色拉油、烹调油和煎炸油的消费者以及生物柴油和生物润滑油的工业市场。以往的大豆油或者是太昂贵或者是缺乏某种关键的食物品质如氧化稳定性、诱人的烹调香味或不饱和脂肪酸含量，或者是缺乏某种重要的生物柴油品质如适宜的氮氧化物排放量或对寒冷的耐受性或者是低温时的流动性。
较高等的植物通过普通的代谢途径来合成脂肪酸-脂肪酸合酶(FAS)途径，该途径发生在脂质体中；在植物细胞中，β-酮脂酰基-ACP合酶是FAS途径中重要的限速酶，其具有几种类型。β-酮脂酰基-ACP合酶I催化链延长至棕榈酰ACP(C16:0)，而β-酮脂酰基-ACP合酶II催化链延长至硬脂酰-ACP(C18:0)，β-酮脂酰基-ACP合酶IV是β-酮脂酰基-ACP合酶II的变异体，也能够催化脂肪链延长至18:0-ACP。在大豆中，FAS的主要产品是16:0-ACP和18:0-ACP，18:0-ACP去饱和形成的18:1-ACP是由位于脂质体内的可溶性δ-9去饱和酶(也称作“硬脂酰-ACP去饱和酶”)催化完成，见Voelker et al.，52Annu，Rev，植物生理，植物分子生物学.335-61(2001)。
脂质体内的FAS和δ-9去饱和酶的产物，16:0-ACP，18:0-ACP和18:1-ACP在特异的硫酯酶(FAT)作用下脱羟基。植物中的硫酯酶依据基因序列的同一性和酶底物的选择性分为两个基因家族，第一家族，FATA，包括长链的酰基-ACP硫酯酶，其主要对18:1-ACP有活性；第二家族的酶，FATB，通常以16:0-ACP(棕榈酰-ACP)，18:0-ACP(硬脂酰-ACP)和18:1-ACP(油酰基-ACP)作为底物。这样的硫酯酶在植物的重新的脂肪酸生物合成时对决定脂肪酸链的长度起重要作用，因此这些酶对于脂肪酰成分的各种改进物的供应是有用的，特别是关于种子贮备油中各种脂肪酰基的相对含量。
FATA和FATB的反应产物，游离脂肪酸，离开脂质体，又转变成其各自的酰基-CoA酯，酰基-CoAs是脂质生物合成途径的底物(Kennedy途径)，该途径发生在内质网(ER)中，负责膜脂质的形成以及构成种子油三甘油酯的生物合成。在ER中还有其它膜结合去脂肪酶，该酶能够进一步对18:1去饱和形成多不饱和脂肪酸，一种δ-12去饱和酶(FAD2)催化一双键插入18:1中形成亚油酸(18:2)，一种δ-15去饱和酶(FAD3)催化一双键插入18:2，形成亚麻酸(18:3)。
许多复杂的生化途径已进行了遗传学调控，通常是抑制单个基因或使单个基因过表达。对植物遗传调控潜能的进一步开发将集中在对某一途径中的多个基因进行协同调控方面。许多方法已经被采用以在某种植物中转入基因包括有性杂交、再转换、共转化以及使用相关的转基因。含有部分相关基因序列的转基因嵌合体能够用来协同抑制多个植物内源性基因，模拟病毒蛋白多聚体的构建体能够将多个编码基因同时导入植物细胞中，参见一篇综述，Halpin et al.，植物分子生物学，47：295-310(2001)。
因此，理想的植物表型需要一或多种基因的表达以及并发的另一或另一些基因的表达的减少。因而，有必要利用单一的转基因构建体，同时使植物中的一或多种基因过表达，而使另一或一些基因的表达抑制或下调。
发明概述
本发明提供一种或一些核酸分子，该分子导入细胞或组织时能够抑制、至少是部分减少、减少、实质性减少或有效降低至少一种或多种内源性FAD2、FAD3或FATB RNAs的表达，同时又能共表达、同时表达或协同产生一种或多种RNAs或蛋白，该RNAs或蛋白转录自或由β-酮脂酰基-ACP合酶I、β-酮脂酰基-ACP合酶IV或CP4 EPSPS编码，给植物细胞和用相同基因转化的植物和种子提供来自转化植物的油和其它产品。
本发明也提供一种重组的核酸分子，该分子由两部分DNA序列构成，第一组DNA序列在宿主细胞表达时能够抑制至少一种、优选两种基因的内源性表达，该基因选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组；第二组DNA序列在宿主细胞表达时能够提高至少一种基因的内源性表达，该基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因，β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组。
本发明进一步提供一种重组核酸分子，该分子包含第一组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够形成一种dsRNA构建体并能够抑制至少一种，优选两种，基因的内源性表达，该基因选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组，而且第一组DNA序列包括第一非编码序列，其表达的第一RNA序列呈现与FAD2基因的非编码区至少90％的同一性，和反义序列，该反义序列表达第一反义RNA序列，该反义的RNA序列与第一RNA序列形成双链的RNA分子；第二非编码序列表达第二RNA序列，该RNA序列与FAD3基因的非编码区有至少90％同一性，和第二反义序列，该反义序列表达第二反义RNA序列，它与第二RNA序列形成双链RNA分子；该重组核酸分子所包含的第二组DNA序列在宿主细胞表达时能够提高至少一种基因的内源性表达，该基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因，β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组。
本发明提供用这些重组核酸分子转化植物的方法，该方法包括产生一种转化植物的方法，该转化植物的种子中油酸含量增高、饱和脂肪酸含量降低、多不饱和脂肪酸含量降低，此方法包括步骤(A)用重组核酸分子转化植物细胞，该核酸分子包括第一组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够抑制至少一种、优选两种基因的内源性表达，该基因选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组；和第二组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够提高至少一种基因的内源性表达，该基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因，β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组；和步骤(B)培育该转化植物，与有相似的遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物种子相比，该转化植物的种子中油酸含量增高、饱和脂肪酸含量降低、多不饱和脂肪酸含量降低。
本发明进一步提供用重组核酸分子转化植物细胞的方法，该方法包括改变植物细胞中油组合物的方法，其包括步骤(A)用重组核酸分子转化植物细胞，该核酸分子包括第一组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够抑制至少一种、优选两种基因的内源性表达，该基因选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组；和第二组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够提高至少一种基因的内源性表达，该基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因，β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组；和(B)培育所述植物细胞，其条件是：第一组DNA序列和第二组DNA序列的转录起始，该植物细胞所含的油组合物与有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物细胞相比发生了变化。
本发明还提供了一种转化植物，该植物含有一种重组的核酸分子，该重组核酸分子包括第一组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够抑制至少一种、优选两种基因的内源性表达，该基因选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组；和第二组DNA序列，其在宿主细胞表达时能够提高至少一种基因的内源性表达，该基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因，β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组。本发明进一步提供一种结有种子的转化大豆植物，其中种子的油组合物包含55-80％重量百分比的油酸、10-40％重量百分比的亚油酸，6％或小于6％重量百分比的亚麻酸和2-8％重量百分比的饱和脂肪酸，以及进料、植物部分和来源于植物的种子。
本发明还提供一种大豆种子，种子的油组合物包含55-80％重量百分比的油酸、10-40％重量百分比的亚油酸，6％或小于6％重量百分比的亚麻酸和2-8％重量百分比的饱和脂肪酸。还提供了一种大豆种子，其油组合物含有65-80％重量百分比的油酸、10-30％重量百分比的亚油酸，6％或小于6％重量百分比的亚麻酸和2-8％重量百分比的饱和脂肪酸。本发明还提供了包括油组合物的大豆制品，所述油组合物包含69-73％重量百分比的油酸、21-24％重量百分比的亚油酸，0.5-3％重量百分比的亚麻酸和2-3％重量百分比的饱和脂肪酸。
本发明提供的粗大豆油的油组合物包括55-80％重量百分比的油酸、10-40％重量百分比的亚油酸，6％或小于6％重量百分比的亚麻酸和2-8％重量百分比的饱和脂肪酸。本发明提供的另一种粗大豆油的油组合物包括65-80％重量百分比的油酸、10-30％重量百分比的亚油酸，6％或小于6％重量百分比的亚麻酸和2-8％重量百分比的饱和脂肪酸。
附图说明
附图1-4分别描述了列举的核酸分子构型；
附图5和6分别描述了列举的第一组DNA序列的构型；和
附图7-15分别描述了本发明的核酸分子。
发明详述
核酸序列的描述
SEQ ID NO：1是FAD2-1A内含子1的核酸序列。
SEQ ID NO：2是FAD2-1B内含子1的核酸序列。
SEQ ID NO：3是FAD2-1B启动子核酸序列。
SEQ ID NO：4是FAD2-1A基因组克隆的核酸序列。
SEQ ID NO：5&6分别是FAD2-1A 3’UTR和5’UTR的核酸序列。
SEQ ID N0：7-13分别是FAD3-1A内含子1，2，3A，4，5，3B和3C的核酸序列。
SEQ ID NO：14是FAD3-1C内含子4的核酸序列。
SEQ ID NO：15是部分FAD3-1A基因组克隆的核酸序列。
SEQ ID NO：16&17分别是FAD3-1A 3′UTR和5′UTR的核酸序列。
SEQ ID NO：18是部分FAD3-1B基因组克隆的核酸序列。
SEQ ID NO：19-25分别是FAD3-1B内含子1，2，3A，3B，3C，4和5的核酸序列。
SEQ ID NO：26&27分别是FAD3-1B 3′UTR和5’UTR的核酸序列。
SEQ ID NO：28是FATB基因组克隆的核酸序列。
SEQ ID NO：29-35分别是FATB内含子I、II、III、IV、V、VI和VII的核酸序列
SEQ ID NO：36&37分别是FATB 3′UTR和5′UTR的核酸序列。
SEQ ID NO：38是Cuphea pulcherrima KAS I基因的核酸序列
SEQ ID NO：39是Cuphea pulcherrima KAS IV基因的核酸序列
SEQ ID NO：40&41分别是蓖麻(Ricinus communis)和希蒙得木(Simmondsia chinensis)δ-9去饱和酶基因的核酸序列。
定义
“ACP”是指酰基载体蛋白部分，“改良的种子油组合物”是指来自于本发明的转基因或转化植物的种子油组合物，相对于来自有相似遗传背景但没有被转化的植物的种子油组合物，其改变或改善了其脂肪酸水平。“反义抑制”是指由于导入一种反义RNA分子而导致的基因特异性沉默。
“一种以上物质例如mRNA或蛋白的共表达”是指在重叠时间域内在同一细胞或组织中的一种物质与另一种物质同时表达。“一种以上物质的协同表达”是指当来自相同物质的转录物和蛋白产物在共享或使用同一个启动子时有一种以上物质共同表达。一种核酸序列的“互补链”是指其全长序列的互补链。
“共抑制”通常是指由于一种同源正义构建体的表达而使特异的内源性基因或基因家族的表达水平，通常是指RNA的水平，下降，该同源正义构建体在内源基因转录时能够使同一条链上的mRNA转录，见Napoli et al植物细胞2：279-289(1990)；van der Krol etal.，植物细胞2：291-299(1990)。“粗大豆油”是指一种从大豆种子中提取的大豆油，虽然它可能已经被脱胶，但还没有被提炼、加工或混合。
在本文中当指蛋白和核酸时，“获得”是指直接或间接从已知蛋白或核酸中获得蛋白或核酸，(直接的例子如当获得一种已知蛋白或核酸的序列时制备具有与已知蛋白或核酸序列相似、至少部分相似序列的蛋白或核酸)(间接的例子如从与已知蛋白或核酸相关的组织中获得蛋白或核酸)。从一已知蛋白或核酸中获得蛋白和核酸的其它方法是本领域技术人员所熟知的。
“dsRNA”、“dsRNAi”、“RNAi”都是指由于能够形成双链RNA分子的构建体的导入而诱导的基因特异性沉默。“dsRNA分子”和“RNAi分子”都是指双链RNA分子，该RNA分子在导入一个细胞和组织时能够至少部分减少细胞和组织细胞中mRNA的水平。
“外显子”指该术语的通常含义，即指核酸分子，通常是指DNA，的一个片段，它编码被表达蛋白的全部或部分。
“脂肪酸”是指游离脂肪酸和脂肪酰基
“基因”是指一段核酸序列，该序列包含与基因产物的表达相关的5’端启动子区域、任意的内含子、外显子区域以及与基因产物表达相关的3’或5’端非翻译区。“基因沉默”是指基因表达的抑制或基因表达的下调。
“基因家族”是指某种生物中的两个或更多的基因，它们编码具有相似功能属性的蛋白。“基因家族成员”是指在植物遗传物质中发现的基因家族中的任意基因，例如“FAD2基因家族成员”是指在植物遗传物质中发现的任意FAD2基因。一个有两个成员的基因家族的的例子是FAD2-1和FAD2-2。基因家族还可以按照核酸序列的相似性进一步进行分类。一个基因家族的成员在基因编码区优选有至少60％，更优选至少70％，再优选至少有80％的核酸序列相同。
“异源性”意味着非天然在一起。一种“高油酸大豆种子”是指一种种子，其油组合物中有大于75％的油酸。
如果作为人为调控的结果，一种核酸分子被插入到细胞或生物体，无论如何间接，都称为核酸分子被“导入”。导入核酸分子的实例包括，但并不限于，通过转化、转染、注射和发射方式导入细胞的核酸和通过偶联、胞饮和吞噬的方式导入生物体的核酸。
“内含子”是常规意义的术语，意思是核酸分子的一个片段，通常指DNA片段，它不对表达蛋白的全部或部分进行编码，在内源性条件下，它转录成RNA分子，该RNA分子在翻译为蛋白质之前要被剪切出内源性RNA。一种“内含子dsRNA分子”和一种“内含子RNAi分子”都是指一种双链的RNA分子，其在导入细胞或组织内时能够至少部分的减少组织细胞内或细胞内的mRNA的水平，该组织或细胞内的双链RNA分子显示出与该组织或细胞的基因中的内含子足够的同一性以降低含有内含子序列的mRNA的水平。
“低饱和度”的油组合物包含3.6％-8％的饱和脂肪酸。
“中等油酸的大豆种子”是指一种种子，在其种子的油组合物中含有50％-85％的油酸。
术语“非编码”是指核酸分子的序列，它对表达蛋白的全部或部分不进行编码，非编码序列包括但并不限于内含子、启动子，3’端非翻译区(3’UTRs)，和5’端非翻译区(5’UTRs)。
可操作地与一种或多种核酸序列连接的启动子能够驱动一种或多种核酸序列的表达，包括多顺反子构型中的多编码或非编码核酸序列。
“被生理性连接的”核酸序列是指发现于单个核酸分子中的核酸序列。“植物”包括整个植物、植物器官(例如叶、茎、根等)、种子、植物细胞及其后代。术语“植物细胞”包括，但不限于，种子的悬浮培养液、胚芽、分生组织区、愈合组织、叶、根、芽、配子体、孢子体和小孢子母细胞。“植物启动子”包括但不限于，植物病毒启动子、来源于植物的启动子、能够在植物细胞中发挥功能的合成启动子，其促进mRNA表达。
“多顺反子基因”或“多顺反子mRNA”是指含有转录核酸序列的任意基因或mRNA，该核酸序列应答于多个表达基因。由此可见这样的多顺反子基因或mRNA含有应答于内含子、5’UTRs、3’UTRs或其组合的序列；重组的多顺反子基因或mRNA可能含有，并不限于，应答于来源于一个基因和来自于另一个基因的一种或多种内含子的一种或多种UTRs序列。
“种子特异性启动子”是指一个启动子它优先的或专门的在种子中呈现活性。“优先活性”是指启动子的活性，该启动子的活性在种子中的表现实际上要高于其它植物组织、器官或细胞器。“种子特异性”包括但不限于种子糊粉层、胚乳和/或胚芽中的活性。
“正义内含子抑制”是指基因沉默，它是由正义内含子或其片段的导入而诱导的。正义内含子抑制描述于Fillatti的PCT专利WO01/14538A2中。多种物质例如mRNA或蛋白的“同时表达”是指一种物质与另一种物质同时表达，这样的表达只能部分覆盖并且也能够发生于不同组织或不同水平。
“总油水平”是指脂肪酸的总聚集量不限定脂肪酸的类型。“转基因”是指与导入组织中的基因表达相关的核酸序列，转基因包括，但不限于，生物体中的内源性基因或非自然发生的基因。“转基因植物”是指任何一种植物，它稳定的整合了一种转基因以一种便于来源于植物的转基因以有性或无性的方式传递的方法。
“零饱和”油组合物包括低于3.6％的饱和脂肪酸。
在本文中指蛋白和核酸时，用普通的大写字母，例如“FAD2”代表酶、蛋白、多肽或肽；用斜体大写字母，例如“FAD2”用于指核酸，包括，但不限于，基因、cDNA、和mRNAs。一个细胞或生物体含有一个多基因家族，这些基因编码某一特异酶，跟在基因术语后面的大写字母(A、B、C)用来表示家族的成员，例如，FAD2-1A是一个不同于FAD2-1B的基因家族成员。
在本文中，任何范围的限定都包括该范围的端点除非另有说明。
物质
本发明的物质将优选有“生物活性”的物质，生物活性是关于结构属性，例如核酸分子能够与另一个核酸分子杂交的能力，或关于一个蛋白能够与一个抗体(或与另一个分子进行结合竞争)结合的能力。选择性地，这样的属性可以是催化性的包括这样的物质能够调节某一化学反应或应答。这样的物质优选“基本纯的”。用在此处的术语“基本纯的”是指从与之正常相关的内环境中的所有其它分子中选择一个分子。优选“基本纯的”分子是指制备过程中的优势种类。“基本纯的”分子超过(不包括出现在天然混合物中的溶剂)60％，75％，优选超过90％，更优选超过95％从其他分子中游离。术语“基本纯的”不包含出现在天然环境条件中的分子。
本发明的物质也可以是重组的。此处，术语“重组”是指任何物质(例如包括但不限于DNA，肽)它间接来自于一个核酸分子的人为操作；也可以认为本发明的物质可以用便于识别该物质的物质来标识，例如荧光标记、化学标记和/或改良基质。
本发明的物质包括核酸分子，该核酸分子包括DNA序列，它在全长上与植物编码区或非编码区或者是与与植物编码区或非编码区互补的序列相比至少有50％、60％或70％的同一性，优选DNA序列，其在全长上与植物编码区或非编码区或者是与与植物编码区或非编码区互补的序列相比有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的同一性。
“同一性”是本领域所熟知的，是指两个或多个多肽序列之间或两个或多个核酸序列之间的关系，经序列比较后决定；在本领域中，“同一性”也指多肽之间或核酸分子序列之间的序列相关程度，由这些序列的碱基匹配程度决定；“同一性”可以根据已知的方法容易地计算出，这些方法包括，但不限于，描述于Computer MolecularBiology，Lesk编辑，牛津大学出版，纽约1993；Biocomputing：Infornatics and Genome Projects，Smith编辑，Academic出版，纽约1988；Computer Analysis of Sequence Data，第一部分，Griffin和Griffin编辑，Humana出版，新泽西，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heinje，Academic出版1987；Sequence Analysis Primer，Gribskov和Devereux编辑，Stockton出版，纽约1991；和Carillo和Lipman，SIAM J，应用数学，48：1073，1988。
为了计算测试序列之间的最大匹配程度设计了决定同一性的方法，而且决定同一性的方法以免费获得程序的方式编撰。可用于决定两个序列之间同一性的计算机程序包括，但不限于，GCG，一组含有五个BLAST的程序，其中三个用于核酸序列的查询(BLASTN，BLASTX和BLASTX)，两个用于蛋白序列的查询(BLASTP和TBLASTN)。BLASTX程序可以从NCBI和其它来源免费获得，例如BLAST年刊，Altschulet al.，NCBI NLM NIH，Bethesda，MD 20894，；Altschul et al.，分子生物学杂志，215：403-410(1990)，著名的Smith Waterman法则也可用于计算同一性。
多肽序列比较参数通常包括：Algorithm：Needleman and Wunsch，分子生物学杂志，48：443-453(1970)；Comparison matrix：BLOSSUM62from Hentikoff and Hentikoff，proc.Natl，Acad.Sci.USA89：10915-10919(1992)；Gap Penalty：12；Gap Length Penalty：4.与这些参数应用的程序可以从Medison，Wisconsind遗传学计算机组(“GCG”)以“差异”程序免费获得，上述参数与no penalty forend gap是肽比较的缺省参数。
核酸序列比较的参数包括：Algorithm：Needleman and Wunsch，分子生物学杂志，48：443-453(1970)；比较基质：配对-+10；不配对＝0；差异penalty：50；Gaplength penalty：3。在本文中，“％同一性”在核酸分子序列比较时将上述参数作为缺省参数决定。来自于GCG的“差异程序其版本是10.2。
本发明核酸序列的子集包括核酸分子片段。“核酸分子片段”是指一段较大的核酸分子，其由足够含量的或其大部分是由较大的核酸分子组成，或者是其包括少量的寡聚核苷酸，含有从大约第15位到大约第400位的邻近的核苷酸，更优选大约第15位到第45位的邻近核苷酸，大约第20位到第45位的邻近核苷酸，大约第15位到第30位的邻近核苷酸，大约第21位到第30位的邻近核苷酸，大约第21位到第25位的邻近核苷酸，大约第21位到第24位的邻近核苷酸，大约第19位到第25位的邻近核苷酸，或大约第21位的邻近核苷酸。核酸分子片段的相当一部分或实际上是大部分由植物的编码或非编码区组成，或选择性地含有较小的寡聚核苷酸。在优选实施例中，一个片段显示出与植物编码区或非编码区100％的同一性。在另一个优选实施例中，一个片段包含一部分较大的核酸序列。在另一方面，一个核酸分子片段含有本发明核酸分子的至少15，25，50或100个邻近核苷酸的核苷酸序列。在一个优选实施例中，一个核苷酸分子含有植物编码区或非编码区的至少至少15，25，50或100个邻近核苷酸的核苷酸序列。
在本发明的另一方面，本发明核酸分子的DNA序列可能包含不同于那些编码多肽或蛋白片段的序列，这是由于多肽中保守的氨基酸变异，因此编码多肽的核酸序列由于保守变异可能有序列的差异。在本发明的再一方面，本发明的一种或多种核酸分子在核酸序列上不同于那些本文中给出的专门序列，它们的一种或多种密码子被编码最初被编码的氨基酸的保守替代物的密码子替换。
本发明的物质也包括核酸分子，该核酸分子编码本发明多肽的至少约有相邻的10个氨基酸的区域，优选至少约有相邻的25、40、50、100或125个氨基酸的区域。由于遗传密码子的简并性，不同的核苷酸密码子可用于编码一特异的氨基酸。一个宿主细胞呈现一种优选的密码子使用方式。结构核苷酸序列优选由特异宿主细胞的密码子使用方式构建，这通常有助于提高转化的宿主细胞中结构核苷酸序列的表达。上述任一核苷酸和氨基酸序列可以被修饰以体现含有该密码子的宿主细胞或组织的优选密码子的使用方式。因此，本发明多肽的一个邻近10个氨基酸区域可以由许多不同的核苷酸序列编码，在植物中，结构核酸序列的改进以体现最佳密码子的使用方式描述于美国专利5,689,052。
本发明的物质包括核酸分子，例如，但不限于，在本发明的一个方面，本发明的核酸分子包含序列SEQ ID NO：19，20，21，22，23，25，32，33，34，或35或其片段或其互补链的内含子序列。在本发明的另一个方面，核酸分子包括核酸序列，该序列导入细胞或组织时能够在同时表达、共表达或协调表达另一RNA或蛋白时抑制RNA或蛋白的产生。在本发明的一个方面，核酸分子含有一个核酸序列，当其导入细胞或组织时，能够抑制、至少部分减少、减少，实质上减少或有效降低内源性FAD2，FAD3和/或FATB RNA的表达，而同时能够共表达、同时表达或协同表达β-酮脂酰基-ACP合酶I、β-酮脂酰基-ACP合酶IV、δ-9去饱和酶和/或CP4 EPSPS RNA或蛋白。
通过降低植物细胞中的FAD2和/或FAD3的含量，可以获得百分含量降低的多不饱和脂肪酸例如亚油酸酯(C18:2)和十八碳三烯酸甘油酯(C18:3)。改变脂肪库中所整合的三甘油酯能够同样的影响植物细胞中的油组合物，因此，FAD2和/或FAD3表达量的降低可能导致单不饱和脂肪酸例如油酸(C18:1)含量的降低。当植物细胞中的FATB含量降低时，可以使饱和脂肪酸如棕榈酸酯或硬脂酸酯含量降低，因此，FATB表达量的降低会导致不饱和脂肪酸例如油酸(C18:1)的含量增加。FAD2，FAD3和FATB表达的同时抑制反而会导致FAS途径向有18个碳原子长度的单不饱和脂肪酸例如油酸(C18:1)的全面升高的方向驱动，见美国专利5,955,650。
通过提高植物细胞中的β-酮脂酰基-ACP合酶I(KASI)和/或β-酮脂酰基-ACP合酶IV(KASIV)的含量，可以降低16:0-ACP的百分含量，提高18:0-ACP的百分含量。较大量的18:0-ACP与一种或多种FAD2，FAD3和FATB的同时抑制相结合时有助于油组合物向油酸酯(C18:1)全面提高的方向驱动。通过提高植物细胞中的δ-9去饱和酶的含量，可以提高不饱和脂肪酸的百分含量，结果全面降低了硬脂酸和总饱和脂肪酸的含量。
这些升高的和降低的酶表达的结合可以被调控以生成这样的脂肪酸成分，包括油，其油酸水平升高，亚油酸、十八碳三烯酸甘油酯、硬脂酸酯、和/或棕榈酸酯水平降低，所有饱和脂肪酸水平的降低。在植物中基因表达的提高可以通过将体外复制的基因编码序列导入植物细胞实现或优选将体外复制的植物基因组中基因编码序列整合入植物细胞。过表达可以通过提高调节机制的活性来实现，该调节机制提交基因的表达，例如基因表达的上调。
植物细胞中CP4 EPSPS的导入使得植物细胞对草甘膦有了耐受性，这因而提供了一种确认是否成功转化的便利方法，即通过筛选对草甘膦的耐受性。
植物细胞中基因表达的抑制也称为基因沉默，发生在转录水平和转录后水平，有各种方法可以抑制宿主细胞内内源性序列的表达包括，但不限于，反义抑制、共同抑制、核酶、正义和反义结合(双链RNAi)、启动子沉默和DNA结合蛋白例如锌指蛋白(见WO 98/53083和WO 01/14538)。这些机制与DNA或RNA水平的核酸同一性相关。在植物中，双链RNA分子能够诱导序列特异性沉默。基因沉默通常是指植物中的双链RNA(dsRNAi)，caenorhabditis elegans和动物中的RNA干扰或RNAi，以及真菌中的quelling。
在优选实施例中，本发明的核酸分子包括第一组DNA序列，每一序列都呈现与植物中表达基因的一种或多种编码或非编码序列的足够的同一性，它能够有效降低、实质上减少或至少部分降低mRNA的转录水平或蛋白水平，该蛋白质由来自于获得的编码序列或非编码序列的基因编码或由目标非编码序列同源的基因编码，和第二组DNA序列，其序列显示出与植物表达基因足够的同原性，它能够至少部分促进、提高、促进或实质上促进mRNA的转录水平或被编码蛋白的水平。
在本文中，某一物质例如蛋白或mRNA数量或水平的降低是由于相关细胞或组织缺乏能够诱导该物质的DNA序列而导致的降低。例如“至少部分降低”意味着降低至少25％，“实质性降低”意味着降低至少75％，以及“有效量的减少”意味着减少了95％以上，所有这些物质含量或水平的降低都是由于相关细胞或组织缺乏诱导该物质的DNA序列。
在本文中，某一物质例如蛋白或mRNA含量或水平的增加或提高意思是其水平或含量高于在植物细胞或组织中具有相似遗传背景但缺乏导入的编码该蛋白或mRNA的核酸分子的物质的含量或水平，例如“至少部分提高”意味着提高至少25％，“实质性提高”意味着提高至少100％，所有这些物质含量或水平的提高都与具有相似遗传背景但缺乏导入的编码该蛋白或mRNA的核酸分子的植物细胞或组织中的该物质的含量或水平有关。
当对某一物质的水平进行比较时，这样的比较优选在相似遗传背景的生物体之间进行，优选的，相似遗传背景是指这些被比较的生物体有50％或更多，优选75％或更多，甚至优选90％或更多的核酸遗传物质的序列相同。
在另一个优选方面，相似遗传背景是指被比较的生物体是植物，该植物除通过植物转染技术最初导入的遗产物质外其它基因是相同的。某一物质含量或水平的测定是通过适宜的方法进行的，非限制性实施例包括mRNA转录水平的比较，蛋白肽水平和/或表型，特别是油含量。在本文中，mRNA转录包括加工和未加工的mRNA转录，蛋白或肽包括有或没有经过翻译后修饰的蛋白或肽。
第一组DNA序列是编码序列，内含子序列，3’UTR序列，5’UTR序列，启动子序列，以及其它非编码序列和上述序列的组合。第一组DNA序列编码一种或多种序列该序列在被表达时能够选择性的减少其中之一或两种蛋白和转录物，编码蛋白和转录物的基因选自由FAD2，FAD3和FATB组成的组。在一个优选实施例中，第一组的DNA序列能够表达反义RNA，单个反义序列可以与一个转录物相连或不与单个转录物相连。在进一步的优选实施例中，第一组DNA序列是生理性的连接序列，它能够表达单个dsRNA分子。在另一个不同的优选实施例中，第一组DNA序列能够表达正义共抑制RNA，其中单个的正义序列可以连接于一个转录物中或在不连接的单个转录物中。第一组DNA序列的实例描述于详述的B部分和实施例中。
第二组DNA序列编码一种或多种序列，该序列在表达时能够提高一种或两种蛋白和转录物，其由选自如下的基因编码：β-酮脂酰基-ACP合酶I(KASI)和/或β-酮脂酰基-ACP合酶IV(KASIV)，δ-9去饱和酶和CP4 EPSPS。第二组的DNA序列可以是生理性的连接序列，第二组DNA序列的实施例描述于详述的第C和第D部分。
因此，本发明提供了改变脂肪酸成分和含有这些成分的化合物例如油、石蜡和脂肪的方法。本发明也包括在植物宿主细胞中生产特异脂肪酸的方法，这些方法采用本文描述的表达盒用于植物宿主细胞的FAS途径的改进。
B第一组DNA序列
在本发明的一个方面，核酸分子包括第一组DNA序列，当其导入细胞或生物体内时表达一种或多种序列，该序列能够有效降低、实质性减少或至少部分减少mRNA的转录或由一种或多种基因编码的蛋白质的水平，优选包括目标内源性基因、植物基因和非病毒性基因。在本发明的一个方面，基因是指FAD2，FAD3或FATB基因。
在一个方面，本发明的核酸分子包括DNA序列，此序列与来自植物基因的一种或多种编码或非编码序列呈现足够的同一性，当其导入植物细胞或植物进行表达时，能够有效的降低、实质性减少或至少部分减少mRNA的转录或由所得到的编码或非编码序列编码的蛋白水平。第一组的DNA序列编码RNA序列或RNA片段，其显示出与所抑制基因的编码区或非编码区有至少90％，优选至少95％，更优选至少98％，最优选至少100％的同一性，这些百分同一性可以是与一个核酸片段。
优选的，非编码序列是指3’UTR，5’UTR或来自植物基因的植物内含子，更优选，非编码序列是指启动子序列，3’UTR，5′UTR或来自植物基因的植物内含子，内含子可以位于外显子中间或位于植物基因的5’或3’UTR内。
第一组DNA序列可以被涉及用于表达dsRNA构建体，正义抑制RNA构建体，或反义RNA构建体或任意的其它抑制性构建体以达到预期的效果，当其被导入植物细胞或植物时。这样的DNA序列可以是核酸分子片段。在一个优选方面，dsRNA构建体包括外显子序列，但是该外显子并不与植物外显子的足够部分相对应，不能有效的降低、实质性减少或至少部分减少mRNA转录物或蛋白的水平。
植物内含子可以是来自内源性或导入基因的任意植物内含子，这些内含子的核酸分子可以有多个来源，包括但不限于数据库例如EMBL和Genbank，这些数据库可以从因特网ebi.ac.uk/swisprot/、expasy.ch/、embl-heidelberg.de/、和ncbi.nlm.nih.gov获得。这些内含子的核酸序列也可以从例如GENSCAN程序获得，但不限于，该程序可以从因特网的mit.edu/GENSCAN.html.获得。
其它内含子也可以通过这样的方法获得，包括但不限于，用一个已知的外显子或内含子序列的探针筛查基因组文库，用与其相应的cDNA序列比较基因组序列或通过与来自其它生物体如拟南芥的内含子对比克隆内含子如大豆内含子，另外，内含子的其它核酸序列对本领域普通技术人员是显而易见的。上述描述的方法也可以用于获得其它非编码序列，包括，但不限于，启动子序列，3’UTR序列和5’UTR序列。
“FAD2”、“δ12去饱和酶”或“ω-6-去饱和酶”基因编码一种酶(FAD2)，该酶能够催化双键插入脂肪酸部分从羧基端起第12位处，术语“FAD2-1”习惯指FAD2基因，该基因在种子组织中以特异的方式自然表达，术语“FAD-2-2”习惯指FAD2基因，该基因(a)不同于FAD2-1基因，(b)能够在多种组织包括种子中自然表达。有代表性的FAD2序列包括，但不限于，描述于美国专利10/176,149中，申请于2002年6月21日以及序列SEQ ID Nos：1-6中。
“FAD3”，“δ15去饱和酶”或“ω-3-去饱和酶”基因编码一种酶(FAD3)，该酶能够催化双键插入脂肪酸部分从羧基端起第15位处，术语“FAD3-1”习惯指FAD3基因家族成员，该基因能够在多种组织包括种子中自然表达，有代表性的FAD3序列包括，但不限于，描述于美国专利10/176,149中，申请于2002年6月21日以及序列SEQ ID Nos：7-27中。
“FATB”或“棕榈酰基-ACP-硫酯酶”基因编码酶(FATB)，该酶能够催化位于棕榈酰-ACP的panthothene辅基的碳-硫硫酯键发生水解，这是其优选反应。其它脂肪酸-ACP硫酯酶的水解也可以被该酶催化。有代表性的FATB序列包括，但不限于，美国临时申请文件No.60/390,185，申请于2002年6月21日，Nos.5,955,329；5,723,761；5,955,650和6,331,664中提出的序列以及序列SEQ IDNos：28-37。
C第二组DNA序列
在本发明的一个方面，核酸分子包括第二组DNA序列，该序列在导入细胞或生物体时，能够部分提高，增加，增强或实质性增强mRNA的转录水平或由一种或多种基因编码的蛋白水平。在本发明的一个方面，基因可以是植物基因。在本发明的另一方面，基因可以是截短基因，该截短基因能催化由全基因催化的反应。在本发明的一个方面，基因是β-酮脂酰基-ACP合酶I、β-酮脂酰基-ACP合酶IV、δ-9去饱和酶或CP4 EPSPS基因。
本发明的基因可以是任何基因、或者是内源性的或导入的基因。这些基因的核酸序列可以有多种来源，包括，但不限于，数据库例如EMBL和Genbank，这些数据库可以从因特网ebi.ac.uk/swisprot/、expasy.ch/、embl-heidelberg.de/和ncbi.nlm.nih.gov获得。这些内含子的核酸分子也可以从例如GENSCAN程序获得，但不限于，该程序可以从因特网的mit.edu/GENSCAN.html.获得。
其它基因也可以通过这样的方法获得，但不限于，这样的方法包括用已知的外显子或内含子序列的探针筛查基因组文库，通过与来自其它组织如拟南芥的基因对比后克隆基因。另外，基因的其它核酸序列对本领域普通技术人员是显而易见的。其它基因可以，例如但并不限于，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增并用于本发明的实施例中，另外，基因的其它核酸序列对本领域普通技术人员是显而易见的。
为此目的可以使用核酸自动合成仪以合成核酸分子，该分子含有细胞或生物体中发现的序列，在合成时，核酸分子可被用于定义一对引物，该因为通过PCR扩增以获得第一个基因的期待的核酸分子或片段。
“KASI”或“β-酮脂酰基-ACP合酶I”基因编码酶(KASI)，该酶能够催化脂肪酰基部分延长至棕榈酰-ACP(C16:0)。有代表性的KASI序列包括，但不限于，美国专利No 5,475,099和PCT公布的WO 94/10189以及SEQ ID No：38的序列。
“KASI”或“β-酮脂酰基-ACP合酶IV”基因编码酶(KASIV)，该酶催化中等链酰基-ACPs的缩和以及提高18:0-ACP的生成。有代表性的KASI序列包括，但不限于，那些在PCT公布的WO 98/46776和SEQ ID NO：39D序列。
“δ-9去饱和酶”或“硬脂酰-ACP去饱和酶”或“ω-9去饱和酶”基因编码酶，该酶能够催化双键插入脂肪酸部分从羧基端起第9位处。本发明优选的δ-9去饱和酶是植物或蓝细菌δ-9去饱和酶，更优选δ-9去饱和酶是发现于如下生物体组成的组，即红花(cartharmus，tinctorius)，蓖麻(ricinus communis)，希蒙得木(simmonsia chinensis)，和芸苔(Brassica campestri)。有代表性的δ-9去饱和酶序列包括，但不限于，美国专利No.5,723,595和SEQ ID Nos 40-41的序列。
“CP4 EPSPS”或“CP4 5-烯醇丙酮酰基莽草酸-3-磷酸酯合酶”基因编码一种酶(CP4 EPSPS)，该酶能够赋予植物细胞或由此产生的植物对草甘膦产生一定程度的耐受性。CP4 EPSPS序列可以是来自于根癌农杆菌(tumefaciens sp.)的CP4 EPSPS序列。CP4或其变异体或其合成形式描述于美国专利No 5,633,435中，有代表性的CP4 EPSPS序列包括，但不限于，公开于美国专利Nos 5,627,061和5,633,435中的序列。
D重组载体和构建体
本发明的一种或多种核酸构建体可用于植物的转化或转染中，产物如转录物或蛋白的水平可以通过生物体例如植物来升高或降低或定位于该生物体的专门的器官或组织。例如产物的水平可以在一种或多种植物的组织和器官中被升高或降低，包括，但不限于，根，块茎、干(Stems)、叶、茎(Stalks)、果实、浆果、坚果、树皮、荚、种子和花，优选的器官是种子，例如外源性遗传物质可以被转入植物细胞，植物细胞发育成一个完整的个体、有性或无性植物或植物部分。
外源性遗传物质是指任意的遗传物质，或者是天然发生的或者是来自于能够被插入任意生物体的渠道。这些外源性遗传物质包括，但不限于，核酸分子和本发明的构建体，外源性遗传物质可以通过DNA载体或为此目的设计的构建体转移到宿主细胞，这种载体的设计通常是本领域的常规技术(参见植物分子生物学：A Laboratory Mannual，Clark(ed)，springer，New York(1997))。
构建体或载体可以包括在植物细胞中发挥功能的启动子或植物启动子以表达所选择的核酸分子。众多在植物细胞中有活性的启动子已记载于文献中，CaMV35S和FMV启动子优选用于植物中。优选的启动子是CaMV35S和FMV35S启动子的增强或复制型。Odell et al.，自然313：810-812(1985)；美国专利No 5,378619；其它的可使用的启动子描述于美国专利5,391,725；5,428,147；5,447,858；5,608,144；5,608,144；5,614,399；5,633,441；5,633,435；和4,633,436中。
特别优选的启动子也可以用于在种子或果实中表达本发明的核酸分子，实际上，在一个优选实施例中，所用的启动子是种子特异性启动子，这些启动子的实例包括来自于napin(Kridl et al种子科学研究，1：209-219(1991))、菜豆球蛋白、硬脂酰-ACP去饱和酶、7Sα、7sα’(Chen et al.，Proc Natl Acad Sci 83：8560-8564(1986))，USP，arcelin和oleosin基因的5’调节区域，在种子中表达的优选启动子是7Sα、7sα’napin和FAD2-1A启动子。
构建体或载体也可以包括其它的遗传元件，包括但不限于，3’转录终止子、3’多腺苷酸化信号、其它非翻译核酸序列、转送或目标序列、可选择的或可筛选的标记物、启动子、增强子和操纵子。构建体或载体也包括无启动子基因，该基因在插入时使用内源性启动子。
用于植物转化或转染的核酸分子可以是本发明的任意的核酸分子，本发明并不只限于列举的实施例。列举的核酸分子已描述于详述的A部分，进一步的非限制列举核酸分子描述于下文和附图1-4以及实施例中。
涉及附图，本发明的核酸分子实例表示在附图1-4中，如上所述，核酸分子由(a)第一组核酸序列和(b)第二组核酸序列组成，这些序列位于一种或多种T-DNA区域，每一组序列都被右边界和左边界限定，在T-DNA区域内，转录的方向由箭头所示。所述的核酸分子的DNA序列可以按单顺反子或多顺反子构型排列，优选构型包括第一组DNA序列和第二组DNA序列位于单一的T-DNA区域内的构型。
在每一个列举的实施例中，第一组DNA序列包括一种或多种序列，当其表达时，能够选择性的减少相应的蛋白和转录物中的一个或二者都减少，蛋白和转录物由选自FAD2，FAD3和FATB组成的组中的基因编码，优选第一组DNA序列中的每一个序列在表达时能够抑制不同基因的表达，包括，但不限于，不同基因家族的成员。这些序列也可以包括编码序列、内含子序列、3’UTR序列、5’UTR序列、其它非编码序列和上述序列的组合。第一组DNA序列可以以任意适合的方式表达，包括作为dsRNA构建体、正义共抑制构建体或作为一个反义构建体。第一组DNA序列可操作地与至少一种启动子相连以驱动该序列的表达，该启动子可以是植物中任意的有功能的启动子或任意的植物启动子，优选的启动子包括，但不限于，napin启动子、7Sα启动子、7sα’启动子和arcelin启动子或FAD2-1A启动子。
第二组DNA序列包括编码序列，每一个编码序列都是在表达时能够提高相应蛋白或转录物中的一种或两种的DNA序列，该蛋白和转录物由选自由AKSI，KASIV，δ-9去饱和酶和CP4 EPSPS组成的组中的基因编码。每一种编码序列都与一个启动子相连，该启动子可以是植物中任意的有功能的启动子或任意的植物启动子。用于第二组DNA序列的优选启动子是FMV启动子和/或种子特异性启动子。优选的种子特异性启动子包括，但不限于，napin启动子、7Sα启动子、7sα’启动子、arcelin启动子、δ-9去饱和酶启动子或FAD2-1A启动子。
在附图1和2描述的实施例中，第一组DNA序列在表达时能够形成dsRNA分子，它能够抑制相应蛋白和转录物中的一种或二者的表达，相应蛋白或转录物由选自由FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因编码或转录。附图1描述的第一组DNA序列包括三个非编码序列，每一个非编码序列表达一个RNA序列(未表示)，其与由FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因的非编码区有同一性。非编码区序列每一个都能够表达一种RNA序列，其显示出与由FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因的非编码区有至少90％的同一性。第一组DNA序列也包括三个反义序列，每一个反义序列表达一种反义RNA序列(未显示)，能够与各自相应的RNA序列形成一种双链RNA分子(以非编码序列表达)。
非编码序列通过一个间隔区序列从反义序列分离开来，优选的间隔区序列是能够促进dsRNA分子的形成，这些间隔区序列的实例包括Wesley et al，supra，and Hamilton et al.，植物杂志.，15：737-746(1988)中提出的间隔区序列，在一优选方面，间隔区序列能够形成一发夹结构如在Wesley et al，supra，中描述的结构，在本文中特别优选的间隔区序列是植物内含子或其部分，一个特别优选的植物内含子是可剪切的内含子，可剪切的内含子包括，但不限于，选自下列内含子组成的组中的内含子，即PDK内含子、FAD3-1A或FAD3-1B内含子#5、FAD3内含子#1、FAD3内含子#3A、FAD3内含子#3B、FAD3内含子#3C、FAD3内含子#4、FAD3内含子#5、FAD2内含子#1和FAD2-2内含子。优选的可剪切内含子包括，但不限于，选自由下列内含子组成的组FAD3内含子#1、FAD3内含子#3A、FAD3内含子#3B、FAD3内含子#3C、FAD3内含子#5。其它优选的可剪切内含子包括，但不限于，一个长度大约为0.75kb至大约为1.1kb的能够促进RNA发夹结构的可剪切内含子。一个特别优选的可剪切内含子的非限制性实例是FAD3内含子#5。
在附图1中，核酸分子包括两个T-DNA区域，每一个都有左右边界的限制，第一个T-DNA区域包括与启动子操作性相连的第一组DNA序列，第一个T-DNA区域进一步包括第二组DNA序列的第一部分，该部分又包括与第一编码序列操作性连接的第一启动子和与第二编码序列操作性相连的第二启动子。第二个T-DNA区域包括第二组DNA序列的第二部分，它包括一个与第三编码序列操作性相连的第三启动子。在附图2描述的优选实施例中，核酸分子包括一个单一的T-DNA区域，并且有左右边界的限制，第一组和第二组DNA序列都位于单一的T-DNA区域内。
在附图1和2表示的dsRNA表达实施例中，序列的顺序与所列举和描述的序列顺序相比可以发生改变，但是非编码序列和反义序列优选围绕间隔区序列排列，这样在表达时第一非编码序列能够与第一反义序列杂交，第二非编码序列能够与第二反义序列杂交，以及第三非编码序列能够与第三反义序列杂交，因此形成了一个单一的dsRNA分子。优选非编码序列在与启动子相关的正义方向，反义序列在与启动子相关的反义方向。为了实现本发明的目的，非编码序列、反义序列和编码序列的数量以及其在T-DNA区域的各种相关位置都可以以适当方式改变。
关于附图3和4，列举的核酸分子包括一个受左右边界限制的T-DNA区域，第一组和第二组DNA序列位于此区域。第一组DNA序列与启动子和转录终止信号操作性地连接，第二组DNA序列包括一个与第一编码序列操作性连接的第一启动子和与第二编码序列操作性连接的第二启动子以及与第三编码序列操作性连接的第三启动子。转录终止信号可以是在植物内有功能的任意转录终止信号或任意的植物转录终止信号。优选的转录终止信号包括，但不限于，pea Rubisco E93′序列，Brassica napin 3′序列，tml 3′序列和nos 3′序列。
在附图3描述的实施例中，第一组DNA序列在表达时能够形成正义共抑制构建体，它能够抑制一种或多种蛋白或转录物的表达，该蛋白或转录物由选自FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因编码或获得。第一组DNA序列包括三个非编码序列，每一个非编码序列表达一个RNA序列(未表示)，其显示出与FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因的非编码区有同一性，非编码序列每一个都表达一个RNA序列其显示出与FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因的非编码区有至少90％的同一性，第一组DNA序列内的非编码序列的顺序与本文所列举和所描述的序列顺序相比可以发生改变，但是非编码序列安排在与启动子相关的正义方向。
附图4描述的实施例，其第一组DNA序列在表达时能够形成反义构建体，该反义构建体能够抑制一种或多种蛋白或转录物的表达，蛋白或转录物由选自由FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因编码或获得。第一组DNA序列包括三个反义序列，每一个反义序列表达一个反义RNA序列(未表示)，其显示出与FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因的一种或多种非编码区有同一性，反义序列每一个都表达一个反义RNA序列其显示出与FAD2，FAD3和FATB构成的组中的基因的一种或多种非编码区有至少90％的同一性，第一组DNA序列内的反义序列的顺序与本文所列举和所描述的序列顺序相比可以发生改变，但是反义序列安排在与启动子相关的反义方向。
如上所述的核酸分子是优选的实施例，它取得了本发明的目的、特征和好处。本发明无意限制于所列举的实施例。在核酸分子中第一组和第二组DNA序列的序列安排并不限制于所列举和所描述的序列安排，而是为了获得本发明的目的、特征和好处可以改变，正如在其它附图中所列举和描述的。
E转基因生物体及其生产方法
本发明的任何核酸分子和构建体都可以以长久或短暂的方式导入植物或植物细胞，本发明优选的核酸分子和构建体描述在上述的详述的A到D部分以及实施例中。本发明的另一个实施例是指生产转基因植物的方法，该方法通常包括这样的步骤，选择一种合适的植物或植物细胞，用重组的载体转化该植物或植物细胞，获得一种转化的宿主细胞。
在一个优选实施例中，植物或细胞是/或来自于与食用和工业用植物油的生产相关的植物，特别优选的是温带含油种子农作物，感兴趣的植物包括，但不限于，油菜籽(canola and high erucic acidvarieties)、玉米、大豆、crambe、芥末、蓖麻子、花生、芝麻、棉花、亚麻子、红花、油棕、亚麻、向日葵和椰子。本发明适用于单子叶植物类和双子叶植物类，也将适用于新的和/或改进的转化和调节技术。
将DNA转化入植物细胞的方法和技术是本领域技术人员所熟知的，而且通过将核酸分子转化入细胞的任何方法对本发明来说都是适宜的，非限制性的适宜方法的实例包括：化学方法，物理方法例如显微注射法、电融合法、基因枪法、微粒轰击法、真空渗入法，病毒载体和受体介导机制，其它细胞转化的方法也被使用包括，但不限于，通过将DNA直接转入花粉的方式将DNA转入植物中，或将DNA直接注射入植物的生殖器官的方式或将DNA直接注射入未成熟的胚芽细胞中，然后再水化干燥的胚芽的方式。
根癌农杆菌-介导的转化是一种广泛用于将基因转入植物细胞的应用系统，参见Fraley et al生物技术3：629-635(1985)Rogerset al.，酶学方法，153：253-277(1987)，被转移的DNA区域通过边界序列限定，介入性DNA通常被插入到植物基因组中，参见Spielmann et al.，生物.基因.遗传物质205-34(1986)。考虑到方便操作，当前的根癌农杆菌转化载体能够在E.Coli和根癌农杆菌中复制，参见Klee et al.，In：植物DNA感染物质，Hohn and Schell(eds)，Springer-Verlag，New York，179-203(1985)。
来自单一植物原生质转化体或来自各种被转化的外植体的植物的再生、发育和培养是本领域所熟知的，参见Maliga et al.，植物分子生物学方法，Cold Spring Harbor Press(1995)；Weissbach andWeissbach，植物分子生物学方法，Academic press，San Diego CA(1988)。本发明的植物可以是育种过程的一部分或来自育种过程，也可以使用白花色甙来再生，生产单性生殖植物的方法是本领域所熟知的，见美国专利5,811,636。
在一个优选实施例中，本发明的植物包括核酸序列，当其表达时能够选择性地减少FAD2、FAD3和/或FATB蛋白水平，和/或FAD2、FAD3和/或FATB转录录水平，该植物能够与本发明的另一种植物匹配，另一种植物包括核酸序列，当其表达时能够过表达另一种酶，优选的其它酶选自下列酶组成的组，即β-酮脂酰基-ACP合酶I、β-酮脂酰基-ACP合酶IV、δ-9去饱和酶和CP4 EPSPS。
F本发明的产物
本发明的植物可以以整体或部分的方式使用，优选的植物部分包括生殖或储备部分，术语“植物”部分在本文中包括，但不限于，种子、胚乳、胚珠、花粉、根、块茎、干、叶子、茎、果实、浆果、坚果、树皮、荚、种子和花，在本发明特别优选的实施例中，植物部分是指种子。
本发明所述的任意植物或植物部分都可以经过加工生产为给料(Feedstock)、食物、蛋白或油制品，用于此目的的特别优选的植物部分是种子，在一优选实施例中，给料、食物、蛋白或油制品被设计用于牲畜、鱼或人类或其任意组合。生产给料、食物、蛋白和油产品的方法是本领域所熟知的，参见美国专利4,957,748；5,100,679；5,219,596；5,936,069；6,005,076；6,146,669；和6,156,227。在一个优选实施例中，蛋白产品是一种高蛋白制品，这样的高蛋白制品优选含有大于5％w/v，更优选含有10％w/v，甚至优选15％w/v的蛋白含量。
在优选的油制品中，油制品是一种高油制品，其来自本发明的所述植物或植物部分的油含量大于5％w/v，更优选大于10％w/v，甚至优选大于15％w/v的油含量。在一优选实施例中，油制品是一种液体其体积大于1，5，10或50升。本发明提供产自本发明植物的油或通过本发明方法生产的油，这样的油呈现提高的氧化稳定性，而且这样的油是所得产物的次要或主要成分。
而且，这样的油可以与其它油混合。在一优选实施例中，产自本发明植物的油或通过本发明方法生产的油构成任意产品超过0.5％、1％、5％、10％、25％、50％、75％或90％(体积或重量)油组合物。在另一个实施例中，油组合物可以被混合并构成混合物中大于10％、25％、35％、50％或75％的体积。产自本发明植物的油与一种或多种有机溶剂或石油馏出物混合。
植物的种子可以放置在容器内，在此处，容器是指能够盛放这些种子的任意器具，一个容器优选能盛放大于约500，1,000，5,000，或25,000粒种子，其中至少约10％、25％、50％、75％或100％的种子来自本发明的植物。本发明也提供能盛放大约10,000，优选约20,000，更优选大约40,000粒种子的容器，其中大于大约10％，优选大于25％，更优选大于50％，更加优选大约75％或90％的种子是来自于本发明植物的种子。本发明也提供一种能盛放大于大约10kg、优选大约25kg、更优选大约50kg的种子，其中大于大约10％，优选大于25％，更优选大约50％，更加优选大于75％或90％的种子是来自于本发明植物的种子
G油组合物
对于许多的油应用，其饱和脂肪酸水平优选小于8％重量，更优选小于约2-3％重量，饱和脂肪酸有较高的溶点，这是许多应用中所不期望的。当作为给料(feedstock)用于燃料时，饱和脂肪酸在低温时出现浑浊，而且带来差的低温流动性，例如对于燃料来说，流点和冷滤点。含有低水平饱和脂肪酸的油产品是消费者和食品工业所优选的，因为它们被认为是较健康的和/或按照FDA规则被贴上“无饱和脂肪”的标签。还有，对于食品的应用如色拉油，低饱和油减少或降低了对使油成为冬天不凝固之油的需求。在生物柴油和润滑油的应用方面，含有低饱和脂肪酸的油赋予了提高的低温流动特性和在低温时不会发生浑浊的特性。
调控某一特殊油生理特性的因素是复杂的，在室温状态，棕榈酸、硬脂酸和其它饱和脂肪酸呈典型的固态，相反对于不饱和脂肪酸来说，其呈现液态，因为饱和脂肪酸在其酰基链上没有双键，在温度升高时能够对氧化作用保持稳定，在人造黄油和巧克力配方中饱和脂肪酸是重要的成分，但在许多食品应用方面，降低饱和脂肪酸的应用则是期望的。
油酸有一个双键，但其在高温时依然能够保持相对的稳定，含有高水平油酸的油适宜烹调和需要加热的操作。最近推荐多使用含有高水平油酸的油，因为油酸显示出较低血液中低密度脂蛋白(LDLs)的水平同时又不影响高密度脂蛋白(HDLs)的水平。但是对油酸含量的一些限制也是期望的，因为当油酸在高温降解时，会产生味道不佳的化合物同时降低了亚油酸在氧化后产生的诱人味道。Neff et al.，JAOCS，77：1303-1313(2000)；Warner et al.，农业、食物化学杂志，49：899-905(2001)。优选的油含有65-85％重量或低于此含量的油酸以限制食品应用时如煎炸油或煎炸食物的不佳味道。其它优选的油含有大于55％重量的油酸以提高氧化稳定性。
亚油酸是食物中主要的不饱和脂肪酸而且是人体的必需营养素，它也是许多食物的理想成分因为它是煎炸食物风味剂物质例如2，4癸二烯醛的主要前体物质，能使煎炸食物味道较好，但是在加热时亚油酸的稳定性受限。优选的食物油其亚油酸的含量大于10％重量以提高理想煎炸食品风味物质的形成，也可以是25％重量或低于此含量以减少异味的形成。亚油酸也有低胆固醇的特性，由于饮食过量会降低机体细胞对抗氧化损伤的能力，从而加大了心血管疾病的危险性。Toborek et al.，Am J Clin J 75：119-125(2002).参见脂肪食物的风味化学，editors D.B Min&T.H.Smouse，Amoil Chem.Soc.，Champaign IL(1989)。
亚油酸与油酸相比有较低的熔点，能够进一步改善低温流动性，这在生物柴油和生物润滑剂应用方面是期望的。有广泛用途的优选油其亚油酸含量为30％重量或低于此重量，因为亚油酸的氧化作用限制了煎炸油、食物、给料、燃料和润滑剂等产品的保质期和使用期，参见脂肪、油和乳化剂的生理特性，ed.N.Widlak，AOCS press(1999)；Erhan & Asadauskas，来自植物油、工业作物和产品中的润滑油basestocks，11：277-282(2000)。还有，牛给料中的高水平的亚油酸会导致不期望的奶牛牛乳中高含量的亚油酸以及由此导致的差的氧化稳定性和口味。Timmons et al.，奶牛科学杂志84：2440-2449(2001)。较有用的油组合物中亚油酸的含量为10-25％重量。
亚麻酸也是人类食物中的重要成分，用于合成长链脂肪酸的ω-3家族和前列腺素。但是它的双键对氧化是高度易感性的，这样含有高水平亚油酸的油暴露于空气中时，特别在高温时会很快变质。当这些油在用于食品之前进行部分的氢化作用是必需的以抑制加热时异味和恶臭的形成，但是氢化作用会产生不利健康的反式脂肪酸它们会导致心血管疾病。为了获得改进的氧化稳定性和减少对氢化油的需要，优选的油其亚麻酸含量是或小于8％，6％或小于6％、4％或小于4％重量，更优选在本发明的油中其亚麻酸的含量是总脂肪酸含量的0.5-2％重量。
本发明的油可以是混合油、合成油或在一个优选实施例中，油是来自于有适宜油组合物的含油种子中。在一优选实施例中，油是一种大豆油。油可能是粗制油例如粗制的大豆油，也可能是加工油例如精炼油、脱色油、除臭油和/或冬天不凝固油。在本文中“精炼”是指将天然的或加工的脂肪或油去除杂质的过程，也可以是经过将脂肪或油用腐蚀性苏打处理，然后离心、用水漂洗、真空加热完成。“脱色”是指处理脂肪或油以去除或减少脂肪或油中有色物质的含量。脱色可以用活性或硅藻土处理来完成。“除臭”是指将导致终产品异味或臭味的成分从脂肪或油中去除，可以通过使用高真空和过热蒸汽脱色来完成。“使成为冬天不凝固之油”是指从油中去除饱和甘油酯的过程，可以通过冷冻和去除油中脂肪的固化部分来完成。
本发明优选的油是含有低饱和的油组合物或零饱和的油组合物。在另一个优选实施例中，本发明的油含有提高的油酸水平、降低的饱和脂肪酸水平和降低的多不饱和脂肪酸水平。在一个优选实施例中，其油是一种大豆油。本文中的脂肪酸含量或脂肪酸水平都是指重量百分含量。
在第一个实施例中，本发明的油优选含有下列油组合物：即55-80％油酸、10-40％亚油酸、6％或小于6％的亚麻酸、2-8％饱和脂肪酸；更优选含有：55-80％油酸、10-39％亚油酸、4.5％或小于4.5％亚麻酸、3-6％饱和脂肪酸；更加优选：55-80％油酸、10-39％亚油酸、3.0％或小于3.0％亚麻酸、2-3.6％饱和脂肪酸。
在第二个实施例中，本发明的油优选含有：65-80％油酸、10-30％亚油酸、6％或小于6％亚麻酸、2-8％饱和脂肪酸；更优选：65-80％油酸、10-29％亚油酸、4.5％或小于4.5％亚麻酸、3-6％饱和脂肪酸；更加优选：65-80％油酸、10-29％亚油酸、3％或小于3％亚麻酸、2-3.6％饱和脂肪酸。
在其它实施例中，油酸的百分含量是50％或大于50％；55％或大于55％；60％或大于60％；65％或大于65％；70％或大于70％；75％或大于75％；80％或大于80％；或者是50-80％；55-80％；55-75％或55-65％；65-80％；65-75％；65-70％；或69-73％。本发明油中油酸的适宜百分含量也包括这样的范围其中下限选自下列的百分数：50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、或80％；上限选自下列的百分数：60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、或90％。
在这些其它实施例中，本发明油中亚油酸的百分含量的范围是10-40％；10-39％；10-30％；10-29％；10-28％；10-25％；10-21％；10-20％；11-30％；12-30％；15-25％；20-25％；20-30％；或21-24％；本发明油中亚油酸的适宜百分含量范围也包括这样的范围其中下限选自下列百分数：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30％；上限选自下列百分数：20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40％。
在这些其它实施例中，本发明油中亚麻酸的含量是10％或小于10％；9％或小于9％；8％或小于8％；7％或小于7％；6％或小于6％；5％或小于5％；4.5％或小于4.5％；4％或小于4％；3.5％或小于3.5％；3％或小于3％；2.5％或小于2.5％；2％或小于2％；或者是0.5-2％；0.5-3％；0.5-4.5％；0.5-6％；3-5％；3-6％；3-8％；1-2％；1-3％；或1-4％，在这些其它实施例中，本发明的油组合物中饱和脂肪酸的含量是15％或小于15％；14％或小于14％；13％或小于13％；12％或小于12％；11％或小于11％；10％或小于10％；9％或小于9％；8％或小于8％；7％或小于7％；6％或小于6％；5％或小于5％；4％或小于4％；3.6％或小于3.6％；或者是2-3％；2-3.6％；2-4％；2-8％；3-15％；3-10％；3-8％；3-6％；3.6-7％；5-8％；7-10％；10-15％。
本发明的油特别适合用作烹调和煎炸油，由于其降低的多不饱和脂肪酸含量使得本发明的油不需要典型油的进一步工艺，因为其没有讨厌的气味和有色的物质。而且该油的低饱和脂肪酸含量改善了油的低温流动特性，而且避免了加热储存油以防结晶或固化的需要。改善的低温流动性还提高了当煎炸食品离开煎炸油时油从煎炸食品材料内的排出，因此获得了低脂肪食品。参见Bouchon et al.，食物科学杂志，66：918-923(2001)。该油中低水平的亚麻酸在煎炸中是特别有用的以降低异味。
该油也特别适合作为色拉油(在华氏40-50度冰箱内能保持清澈的油)，由于其低饱和脂肪酸含量和适宜的亚油酸含量，其在冰箱温度下具有改善的透明度，减少或降低了在其作为色拉油使用之前使其成为不凝固油的需要。
而且，该油的适宜的油酸含量和低亚麻酸含量使其非常适合用于生产起酥油(shortening)、人造黄油和其它半固体植物脂肪用于食品材料。这些脂肪的生产典型的包括不饱和油的氢化，例如大豆油、玉米油或芸苔油。该油的提高的氧化稳定性和风味稳定性是指它不需要进一步的氢化，而其它传统的植物油需要氢化，当其用于人造黄油和起酥油时，因而减少了工艺费用和不利健康的反式异构体的生成。
本发明的油也适宜用于给料(feedstock)以生产生物柴油，特别是因为用此油制造的生物柴油具有改善的低温流动性、改善的燃烧质量(十六烷数目)、改善的氧化稳定性和降低的氧化氮排放量。生物柴油是一种选择性的柴油燃料通常包括饱和、单不饱和和多不饱和C16-C22脂肪酸的甲基酯。十六烷的数目是燃烧质量的检测标准-十六烷数目越高，引擎中燃料的燃烧延迟时间越短。生物柴油燃料的ASTM标准规则要求的最少十六烷数目是47。
在传统的柴油发动机中使用生物柴油与使用石油柴油燃料相比导致了污染物的实质性减少例如硫酸盐、一氧化碳、颗粒物质，在校车上使用生物柴油能够极大地减少孩子们暴露于有毒柴油尾气中。限制使用100％传统生物柴油作燃料是因为传统大豆生物柴油的浊点高(2℃)与2号柴油(-16℃)相比。参见Dunn et al.，油化学的最新研究进展.，1：31-56(1997)。用本发明油制备的生物柴油有提高的(降低的)流点和冷滤点，也可以混合使用以改善生物柴油的低温特性，该生物柴油由便宜的但高饱和的脂肪制成，例如动物脂肪(动物脂、猪油、鸡脂肪)和棕榈油。生物柴油也可以与石油柴油以任何比率混合。
生物柴油通常是通过提取、过滤和精练大豆油获得以去除游离脂肪和磷脂，然后用甲醇对油进行酯交换以形成脂肪酸甲酯，参见US No5,891,203。最终的大豆甲酯就是通常所指的“生物柴油”，本发明的油也可以用作没有甲酯形成的柴油燃料，例如用乙缩醛与该油混合，参见US No 6,013,114。由于其改善的低温流动性和氧化稳定性，本发明的油也适宜用作润滑剂和柴油燃料的添加剂，参见US Nos5,888,947；5,454,842；和4,557,734。
大豆，本发明的油也适宜用作各种豆制品，该豆制品由整个大豆制作，例如豆奶、大豆坚果奶油、natto和tempeh，以及经过加工的大豆和大豆油制作的豆制品，包括大豆、大豆粉、大豆蛋白浓缩物、大豆蛋白分离物、稠化的大豆蛋白浓缩物、氢化的大豆蛋白、植脂稀奶油、烹调油、色拉油、起酥油、卵磷脂。
整个大豆蛋白也是可食用的而且通常以未加工的方式、烤制的方式出售，或作为菜用大豆。通过浸泡、磨碎整个大豆的方法生产的豆奶在喷雾干燥后经过加工形成大豆乳酸、大豆乳酪、豆腐或腐竹。该大豆或油能够适用于这些和其它的豆制品因为它的改善的氧化稳定性、降低的异味前体物质和它的低饱和脂肪酸含量。
下列的实施例用于说明本发明但不做任何形式的限制。
实施例
实施例1  抑制型构建体
1A  FAD2-1构建体
FAD2-1A内含子(SEQ ID NO：1)以正义和反义的方向克隆入表达载体pCGN3892，该载体pCGN3892含有大豆7S启动子和豌豆rbcS3′，然后两个基因融合物被分别连接到pCGN3892，含有CP4EPSPS基因的载体被FMV启动子调控，最终的表达构建体(pCGN5469和pCGN5471)用于转化大豆。
在质粒pCGN5468(含有大豆7S启动子，在正义方向与FAD2-1A内含子融合，和豌豆rbcS3′)或pCGN 5470(含有大豆7S启动子，在反义方向与FAD2-1A内含子融合，和豌豆rbcS3′)中，FAD2-1B内含子(SEQ ID NO：2)分别在正义和反义方向与FAD2-1A内含子的3′末端融合。然后，最终的内含子重组融合体分别导入pCGN9372，一个含有由FMV启动子调控的CP4 EPSPS基因的载体，最终的表达构建体(pCGN5485，FAD2-1A&FAD2-1B正义内含子和pCGN5486，FAD2-1A&FAD2-1B反义内含子)用于转化大豆。
1B  FAD3-1构建体
FAD3-1A内含子#1、#2、#4和#5(分别为SEQ ID NOs：7、8、10和11)，FAD3-1B内含子#3C(SEQ ID NO：23)和#4(SEQ IDNO：24)在正义和反义方向分别导入pCGN3892。pCGN3892含有大豆7S启动子和豌豆rbcS3′，这些融合体连接到pCGN9372，一个含有由FMV启动子调控的用于转染大豆的CP4 EPSPS基因的载体，最终的表达构建体(pCGN5455，FAD3-1A正义内含子#4；pCGN5459，FAD3-1A反义内含子#4；pCGN5456，FAD3正义内含子#5；pCGN5460，FAD3-1A反义内含子#5；pCGN5466，FAD3-1A反义内含子#2；pCGN5473反义内含子#1)用于大豆的转染化
1C  FatB构建体
大豆的FATB内含子II序列(SEQ ID NO：30)以FATB部分基因组克隆作为模板通过PCR技术扩增，PCR扩增按照如下程序操作：1个循环，95℃10分钟；25个循环，95℃30秒、62℃30秒、72℃30秒；1个循环，72℃7分钟。PCR扩增后的产品长854bp，在两端点含有重新设计的限制位点，PCR产物通过PCR引物5′末端的XhoI位点在正义方向直接克隆到表达试剂盒pCGN3892，Xhol位点与PCR引物的5′末端连接形成pMON70674，载体pCGN3892含有大豆的7S启动子和豌豆的rbcS3′，pMON70674然后被NotI切割并导入pMON41164，一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因的载体，最终的基因表达构建体，pMON70678，通过根癌农杆菌方式用于转化大豆。
建立两个含有大豆FATB内含子II序列(SEQ ID NO：30)的其它表达构建体，pMON70674用NotI切割并连接到pMON70675，含有由FMV启动子调控的CP4 EPSPS基因和由napin启动子调控的KASIV基因，最终形成pMON70680，表达载体pMON70680然后用SnaBI切割并与在正义方向由7S启动子调控的加州希蒙得木(jojoba)δ-9去饱和酶基因(SEQ ID NO：41)的基因融合物相连，表达构建体pMON70680和Pmon70681以根癌农杆菌方式转化大豆。
ID  重组构建体
建立含有第一组DNA序列的各种排列的表达构建体。第一组DNA序列可以是那些描述过的任意序列或者是附图5和6中列举过的任一序列或者是其它组的DNA序列其含有正义和反义FAD2，FAD3和FATB非编码区的任意组合以致它们能够形成dsRNA构建体、正义共抑制构建体、反义构建体或前述的各种组合。
附图.5(a)-(c)描述了几种第一组DNA序列，按照本发明它们能够表达正义共抑制构建体或反义构建体，它们的非编码序列描述于下表1和2中，非编码序列可以是单一的序列、序列的重组(例如5′UTR与3′UTR连接)或上述的任意组合。为了表达正义共抑制构建体，所有的非编码序列都是正义序列，为了表达反义构建体，所有的非编码序列都是反义序列。附图.5(d)描述了一种第一组DNA序列，按照本发明它能够表达正义和反义构建体。
附图.6(a)-(c)描述了几种第一组DNA序列，按照本发明它们能够表达dsRNA构建体或反义构建体，它们的非编码序列描述于下表1和2中，描述于附图6中的第一组DNA序列含有几对正义和反义序列，这些序列按一定顺序排列以致，如由第一个正义序列表达的RNA能够与由第一个反义序列表达的反义RNA形成一个双链的RNA，例如，参考附图6(a)和列举的组合No.1(表1)，第一组DNA序列包含一个正义FAD2-1序列，一个正义FAD3-1序列，一个反义FAD2-1序列和一个反义FAD3-1序列，两个反义序列相应于正义序列以致第一组DNA序列的表达产物能够彼此形成一个双链RNA，正义序列通过一个间隔区序列可以从反义序列中分离出来，优选的间隔区序列是能够促进dsRNA分子形成的序列，这些间隔区序列的实例包括在Wesleyet al.，supra，和Hamilton et al.，植物杂志.，15：737-746(1988)中提出的序列，启动子是指在植物中有功能的任意启动子或任意的植物启动子。适宜启动子的非限制性实例描述于详细说明的D部分。
使用各种DNA操作技术将第一组DNA序列以正义或反义方向插入一个表达构建体，如果适宜的限制性位点出现在DNA序列中，通过限制性内切酶的消化和与构建体连接的方式，该构建体在一种或多种可获得的克隆位点被消化，它们被插入到表达构建体中；如果适宜的限制性位点没有出现在DNA序列中，那么构建体的DNA或者是DNA序列要通过各种有利于将DNA序列克隆到构建体中的方式进行修饰，修饰DNA的方式的实例包括PCR、合成接头或适配子连接反应、体外定点诱变、突出的5′或3′末端的补平或削平以及类似的方法。修饰DNA的这些以及其它方法是本领域普通技术人员所熟知的。
                                表1
列举组合                             非编码序列(正义或反义)
第一 第二 第三 第四
1 FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C
2 FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B
3 FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C序列
4 FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C FATB
5 FAD2-1A或B FATB FAD3-1A或B或C
6 FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B FATB
7 FAD3-1A或B或C FATB FAD2-1A或B
8 FATB FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B
9 FATB FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C
10 FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C序列 FATB
11 FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B 不同的FAD3-1A或B或C序列 FATB
12 FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B FATB
13 FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C FATB 不同的FAD3-1A或B或C序列
14 FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B FATB 不同的FAD3-1A或B或C序列
15 FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C序列 FATB FAD2-1A或B
16 FAD2-1A或B FATB FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C序列
17 FAD3-1A或B或C FATB FAD2-1A或B 不同的FAD3-1A或B或C序列
18 FAD3-1A或B或C FATB 不同的FAD3-1A或B或C序列 FAD2-1A或B
19 FATB FAD2-1A或B FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C序列
20 FATB FAD3-1A或B或C FAD2-1A或B 不同的FAD3-1A或B或C序列
21 FATB FAD3-1A或B或C 不同的FAD3-1A或B或C序列 FAD2-1A或B
                                            表2
                   SEQ ID NOs与表1序列的相关性
FAD2-1A FAD2-1B FAD3-1A FAD3-1B FAD3-1C FATB
3’UTR SEQ NO：5 n/a SEQ NO：16 SEQ NO：26 n/a SEQ NO：36
5’UTR SEQ NO：6 n/a SEQ NO：17 SEQ NO：27 n/a SEQ NO：37
5’+3’UTR(或3’+5’UTR) 连接的SEQNOs：5和6 n/a 连接的SEQNOs：16和17 连接的SEQNOs：26和27 n/a 连接的SEQNOs：36和37
Intron #1 SEQ NO：1 SEQ NO：2 SEQ NO：7 SEQ NO：19 n/a SEQ NO：29
Intron #2 n/a n/a SEQ NO：8 SEQ NO：20 n/a SEQ NO：30
Intron #3 n/a n/a n/a n/a n/a SEQ NO：31
Intron #3A n/a n/a SEQ NO：9 SEQ NO：21 n/a n/a
Intron #3B n/a n/a SEQ NO：12 SEQ NO：22 n/a n/a
Intron #3C n/a n/a SEQ NO：13 SEQ NO：23 n/a n/a
Intron #4 n/a n/a SEQ NO：10 SEQ NO：24 SEQ NO：14 SEQ NO：32
Intron #5 n/a n/a SEQ NO：11 SEQ NO：25 n/a SEQ NO：33
Intron #6 n/a n/a n/a n/a n/a SEQ NO：34
Intron #7 n/a n/a n/a n/a n/a SEQ NO：35
实施例2  组合构建体
在附图7-15中，启动子用箭头表示，编码序列(包括编码区和非编码区)用五边形表示，指向转录的方向，正义序列用正常的文本标识，反义序列用颠倒的文本标识。在这些附图中所用的缩写包括：7Sa＝7Sa启动子；7Sa’＝7Sa’启动子；Br napin＝Brassica napin启动子；FMV＝FMV启动子；ARC＝arcelin启动子；RBCE93’＝Rubisco E9终止信号；Nos3’＝nos终止信号；TML3’＝tml终止信号；napin3’＝napin终止信号；‘3(在与FAD或FAT相同的盒里)＝3’UTR；5’(在与FAD或FAT相同的盒里)＝5’UTR；Cr＝Cuphea pulcherrima；Gm＝大豆；Rc＝蓖麻；FAB2＝硬脂酰去饱和酶基因的FAB2等位基因；以及Intr或Int＝内含子
2A  dsRNA构建体
附图7-9描述了本发明的核酸分子，其中第一组DNA序列能够表达dsRNA构建体，在附图7-9中描述的第一组DNA序列包含数对相关的正义和反义序列并顺序排列以致例如由第一正义序列表达的RNA能够与第一反义序列表达的RNA形成双链RNA，正义序列可以与反义序列相邻也可以通过间隔区序列与反义序列分离开来，如附图9所示。
第二组DNA序列包含编码序列，每一个编码序列是一个DNA序列，它所编码的序列在被表达时能够提高由选自KASI，KASIV，δ-9去饱和酶和CP4 EPSPS基因所组成的组的基因编码的蛋白和转录物或者二者之一，每一个编码序列都与一个启动子相连，该启动子可以是植物中有功能的任意启动子或者是任意的植物启动子，也可以是FMV启动子，napin启动子，7S(7Sa或7Sa’)启动子，arcelin启动子，δ-9去饱和酶启动子或者FAD2-1A启动子。
参看附图7，大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)，和FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可连接的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4 EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassicanapin 3′终止序列的载体和含有由大豆FAD2启动子调控的Rcommunis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ ID NO：40)和nos 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON68539，描述于附图7中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)、FAD3-1A内含子4(SEQ ID NO：10)和FATB内含子II(SEQ ID NO：30)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点处包括再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后该载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E93′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON68540，描述于附图7中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A内含子4(SEQ ID NO：10)和FATB内含子II(SEQ ID NO：30)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E93′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON68544，描述于附图7中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A内含子4(SEQID NO：10)，FATB内含子II(SEQ ID NO：30)和FAD3-1B内含子4(SEQID NO：24)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON68544，描述于附图7中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A内含子4(SEQID NO：10)，FATB内含子II(SEQ ID NO：30)和FAD3-1B内含子4(SEQID NO：24)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON68546，描述于附图7中并采用本文所描述的方法用于转化。
参看附图8，大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)，和FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，该产物通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E93′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON68536，描述于附图8中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A 3′UTR(SEQID NO：16)，和FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，含有由大豆FAD2启动子调控的R communis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ ID NO：40)和nos 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割并连接到tml 3′终止序列的上游，然后载体用NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON68537，描述于附图8中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A 3′UTR(SEQID NO：16)，和FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.pulcherrimaKAS IV基因和Brassica napin3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入到pMON41164，最终的基因表达构建体，pMON68538，描述于附图8中并采用本文所描述的方法用于转化。
参看附图9，大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)，FAD3-1A 3′UTR(SEQ ID NO：16)，和FAD 3-1B3′UTR(SEQ ID NO：26)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ IDNO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON80622，描述于附图9中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)和FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义和反义方向直接克隆，并通过一个可剪切的大豆FAD3-1A内含子5(SEQ ID NO：11)分离开来，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，该产物克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON80623，描述于附图9中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在了一起)，FATB 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36，连接在了一起)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)，和FAD3-1B5′UTR-3′UTR(SEQ IDNOs：27和26，连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义和反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，05，描述于附图9中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在了一起)，FATB5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36，连接在了一起)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义和反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassicanapin3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入到pMON41164，最终的基因表达构建体，06，描述于附图9中并采用本文所描述的方法用于转化。
2B  正义共抑制构建体
附图10-13描述了本发明的核酸分子，其中第一组DNA序列能够表达正义共抑制构建体。第二组DNA序列包含编码序列，每一个编码序列都是DNA序列，当其所编码的序列在被表达时能够提高由选自KASI，KASIV，δ-9去饱和酶和CP4 EPSPS基因所组成的组的基因编码的蛋白和转录物或者二者之一，每一个编码序列都与一个启动子相连，该启动子可以是植物中有功能的任意启动子或者是任意的植物启动子，也可以是FMV启动子，napin启动子，7S(7Sa或7Sa’)启动子，arcelin启动子，δ-9去饱和酶启动子或者FAD2-1A启动子。
参看如图10，大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1C内含子4(SEQ ID NO：14)，FATB内含子II(SEQ ID NO：30)，FAD3-1A内含子4(SEQ ID NO：10)，和FAD3-1B内含子4(SEQ ID NO：24)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和豌豆Rubisco E93′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON68522，描述于附图10中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A内含子4(SEQ ID NO：10)，FAD3-1B内含子4(SEQ ID NO：24)和FATB内含子II(SEQ ID NO：30)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义方向直接通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassicanapin 3′终止序列的载体和含有由大豆FAD2启动子调控的Rcommunis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ ID NO：40)和nos 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON80614，描述于附图10中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A3′UTR(SEQID NO：16)和FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义方向直接通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON68531，描述于附图10中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A3′UTR(SEQID NO：16)和FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体和含有由大豆FAD2启动子调控的Rcommunis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ ID NO：40)和nos 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON68534，描述于附图10中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A 3′UTR(SEQID NO：16)和FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4 EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由大豆FAD2启动子调控的Rcommunis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ IDNO：40)和nos 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON68535，描述于附图10中并采用本文所描述的方法用于转化。
参看附图11，大豆FAD2-13’UTR(SEQ ID NO：5)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)和FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，Pmon80605，描述于附图11中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-13′UTR(SEQ ID NO：5)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)和FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，PMON80606，描述于附图11中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)和FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由大豆FAD2启动子调控的Rcommunis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ ID NO：40)和nos3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，PMON80607，描述于附图11中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FAD3-1A 3′UTR(SEQ ID NO：16)和FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassicanapin3′终止序列的载体和含有由大豆FAD2启动子调控的Rcommunis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ ID NO：40)和nos 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON80614，描述于附图11中并采用本文所描述的方法用于转化。
参考附图12，大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)和FAD3-1A 3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα启动子和tml3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON80629，描述于附图12中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)，FAD3-1A内含子4(SEQ ID NO：10)，FATB内含子II(SEQ ID NO：30)和FAD3-1A内含子4(SEQ ID NO：10)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON81902，描述于附图12中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在一起)，FAD3-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：17和16连接在一起，或者27和26连接在一起)，FATB 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。PCR产物在正义方向直接通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，相似地，FAD3-1PCR产物在正义方向直接通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法克隆到含有大豆7Sα启动子和tml 3′终止序列的载体中，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，FATB PCR产物在正义方向直接克隆到含有arcelin启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，01，描述于附图12中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在一起)，FAD3-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：17和16连接在一起，或者27和26连接在一起)，FATB5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法FAD2-1PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，相似地，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，FAD3-1PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα启动子和tml 3′终止序列的载体中，通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，FATB PCR产物在正义方向直接克隆到含有arcelin启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由Brassicanapin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，02，描述于附图12中并采用本文所描述的方法用于转化。
参看附图13，大豆FAD2-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在一起)，FATB5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)和FAD3-1B5′UTR-3′UTR(SEQID Nos：27和26连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由Brassicanapin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中。最终的基因表达构建体，07，描述于附图13中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1内含子1(SEQ ID NO：1或2)通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中。大豆FATB5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)，FAD3-1A 3′UTR(SEQ ID NO：16)和FAD3-1B5′UTR-3′UTR(SEQ ID Nos：27和26连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα启动子和tml3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E93′终止序列的载体。一个含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，09，描述于附图13中并采用本文所描述的方法用于转化。
2C  反义构建体
附图14描述了本发明的核酸分子，其中第一组DNA序列能够表达反义构建体，附图15描述了本发明的核酸分子，其中第一组DNA序列能够表达正义和反义构建体的组合。第二组DNA序列包含编码序列，每一个编码序列是一个DNA序列，它所编码的序列在被表达时能够提高由选自KASI，KASIV，δ-9去饱和酶和CP4 EPSPS基因所组成的组的基因编码的蛋白和转录物或者二者之一，每一个编码序列都与一个启动子相连，该启动子可以是植物中有功能的任意启动子或者是任意的植物启动子，也可以是FMV启动子，napin启动子，7S(7Sa或7Sa’)启动子，arcelin启动子，δ-9去饱和酶启动子或者FAD2-1A启动子。
参看附图14，大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)，FAD3-1A 3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON80615，描述于附图14中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB 3′UTR(SEQ ID NO：36)，FAD3-1A 3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由Brassicanapin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON80616，描述于附图14中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)和FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后这些载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由大豆FAD2启动子调控的R communis δ-9去饱和酶(FAB2)基因(SEQ IDNO：40)和nos3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，pMON80617，描述于附图14中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-1 3′UTR(SEQ ID NO：5)，FATB3′UTR(SEQ ID NO：36)和FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在反义方向直接克隆到含有大豆7Sα启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后该载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，pMON80630，描述于附图14中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-15′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在一起)，FATB5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)，FAD3-1A3′UTR(SEQ ID NO：16)和FAD3-1B5′UTR-3′UTR(SEQ ID Nos：27和26连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，然后该载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E93′终止序列的载体。一个含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中最终的基因表达构建体，08，描述于附图14中并采用本文所描述的方法用于转化。
参看附图15，大豆FAD2-1 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在一起)，FAD3-1A5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：17和16连接在一起)和FATB 5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义和反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，额外的大豆7Sα启动子位于正义和反义序列之间，然后该载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。最终的基因表达构建体，03，描述于附图15中并采用本文所描述的方法用于转化。
大豆FAD2-15′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：6和5，连接在一起)，FAD3-1A5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：27和26连接在一起)和FATB5′UTR-3′UTR(SEQ ID NOs：37和36连接在一起)序列通过PCR扩增形成PCR产物，该产物在两个端点都包含再工程化的限制性位点。通过将XhoI位点设计到PCR引物5′末端的方法，PCR产物在正义和反义方向直接克隆到含有大豆7Sα’启动子和tml 3′终止序列的载体中，额外的大豆7Sα启动子位于正义和反义序列之间，然后该载体被NotI切割并转入pMON41164中，即一个含有由FMV启动子调控的CP4EPSPS基因和豌豆Rubisco E9 3′终止序列的载体。一个含有由Brassica napin启动子调控的C.Pulcherrima KAS IV基因(SEQ ID NO：39)和Brassica napin 3′终止序列的载体用适宜的限制性酶切割然后转入pMON41164中，最终的基因表达构建体，04，描述于附图15中并采用本文所描述的方法用于转化。
如上所述的核酸分子是优选的实施方案，能够获得本发明的目的、特点和益处，但是这并不意味着本发明仅限于列举的实施方案。第一组和第二DNA序列的核酸排列方式并不限于所列举和所描述的排列方式，为了实现本发明的目的、特点和益处可以以任意适宜的方式改变，这种改变列举于相应的附图中以及概括于权利要求中。
实施例3  植物转化与分析
通过前述的方法包括McCabe et al.，生物/技术，6：923-926(1988)或土壤杆菌属介导的转化方法，实施例1和2的构建体被稳定地转入大豆(如Asgrow品种A4922或Asgrow品种A3244或Asgrow品种A3525)。转化的大豆植物通过在含有草甘膦的培养基上选择来鉴定，来自于用构建体转化的大豆品系种子的脂肪酸组合物用气相色谱分析。此外这些构建体中的任何一个可以含有其它有兴趣的序列以及启动子的不同组合。
对于某些用途，在发育的种子中检测改进的脂肪酸组合物，而在其它情况下，例如油组合物的分析，脂肪酸改进的检测在FAS途径晚期进行，或对脂肪酸组合物较小改进的检测，优选对成熟种子来源的脂肪酸或油进行分析，进一步优选特定种子的油和/或脂肪酸含量的分析，特别是检测分离的R1种子中油的改进。在本文中，R0是指经本文所描述的转化/再生过程发育的植物和种子，R1是指由转基因R0种子发育的植物和种子。
用实施例2的构建体转化的大豆品系种子中脂肪酸组合物的确定。将转基因大豆组和对照大豆组的各1/10种子用组织匀浆器(ProScientific)分别进行研磨以进行油提取，来自研磨大豆种子的油用1.5ml含有triheptadecanoin(0.50mg/ml)的正庚烷提取，过夜，200ul的提取油的等分部分通过在纯甲醇中添加500μl甲醇钠衍生为甲基酯。衍生反应在50℃进行20分钟，同时加入500μl 10％(w/v)氯化钠和400μl正庚烷终止反应，用正庚烷提取的终产物脂肪酸甲酯在Hewlett-Packard 6890GC型(Palo Alto，CA)上通过气相层析法(GC)进行分离，GC配有Supelcowax 250柱(30m，0.25mm id，0.25微米膜厚)(Supelco，Bellefonte，PA)。柱温在注入时为175℃，温度以40℃/min的速度从175℃升到245℃然后降回175℃。注入器和检测器的温度分别为250℃和270℃。
实施例4  具有改进的生物柴油特性的合成燃料油
制备含有下列脂肪酸甲酯混合物的合成燃油肪酸组合物：73.3％油酸，21.4％亚油酸，2.2％棕榈酸，2.1％亚麻酸和1.0％硬脂酸(都以重量计)。纯化的脂肪酸甲酯购自Nu-Chek Prep，Inc.，Elysian，MN，USA，组合物中十六烷的数目和燃烧延迟时间由Southwest研究所通过燃烧质量测试器(“IQT”)613(Southwest研究所，San Antonio，Texas，USA)测试。
IQT由一个电子加热的恒定容量燃烧室，一个燃油注入系统和一个用于控制操作过程、记录资料和提供对该资料进行解释的计算机组成。燃油注入系统包括一个燃油注入喷嘴，该喷嘴形成进入燃烧室的入口，燃油喷嘴中的一个针状升降感受器探测进入燃烧室的燃油流速，连接到燃烧室上的一个压力转换器检测汽缸压力和燃烧室内的压力。IQT的基本功能是检测从燃油注入燃烧室开始至燃烧开始的时间，燃烧室内的热力学条件被精确控制以提供对燃烧延迟时间的连续测量。
对于十六烷数量和燃烧延迟时间的检测，将被测燃油用5微米的滤器过滤，燃油贮池、注入管道和喷嘴都用雾化氮气清洗，燃油贮池然后用无纺绒布擦试，一部分被测燃油用于注满燃油贮池、注入管道和喷嘴，贮池用被测燃油充满并将所有气体从系统排出，贮池加压至50psig，该方法基本由在高压下注入燃烧室数量精确的被测燃油组成，燃烧室通过空气控制达到理想的压力和温度。检测过程由决定燃油注入开始至燃烧开始之间的时间组成，即通常所述的燃烧延迟时间。这种决定基于所测的针升降和燃烧室的压力，通常的十六烷评定程序要求设定壳温为567.5℃，气体压力为2.1Mpa。
在操作开始之日，使已知注入延迟的燃油在IQT燃烧瓶中运行，以确保设备在正常参数运行。然后运行被测的合成燃油，最后再运行已知燃油以验证该系统没有发生变化。一旦燃油贮池与燃油注入泵相连，PC控制器的测试程序便开始运行，该计算机控制着所有的程序包括空气的充填、燃油的注入和废气的排放，燃烧实验重复进行32次。
燃烧延迟时间是指从燃油注入开始至燃烧开始之间的时间，该延迟时间由针升降和气缸内的压力参数决定。注入针的升起作为注入开始的信号，由于燃油气化的冷却效应，会使得气缸压力轻微下降。燃烧开始被定义为气缸压力的恢复时间-由于燃烧压力升高至燃油注入之前的压力。
然后根据整合到数据采集和压缩软件中的校准曲线，用所测的燃烧延迟时间来决定十六烷数量。校准曲线，由作为燃烧延迟时间函数的十六烷数量组成，是通过使用基本参照燃油和NEG检测燃油的混合物获得。关于被测燃油其在环境温度下是液体，校准曲线以至少一种已知十六烷数量的检测燃油为日常基准进行检测(Ryan，“燃烧延迟的理化特性与十六烷数量的相关性”，SAE Paper 852103(1985)；Ryan，“由常规容量燃烧高压瓶决定的柴油燃烧特性”，SAE Paper870586(1986)；Ryan，“便携式燃油十六烷″品质监测器的发展”，Belvoir Fuels and Lubricants Research Facility Report No.227，五月(1992)；Ryan，“用于柴油点燃和燃烧的引擎和常规容量瓶的研究”，SAE Paper 881616(1988)；和Allard et al.，“由燃烧质量检测器(“IQT”)决定的柴油燃烧质量”，SAE Paper 961182(1996)。在表3中，合成油组合物显示了其适宜作为生物柴油使用的十六烷数量和燃烧延迟时间，但并不限于此。
                     表3
燃料名称 检测数目  十六烷数量  十六烷数量的标准差 燃烧延迟(ms) 燃烧延迟的标准差
Check-High1Check-High  17771778  49.5549.33  0.5340.611  4.0094.028  0.0440.051
 平均值  49.4  4.02
合成油类合成油类合成油类  177917801781  55.0255.6555.63  1.8971.8071.649  3.6223.5833.583  0.1160.1090.098
 平均值  55.4  3.60
Check-High  1786  49.2  0.727  4.04  0.061
1名称为Check-High的燃油是一校准燃油，它的十六烷数量是49.3±0.5，在合成的测试燃油运行前后要用该校准燃油来校正。
用ASTM D程序测定合成油的密度(ASTM D-4052)、浊点(ASTMD-2500)、流点(ASTM D-97)和冷凝点(IP309/ASTM D-6371)，ASTM D程序购自ASTM，100 Barr Harbor Drive，West Conshohocken，PA，USA。这些测试结果列于表4，在表4中列举了合成油组合物适宜作为生物柴油的数据，但不限于此。
                        表4
  检测   方法   结果
  密度   ASTM D-4052   0.8791g/mL
  浊度   ASTM D-2500   -18℃
  流点   ASTM D-97   -21℃
  冷凝点   IP 309(与ASTM D-6371相同)   -21℃
通过计算基于生物的燃料的不饱和水平来估算氮氧化物排放水平，即通过测量燃油密度间接计算估计的排放水平或直接测量估计的排放水平。也有可获得的标准程序来直接测量氧化氮的排放水平。据估计合成油与由传统的大豆油制备的脂肪酸甲基酯相比有较低的氧化氮排放水平，这种估计是基于合成油中所有的不饱和物的水平。油双键的含量越高，例如不饱和程度越高，氮氧化物排放率越高，有123个双键的油与含有153个双键的传统大豆油的比较列于表5。
             表5
    合成油73％油酸(18:1)    x1双键＝         7322％亚油酸(18:2)  x2双键＝         442％亚麻酸(18:3)   x3双键＝          6
                      双键总数        123
    传统大豆油23％油酸(18:1)    x1双键＝         2353％亚油酸(18:2)  x2双键＝        1068％亚麻酸(18:3)   x3双键＝         24
                      双键总数        153
据国家再生能源委员会，合同No ACG-8-17106-02最后报告：生物柴油组合物对ADDC系列60柴油引擎排放率的影响，(2000-06)，生物柴油组合物的硝酸排放率通过公式y＝46.959x-36.388来估计，其中y是氧化物排放率克/brake马力小时；x是生物柴油的密度。该公式基于在包括16种生物柴油的检测时硝酸排放率的回归分析，检测使用1991标度，生产系列60型Detroit柴油公司发动机。
合成油的密度由Southwest研究所通过ASTM D4052方法测定，表4中的结果用于上述方程式中以预测硝酸排放值4.89g/bhp-h，这一结果与对照的大豆油进行比较，国家再生能源委员会的报告给出了对照组大豆生物柴油(甲基大豆酯IGT)的密度和硝酸排放率，对照生物柴油的密度是0.8877g/mL，同时给出了计算出的硝酸排放率5.30g/bhp-h，这个计算的排放值与硝酸排放的实验值5.32g/bhp-h相似，与对照组相比，合成油组合物显示了改进的数值，适于用作生物柴油，但不限于此。
实施例5  获得健康血清脂质水平的最适宜脂肪酸组成
通过具有胆固醇降低特性的植物组成来鉴定与传统大豆油相比对血脂水平具有较好效果的脂肪酸组成(例如较低的LDL-胆固醇和较高的HDL胆固醇)，基于27个临床实验的公布方程用于比较使用新油组合物者和使用传统大豆油者血清脂质水平。
表6显示了血脂水平的变化结果，其中30％的来自于碳水化合物的食物能量用脂类代替，结果表明在饮食中当用大豆油代替碳水化合物时，在血脂水平方面具有令人满意的效果。这种血脂组成的改进可能是由于降低了饱和脂肪酸含量，使总脂肪酸中亚油酸含量达到10-30％，优选约15-25％。当亚油酸的含量低于总脂肪酸的10％时，与对照大豆油相比新组合物能够提高LDL-胆固醇，即使饱和脂肪酸的含量降低至总脂肪酸的5％。当亚油酸的比率升高时，组合物提高血清HDL水平的能力降低，因此优选的亚油酸成分约占总脂肪酸含量的15-25％。
                                      表6
                              脂肪酸   血脂
C16:0 C18:0 C18:1 C18:2 C18:3   其它(C20:1)
大豆对照组(％)30％脂肪E的比例(％)LDL计算值(mg/dl)HDL计算值(mg/dl)   11.0003.3004.2241.551   4.0001.2001.5360.564   23.4007.0201.6852.387   53.20015.9608.7784.469   7.8002.3401.2870.655   0.6000.1800.0430.061 -6.0339.687
3％18:2，＜6％饱和(％)30％脂肪E的比例(％)LDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)HDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)   3.0000.9001.1520.423   2.0000.6000.7680.282   85.00025.5006.1208.670   3.0000.9000.4950.252   3.0000.9000.4950.252   4.0001.2000.2880.408 -5.4780.55510.2870.600
10％18:2，＜6％饱和(％)30％脂肪E的比例(％)LDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)HDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)   3.0000.9001.1520.423   2.0000.6000.7680.282   72.00021.6005.1847.344   10.0003.0001.6500.840   3.0000.9000.4950.252   10.0003.0000.7201.020 -6.129-0.09610.1610.474
20％18:2，＜6％饱和(％)30％脂肪E的比例(％)LDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)HDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)   3.0000.9001.1520.423   2.0000.6000.7680.282   65.00019.5004.6806.630   20.0006.0003.3001.680   3.0000.9000.4950.252   7.0002.1000.5040.714 -7.059-1.0269.9810.294
21％18:2，＜3.2％饱和(％)30％脂肪E的比例(％)LDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)HDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)   2.0000.6000.7680.282   1.0000.3000.3840.141   72.00021.6005.1847.344   21.0006.3003.4651.764   1.0000.3000.1650.084   3.0000.9000.2160.306 -7.878-1.8459.9210.234
30％18:2，＜6％饱和(％)30％脂肪E的比例(％)LDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)HDL计算值(mg/dl)与对照相比(mg/dl)   3.0000.9001.1520.423   2.0000.6000.7680.282   57.00017.1004.1045.814   30.0009.0004.9502.520   3.0000.9000.4950.252   5.0001.5000.3600.510 -7.989-1.9569.8010.114
                                序列表
<110>孟山都技术有限公司
<120>核酸构建体及其生产改良的种子油组合物的方法
<130>16518.098
<150>US 60/365,794
<151>2002-03-21
<150>US 60/390,185
<151>2002-06-21
<160>41
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>420
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD2-1A内含子1
<400>1
gtaaattaaa ttgtgcctgc acctcgggat atttcatgtg gggttcatca tatttgttga     60
ggaaaagaaa ctcccgaaat tgaattatgc atttatatat cctttttcat ttctagattt    120
cctgaaggct taggtgtagg cacctagcta gtagctacaa tatcagcact tctctctatt    180
gataaacaat tggctgtaat gccgcagtag aggacgatca caacatttcg tgctggttac    240
tttttgtttt atggtcatga tttcactctc tctaatctct ccattcattt tgtagttgtc    300
attatcttta gatttttcac tacctggttt aaaattgagg gattgtagtt ctgttggtac    360
atattacaca ttcagcaaaa caactgaaac tcaactgaac ttgtttatac tttgacacag    420
<210>2
<211>405
<212>DNA
<211>405
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD2-1B内含子1
<400>2
gtatgatgct aaattaaatt gtgcctgcac cccaggatat ttcatgtggg attcatcatt     60
tattgaggaa aactctccaa attgaatcgt gcatttatat tttttttcca tttctagatt    120
tcttgaaggc ttatggtata ggcacctaca attatcagca cttctctcta ttgataaaca    180
attggctgta ataccacagt agagaacgat cacaacattt tgtgctggtt accttttgtt    240
ttatggtcat gatttcactc tctctaatct gtcacttccc tccattcatt ttgtacttct    300
catatttttc acttcctggt tgaaaattgt agttctcttg gtacatacta gtattagaca    360
ttcagcaaca acaactgaac tgaacttctt tatactttga cacag                    405
<210>3
<211>1704
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD2-1B启动子
<400>3
actatagggc acgcgtggtc gacggcccgg gctggtcctc ggtgtgactc agccccaagt     60
gacgccaacc aaacgcgtcc taactaaggt gtagaagaaa cagatagtat ataagtatac    120
catataagag gagagtgagt ggagaagcac ttctcctttt tttttctctg ttgaaattga    180
aagtgttttc cgggaaataa ataaaataaa ttaaaatctt acacactcta ggtaggtact    240
tctaatttaa tccacacttt gactctatat atgttttaaa aataattata atgcgtactt    300
acttcctcat tatactaaat ttaacatcga tgattttatt ttctgtttct cttctttcca    360
cctacataca tcccaaaatt tagggtgcaa ttttaagttt attaacacat gtttttagct    420
gcatgctgcc tttgtgtgtg ctcaccaaat tgcattcttc tctttatatg ttgtatttga    480
attttcacac catatgtaaa caagattacg tacgtgtcca tgatcaaata caaatgctgt    540
cttatactgg caatttgata aacagccgtc cattttttct ttttctcttt aactatatat    600
gctctagaat ctctgaagat tcctctgcca tcgaatttct ttcttggtaa caacgtcgtc    660
gttatgttat tattttattc tatttttatt ttatcatata tatttcttat tttgttcgaa    720
gtatgtcata ttttgatcgt gacaattaga ttgtcatgta ggagtaggaa tatcacttta    780
aaacattgat tagtctgtag gcaatattgt cttctttttc ctcctttatt aatatatttt    840
gtcgaagttt taccacaagg ttgattcgct ttttttgtcc ctttctcttg ttctttttac    900
ctcaggtatt ttagtctttc atggattata agatcactga gaagtgtatg catgtaatac    960
taagcaccat agctgttctg cttgaattta tttgtgtgta aattgtaatg tttcagcgtt   1020
ggctttccct gtagctgcta caatggtact gtatatctat tttttgcatt gttttcattt   1080
tttcttttac ttaatcttca ttgctttgaa attaataaaa caatataata tagtttgaac   1140
tttgaactat tgcctattca tgtaattaac ttattcactg actcttattg tttttctggt   1200
agaattcatt ttaaattgaa ggataaatta agaggcaata cttgtaaatt gacctgtcat   1260
aattacacag gaccctgttt tgtgcctttt tgtctctgtc tttggttttg catgttagcc   1320
tcacacagat atttagtagt tgttctgcat acaagcctca cacgtatact aaaccagtgg   1380
acctcaaagt catggcctta cacctattgc atgcgagtct gtgacacaac ccctggtttc   1440
catattgcaa tgtgctacgc cgtcgtcctt gtttgtttcc atatgtatat tgataccatc   1500
aaattattat atcatttata tggtctggac cattacgtgt actctttatg acatgtaatt   1560
gagtttttta attaaaaaaa tcaatgaaat ttaactacgt agcatcatat agagataatt   1620
gactagaaat ttgatgactt attctttcct aatcatattt tcttgtattg atagccccgc  1680
tgtccctttt aaactcccga gaga                                         1704
<210>4
<211>4497
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD2-1A基因组克隆
<400>4
cttgcttggt aacaacgtcg tcaagttatt attttgttct tttttttttt atcatatttc     60
ttattttgtt ccaagtatgt catattttga tccatcttga caagtagatt gtcatgtagg    120
aataggaata tcactttaaa ttttaaagca ttgattagtc tgtaggcaat attgtcttct    180
tcttcctcct tattaatatt ttttattctg ccttcaatca ccagttatgg gagatggatg    240
taatactaaa taccatagtt gttctgcttg aagtttagtt gtatagttgt tctgcttgaa    300
gtttagttgt gtgtaatgtt tcagcgttgg cttcccctgt aactgctaca atggtactga    360
atatatattt tttgcattgt tcattttttt cttttactta atcttcattg ctttgaaatt    420
aataaaacaa aaagaaggac cgaatagttt gaagtttgaa ctattgccta ttcatgtaac    480
ttattcaccc aatcttatat agtttttctg gtagagatca ttttaaattg aaggatataa    540
attaagagga aatacttgta tgtgatgtgt ggcaatttgg aagatcatgc gtagagagtt    600
taatggcagg ttttgcaaat tgacctgtag tcataattac actgggccct ctcggagttt    660
tgtgcctttt tgttgtcgct gtgtttggtt ctgcatgtta gcctcacaca gatatttagt    720
agttgttgtt ctgcatataa gcctcacacg tatactaaac gagtgaacct caaaatcatg    780
gccttacacc tattgagtga aattaatgaa cagtgcatgt gagtatgtga ctgtgacaca    840
acccccggtt ttcatattgc aatgtgctac tgtggtgatt aaccttgcta cactgtcgtc    900
cttgtttgtt tccttatgta tattgatacc ataaattatt actagtatat cattttatat    960
tgtccatacc attacgtgtt tatagtctct ttatgacatg taattgaatt ttttaattat   1020
aaaaaataat aaaacttaat tacgtactat aaagagatgc tcttgactag aattgtgatc   1080
tcctagtttc ctaaccatat actaatattt gcttgtattg atagcccctc cgttcccaag   1140
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tacctggttt aaaattgagg gattgtagtt ctgttggtac atattacaca ttcagcaaaa   1560
caactgaaac tcaactgaac ttgtttatac tttgacacag ggtctagcaa aggaaacaac   1620
aatgggaggt agaggtcgtg tggcaaagtg gaagttcaag ggaagaagcc tctctcaagg   1680
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tgctttcagc gctccctcct cacttcattc tcctatgttg tttatgacct ttcatttgcc   1800
ttcattttct acattgccac cacctacttc cacctccttc ctcaaccctt ttccctcatt   1860
gcatggccaa tctattgggt tctccaaggt tgccttctca ctggtgtgtg ggtgattgct   1920
cacgagtgtg gtcaccatgc cttcagcaag taccaatggg ttgatgatgt tgtgggtttg   1980
acccttcact caacactttt agtcccttat ttctcatgga aaataagcca tcgccgccat   2040
cactccaaca caggttccct tgaccgtgat gaagtgtttg tcccaaaacc aaaatccaaa   2100
gttgcatggt tttccaagta cttaaacaac cctctaggaa gggctgtttc tcttctcgtc   2160
acactcacaa tagggtggcc tatgtattta gccttcaatg tctctggtag accctatgat   2220
agttttgcaa gccactacca cccttatgct cccatatatt ctaaccgtga gaggcttctg   2280
atctatgtct ctgatgttgc tttgttttct gtgacttact ctctctaccg tgttgcaacc   2340
ctgaaagggt tggtttggct gctatgtgtt tatggggtgc ctttgctcat tgtgaacggt   2400
tttcttgtga ctatcacata tttgcagcac acacactttg ccttgcctca ttacgattca   2460
tcagaatggg actggctgaa gggagctttg gcaactatgg acagagatta tgggattctg   2520
aacaaggtgt ttcatcacat aactgatact catgtggctc accatctctt ctctacaatg   2580
ccacattacc atgcaatgga ggcaaccaat gcaatcaagc caatattggg tgagtactac   2640
caatttgatg acacaccatt ttacaaggca ctgtggagag aagcgagaga gtgcctctat   2700
gtggagccag atgaaggaac atccgagaag ggcgtgtatt ggtacaggaa caagtattga   2760
tggagcaacc aatgggccat agtgggagtt atggaagttt tgtcatgtat tagtacataa   2820
ttagtagaat gttataaata agtggatttg ccgcgtaatg actttgtgtg tattgtgaaa   2880
cagcttgttg cgatcatggt tataatgtaa aaataattct ggtattaatt acatgtggaa   2940
agtgttctgc ttatagcttt ctgcctaaaa tgcacgctgc acgggacaat atcattggta   3000
atttttttaa aatctgaatt gaggctactc ataatactat ccataggaca tcaaagacat   3060
gttgcattga ctttaagcag aggttcatct agaggattac tgcataggct tgaactacaa   3120
gtaatttaag ggacgagagc aactttagct ctaccacgtc gttttacaag gttattaaaa   3180
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tagcaaacac ctaaattgga ctgattttta gattcaaatt taataattaa tctaaattaa   3300
acttaaattt tataatatat gtcttgtaat atatcaagtt ttttttttta ttattgagtt   3360
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aaaagttaat actgatggtg gagaaaaaaa aatgttattg ggagcatatg gtaagataag   3540
acggataaaa atatgctgca gcctggagag ctaatgtatt ttttggtgaa gttttcaagt   3600
gacaactatt catgatgaga acacaataat attttctact tacctatccc acataaaata   3660
ctgattttaa taatgatgat aaataatgat taaaatattt gattctttgt taagagaaat   3720
aaggaaaaca taaatattct catggaaaaa tcagcttgta ggagtagaaa ctttctgatt   3780
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<210>5
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tggagcaacc aatgggccat agtgggagtt atggaagttt tgtcatgtat tagtacataa     60
ttagtagaat gttataaata agtggatttg ccgcgtaatg actttgtgtg tattgtgaaa    120
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<210>6
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<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD2-1A 5′UTR
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gtcgt                                                                125
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<212>DNA
<213>大豆
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<223>FAD3-1A内含子1
<400>7
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cacattgttc tgttatgtca tttcttcttc atttggcttt agacaactta aatttgagat    120
ctttattatg tttttgctta tatggtaaag tgattcttca ttatttcatt cttcattgat    180
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<400>8
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tcaattattt ttatagtgtg tttggaagcc cgtttgagaa aataagaaat cgcatctgga   120
atgtgaaagt tataactatt tagcttcatc tgtcgttgca agttctttta ttggttaaat   180
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ttttatttga taaatgacaa ccaaattgat tttgatggat tttgca                  346
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<211>142
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<213>大豆
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<400>9
gtatgtgatt aattgcttct cctatagttg ttcttgattc aattacattt tatttatttg    60
gtaggtccaa gaaaaaaggg aatctttatg cttcctgagg ctgttcttga acatggctct   120
tttttatgtg tcattatctt ag                                            142
<210>10
<211>1228
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD3-1A内含子4
<400>10
taacaaaaat aaatagaaaa tagtgggtga acacttaaat gcgagatagt aatacctaaa     60
aaaagaaaaa aatataggta taataaataa tataactttc aaaataaaaa gaaatcatag    120
agtctagcgt agtgtttgga gtgaaatgat gttcacctac cattactcaa agattttgtt    180
gtgtccctta gttcattctt attattttac atatcttact tgaaaagact ttttaattat    240
tcattgagat cttaaagtga ctgttaaatt aaaataaaaa acaagtttgt taaaacttca    300
aataaataag agtgaaggga gtgtcatttg tcttctttct tttattgcgt tattaatcac    360
gtttctcttc tctttttttt ttttcttctc tgctttccac ccattatcaa gttcatgtga    420
agcagtggcg gatctatgta aatgagtggg gggcaattgc acccacaaga ttttattttt    480
tatttgtaca ggaataataa aataaaactt tgcccccata aaaaataaat attttttctt    540
aaaataatgc aaaataaata taagaaataa aaagagaata aattattatt aattttatta    600
ttttgtactt tttatttagt ttttttagcg gttagatttt tttttcatga cattatgtaa    660
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aataagtaaa acaagtgaca attatatttt atatttactt aatgtgaaat aatacttgaa    840
cattataata aaacttaatg acaggagata ttacatagtg ccataaagat attttaaaaa    900
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<212>DNA
<213>大豆
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<400>11
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tcacacccac ttcatttaaa ataagaacgt gggtgttatt ttaatttcta ttcactaaca    180
tgagaaatta acttatttca agtaataatt ttaaaatatt tttatgctat tattttatta    240
caaataatta tgtatattaa gtttattgat tttataataa ttatattaaa attatatcga    300
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atcaatataa attatatttt gctgataaaa aaacatggtt aaccattaaa ttcttttttt    540
aaaaaaaaaa ctgtatctaa actttgtatt attaaaaaga agtctgagat taacaataaa    600
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<213>大豆
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<212>DNA
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<400>13
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<212>DNA
<213>大豆
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<400>14
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tacatccttt tcacatctta cttgaaaaga ttttaattat tcattgaaat attaacgtga    420
cagttaaatt aaaataataa aaaattcgtt aaaacttcaa ataaataaga gtgaaaggat    480
catcattttt cttctttctt ttattgcgtt attaatcatg cttctcttct tttttttctt    540
cgctttccac ccatatcaaa ttcatgtgaa gtatgagaaa atcacgattc aatggaaagc    600
tacaggaacy ttttttgttt tgtttttata atcggaatta atttatactc cattttttca    660
caataaatgt tacttagtgc cttaaagata atatttgaaa aattaaaaaa attattaata    720
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atagctttac ctgtgatcat ttatagcttt aagggactta gatgttacaa tcttaattac    900
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<212>DNA
<213>大豆
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<212>DNA
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<400>18
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gtgactgcat tggtagctgc agcaatcggc ttcaatagct ggttcttctg gccactctat    240
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attattatta caaattgtta tgttatgtta tgttatgttg ttgtgccttt ttctcagtga    360
tgctttagtc atttcatttc acttggttat gcatgattgt tcgttcatat gttctgtcat    420
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atgaccaaat tgtcctcaca agtccaaacc gtccactatt ttattttcac ctactttata    180
gcccaatttg ccatttggtt acttcagaaa agagaacccc atttgtagta aatatattat    240
ttatgaatta tggtagtttc aacataaaac atacttatgt gcagttttgc catccttcaa    300
aagaaggtag aaacttactc catgttactc tgtctatatg taatttcaca g             351
<210>25
<211>277
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD3-1B内含子5
<400>25
gtattaattc tctatttcac aagaaattat tgtatgtctg cctatgtgat ctaagtcaat     60
tttcacataa cacatgatca aactttctta attctttctt ctaaattgaa aaagtggatt    120
atatgtcaat tgaaaattgg tcaagaccac aaacatgtga tgatctccca ccttacatat    180
aataatttct cctattctac aatcaataat ccttctatgg tcctgaattg ttcctttctt    240
ttttcatttt cttattcttt ttgttgtccc acaatag                             277
<210>26
<211>158
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD3-1B 3′UTR
<400>26
agtttttgat gctacattta cctatttcac tcttaaatac tatttcctat gtaatatgta     60
atttagaata tgttacctac tcaaatcaat taggtgacat gtataagctt tcataaatta    120
tgctagaaat gcacttactt ttcaaagcat gctatgtc                            158
<210>27
<211>83
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FAD3-1B 5′UTR
<400>27
tctaatacga ctcactatag ggcaagcagt ggtatcaacg cagagtacgc gggggtaaca     60
gagaaagaaa catttgagca aaa                                             83
<210>28
<211>4083
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB基因组克隆
<400>28
gggaaacaac aaggacgcaa aatgacacaa tagcccttct tccctgtttc cagcttttct     60
ccttctctct ctccatcttc ttcttcttct tcactcagtc aggtacgcaa acaaatctgc    120
tattcattca ttcattcctc tttctctctg atcgcaaact gcacctctac gctccactct    180
tctcattttc tcttcctttc tcgcttctca gatccaactc ctcagataac acaagaccaa    240
acccgctttt tctgcatttc tagactagac gttctaccgg agaaggttct cgattctttt    300
ctcttttaac tttattttta aaataataat aatgagagct ggatgcgtct gttcgttgtg    360
aatttcgagg caatggggtt ctcattttcg ttacagttac agattgcatt gtctgctttc    420
ctcttctccc ttgtttcttt gccttgtctg atttttcgtt tttatttctt acttttaatt    480
tttggggatg gatatttttt ctgcattttt tcggtttgcg atgttttcag gattccgatt    540
ccgagtcaga tctgcgccgg cttatacgac gaatttgttc ttattcgcaa cttttcgctt    600
gattggcttg ttttacctct ggaatctcac acgtgatcaa ataagcctgc tattttagtt    660
gaagtagaat ttgttcttta tcggaaagaa ttctatggat ctgttctgaa attggagcta    720
ctgtttcgag ttgctatttt ttttagtagt attaagaaca agtttgcctt ttattttaca    780
tttttttcct ttgcttttgc caaaagtttt tatgatcact ctcttctgtt tgtgatataa    840
ctgatgtgct gtgctgttat tatttgttat ttggggtgaa gtataatttt ttgggtgaac    900
ttggagcatt tttagtccga ttgatttctc gatatcattt aaggctaagg ttgacctcta    960
ccacgcgttt gcgtttgatg ttttttccat ttttttttta tctcatatct tttacagtgt   1020
ttgcctattt gcatttctct tctttatccc ctttctgtgg aaaggtggga gggaaaatgt   1080
attttttttt tctcttctaa cttgcgtata ttttgcatgc agcgacctta gaaattcatt   1140
atggtggcaa cagctgctac ttcatcattt ttccctgtta cttcaccctc gccggactct   1200
ggtggagcag gcagcaaact tggtggtggg cctgcaaacc ttggaggact aaaatccaaa   1260
tctgcgtctt ctggtggctt gaaggcaaag gcgcaagccc cttcgaaaat taatggaacc   1320
acagttgtta catctaaaga aggcttcaag catgatgatg atctaccttc gcctcccccc   1380
agaactttta tcaaccagtt gcctgattgg agcatgcttc ttgctgctat cacaacaatt   1440
ttcttggccg ctgaaaagca gtggatgatg cttgattgga agccacggcg acctgacatg   1500
cttattgacc cctttgggat aggaaaaatt gttcaggatg gtcttgtgtt ccgtgaaaac   1560
ttttctatta gatcatatga gattggtgct gatcgtaccg catctataga aacagtaatg   1620
aaccatttgc aagtaagtcc gtcctcatac aagtgaatct ttatgatctt cagagatgag   1680
tatgctttga ctaagatagg gctgtttatt tagacactgt aattcaattt catatataga   1740
taatatcatt ctgttgttac ttttcatact atatttatat caactatttg cttaacaaca   1800
ggaaactgca cttaatcatg ttaaaagtgc tgggcttctt ggtgatggct ttggttccac   1860
gccagaaatg tgcaaaaaga acttgatatg ggtggttact cggatgcagg ttgtggtgga   1920
acgctatcct acatggttag tcatctagat tcaaccatta catgtgattt gcaatgtatc   1980
catgttaagc tgctatttct ctgtctattt tagtaatctt tatgaggaat gatcactcct   2040
aaatatattc atggtaatta ttgagactta attatgagaa ccaaaatgct ttggaaattt   2100
gtctgggatg aaaattgatt agatacacaa gctttataca tgatgaacta tgggaaacct   2160
tgtgcaacag agctattgat ctgtacaaga gatgtagtat agcattaatt acatgttatt   2220
agataaggtg acttatcctt gtttaattat tgtaaaaata gaagctgata ctatgtattc   2280
tttgcatttg ttttcttacc agttatatat accctctgtt ctgtttgagt actactagat   2340
gtataaagaa tgcaattatt ctgacttctt ggtgttgggt tgaagttaga taagctatta   2400
gtattattat ggttattcta aatctaatta tctgaaattg tgtgtctata tttgcttcag   2460
gggtgacata gttcaagtgg acacttgggt ttctggatca gggaagaatg gtatgcgtcg   2520
tgattggctt ttacgtgact gcaaaactgg tgaaatcttg acaagagctt ccaggtagaa   2580
atcattctct gtaattttcc ttcccctttc cttctgcttc aagcaaattt taagatgtgt   2640
atcttaatgt gcacgatgct gattggacac aattttaaat ctttcaaaca tttacaaaag   2700
ttatggaacc ctttcttttc tctcttgaag atgcaaattt gtcacgactg aagtttgagg   2760
aaatcatttg aattttgcaa tgttaaaaaa gataatgaac tacatatttt gcaggcaaaa   2820
acctctaatt gaacaaactg aacattgtat cttagtttat ttatcagact ttatcatgtg   2880
tactgatgca tcaccttgga gcttgtaatg aattacatat tagcattttc tgaactgtat   2940
gttatggttt tggtgatcta cagtgtttgg gtcatgatga ataagctgac acggaggctg   3000
tctaaaattc cagaagaagt cagacaggag ataggatctt attttgtgga ttctgatcca   3060
attctagaag aggataacag aaaactgact aaacttgacg acaacacagc ggattatatt   3120
cgtaccggtt taagtgtatg tcaactagtt tttttgtaat tgttgtcatt aatttctttt   3180
cttaaattat ttcagatgtt gctttctaat tagtttacat tatgtatctt cattcttcca   3240
gtctaggtgg agtgatctag atatcaatca gcatgtcaac aatgtgaagt acattgactg   3300
gattctggag gtatttttct gttcttgtat tctaatccac tgcagtcctt gttttgttgt   3360
taaccaaagg actgtccttt gattgtttgc agagtgctcc acagccaatc ttggagagtc   3420
atgagctttc ttccgtgact ttagagtata ggagggagtg tggtagggac agtgtgctgg   3480
attccctgac tgctgtatct ggggccgaca tgggcaatct agctcacagt ggacatgttg   3540
agtgcaagca tttgcttcga ctcgaaaatg gtgctgagat tgtgaggggc aggactgagt   3600
ggaggcccaa acctatgaac aacattggtg ttgtgaacca ggttccagca gaaagcacct   3660
aagattttga aatggttaac ggttggagtt gcatcagtct ccttgctatg tttagactta   3720
ttctggcctc tggggagagt tttgcttgtg tctgtccaat caatctacat atctttatat   3780
ccttctaatt tgtgttactt tggtgggtaa gggggaaaag ctgcagtaaa cctcattctc   3840
tctttctgct gctccatatt tcatttcatc tctgattgcg ctactgctag gctgtcttca   3900
atatttaatt gcttgatcaa aatagctagg catgtatatt attattcttt tctcttggct   3960
caattaaaga tgcaattttc attgtgaaca cagcataact attattctta ttatttttgt   4020
atagcctgta tgcacgaatg acttgtccat ccaatacaac cgtgattgta tgctccagct   4080
cag                                                                 4083
<210>29
<211>109
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子I
<400>29
gtacgcaaac aaatctgcta ttcattcatt cattcctctt tctctctgat cgcaaactgc      60
acctctacgc tccactcttc tcattttctc ttcctttctc gcttctcag                 109
<210>30
<211>836
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子II
<400>30
gttctcgatt cttttctctt ttaactttat ttttaaaata ataataatga gagctggatg      60
cgtctgttcg ttgtgaattt cgaggcaatg gggttctcat tttcgttaca gttacagatt     120
gcattgtctg ctttcctctt ctcccttgtt tctttgcctt gtctgatttt tcgtttttat     180
ttcttacttt taatttttgg ggatggatat tttttctgca ttttttcggt ttgcgatgtt     240
ttcaggattc cgattccgag tcagatctgc gccggcttat acgacgaatt tgttcttatt     300
cgcaactttt cgcttgattg gcttgtttta cctctggaat ctcacacgtg atcaaataag     360
cctgctattt tagttgaagt agaatttgtt ctttatcgga aagaattcta tggatctgtt     420
ctgaaattgg agctactgtt tcgagttgct atttttttta gtagtattaa gaacaagttt     480
gccttttatt ttacattttt ttcctttgct tttgccaaaa gtttttatga tcactctctt     540
ctgtttgtga tataactgat gtgctgtgct gttattattt gttatttggg gtgaagtata     600
attttttggg tgaacttgga gcatttttag tccgattgat ttctcgatat catttaaggc     660
taaggttgac ctctaccacg cgtttgcgtt tgatgttttt tccatttttt ttttatctca     720
tatcttttac agtgtttgcc tatttgcatt tctcttcttt atcccctttc tgtggaaggt     780
gggagggaaa atgtattttt tttttctctt ctaacttgcg tatattttgc atgcag         836
<210>31
<211>169
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子III
<400>31
gtaagtccgt cctcatacaa gtgaatcttt atgatcttca gagatgagta tgctttgact     60
aagatagggc tgtttattta gacactgtaa ttcaatttca tatatagata atatcattct    120
gttgttactt ttcatactat atttatatca actatttgct taacaacag                169
<210>32
<211>525
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子IV
<400>32
gttagtcatc tagattcaac cattacatgt gatttgcaat gtatccatgt taagctgcta     60
tttctctgtc tattttagta atctttatga ggaatgatca ctcctaaata tattcatggt    120
aattattgag acttaattat gagaaccaaa atgctttgga aatttgtctg ggatgaaaat    180
tgattagata cacaagcttt atacatgatg aactatggga aaccttgtgc aacagagcta    240
ttgatctgta caagagatgt agtatagcat taattacatg ttattagata aggtgactta    300
tccttgttta attattgtaa aaatagaagc tgatactatg tattctttgc atttgttttc    360
ttaccagtta tatataccct ctgttctgtt tgagtactac tagatgtata aagaatgcaa    420
ttattctgac ttcttggtgt tgggttgaag ttagataagc tattagtatt attatggtta    480
ttctaaatct aattatctga aattgtgtgt ctatatttgc ttcag                    525
<210>33
<211>389
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子V
<400>33
gtagaaatca ttctctgtaa ttttccttcc cctttccttc tgcttcaagc aaattttaag     60
atgtgtatct taatgtgcac gatgctgatt ggacacaatt ttaaatcttt caaacattta    120
caaaagttat ggaacccttt cttttctctc ttgaagatgc aaatttgtca cgactgaagt    180
ttgaggaaat catttgaatt ttgcaatgtt aaaaaagata atgaactaca tattttgcag    240
gcaaaaacct ctaattgaac aaactgaaca ttgtatctta gtttatttat cagactttat    300
catgtgtact gatgcatcac cttggagctt gtaatgaatt acatattagc attttctgaa    360
ctgtatgtta tggttttggt gatctacag                                      389
<210>34
<211>106
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子VI
<400>34
tatgtcaact agtttttttg taattgttgt cattaatttc ttttcttaaa ttatttcaga     60
tgttgctttc taattagttt acattatgta tcttcattct tccagt                   106
<210>35
<211>82
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB内含子VII
<400>35
gtatttttct gttcttgtat tctaatccac tgcagtcctt gttttgttgt taaccaaagg     60
actgtccttt gattgtttgc ag                                               82
<210>36
<211>208
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB 3′UTR
<400>36
gatttgaaat ggttaacgat tggagttgca tcagtctcct tgctatgttt agacttattc     60
tggttccctg gggagagttt tgcttgtgtc tatccaatca atctacatgt ctttaaatat    120
atacaccttc taatttgtga tactttggtg ggtaaggggg aaaagcagca gtaaatctca    180
ttctcattgt aattaaaaaa aaaaaaaa                                       208
<210>37
<211>229
<212>DNA
<213>大豆
<220>
<223>FATB 5′UTR
<400>37
acaattacac tgtctctctc ttttccaaaa ttagggaaac aacaaggacg caaaatgaca     60
caatagccct tcttccctgt ttccagcttt tctccttctc tctctctcca tcttcttctt    120
cttcttcact cagtcagatc caactcctca gataacacaa gaccaaaccc gctttttctg    180
catttctaga ctagacgttc taccggagaa gcgaccttag aaattcatt                229
<210>38
<211>1398
<212>DNA
<213>Cuphea pulcherrima
<220>
<223>KAS I基因
<400>38
atgcattccc tccagtcacc ctcccttcgg gcctccccgc tcgacccctt ccgccccaaa     60
tcatccaccg tccgccccct ccaccgagca tcaattccca acgtccgggc cgcttccccc    120
accgtctccg ctcccaagcg cgagaccgac cccaagaagc gcgtcgtgat caccggaatg    180
ggccttgtct ccgttttcgg ctccgacgtc gatgcgtact acgacaagct cctgtcaggc    240
gagagcggga tcggcccaat cgaccgcttc gacgcctcca agttccccac caggttcggc    300
ggccagattc gtggcttcaa ctccatggga tacattgacg gcaaaaacga caggcggctt    360
gatgattgcc ttcgctactg cattgtcgcc gggaagaagt ctcttgagga cgccgatctc    420
ggtgccgacc gcctctccaa gatcgacaag gagagagccg gagtgctggt tgggacagga    480
atgggtggtc tgactgtctt ctctgacggg gttcaatctc ttatcgagaa gggtcaccgg    540
aaaatcaccc ctttcttcat cccctatgcc attacaaaca tggggtctgc cctgctcgct    600
attgaactcg gtctgatggg cccaaactat tcaatttcca ctgcatgtgc cacttccaac    660
tactgcttcc atgctgctgc taatcatatc cgccgtggtg aggctgatct tatgattgct    720
ggaggcactg aggccgcaat cattccaatt gggttgggag gctttgtggc ttgcagggct    780
ctgtctcaaa ggaacgatga ccctcagact gcctctaggc cctgggataa agaccgtgat    840
ggttttgtga tgggtgaagg tgctggagtg ttggtgctgg agagcttgga acatgcaatg    900
aaacgaggag cacctattat tgcagagtat ttgggaggtg caatcaactg tgatgcttat    960
cacatgactg acccaagggc tgatggtctc ggtgtctcct cttgcattga gagtagcctt   1020
gaagatgctg gcgtctcacc tgaagaggtc aattacataa atgctcatgc gacttctact   1080
ctagctgggg atctcgccga gataaatgcc atcaagaagg ttttcaagaa cacaaaggat   1140
atcaaaatta atgcaactaa gtcaatgatc ggacactgtc ttggagcctc tggaggtctt   1200
gaagctatag cgactattaa gggaataaac accggctggc ttcatcccag cattaatcaa   1260
ttcaatcctg agccatccgt ggagttcgac actgttgcca acaagaagca gcaacacgaa   1320
gttaatgttg cgatctcgaa ttcatttgga ttcggaggcc acaactcagt cgtggctttc   1380
tcggctttca agccatga                                                 1398
<210>39
<211>1218
<212>DNA
<213>Cuphea pulcherrima
<400>39
atgggtgtgg tgactcctct aggccatgac cctgatgttt tctacaataa tctgcttgat     60
ggaacgagtg gcataagcga gatagagacc tttgattgtg ctcaatttcc tacgagaatt    120
gctggagaga tcaagtcttt ctccacagat ggttgggtgg ccccgaagct ctctaagagg    180
atggacaagt tcatgctata catgctgacc gctggcaaga aagcattaac agatggtgga    240
atcaccgaag atgtgatgaa agagctagat aaaagaaaat gcggagttct cattggctca    300
gcaatgggtg gaatgaaggt attcaatgat gccattgaag ccctaaggat ttcatataag    360
aagatgaatc ccttttgtgt acctttcgct accacaaata tgggatcagc tatgcttgca    420
atggacttgg gatggatggg gcccaactac tcgatatcta ctgcttgtgc aacgagtaac    480
ttttgtataa tgaatgctgc gaaccatata atcagaggcg aagcagatgt gatgctttgc    540
gggggctcag atgcggtaat catacctatt ggtatgggag gttttgttgc atgccgagct    600
ttgtcccaga gaaattccga ccctactaaa gcttcaagac catgggacag taatcgtgat    660
ggatttgtta tgggggaagg agctggagtg ctactactag aggagttgga gcatgcaaag    720
aaaagaggtg cgactattta cgcagaattt ctaggtggga gtttcacttg cgatgcctac    780
cacatgaccg agcctcaccc tgatggagct ggagtgattc tctgcataga gaaggctttg    840
gctcagtcag gagtctctag ggaagacgta aattacataa atgcccatgc cacatccact    900
ccggctggag atatcaaaga gtaccaagct cttatccact gtttcggcca aaacagagag    960
ttaaaagtta attcaaccaa atcaatgatt ggtcaccttc tcggagcagc cggtggtgtg   1020
gaagcagttt cagtagttca ggcaataagg actgggtgga tccatccgaa tattaatttg   1080
gaaaacccag atgaaggcgt ggatacaaaa ttgctcgtgg gtcctaagaa ggagagactg   1140
aacgttaagg tcggtttgtc taattcattt gggtttggtg ggcacaactc gtccatactc   1200
ttcgcccctt acatctag                                                 1218
<210>40
<211>1191
<212>DNA
<213>蓖麻
<220>
<223>δ-9去饱和酶
<400>40
atggctctca agctcaatcc tttcctttct caaacccaaa agttaccttc tttcgctctt     60
ccaccaatgg ccagtaccag atctcctaag ttctacatgg cctctaccct caagtctggt    120
tctaaggaag ttgagaatct caagaagcct ttcatgcctc ctcgggaggt acatgttcag    180
gttacccatt ctatgccacc ccaaaagatt gagatcttta aatccctaga caattgggct    240
gaggagaaca ttctggttca tctgaagcca gttgagaaat gttggcaacc gcaggatttt    300
ttgccagatc ccgcctctga tggatttgat gagcaagtca gggaactcag ggagagagca    360
aaggagattc ctgatgatta ttttgttgtt ttggttggag acatgataac ggaagaagcc    420
cttcccactt atcaaacaat gctgaatacc ttggatggag ttcgggatga aacaggtgca    480
agtcctactt cttgggcaat ttggacaagg gcatggactg cggaagagaa tagacatggt    540
gacctcctca ataagtatct ctacctatct ggacgagtgg acatgaggca aattgagaag    600
acaattcaat atttgattgg ttcaggaatg gatccacgga cagaaaacag tccatacctt    660
gggttcatct atacatcatt ccaggaaagg gcaaccttca tttctcatgg gaacactgcc    720
cgacaagcca aagagcatgg agacataaag ttggctcaaa tatgtggtac aattgctgca    780
gatgagaagc gccatgagac agcctacaca aagatagtgg aaaaactctt tgagattgat    840
cctgatggaa ctgttttggc ttttgctgat atgatgagaa agaaaatttc tatgcctgca    900
cacttgatgt atgatggccg agatgataat ctttttgacc acttttcagc tgttgcgcag    960
cgtcttggag tctacacagc aaaggattat gcagatatat tggagttctt ggtgggcaga   1020
tggaaggtgg ataaactaac gggcctttca gctgagggac aaaaggctca ggactatgtt   1080
tgtcggttac ctccaagaat tagaaggctg gaagagagag ctcaaggaag ggcaaaggaa   1140
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<210>41
<211>1194
<212>DNA
<213>希蒙得木
<220>
<223>δ-9去饱和酶
<400>41
atggcgttga agcttcacca cacggccttc aatccttcca tggcggttac ctcttcggga     60
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gtgcaaaaga cccattcaat gccgcctcaa aagattgaga ttttcaaatc cttggagggt    240
tgggctgagg agaatgtctt ggtgcatctt aaacctgtgg agaagtgttg gcaaccacaa    300
gattttctac ccgacccggc ctccgaggga tttatggatc aagtcaagga gttgagggaa    360
agaaccaaag aaatcccgga tgagtacctt gtggtgttgg ttggcgatat gatcactgaa    420
gaagctcttc cgacctacca gacgatgcta aacacgctcg atggagtacg tgatgagacg    480
ggtgccagcc ttacttcttg ggctatctgg acccgggcat ggaccgctga agagaatagg    540
cacggtgatc ttttgaacaa gtatctttac cttactggtc gagttgacat gaagcagata    600
gagaagacaa tccagtatct aatcggatct ggaatggacc ctcgaagtga aaacaacccc    660
tatctaggct tcatctacac ttccttccaa gagagagcaa ccttcatctc ccatggaaac    720
accgctaggc tcgccaaaga ccacggcgac tttcaactag cacaagtatg tggcatcatc    780
gctgcagatg agaagcgcca cgaaactgcc tacacaaaaa ttgtcgaaaa gctctttgaa    840
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ccagcccact taatgtatga tggcaaagat gacaatctct ttgagaacta ctcagccgtc    960
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aatcgctgga aagtcgagaa tttaatgggt ctgtctggcg agggacataa ggctcaagat   1080
ttcgtatgtg ggttggcccc gaggatcagg aaactcgggg agagagctca gtcgctaagc   1140
aaaccggtat ctcttgtccc cttcagctgg attttcaaca aggaattgaa ggtt         1194

Claims (72)

1.一种大豆种子，其所含油组合物包括55-80％重量的油酸，10-40％重量的亚油酸，6％或低于6％重量的亚麻酸和2-8％重量的饱和脂肪酸。
2.如权利要求1所述的大豆种子，其中所述的种子包含重组的核酸分子，所述核酸分子包含：
第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组中至少两种基因的内源性表达，和
第二组DNA序列，其在宿主细胞内表达时能够提高选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因、δ-9去饱和酶基因所组成的组中的至少一种基因的内源性表达。
3.如权利要求2所述的大豆种子，其中所述种子相对于来自具有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物的种子来说，呈现提高的油酸含量，降低的饱和脂肪酸含量和降低的多不饱和脂肪酸含量。
4.如权利要求2所述的大豆种子，其中油组合物进一步包括10-39％重量的亚油酸，4.5％或低于4.5％重量的亚麻酸和3-6％重量的饱和脂肪酸。
5.如权利要求2所述的大豆种子，其中油组合物进一步包括10-39％重量的亚油酸，3.0％或低于3.0％重量的亚麻酸和2-3.6％重量的饱和脂肪酸。
6.如权利要求2所述的大豆种子，其中油组合物进一步包括11-30％重量的亚油酸，4.5％或低于4.5％重量的亚麻酸和低于6％重量的饱和脂肪酸。
7.来自于权利要求2所述大豆种子的油，其中所述油相对于来自具有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物种子的油来说，呈现提高的油酸含量，降低的饱和脂肪酸含量和降低的多不饱和脂肪酸含量。
8.来自于权利要求2所述大豆种子的食物。
9.一种大豆种子的容器，其中至少25％的种子呈现其油组合物包括55-80％重量的油酸、10-40％重量的亚油酸、6％或低于6％重量的亚麻酸和2-8％重量的饱和脂肪酸。
10.一种大豆种子，其具有的油组合物包括65-80％重量的油酸，10-30％重量的亚油酸，6％或低于6％重量的亚麻酸和2-8％重量的饱和脂肪酸。
11.如权利要求10所述的大豆种子，其中油组合物进一步包括10-29％重量的亚油酸，4.5％或低于4.5％重量的亚麻酸和3-6％重量的饱和脂肪酸。
12.如权利要求10所述的大豆种子，其中油组合物进一步包括10-29％重量的亚油酸，3.0％或低于3.0％重量的亚麻酸和2-3.6％重量的饱和脂肪酸。
13.一种粗制大豆油，其具有的油组合物包括55-80％重量的油酸，10-40％重量的亚油酸，6％或低于6％重量的亚麻酸和2-8％重量的饱和脂肪酸。
14.如权利要求13所述的粗制大豆油，其中所述的油选自由烹调油、色拉油和煎炸油所组成的组。
15.如权利要求13所述的粗制大豆油，其中所述的油是制备物质的原材料，该物质选自由起酥油、人造黄油、润滑油、生物柴油、燃油和柴油添加剂所组成的组。
16.如权利要求13所述的粗制大豆油，其中所述的油在大于1升的容积中生成。
17.如权利要求16所述的粗制大豆油，其中所述的油在大于10升的容积中生成。
18.一种粗制大豆油，其具有的油组合物包括65-80％重量的油酸，10-40％重量的亚油酸，6％或低于6％重量的亚麻酸和2-8％重量的饱和脂肪酸。
19.一种粗制大豆油，其具有的油组合物包括69-73％重量的油酸，21-24％重量的亚油酸，0.5-3％重量的亚麻酸和2-3％重量的饱和脂肪酸。
20.如权利要求19所述的粗制大豆油，其中所述的油选自由烹调油、色拉油和煎炸油所组成的组。
21.如权利要求19所述的粗制大豆油，其中所述的油是制备大豆食品的原材料。
22.一种结种子的转化的大豆植物，其中所述种子呈现其油组合物包括55-80％重量的油酸，10-40％重量的亚油酸，6％或低于6％重量的亚麻酸和2-8％重量的饱和脂肪酸。
23.如权利要求22所述的转化的大豆植物，其中所述的转化的大豆植物包含重组的核酸分子，所述核酸分子包含
第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制FAD2基因和FAD3基因的内源性表达；和
第二组DNA序列，其在宿主细胞内表达时能够提高选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因、δ-9去饱和酶基因所组成的组中的至少一种基因的内源性表达。
24.来自于如权利要求23所述转化植物的给料。
25.来自于如权利要求23所述转化植物的植物部分。
26.来自于如权利要求23所述转化植物的种子。
27.一种转化植物，其包含重组的核酸分子，所述核酸分子包含：
第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组中至少两种基因的内源性表达；和
第二组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够提高选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因、δ-9去饱和酶基因所组成的组中的至少一种基因的内源性表达。
28.如权利要求27所述的转化植物，其中所述的转化植物是温带的含油种子植物。
29.如权利要求27所述的转化植物，其中所述的转化植物是大豆植物。
30.如权利要求27所述的转化植物，其中所述的转化植物与具有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物相比，其产生的种子呈现提高的油酸含量，降低的饱和脂肪酸含量和降低的多不饱和脂肪酸含量。
31.一种改变植物细胞中油组合物的方法，其包括：
(A)用重组核酸分子转化植物细胞，其中所述重组核酸分子包含：第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组中至少两种基因的内源性表达；和第二组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够提高选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因所组成的组中的至少一种基因的内源性表达；和
(B)培育所述植物细胞，其条件是其中所述第一组DNA序列和所述第二组DNA序列的转录被起始，由此相对于具有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物细胞，所述的油组合物被改变。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述的培育步骤产生一种植物细胞，该植物细胞具有至少部分降低的FAD2酶和FAD3酶水平和至少部分提高的至少一种基因水平，所述基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因所组成的组。
33.如权利要求31所述的方法，其中所述细胞出现在多细胞环境中。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述细胞出现在转化植物。
35.如权利要求31所述的方法，其中所述的改变相对于具有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物细胞来说包括提高的油酸含量，降低的饱和脂肪酸含量和降低的多不饱和脂肪酸含量。
36.一种生产转化植物的方法，该植物的种子具有降低的饱和脂肪酸含量，所述方法包括：
(A)用重组核酸分子转化植物细胞，所述重组核酸分子包含第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组中至少两种基因的内源性表达；和第二组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够提高选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因所组成的组中至少一种基因的内源性表达；和
(B)培育该转化的植物，其中转化的植物产生的种子相对于具有相似遗传背景但缺乏重组核酸分子的植物种子来说具有降低的饱和脂肪酸含量。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述的培育步骤进一步包括在植物的组织或器官中表达第一组DNA序列和所述的第二组DNA序列，其中所述的组织或器官选自由根、块茎、干、叶子、茎、果实、浆果、坚果、植物皮、荚、种子和花组成的组。
38.如权利要求36所述的方法，其中所述的培育步骤进一步包括在种子中表达第一组DNA序列和所述的第二组DNA序列。
39.一种重组核酸分子，其包含：
第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制选自由FAD2、FAD3和FATB基因组成的组中至少两种基因的内源性表达；和
第二组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够提高选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因所组成的组中的至少一种基因的内源性表达。
40.如权利要求39所述的重组核酸分子，其中所述的第一组DNA序列包含第一非编码序列，其在宿主细胞内表达时能够抑制FAD2基因的内源性表达；和第二非编码序列，其在宿主细胞内表达时能够抑制FAD3-1A基因的内源性表达。
41.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中第一组DNA序列表达为正义共抑制RNA转录体。
42.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中第一非编码序列表达为第一正义共抑制RNA转录体，以及第二非编码序列表达为第二正义共抑制RNA转录体，以及第一和第二正义共抑制转录体彼此不互相连接。
43.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中第一组DNA序列表达为反义RNA转录体。
44.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中第一非编码序列表达为第一反义RNA转录体，以及第二非编码序列表达为第二反义RNA转录体，以及第一和第二反义转录体彼此不互相连接。
45.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中第一组DNA序列表达为能够形成单一的双链RNA分子的RNA转录体。
46.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中所述第一组DNA序列进一步包含第三非编码序列，其在宿主细胞内表达时能够抑制FAD3-1B基因的内源性表达。
47.如权利要求46所述的重组核酸分子，其中所述第一非编码序列是FAD2-1A序列，所述第二非编码序列是FAD3-1A序列以及所述第三非编码序列是FAD3-1B序列。
48.如权利要求47所述的重组核酸分子，其中所述FAD2-1A序列选自由FAD2-1A内含子序列，FAD2-1A 3′UTR序列和FAD2-1A 5′UTR序列组成的组。
49.如权利要求47所述的重组核酸分子，其中所述FAD3-1A序列选自由FAD3-1A内含子序列，FAD3-1A 3′UTR序列和FAD3-1A 5′UTR序列组成的组。
50.如权利要求47所述的重组核酸分子，其中所述FAD3-1B序列选自由FAD3-1B内含子序列，FAD3-1B 3′UTR序列和FAD3-1B 5′UTR序列组成的组。
51.如权利要求40所述的重组核酸分子，其中所述的第一组DNA序列进一步包含第三非编码序列，该非编码序列在宿主细胞表达时能够抑制FATB基因的内源性表达。
52.如权利要求51所述的重组核酸分子，其中所述FATB序列选自由FATB内含子序列、FATB 3′UTR序列和FATB 5′UTR序列组成的组。
53.如权利要求39所述的重组核酸分子，其进一步包含植物启动子，该启动子可操作地与所述第一组DNA序列连接。
54.如权利要求53所述的重组核酸分子，其中所述的植物启动子是FAD2-1A启动子，7Sα启动子或7Sα′启动子。
55.如权利要求39所述的重组核酸分子，其中所述的第二组DNA序列在表达时能够提高至少两种下述基因的内源性表达，所述基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因所组成的组。
56.如权利要求39所述的重组核酸分子，其中所述的第二组DNA序列在表达时能够提高β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因的内源性表达。
57.如权利要求39所述的重组核酸分子，其中所述的第一组DNA序列和所述的第二组DNA序列排列成单顺反子构型。
58.如权利要求39所述的重组核酸分子，其中所述的第二组DNA序列和第二组DNA序列排列成多顺反子构型。
59.一种重组的核酸分子，其包括：
第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制FAD2基因和FAD3基因的内源性表达，其中所述的第一组DNA序列包含第一非编码序列，该非编码序列表达与FAD2基因的非编码区有至少90％同一性的第一RNA序列；第一反义序列，该反义序列表达能够与第一RNA序列形成双链RNA分子的第一反义RNA序列；第二非编码序列，该第二非编码序列表达与FAD3基因的非编码区有至少90％同一性的第二RNA序列；和第二反义序列，该第二反义序列表达能够与第二RNA序列形成双链RNA分子的第二反义RNA序列；和
第二组DNA序列，该第二组DNA序列在宿主细胞内表达时能够提高至少一种下述基因的内源性表达，所述基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组。
60.如权利要求59所述的重组核酸分子，其中所述FAD2基因的非编码区选自由FAD2-1A内含子序列、FAD2-1A 3′UTR序列和FAD2-1A 5′UTR序列组成的组。
61.如权利要求59所述的重组核酸分子，其中所述FAD3基因的非编码区选自由FAD3-1A内含子序列、FAD3-1A 3′UTR序列和FAD3-1A 5′UTR序列组成的组。
62.如权利要求59所述的重组核酸分子，其中所述FAD3基因的非编码区选自由FAD3-1B内含子序列、FAD3-1B 3′UTR序列和FAD3-1B 5′UTR序列组成的组。
63.如权利要求59所述的重组核酸分子，其中第一组DNA序列表达为RNA转录体，该转录体能够形成单一的双链RNA分子。
64.如权利要求59所述的重组核酸分子，其进一步包含间隔区序列，该间隔区序列将第一和第二反义序列与第一和第二非编码序列分离，以便第一组DNA序列在表达时能够形成单一的双链RNA分子。
65.如权利要求64所述的重组核酸分子，其中所述的间隔区序列是可剪切的内含子序列。
66.如权利要求65所述的重组核酸分子，其中所述的可剪切内含子序列是可剪切的FAD3内含子#5序列或可剪切的PDK内含子序列。
67.如权利要求59所述的重组核酸分子，其中所述的FAD3基因的非编码区是FAD3-1A序列，和其中所述的第一组DNA序列进一步包含第三非编码序列，该第三非编码序列表达与FAD3-1B基因的非编码区有至少90％的同一性的第三RNA序列，和第三反义序列，其表达能够与第三RNA序列形成双链RNA分子的第三反义RNA序列。
68.如权利要求59所述的重组核酸分子，其进一步包含第三非编码序列，该第三非编码序列能够表达与FATB基因的非编码区有至少90％的同一性的第三RNA序列；和第三反义序列，该第三反义序列能够表达与第三RNA序列形成双链RNA分子的第三反义RNA序列。
69.如权利要求68所述的重组核酸分子，其中所述的FATB序列选自由FATB内含子序列、FATB 3′UTR序列和FATB 5′UTR序列组成的组。
70.一种重组核酸分子，其包括：
第一组DNA序列，该序列在宿主细胞内表达时能够抑制FAD2基因和FAD3基因的内源性表达；和
第二组DNA序列，该序列包含第一编码序列，其能够表达CP4EPSPS基因，和第二编码序列，其在表达时能够提高下述基因的内源性表达，所述基因选自由β-酮脂酰基-ACP合酶I基因、β-酮脂酰基-ACP合酶IV基因和δ-9去饱和酶基因组成的组。
71.如权利要求70所述的重组核酸分子，其中所述的第一组DNA序列和所述的第二组DNA序列位于单一的T-DNA区域。
72.如权利要求70所述的重组核酸分子，其中所述的第一组DNA序列和所述的第二编码序列位于第一T-DNA区域，并且所述的第一编码序列位于第二T-DNA区域。
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