CN1596313B - 人源化的胶原抗体及相关方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种经接枝的抗体或其功能性片断，其包括在重链互补决定区(CDR)的一个或多个CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR，其中经接枝的抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。本发明还提供一种使用对隐蔽胶原表位具有特异结合活性的抗体的方法，包括抑制血管生成、肿瘤生长及转移的方法。

Description

人源化的胶原抗体及相关方法
技术领域
本发明一般性涉及免疫学且更具体而言涉及人源化的抗体及其用途。
背景技术
细胞外基质(ECM)在正常和病理过程的调控中起主要作用。在ECM中所发现的表达最多的成份是胶原。已知三螺旋胶原对蛋白水解分裂作用抵抗力很强，除非通过基质金属蛋白酶(MMP)家族酶的成员进行该作用。
血管生成和肿瘤生长取决于细胞与细胞外基质之间的相互作用。血管生成和肿瘤侵袭期间，皮内细胞和肿瘤细胞都经蛋白水解重塑其细胞外的微环境。然后这些侵袭性细胞与此新近重塑的细胞外基质相互作用，接着进行迁移和侵袭。所以，血管周围的基底膜主要成份是IV型胶原。另外，I型胶原是细胞间基质的主要成份。
癌症进展主要的不利影响之一是在原发性肿瘤部位之外的转移。此转移常常需要更积极的治疗，并且转移一旦发生，那么癌症患者生存的预后急剧下降。
所有实性肿瘤的生长都需要新的血管生长以用于肿瘤的连续扩张，尤其是最小尺寸之外的肿瘤连续扩张。因为肿瘤生长需要血管生成，所以抑制血管生成是抑制肿瘤生长的一种途径。因此，希望鉴别以血管生成的脉管系统为目标的分子。尤其引人注意的瞄准血管生成脉管系统的分子是能与血管生成脉管系统特异结合的抗体。然而，由于大多数抗体在非人类动物(例如小鼠)中发展出来，因此这些抗体经常具有限制其对人用治疗效能的不良致免疫活性。
一种克服非人类抗体不良特性的途径是通过使用经剪接的人类抗体框架区序列和提供结合特异性的结合结构域一起来使抗体人源化。然而，这些被成为互补决定区(CDR)的结合结构域移植人类框架中经常导致结合亲合力的丧失。
因此，需要鉴别对血管生成脉管系统具有特异性的抗体并需要人源化和优化用于治疗目的的抗体。以下发明满足了此需要并且也提供了相关优势。
发明内容
本发明提供经接枝的抗体或其功能性片断，包括在重链互补决定区(CDR)的一个或多个CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR，其中经接枝的抗体或其功能性片断具有对隐蔽胶原表位的特异结合活性。本发明也提供
使用对隐蔽胶原表位具有特异结合活性的抗体的方法，包括抑制血管生成、肿瘤生长及转移的方法。
本发明提供了一种经接枝的抗体或其功能性片段，其包括以下互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ IDNO：22；和SEQ ID NO：24；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一个氨基酸替换，而且，该经接枝的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了一种抗体或其功能性片段，其包括六个CDR，其中，所述的CDR选自引证如下的CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；SEQ ID NO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQID NO：44的氨基酸6-10；SEQ ID NO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ ID NO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ ID NO：52；SEQ ID NO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ ID NO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ IDNO：61；SEQ ID NO：62；SEQ ID NO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ IDNO：66；SEQ ID NO：67；SEQ ID NO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ IDNO：71；SEQ ID NO：72；SEQ ID NO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ IDNO：76；SEQ ID NO：77；SEQ ID NO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ IDNO：81；SEQ ID NO：82；SEQ ID NO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ IDNO：86；SEQ ID NO：154；SEQ ID NO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ IDNO：158；SEQ ID NO：159；SEQ ID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；上述的抗体或功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。其中所述的抗体或功能片段不包括以下6个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ IDNO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；及SEQ ID NO：24。
本发明还提供了一种抗体或其功能性片段，其包括由第一、第二和第三CDR组成的重链多肽，所述的第一CDR选自：SEQ ID NO：26；SEQ ID NO：43；SEQ IDNO：44；SEQ ID NO：45；SEQ ID NO：46；SEQ ID NO：47，所述的第二CDR选自：SEQ ID NOS：28，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：49，SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：51，SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：54，或SEQ ID NO：55，所述的第三CDR选自：SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：56，SEQ ID NO：57，SEQ ID NO：58，SEQ IDNO：59，SEQ ID NO：60，SEQ ID NO：61，SEQ ID NO：62，SEQ ID NO：63，或SEQ IDNO：64，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了一种抗体或其功能性片段，其包括由第一、第二和第三CDR组成的轻链多肽，所述的第一CDR选自：SEQ ID NO：20，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，或76，所述的第二CDR由SEQ ID NO：22组成，所述的第三CDR选自：SEQ ID NOS：24，77，78，79，80，81，82，83，84，85，或86，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明进一步提供了编码上述任何一抗体的核苷酸。
本发明还提供了包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQ ID NO：28；SEQID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24的抗体或其功能性片段在制备用于瞄准血管生成脉管系统的药物中的应用，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明进一步提供抗体或其功能性片段在制备用于瞄准血管生成脉管系统的药物中的应用，其中所述的抗体或功能性片段包括选自于引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQID NO：22；SEQ ID NO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ ID NO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ ID NO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQID NO：52；SEQ ID NO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ IDNO：57；SEQ ID NO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ ID NO：61；SEQ IDNO：62；SEQ ID NO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ IDNO：67；SEQ ID NO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ ID NO：71；SEQ IDNO：72；SEQ ID NO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ IDNO：77；SEQ ID NO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ IDNO：82；SEQ ID NO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ IDNO：154；SEQ ID NO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQID NO：159；SEQ ID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，而且其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ IDNO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制血管生成的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQ IDNO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制血管生成的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选择于以下组的六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；SEQID NO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ IDNO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ ID NO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ ID NO：52；SEQID NO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ IDNO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ ID NO：61；SEQ ID NO：62；SEQ IDNO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ ID NO：67；SEQ IDNO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ ID NO：71；SEQ ID NO：72；SEQ IDNO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ ID NO：77；SEQ IDNO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ ID NO：82；SEQ IDNO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ ID NO：154；SEQ IDNO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQ ID NO：159；SEQID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于瞄准肿瘤的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQ IDNO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于瞄准肿瘤的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；SEQ IDNO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ ID NO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ IDNO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ ID NO：52；SEQ IDNO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ IDNO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ ID NO：61；SEQ ID NO：62；SEQ IDNO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ ID NO：67；SEQ IDNO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ ID NO：71；SEQ ID NO：72；SEQ IDNO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ ID NO：77；SEQ IDNO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ ID NO：82；SEQ IDNO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ ID NO：154；SEQ IDNO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQ ID NO：159；SEQID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；SEQID NO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ IDNO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ ID NO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ ID NO：52；SEQID NO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ IDNO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ ID NO：61；SEQ ID NO：62；SEQ IDNO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ ID NO：67；SEQ IDNO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ ID NO：71；SEQ ID NO：72；SEQ IDNO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ ID NO：77；SEQ IDNO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ ID NO：82；SEQ IDNO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ ID NO：154；SEQ IDNO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQ ID NO：159；SEQID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于探测血管生成的脉管系统的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ IDNO：24；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于探测血管生成的脉管系统的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ IDNO：22；SEQ ID NO：24；ID NO：43；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ ID NO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ IDNO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ ID NO：52；SEQ IDNO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ IDNO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ ID NO：61；SEQ ID NO：62；SEQ IDNO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ ID NO：67；SEQ IDNO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ ID NO：71；SEQ ID NO：72；SEQ IDNO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ ID NO：77；SEQ IDNO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ ID NO：82；SEQ IDNO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ ID NO：154；SEQ IDNO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQ ID NO：159；SEQID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制转移的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：26；SEQ IDNO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制转移的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；SEQ IDNO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ ID NO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQ IDNO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ ID NO：52；SEQ IDNO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ IDNO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ ID NO：61；SEQ ID NO：62；SEQ IDNO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ ID NO：67；SEQ IDNO：68；SEQ ID NO：69；SEQ ID NO：70；SEQ ID NO：71；SEQ ID NO：72；SEQ IDNO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ ID NO：77；SEQ IDNO：78；SEQ ID NO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ ID NO：82；SEQ IDNO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ ID NO：154；SEQ IDNO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQ ID NO：159；SEQID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ ID NO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；和SEQ ID NO：24。
本发明还提供了一种经接枝的抗体或其功能性片段，其包括以下的互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQID NO：34；和SEQ ID NO：36；其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的经接枝的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了一种抗体或其功能性片段，其包括六个CDR，其中所述的CDR选自：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ IDNO：34；SEQ ID NO：36；SEQ ID NO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ IDNO：90；SEQ ID NO：91；SEQ ID NO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ IDNO：95；SEQ ID NO：96；SEQ ID NO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ IDNO：100；SEQ ID NO：101；SEQ ID NO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQID NO：105；SEQ ID NO：106；SEQ ID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ IDNO：124；SEQ ID NO：125；SEQ ID NO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQID NO：128；SEQ ID NO：129；SEQ ID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ IDNO：137；SEQ ID NO：138；SEQ ID NO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQID NO：142；SEQ ID NO：143；SEQ ID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ IDNO：151；SEQ ID NO：152；SEQ ID NO：153；或SEQ ID NO：358；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36。
本发明提供了一种抗体或其功能性片段，其包括由第一，第二，及第三CDR组成的一个重链多肽，所述的第一CDR选自SEQ ID NOS：38；87；88；89；90；91；147；或148；所述的第二CDR选自SEQ ID NOS：40，92，93，94，95或144；所述的第三CDR选自SEQ ID NOS：42，96，97，98，99，100，101，102，103，104，105，106，107，108或109，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了一种抗体或其功能性片段，其包括由第一，第二，及第三CDR组成的一个轻链多肽，所述的第一CDR选自SEQ ID NOS：32，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，146，149，150，151，152或153；所述的第二CDR选自SEQ ID NOS：34，120，121，122，123，124或125；所述的第三CDR选自SEQ IDNOS：36，126，127，128，129，130，131，132，133，134，135，136，137，138，139，140，141，142，143，145或358，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于瞄准血管生成脉管系统的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于瞄准血管生成脉管系统的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ IDNO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ IDNO：36；SEQ ID NO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ ID NO：90；SEQ IDNO：91；SEQ ID NO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ IDNO：96；SEQ ID NO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ IDNO：101；SEQ ID NO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQID NO：106；SEQ ID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ IDNO：125；SEQ ID NO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQID NO：129；SEQ ID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ ID NO：137；SEQ IDNO：138；SEQ ID NO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQ ID NO：142；SEQID NO：143；SEQ ID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ IDNO：152；SEQ ID NO：153；或SEQ ID NO：358；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制血管生成的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQ IDNO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制血管生成的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ ID NO：36；SEQID NO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ ID NO：90；SEQ ID NO：91；SEQ IDNO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ ID NO：96；SEQ IDNO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ ID NO：101；SEQ IDNO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQ ID NO：106；SEQID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ ID NO：125；SEQ IDNO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQ ID NO：129；SEQID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ ID NO：137；SEQ ID NO：138；SEQ IDNO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQ ID NO：142；SEQ ID NO：143；SEQID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ ID NO：152；SEQ IDNO：153；或SEQ ID NO：358；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ IDNO：34；和SEQ ID NO：36。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于瞄准肿瘤的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQ IDNO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于瞄准肿瘤的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ ID NO：36；SEQ IDNO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ ID NO：90；SEQ ID NO：91；SEQ IDNO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ ID NO：96；SEQ IDNO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ ID NO：101；SEQ IDNO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQ ID NO：106；SEQID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ ID NO：125；SEQ IDNO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQ ID NO：129；SEQID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ ID NO：137；SEQ ID NO：138；SEQ IDNO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQ ID NO：142；SEQ ID NO：143；SEQID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ ID NO：152；SEQ IDNO：153；或SEQ ID NO：358；所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQID NO：36。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ ID NO：36；SEQID NO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ ID NO：90；SEQ ID NO：91；SEQ IDNO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ ID NO：96；SEQ IDNO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ ID NO：101；SEQ IDNO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQ ID NO：106；SEQID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ ID NO：125；SEQ IDNO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQ ID NO：129；SEQID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ ID NO：137；SEQ ID NO：138；SEQ IDNO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQ ID NO：142；SEQ ID NO：143；SEQID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ ID NO：152；SEQ IDNO：153；或SEQ ID NO：358；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于探测血管生成的脉管系统的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ IDNO：36，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明还提供了抗体或其功能性片段在制备用于探测血管生成的脉管系统的药物中的应用，其中所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ IDNO：36；SEQ ID NO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ ID NO：90；SEQ IDNO：91；SEQ ID NO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ IDNO：96；SEQ ID NO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ IDNO：101；SEQ ID NO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQID NO：106；SEQ ID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ IDNO：125；SEQ ID NO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQID NO：129；SEQ ID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ ID NO：137；SEQ IDNO：138；SEQ ID NO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQ ID NO：142；SEQID NO：143；SEQ ID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ IDNO：152；SEQ ID NO：153；或SEQ ID NO：358；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括互补决定区(CDR)：SEQ ID NO：38；SEQ IDNO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36，其中，至少有一个所述的CDR具有至少一种氨基酸替代，其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍。
本发明提供了抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，所述抗体或其功能性片段包括选自引证如下的六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ ID NO：36；SEQ IDNO：87；SEQ ID NO：88；SEQ ID NO：89；SEQ ID NO：90；SEQ ID NO：91；SEQ IDNO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ ID NO：96；SEQ IDNO：97；SEQ ID NO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ ID NO：101；SEQ IDNO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQ ID NO：106；SEQID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ ID NO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ ID NO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ ID NO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ ID NO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ ID NO：125；SEQ IDNO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQ ID NO：129；SEQID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ ID NO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ ID NO：137；SEQ ID NO：138；SEQ IDNO：139；SEQ ID NO：140；SEQ ID NO：141；SEQ ID NO：142；SEQ ID NO：143；SEQID NO：144；SEQ ID NO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ ID NO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ ID NO：152；SEQ IDNO：153；或SEQ ID NO：358；其中所述的抗体或其功能性片段与变性胶原的结合力至少是天然胶原的二倍，其中所述的抗体或其功能性片段不包括以下六个CDR：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；和SEQ ID NO：36。
本发明提供了一种抗体或其功能性片段，其中所述抗体或其功能性片段包括：引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：144的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：149的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
本发明还提供了一种抗体或其功能性片段，其中所述的抗体或其功能性片段包括：由SEQ ID NO：45的氨基酸6-10组成的重链CDR1；引证为SEQ IDNO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
本发明提供了一种经接枝的抗体或其功能性片段，其中所述的经接枝的抗体或其功能性片段包括：SEQ ID NO：45的氨基酸6-10组成的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3。其中重链CDR被接枝到引证为SEQ IDNO：8的VHIII/JH6重链易变框架区。
本发明还提供了一种经接枝的抗体或其功能性片段，其中所述的经接枝的抗体或其功能性片段包括：引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3。其中重链CDR被接枝到引证为SEQ ID NO：8的VHIII/JH6重链易变框架区。
附图说明
图1显示用于克隆编码HUIV26和HDI77抗体的核酸的引物的序列。图1A显示用于小鼠抗体重链的信号肽的一组5′引物(SEQ ID NO：184-192)。图1B显示用于小鼠抗体重链的一组5′引物(SEQ ID NO：193-211)。图1C显示用于小鼠重链及轻链恒定区的一组引物。引物2650(SEQ ID NO：212)是用于小鼠κ轻链恒定区(氨基酸123-115)的3′引物。引物2656(SEQ ID NO：213)是用于小鼠IgM CH1区域(氨基酸121-114)的3′引物。引物2706(SEQ IDNO：214)是用于IgM CH1区域(氨基酸131-124)的3′引物。
图2显示抗隐蔽胶原位点抗体HUIV26的可变区序列。图2A显示HUIV26可变区轻链的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)。图2B显示HUIV26可变区重链的核苷酸序列(SEQ ID NO：3)。图2C显示HUIV26的HUIV26轻链(VK)结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)与人类可变区融合VKIV/JK2(SEQ ID NO：6))的比对及HUIV26重链(VH)结构域(SEQ ID NO：4)与人类可变区融合VHIII/JH6(SEQ ID NO：8)的比对，其中CDR加了下划线。通过直线来表示框架区中在所述经比对的序列之间不同的氨基酸。
图3显示抗隐蔽胶原位点抗体HUI77的可变区的序列。图3A显示HUI77可变区轻链的核苷酸序列(SEQ ID NO：9)。图3B显示HUI77可变区重链的核苷酸序列(SEQ ID NO：11)。图3C显示HUI77的HUI77轻链(VK)结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO：10)与人类可变区融合(VKII/JK1(SEQ ID NO：14))的比对及HUI77重链(VH)结构域(SEQ ID NO：12)与人类可变区融合VHIII/JH6(SEQ ID NO：16)的比对，其中CDR加了下划线。通过直线来表示在框架区中所对比的序列之间不同的氨基酸。图3D显示HUI77可变区的核苷酸序列与DPK13及JK1的人类框架融合的序列(SEQ ID NO：17)的比对。
图4显示用于抗隐蔽胶原位点抗体HUIV26的有益CDR突变。图4A显示用于在HUIV26的LCDR3及HCDR3中产生随机突变的一组引物(HUIV26LCDR3引物，SEQ ID NO：224-232；HDIV26 HCDR3引物，SEQ IDNO：233-243)。图4B显示在HDIV26的LCDR1a(SEQ ID NO：266-273)、LCDR1b(SEQ ID NO：274-282)、LCDR2(SEQ ID NO：283-289)、HCDR1(SEQ IDNO：290-294)、HCDR2a(SEQ ID NO：295-303)及HCDR2b(SEQ ID NO：304-311)中产生随机突变的一组引物。图4C显示HUIV26抗体的有益CDR突变。
图5显示用于抗隐蔽胶原位点抗体HDI77的有益CDR突变。图5A显示用于在HDI77的LCDR3和HCDR3中产生随机突的一组引物。图5B显示用于在HUI77的LCDR1a(SEQ ID NO：312-319)、LCDR1b(SEQ ID NO：320-327)、LCDR2(SEQ ID NO：328-334)、HCDR1(SEQ ID NO：335-341)、HCDR2a(SEQID NO：342-349)及HCDR2b(SEQ ID NO：350-357)中产生随机突变的引物。图5C显示HUI77抗体的有益CDR突变。
图6显示在HUIV26抗体的组合变体中的突变。显示了氨基酸的位置，以粗体显示了不同于野生型的突变。组合变体的相对活性显示为“SPEKon”和″SPEKoff″(最后一列)。也显示了用于产生组合库的引物(SEQ ID NO：163-173)。
图7显示在HUI77抗体的组合变体中的突变。显示了氨基酸的位置，其中不同于以粗体来显示的野生型。组合突变的相对活性显示为“SPEKon”和″SPEKoff″(最后一列)。也显示了用于产生组合库的引物(SEQ ID NO：174-18)。
图8显示HUIV26变体的活性和特异性。显示了含有野生型HUIV26CDR和HUIV26变体2D4H1-C3及DhuG5的IX-IV26的经提纯的Fab对变性胶原IV(图8A)、变性胶原I(图8B)和天然胶原IV(图8C)的结合。
图9显示HUI77变体的活性和特异性。显示了含有野生型HUI77CDR和HUI77变体Qh2b-B7及QhuD9的IX-I77的经提纯的Fab对变性胶原I(图9A)、变性胶原IV(图9B)和天然胶原I(图9C)的结合。
图10显示HDIV26变体DhuH8的结合活性。显示了该抗体的Fab形式和IgG形式对变性(d-IV)和天然(n-IV)人类胶原IV的结合活性。
图11显示HUI77变体QH2b对B16黑素瘤细胞增殖的影响。培养中生长的B16黑素瘤细胞未经处理(对照；方形)或者用QH2b变体的IgG形式来处理(圆形)。
具体实施方式
本发明提供对隐蔽胶原部位特异的抗体，其中此部位在血管生成和肿瘤细胞侵袭期间经由胶原组织暴露出来并且因此充当能以血管生成的脉管系统为目标的抗体。优化这些抗体对隐蔽胶原部位的结合活性。为诊断或治疗目的可将这些抗体用于瞄准血管生成脉管系统。这些抗体也能用于抑制肿瘤生长。
文中所用术语“CDR”或“互补决定区”旨在表示在重链和轻链多肽可变区内部所发现的非相邻抗原结合部位。这些特殊区在Kabat等人的J.Biol. Chem.252：6609-6616(1977)，Kabat等人的U.S.Dept.of Health and HumanServices，″Sequences of proteins of immunological interest″(1991)；在Chothia等人的J.Mol.Biol.196：901-917(1987)和MacCallum等人的J.Mol.Biol.262：732-745(1996)中有所描述，其中当互相对比时，这些定义包括氨基酸残基的重叠或子区。尽管如此，对用来指抗体或经接枝的抗体或其变体的CDR的两个定义中的任一个的应用旨在处于文中所定义及所用术语的范围之内。如容纳了上面所引用的每一篇参考文献所定义的CDR的氨基酸残基陈述于下表1中作为对照。
表1CDR定义
  Kabat<sup>1</sup>   Chothia<sup>2</sup>   MacCallum<sup>3</sup>
  V<sub>H</sub>CDR1   31-35   26-32   30-35
  V<sub>H</sub>CDR2   50-65   53-55   47-58
  V<sub>H</sub>CDR3   95-102   96-101   93-101
  V<sub>L</sub>CDR1   24-34   26-32   30-36
  V<sub>L</sub>CDR2   50-56   50-52   46-55
  V<sub>L</sub>CDR3   89-97   91-96   89-96
1残基编号遵循Kabat等命名法，见上
2残基编号遵循Chothia等命名法，见上
3残基编号遵循MacCallum等命名法，见上
文中所用术语“框架”用来指抗体可变区时，旨在表示抗体可变区内部除CDR区外的所有氨基酸残基。可变区框架通常约100-120个氨基酸之间长度但是旨在仅引用除CDR之外的氨基酸。文中所用术语“框架区”旨在表示通过CDR分开的每个框架结构域。
文中所用术语“供体”旨在表示衍生出一部分的母抗体分子或其片断，其中将此部分给予或赠与另一抗体分子或其片断使得给该接受分子赋予母体分子的结构或功能特征。关于CDR移植的特定实例，衍生出经移植的CDR的母体分子是供体分子。供体CDR将母体分子的结合亲合力赋予接受分子。供体分子与接受分子可以是不同物种或相同物种。如果供体和接受分子属相同物种，那么当然供体肯定是与接受分子分开且不同的分子。
文中所用术语“受体”旨在表示接受来自母体或供体抗体分子或其片断的所赠部分的抗体分子或其片断。因此将母体分子的所赠部分的结构或功能特征传授给受体抗体分子或其片断。关于CDR移植的特定实例，包括框架和/或其他抗体片断在内的受体分子是CDR所移植于其中的接受分子。将供体CDR或母体分子的结合亲合力传授给受体抗体分子。当然与供体分子的情况一样受体分子可以是与此供体相同或不同的物种。
若用于指抗体或其重链或轻链时，“可变区”旨在表示向分子赋予抗原结合性且不是恒定区的抗体的氨基末端。此术语旨在包括其维持整个可变区所有结合功能中的一部分的功能性片断。因此，术语“异侧(heteromeric)可变区结合片断”旨在表示被组装成异侧复合体的至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区或其功能性片断。异侧可变区结合片断包括(例如)功能性片断(诸如Fab、F(ab)2、Fv)、单链Fv(scFv)等等。此等功能性片断已为所属领域的技术人员所熟知。因此，使用这些术语来描述异侧可变区功能性片断旨在符合已为所属领域的技术人员熟知的定义。所述术语，例如在Harlow和Lane的AntibodieS：A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory，纽约(1989)；Molec.Biology and Biotechnology nay：A Comprehensive Desk Reference(Myers，R.A.(编)，纽约：VCH Publisher公司)；Huston等人的Cell Biophysics.22：189-224(1993)；Plückthun和Skerra的Meth.Enzymol.，178：497-515(1989)；和Day，E.D.，Advanced Immunochemistry.第二版，Wiley-Liss公司，纽约，NY(1990)中有所描述。
文中所用术语“群体”旨在表示两个或多个不同分子的群组。一个群组可以与当前使用者可得到的个体分子数目一样大或者能够由所属领域技术人员制备而成。群体可以小至2-4个分子或者大至1013个分子。通常，一个群体将含有两个或两个以上、三个或三个以上、五个或五个以上、九个或九个以上、十个或十个以上、十二个或十二个以上、十五个或十五个以上或者二十个或二十个以上的不同分子。一个群体也可含有几十个或几百个不同分子或者甚至几千个不同分子。举例来说，一个群体可含有约20个至约100000个不同分子或更多(例如约25或25以上、30或30以上、40或40以上、50或50以上、75或75以上、100或100以上、150或150以上、200或200以上、300或300以上、500或500以上或者1000或1000以上的不同分子)，且可含有10,000，100,000或者甚至1×106或更多的不同分子。所属领域的技术人员将会知道一个群体的何种尺寸及何种差异适合于特殊应用。
文中所用术语“变更的”用于指抗体可变区时，旨在表示含有相比母体氨基酸序列而言在框架区、CDR或二者于相同位置的一个或多个氨基酸改变的重链或轻链可变区。若经变更的可变区衍生自供体和受体区或由它们所组成，那么对比其各自氨基酸位置而言在此经变更的物种内的经改变的氨基酸残基位于母体供体和受体区内。
文中所用术语“核酸”(nucleic acid或nucleic acids)”旨在表示单股或双股DNA或RNA分子。本发明的核酸分子可为线型、圆形或分枝构型且可代表核酸分子的义链或反义链或全部两种链。此术语也旨在包括合成和天然全部两种来源的核酸分子。天然来源的核酸分子可衍生于任何动物，例如人类、非人类灵长类动物、小鼠、大鼠、兔、牛、猪、绵羊、犬、猫或两栖动物，或者来源于低级真核生物，例如果蝇(Drosophila)、线虫(C.elegans)、酵母等。合成核酸包括(例如)化学合成物和酶合成物。术语“核酸(nucleic acid或nucleicacids)”同样旨在包括具有与参考核酸类似功能特性且可用类似于自然发生核苷酸及核苷的方式来利用的天然核苷酸类似物。
文中所用术语“抗体”以其最广义来使用以包括多克隆及单克隆抗体，以及所述抗体的抗原结合片断。可用于本发明的抗体或该抗体的抗原结合片断的特征为：具有对多肽或其至少约1×105M-1肽部分的特异结合活性。因此，此抗体定义也包括对多肽保留了特异结合活性的抗体的Fab、F(ab′)2、Fd、Fv、单链Fv(scFv)片断等等。所属领域的技术人员能(例如)通过比较抗体对特殊多肽的结合活性与对非特殊多肽的对照多肽的结合活性来很容易的确定抗体对多肽的特异结合活性。制备多克隆或单克隆抗体的方法已为所属领域的技术人员熟知(参看，(例如)Harlow和Lane的Antibodies：A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press(1988))。
此外，文中所用术语“抗体”包括自然发生的抗体和非自然发生的抗体，其包括(例如)单链抗体、嵌合的、双功能及人源化的抗体，也包括其抗原结合片断。所述非自然发生的抗体可利用固相肽合成法来构建，可重组产生或者可(例如)通过如Huse等人在(Science 246：1275-1281(1989))中所述的筛选由可变重链和可变轻链所组成的组合库来获得。这些及其他制造功能性抗体的方法已为所属领域的技术人员所熟知(Winter和Harris的Immunol.Today14：243-246(1993)；Ward等人的Nature 341：544-546(1989)；Harlow和Lane，见上，(1988)；Hilyard等人的Protein Engineering：A practical approach(IRLPress 1992)；Borrabeck的Antibody Engineering.第二版(Oxford University Press1995))。
文中所用特异性结合意谓显著不同于非特异相互作用的结合。特异性结合可进行测定，(例如)可以通过确定与通常是不具有结合活性的类似结构的分子(例如，结合不同抗原结合部位或抗原的抗体)的对照分子相比的分子结合性。也可以(例如)通过与对照分子的竞争(例如与过量相同分子竞争)来确定结合特异性。该情况下，如果分子的结合竞争性地通过自身进行抑制，那么表示特异性结合。因此，抗体与抗原之间的特异性结合显著不同于非特异相互作用且经抗体的抗原结合位点而发生。
文中所用选择性结合是指分子之间既为特异的又为辨别的结合相互作用，例如与单分子或密切相关的分子结合的抗体。举例来说，如果分子的表位是独特的，那么抗体对抗原所展示的特异性对抗原而言既是特异的又是选择性的。因此，如通过对独特于一个分子或密切相关分子的表位具有特异性的抗体所例证，具有选择性结合的分子可区别分子。或者，抗体可对许多分子所共有的表位具有特异性，例如，在许多分子上表达的碳水化合物。所述抗体对一个分子或密切相关分子具有特异结合但不具有选择性。
文中所用术语“结合亲合力”旨在表示结合相互作用的强度且包括实际结合亲合力及表观结合亲合力。实际结合亲合力是结合速率与解离速率的比率。因此，提供或优化结合亲合力包括变更这些成份的任一方或双方以达到所希望的结合亲合力水平。表观亲合力可包括(例如)相互作用的活动性。举例来说，二价异侧可变区结合片断可展示出由于其化合价而变更或优化的结合亲合力。
文中所用术语“大致相同”用于指结合亲合力时，旨在表示类似或相同的结合亲合力，其中在亲合力测定的实验可变性之内一个分子具有类似于另一分子的结合亲合力。结合亲合力测定的实验可变性依赖于所用的特定分析且已为所属领域的技术人员所熟知。
文中所用术语“优化”用于指可变区或其功能性片断时，旨在表示相比母体可变区或供体可变区的活性而言可变区的功能活性经修饰导致活性上想要的变化。显示优化活性的可变区或其片断可展示(例如)比未更改可变区更高亲合力或更低亲合力结合活性或者增强的或降低的结合或解离速率。若须要显示优化活性的可变区或其功能性片断也可展示增强的稳定性，例如在特殊有机体中增强的半衰期。举例来说，通过降低对蛋白分解的敏感度可使抗体活性优化以增强稳定性。若须要，显示优化活性的抗体也可展示更低的亲合力结合，其包括降低的结合速率或增强的分解速率。展示了更低亲合力结合的优化可变区可用于(例如)渗透实性肿瘤。与更高的亲合力可变区(此区可与肿瘤的边缘区结合但是由于其高亲合力而不能渗透至肿瘤内区)相反，更低的亲合力可变区可能更有利于渗透肿瘤的内区。若进行上述结合亲合力的优化，那么催化可变区的优化可以(例如)提高或降低催化速率、解离常数或结合常数。
文中所用“隐蔽胶原位点”或“或隐蔽胶原表位”是指抗体或其功能性片断的结合在天然胶原中比在变性胶原中更不易达到的胶原分子表位。对隐蔽胶原表位具有结合活性的抗体先于天然胶原而优先识别变性胶原，即是说，此抗体具有对变性胶原比对天然胶原的更高的结合亲合力。举例来说，此抗体对变性胶原可具有超过天然胶原至少约2倍或更高优选(即是说，至少约2倍高)结合活性，且可展示对变性胶原超出天然胶原约3倍或更高优选、约5倍或更高优选、约10倍或更高优选、约15倍或更高优选、约20倍或更高优选、约25倍或更高优选、约50倍或更高优选、约100倍或更高优选或者甚至更高的优选。
文中天然胶原是指其中有三个α链编制在一个三螺旋分子中的分子。天然胶原可为翻译后加工的不同阶段，例如原胶原(pro-collagen)和在产生成熟组织形式的胶原中的中间体或者在不破坏胶原三螺旋结构条件下通过组织的有限蛋白分解而分离出的胶原分子。因此，天然胶原可以是无损伤的的胶原分子或者可含有位于三螺旋区侧面的非三螺旋序列(只要未破坏三螺旋)。本文中变性胶原是指其中三螺旋被完全或部分破坏使得隐蔽表位易于达到的变性胶原。胶原变性可在原位通过蛋白酶(例如，基质金属蛋白酶)作用发生，该作用可使胶原在三螺旋区内部裂开，其使得生成的三螺旋片断不稳定。胶原变性可在体外通过天然胶原的热变性或化学变性来进行诱发。也可在体外通过在所生成的三螺旋片断热不稳定的温度下，用能使三螺旋区裂开的蛋白酶(一般称为溶胶原酶)处理天然胶原来制备变性胶原。变性胶原可通过翻译之后加工的不同阶段的天然胶原变性或者通过由有限蛋白分解而从组织所分离的天然胶原的变性而得到。所属领域的技术人员应知道分离天然胶原的多种方法和使含有隐蔽胶原表位的三螺旋变性的多种方法。
本发明抗体具有对隐蔽胶原抗体决定部位的结合活性，此与各自母体小鼠抗体相同。例如，具有衍生自HUIV26的CDR的本发明抗体可具有与小鼠HUIV26抗体基本上相同的结合特异性，该小鼠抗体在Xu等人的Hybridoma19：375-385(2000)；Xu等人的J.Cell Biol.154：1069-1079(2001)；及WO00/40597中有所描述，每一篇以引用的方式并入本文中。类似地，具有衍生自HUI77的CDR的本发明抗体可具有与小鼠HUI77抗体基本上相同的结合特异性，该小鼠抗体在Xu等人，见上，2000；Xu等人，见上，2001；及WO 00/40597中有所描述。此结合特异性可通过文中所揭示的方法来测试，例如，通过对比本发明抗体与对应母体小鼠抗体的活性。举例来说，可将衍生自HUIV26的本发明抗体与具有图2C中所示可变区氨基酸序列(SEQ ID NO：2及4)的对应小鼠抗体进行对比。类似地，可将衍生自HUI77的本发明抗体与具有图3C中所示可变区氨基酸序列(SEQ ID NO：10和12)的对应小鼠抗体进行对比。例如可通过与对应母抗体竞争性结合来确定相似的结合特异性。当然本发明抗体可具有与对应母抗体基本上相同的特异性或者可具有变更的特异性(只要抗体对隐蔽胶原表位具有结合活性)。
本发明提供对隐蔽胶原表位具有特异结合活性的抗体。所述抗体包括了在结合到隐蔽胶原位点的抗体HUIV26及HUI77的CDR中具有至少一个氨基酸替换的至少一个CDR。本发明也提供编码这些抗体的核酸。本发明还提供使用所述抗体的方法。
已经开发了识别人类胶原隐蔽结构域的高特异性单克隆抗体，其被指定为HUIV26和HUI77(参看Xu等人的Hybridoma 19：375-385(2000)；Xu等人的J.Cell Biol.154：1069-1079(2001)；WO 00/40597，每一篇均以引用的方式并入本文中)。单克隆抗体HUIV26识别人类IV型胶原的隐蔽结构域，而HUI77识别人类I和IV型胶原的隐蔽结构域，该结构域为II、III和V型胶原所共有。在多数正常生理条件下不易达到该(等)隐蔽结构域，但是胶原三螺旋在体内的蛋白水解重塑之后变得易达到。因此，在侵袭性细胞过程中隐蔽胶原表位变得更易达到。重要的是，已显示出由这些抗体所定义的隐蔽结构域暴露于肿瘤基底膜内，该基底膜结合了来自于人类肿瘤(包括乳房、膀胱和黑素瘤肿瘤)的血管生成的血管。然而，此隐蔽结构域很少暴露于所测试血管或正常组织内。所以，抗体HUIV26及HUI27代表血管生成血管的重要和特异标志。这些隐蔽结构域在调控血管生成和肿瘤生长中其起重要作用，因为在全身投用之后，单克隆抗体HUIV26和HUI77有效抑制在小鸡胚胎、老鼠及小鼠模型中的血管生成和人类肿瘤生长(Xu等人，见上，2001)。因此，这些对所述隐蔽胶原位点具有特异结合活性的单克隆抗体和本发明抗体是供治疗以异常新血管形成为特征的疾病的强有力及有效的新治疗剂。
本发明核酸序列可包括与明确叙述的SEQ ID NO相同或基本相同的序列。类似地，本发明氨基酸序列可包括与明确叙述的SEQ ID NO相同或基本相同的序列。文中所用术语“基本上”或“基本相同”当用于指核苷酸或氨基酸序列时，旨在表示当与参考序列(例如母抗体序列)对比时，核苷酸或氨基酸序列显示相当大程度、数量或范围的序列同一性。我们还认为所述相当大程度、数量或范围的序列同一性是重要的和有意义的且因此展示了确定可识别的或已知的特征。因此，与本发明抗体(包括其片断)的重链或轻链核苷酸序列基本相同的核苷酸序列是指展示了确定已知的或可识别为编码或作为如同母抗体序列的氨基酸序列的特征的序列。对其的微小修饰只要可识别为母抗体序列就可包括在内。类似地，与本发明抗体或其功能性片段的重链或轻链氨基酸序列基本相同的氨基酸序列是指展示了确定已知的或可识别为代表母抗体氨基酸序列及其微小修饰的特征的序列。当确定核苷酸或氨基酸序列是否与母抗体基本相同时，需考虑相对于该母抗体变化的数目和连同其功能是否得到维持，例如本发明抗体结合到隐蔽胶原位点的功能是否维持。
将这些核苷酸序列和/或氨基酸的微小修饰作为编码核酸及其功能片断的重链和轻链来包括在内。所述微小修饰包括(例如)由于遗传密码的简并而未改变经编码的氨基酸序列的微小修饰，以及仅导致经编码的氨基酸序列的保守替换的微小修饰。经编码的氨基酸序列的保守替换包括(例如)属于以下群组内的氨基酸：(1)非极性氨基酸(Gly、Ala、Val、Leu及Ile)；(2)极性中性氨基酸(Cys、Met、Ser、Thr、Asn及Gln)；(3)极性酸性氨基酸(Asp及Glu)；(4)极性碱性氨基酸(Lys、Arg及His)；及(5)芳香族氨基酸(Phe、Trp、Tyr及His)。只要核酸或经编码的多肽保留文中所述的一些或全部功能，那么其他微小修饰可包括在对本发明的重链及轻链多肽进行编码的核酸之内。
为了产生对隐蔽胶原表位具有特异结合活性的本发明抗体，克隆且定序了抗体HUIV26及HUI77的重链及轻链可变区(参看实例I和图2及3)。鉴别了重链及轻链可变区的CDR。如通过Kabat编号法所确定，典型的重链及轻链CDR已显示于图2C及3C中(已加了下划线)。HUIV26的典型重链及轻链CDR包括(例如)：VL CDR1，KSSQSLLNSGNQKNYLA(SEQ ID NO：20)；VL CDR2，GASTRES(SEQ ID NO：22)；VL CDR3，QNDHSYPYT(SEQ ID NO：24)；VHCDR1，GFDFSRYWMS(SEQ ID NO：26)；VH CDR2，EINPDSSTINYTPSLKD(SEQ ID NO：28)及VH CDR3，PVDGYYDAMDY(SEQ ID NO：30)。HUI77的典型重链及轻链CDR包括(例如)VL CDR1，RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ IDNO：32)；VL CDR2，KVSNRFS(SEQ ID NO：34)；VL CDR3，FQGSHVPWT(SEQID NO：36)；VH CDR1，GFSLSTSGMGVG(SEQ ID NO：38)；VH CDR2，DIWWDDNKYYNPSLKS(SEQ ID NO：40)及VH CDR3，RANYGNPYYAMDY(SEQ ID NO：42)。
产生了含有单一氨基酸替换的CDR变体库(实例II)。筛选所述库以与隐蔽胶原位点相结合，且鉴别除了具有有益活性的单一氨基酸突变。针对活性而联合并进行筛选了组合突变体(实例III)，在所述组合突变体中含有至少一个氨基酸替换的两个或两个以上变体CDR是相关于母体HUIV26或HUI77 CDR而言的。鉴别了许多具有与隐蔽胶原位点相结合优化活性的组合突变体。
本发明抗体对隐蔽胶原表位具有结合活性。如文中所揭示，只要暴露出在天然胶原中不易达到的抗原决定簇，那么可通过多种方法中的任一种来使此胶原变性。所述方法包括(例如)：蛋白酵素分解、加热或热变性、化学变性等等。所属领域的技术人员应知道适合于使胶原分子变性以显露隐蔽胶原位点或表位的多种方法。而且，变性方法可以是两个或两个以上变性方法的联合，例如与化学和/或热变性相联合的蛋白分解。举例来说，蛋白分解可用来分裂胶原，产生更易于受热或化学变性影响的胶原分子。用于使胶原变性的典型蛋白酶是基质金属蛋白酶，其可在体外使用且可在体内起作用以在三螺旋区内部及在哺乳动物中体温下分裂胶原。
本发明提供HUIV26和HUI77抗体的经接枝的抗体。在一个实施例中，本发明提供HUIV26的经接枝的抗体。经接枝的抗体或其功能性片断包括了在重链CDR或轻链CDR的一个或多个CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个互补决定区(CDR)，其中重链CDR选自SEQ ID NO：26、28和30，轻链CDR选自SEQ ID NO：20、22和24，该经接枝的抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
在另一实施例中，本发明提供了HUI77的经接枝的抗体。此经接枝的抗体或其功能性片段包括在重链CDR或轻链CDR的一个或多个CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个互补决定区(CDR)，其中重链CDR选自SEQ IDNO：38、40和42，轻链CDR选自SEQ ID NO：32、34和36，该经接枝的抗体或其功能性片段对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
本发明还提供包括明确叙述的CDR的抗体或其功能性片断，其中该抗体或其功能性片段对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。所述抗体包括具有至少单一氨基酸替换并保留对隐蔽胶原表位结合活性的抗体。所述CDR变体之中包括在图4及5中所描述的变体。
在HUIV26的CDR中具有单一氨基酸替换的本发明的典型CDR包括(例如)下述CDR，其中表示了在Kabat编号法中氨基酸突变体的位置连同自野生型至突变体(野生型-突变体)的氨基酸替换。所述典型CDR包括：HuIV26 VH CDR131R-H(SEQ ID NO：43)；HuIV26 VH CDR1 34M-I(SEQ ID NO：44)；HuIV26 VHCDR1 35S→T(SEQ ID NO：45)；HuIV26 VH CDR1 35S→A(SEQ IDNO：46)；HuIV26 VH CDR1 35S-G(SEQ ID NO：47)；HuIV26 VH CDR2 57I-A(SEQ ID NO：48)；HUIV26 VH CDR2 57I-S(SEQ ID NO：49)；HuIV26 VHCDR2 62S→Y(SEQ ID NO：50)；HuIV26 VH CDR2 62S→A(SEQ ID NO：51)；HuIV26 VH CDR2 62S-H(SEQ ID NO：52)；HuIV26 VH CDR2 62S→G(SEQ ID NO：53)；HuIV26 VH CDR2 64K→Q(SEQ ID NO：54)；HuIV26 VHCDR2 65D-S(SEQ ID NO：55)；HuIV26 VH CDR3 97D-P(SEQ IDNO：56)；HuIV26 VH CDR3 97D→G(SEQ ID NO：57)；HuIV26 VH CDR397D→T(SEQ ID NO：58)；HuIV26 VH CDR3 97D→A(SEQ IDNO：59)；HUIV26 VH CDR3 98G→P(SEQ ID NO：60)；HuIV26 VH CDR398G→A(SEQ ID NO：61)；HuIV26 VH CDR3 98G-H(SEQ ID NO：62)；HuIV26VH CDR3 102Y→P(SEQ ID NO：63)；HuIV26 VH CDR3 102Y-N(SEQ IDNO：64)；HuIV26 VL CDR1 27Q-R(SEQ ID NO：65)；HuIV26 VL CDR1 27Q-S(SEQ ID NO：66)；HuIV26 VL CDR1 27dN-S(SEQ ID NO：67)；HuIV26 VLCDR1 27eS-Y(SEQ ID NO：68)；HuIV26 VL CDR1 27eS→W(SEQ IDNO：69)；HUIV26 VL CDR1 27eS→H(SEQ ID NO：70)；HuIV26 VL，CDR127eS-R(SEQ ID NO：71)；HuIV26 VL CDR1 27fG→Y(SEQ IDNO：72)；HuIV26 VL CDR1 27fG→R(SEQ ID NO：73)；HuIV26 VL CDR127fG→H(SEQ ID NO：74)；HuIV26 VL CDR1 27fG→I(SEQ IDNO：75)；HuIV26 VL CDR1 29Q→K(SEQ ID NO：76)；HuIV26 VL CDR393S→Q(SEQ ID NO：77)；HuIV26 VL CDR3 93S-G(SEQ IDNO：78)；HuIV26 VL CDR3 93S→L(SEQ ID NO：79)；HUIV26 VL CDR393S→A(SEQ ID NO：80)；HuIV26 VL CDR3 93S→T(SEQ ID NO：81)；HuIV26 VL CDR3 93S→V(SEQ ID NO：82)；HUIV26 VL CDR394Y→N(SEQ ID NO：83)；HuIV26 VL CDR3 94Y-S(SEQ IDNO：84)；HUIV26 VL CDR3 94Y→P(SEQ ID NO：85)；HuIV26 VL CDR394Y→-M(SEQ ID NO：86)及HuIV26 VL CDR2 S7I-V(SEQ ID NO：162)。
在HUI77的CDR中具有单一氨基酸替换的本发明典型CDR包括(例如)下述CDR，其中表示了在Kabat编号法中氨基酸突变位置连同自野生型至突变体(野生型-突变体)的氨基酸替换。所述典型CDR包括：HUI77 VH CDR1 32S-P(SEQ ID NO：87)；HUI77 VH CDR1 32S→W(SEQ ID NO：88)；HUI77 VH CDR135bG→W(SEQ ID NO：89)；HUI77 VH CDR1 35bG→L(SEQ ID NO：90)；HUI77 VH CDR1 35bG-A(SEQ ID NO：91)；HUI77 VH CDR2 59Y→S(SEQID NO：92)；HUI77 VH CDR2 59Y→A(SEQ ID NO：93)；HUI77 VH CDR259Y→P(SEQ ID NO：94)；HUI77 VH CDR2 64K→P(SEQ ID NO：95)；HUI77 VH CDR3 95R→P(SEQ ID NO：96)；HUI77 VH CDR3 95R→Q(SEQ ID NO：97)；HUI77 VH CDR3 95R→L(SEQ ID NO：98)；HUI77 VHCDR3 95R→T(SEQ ID NO：99)；HUI77 VH CDR3 95R→V(SEQ ID NO：100)；HUI77 VH CDR3 100N→V(SEQ ID NO：101)；HUI77 VH CDR3100N→W(SEQ ID NO：102)；HUI77 VH CDR3 100eM→Q(SEQ ID NO：103)；HUI77 VH CDR3 100eM→N(SEQ ID NO：104)；HUI77 VH CDR3100eM→T(SEQ ID NO：105)；HUI77 VH CDR3 102Y→K(SEQ IDNO：106)；HUI77 VH CDR3 102Y→T(SEQ ID NO：107)；HUI77 VH CDR3102Y→M(SEQ ID NO：108)；HUI77 VH CDR3 102Y-H(SEQ ID NO：109)；HUI77 VL CDR1 27cV→P(SEQ ID NO：110)；HUI77 VL，CDR127cV→W(SEQ ID NO：111)；HUI77 VL CDR1 27dH→L(SEQ IDNO：112)；HUI77 VL CDR1 27dH-S(SEQ ID NO：113)；HUI77 VL，CDR127eS→W(SEQ ID NO：114)；HUI77 VL CDR1 28N→Y(SEQ ID NO：115)；HUI77 VL CDR1 28N→W(SEQ ID NO：116)；HUI77 VL CDR1 30N→Y(SEQ ID NO：117)；HUI77 VL CDR1 33L→F(SEQ ID NO：118)；HUI77 VLCDR1 33L→V(SEQ ID NO：119)；HUI77 VL CDR2 50K→S(SEQ IDNO：120)；HUI77 VL CDR2 51V→A(SEQ ID NO：121)；HUI77 VL CDR253N→S(SEQ ID NO：122)；HUI77 VL CDR2 54R→L(SEQ ID NO：123)；HUI77VL CDR2 56S→W(SEQ ID NO：124)；HUI77 VL，CDR2 56S→F(SEQ ID NO：125)；HUI77 VL CDR3 89F→V(SEQ ID NO：126)；HUI77 VL CDR3 89F→H(SEQ ID NO：127)；HUI77 VL CDR3 90Q→R(SEQ ID NO：128)；HUI77VL，CDR3 90Q→W(SEQ ID NO：129)；HUI77 VL CDR3 91G→S(SEQ ID NO：130)；HUI77 VL CDR3 92S→W(SEQ ID NO：131)；HUI77 VL CDR3 92S→E(SEQ ID NO：132)；HUI77 VL CDR3 93H→L(SEQ ID NO：133)；HUI77VL，CDR3 93H→T(SEQ ID NO：134)；HUI77 VL CDR3 93H-S(SEQ ID NO：135)；HUI77 VL CDR3 93H→A(SEQ ID NO：136)；HUI77 VL CDR3 93H→Q(SEQ ID NO：137)；HUI77 VL CDR3 94V→T(SEQ ID NO：138)；HUI77 VLCDR3 97T→A(SEQ ID NO：139)；HUT77 VL CDR3 97T-R(SEQ IDNO：140)；HUI77 VL CDR3 97T→H(SEQ ID NO：141)；HUI77 VL CDR397T→K(SEQ ID NO：142)；HUI77 VL CDR3 97T→I(SEQ ID NO：143)；HUI77VH CDR2 59Y→T(SEQ ID NO：144)；HUI77 VL，CDR3 94V→F(SEQ IDNO：145)及HUI77 VL，CDR1 28N-Q(SEQ ID NO：146)。
除具有单一氨基酸替换的CDR之外，本发明还提供具有两个或两个以上氨基酸替换的HUIV26和HUI77CDR。在HUIV26中具有两个或两个以上氨基酸替换的典型CDR包括例如：HDIV26 VH CDR2 57I→A/62S→A(SEQ IDNO：154)；HOIV26 VH CDR2 57I-A/62S→Y(SEQ ID NO：155)；HUIV26 VHCDR2 57I-A/62S-H(SEQ ID NO：156)；HUIV26 VL CDR1 27eS-W/27fG-Y(SEQID NO：157)；HUIV26 VL CDR1 27eS→Y/27fG→Y(SEQ ID NO：158)；HUIV26VL CDR1 27eS→Y/27fG→H(SEQ ID NO：159)；HUIV26 VL CDR127eS→R/27fG→Y(SEQ ID NO：160)及HDIV26 VL CDR1 27eS→W/27fG→H(SEQ ID NO：161)(参看图6)。在HUI77中具有两个或两个以上氨基酸替换的典型CDR包括例如：HUI77 VH CDR1 32S-P/35bG-W(SEQ IDNO：147)；HUI77 VH CDR1 32S-P/35bG-A(SEQ ID NO：148)；HUI77 VL CDR127dH-S/28N-W(SEQ ID NO：149)；HUI77 VL CDR1 27dH→S/28N→Y(SEQ IDNO：150)；HUI77 VL CDR1 27dH→S/28N→Q(SEQ ID NO：151)；HDI77 VLCDR1 28N→Q/33L→F(SEQ ID NO：152)及HUI77 VL CDR127H→S/28N→W/33L→F(SEQ ID NO：153)(参看图7)。
本发明提供具有至少一个上述变体CDR序列的抗体。当然只要能维持对隐蔽胶原位点的结合活性，那么HUIV26 CDR的任意联合可与突变体和/或野生型CDR联合以产生HUIV26移植抗体。类似地，只要能维持对隐蔽胶原位点的结合活性，那么HUI77 CDR的任意联合可与突变体和/或野生型CDR联合以产生经HUI77移植的抗体。因此，单一氨基酸替换任意联合可与其他CDR突变体联合以产生具有至少两种变体CDR的抗体。可将在相同CDR内不同位置的任意单一突变进行联合以产生在两个或两个以上位置具有2个或2个以上氨基酸替换的CDR。只要能维持对隐蔽胶原位点的结合活性，那么可联合任意单一或多种突变。
因此，本发明提供抗体或其功能性片断，其包括选自以下所引用的CDR的一个或多个CDR：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：156、SEQ IDNO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：161及SEQ ID NO：162，此抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
本发明还提供抗体或其功能性片断，其包括选自以下所引用的CDR的一个或多个CDR：SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ IDNO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ IDNO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ IDNO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ IDNO：127、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ IDNO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ IDNO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152及SEQ ID NO：153，该抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
本发明还包括抗体或其功能性片断，其包括由在一个或多个重链CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR所组成的重链多肽，其中重链CDR选自重链CDR1、重链CDR2及重链CDR3：重链CDR1选自引证为SEQ ID NO：26、43、44、45、46及47的CDR；重链CDR2选自引证为SEQ ID NO：28、48、49、50、51、52、53、54及55的CDR；重链CDR3选自引证为SEQ ID NO：30、56、57、58、59、60、61、62、63及64的CDR所，该抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
本发明也提供抗体或其功能性片断，其包括由在一个或多个轻链CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR所组成的轻链多肽，其中轻链多肽选自轻链CDR1、轻链CDR2及轻链CDR3：轻链CDR1选自引证为SEQ ID NO：20、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75及76的CDR；轻链CDR2引证为SEQ ID NO：22及轻链CDR3选自引证为SEQ ID NO：24、77、78、79、80、81、82、83、84、85及86的CDR，该抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
本发明还提供抗体或其功能性片断，其包括由在一个或多个重链CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR所组成的重链多肽，其中重链CDR选自重链CDR1、重链CDR2及重链CDR3：重链CDR1选自引证为SEQ ID NO：38、87、88、89、90、91、47及148的CDR；重链CDR2选自引证为SEQ ID NO：40、92、93、94、95及144的CDR；重链CDR3选自引证为SEQ ID NO：42、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108及109的CDR，该抗体及其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
另外提供的是抗体或其功能性片断，其含有由在一个或多个轻链CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR所组成的轻链多肽，其中轻链CDR选自轻链CDR1、轻链CDR2及轻链CDR3：轻链CDR1选自引证为SEQ ID NO：32、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、146、149、150、151、152及153的CDR；轻链CDR2引证为SEQ ID NO：34、120、121、122、123、124及125及轻链CDR3选自引证为SEQ ID NO：36、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143及145的CDR，该抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。
如上所述，只要能维持对隐蔽胶原位点的结合活性，那么本发明抗体可从变体和/或野生型CDR的任意联合产生。如文中所揭示，鉴别出了含有具有至少单一氨基酸替换的多种CDR的不同组合抗体对隐蔽胶原位点具有结合活性。除了含有文中所揭示的各自CDR任意联合的抗体之外，本发明也提供了CDR的以下特定联合。
典型HUIV26变体包括(例如)以下抗体：包括引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：28的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：20的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(4.1-2D4)。包括引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：28的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：72的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(L1b-F11)。包括引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：48的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：20的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(H2a-G8)。包括引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：154的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的CDR2及引证为SEQ IDNO：77的轻链CDR3的抗体(DcomA2)。包括引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的CDR2；引证为SEQ ID NO：63的CDR3；引证为SEQ ID NO：158的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomA4)。
包括引证为SEQ ID NO：46的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：159的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomB1)。包括引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：48的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：160的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomD2)。包括引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：72的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomD3)。包括引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomD6)。
包括引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：160的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomE3)。
包括引证为SEQ ID NO：46的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：160的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomG2)。
包括引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：162的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：158的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomA7)。
包括引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：156的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomB10)。
含有引证为SEQ ID NO：26的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：154的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomC8)。
包括引证为SEQ ID NO：45的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：155的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：157的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomD7)。
包括引证为SEQ ID NO：46的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：154的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：161的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomD11)。
包括引证为SEQ ID NO：46的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：156的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：161的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(DcomE11)。
包括引证为SEQ ID NO：46的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：28的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：63的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：20的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：22的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：77的轻链CDR3的抗体(2D4H1-C3)。
典型的HUI77变体包括(例如)以下抗体：
包括引证为SEQ ID NO：38的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：40的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：32的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(12F10Q)。
包括引证为SEQ ID NO：38的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：92的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：32的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CFR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(QH2b-A3)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：92的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：149的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom1B6)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：92的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：150的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom1B8)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：149的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR2的抗体(Qcom1C3)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：144的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：149的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom1D3)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：151的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom1E3)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：92的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：151的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的CDR3的抗体(Qcom1H6)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：152的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：145的轻链CDR3的抗体(Qcom1H7)。
包括引证为SEQ ID NO：148的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：150的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom2A4)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：115的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom2B11)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：40的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：153的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom2C1)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：92的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：116的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ IDNO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom2D9)。
包括引证为SEQ ID NO：147的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：116的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ ID NO：36的轻链CDR3的抗体(Qcom2E3)。
包括引证为SEQ ID NO：38的重链CDR1；引证为SEQ ID NO：93的重链CDR2；引证为SEQ ID NO：103的重链CDR3；引证为SEQ ID NO：32的轻链CDR1；引证为SEQ ID NO：34的轻链CDR2及引证为SEQ IDNO：36的轻链CDR3的抗体(Qh2b-B7)。
本发明也提供含有分别衍生自HDIV26和HDI77的CDR的经接枝的抗体。所述经移植的CDR包括人源化的抗体，其中来自HUIV26或HUI77的CDR已经被移植或者其中移植了含有一个或多个氨基酸替换的CDR。如文中所述，可将CDR直接移植到人类框架中。若须要，通过产生框架库也可以合并框架变化。如下文更详细的描述，CDR和/或框架序列的优化可独立执行及继而联合或者可同时执行。
因此，本发明另外提供经接枝的抗体，其中将HUIV26 CDR(SEQ ID NO：20、22、24、26、28及30)移植到人类框架序列。也提供经接枝的抗体，其中将HUI77 CDR(SEQ ID NO：32、34、36、38、40及42)移植到人类框架。
为产生经接枝的抗体，将胶原特异性抗体的供体CDR移植到抗体受体可变区框架上。用于经接枝的抗体及产生CDR变体以优化活性的方法先前已有所描述(WO 98/33919、WO 00/78815及WO 01/27160)。可执行此程序以在同时进行的过程中实现供体CDR的移植和重新取得亲合力。类似地，这些方法可单独或与CDR移植联合使用以修饰或优化可变区的结合亲合力。用于将供体CDR结合亲合力提供到受体可变区上的方法对于重链及轻链可变区都适用且同样可用于同时进行移植和优化抗体可变区的结合亲合力。
供体CDR可变更以在供体CDR内全部或所选位置处含有多数不同氨基酸残基变化。举例来说，可将二十个自然发生的氨基酸残基或预选子群的随机或有偏向合并引入至供体CDR以产生CDR物种的不同群体。CDR变体物种内含到可变区的不同群体中以供产生展示了对预定抗原已优化的结合亲合力的变体物种之用。
在供体CDR位置中可以制成可能变化的范围。可将为变化而选择的某些或所有的可能变化引入到经移植的供体CDR的群体中。可选择CDR中的单一位置以引进变化或者可为活性而联合或筛选具有变更氨基酸的多种位置。
沿CDR改变所有氨基酸位置的一种途径是通过用(例如)全部二十个自然发生的氨基酸来替代每一个位置。每个位置的替代可在其他供体CDR氨基酸位置的范围中发生以使得CDR的重要部分维持可靠的供体CDR序列且因此维持供体CDR的结合亲合力。举例来说，受体可变区框架或者天然或变更的框架可由在CDR内的每个位置含有单一位置替代的CDR群体进行移植。类似地，可瞄准受体可变区框架以用于由含有经改变至合并了所有二十个氨基酸残基或氨基酸子群的多于一个位置的CDR群体进行移植。在将要移植的CDR或CDR组之内的一个或多个氨基酸位置可进行变更并移植到受体可变区框架中以产生经接枝的抗体群体。当然，若须要，具有一个或多个变更位置的CDR可与具有一个或多个变更位置的一个或多个其他CDR进行联合。
具有一个或多个变更位置的CDR变体物种群体可与构成可变区的结合区的任意或全部CDR进行联合。所以，可瞄准受体可变区框架以用于在重链或轻链中一个、两个或全部三个可接受CDR位置同时合并供体CDR变体群体。由氨基酸位置变化瞄准的CDR或CDR的数目的选择将取决于(例如)是否须要将全部CDR移植到受体中或者此方法是否是为结合亲合力的优化而执行。
用于选择供体CDR氨基酸以达到提供供体CDR结合亲合力至抗体受体可变区框架之上的途径是选择高度可变的已知的或容易鉴别的CDR位置。举例来说，可变区CDR3通常高度可变。所以如文中所述，可选择性地瞄准该区以用于移植程序期间的氨基酸位置变化从而确保重新取得或增加结合亲合力，其中氨基酸位置变化可是单独的或是与相应受体可变变化一起。
若须要，具有一个或多个变更氨基酸位置的CDR变体群体可方便地与具有一个或多个变更氨基酸位置的框架变体群体进行联合。此联合可导致变化的有益联合，此联合可通过筛选其优化活性而得以鉴别。
因此生成的经CDR移植的可变区群体含有在每个位置对应于可靠母体氨基酸残基的物种，也含有在每个所选CDR位置对应可靠母体氨基酸残基连同变体残基的可能联合及置换的不同数目的不同物种。为保留供体CDR结合活性或已优化结合活性的变更可变区物种而筛选所述经CDR移植的可变区的不同群体。
可选择受体使得其与接纳供体CDR的可变区氨基酸序列密切相似。另外，可使用与供体抗体不太密切相关的多种抗体。或者，在受体框架中所有可能或相应变化的库可被构成且接着筛选该库以得到维持或展示了对比供体分子而言增加的结合亲合力的可变区或其异侧结合片断。可将供体CDR移植到具有一个或多个变化的多种自然发生的受体框架或变更框架中或者甚至将其移植到在一个或多个位置含有变化的库中。因此，其适用性不以与供体框架可变区相似的受体框架可变区的可获得性或寻求为前提条件。
用于将供体CDR结合亲合力提供至可变区上的所述方法可涉及鉴别受体框架中的相应氨基酸位置(所述位置是已知的或经预测会影响CDR构型，或者是已知的或经预测会影响在参与结合的CDR之内的氨基酸侧链空间范围)，且接着产生在那些氨基酸位置处合并了复数个氨基酸残基的变更的可变区物种的群体。举例来说，在那些位置的不同氨基酸残基可随意或以预定偏向进行合并且在每个相应位置包括全部二十个自然发生氨基酸残基。为在相应框架位置进行结合，可另外选择包括少于全部自然发生氨基酸的子群。在每个相应框架位置包括复数个不同氨基酸残基确保了在具有框架变化的群体之内存在至少一个物种，其中框架变化允许在受体框架可变区范围中CDR重获其供体结合亲合力。
为使抗体人源化，可选择任意的多种人类框架用于CDR移植。举例来说，可将HUIV26或HUI77的CDR克隆至多种人类框架序列。使用人类生殖细胞系基因编码重链及轻链可变区和J区可产生框架以得到用于CDR移植的人类框架序列。典型的人类框架核苷酸序列包括(例如)：DPK24(VKIV)(SEQ ID NO：5)、DP-54(VHIII)(SEQ ID NO：7)、DPK13(VKII)(SEQ ID NO：13)、DP-28(VHII)(SEQ ID NO：15)及J区JK1(SEQ ID NO：217)、JK2(SEQ ID NO：218)和JH6(SEQID NO：219)的框架序列。当然，来自任意可用的生殖细胞系序列的框架区可与任意可用的J序列联合以(若须要)产生用于移植CDR的人类框架。举例来说，HUIV26和HUI77的小鼠可变区与典型人类框架的比对分别显示于图2C和3C中。VKIV/JK2轻链可变区和VHIII重链可变区的融合与HUIV26比对(图2C)。VKII/JK1轻链可变区和VHIII/JH6重链可变区的融合与HUI77比对(图3C)。生殖细胞系和J区的典型融合显示于图3D，其与HUI77轻链进行比对。当然，可选择任意可用的人类框架用于CDR移植且(若须要)通过文中所揭示的方法进行优化。如文中所揭示，可将具有有益突变的CDR移植到多种框架中且具有保留的或增加的活性(参看实例III)。
用以变更的相应框架氨基酸位置的选择取决于所属领域的技术人员所熟知的多种标准。选择用以改变的相应框架氨基酸的一种标准是在供体分子与受体分子之间在氨基酸框架残基上的相对差。使用该途径来选择用以变更的相应框架位置是简单的且具有避免在残基确定中的主观偏差或避免在通过残基的CDR结合亲合力影响中的任意偏差的优势。
用于确定用以改变的相应氨基酸位置的另一标准可以是(例如)选择已知是重要的或有助于CDR构型的框架残基。举例来说，规范的框架残基对于CDR构型或结构而言是重要的。瞄准规范框架残基作为用以改变的相应位置可鉴别在其相关联的供体CDR序列范围中更适合的氨基酸残基。
氨基酸残基在特殊框架位置的频率是另一个标准，其可用于选择所要改变的相应框架氨基酸位置。举例来说，所选框架与其亚科内其他框架序列的比较可显露在一特殊位置或多个特殊位置以较小频率发生的残基。接纳不太充足的残基的所述位置可类似适用于选择作为在受体可变区框架中所要变更的位置。
例如，也可基于对CDR的近似度来选择用以改变的相应氨基酸位置。在某种范围中，所述残基能参与CDR构型或抗原结合。而且，此标准可类似用于使文中所述的通过其他标准选择的相应位置按优先次序比对。因此，区分一个或多个CDR的近侧和远侧的残基是减少所要改变的相应位置的数目的有效方法。
用于选择所要变更的相应氨基酸框架位置的其他标准包括(例如)已知的或已预测存在于抗原-CDR界面附近的三维空间中的或已预测调控CDR活性的残基。类似地，可选择已知的或已预测在重(VH)链和轻(VL)链可变区界面之间形成接触的框架残基。所述框架位置通过调控CDR结合区、抗原相互作用或VH和VL相互作用可影响CDR的构型或亲合力。因此，选择这些氨基酸位置来构建用于筛选结合活性的不同群体可用于鉴别框架变化，此框架变化替代对CDR构型具有不利影响的残基或抵偿对框架中别处存在的残基的不利影响。
可选择用于变更的其他框架残基包括难以接近溶剂的氨基酸位置。所述残基通常隐匿在可变区中且因此可以影响CDR的构型或VH和VL相互作用。例如，可从由多肽的氨基酸侧链或由已知的三维结构数据所创造的环境的相对疏水性来预测溶剂的可接近性。
在于供体CDR中选择相应氨基酸位置，及在想要改变的框架区中选择任意相应氨基酸位置之后，在某些或全部所选位置上的氨基酸变化可并入用于受体可变区框架和供体CDR的编码核酸。变更的框架或CDR序列可单独构成及进行测试，或者可同时联合或进行测试(若须要)。
在任意或全部变更位置的可变性可从少数至多数不同氨基酸残基范围，其包括所有二十个自然发生氨基酸或其功能等价物和其类似物。
用以改变的氨基酸位置的数目及定位的选择是灵活的且可取决于用来鉴别具有理想活性(例如相比供体可变区而言基本相同或更高的结合亲合力)的变更可变区的预期用途和所想要的效率。在这方面，并入经变更的可变区群体的变化数目越大，则对展示了理想活性(例如，与供体基本相同的或高于供体的结合亲合力)的至少一个物种的鉴别更有效。或者，如果使用者具有关于某些氨基酸残基或位置不均衡地有助于结合亲合力的影响的经验或实际数据，那么可希望产生集中在那些经鉴别的残基或位置之内或周围的变化的变更可变区的有限群体。
举例来说，若需要CDR移植可变区，则经变更的可变区的大的不同的群体可包括在供体和受体框架与所有单一CDR氨基酸位置变化之间的所有非相同框架区位置。或者中间差异的群体可包括(例如)仅为要合并的近侧非相同框架位置的子群连同所有单一CDR氨基酸位置变化的子群。(例如)通过另外包括所有成对CDR氨基酸位置变化可进一步增加上述群体的差异。相反，集中在预定残基或位置(其在少至一个框架和/或一个CDR氨基酸残基位置处来合并变体残基)上的群体可类似进行构建以用于筛选和鉴别本发明的变更的抗体可变区。若用上述群体，则所述集中群体的差异可通过另外扩展所选择用以改变的位置以包括在框架和CDR区的任一个或全部两者中的其他相应位置来进一步得到增加。在另外采用的框架和CDR的任一个或全部两者中存在从很少变化到许多变化的范围的许多其他联合，所有这些联合将导致经变更的可变区群体，该经变更的可变区可经筛选以鉴别具有所想要活性(例如，对隐蔽胶原位点的结合活性)的至少一个CDR移植经变更的可变区。所属领域的技术人员应知道或者可确定在框架或供体CDR或其子群中哪个所选的残基位置可进行改变以产生用于根据文中所提供的教示和引导筛选和鉴别经变更的抗体的群体。
所有CDR编码核酸和所有所选氨基酸位置变化的同时合并可通过所属领域技术人员已知的多种方法来完成，其包括(例如)重组和化学合成法。举例来说，可通过(例如)以化学方法合成用于与供体CDR编码核酸一起相融合的受体可变区的核苷酸序列和以化学方法在为接纳可变氨基酸残基而选择的位置上结合多数相应氨基酸密码子来实现同时结合。
一种为所属领域中熟知的用于快速及有效地在已知氨基酸序列中产生大量变更或用于产生可变序列或随机序列的不同群体的所述方法是基于密码子的合成法或诱变法。此方法是美国第5,264,563和第5,523,388号专利的主题且在Glaser等人的J.Immunology 149：3903(1992)中也有所描述。简要地说，例如，用于指定遗传密码氨基酸的所有二十个密码子的随机化的偶合反应在分开的反应导管(vessel)中执行且用于特殊密码子位置的随机化通过混合每个所述反应导管中的产物来发生。混合之后，将对应于给全部二十个氨基酸的同等混合物编码的密码子的随机化反应产物分至用于每个随机化密码子在下个位置合成的分开的反应导管。对于全部二十个氨基酸同等频率的合成，可在每个反应导管中进行合成高达两个密码子。
对这些合成方法的变化也存在且包括(例如)在所想要位置的预定密码子合成法和在一个或多个密码子位置的预定序列的有偏向合成法。有偏向的合成法涉及两个反应导管的使用，其中预定密码子或母体密码子在一个导管中合成且随机密码子在第二个导管中合成。可将第二个导管分成多重反应导管，例如上述的用于指定在特殊位置的完全随机的氨基酸的密码子合成的反应导管。或者，例如通过NNG/T核苷酸的偶合(其中N是所有四个核苷酸的混合物)，简并的密码子群体可在第二个反应导管中合成。预定密码子和随机密码子合成之后，混合两个反应导管每一个中的反应产物且接着将其再分至用于在下一个密码子位置合成的另外两个导管。
对用来产生不同数目变体序列的上述基于密码子的合成法的修饰可用于文中所述变体群体的产生。此修饰基于上述两导管方法，其使合成法偏向于母体序列且允许使用者将变体分成含有具有随机密码子变化的特定数目密码子位置的群体。
简要地说，此合成法可通过在每个密码子位置合成之后继续将反应导管分成两个新导管来执行。划分之后，以第二导管开始，将来自每个连续成对反应导管的反应产物进行混合。此混合集合了具有含随机变化的相同数目密码子位置的反应产物。然后通过将第一和最末导管的产物及来自每个连续成对反应导管的最新混合产物分至及再分至两个新导管而使合成继续进行。在一个新导管中合成了母体密码子且在第二个导管中合成了随机密码子。举例来说，在第一密码子位置的合成必然伴有在一个反应导管中母体密码子的合成和在第二反应导管中随机密码子的合成。
对于在第二个密码子位置的合成，将最初的两个反应导管的每一个分成两个导管，其产生两对导管。对于每对导管而言，母体密码子在一个导管合成且随机密码子在第二个导管中合成。若进行线性比对，则将第二及第三导管中的反应产物进行混合以集合在单一密码子位置具有随机密码子序列的那些产物。此混合也将产物群体减至三个，其是用于下一轮合成的起始群体。类似地，对于第三、第四和每个剩余位置而言，可将用于前述位置的每个反应产物群体进行划分且合成了母体及随机密码子。
随基于密码子的合成法的上述修饰之后，在一个、两个、三个及四个位置及其他位置含有随机密码子变化的群体可基于个体的需要方便地进行分离和使用。另外，此合成方案也允许用于随机化序列群体在母体序列的富集，因为仅含有母体序列合成的导管类似地从随机密码子合成中分离出来。
所属领域已熟知的用于在已知氨基酸序列中产生大量变更或者用于产生可变序列或随机序列的不同群体的其他方法包括(例如)简并的或部分简并的寡核苷酸合成。指定全部四个核苷酸单体同等混合物的密码子(成为NNN)导致简并合成。不过，部分简并的合成可使用例如前述NNG/T密码子来完成。所属领域已熟知的其他方法可选择性地使用，例如使用统计学上预定的或杂合的密码子合成，其是美国第5,223,409号和第5,403,484号专利的主题。
一旦变更的可变区编码核酸的群体如上述进行构建，那么他们可经表达产生经变更的可变区多肽的群体，其中对经变更的可变区多肽群体进行筛选其结合亲合力。举例来说，可将经变更的可变区编码核酸克隆至用于繁殖、操纵和表达的适当载体中。所述载体是已知的或者可以由所属领域的技术人员进行构建且应当包括足够用于变更的可变区多肽的转录、翻译、调节和(若须要)分选及分泌的所有表达元素。只要表达核调节元素在各自的宿主体系中起作用那么所述载体适用于原核的或真核宿主体系中的表达。该等表达载体可另外包括用于诱导表达或细胞类型特异表达的调节元素。所属领域的技术人员应知道哪些宿主体系与特殊载体相适合及哪些调节元素或功能元素足够完成以可溶的、分泌的或细胞表面形式的多肽的表达。
适当的宿主细胞包括(例如)细菌和相应的噬菌体表达体系，酵母、鸟、昆虫和哺乳动物的细胞。用于不同宿主体系中所述群体之内的变更可变区或变更可变区多肽的群组的重组表达、筛选、净化的方法已为所属领域熟知且(例如)在Sambrook等人的Molecular Cloning：A Laboratory Manual.Cold SpringHarbor Laboratory，纽约(1992年)和Ausubel等人的Current Protocols in Molecular Biology，(增刊54)，John Wiley & Sons，纽约(2001年)中有所描述。用于经变更的可变区的表达和筛选的特殊载体和宿主细胞的选择已为所属领域的技术人员所知且取决于使用者的偏好。另外，使用细丝状噬菌体载体/宿主体系来表达以可溶或细胞表面形式的杂受体不同群体在所属领域已为人熟知且是美国第5,871,974号专利的主题。
可对经变更的可变区多肽经表达的群体进行筛选以用于鉴别展示了已优化结合活性(例如与供体CDR可变区基本相同或更高的结合亲合力)的一个或多个经变更的可变区物种。可通过所属领域已熟知的不同方法来完成筛选以确定多肽或化合物的结合亲合力。另外，基于通过比较经变更的可变区多肽与供体CDR可变区之间的结合量来确定分子与其伙伴结合的相对亲合力的方法可类似用于鉴别展示了与供体CDR可变区基本相同或更高的结合亲合力的物种。所有所述方法可(例如)在液相或在固相中执行。而且，结合分析的不同格式已为所属领域熟知且包括(例如)固定至过滤器(诸如尼龙、硝化纤维素)、二维比对、酶联免疫吸附法(ELISA)、放射线免疫测定(RIA)、淘筛(panning)和等离子共振。已发现所述方法在(例如)Harlow和Lane，见上，1988年中有所描述。
对于多肽群体(例如由本发明方法产生的变更的可变区群体)的筛选，将变更的可变区的群体固定至过滤器或其他固态基质是有利的，因为大量不同物种可有效地进行筛选抗原结合性。所述过滤器提升(lift)允许用于鉴别展示了相比供体CDR可变区而言基本相同或更高的结合亲合力的经变更的可变区。或者，如果经变更的可变区的群体被表达在细胞或噬菌体的表面上，那么对经固定的抗原进行淘筛可用于有效地筛选具有抗原结合活性的变体或者用于确定群体之内物种的相对结合亲合力。
用于筛选变更的可变区多肽的另一亲合力方法是捕获提升法(capture liftassay)，该方法可用于鉴别具有对配合体的选择性亲合力的结合分子(Watkins等人的(1997年)；WO 99/06834)。此方法采用经变更的可变区至固态支撑物的选择性固定且然后是筛选所述经选择性地固定的变更可变区以用于针对同源抗原或结合伙伴的结合相互作用。选择性固定起增加正测定的结合相互作用的灵敏度的作用，因为变更可变区群体至固态支撑物上的初始固定减少了与不相关分子或存在于反应中的污染物之间的非特异结合相互作用。
用于筛选群体或测定个体经变更的可变区多肽的亲合力的另一种方法是通过表面等离子共振(SPR)。此方法是基于在金属/液体界面激发表面等离子波时发生的现象。光被指向于及反射自未与样品接触的表面侧，且SPR引起角及波长的特定联合上反射强度的减少。生物分子结合事件引起作为SPR信号中的变化来探测的表层折射率的变化。此结合事件可以是受体-配合体对之间的结合结合或结合解离。折射率的变化可基本上实时测定且因此允许测定亲合常数的单个成份。更明确的说，此方法能够精确测定结合速率(kon)和解离速率(koff)。
kon和koff值的测定可用于鉴别经变更的可变区或在治疗上更有效的优化的可变区。举例来说，变更的可变区或其异侧结合片断可以是更有效的，因为其具有(例如)相比展示了相似结合亲合力的可变区或异侧结合片断而言估计为更高的kon值。因为更具高kon值的分子能以较快速率特异地结合及抑制其目标物因而提供了增强的功效。类似地，本发明的分子可以更有效，因为其展示了相比具有相似结合亲合力的分子而言更低的koff值。可观测到用具有更低koff速率的分子观测到的增强功效，因为一旦得以结合，所述分子更慢地自其目标物解离。尽管已描述了关于本发明的经变更的可变区和优化可变区，但是上述用于测定结合及分解速率的方法基本上可适用于任意抗体或其片断以鉴别用于治疗或诊断目的的更有效结合剂。
使用表面等离子共振来测定亲合力(包括结合及分解速率)的方法已为所属领域熟知且可发现在例如和Malmquist的Advances in Biosensors.2：291-336(1992)及Wu等人的Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：6037-6042(1998)中已有所描述。另外，一种已为所属领域熟知的用于测定结合相互作用的装置是在通过Pharmacia Biosensor(瑞典，乌普萨拉)在商业上可购得的BIAcore 2000仪器。
使用任意上述筛选方法及所属领域中熟知的其他方法，通过将探测群体内至少一个经变更可变区结合到其抗原或同源配合体上来鉴别具有优化结合活性的经变更的可变区，例如与供体CDR可变区基本相同或更高的结合亲合力。除了优化对抗原的结合活性，催化活性也包括于本发明抗体中且使用文中所揭示的用于结合亲合力优化的方法来进行优化。因此，可对上述方法进行修饰以包括为筛选其优化催化活性而进行的添加基质和反应物。在相同的筛选中与供体可变区独立或同时进行的比较可鉴别那些具有与供体基本相同或更高结合亲合力的结合剂。所属领域的技术人员应知道或可以确定使用供体可变区、足以鉴别经非特异结合的选择性相互作用的结合条件。
用于在经变更的可变区群体之内鉴别结合物种的探测方法可以是直接的或间接的且可包括例如光发射、放射性同位素、比色染料及荧色物的测定。直接探测包括不用中间物或二次测定程序起作用以评估已结合的抗原或配合体的量的方法。所述方法通常采用其自身由可探测性半族(例如放射性的、光发射的、荧光的、比色的或酶半族)来示踪(label)的配合体。相反，间接探测包括通过中间物或二次测定程序起作用的方法。所述方法通常采用与抗原或配合体特异反应且自身可直接由可探测性半族来示踪或可由第二试剂来探测的分子。举例而言，可使用能够与对配合体特异的第一抗体相互作用的第二抗体，再使用上述用于直接探测的探测方法来探测对该配合体特异的抗体。另外，对于筛选催化抗体的特定实例，基质消失或产物出现可用作结合亲合力或催化活性的间接测定。
在没有与其各自的VH或VL子单位组装成异侧结构的情况下，所述分离的可变区展示了同单一链一样的结合亲合力。同样，VH和VL经变更的可变区多肽群可单独进行表达并筛选其结合活性，例如具有相比CDR供体VH或VL可变区而言基本相同或更高的结合亲合力的优化活性。或者，VH和VL经变更的可变区多肽群可以进行共同表达致使其自组装成异侧经变更的可变区结合片断。可对异侧结合片断群体进行筛选以得到展示了与CDR供体可变区结合片断基本相同或更高结合亲合力的物种。
采用用于同时移植和优化的方法或用于优化的方法，产生具有比约2倍、3倍、4倍、5倍、8倍或10倍更高的增加的亲合力的异侧可变区结合片断是可能的。尤其是，能够产生具有相比供体或母体分子而言高于12倍、15倍、20倍和25倍增加的亲合力及高于50倍、100倍、200倍、500倍或1000倍的亲合力的异侧可变区结合片断。
另外，文中所述用于优化的方法也适用于产生催化异侧可变区片断或用于优化其催化活性。例如通过改变基质结合的结合或解离速率、基质结合亲合力、过渡态结合亲合力及转换率(kcat)或Km来优化催化活性。测定这些特性的方法已为所属领域熟知(参看例如Segel的Enzyme Kinetics.John Wiley & Sons，纽约(1975))。当用于优化异侧可变区结合片断时可将所述方法用于上述方法的筛选步骤。
此外，用于提供供体CDR在抗体受体可变区框架上的结合亲合力的方法适用如由Kabat等人，见上；Chothia等人，见上或MacCallum等人，见上所述的移植CDR。该等方法可类似用于如在Kabat等人，见上；Chothia等人，见上或MacCallum等人，见上中所述的CDR的联合。通常，通过鉴别由一种所属领域已知及文中提出的CDR定义所述的边界来移植可变区CDR。然而，因为所述方法是针对构建和筛选CDR经移植变更的可变区的群体(其可合并在框架及CDR区中的相应氨基酸位置变化)，且所述变体可(例如)抵偿或增加可变区中其他处的氨基酸变化，所以特殊CDR或可变区CDR组的准确边界可以发生变化。因此，不管对于移植的准确CDR区是由Kabat等人、Chothia等人或MacCallum等人所述区还是这些区域任意联合，所述CDR区基本取决于使用者的偏好。
类似地，前述用于优化抗体结合亲合力的方法也适用于以基本上任意可变区的方式使用，对于可变区，编码核酸可以获得或变得可获得。若以用于提供供体CDR结合亲合力的方法，则用于优化结合亲合力的方法在修饰具有人类框架的CDR移植可变区的结合亲合力上有许多应用。此外，所述分子在人类患者中是显著低抗原性的且因此从治疗学上讲在治疗人类疾病中是有价值的。然而，用于优化可变区结合亲合力的本发明方法适用于可变区所有物种。因此，本发明包括衍生自人类、小鼠、大鼠、兔、山羊和小鸡或其他所希望物种的可变区的结合亲合力优化。
本发明方法关于可变区和异侧可变区结合片断已经进行了描述。所属领域技术人员应了解：所有所述方法适用于全部抗体及其功能性片断，也(若须要)适用于除抗原结合可变区之外的区域及功能结构域。
结合速率可在任意非平衡混合物中进行确定，其中非平衡混合物包括例如，通过快速接触结合多肽及配合体或通过快速改变温度来形成的一种混合物。非平衡混合物可以是预平衡混合物。例如，总配合体和总结合多肽在探测腔室中的数目恒定的情况下，通过接触可溶结合多肽和可溶配合体可形成预平衡混合物。以在毫秒时标或更快时提供结合多肽与配合体的快速混合及改变结合多肽或配合体性质的快速探测的形式完成在预平衡混合物中结合速率的测定。停流(stopped flow)及快速淬流(quench flow)仪器(例如上述仪器)提供测定非平衡动力学的便利方式。结合速率也可以在非平衡混合物中进行测定，其中非平衡混合物包括(例如)含有结合多肽、配合体或已与配合体结合的结合多肽的不可溶物种的溶液，或者含有可变浓度的总配合体或总结合多肽的溶液。
可在提供将配合体附着于表面上含结合多肽的溶液的表面流和连续流的形式中来完成非平衡混合物中结合速率的测定，或者反过来，与改变结合多肽、配合体或表面性质的快速探测进行联合致使测定以毫秒时标或更快完成。提供结合速率非平衡测定的形式的实例包括表面等离子共振仪和衰减波仪。
可通过探测存在于经结合或未经结合状态之间的结合多肽或配合体的性质的改变或者当结合多肽与配合体结合时周围环境的变化来完成结合速率的测定。依据结合而改变并可用于测定结合速率的结合多肽或配合体的性质包括(例如)：热的吸收和放出、电磁辐射的吸收和放出、对受体的亲合力、分子重量、密度、质量、电荷、传导率、核磁矩、电子自旋态、极性、分子形状或分子尺寸。当结合多肽与配合体相结合时可改变的周围环境的性质包括(例如)周围溶剂的温度和折射率。
测定预平衡混合物中结合速率的形式包括(例如)停流动力仪和快速淬流仪。停流仪可用于将含有来自分开的储蓄器的结合多肽和配位体的溶液仅在通入探测细胞之前推动至混合腔室中。然后该仪器可探测在一个或多个上述特性中的变化以监控结合事件的进度。快速淬流仪可用于快速混合含结合多肽的溶液与含配合体的溶液，接着在限量时间之后中止结合反应。对于混合后在不同时间通过淬火所产生的经淬流混合物，可探测在一个或多个上述特性中的变化。只要淬火步骤不抑制为测定结合速率而依赖的性质探测，例如，可通过冷冻或添加化学淬火剂来执行淬火。因而，快速淬火仪适用于在(例如)分光镜探测不便利的情形。多种仪器在商业上可自(例如)KinTek公司(宾夕法尼亚，州立大学)和Hi-Tech Scientific(英国，Salisbury)的卖主购得。
用于测定在非平衡混合物中结合速率的形式包括(例如)表面等离子共振和衰减波仪。表面等离子共振和衰减波技术利用了附着于分别含有结合多肽或配合体两种中任一种的生物传感器和溶液的配合体或结合多肽，其从生物传感器表面上穿过。当结合多肽与配合体相结合时可用随时间而定的方式来测定在芯片表面发生的溶液折射率的改变。举例来说，表面等离子共振是基于在金属/液体界面激发表面等离子波时发生的现象。光指向于并反射自未与样品接触的表面侧面，且SPR引起角及波长的特异性结合时反射光强度的减少。生物分子结合事件引起表层折射率的改变，这以SPR信号的变化来探测。结合事件可以是受体-配合体对之间的结合关联或结合解离。基本上可实时测定折射率的变化且因此允许确定亲合常数的个体成份。更具体地说，该方法能够精确测定结合速率(kon)和解离速率(koff)。表面等离子共振仪在所属领域可得到(包括，例如BIAcore仪器、IBIS系统、SPR-CELLIA系统、Spreeta和Plasmon SPR)，且衰减波技术在如(例如)Rich和Myszka的Curr.Opin.Biotech.11：54-61(2000)所述的Iasys系统中是用得到的。
用于测定结合亲合力的另一方法包括相当的ELISA。如文中所揭示，基于半极大结合移位的亲合力改变近似值可用于鉴别相对于野生型的kon和koff值(实例III)。所述方法尤其适用于筛选大量变体，而上述方法适用于结合活性的详细分析。
结合活性可在结合事件进行期间使用(例如)上述所述方法通过以一个或多个离散(discreet)时间间隔测定配合体或结合多肽的性质变化来进行确定。结合事件期间以离散时间间隔确定的测定可用于确定结合速率的定量测定或结合速率的相对测定。结合速率的定量测定可包括(例如)结合速率值或kon值。结合速率或kon的定量值可从依时间而定的数学分析或图形分析来确定。所述分析已为所属领域熟知且包括用于拟合数据到总的指数项及线性项的运算法则或用于计算机模拟以拟合数据到结合模型的运算法则，其(例如)在Johnson的Cur.Opin.Biotech.9：87-89(1998)中有所描述，其以引用的方式并入本文。
如果反应中质传(mass transport)的效应已得到解释，那么可使用如上述该等分析的数学分析和图形分析从含有不可溶物种或可变浓度的总配合体或总结合多肽的混合物来确定结合速率。所属领域技术人员可通过在具有关于质传的相似局限性的情况下比较结合速率或通过根据在所属领域可得的模型(包括，例如Myszka等人的Biophys.J.75：583-594(1998)中所述的模型，其以引用的方式并入本文)调整已计算的结合速率来解释质传。
结合速率或kon的更高值通常表现出改良的治疗效力。因此，定量测定通过允许由不同方法(只要所用方法已为所属领域技术人员了解可得到一致结果)确定的结合多肽结合速率与治疗性控制之间的比较来提供优势。
结合速率的相对测定可包括(例如)在相似条件下与配合体相结合的两个或两个以上结合多肽的结合速率的比较或以预定速率与配合体相结合的结合多肽的结合速率的比较。两个或两个以上结合多肽的结合速率的比较可包括已知结合速率的标准或已知治疗作用的分子。可通过相对于包括(例如)科学文献中可知或资料库中的速率在内的先前已测速率校准该测定来确定用于比较的预定义速率。与预定速率相比较的一个实例是通过使用时间驱动的选择设备在由预定义速率所定义的离散时间间隔与配合体结合的结合多肽物种的选择。
为比较的目的，结合多肽与配合体的结合速率可相对于适合治疗性控制和相同配合体的结合速率来进行确定。也可按照相比对于治疗性控制与配合体的定量结合速率而言对于结合多肽与配合体的定量结合速率来进行比较。相对的或定量的结合速率可通过上述方法来确定。与配合体结合的结合多肽的结合速率的确定可与结合多肽与治疗性控制同时执行或者以分开的时间执行，只要每个分析中条件足够相似以允许有效的比较。因此，为结合多肽确定的结合速率可与先前为治疗性控制确定的结合速率相比较。
具有改良治疗效力的结合多肽可区别于具有对配合体增加的Ka但不具有改良治疗效力的结合多肽。基于Ka鉴别治疗性结合多肽的方法依赖于平衡测定，其中在非平衡条件下完成的缺乏时间相依性的测定用于鉴别具有增加的结合速率且因而具有改良治疗效力的结合多肽是不精确的。根据关系式Ka＝kOn/koff，对于结合多肽与配合体的结合的增加的Ka可归因于kOn或koff的改变。举例来说，如果发生kOn的增加过于补偿了koff的减少，那么具有改良治疗效力的结合多肽可具有减少的Ka。因此，受koff的改变影响的Ka的改变与治疗效力的改变没有明显关系，因为具有改良治疗效力的结合多肽可显示减少的或增加的Ka。
为了优化本发明抗体的结合活性，结合速率的倍数增加可通过kOn的增加来表示。因此，使用文中所述方法，kon可以是约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或10以上。kon可以是至少约1×102M-1s-1、2×102M-1s-1、5×102M-1s-1、1×103M-1s-1、2×103M-1s-1、5×103M-1s-1、1×104NT-1s-1、2×104M-1s-1、5×104M-1s-1、1×105M-1s-1、2×105M-1s-1或3×105M-1s-1。kon也可以增加到至少约5×105M-1s-1、7×105M-1s-1、9×105M-1s-1、1×106M-1s-1、3×106M-1s-1、5×10sM-1s-1、7×10sM-1s-1、9×106M-1s-1或1×107M-1s-1或以上。而且，导致了改良治疗效力的kon增加不依赖于Ka的改变对结合多肽的影响。kon增加的结合多肽可具有与其母体多肽的Ka相似的Ka值或低于其母体多肽的Ka的Ka值。
本发明也提供给本发明抗体和CDR编码的核酸。本发明还提供编码小鼠抗体HUIV26(SEQ ID NO：1及3)和HUI77(SEQ ID NO：5及7)(参看图2和图3)的核酸。另外提供的是编码HUIV26 CDR(SEQ ID NO：20、22、24、26、28和30)及HUI77 CDR(SEQ ID NO：32、34、36、38、40和42)的核酸。所述核酸包括具有给CDR中任意或全部氨基酸编码的简并密码子的核酸。举例来说，本发明提供编码HUIV26 CDR的核酸：VL CDR1，SEQ ID NO：19；VL CDR2，SEQ IDNO：21；VL CDR3，SEQ ID NO：23；VH CDR1，SEQ ID NO：2S；VH CDR2，SEQID NO：27和VH CDR3，SEQ ID NO：29。本发明也提供对HUI77 CDR编码的核酸：VL CDR1，SEQ ID NO：31；VL CDR2，SEQ ID NO：33；VL CDR3，SEQ ID NO：35；VH CDR1，SEQ ID NO：37；VH CDR2，SEQ ID NO：39和VH CDR3，SEQ IDNO：41。也包括此所述核酸的简并形式以使其编码引证为HUIV26的SEQ IDNO：20、22、24、26、28和30及HUI77的SEQ ID NO：32、34、36、38、40和42的氨基酸序列。
进一步提供对含有一个或多个氨基酸替换的HUIV26 CDR或HUI77 CDR编码的核酸。举例来说，本发明提供对具有单一或多种氨基酸替换(如文中所揭示)的HUIV26和HUI77的CDR进行编码的核酸。如果编码具有一个或多个氨基酸替换的CDR的核酸衍生自(例如)HUIV26的SEQ ID NO：19、21、23、25、27或29或者HUI77的SEQ ID NO：31、33、35、37、39或41中之一，那么所述可通过任何所述氨基酸的相应的简并密码子来编码这些氨基酸替换。对所述CDR变体编码的核酸也包括在任意或全部野生型氨基酸位置的简并密码子。
应用期间，不同的核酸和寡核苷酸引物(除自然发生的核苷酸A、C、G、T或U之外)是指标准缩略语：R＝G或A；Y＝T/U或C；M＝A或C；K＝G或T/U；S＝G或C；W＝A或T/U；B＝G，C或T/U；D＝A，G或T/U；H＝A，C或T/U；V＝A，G或C；N＝任意核苷酸。
本发明抗体对隐蔽胶原表位具有结合活性。已经显示出HUIV26和HDI77抗体瞄准血管生成的脉管系统(参看Xu等人，见上，2001；WO 00/40597)。因此，本发明的与隐蔽胶原表位特异性结合的经移植的HUIV26和HUI77抗体可同样瞄准血管生成脉管系统。单克隆抗体HUIV26和HUI77及其在文中所揭示的移植形式的最显著和重要的方面之一是其特异性方面。预期本发明抗体的全身投用具有最小(即便有)毒副作用，因为通过HUIV26和HUI77抗体识别的隐蔽表位暴露于成熟的天然三螺旋胶原，但是仅在变性过程中暴露，例如热变性或蛋白水解变性。因此，预期有(即便有)正常生理学条件下微小的结合。
而且，HUIV26和HUI77所结合的隐蔽胶原结构域代表用于治疗众多新血管疾病的新颖治疗目标，包括肿瘤生长和转移、糖尿病性视网膜病及其他相关眼病，诸如黄斑变性、牛皮癣和风湿性关节炎。与血管生成有关的其他典型疾病包括(但不限于)炎性病症，诸如免疫和非免疫炎症、慢性关节风湿病和牛皮癣；与不合适的或不合时宜的脉管侵袭有关的病症，诸如糖尿病视网膜病、新血管性青光眼、再狭窄、动脉粥样硬化斑和骨质疏松症中的毛细管增殖；及与癌症有关的病症，诸如实性肿瘤、实性肿瘤转移、血管角质瘤、晶体后纤维组织增生症、血管瘤、卡波济式肉瘤(Kaposi′s sarcoma)等需要血管形成以支撑肿瘤生长的癌症。其他典型肿瘤包括黑素瘤、癌、肉瘤、纤维肉瘤、神经胶质瘤和星形细胞瘤等。
因此，本发明方法可用于治疗宦游包括上述疾病的与血管生成有关的疾的个体。所述方法可用于改善与疾病相关的征兆和症状。举例来说，在癌症治疗的情况下，所述方法可用于抑制肿瘤生长。所属领域的技术人员应知道或可容易确定疾病相关的适合于使用本发明抗体来测定治疗应用效能的适当症状或征兆。
本发明抗体也可用作初期探测与侵袭性肿瘤生长和转移有关的异常新血管形成的重要诊断剂及成像剂。本发明抗体也可用于肿瘤的分级和分段，因为与良性病变相反的侵袭性肿瘤很可能与周围基底膜的降解有关。
因此，本发明提供瞄准血管生成脉管系统的方法，其包括投用对隐蔽胶原表位具有特异结合活性的抗体或其功能性片段，其中该抗体或其功能性片断是本发明抗体。举例来说，如文中所揭示，所述抗体可包括HUIV26和HUI77抗体的一个或多个CDR，包括野生型CDR或其变体。瞄准血管生成脉管系统的方法可用于治疗和/或诊断目的。
为治疗目的，该抗体或其功能性片断自身可用作治疗剂或可另外包括治疗性半族。在治疗性半族情况下，该半族可以是诸如化疗剂、细胞毒素剂、毒素或抗血管生成剂的药物，其是指减少或抑制血管生成的分子。举例来说，细胞毒素剂可以是放射性核素或化学化合物。可用作治疗剂的典型放射性核素包括(例如)X射线发射体或γ射线发射体。另外，半族可以是含有诸如药物或核酸的试剂的药物传送媒介，例如隔成腔室的微装置、细胞、脂质体或病毒。
典型的治疗剂包括(例如)：连接至抗体的蒽环霉素(anthracyclin)、阿霉素，且抗体/阿霉素联合在治疗肿瘤中治疗学上已经是有效的(Sivam等人的Cancer Res.55：2352-2356(1995)；Lau等人的Bioorg.Med.Chem.3：1299-1304(1995)；Shih等人的Cancer Immunol.Immunother.38：92-98(1994))。类似地，包括伊达比星(idarubicin)和道诺霉素(daunorubicin)的其他蒽环霉素以化学方法联合至抗体，其传送有效剂量的试剂至肿瘤(Rowland等人的Cancer Immunol.Immunother.37：195-202(1993)；Aboud-Pirak等人的Biochem. Pharmacol.38：641-648(1989))。
除蒽环霉素之外，已经将诸如美法仑(melphalan)和瘤可宁(chlorambucil)的烷化剂连接至抗体产生了治疗学上有效的联合(Rowland等人的Cancer Immunol.Immunother.37：195-202(1993)；Smyth等人的Immunol.Cell Biol.65：315-321(1987))，如同(诸如)长春地辛(vindesine)和长春碱(vinblastine)的长春花生物碱已连接至抗体一样(Aboud-Pirak等人，见上，1989；Starling等人的Bioconj.Chem.3：315-322(1992))。类似地，抗体与抗代谢物(例如5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶核苷及其衍生物)的联合在治疗肿瘤上已经是有效的(Krauer等人的Cancer Res.52：132-137(1992)；Henn等人的J.Med.Chem.36：1570-1579(1993))。当其他的化疗剂与不同抗体一起联合投用时，所述化疗剂在治疗上也是有效的，其中所述化疗剂包括顺氯氨铂(cis-platinum)(Schechter等人的Int.J.Cancer 48：167-172(1991))、氨甲喋呤(methotrexate)(Shawler等人的J.Biol.Resp.Mod.7：608-618(1988)；Fitzpatrick和Garnett的Anticancer Drug Des.10：11-24(1995))和丝裂霉素C(Dillman等人的Mol. Biother.1：250-255(1989))。治疗剂也可以是毒素，例如蓖麻毒。
治疗剂也可以是物理的、化学的或生物学的物质(例如脂质体、微胶囊、微泵或其他隔成腔室的微装置)，其可用作(例如)药物传送系统。通常，所述微装置应当是无毒的且(若须要)生物可降解的。含有试剂的不同半族(包括微胶囊)和使半族(包括隔成腔室的微装置)连接至本发明抗体的方法已为所属领域熟知且在市面上有售(参看，例如“Remington′s PharmaceuticalSciences”第18版.(Mack Publishing Co.1990)，第89-91章；Harlow和Lane，Antibodies：A laboratory manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press 1988))。
为诊断目的，抗体或其功能性片断可另外包括可探测性半族。可探测性半族可以是(例如)放射性核素、荧光的、磁性的、比色的半族等等。为体内诊断目的，诸如发射了放射线核素(例如铟-111或锝-99)的γ射线的半族可连接至本发明抗体，且在投用予主体之后，可使用固体闪烁探测器来进行探测。类似地，发射放射性核素的正电子(例如碳-11)或顺磁性自旋示踪物(例如碳-13)可连接至该分子，且在投用予主体之后，该半族的定位可分别使用正电子发射横断层摄影(positron emission transaxial tomography)或磁共振成像(magneticresonance imaging)来进行探测。所述方法可鉴别原发性肿瘤和转移性病变。
为诊断目的，本发明抗体可用于确定组织中或体液中变性胶原的含量。变性胶原的含量可在(例如)通过组织活检而从个体获得的组织样品中进行确定。典型的体液包括(但不限于)血清、血浆、尿、滑液等等。
本发明也提供通过投用抗体或其功能性片断来抑制血管生成的方法，其中该抗体或其功能性片断对隐蔽胶原表位具有特异结合活性。举例来说，本发明抗体可进行投用以使个体组织中的血管生成得到抑制。本发明另外提供通过投用发明抗体来瞄准肿瘤的方法。本发明也提供通过投用本发明抗体或其功能性片断来抑制肿瘤生长的方法。
本发明抗体也可用于体内或体外诊断应用。因此，本发明提供通过使血管生成脉管系统与本发明的抗体或其功能性片断相接触来探测血管生成脉管系统的方法。血管生成脉管系统可在体内通过将本发明抗体单独或附着于可探测性半族来投用至个体来成像。因而该血管生成脉管系统可在体内进行探测。或者，可将抗体投予从个体获得的组织(例如组织活检)以使得本发明抗体可在体外用于诊断目的以探测血管生成脉管系统。
可通过许多已为人熟知的用于偶联或联合半族的方法中之任一种来使治疗性半族或可探测性半族偶联至本发明抗体或其功能性片断。当然，在不干扰或不抑制抗体结合活性(即结合隐蔽胶原位点的能力)之下所述偶联方法允许治疗性半族或可探测性半族的附着。用于使半族联合于本发明抗体或其功能性片段的方法已为所属领域技术人员所熟知(参看，例如Hermanson的Bioconjugate Techniques.Academic Press，San Diego(1996))。
当将本发明抗体投于主体时，其作为含有(例如)抗体和医药上可接受载剂的药用组合物来投用。如文中所揭示，该抗体可偶联到治疗性半族或可探测性半族。医药上可接受的载剂已为所属领域熟知且包括(例如)诸如水或生理学上的缓冲盐水的水溶液或其他溶剂或媒介(例如乙二醇、甘油)或油类(例如橄榄油)或可注射的有机酯。
医药上可接受的载剂可含有(例如)起稳定或增加该联合的吸收的生理学上可接受的化合物。所述生理学上可接受的化合物包括(例如)：碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质或其他的稳定剂或赋形剂。所属领域技术人员应知道：医药上可接受的载剂(包括生理学上可接受的化合物)的选择(例如)取决于组合物的投用路线。医药组合物也可包括诸如癌症治疗剂的试剂。
所属领域技术人员应知道：含有本发明抗体的医药组合物可通过不同路线(举例来说，包括经口方式或非经肠道方式，例如静脉注射方式)向主体投用。该组合物可通过注射或通过插管法来投用。该医药组合物也可以是连接至脂质体或其他聚合物基体的抗体，其可将(例如)化疗剂的药物并入其中(Gregoriadis，Liposome Technology.第I-III卷，第2版(CRC Press，Boca RatonFL(1993)，其以引用的方式并入本文)。举例来说，由磷脂或其他脂质组成的脂质体是无毒的、生理学上可接受的且可代谢的载剂，其制备和投用相对简单。
对于文中所揭示的治疗或诊断的方法而言，向主体投用有效量的抗体和治疗性半族。文中所用术语“有效量”表示产生想要影响的医药组合物的量。有效量常常取决于是否投用抗体本身或抗体是否连接至半族以及半族的类型。因此，与为治疗目的而所投用的放射性药物/抗体联合的量相比而言，需要更少量经放射性同位素示踪的分子用于成像。用于特定目的的特殊抗体/半族的有效量可利用所属领域技术人员熟知的方法进行确定。所属领域技术人员可针对治疗或诊断目的的有效量而容易确定本发明抗体的适当剂量。
为治疗或体内诊断目的，只要该投用对所想要的目的有效，那么当然可使用多种投用方法的任一种。所述投用方法包括(例如)：静脉内方式、经皮肤方式、滑膜内方式、肌肉内方式、瘤体内方式、眼内方式、鼻内方式、鞘内方式、局部方式、经口方式等等。所属领域技术人员可容易确定取决于所想要治疗结果或所想要诊断目的的合适投用方式。
而且，为治疗或诊断应用，本发明抗体当然通常投于哺乳动物，例如人类。本发明抗体对于家畜或农业目的的应用包括其他哺乳动物，例如非人灵长类、猪、牛、马、山羊、绵羊、骡、驴、狗、猫、兔、小鼠、大鼠等等。
当然，文中所揭示的使用本发明抗体的任意治疗方法可与其他治疗方法联合使用。举例来说，本发明抗体(抗体自身或附着于治疗剂的抗体)可与其他治疗处理体系(regimen)同时投用或相继投用。例如，本发明抗体可单独投用或与另一治疗处理联合投用，包括文中所揭示的任意治疗药物以及已为所属领域技术人员熟知的用于治疗特殊疾病的其他药物。举例来说，在治疗癌症情况下，本发明抗体可与另一化疗剂(例如药物或放射性核素)同时或相继投用。类似地，本发明抗体可与例如外科手术的其他处理体系相联合，其中在手术前、手术中或手术后投用该抗体。若须要，所属领域技术人员应知道或可容易确定待与本发明抗体联合使用的理想治疗处理。因此，本发明抗体可与其他治疗体系联合投用，包括(但不限于)化疗法、放射疗法、外科手术等等。
本发明额外提供使用本发明抗体来抑制转移的方法。该方法可包括投用对隐蔽胶原表位具有结合活性的抗体或其功能性片段的步骤。该抗体可以是(例如)包括在抗体HUIV26和HUI77的一个或多个重链或轻链CDR中具有至少一个氨基酸替换的一个或多个CDR的抗体。文中所用的抑制转移是指减少自原发性肿瘤位点远离的转移位点的数目和/或尺寸。该抑制转移的方法可涉及到使用阻碍了肿瘤细胞至隐蔽胶原表位(该表位在通过由肿瘤细胞分泌的胶原降解酶的作用来重塑组织之后暴露)的粘附的本发明抗体。
如文中所揭示，在一个或多个CDR具有一个或多个氨基酸替换的HUI77的变体抑制了黑素瘤细胞在体内的增殖(实例VI)。本发明抗体可以阻断被传送至肿瘤细胞的生存信号或增殖信号的通道或抑制所传送信号对肿瘤细胞的结合。因此，本发明也提供通过投用对隐蔽胶原表位具有结合活性的本发明抗体来瞄准肿瘤细胞的方法，其中该抗体能够通过隐蔽胶原位点阻碍被传送至肿瘤细胞的生存信号或增殖信号的通道。
对于抑制血管生长的方法，该血管生成脉管系统可能与肿瘤有关。本发明方法也可用于直接、单独或与抑制肿瘤的血管生成脉管系统联合来抑制肿瘤生长。本发明方法还可用于单独或与抑制肿瘤血管生成脉管系统及/或肿瘤生长联合抑制转移。典型肿瘤包括(但不限于)文中所述肿瘤，包括黑素瘤、癌、肉瘤、纤维肉瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤等等。可如先前所述，使用(例如)诸如大鼠角膜微区血管生成分析法、小鸡胚胎肿瘤生长法或SCID小鼠肿瘤生长分析法(该等方法在Xu等人，见上，2001中有所描述)的方法，或者使用其他为人所熟知的用于测定血管生成抑制性、肿瘤生长抑制性或转移抑制性的分析来执行用于检测HUIV26或HUI77变体对抑制血管生成或抑制肿瘤生长的效果的方法。
本发明方法也可用于抑制非肿瘤血管生成脉管系统。对非肿瘤血管生成脉管系统的所述应用可包括发炎并在其中发生血管生成的组织。适合于用本发明抗体进行治疗的与血管生成脉管系统相关的典型非肿瘤疾病包括(但不限于)文中所揭示的疾病，包括关节炎、眼病、视网膜疾病、血管瘤等等。本发明抗体也可用于抑制牛皮癣、黄斑变性、再狭窄等，或者与隐蔽胶原表位(本发明抗体对其具有结合活性)的可接近性增加有关的任意肿瘤或非肿瘤疾病。
当然，在文中所规定的本发明定义之内也提供了基本上不影响本发明各种实施例活性的修饰。因此，以下实例旨在说明而非限制本发明。
实例I
HUIV26和HUI77抗体的重链及轻链可变区的克隆
本实例描述HUIV26和HUI77抗体可变区的克隆。
自表达这些小鼠单克隆抗体的杂交瘤来克隆HUIV26和HUI77抗体的可变区并进行定序。简要地说，使用Direct mRNA Micro盒(kit)(Qiagen；Valencia CA)从各自小鼠杂交瘤细胞分离总mRNA。使用SuperscriptPreamplification System(GibcoBRL/Invitrogen；Carlsbad CA)自mRNA合成了第一链cDNA。抗体可变区序列通过聚合酶链反应(PCR)得到扩增，其使用为小鼠轻链或重链信号序列而设计的一组5′引物与小鼠VL的κ链恒定区或VH序列IgM CH1区域的单一3′引物配对。用于小鼠抗体重链及轻链信号肽的5′引物的序列和恒定区引物序列显示于图1。小鼠κ轻链恒定区的3′引物(引物2650；SEQ ID NO：212)对应于氨基酸115-123。小鼠IgM CH1区域的3′引物(引物2656；SEQ ID NO：213)对应于氨基酸121-114。小鼠IgM CH1区域的3′引物(引物2706；SEQ ID NO：214)对应于氨基酸131-124。
自聚合酶链反应分离出DNA片断，得到约400bp长度的主产物。将所述DNA片断克隆至pCR2.1载体。这些插入的DNA片断用前向及反相13M引物来定序。所述DNA序列与抗体序列数据库进行比较。确定HUIV26和HUI77抗体的N末端氨基酸序列，且所述DNA片断序列也与相应抗体的N末端氨基酸序列相比较。
用5′引物mK2(引物2664；SEQ ID NO：185)和3′引物2650(SES ID NO：212)来克隆编码核酸的HUIV26 VL。HUIV25 VL的部分序列是ATCTTCTTGCTGTTCTGG (SEQ ID NO：215)，其中MK2引物加了下划线，且该部分序列为斜体的小鼠信号肽译码。用5′引物MH12(引物2731；SEQ ID NO：203)和3′引物2706(SEQ ID NO：214)来克隆编码核酸的HUIV26 VH。
编码核酸的HUI77 VL用5′引物mK1(引物2663；SEQ ID NO：184)和3′引物2650(SEQ ID NO：212)进行克隆。HUI77 VL的部分序列是TTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTCCAGCAGT(SEQ ID NO：216)，其中mK1引物加了下划线且该部分序列为斜体的小鼠信号肽译码。编码核酸的HUI77用5′引物MH15(引物2734；SEQ ID NO：206)或MH16(引物2735；SEQID NO：207)和3′引物2656(SEQ ID NO：213)来克隆。
HUIV26和HUI77的重链及轻链核苷酸的序列和氨基酸序列分别显示于图2和图3。使用Kabat编号系统，见上，为每个HUIV26和HUI77抗体鉴别了重链及轻链的CDR(在图2C和图3C中加了下划线)。
HUI77 VL核苷酸序列(SEQ ID NO：9)与人类框架融合DPK13/JK1(SEQ IDNO：17)核苷酸序列的比对显示于图3D。相应轻链氨基酸序列分别引证为HUI77及DPK13/JK1的SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：18。
所述实例描述小鼠抗体HUIV26和HUI77的克隆和序列。
实例II
HUIV26和HUI77抗体的CDR变体库的产生
本实例描述用于CDR优化的HUIV26和HUI77抗体CDR变体库的产生。
抗体HUIV26和HUI77的CDR3区域通过产生CDR变体库来优化。轻链CDR3和重链CDR3的引物用于产生CDR3变体库，其中合成该引物以编码CDR3中一个或多个位置的一个以上氨基酸。合成编码CDR3变体的引物之后，将所述CDR3区域组装至轻链(VL)和重链(VH)区。
简要地说，使用PCR或引物延长连接，将HUI77和HUIV26抗体的人源化VL和VH基因与本别显示于图4A和图5A的引物进行组装。。含CDR3突变的可变区基因通过用对应所述CDR的突变型引物群组替代野生型CDR3引物(IV26-17、IV26-h7、I77-17或I77-h7)来进行组装。然后使用对于VL的引物B-pelB和224与的和对于HV基因的B-phA和1200a通过PCR来将经组装的可变区扩增和不对称地生物素化至正链(plus strand)上。用于扩增人源化的VL和VH序列及分离负链DNA的引物是：B-pelB，Biotin-TTA CTC GCT GCC CAA CCA GCC ATGGCC(SEQ ID NO：220)；224，GAC AGA TGG TGC AGC CAC AGT(SEQ IDNO：221)；B-phoA，Biotin-TTA CTG TTT ACC CCT GTG ACA AAA GCC(SEQID NO：222)；及1200a，GAA GAC CGA TGG GCC CTT GGT(SEQ ID NO：223)。
将经组装的VL和VH区域通过诱变引至Fab表达载体。简要地说，在将PCR产物结合至经抗生素蛋白(NeutrAvidin)联合的磁珠之后，分离所述未经生物素化的负链，并通过杂交诱变将其引至Fab表达载体IX-104CSA(Kristensson等人，Vaccines 95，第39-43页，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold SpringHarbor(1995)；Kunkel，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：488-492(1985)；Wu等人，J.Mol.Bio.294：151-162(1999))。
为每个HUI77和HUIV26抗体构建了三个人源化CDR3突变库。这三个文库引入了随机突变但是不同于CDR3突变。一个文库仅在LCDR3中有突变，第二个文库仅在HCDR3中有突变，及第三个文库在LCDR3和HCDR3中都有突变。
可在HUIV26和HUI77抗体的CDR1和CDR2上执行与上述用于CDR3诱变的方法基本相同的方法。组装至Fab表达载体之后，含有HUIV26和HUI77变体CDR的该等Fab在细菌中进行表达且测试其对变性胶原的结合性。用过滤器提升筛选法和ELISA筛选突变体文库。基本上如先前所述执行所述方法(Huse等人，J.Immunol.149：3914-3920(1992)；Watkins等人，Anal.Biochem.253：37-45(1997))。简要地说，用热变性的人类胶原I或IV预涂覆硝化纤维膜并将其用于从噬菌体盘提升大肠杆菌(E.coli)表达的变体FAB。然后由抗体来培养该等硝化纤维膜，抗人类κ链或抗血球凝集素(HA)标记物中的任一个结合至碱性磷酸酶以探测被结合的变体Fab。为结合至变性的生物化素胶原I和IV，再次通过单点ELISA(Watkins等人，见上，1997)相对地筛选阳性克隆。通过ELISA来表征有益的变体对天然的胶原和热变性形式的胶原的结合性。如ELISA所展示，将有益突变确定为相对于相应的野生型Fab而言具有与变性胶原结合的更高亲合力的突变。
图4B和图5B所显示的分别是在HUIV26和HUI77抗体中的有益CDR突变的概总。图4B概述了在HUIV26的重链CDR1、CDR2和CDR3及轻链CDR1和CDR3中的有益单一氨基酸突变。具有单一氨基酸替换的典型HUIV26变体是12F10Q变体，其展示了如通过基于自ELISA滴定获得的半极大结合中移位的倍数改良所估计的0.055的kon和0.049的koff。
图5B概述了在HUI77的重链CDR1、CDR2和CDR3及轻链CDR1、CDR2和CDR3中的有益单一氨基酸突变。如我们所看到，发现各种CDR中的许多单一氨基酸突变维持或提高了对隐蔽胶原位点的结合。
所述实例描述了具有有益突变的HUIV26和HUI77的CDR变体。
实例III
具有提高活性的HUIV26和HUI77抗体的组合变体的鉴别
本实例描述合并了HUIV26和HUI77中各种有益CDR突变的组合变体的产生及鉴别。
为了进一步优化HUIV26和HUI77抗体CDR变体，产生合并了含一个或多个突变的至少两个CDR的组合变体并测试其对隐蔽胶原位点的结合。使用具有编码如实例II所述的变体氨基酸的一个或多个位置的引物合成了组合变体。所用的所述引物显示于图6和图7。
图6和图7所示的分别是HUIV26和HUI77抗体的有益组合变体的概总。图6和图7所示的kon和koff值(“SPEKon”和“SPEKoff”)估计为基于从ELISA滴定获得的半极大结合中的移位的变体倍数改良。也显示了具有相同的有益CDR突变但具有不同框架序列的几个变体。所述结果显示：有益CDR突变可移植至多种框架且可保持或具有改良的结合活性。
所述实例显示产生了HUIV26和HUI77的组合CDR变体。鉴别出具有相对于各自抗体野生型形式亲合力增加的许多变体。
实例IV
HUIV26和HUI77变体的结合活性和特异性
本实例描述HUIV26和HUI77抗体对天然及变性胶原的结合活性和特异性。
确定了野生型及经选择的典型HUIV26和HUI77抗体的活性和特异性。如图8所示，确定了IX-IV26、含野生型HUIV26 CDR的Fab、及HUIV26变体2D4H1-C3和DhuG5的活性和特异性。测试了该等抗体对变性胶原IV(图8A)、变性胶原I(图8B)和天然胶原IV(图8C)的结合。所述抗体中没有一个对天然胶原IV(图8C)具有显著结合活性。三个抗体对变性胶原IV(图8A)都展示了结合活性。但是，2D4H1-C3及DhuG5变体展示了相对于IX-IV26(图8A)而言显著增加的结合活性。在抗体的最高测定浓度时，IX-IV26对变性胶原I没有展示显著的结合活性，而且2D4H1-C3和DhuG5展示了低结合活性(图8B)。该等结果表明：所述HUIV26变体具有相似于野生型HUIV26的结合活性和特异性并维持了对隐蔽胶原表位的活性和特异性。所述结果进一步显示：具有变异CDR的变体可具有相对于野生型而言维持的或增加的结合亲合性。
如图9所示，确定了IX-I77、含有野生型HUI77 CDR的Fab及HDI77变体Qh2b-B7和QhuD9的活性和特异性。测试所述抗体对变性胶原I(图9A)、变性胶原IV(图9B)和天然胶原I(图9C)的结合，且结果表明：所述变体展示出与野生型相似的结合特异性。以较高浓度时，尽管变体QhuD9对天然胶原展示了适中的结合活性，但是IX-I77和Qhu2b-B7都没有对天然胶原I展示出显著的结合活性。所述抗体对变性胶原I(图9A)和变性胶原IV(图9B)都展示了结合活性。但是，Qhu2b-B7和QhuD9变体对变性胶原I和IV都展示了相对于IX-I77而言显著增加的结合活性。该等结果表明：具有突变的CDR的变体可具有相对于野生型而言维持的或增加的结合亲合力。
为了进一步检验CDR突变对结合活性的影响，选择HUIV26变体DhuH8并以两种形式将其表达为Fab和免疫球蛋白(IgG)。确定了这两种形式对天然(n-IV)和变性(d-IV)人类胶原IV的结合活性。如图10所示，Dhu8变体的Fab和IgG形式都未展示出对天然胶原IV的显著结合。Fab形式对变性胶原IV展示了结合活性，且IgG形式的结合亲合力显著增加。所述结果表明：具有相对野生型而言一个或多个CDR氨基酸替换的HUIV26变体可展示出对隐蔽胶原表位的结合且在IgG形式中相对抗体变体的Fab形式而言可显著增加该结合亲合力。
所述结果表明：具有一个或多个CDR氨基酸替换的HUIV26和HUI77变体可展示相对野生型而言相似的结合特异性及增加的结合亲合力。
实例V
具有优化CDR的经移植的HUIV26和HUI77抗体的产生
本实例描述合并了有益CDR突变的人源化的HUIV26和HUI77抗体的产生。
如实例II和III所述鉴别具有有益突变的CDR变体。一旦有益CDR变体得到鉴别，那么将该CDR变体移植至人类框架序列。除具有有益突变的CDR变体之外，其他的CDR可以是各自抗体的野生型序列或者一个或多个变体CDR。至少一个CDR是含有有益突变的变体。举例来说，如果经接枝的抗体含有重链和轻链，那么至少一个重链或轻链CDR会具有相对相应野生型而言至少一个氨基酸突变。
选择人类框架序列作为移植的接受者。该人类框架可与供体抗体框架序列密切相关或者可相对偏离母体供体抗体。一旦选择人类框架用于移植，那么合成重叠寡核苷酸来编码所选人类框架和适当供体CDR，包括含至少一个有益突变的至少一个变体CDR。重叠寡核苷酸用于组装编码包括所选人类框架、CDR变体和其他适当的CDR的可变区的核酸以产生对隐蔽胶原位点具有结合活性的抗体或片断。
将经组装的可变区克隆至表达载体，例如诸如实例II所述载体的Fab表达载体，并如实例II和III所述来测试对变性胶原的结合活性。
所述实例描述了含有HUIV26和HUI77抗体的有益CDR突变的人源化的抗体的产生。
实例VI
通过变体HUI77抗体对B16黑素瘤细胞增殖的抑制
本实例描述HUI77变体QH2b对B16黑素瘤细胞增殖的影响。
将指定QH2b的人源化Fab(HUI77抗体的QH2b-B7变体)设计到全长IgG1抗体(QH2b-IgG1)。使该QH2b-IgG1抗体在NSO细胞的哺乳动物细胞培养中进行表达并提纯该抗体。
经提纯的QH2b-IgG1用于体外细胞增殖分析。将B16黑素瘤细胞覆盖于变性的人类I型胶原上。将QH2b-IgG1(100μg/ml/天)添加至培养皿并在所指示的时间确定细胞数目(图11)。作为对照，所述细胞未用抗体处理。
如图11所示，B16黑素瘤细胞在变性的I型胶原上增殖，如经3天时细胞数目的增加所示。经3天时间，用QH2b-IgG1处理的B16黑素瘤细胞培养基本上未展示细胞生长，其表明：在HUI77变体QH2b-IgG1存在下所述黑素瘤细胞不增殖。
所述结果表明：具有一个或多个CDR氨基酸替换的HDI77变体可抑制B16黑素瘤细胞的细胞增殖。
本申请案自始至终引用了各种出版物。这些出版物的揭示内容以引用的方式全部并入本申请案以便于更充分地描述本发明在所属领域的发展水平。尽管已经参考以上所提供的实例来描述本发明，但是应了解：在不脱离本发明精神的情况下可进行各种改动。
序列表
<110>细胞基质公司
<120>人源化的胶原抗体及相关方法
<130>66797-164(IX 5532)
<140>PCT/US02/38147
<141>2002-11-26
<150>US 09/995,529
<151>2001-11-26
<160>358
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>339
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(339)
<400>1
gac att gtg atg aca cag tct cca tct ttg ttg agt gtg tca gca gga  48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Val Ser Ala Gly
 1               5                   10                  15
gag aag gtc act atg agc tgc aag tcc agt cag agt ctg tta aac agt  96
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
             20                  25                  30
gga aat caa aag aac tac ttg gcc tgg tac cag cag aaa cca ggg cag  144
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
         35                  40                  45
cct cct aaa ctg ttg atc tat ggg gca tcc act agg gaa tct ggg gtc  192
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
     50                  55                  60
cct gat cgc ttc aca ggc agt gga tct gga acc gat ttc act ctt atc  240
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ile
 65                  70                  75                  80
atc agc agt gtg cag gct gaa gac ctg gca gtt tat tac tgt cag aat  288
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
                 85                  90                  95
gat cat agt tat ccg tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata  336
Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
aaa                                                              339
Lys
<210>2
<211>113
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Val Ser Ala Gly
 1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
            20                  25                  30
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        35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ile
65                  70                  75                  80
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                85                  90                  95
Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys
<210>3
<211>360
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(360)
<400>3
gag gtg aag ctt ctc gag tct gga ggt ggc ctg gtg cag cct gga gga  48
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                   10                  15
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            100                 105                 110
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Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
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<210>4
<211>120
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>4
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
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                85                  90                  95
Ala Arg Pro Val Asp Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>5
<211>305
<212>DNA
<213>智人
<400>5
gac atc gtg atg acc cag tct cca gac tcc ctg gct gtg tct ctg ggc  48
gag agg gcc acc atc aac tgc aag tcc agc cag agt gtt tta tac agc  96
tcc aac aat aag aac tac tta gct tgg tac cag cag aaa cca gga cag  144
cct cct aag ctg ctc att tac tgg gca tct acc cgg gaa tcc ggg gtc  192
cct gac cga ttc agt ggc agc ggg tct ggg aca gat ttc act ctc acc  240
atc agc agc ctg cag gct gaa gat gtg gca gtt tat tac tgt cag caa  288
tat tat agt act cct cc                                           305
<210>6
<211>113
<212>PRT
<213>智人
<400>6
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
 1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys
<210>7
<211>294
<212>DNA
<213>智人
<400>7
gag gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gtc cag cct ggg ggg  48
tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttt agt agc tat  96
tgg atg agc tgg gtc cgc cag gct cca ggg aag ggg ctg gag tgg gtg  144
gcc aac ata aag caa gat gga agt gag aaa tac tat gtg gac tct gtg  192
aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aac gcc aag aac tca ctg tat  240
ctg caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac acg gct gtg tat tac tgt  288
gcg aga                                                          294
<210>8
<211>120
<212>PRT
<213>智人
<400>8
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Pro Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>9
<211>336
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(336)
<400>9
gat gtt ttg atg acc caa act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga  48
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
 1               5                   10                  15
gat caa gcc tcc atc tct tgc aga tct agt cag agc att gta cat agt  96
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
             20                  25                  30
aat gga aac acc tat tta gaa tgg tac ctg cag aaa cca ggc cag tct  144
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
         35                  40                  45
cca aag ctc ctg atc tac aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggt gtc cca  192
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
     50                  55                  60
gac agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc  240
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
 65                  70                  75                  80
agc aga gtg gag gct gag gat ctg gga gtt tat tac tgc ttt caa ggt  288
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
                 85                  90                  95
tca cat gtt ccg tgg acg ttc ggt gga ggc acc aag ctg gaa atc aaa  336
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>10
<211>112
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>10
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
 1               5                  10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
                85                  90                  95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>11
<211>369
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(369)
<400>11
cag gtt act ctg aaa gag act ggc cct ggg ata ttg cag ccc tcc cag  48
Gln Val Thr Leu Lys Glu Thr Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
 1               5                   10                  15
acc ctc agt ctg act tgt tct ttc tct ggg ttt tca ctg agc act tct  96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
             20                  25                  30
ggt atg ggt gta ggc tgg att cgt cag cct tca gga gag ggt cta gag  144
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Glu Gly Leu Glu
         35                  40                  45
tgg ctg gca gac att tgg tgg gat gac aat aag tac tat aac cca tcc  192
Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
     50                  55                  60
ctg aag agc cgg ctc aca atc tcc aag gat acc tcc agc aac cag gta  240
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
ttc ctc aag atc acc agt gtg gac act gca gat act gcc act tac tac  288
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                 85                  90                  95
tgt gct cga aga gct aac tat ggt aac ccc tac tat gct atg gac tac  336
Cys Ala Arg Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
            100                 105                 110
tgg ggt caa gga acc tca gtc acc gtc tcc tca                      369
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>12
<211>123
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>12
Gln Val Thr Leu Lys Glu Thr Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
 1               5                  10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Glu Gly Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>13
<211>305
<212>DNA
<213>智人
<400>13
gat att gtg atg acc cag act cca ctc tcc ctg ccc gtc acc cct gga  48
gag ccg gcc tcc atc tcc tgc agg tct agt cag agc ctc ttg gat agt  96
gat gat gga aac acc tat ttg gac tgg tac ctg cag aag cca ggg cag  144
tct cca cag ctc ctg atc tat acg ctt tcc tat cgg gcc tct gga gtc  192
cca gac agg ttc agt ggc agt ggg tca ggc act gat ttc aca ctg aaa  240
atc agc agg gtg gag gct gag gat gtt gga gtt tat tac tgc atg caa  288
cgt ata gag ttt cct tc                                           305
<210>14
<211>111
<212>PRT
<213>智人
<400>14
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
                85                  90                  95
His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>15
<211>288
<212>DNA
<213>智人
<400>15
caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgcg ctggtgaaac ccacacagac cctcacactg 60
acctgcacct tctctgggtt ctcactcagc actagtggaa tgcgtgtgag ctggatccgt 120
cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacgcattg attggg atg atg ata    175
aat tct aca gca cat ctc tga agaccaggct caccatctcc aaggacacct      226
ccaaaaacca ggtggtcctt acaatgacca acatggaccc tgtggacaca gccacgtatt 286
ac                                                                288
<210>16
<211>123
<212>PRT
<213>智人
<400>16
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
 1               5                  10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Met Arg Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Arg Ile Asp Trp Asp Asp Asp Lys Phe Tyr Ser Thr Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Arg Ala Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>17
<211>340
<212>DNA
<213>智人
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(339)
<400>17
gat att gtg atg acc cag act cca ctc tcc ctg ccc gtc acc cct gga  48
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                   10                  15
gag ccg gcc tcc atc tcc tgc agg tct agt cag agc ctc ttg gat agt  96
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
             20                  25                  30
gat gat gga aac acc tat ttg gac tgg tac ctg cag aag cca ggg cag  144
Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
         35                  40                  45
tct cca cag ctc ctg atc tat acg ctt tcc tat cgg gcc tct gga gtc  192
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
     50                  55                  60
cca gac agg ttc agt ggc agt ggg tca ggc act gat ttc aca ctg aaa  240
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
 65                  70                  75                  80
atc agc agg gtg gag gct gag gat gtt gga gtt tat tac tgc atg caa  288
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln
                 85                  90                  95
cgg ttc aca tgt tcc gtg gac gtt cgg cca agg gac caa ggt gga aat  336
Arg Phe Thr Cys Ser Val Asp Val Arg Pro Arg Asp Gln Gly Gly Asn
            100                 105                 110
caa a                                                            340
Gln
<210>18
<211>113
<212>PRT
<213>智人
<400>18
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65                  70                  75                  80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln
                85                  90                  95
Arg Phe Thr Cys Ser Val Asp Val Arg Pro Arg Asp Gln Gly Gly Asn
            100                 105                 110
Gln
<210>19
<211>51
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(51)
<400>19
aag tcc agt cag agt ctg tta aac agt gga aat caa aag aac tac ttg  48
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                   10                  15
gcc                                                              51
Ala
<210>20
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>20
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>21
<211>21
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(21)
<400>21
ggg gca tcc act agg gaa tct                                          21
Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser
 1               5
<210>22
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>22
Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser
 1               5
<210>23
<211>27
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(27)
<400>23
cag aat gat cat agt tat ccg tac acg                                  27
Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>24
<211>9
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>24
Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>25
<211>30
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(30)
<400>25
gga ttc gat ttt agt aga tac tgg atg agt                          30
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser
 1               5                   10
<210>26
<211>10
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>26
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser
 1               5                  10
<210>27
<211>51
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(51)
<400>27
gaa att aat cca gat agc agt acg ata aac tat acg cca tct cta aag  48
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
 1               5                  10                  15
gat                                                                51
Asp
<210>28
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>28
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>29
<211>33
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(33)
<400>29
ccg gtt gat ggt tac tac gat gct atg gac tac                        33
Pro Val Asp Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                   10
<210>30
<211>11
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>30
Pro Val Asp Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>31
<211>48
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(48)
<400>31
aga tct agt cag agc att gta cat agt aat gga aac acc tat tta gaa  48
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                   10                  15
<210>32
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>32
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>33
<211>21
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(21)
<400>33
aaa gtt tcc aac cga ttt tct                                      21
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>34
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>34
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>35
<211>27
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(27)
<400>35
ttt caa ggt tca cat gtt ccg tgg acg                       27
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>36
<211>9
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>36
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>37
<211>36
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(36)
<400>37
ggg ttt tca ctg agc act tct ggt atg ggt gta ggc           36
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly
 1               5                  10
<210>38
<211>12
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>38
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly
 1               5                  10
<210>39
<211>48
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(48)
<400>39
gac att tgg tgg gat gac aat aag tac tat aac cca tcc ctg aag agc  48
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
 1               5                   10                  15
<210>40
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>40
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
 1               5                  10                  15
<210>41
<211>39
<212>DNA
<213>小家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(39)
<400>41
aga gct aac tat ggt aac ccc tac tat gct atg gac tac         39
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                   10
<210>42
<211>13
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>42
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>43
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>43
Gly Phe Asp Phe Ser His Tyr Trp Met Ser
 1               5                  10
<210>44
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>44
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Ile Ser
 1               5                  10
<210>45
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>45
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Thr
 1               5                  10
<210>46
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>46
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ala
 1               5                  10
<210>47
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>47
Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Gly
 1               5                  10
<210>48
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>48
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ala Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>49
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>49
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ser Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Asp
 1               5                  10                  15
Lys
<210>50
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>50
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Tyr Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>51
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>51
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ala Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>52
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>52
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro His Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>53
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>53
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Gly Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>54
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>54
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Gln
 1               5                  10                  15
Asp
<210>55
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>55
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
 1               5                  10                  15
Ser
<210>56
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>56
Pro Val Pro Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>57
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>57
Pro Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>58
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>58
Pro Val Thr Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>59
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>59
Pro Val Ala Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>60
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>60
Pro Val Asp Pro Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>61
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>61
Pro Val Asp Ala Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>62
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>62
Pro Val Asp His Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>63
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>63
Pro Val Asp Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Pro
 1               5                  10
<210>64
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列
<400>64
Pro Val Asp Gly Tyr Tyr Asp Ala Met Asp Asn
 1               5                  10
<210>65
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>65
Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>66
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>66
Lys Ser Ser Ser Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>67
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>67
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>68
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>68
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Tyr Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>69
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>69
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Trp Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>70
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>70
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn His Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>71
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>71
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Arg Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>72
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>72
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Tyr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>73
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>73
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>74
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>74
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser His Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>75
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>75
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ile Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>76
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>76
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Lys Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>77
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>77
Gln Asn Asp His Gln Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>78
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>78
Gln Asn Asp His Gly Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>79
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>79
Gln Asn Asp His Leu Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>80
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>80
Gln Asn Asp His Ala Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>81
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>81
Gln Asn Asp His Thr Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>82
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>82
Gln Asn Asp His Val Tyr Pro Tyr Thr
 1               5
<210>83
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>83
Gln Asn Asp His Ser Asn Pro Tyr Thr
 1               5
<210>84
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>84
Gln Asn Asp His Ser Ser Pro Tyr Thr
 1               5
<210>85
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>85
Gln Asn Asp His Ser Pro Pro Tyr Thr
 1               5
<210>86
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>86
Gln Asn Asp His Ser Met Pro Tyr Thr
 1               5
<210>87
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>87
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro Gly Met Gly Val Gly
 1               5                  10
<210>88
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>88
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Trp Gly Met Gly Val Gly
 1               5                  10
<210>89
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>89
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Trp
 1               5                  10
<210>90
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>90
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Leu
 1               5                  10
<210>91
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>91
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ala
 1               5                  10
<210>92
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>92
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Lys Ser
 1               5                  10                  15
<210>93
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>93
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Ala Asn Pro Ser Leu Lys Ser
 1               5                  10                  15
<210>94
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>94
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Pro Asn Pro Ser Leu Lys Ser
 1               5                  10                  15
<210>95
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>95
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Pro Ser
 1               5                  10                  15
<210>96
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>96
Pro Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>97
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>97
Gln Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>98
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>98
Leu Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>99
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>99
Thr Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>100
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>100
Val Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>101
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>101
Arg Ala Asn Tyr Gly Val Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>102
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>102
Arg Ala Asn Tyr Gly Trp Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
 1               5                  10
<210>103
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>103
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Gln Asp Tyr
 1               5                  10
<210>104
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>104
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Asn Asp Tyr
 1               5                  10
<210>105
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>105
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Thr Asp Tyr
 1               5                  10
<210>106
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>106
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Lys
 1               5                  10
<210>107
<211>13
<212>PRT    
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>107
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Thr
 1               5                  10
<210>108
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>108
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Met
 1               5                  10
<210>109
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>109
Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Met Asp His
 1               5                  10
<210>110
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>110
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Pro His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>111
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>111
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Trp His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>112
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>112
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Leu Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>113
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>113
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Ser Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>114
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>114
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>115
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>115
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>116
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>116
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Trp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>117
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>117
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Tyr Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>118
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>118
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
 1               5                  10                  15
<210>119
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>119
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Val Glu
 1               5                  10                  15
<210>120
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>120
Ser Val Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>121
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>121
Lys Ala Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>122
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>122
Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser
 1               5
<210>123
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>123
Lys Val Ser Asn Leu Phe Ser
 1               5
<210>124
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>124
Lys Val Ser Asn Arg Phe Trp
 1               5
<210>125
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>125
Lys Val Ser Asn Arg Phe Phe
 1               5
<210>126
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>126
Val Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>127
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>127
His Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>128
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>128
Phe Arg Gly Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>129
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>129
Phe Trp Gly Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>130
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>130
Phe Gln Ser Ser His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>131
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>131
Phe Gln Gly Trp His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>132
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>132
Phe Gln Gly Glu His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>133
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>133
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>134
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>134
Phe Gln Gly Ser Thr Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>135
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>135
Phe Gln Gly Ser Ser Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>136
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>136
Phe Gln Gly Ser Ala Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>137
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>137
Phe Gln Gly Ser Gln Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>138
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>138
Phe Gln Gly Ser His Thr Pro Trp Thr
 1               5
<210>139
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>139
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Ala
 1               5
<210>140
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>140
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Arg
 1               5
<210>141
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>141
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp His
 1               5
<210>142
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>142
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Lys
 1               5
<210>143
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>143
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Ile
 1               5
<210>144
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>144
Asp Ile Trp Trp Asp Asp Asn Lys Tyr Thr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
 1               5                  10                  15
<210>145
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>145
Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Trp Thr
 1               5
<210>146
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>146
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>147
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>147
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro Gly Met Gly Val Trp
 1               5                  10
<210>148
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>148
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro Gly Met Gly Val Ala
 1               5                  10
<210>149
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>149
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Ser Ser Trp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>150
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>150
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Ser Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>151
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>151
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Ser Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
 1               5                  10                  15
<210>152
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>152
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
 1               5                  10                  15
<210>153
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>153
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Ser Ser Trp Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
 1               5                  10                  15
<210>154
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>154
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ala Asn Tyr Thr Pro Ala Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>155
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>155
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ala Asn Tyr Thr Pro Tyr Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>156
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>156
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ala Asn Tyr Thr Pro His Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>157
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>157
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Trp Tyr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>158
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>158
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Tyr Tyr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>159
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>159
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Tyr His Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>160
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>160
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Arg Tyr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>161
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>161
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Trp His Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Ala
<210>162
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>162
Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Val Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
 1               5                  10                  15
Asp
<210>163
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>163
tctctggaga tggtgaattt acgtactgct atctggatt                      39
<210>164
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>164
ctaagtagtt cttttggttg ttataacaga ctctggctgg a                   41
<210>165
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>165
tggagcctgg cggacccagg hcatccaata tctactaaag gtgaatccag a        51
<210>166
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>166
tctctggaga tggtgaatyt atcctttagg gmtggcgtat agttggccgt actgctatct 60
ggatt                                                             65
<210>167
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>167
tctctggaga tggtgaatyt atcctttagg trtggcgtat agttggccgt actgctatct 60
ggatt                                                             65
<210>168
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>168
ctaagtagtt cttttggttg trgtrgytta acagactctg gctgga                46
<210>169
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>169
ctaagtagtt cttttggttg csgtrgytta acagactctg gctgga                46
<210>170
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>170
ctaagtagtt cttttggttg trgckgytta acagactctg gctgga    46
<210>171
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>171
ctaagtagtt cttttggttg csgckgytta acagactctg gctgga    46
<210>172
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>172
ctaagtagtt cttttggttg trccagytta acagactctg gctgga    46
<210>173
<211>46
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>173
ctaagtagtt cttttggttg csccagytta acagactctg gctgga    46
<210>174
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>174
cttctgcagg taccattcgt tatacaatgc tctgactaga                     40
<210>175
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>175
tgggggctga cggatccacm acacacccat tccacragtg ctgagtgaga acccaga  57
<210>176
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>176
tgggggctga cggatccags ccacacccat tccacractg ctgagtgaga acccaga  57
<210>177
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>177
gctcttcaga gatgggttag vgtatttatt gtcatcccac                     40
<210>178
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>178
cttctgcagg taccattcma aataggtgtt tccccaactc ratacaatgc tctgactaga 60
<210>179
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>179
cttctgcagg taccattcma aataggtgtt tccgtaactc ratacaatgc tctgactaga 60
<210>180
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>180
cttctgcagg taccattcma aataggtgtt tccctgactc ratacaatgc tctgactaga 60
<210>181
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>181
cttctgcagg taccattcma aataggtgtt tccccaactg tgtacaatgc tctgactaga 60
<210>182
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>182
cttctgcagg taccattcma aataggtgtt tccctaactg tctacaatgc tctgactaga 60
<210>183
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>183
cttctgcagg taccattcma aataggtgtt tccctcactg tgtacaatgc tctgactaga 60
<210>184
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>184
ttggtgctga tgttctgg                                               18
<210>185
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>185
atcttcttgc tgttctgg                      18
<210>186
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>186
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>187
gggctgcttg tgctctgg                      18
<210>188
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>188
ggaatcttgt tgctctgg                      18
<210>189
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>189
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>190
ggtctcctgt tgctctgt                      18
<210>191
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>191
atatttctac tgctctgt                      18
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>192
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>194
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>196
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>198
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>199
ttaaacttgg gtttttct                     18
<210>200
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>200
gkgctgytcy tctgcct                      17
<210>201
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>201
ttaagtcttc tgtacctg                        18
<210>202
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>202
tcagtaactg caggtgtcca                      20
<210>203
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>203
ttttaaaagg tgtccagtgt                      20
<210>204
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
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gcaacagcta caggtgtcca                      20
<210>205
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
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<210>206
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>206
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<210>207
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>207
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<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>208
cagtggttac aggggtcaat tca                      23
<210>209
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>209
ctgttsacag cchttcckgg t                            21
<210>210
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>210
ctgatggcag ctgcccaaag t                            21
<210>211
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>211
tttatcaagg tgtgcattgt                              20
<210>212
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>212
tcactggatg gtgggaagat ggataca                      27
<210>213
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>213
gacatttggg aaggactgac tctc                                   24
<210>214
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>214
cagggggctc tcgcaggaga cgag                                   24
<210>215
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>215
atcttcttgc tgttctgggt atctggaacc tgtggg                      36
<210>216
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>216
ttggtgctga tgttctggat tcctgcttcc agcagt                      36
<210>217
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>217
gtggacgttc ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaac                         38
<210>218
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>218
tgtacacttt tggccagggg accaagctgg agatcaaac                        39
<210>219
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>219
attactacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc accgtctcct 60
cag                                                               63
<210>220
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>220
ttactcgctg cccaaccagc catggcc                                     27
<210>221
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>221
gacagatggt gcagccacag t                                           21
<210>222
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>222
ttactgttta cccctgtgac aaaagcc                                     27
<210>223
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>223
gaagaccgat gggcccttgg t                                           21
<210>224
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>44，45
<223>n＝A，T，C或G
<400>224
cttggtcccc tggccaaaag tgtacggata actatgatca ttmnnacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>225
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>41，42
<223>n＝A，T，C或G
<400>225
cttggtcccc tggccaaaag tgtacggata actatgatcm nnctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>226
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>38，39
<223>n＝A，T，C或G
<400>226
cttggtcccc tggccaaaag tgtacggata actatgmnna ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>227
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>35，36
<223>n＝A，T，C或G
<400>227
cttggtcccc tggccaaaag tgtacggata actmnnatca ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>228
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
<400>228
cttggtcccc tggccaaaag tgtacggata mnnatgatca ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>229
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>29，30
<223>n＝A，T，C或G
<400>229
cttggtcccc tggccaaaag tgtacggmnn actatgatca ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>230
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>230
cttggtcccc tggccaaaag tgtamnnata actatgatca ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>231
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>231
cttggtcccc tggccaaaag tmnncggata actatgatca ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>232
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
<223>n＝A，T，C或G
<400>232
cttggtcccc tggccaaamn ngtacggata actatgatca ttctgacagt aataaactgc 60
cacatc                                                            66
<210>233
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>50，51
<223>n＝A，T，C或G
<400>233
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc atcgtagtaa ccatcaacmn ntctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>234
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>47，48
<223>n＝A，T，C或G
<400>234
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc atcgtagtaa ccatcmnncg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>235
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>44，45
<223>n＝A，T，C或G
<400>235
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc atcgtagtaa ccmnnaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>236
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>41，42
<223>n＝A，T，C或G
<400>236
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc atcgtagtam nnatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>237
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>38，39
<223>n＝A，T，C或G
<400>237
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc atcgtamnna ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>238
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>35，36
<223>n＝A，T，C或G
<400>238
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc atcmnngtaa ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>239
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
<400>239
cgtggttcct tgcccccagt agtccatagc mnngtagtaa ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>240
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>29，30
<223>n＝A，T，C或G
<400>240
cgtggttcct tgcccccagt agtccatmnn atcgtagtaa ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>241
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>241
cgtggttcct tgcccccagt agtcmnnagc atcgtagtaa ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>242
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>242
cgtggttcct tgcccccagt amnncatagc atcgtagtaa ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>243
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
<223>n＝A，T，C或G
<400>243
cgtggttcct tgcccccamn ngtccatagc atcgtagtaa ccatcaaccg gtctcgcaca 60
gtaatacac                                                         69
<210>244
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>44，45
<223>n＝A，T，C或G
<400>244
cttggtgccc tggccgaacg tccacggaac atgtgaacct tgmnngcagt aataaactcc 60
aacatc                                                            66
<210>245
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>41，42
<223>n＝A，T，C或G
<400>245
cttggtgccc tggccgaacg tccacggaac atgtgaaccm nnaaagcagt aataaactcc 60
aacatc                                                            66
<210>246
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>38，39
<223>n＝A，T，C或G
<400>246
cttggtgccc tggccgaacg tccacggaac atgtgamnnt tgaaagcagt aataaactcc 60
aacatc                                                            66
<210>247
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>35，36
<223>n＝A，T，C或G
<400>247
cttggtgccc tggccgaacg tccacggaac atgmnnacct tgaaagcagt aataaactcc 60
aacatc                                                            66
<210>248
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
<400>248
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<222>38，39
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<222>35，36
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<222>23，24
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tagagatggc gtatagttta tmnnactgct atctggattt atttcgccaa yccactccag 60
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tagagatggc gtatagttmn ncgtactgct atctggattt atttcgccaa yccactccag 60
ccctttc                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcct ttagagatgg cgtatamnnt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcct ttagagatgg cgtmnngttt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcct ttagagatgg mnnatagttt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcct ttagagamnn cgtatagttt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcct ttagmnntgg cgtatagttt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcct tmnnagatgg cgtatagttt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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cgttgtctct ggagatgrtg aatytatcmn ntagagatgg cgtatagttt atcgtactgc 60
tatctgg                                                           67
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<223>引物
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<220>
<223>引物
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<212>DNA
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<220>
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<210>321
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<212>DNA
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<220>
<223>引物
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<400>321
tggcttctgc aggtaccatt ccaaataggt gtttccmnna ctatgtacaa tgctctgact 60
<210>322
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
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<223>n＝A，T，C或G
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<211>60
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<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
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tggcttctgc aggtaccatt ccaaataggt mnntccatta ctatgtacaa tgctctgact 60
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<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
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<400>324
tggcttctgc aggtaccatt ccaaatamnn gtttccatta ctatgtacaa tgctctgact 60
<210>325
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>325
tggcttctgc aggtaccatt ccaamnnggt gtttccatta ctatgtacaa tgctctgact 60
<210>326
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>326
tggcttctgc aggtaccatt cmnnataggt gtttccatta ctatgtacaa tgctctgact 60
<210>327
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
<223>n＝A，T，C或G
<400>327
tggcttctgc aggtaccamn ncaaataggt gtttccatta ctatgtacaa tgctctgact 60
<210>328
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
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<222>38，39
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gaacctgtct gggactccag aaaaccggtt ggaaacmnna tagatcagga gctgtgg    57
<210>329
<211>57
<212>DNA
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<220>
<223>引物
<221>misc_feature
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gaacctgtct gggactccag aaaaccggtt ggamnnttta tagatcagga gctgtgg    57
<210>330
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
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<400>330
gaacctgtct gggactccag aaaaccggtt mnnaacttta tagatcagga gctgtgg    57
<210>331
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>29，30
<223>n＝A，T，C或G
<400>331
gaacctgtct gggactccag aaaaccgmnn ggaaacttta tagatcagga gctgtgg    57
<210>332
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>332
gaacctgtct gggactccag aaaamnngtt ggaaacttta tagatcagga gctgtgg    57
<210>333
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>333
gaacctgtct gggactccag amnnccggtt ggaaacttta tagatcagga gctgtgg    57
<210>334
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
<223>n＝A，T，C或G
<400>334
gaacctgtct gggactccmn naaaccggtt ggaaacttta tagatcagga gctgtgg    57
<210>335
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>38，39
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<400>335
tgggggctga cggatccagc ccacacccat tccagamnng ctgagtgaga acccaga    57
<210>336
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>35，36
<223>n＝A，T，C或G
<400>336
tgggggctga cggatccagc ccacacccat tccmnnagtg ctgagtgaga acccaga    57
<210>337
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
<400>337
tgggggctga cggatccagc ccacacccat mnnagaagtg ctgagtgaga acccaga    57
<210>338
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>29，30
<223>n＝A，T，C或G
<400>338
tgggggctga cggatccagc ccacaccmnn tccagaagtg ctgagtgaga acccaga    57
<210>339
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>339
tgggggctga cggatccagc ccacmnncat tccagaagtg ctgagtgaga acccaga    57
<210>340
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>340
tgggggctga cggatccagc cmnnacccat tccagaagtg ctgagtgaga acccaga    57
<210>341
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
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<400>341
tgggggctga cggatccamn ncacacccat tccagaagtg ctgagtgaga acccaga    57
<210>342
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>41，42
<223>n＝A，T，C或G
<400>342
cagagatggg ttgtagtatt tattgtcatc ccaccaaatm nntgcaagcc actccagggc 60
<210>343
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>38，39
<223>n＝A，T，C或G
<400>343
cagagatggg ttgtagtatt tattgtcatc ccaccamnng tctgcaagcc actccagggc 60
<210>344
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>35，36
<223>n＝A，T，C或G
<400>344
cagagatggg ttgtagtatt tattgtcatc ccamnnaatg tctgcaagcc actccagggc 60
<210>345
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
<400>345
cagagatggg ttgtagtatt tattgtcatc mnnccaaatg tctgcaagcc actccagggc 60
<210>346
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>29，30
<223>n＝A，T，C或G
<400>346
cagagatggg ttgtagtatt tattgtcmnn ccaccaaatg tctgcaagcc actccagggc 60
<210>347
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>347
cagagatggg ttgtagtatt tattmnnatc ccaccaaatg tctgcaagcc actccagggc 60
<210>348
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>348
cagagatggg ttgtagtatt tmnngtcatc ccaccaaatg tctgcaagcc actccagggc 60
<210>349
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
<223>n＝A，T，C或G
<400>349
cagagatggg ttgtagtamn nattgtcatc ccaccaaatg tctgcaagcc actccagggc 60
<210>350
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>41，42
<223>n＝A，T，C或G
<400>350
cttggagatg gtgagcctgc tcttcagaga tgggttgtam nntttattgt catcccacca 60
<210>351
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>38，39
<223>n＝A，T，C或G
<400>351
cttggagatg gtgagcctgc tcttcagaga tgggttmnng tatttattgt catcccacca 60
<210>352
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>35，36
<223>n＝A，T，C或G
<400>352
cttggagatg gtgagcctgc tcttcagaga tggmnngtag tatttattgt catcccacca 60
<210>353
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>32，33
<223>n＝A，T，C或G
<400>353
cttggagatg gtgagcctgc tcttcagaga mnngttgtag tatttattgt catcccacca 60
<210>354
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>29，30
<223>n＝A，T，C或G
<400>354
cttggagatg gtgagcctgc tcttcagmnn tgggttgtag tatttattgt catcccacca 60
<210>355
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>26，27
<223>n＝A，T，C或G
<400>355
cttggagatg gtgagcctgc tcttmnnaga tgggttgtag tatttattgt catcccacca 60
<210>356
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>23，24
<223>n＝A，T，C或G
<400>356
cttggagatg gtgagcctgc tmnncagaga tgggttgtag tatttattgt catcccacca 60
<210>357
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<221>misc_feature
<222>20，21
<223>n＝A，T，C或G
<400>357
cttggagatg gtgagcctmn ncttcagaga tgggttgtag tatttattgt catcccacca 60
<210>358
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的抗体突变体
<400>358
Phe Gln Ser Ser His Phe Pro Trp Thr
 1               5

Claims (68)

1.一种抗体或其功能性片段，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述抗体或其功能片段在一个或多个互补决定区(CDR)包含至少一个氨基酸替换，所述抗体或其功能片段因此特异性与隐蔽胶原表位结合，并且
所述重链可变区包含：
(i)重链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：38，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：38：
(a)7位的丝氨酸被脯氨酸或色氨酸替换；或
(b)12位的甘氨酸被色氨酸、亮氨酸或丙氨酸替换；
(ii)重链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：40，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：40：
(a)10位的酪氨酸被丝氨酸、丙氨酸、脯氨酸或苏氨酸替换；或
(b)15位的赖氨酸被脯氨酸替换；和
(iii)重链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：42，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：42：
(a)1位的精氨酸被脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸替换；
(b)6位的天冬酰胺被缬氨酸或色氨酸替换；
(c)11位的蛋氨酸被谷氨酰胺、天冬酰胺或苏氨酸替换；或
(d)13位的酪氨酸被亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸或组氨酸替换；
且所述轻链可变区包含：
(iv)轻链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：32，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：32：
(a)7位的缬氨酸被脯氨酸或色氨酸替换；
(b)8位的组氨酸被亮氨酸或丝氨酸替换；
(c)9位的丝氨酸被色氨酸替换；
(d)10位的天冬氨酰被酪氨酸、色氨酸或谷氨酰胺替换；
(e)12位的天冬酰胺被酪氨酸替换；或
(f)15位的亮氨酸被苯丙氨酸或缬氨酸替换；
(v)轻链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：34，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：34：
(a)1位的赖氨酸被丝氨酸替换；
(b)2位的缬氨酸被丙氨酸替换；
(c)4位的天冬酰胺被丝氨酸替换；
(d)5位的天冬氨酰被亮氨酸替换；或
(e)7位的丝氨酸被色氨酸或苯丙氨酸替换；和
(vi)轻链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：36，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：36：
(a)1位的苯丙氨酸被缬氨酸或组氨酸替换；
(b)2位的谷氨酰胺被精氨酸或色氨酸替换；
(c)3位的甘氨酸被丝氨酸替换；
(d)4位的丝氨酸被色氨酸或谷氨酸替换；
(e)5位的组氨酸被亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺替换；
(f)6位的缬氨酸被苏氨酸或苯丙氨酸替换；或
(g)9位的苏氨酸被丙氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸或异亮氨酸替换；
且所述抗体或其抗原结合片段因此具有至少一个所述任何替换；或者是，所述重链可变区包含：
(i)重链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：26，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：26：
(a)6位的精氨酸被组氨酸替换；
(b)9位的蛋氨酸被异亮氨酸替换；或
(c)10位的丝氨酸被苏氨酸、丙氨酸或甘氨酸替换；
(ii)重链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：28，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：28：
(a)9位的异亮氨酸被丙氨酸、丝氨酸、缬氨酸替换；
(b)14位的丝氨酸被酪氨酸、丙氨酸、组氨酸或甘氨酸替换；
(c)16位的赖氨酸被天冬氨酸或谷氨酰胺替换；或
(d)17位的天冬氨酸被赖氨酸或丝氨酸氨酸替换；和
(iii)重链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：30，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：30：
(a)3位的天冬氨酸被脯氨酸、甘氨酸、苏氨酸或丙氨酸替换；
(b)4位的甘氨酸被脯氨酸、丙氨酸或组氨酸替换；或
(c)11位的酪氨酸被脯氨酸或天冬酰胺或苏氨酸替换；
且所述轻链可变区包含：
(iv)轻链CDR1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：20，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：20：
(a)4位的谷氨酰胺被精氨酸或丝氨酸替换；
(b)8位的天冬酰胺被丝氨酸替换；
(c)9位的丝氨酸被酪氨酸、色氨酸、组氨酸或精氨酸替换；
(d)10位的甘氨酸被酪氨酸、精氨酸、组氨酸或异亮氨酸替换；或
(e)12位的谷氨酰胺被赖氨酸替换；
(v)轻链CDR2，其氨基酸序列为SEQ ID NO：22：和
(vi)轻链CDR3，其氨基酸序列为SEQ ID NO：24，或者氨基酸序列为具有一个或多个以下替换的SEQ ID NO：24：
(a)5位的丝氨酸被谷氨酰胺、甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苏氨酸或缬氨酸替换；或
(b)6位的酪氨酸被天冬酰胺、丝氨酸、脯氨酸或蛋氨酸替换；且所述抗体或其抗原结合片段因此具有至少一个所述任何替换。
2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，所述的CDR选自如下的CDR：SEQ ID NO：26的氨基酸6-10；SEQ ID NO：28；SEQ IDNO：30；SEQ ID NO：20；SEQ ID NO：22；SEQ ID NO：24；SEQ ID NO：43的氨基酸6-10；SEQ ID NO：44的氨基酸6-10；SEQ ID NO：45的氨基酸6-10；SEQ ID NO：46的氨基酸6-10；SEQ ID NO：47的氨基酸6-10；SEQID NO：48；SEQ ID NO：49；SEQ ID NO：50；SEQ ID NO：51；SEQ IDNO：52；SEQ ID NO：53；SEQ ID NO：54；SEQ ID NO：55；SEQ ID NO：56；SEQ ID NO：57；SEQ ID NO：58；SEQ ID NO：59；SEQ ID NO：60；SEQ IDNO：61；SEQ ID NO：62；SEQ ID NO：63；SEQ ID NO：64；SEQ ID NO：65；SEQ ID NO：66；SEQ ID NO：67；SEQ ID NO：68；SEQ ID NO：69；SEQ IDNO：70；SEQ ID NO：71；SEQ ID NO：72；SEQ ID NO：73；SEQ ID NO：74；SEQ ID NO：75；SEQ ID NO：76；SEQ ID NO：77；SEQ ID NO：78；SEQ IDNO：79；SEQ ID NO：80；SEQ ID NO：81；SEQ ID NO：82；SEQ ID NO：83；SEQ ID NO：84；SEQ ID NO：85；SEQ ID NO：86；SEQ ID NO：154；SEQID NO：155；SEQ ID NO：156；SEQ ID NO：157；SEQ ID NO：158；SEQ IDNO：159；SEQ ID NO：160；SEQ ID NO：161；或SEQ ID NO：162。
3.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：28的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQ IDNO：20的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
4.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：28的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQ IDNO：72的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
5.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：48的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：20的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
6.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：45的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：154的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：157的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
7.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：158的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
8.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：46的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：159的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
9.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：48的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：160的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
10.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：45的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：72的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
11.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：157的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
12.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：45的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：160的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
13.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：46的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：160的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
14.根据权利要2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：45的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：162的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：158的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
15.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：45的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：156的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：157的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
16.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：26的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：154的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：157的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
17.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：45的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：155的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：157的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
18.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：46的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：154的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：161的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
19.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：46的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：156的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：161的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
20.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：46的氨基酸6-10的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：28的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：63的重链CDR3；被称作SEQID NO：20的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：22的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：77的轻链CDR3。
21.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其包括重链多肽，该重链多肽包含第一、第二和第三CDR，所述的第一CDR选自：SEQ ID NO：26；SEQ ID NO：43；SEQ ID NO：44；SEQ ID NO：45；SEQ ID NO：46；或SEQ ID NO：47，所述的第二CDR选自：SEQ IDNOS：28，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：49，SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：51，SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55，所述的第三CDR选自：SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：56，SEQ ID NO：57，SEQID NO：58，SEQ ID NO：59，SEQ ID NO：60，SEQ ID NO：61，SEQ IDNO：62，SEQ ID NO：63或SEQ ID NO：64。
22.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其包括轻链多肽，该轻链多肽包含第一、第二和第三CDR，所述的第一CDR选自：SEQ ID NO：20，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75或76，所述的第二CDR由SEQ ID NO：22组成，所述的第三CDR选自：SEQID NO：24，77，78，79，80，81，82，83，84，85或86。
23.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，所述的CDR选自：SEQ ID NO：38；SEQ ID NO：40；SEQ ID NO：42；SEQ ID NO：32；SEQ ID NO：34；SEQ ID NO：36；SEQ ID NO：87；SEQ ID NO：88；SEQ IDNO：89；SEQ ID NO：90；SEQ ID NO：91；SEQ ID NO：92；SEQ ID NO：93；SEQ ID NO：94；SEQ ID NO：95；SEQ ID NO：96；SEQ ID NO：97；SEQ IDNO：98；SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100；SEQ ID NO：101；SEQ IDNO：102；SEQ ID NO：103；SEQ ID NO：104；SEQ ID NO：105；SEQ IDNO：106；SEQ ID NO：107；SEQ ID NO：108；SEQ ID NO：109；SEQ IDNO：110；SEQ ID NO：111；SEQ ID NO：112；SEQ ID NO：113；SEQ IDNO：114；SEQ ID NO：115；SEQ ID NO：116；SEQ ID NO：117；SEQ IDNO：118；SEQ ID NO：119；SEQ ID NO：120；SEQ ID NO：121；SEQ IDNO：122；SEQ ID NO：123；SEQ ID NO：124；SEQ ID NO：125；SEQ IDNO：126；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：127；SEQ ID NO：128；SEQ IDNO：129；SEQ ID NO：130；SEQ ID NO：131；SEQ ID NO：132；SEQ IDNO：133；SEQ ID NO：134；SEQ ID NO：135；SEQ ID NO：136；SEQ IDNO：137；SEQ ID NO：138；SEQ ID NO：139；SEQ ID NO：140；SEQ IDNO：141；SEQ ID NO：142；SEQ ID NO：143；SEQ ID NO：144；SEQ IDNO：145；SEQ ID NO：146；SEQ ID NO：147；SEQ ID NO：148；SEQ IDNO：149；SEQ ID NO：150；SEQ ID NO：151；SEQ ID NO：152；SEQ IDNO：153；或SEQ ID NO：358。
24.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：38的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：40的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：32的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；及被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
25.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：38的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：32的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；及被称作SEQID NO：130的轻链CDR3。
26.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：149的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
27.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SE QID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：150的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
28.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：149的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
29.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：144的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：149的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
30.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQID NO：151的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
31.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：151的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
32.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：152的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；及被称作SEQ ID NO：358的轻链CDR3。
33.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：148的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：150的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
34.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：115的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
35.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：40的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：153的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
36.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：116的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
37.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：116的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
38.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：38的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：32的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：130的轻链CDR3。
39.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：38的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：32的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
40.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：149的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
41.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：150的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
42.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：149的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
43.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：144的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：149的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
44.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：151的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
45.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：151的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
46.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：152的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：145的轻链CDR3。
47.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：148的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：150的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
48.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：115的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
49.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：40的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：153的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
50.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：92的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：116的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
51.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括：被称作SEQ ID NO：147的重链CDR1；被称作SEQ ID NO：93的重链CDR2；被称作SEQ ID NO：103的重链CDR3；被称作SEQ ID NO：116的轻链CDR1；被称作SEQ ID NO：34的轻链CDR2；和被称作SEQ ID NO：36的轻链CDR3。
52.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括重链多肽，该重链多肽包含第一，第二，及第三CDR，所述的第一CDR选自SEQ ID NOS：38；87；88；89；90；91；147；或148；所述的第二CDR选自SEQ ID NOS：40，92，93，94，95或144；所述的第三CDR选自SEQ ID NOS：42，96，97，98，99，100，101，102，103，104，105，106，107，108或109。
53.根据权利要求23所述的抗体或其功能性片段，其包括轻链多肽，该轻链多肽包含第一，第二，及第三CDR，所述的第一CDR选自SEQ ID NOS：32，110，111，112，113，114，115，116，117，118，119，146，149，150，151，152或153；所述的第二CDR选自SEQ IDNOS：34，120，121，122，123，124或125；所述的第三CDR选自SEQ IDNOS：36，126，127，128，129，130，131，132，133，134，135，136，137，138，139，140，141，142，143，145或358。
54.根据权利要求41-53中任一项所述的功能性片段，其中所述功能性片段选自Fv、Fab、F(ab)2或scFV。
55.一种核苷酸，其编码根据权利要求1-53中任一项所述的抗体或其功能性片段。
56.根据权利要求1-54任一项所述的抗体或其功能性片段在制备用于靶向血管生成脉管系统的药物中的应用。
57.根据权利要求56所述的应用，其中所述抗体或其功能性片段另外包括治疗性半族。
58.根据权利要求56所述的应用，其中所述抗体或其功能性片段另外包括可探测性半族。
59.根据权利要求1-54任一项所述的抗体或其功能性片段在制备用于抑制血管生成的药物中的应用。
60.根据权利要求59所述的应用，其中所述抗体或其功能性片段另外包括治疗性半族。
61.根据权利要求1-54任一项所述的抗体或其功能性片段在制备用于靶向肿瘤的药物中的应用。
62.根据权利要求61的应用，其中所述抗体或其功能性片段另外包括治疗性半族。
63.根据权利要求61的应用，其中所述抗体或其功能性片段另外包括可探测性半族。
64.根据权利要求1-54任一项所述的抗体或其功能性片段在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用。
65.根据权利要求64所述的应用，其中所述的抗体或其功能性片段另外包括治疗性半族。
66.根据权利要求1-54任一项所述的抗体或其功能性片段在制备用于探测血管生成的脉管系统的药物中的应用。
67.根据权利要求66的应用，其中所述抗体或其功能性片段另外包括可探测性半族。
68.根据权利要求1-54任一项所述的抗体或其功能性片段，其中重链CDR被接枝到被称作SEQ ID NO：8的VHIII/JH6重链可变框架区。
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