CN1616057A - 一种鱼金冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鱼金冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于用微波萃取法从中药鱼腥草、金银花中提取得到鱼腥草、金银花的有效成分，其中鱼腥草、金银花挥发油经HP－β－环糊精包合，提高了挥发油的稳定性、溶解度，提取物用大孔树脂进行分离纯化，挥发油、提取物与药用辅料混合，制备成冻干粉针剂。药理实验结果表明，本发明的鱼金冻干粉针剂，具有更强的药理作用。
Description
所属技术领域
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种鱼金冻干粉针剂及其制备方法。
技术背景
鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜Houttuyniacordata Thunb的干燥地上部分，味辛、性凉，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等功效，用于肺痈吐脓，痰热喘咳，热痢，热淋，痈肿疮毒。金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japocina thumb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Lonicera confuse DC.或花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花，又名忍冬、双花，味甘、寒，为临床常用中药，具清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热。鱼金注射液(WS3-B-3263)由鱼腥草和金银花两味组成，具清热解毒功效，用于热毒雍盛而致的上呼吸道感染、支气管肺炎、病毒性肺炎、化脓性疾病、妇科炎症与手术后发热。该注射液疗效确切，抗菌范围广，抗病毒能力强，毒副反应小，在临床中应用广泛。
鱼腥草的主要有效成分为挥发油，金银花的主要有效成分为挥发油和绿原酸，鱼金注射液(WS3-B-3263)采用水蒸气蒸馏法提取有效成分，该方法未能保留金银花中的重要抗菌活性成分绿原酸，同时由于挥发油类成分易氧化、性质不稳定，对注射液的稳定性有一定的影响，鱼腥草挥发油由于含癸酰乙醛具有强烈鱼腥气味，使其注射液制剂和应用受到一定限制。近年来报道，药剂学上新型辅料HP-β-环糊精能与多种化合物形成包合物，可增强药物的稳定性，提高溶解度及溶出度，降低药物挥发性，掩盖不良气味。
专利(申请号02139416)“一种鱼金制剂及其制备方法”采用蒸馏法提取物和水醇法提取物制备制剂，该专利采用常规的蒸馏法提取鱼腥草、金银花挥发油类成分，提取时间长，温度高，得率较低，该专利采用水醇法提取水溶性物质，所得提取物含杂质多，绿原酸类成分损失大，制备注射制剂比较困难。
发明内容
基于上述原因，本发明采用微波萃取法提取鱼腥草、金银花中的挥发油成分，用HP-β-环糊精进行包合，药渣再用微波萃取法提取有效成分，并用大孔树脂进行分离纯化，包合物、提取物与药用辅料混合制备成冻干粉针剂。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法：
(1)取鱼腥草、金银花粉碎，过20-40目筛，放入微波萃取器中，加入2-3倍量己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油，备用；
(2)药渣加10-15倍量水，浸润后继续用微波萃取，设定其中微波功率500W，频率2450MHz，提取温度100℃，辐射时间30min，提取液过滤，浓缩至药液：药材为1∶1，滤液上已处理好的大孔吸附树脂柱吸附，用2-4倍柱体积的水洗脱后，再用3-5倍柱体积40％-50％乙醇水溶液洗脱，取40％-50％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到提取物。
(3)取鱼腥草、金银花挥发油，采用饱和水溶液法用HP-β-环糊精进行包合：HP-β-环糊精，以20ml/g-30ml/g的比例加水，加热溶解，冷至室温，按照鱼腥草、金银花萃取物：HP-β-环糊精＝1∶8-12的比例(v/g)加入鱼腥草、金银花萃取物，搅拌时间120-180分钟，取出冷藏20小时，抽滤，滤渣常温下干燥36小时，得到鱼腥草、金银花挥发油包合物；
(4)本发明的制剂的处方为：
挥发油包合物27-39重量份，提取物4-4.5重量份，药用辅料62-86重量份；
(4)取上述包合物、提取物和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，过滤，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
微波萃取是利用微波能来提高萃取率的一种最新发展起来的新技术。它的原理是在微波场中，吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对差的萃取剂中；微波萃取具有设备简单、适用范围广、萃取效率高、重现性好、节省时间、节省试剂、污染小等特点。
本发明采用微波提取法提取药物的有效成分，选择性好，提取效率高，所得到的提取物杂质少，简化了工艺步骤，制得的冻干粉有效成分含量高且具有较好的溶解性、稳定性。药理实验表明本发明的鱼金冻干粉针剂具有更好的药理作用。
二.制剂的检测分析
1.制剂中甲基正壬酮的测定：
1.1实验药物：本发明鱼金冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)市售鱼金注射液(西安黄河制药有限公司)
1.2实验方法：将本发明冻干粉针剂用注射用水溶解成与市售鱼金注射液含生药量相同的溶液，按照鱼金注射液(标准号WS3-B-3263)中的检测分析项的检测方法采用气相色谱法进行检测分析。结果见表1：
表1 各组制剂的甲基正壬酮含量比较
| 组别 | 市售鱼金注射液 | 本发明冻干粉针剂 |
| 甲基正壬酮(ug/ml) | 26.5 | 37.2 |
2.制剂中绿原酸的含量测定：
2.1仪器与试药：Waters高效液相色谱仪器(600泵，2487检测器)，Millinium32色谱处理软件；样品1：本发明鱼金冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)，样品2：市售鱼金注射液(西安黄河制药有限公司)，样品3(按专利申请号为02139416的方法制备)，绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；
2.2实验方法：取样品，参照《中国药典》2000版一部金银花项下绿原酸的含量测定方法进行测定，结果见表2：
表2各组制剂的绿原酸含量比较
| 组别 | 样品1 | 样品2 | 样品3 |
| 绿原酸(mg/ml) | 23.8 | / | 14.3 |
/为不含绿原酸
结论：通过上述检测分析实验我们可以得知本发明鱼金冻干粉针剂的有效成分绿原酸含量明显提高，充分说明本发明的工艺比原工艺有显著的提高，有实际意义。
三.提取物中绿原酸的检测分析
1.实验药物：提取物1(按本发明制备工艺制备，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
提取物2(按专利申请号为02139416的提取方法制备)
2.实验方法：取提取物，参照《中国药典》2000版一部金银花项下绿原酸的含量测定方法进行测定，结果见表3：
表3各组提取物的绿原酸含量比较
| 组别 | 提取物1 | 提取物2 |
| 绿原酸百分含量(％) | 60.2 | 28.9 |
| 绿原酸提取率(％) | 1.21 | 0.43 |
结论：通过上述检测分析实验我们可以得知本发明提取物的的有效成分绿原酸含量和纯度都明显提高，充分说明本发明有实际意义。
四.微波萃取法和水蒸气蒸馏法提取工艺的比较
实验方法：取过30目筛鱼腥草40g，金银花20g置敞口容器中，加入150ml己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450W，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油；另取相同量鱼腥草、金银花，加9000ml水，浸泡2小时后用水蒸气蒸馏法提取挥发油，结果见表5
表5 微波萃取法和水蒸气蒸馏法提取工艺的比较
| 微波萃取法 | 水蒸气蒸馏法 | |
| 温度 | 40℃ | 100℃ |
| 时间 | 80s | 6h |
| 挥发油得量 | 0.51ml | 0.042ml |
| 挥发油得率 | 0.85％ | 0.07％ |
由以上对比实验可知：微波萃取法与水蒸气蒸馏法比较，具有提取温度低，提取时间短，成本低，提取率高的特点，充分说明本发明具有实际意义。
五.药理实施例
抑菌作用研究
1.实验药物：本发明鱼金冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)市售鱼金注射液(西安黄河制药有限公司)。
2.实验菌种：金黄葡萄球菌，大肠杆菌，枯草杆菌，青霉菌，黑曲霉，啤酒酵母菌上述菌种均由北京大学微生物教研室提供。
3.实验方法：滤纸片法测定抑菌作用：取直径6mm的滤纸片，放入药物中浸泡16h，120℃下湿热灭菌备用.将上述供试菌液各取0.5ml与相应固体培养基，在超净工作台内制成含菌平板，取含浸出汁的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴5片，每菌做3次重复，细菌置37℃、霉菌及酵母菌置27℃的生化培养箱内培养48h，测定24h、48h后滤纸片的抑菌圈大小，比较抑菌效果见表6：
最低抑菌浓度(Mic)测定：配制上述菌种分别所需的培养基，准确量取9ml分装试管，准确加入8％、4％、2％、1％、0.5％、0.25％药物系列浓度溶液1ml，配成系列培养基，120℃高压湿热灭菌，冷藏后每系列接种一个菌种，每系列做3次重复，细菌置37℃、霉菌及酵母菌置27℃的生化培养箱内培养48h，观察菌种生长情况，以完全没有菌生长的最低浓度为最低抑菌浓度，见表7：
表6 对供试菌种的抑制效果
| 供试菌种 | 市售鱼金注射液 | 本发明冻干粉针剂 |
| 抑菌直径(mm)24h 48h | 抑菌直径(mm)24h 48h | |
| 金黄葡萄球菌 | 9.5 9.5 | 9.5 9.5 |
| 大肠杆菌 | 10.1 10.4 | 11.2 11.5 |
| 枯草杆菌 | 5.5 5.5 | 6.5 6.5 |
| 青霉菌 | 6.5 5.8 | 7.5 7.0 |
| 黑曲霉菌 | 5.9 4.8 | 6.8 5.5 |
| 酵母菌 | 6.5 6.2 | 8.0 7.5 |
表7 最低抑制浓度
| 供试菌种 | 市售鱼腥草注射液最低抑制浓度 | 本发明冻干粉针剂最低抑制浓度 |
| 金黄葡萄球菌 | 0.5％ | 0.25％ |
| 大肠杆菌 | 1％ | 0.5％ |
| 枯草杆菌 | 0.5％ | 0.25％ |
| 青霉菌 | 4％ | 2％ |
| 黑曲霉菌 | 8％ | 4％ |
| 酵母菌 | 8％ | 4％ |
结论：通过上述药理实验表明，本发明的鱼金冻干粉针剂与市售鱼金注射液比较具有更好的药理作用。
六.制备实施例
实施例1
(1)取鱼腥草4000g、金银花2000g粉碎，过30目筛，放入微波萃取器中，加入2.5倍量己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油，备用；
(2)药渣加10倍量水，浸润后继续用微波萃取，设定其中微波功率500W，频率2450MHz，提取温度100℃，辐射时间30min，提取液过滤，浓缩至药液∶药材为1∶1，上已处理好的D101大孔吸附树脂柱吸附，用3倍柱体积的水洗脱后，再用4倍柱体积45％乙醇水溶液洗脱，取45％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到提取物40g。
(3)取鱼腥草、金银花挥发油，采用饱和水溶液法用HP-β-环糊精进行包合：HP-β-环糊精，以20ml/g的比例加水，加热溶解，冷至室温，按照鱼腥草、金银花萃取物∶HP-β-环糊精＝1∶8的比例(v/g)加入鱼腥草、金银花萃取物，搅拌时间120分钟，取出冷藏20小时，抽滤，滤渣常温下干燥36小时，得到鱼腥草、金银花包合物270g；
(4)本发明的制剂的处方为：
包合物270g，提取物40g，甘露醇为620g；
(5)取上述包合物、提取物和药用辅料混合，加注射用水溶解，加活性炭吸附，过滤，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-7.0，0.22um微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
实施例2
(1)取鱼腥草4000g、金银花2000g粉碎，过20目筛，放入微波萃取器中，加入2倍量己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油，备用；
(2)药渣加15倍量水，浸润后继续用微波萃取，设定其中微波功率500W，频率2450MHz，提取温度100℃，辐射时间30min，提取液过滤，浓缩至药液∶药材为1∶1，上已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用2倍柱体积的水洗脱后，再用3倍柱体积40％乙醇水溶液洗脱，取40％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到提取物42g。
(3)取鱼腥草、金银花挥发油，采用饱和水溶液法用HP-β-环糊精进行包合：HP-β-环糊精，以30ml/g的比例加水，加热溶解，冷至室温，按照鱼腥草、金银花萃取物∶HP-β-环糊精＝1∶12的比例(v/g)加入鱼腥草、金银花萃取物，搅拌时间180分钟，取出冷藏20小时，抽滤，滤渣常温下干燥36小时，得到鱼腥草、金银花包合物380g；
(4)本发明的制剂的处方为：
包合物380g，提取物42g，乳糖为840g；
(5)取上述包合物、提取物和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，过滤，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-7.0，0.22um微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
实施例3
(1)取鱼腥草380g、金银花190g粉碎，过40目筛，放入微波萃取器中，加入2-3倍量己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油，备用；
(2)药渣加12倍量水，浸润后继续用微波萃取，设定其中微波功率500W，频率2450MHz，提取温度100℃，辐射时间30min，提取液过滤，浓缩至药液∶药材为1∶1，上已处理好的D101大孔吸附树脂柱吸附，用2倍柱体积的水洗脱后，再用5倍柱体积50％乙醇水溶液洗脱，取50％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到提取物4.3g。
(3)取鱼腥草、金银花挥发油，采用饱和水溶液法用HP-β-环糊精进行包合：HP-β-环糊精，以25ml/g的比例加水，加热溶解，冷至室温，按照鱼腥草、金银花萃取物∶HP-β-环糊精＝1∶10的比例(v/g)加入鱼腥草、金银花萃取物，搅拌时间140分钟，取出冷藏20小时，抽滤，滤渣常温下干燥36小时，得到鱼腥草、金银花包合物30g；
(4)本发明的制剂的处方为：
包合物30g，提取物4.3g，蔗糖为69g；
(5)取上述包合物、提取物和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，过滤，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-7.0，0.22um微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得50支。
实施例4
(1)取鱼腥草420g、金银花210g粉碎，过30目筛，放入微波萃取器中，加入3倍量己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油，备用；
(2)药渣加12倍量水，浸润后继续用微波萃取，设定其中微波功率500W，频率2450MHz，提取温度100℃，辐射时间30min，提取液过滤，浓缩至药液∶药材为1∶1，上已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用3倍柱体积的水洗脱后，再用5倍柱体积45％乙醇水溶液洗脱，取45％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到提取物4.5g。
(3)取鱼腥草、金银花挥发油，采用饱和水溶液法用HP-β-环糊精进行包合：HP-β-环糊精，以20ml/g的比例加水，加热溶解，冷至室温，按照鱼腥草、金银花萃取物∶HP-β-环糊精＝1∶10的比例(v/g)加入鱼腥草、金银花萃取物，搅拌时间160分钟，取出冷藏20小时，抽滤，滤渣常温下干燥36小时，得到鱼腥草、金银花包合物39g；
(4)本发明的制剂的处方为：
包合物39g，提取物4.5g，甘露醇为86g；
(5)取上述包合物、提取物和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，过滤，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-7.0，0.22um微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得50支。
Claims (8)
1.一种鱼金冻干粉针剂，其特征在于它是由鱼腥草、金银花挥发油HP-β-CD包合物27-39重量份、鱼腥草、金银花提取物4-4.5重量份和药用辅料62-86重量份制备而成。其特征还在于药物有效成分采用微波萃取法进行提取。
2.根据权利要求1所述的一种鱼腥草冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤：
(1)取鱼腥草、金银花粉碎，过20-40目筛，放入敞口容器中，加入2-3倍量己烷，充分浸润，进行微波辐射萃取，设定其中微波功率625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s，滤取己烷萃取物，真空蒸发，得鱼腥草、金银花挥发油，备用；
(2)药渣加10-15倍量水，浸润后继续用微波萃取，设定其中微波功率500W，频率2450MHz，提取温度100℃，辐射时间30min，提取液过滤，浓缩至药液：药材为1∶1，上已处理好的大孔吸附树脂柱吸附，用2-4倍柱体积的水洗脱后，再用3-5倍柱体积40％-50％乙醇水溶液洗脱，取40％-50％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到提取物。
(3)取鱼腥草、金银花挥发油，采用饱和水溶液法用HP-β-环糊精进行包合：HP-β-环糊精，以20ml/g-30ml/g的比例加水，加热溶解，冷至室温，按照鱼腥草、金银花萃取物：HP-β-环糊精＝1∶8-12的比例(v/g)加入鱼腥草、金银花萃取物，搅拌时间120-180分钟，取出冷藏20小时，抽滤，滤渣常温下干燥36小时，得到鱼腥草、金银花包合物；
(4)取上述包合物、提取物和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，过滤，加注射用水至规定量，调节pH值至5.0-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
3.根据权利要求1，2所述的药用辅料为甘露醇或乳糖或蔗糖的一种。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于进行微波辐射萃取鱼腥草、金银花挥发油时微波功率为625W，频率2450MHz，提取温度40℃，辐射时间80s。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于进行微波辐射萃取鱼腥草、金银花水提物时微波功率为500W，频率2450MHz，提取温100℃，辐射时间30min
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂为非极性或弱极性。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂优选为AB-8或D101型。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂洗脱的乙醇浓度优选为44-46％。
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| CN 200410080243 CN1616057A (zh) | 2004-09-28 | 2004-09-28 | 一种鱼金冻干粉针剂及其制备方法 |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011040936A1 (en) * | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Ethicon, Inc. | Antimicrobial/antibacterial medical devices coated with traditional chinese medicines |
| CN104013715A (zh) * | 2014-06-03 | 2014-09-03 | 赣州百灵动物药业有限公司 | 一种鱼金注射液的制备方法 |
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2004
- 2004-09-28 CN CN 200410080243 patent/CN1616057A/zh active Pending
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| EP3409302A1 (en) * | 2009-09-29 | 2018-12-05 | Ethicon, Inc. | Antimicrobial/antibacterial medical devices coated with traditional chinese medicines |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |