CN1631903A - 姬松茸菌胞外多糖生产方法 - Google Patents
姬松茸菌胞外多糖生产方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1631903A CN1631903A CN 200410092883 CN200410092883A CN1631903A CN 1631903 A CN1631903 A CN 1631903A CN 200410092883 CN200410092883 CN 200410092883 CN 200410092883 A CN200410092883 A CN 200410092883A CN 1631903 A CN1631903 A CN 1631903A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- agaricus blazei
- production
- culture medium
- mycelium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001327634 Agaricus blazei Species 0.000 title claims description 40
- 229920002444 Exopolysaccharide Polymers 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 46
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 46
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 46
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 11
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 9
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 9
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008274 jelly Substances 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Inorganic materials [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 VB10.3-0.4 mg Natural products 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 2
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222518 Agaricus Species 0.000 description 1
- 241000965186 Agaricus brasiliensis Species 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 229920000310 Alpha glucan Polymers 0.000 description 1
- 244000303769 Amaranthus cruentus Species 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 235000011437 Amygdalus communis Nutrition 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 229920001231 Polysaccharide peptide Polymers 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 235000019784 crude fat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 1
- 108010022457 polysaccharide peptide Proteins 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 230000031877 prophase Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种姬松茸菌胞外多糖生产方法，该方法优化了生产培养基的配方，改良了发酵与提取工艺，包括菌种制作、种子培养基配制与接种培养、生产培养基接种培养及多糖提取、纯化等步骤，显著提高了该菌所产胞外多糖的质量与纯度，使胞外多糖产量达825.2mg/L，本发明工艺简单，成本低廉，可工业化推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及食用真菌多糖的生产领域，尤其涉及姬松茸菌胞外多糖的发酵培养与提取生产方法。
背景技术
姬松茸又称巴西蘑菇，是一种非常珍稀的药食兼用真菌，学名为A.brasiliensis。姬松茸菌营养丰富，味道鲜美，有浓烈的杏仁香味，每百克姬松茸干品含粗蛋白40-45克，糖类38-45克，纤维质6-8克，粗脂肪3-4克，是含蛋白质和糖类非常丰富的食用菌；另外还含有丰富的维生素，如VB10.3-0.4毫克，VB23.2-3.7毫克，烟酸22-50毫克，麦角甾醇100-200毫克(VD原)。该菌含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸占其总氨基酸的39.7-42.8％。姬松茸的主要活性成份是多糖，并以葡聚糖为主，含β-(1-6)侧链的β-(1-3)主链的葡聚糖。研究结果表明，姬松茸多糖主要通过激活机体免疫系统，增强巨噬细胞的吞噬能力，刺激干扰素的形成，激活机体内自然杀伤细胞，促进免疫球蛋白，白细胞介素的生成，提高淋巴细胞的转化率等发挥其抗肿瘤作用；在基因水平上有较强的抗化学诱变作用；可用于慢性乙型肝炎及恶性肿瘤放化疗后乏力，白细胞减少，免疫功能降低的综合治疗，随着研究的深入，姬松茸菌多糖显著的疗效已逐渐被人们所认识。
目前姬松茸菌多糖生产的原料主要靠人工栽培和野外采集的子实体中提取获得。由于野生姬松茸菌在自然界中数量稀少，加上目前野生环境的破坏和人们对其的过度采集，野外采集的姬松茸菌来源已越来越少，而人工栽培虽然能提供一定数量的姬松茸，但是周期长(一般三个月左右)，占地面积大，产量低而不稳，需要的劳动量大，病虫害多，受季节和气候影响大，而且姬松茸子实体的质量也难以保证，更为严重的是污染大(重金属含量高，农药残留多)。而工业化深层发酵培养方法具有周期短，产量高等优点，国内外利用该法生产多糖的研究早已开展，并申请了多个专利，如公开号CN 1398978A姬松茸的发酵工艺及其多糖肽的生产方法、公开号CN 1339582A姬松茸大规模液体深层发酵工艺、公开号CN1303923A珍稀药用丝状真菌姬松茸液体培养、专利号00135444.2姬松茸面条及姬松茸菌株工业液体发酵生产工艺等，但他们多是采用淀粉类原料如马铃薯淀粉、玉米淀粉或玉米(粉)汁，豆(饼)粉等为主(在培养基中仅有少量的单糖或二糖作为前期诱导碳源)进行液体发酵培养，同时均以提取菌丝体多糖(即细胞壁结构性多糖)或以菌丝体与发酵液的混合物为目标，因此，制取姬松茸菌丝体多糖技术已较为成熟。但姬松茸菌在培养液内的发酵过程中不仅能产生大量的菌丝体，同时在培养液中也分泌积累了胞外多糖，为了获得这部分胞外多糖，我们利用上述淀粉类原料做培养基进行试验发现，经高温灭菌后易结块或结球，致使在形成的姬松茸菌丝体球内含有淀粉颗粒；而且在该液产生的所谓胞外多糖内除真正由姬松茸菌分泌的β-葡聚糖外，还混有部份淀粉多糖(原料)即α-葡聚糖，这造成胞外多糖产量的虚高，质量纯度成了问题。
发明内容
本发明目的是针对以上存在问题，通过对生产培养基的优化和生产及提取工艺的改良，提出一种真正来源于姬松茸菌胞外多糖的优质高产生产方法。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种姬松茸菌胞外多糖的生产方法，包括生产培养基的组分与含量(重量％)及生产的步骤与条件，其中，
生产培养基为：
葡萄糖，蔗糖，红糖或蜂蜜中的一种或二种以上混合物 1-6％；
酵母膏或蛋白胨或与尿素、硫酸铵、KNO3中的一种或二种以上的混合物
0.2-1.0％
K2HPO4 0.1-0.6％
MgSO4 0.05-0.3％
生产步骤，条件为：
(1)菌种制作：将姬松茸菌种接种在PDA斜面培养基上，于25～28℃恒温培养7～10天后，置于4℃左右的冰箱中保存备用；
(2)种子培养基配制与接种培养：液体种子培养基配方(重量％)为葡萄糖2％，酵母膏0.2％、K2HPO4 0.2％、MgSO4 0.05％、pH调整到6，灭菌后将步骤(1)所制菌种活化培养的菌丝体接入，在28～30℃下静止培养5天；
(3)生产培养基接种培养：将步骤(2)培养的菌丝体，在无菌条件下水洗3次，再放入灭菌的内含直径2毫米玻璃珠试管内，在旋涡混合仪内把菌丝体打成碎片，配成菌丝悬浮液后接入生产培养基中，接种量为每升培养液接100毫克湿润菌丝体；在28～30℃下静止培养有利于胞外多糖的合成，经8天左右，约有50％液体形成胶冻状，终止发酵；该生产培养基的优化配方(重量％)为红糖2％、酵母膏0.2％、K2HPO4 0.2％、MgSO4 0.05％，PH为6。
(4)多糖提取及纯化：将步骤(3)胶冻状发酵混合物用超声波处理至菌丝体和胞外多糖完全分开，过滤取出菌丝体后(该菌丝体可按现有技术另行提取胞内多糖)，在滤液中加3倍体积95％乙醇沉淀多糖，于冰箱内静止过夜，离心收集多糖，再用丙酮、乙醚、乙醇交替洗涤多糖后，用蒸馏水溶解多糖，并用超声波助溶，静止2～4小时，离心去除不溶物，再在滤液中加3倍体积95％乙醇沉淀多糖，于冰箱内静止过夜，离心即得姬松茸胞外多糖；
由于是静止培养，气生菌丝生长旺盛，分泌的胞外多糖环绕在该菌丝体的周围，因此以大表面积的浅层培养有利于形成胞外多糖和提高培养基的利用率。
本发明的有益效果是，以单糖或二糖取代淀粉类作为培养基的碳源，采用菌丝碎片悬浮液接种，浅层静止培养促进胞外多糖分泌，不仅使获得的胞外多糖真正来源于姬松茸菌，并提高了胞外多糖的产量，保证了胞外多糖的纯度；同时该工艺简单，合理，有利于工业化应用。
具体实施方式
通过以下实施例将对本发明做进一步说明。
实施例1：
姬松茸菌株：Agaricus brasiliensis 03，该菌株组织分离于巴西巴拉那州库里提巴市菇农种植的姬松茸子实体。将其接种在PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)斜面培养基上，于25～28℃恒温培养7～10天后，置于4℃左右的冰箱中保存备用，该菌种使用前先接种在PDA斜面培养基上活化，即于25～30℃恒温培养7～10天后，把菌丝体(不带培养基)接种在灭菌的含有液体种子培养基的三角烧瓶中静止培养5天，该液体种子培养基的配方为(重量％)：葡萄糖2％，酵母膏0.2％，K2HPO40.2％；MgSO40.05％，余量为水，pH6，培养温度为28～30℃，这时菌丝生长白而旺，用筛网过滤收集该液内菌丝体，在无菌条件下把菌丝体用无菌水洗3次，放入灭菌的试管内(含直径2毫米玻璃珠)，在旋涡混合仪内把菌丝体打成碎片(约1分钟)，再配成菌丝悬浮液接种于生产培养基中，接种量为每升生产培养基接100毫克湿润菌丝体。生产培养基配方为：红糖20克、酵母膏2克、K2HPO42克、MgSO40.5克、余量为水，配制成1000毫升培养液，pH调成6，存入浅底容器中，培养液高度一般控制在3～5公分，再按量接入菌种碎片，在28～30℃静止条件下培养7～10天，当约有50％培养液形成胶冻状时终止发酵；
用JY92-II型超声波细胞破碎仪(宁波新芝生物科技公司)处理该发酵液直到菌丝体和胞外多糖完全分开，用过滤布滤去菌丝体(菌丝体胞内多糖可利用已有技术另行提取)，在滤液中加3倍体积95％乙醇沉淀多糖，于冰箱内静止过夜，离心收集多糖，再用丙酮、乙醚、90％乙醇依此交替洗涤多糖，再用蒸馏水溶解多糖，用超声波助溶，静止2-4小时，离心去除不溶物，再在滤液中加3倍体积95％乙醇沉淀多糖，于冰箱内静止过夜，离心即得姬松茸菌胞外多糖纯品，该胞外多糖提取得率为825.2mg/L。
实施例2：
该例生产培养基的配方为：蔗糖50克、酵母膏与硫酸铵1∶1混合物8克、K2HPO4 5克、MgSO4 2.5克、余量为水，配制成1000毫升培养液，pH调整为6，其余从菌种制备到提取纯化各步骤，条件均同于实施例1。该例胞外多糖提取得率为789.5mg/L。
Claims (5)
1.姬松茸菌胞外多糖生产方法，其特征在于该生产培养基的组分与含量(重量％)及其生产步骤，条件如下：其中，
生产培养基为：
葡萄糖，蔗糖，红糖或蜂蜜中的一种或二种以上混合物 1-6％；
酵母膏或蛋白胨或与尿素、硫酸铵、KNO3中的一种或二种以上的混合物
0.2-1.0％
K2HPO4 0.1-0.6％
MgSO4 0.05-0.3％
生产步骤，条件为：
(1)菌种制作：将姬松茸菌种接种在PDA斜面培养基上，于25～28℃恒温培养7～10天后，置于4℃左右的冰箱中保存备用；
(2)种子培养基配制与接种培养：液体种子培养基配方(重量％)为葡萄糖2％，酵母膏0.2％、K2HPO4 0.2％、MgSO4 0.05％、pH调整到6，灭菌后将步骤(1)所制菌种活化培养后的菌丝体接入，在28～30℃下静止培养5天；
(3)生产培养基接种培养：将步骤(2)培养的菌丝体经消毒水洗，打碎配成菌丝悬浮液后，按每升培养液接100毫克湿润菌丝体计，接入上述生产培养基中，在28～30℃下静止培养8天，约有50％培养液呈胶冻状后终止发酵；
(4)多糖提取及纯化：用超声波处理步骤(3)发酵液直到菌丝体和胞外多糖完全分开，过滤去除菌丝体，在滤液中加3倍体积95％乙醇沉淀多糖，于冰箱内静止过夜，离心收集多糖后，用丙酮、乙醚、乙醇交替洗涤多糖，再用蒸馏水溶解多糖，超声波助溶，静止2～4小时，离心去除不溶物，再在滤液中加3倍体积95％乙醇沉淀多糖，于冰箱内静止过夜，离心得姬松茸菌胞外多糖纯品。
2.根据权利要求1所述姬松茸菌胞外多糖生产方法，其特征在于所述生产培养基的组分与含量(重量％)为红糖2％、酵母膏0.2％、K2HPO4 0.2％、MgSO40.05％。
3.根据权利要求1所述姬松茸菌胞外多糖生产方法，其特征在于所述生产液接种采用菌丝碎片悬浮液。
4.根据权利要求1所述姬松茸菌胞外多糖生产方法，其特征在于所述生产液培养方法采用浅层液体静止培养。
5.根据权利要求1所述姬松茸菌胞外多糖生产方法，其特征在于所述生产液发酵后其菌丝体和胞外多糖分离采用超声波分离法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410092883 CN1286854C (zh) | 2004-11-23 | 2004-11-23 | 姬松茸菌胞外多糖生产方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410092883 CN1286854C (zh) | 2004-11-23 | 2004-11-23 | 姬松茸菌胞外多糖生产方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1631903A true CN1631903A (zh) | 2005-06-29 |
| CN1286854C CN1286854C (zh) | 2006-11-29 |
Family
ID=34847705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410092883 Expired - Fee Related CN1286854C (zh) | 2004-11-23 | 2004-11-23 | 姬松茸菌胞外多糖生产方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1286854C (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101831471B (zh) * | 2010-05-12 | 2012-10-17 | 浙江省农业科学院 | 利用食用、药用真菌发酵黄浆水生产多糖的方法 |
| CN102835624A (zh) * | 2012-09-21 | 2012-12-26 | 湖北梨花湖食品有限公司 | 一种灵芝多糖面条及其生产方法 |
-
2004
- 2004-11-23 CN CN 200410092883 patent/CN1286854C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101831471B (zh) * | 2010-05-12 | 2012-10-17 | 浙江省农业科学院 | 利用食用、药用真菌发酵黄浆水生产多糖的方法 |
| CN102835624A (zh) * | 2012-09-21 | 2012-12-26 | 湖北梨花湖食品有限公司 | 一种灵芝多糖面条及其生产方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1286854C (zh) | 2006-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106916861B (zh) | 一种同时生产木耳多糖和黑色素的方法 | |
| CN106434373A (zh) | 一种绣球菌的高密度发酵培养基配方及其医药级葡聚糖制备方法 | |
| CN111334440B (zh) | 米根霉ch5及其在提取紫芝多糖中的应用 | |
| CN114196578B (zh) | 棘孢曲霉nm-11-6及其在柠檬精油提取中的应用 | |
| CN111543254A (zh) | 一种桑黄菌丝体的培养方法、饮品及其应用 | |
| CN105647755B (zh) | 一种富硒灵芝桑椹保健冰酒 | |
| CN1036044C (zh) | 灵芝发酵保健饮料的生产方法 | |
| CN110551636B (zh) | 一种紫红曲霉my-21菌株及其应用 | |
| CN1220769C (zh) | 鸡枞大规模液体深层发酵生产工艺 | |
| CN101057659B (zh) | 黑木耳降脂产品的制备方法 | |
| CN105624232B (zh) | 提高猴头菌发酵多糖的方法 | |
| CN1055966C (zh) | 深层发酵法生产灵芝保健饮料 | |
| CN1286854C (zh) | 姬松茸菌胞外多糖生产方法 | |
| CN110592161A (zh) | 多糖的制备方法、保健口服液及制备方法 | |
| KR100892355B1 (ko) | 치마버섯 균사체의 반연속식 액상배양을 통한 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸 대량생산 방법 | |
| CN107686818A (zh) | 一种灰树花多糖产生菌及灰树花多糖制备方法 | |
| CN1278598C (zh) | 金耳酵母状孢子发酵生产食品和食品添加剂的方法 | |
| CN109731015B (zh) | 一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂及制备方法 | |
| CN110607332B (zh) | 一种提高功能性红曲Monacolin K含量的培养基及发酵方法 | |
| CN116254306A (zh) | 一种发酵高产银耳多糖的方法 | |
| CN114667890A (zh) | 一种松茸子实体分离培育菌种和菌丝体的方法，以及松茸菌丝体粉和浓缩液的制备方法 | |
| CN111139277A (zh) | 粗多糖及其制备工艺、保健口服液及其制备方法 | |
| CN1187438C (zh) | 高产壳聚糖酶的真菌菌株及其用途 | |
| CN114190224B (zh) | 一种提高金针菇赖氨酸含量的方法 | |
| CN109777847B (zh) | 体细胞亲和灵芝菌株对共发酵生产强抗氧化活性多糖的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20061129 Termination date: 20101123 |