CN1578779B - 细胞增殖的有机小分子调节剂 - Google Patents

细胞增殖的有机小分子调节剂 Download PDF

Info

Publication number
CN1578779B
CN1578779B CN028233328A CN02823332A CN1578779B CN 1578779 B CN1578779 B CN 1578779B CN 028233328 A CN028233328 A CN 028233328A CN 02823332 A CN02823332 A CN 02823332A CN 1578779 B CN1578779 B CN 1578779B
Authority
CN
China
Prior art keywords
group
certain embodiments
ring
aromatic ring
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CN028233328A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1578779A (zh
Inventor
A·D·巴克斯特
E·A·博伊德
M·弗兰克－卡梅内特斯基
J·波特
S·普里斯
L·L·鲁宾
J·H·A·施蒂巴德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Curis Inc
Original Assignee
Curis Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Curis Inc filed Critical Curis Inc
Publication of CN1578779A publication Critical patent/CN1578779A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1578779B publication Critical patent/CN1578779B/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/422—Oxazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/50—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D333/52—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes
    • C07D333/62—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D333/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D333/70—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明提供可利用的用于调节细胞或组织增殖或分化的方法和试剂，所述方法包括使所述细胞与hedgehog激动剂例如图32和图33中所示的化合物接触。在某些实施方案中，所述方法和试剂可用于例如通过拮抗正常ptc途径或者激活smoothened或hedgehog活性来校正或抑制异常或不想要的生长状态。

Description

细胞增殖的有机小分子调节剂
相关申请
本申请是于2001年3月1日申请的PCT申请US01/10296的部分连续申请，并且是于2001年9月26日申请的美国专利申请号09/964276的部分连续申请，后者是于2000年11月28日申请的美国专利申请号09/724,492的部分连续申请，而且基于2000年3月30日申请的美国临时申请号60/193,279，所述文献的说明书内容通过引用全部结合到本文中。 
发明背景 
图式形成是胚胎细胞形成分化组织的有序空间排列的活动。高等生物的机体复杂性通过细胞内在谱系和细胞外在信号的相互作用在胚胎发生期间产生。从机体计划的最早建立，到器官系统的图式发育，到组织分化期间各种细胞类型的产生，诱导相互作用对脊椎动物发育中的胚胎图式发育是必不可少的(Davidson，E.，(1990) Development 108：365-389；Gurdon，J.B.，(1992)Cell 68：185-199；Jessell，T.M.等，(1992)Cell 68：257-270)。发育细胞相互作用的影响是可变的。通常，由于诱导与未诱导状态和诱导状态的效应细胞不同的细胞，所述效应细胞从细胞分化的一种途径转向另一种途径(诱导)。有时，细胞诱导其相邻细胞同其本身一起分化(自体诱导)；在其它情况下，细胞抑制其相邻细胞同其本身一起分化。早期发育中的细胞相互作用可能是序贯的，致使两种细胞类型之间的原始诱导导致多样性的渐进放大。此外，诱导相互作用不仅发生在胚胎，而且也发生在成体细胞中，并且可起到建立并保持形态发生图式以及诱导分化的作用(J.B.Gurdon(1992)Cell 68：185-199)。 
信号分子的Hedgehog家族成员在无脊椎动物和脊椎动物发育期 间介导许多重要的近程和远程图式发育过程。在蝇中，一种hedgehog基因调节体节和成虫盘的图式发育。相反，在脊椎动物中，hedgehog基因家族参与控制左右不对称、CNS中的极性、体节和肢体、器官发生、软骨发生和精子发生。 
通过遗传筛选，在果蝇即黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定出第一个hedgehog基因(Nüsslein-Volhard，C.和Wieschaus，E.(1980)Nature 287，795-801)。该筛选鉴定出许多影响胚胎发育和幼体发育的突变。在1992年和1993年，果蝇hedgehog(hh)基因的分子性质已有报道(C.F.，Lee等(1992)Cell 71，33-50)，此后，已从各种脊椎动物中分离出数种hedgehog同源物。尽管在果蝇属(Drosophila)和其它无脊椎动物中只发现了一种hedgehog基因，但是在脊椎动物中却存在多种Hedgehog基因。 
脊椎动物hedgehog基因家族包括至少4个成员，例如单个果蝇hedgehog基因的共生同源物。示例性的hedgehog基因和蛋白描述于PCT公布号WO 95/18856和WO 96/17924中。这些成员中的3个成员，在本文称为Desert hedgehog(Dhh)、Sonic hedgehog(Shh)和Indianhedgehog(Ihh)，显然存在于所有脊椎动物中，包括鱼、鸟类和哺乳动物。第4个成员，在本文称为tiggie-winkle hedgehog(Thh)，似乎是鱼特有的。Desert hedgehog(Dhh)在小鼠胚胎发育和成年啮齿动物和人类中主要在睾丸中表达；Indian hedgehog(Ihh)在胚胎发生期间参与骨发育，而在成体中参与骨形成；而如上所述的Shh主要参与形态发生和神经诱导活动。已知hedgehog多肽在脊椎动物器官的发育和保持中的决定性诱导作用，因此在临床和研究方面，对hedgehog相互作用蛋白的鉴定具有最重要的意义。 
各种Hedgehog蛋白由一个信号肽、一个高度保守的N-末端区和一个更多样化的C-末端结构域组成。除在分泌途径中的信号序列切割外(Lee，J.J.等(1992)Cell 71：33-50；Tabata，T.等(1992)Genes Dev.2635-2645；Chang，D.E.等(1994)Development120：3339-3353)， Hedgehog前体蛋白还经历了依赖于C-末端部分中保守序列的内部自我蛋白酶解(Lee等(1994)Science 266：1528-1537；Porter等(1995) Nature 374：363-366)。该自我切割产生一种19kD N-末端肽和一种26-28kD C-末端肽(Lee等(1992)，参见上文；Tabata等(1992)，参见上文；Chang等(1994)，参见上文；Lee等(1994)，参见上文；Bumcrot，D.A.等(1995)Mol.Cell.Biol.15：2294-2303；Porter等(1995)，参见上文；Ekker，S.C.等(1995)Curr.Biol.5：944-955；Lai，C.J.等(1995) Development 121：2349-2360)。所述N-末端肽与合成所述肽的细胞表面保持紧密结合，而所述C-末端肽在体外和体内均可自由扩散(Porter等(1995)Nature 374：363；Lee等(1994)，参见上文；Bumcrot等(1995)，参见上文；Mart′，E.等(1995)Development 121：2537-2547；Roelink，H.等(1995)Cell 81：445-455)。有趣的是，所述N-末端肽在细胞表面的保留依赖于自我切割，因为由RNA编码的、在内部切割的正常位置上准确终止的截短形式的HH在体外(Porter等(1995)，参见上文)和在体内(Porter，J.A.等(1996)Cell 86，21-34)均是可扩散的。生物化学研究已经表明，HH前体蛋白的自我蛋白酶解通过随后在亲核取代中被切下的内部硫酯中间体来进行。可能所述亲核体是一种最终共价结合到所述N-肽的C-末端的亲脂性小分子(Porter等(1996)，参见上文)，从而使其粘附于细胞表面。该生物学意义是深远的。由于所述粘连，在产生Hedgehog的细胞表面产生了局部高浓度的N-末端Hedgehog肽。就是所述N-末端肽对果蝇属和脊椎动物中的近程和远程Hedgehog信号活性而言既是必要的又是充分的(Porter等(1995)，参见上文；Ekker等(1995)，参见上文；Lai等(1995)，参见上文；Roelink，H.等(1995)Cell 81：445-455；Porter等(1996)，参见上文；Fietz，M.J.等(1995)Curr.Biol.5：643-651；Fan，C.-M.等(1995)Cell 81：457-465；Mart′，E.等(1995)Nature 375：322-325；Lopez-Martinez等(1995)Curr.Biol 5：791-795；Ekker，S.C.等(1995)Development 121：2337-2347；Forbes，A.J.等(1996)Development122：1125-1135)。 
在果蝇发育期间，在不同的位点上，HH都影响近程和远程图式发育过程。在早期胚胎的体节极性的确立中，它具有似乎被直接介导的近程作用，而在成虫盘的图式发育中，它通过诱导次级信号而诱导远程作用。 
在脊椎动物中，几种hedgehog基因已在最近几年被克隆出来。在这些基因中，Shh研究得最为深入细致，由于它在使相邻组织发生图式发育的信号源的不同组构中心中表达。最新的证据表明，Shh参与这些相互作用。 
Shh的表达在预定中线中胚层即小鼠(Chang等(1994)，参见上文；Echelard，Y.等(1993)Cell 75：1417-1430)、大鼠(Roelink，H.等(1994) Cell 76：761-775)和鸡(Riddle，R.D.等(1993)Cell 75：1401-1416)中的结节以及在蓑鲉(zebrafish)的鳞(Ekker等(1995)，参见上文；Krauss，S.等(1993)Cell 75：1431-1444)中原肠胚形成开始后立即起动。在鸡胚中，Shh在结节中的表达图式产生左右不对称，这似乎是心脏左右排列的原因(Levin，M.等(1995)Cell 82：803-814)。 
在CNS中，来自脊索和底板的Shh似乎诱导腹部细胞的命运。当异位表达时，Shh导致以下动物的大面积中脑和后脑腹面发育：小鼠(Echelard等(1993)，参见上文；Goodrich，L.V.等(1996)Genes Dev.10：301-312)、非洲爪蟾属(Xenopus)(Roelink，H.等(1994)，参见上文；Ruizi Altaba，A.等(1995)Mol.Cell.Neurosci.6：106-121)和蓑鲉(Ekker等(1995)，参见上文；Krauss等(1993)，参见上文；Hammerschmidt，M.等(1996)Genes Dev.10：647-658)。在脊髓水平上的中间神经外胚层的外植块中，Shh蛋白诱导底板和运动神经元发育的浓度阈各不相同，底板浓度高，而运动神经元浓度较低(Roelink等(1995)，参见上文；Mart′等(1995)，参见上文；Tanabe，Y.等(1995)Curr.Biol.5：651-658)。此外，抗体阻断提示，由脊索产生的Shh对于运动神经元命运的脊索介导的诱导是必需的(Mart′等(1995)，参见上文)。因此，产生Shh的中线细胞表面高浓度的Shh似乎导致在体外观察到的底板的接触介导诱 导(Placzek，M.等(1993)Development 117：205-218)，以及在体内观察到的紧接脊索上的底板的中线定位。从脊索释放的Shh浓度越低，在已显示在体外接触依赖性的过程中，底板推测诱导在更远腹侧区的运动神经元(Yamada，T.等(1993)Cell 73：673-686)。在取自中脑和前脑水平上的外植块中，Shh也诱导合适的腹侧神经元细胞类型，分别为多巴胺能前体(Heynes，M.等(1995)Neuron 15：35-44；Wang，M.Z.等(1995)Nature Med.1：1184-1188)和胆碱能前体(Ericson，J.等(1995) Cell 81：747-756)，表明Shh是全长CNS内腹部特化的共同诱导物。这些观察结果提出了这样的问题：对Shh的差异应答是如何在特定前后位置上受到调节的。 
来自中线的Shh也使脊椎动物胚胎的近轴区、躯干的体节(Fan等(1995)，参见上文)和体节的头部间充质喙(Hammerschmidt等(1996)，参见上文)发生图式发育。在鸡和小鼠的轴旁中胚层外植块中，Shh以生皮肌节标记Pax3的不表达为代价来促进生骨节特异性标记如Paxl和Twist的表达。此外，滤器屏障实验提示，Shh直接介导生骨节的诱导，而不是通过激活第二信号机制来介导(Fan，C.-M.和Tessier-Lavigne，M.(1994)Cell 79，1175-1186)。 
Shh也诱导生肌节基因表达(Hammerschmidt等(1996)，参见上文；Johnson，R.L.等(1994)Cell 79：1165-1173；Münsterberg，A.E.等(1995) Genes Dev.9：2911-2922；Weinberg，E.S.等(1996)Development122：271-280)，尽管最近的实验表明，还需要WNT家族成员即无翅果蝇(Drosophila wingless)的脊椎动物同源物的协作(Münsterberg等(1995)，参见上文)。令人不解的是，鸡中的生肌节诱导需要的Shh浓度要比诱导生骨节标记的高(Münsterberg等(1995)，参见上文)，尽管生骨节起源于距脊索近得多定位的体节细胞。在蓑鲉中获得了相似的结果，其中高浓度的Hedgehog诱导生肌节标记基因表达，并且阻抑生骨节标记基因表达(Hammerschmidt等(1996)，参见上文)。然而，与羊膜动物相反，这些观察结果与鱼胚胎的构造相一致，在此，生 肌节是体节的主要和更多的轴向成分。因此，对Shh信号的调节以及新信号因子的获得可能改变了脊椎动物进化过程中的体节结构。 
在脊椎动物肢芽中，后间充质细胞的亚组即“Zone of polarizingactivity(极化活性区)”(ZPA)调节前后指趾的身份(综述参见Honig，L.S.(1981)Nature 291：72-73)。Shh的异位表达或Shh肽中浸泡的微珠的应用模拟前ZPA移植物的作用，产生了指趾的镜像重迭(Chang等(1994)，参见上文；Lopez-Martinez等(1995)，参见上文；Riddle等(1993)，参见上文)(图2g)。因此，指趾身份似乎主要取决于Shh浓度，尽管有可能其它信号可以在似乎是AP图式发育所需要的相当长的距离内(100-150μm)分程传递该信息。与果蝇成虫盘中HH和DPP的相互作用类似，脊椎动物肢芽中的Shh激活Bmp2即dpp同源物的表达(Francis，P.H.等(1994)Development120：209-218)。然而，与果蝇中的DPP不同，Bmp2不能模拟Shh在鸡肢芽中的异位应用上的极化作用(Francis等(1994)，参见上文)。除前后图式发育之外，Shh似乎也通过诱导后顶端外胚嵴中成纤维细胞生长因子FGF4的合成而参与肢体的远近生长晕的调节(Laufer，E.等(1994)Cell 79：993-1003；Niswander，L.等(1994)Nature 371：609-612)。 
Hedgehog蛋白和BMP之间的密切关系可能在脊椎动物Hedgehog表达的许多位点上是保守的，但可能不是在其所有位点上都是保守的。例如，在鸡后肠中，已经表明Shh诱导Bmp4即另一种脊椎动物dpp同源物的表达(Roberts，D.J.等(1995)Development121：3163-3174)。此外，Shh和Bmp2、4或6显示其在胃、泌尿生殖系统、肺、牙蕾和毛囊的上皮细胞和间充质细胞中的表达方面的意外关系(Bitgood，M.J.和McMahon，A.P.(1995)Dev.Biol.172：126-138)。此外，Ihh即两种其它小鼠Hedgehog基因之一在肠和正在发育的软骨中的Bmp表达细胞附近表达(Bitgood和McMahon(1995)，参见上文)。 
最新的证据提出了一种其中Ihh在调节软骨发生发育中起关键性作用的模型(Roberts等(1995)，参见上文)。在软骨形成中，软骨细 胞从增殖状态通过中间体变成肥大前状态，再变成分化的肥大软骨细胞。Ihh在肥大前软骨细胞中表达并且起动导致软骨细胞分化被阻断的信号级联。其直接靶是Ihh表达结构域周围的软骨膜，后者通过Gli和Patched(Ptc)(Hedgehog信号的保守转录靶)的表达而应答(参见下文)。最有可能的是，这产生导致在关节周软骨膜中合成甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)的第二信号。PTHrP本身再发信号至肥大前软骨细胞，阻断其进一步分化。同时，PTHrP抑制Ihh的表达，从而形成调节软骨细胞分化速率的负反馈环。 
Patched最初在果蝇中被鉴定为一种体节极性基因，即一组影响不同体节内沿胚胎的前后轴以同源系列发生的细胞分化的发育基因之一。参见Hooper，J.E.等(1989)Cell 59：751；和Nakano，Y.等(1989) Nature 341：508。patched的脊椎动物同源物表达图式提示其参与神经管、骨胳、肢体、颅面结构和皮肤的发育。 
遗传学和功能研究证明，patched是hedgehog信号级联即进化上保守的、调节许多下游基因表达的途径的一部分。参见Perrimon，N.(1995)Cell 80：517；和Perrimon，N.(1996)Cell 86：513。Patched参与所述靶基因的组成型转录抑制；其作用与由hedgehog或脊椎动物同源物编码的、诱导转录激活的分泌型糖蛋白的相反。处于该途径控制之下的基因包括Wnt和TGF-β家族的成员。 
Patched蛋白具有2个大的胞外结构域、12个跨膜区段和几个胞质区段。参见Hooper，参见上文；Nakano，参见上文；Johnson，R.L.等(1996)Science 272：1668；和Hahn，H.等(1996)Cell 85：841。patched在hedgehog信号途径中的生化作用尚不清楚。然而，与hedgehog蛋白的直接相互作用已有报道(Chen，Y.等(1996)Cell 87：553)，并且patched可能与另一种由smoothened基因编码的跨膜蛋白一起参与hedgehog受体复合物。参见Perrimon，参见上文；和Chen，参见上文。 
patched的人同源物最近被克隆出来并且作图于染色体9q22.3 上。参见Johnson，参见上文；和Hahn，参见上文。该区已涉及基底细胞痣综合征(BCNS)，其特征为发育异常，包括肋骨和颅面改变、手足畸形以及脊柱裂。 
BCNS也易发生多种肿瘤类型，最常见的是在机体多个部位发生的且似乎在生命的前20年内发生的基底细胞癌(BCC)。然而，BCC最常见的病例与所述综合征无关并且散发性发生在少数祖籍北欧的中年人或老年人暴晒阳光的部位。 
最近在BCNS相关BCC和散发性BCC中的研究表明，patched两个等位基因的功能性丧失导致发生BCC。参见Johnson，参见上文；Hahn，参见上文；和Gailani，M.R.等(1996)Nature Genetics 14：78。染色体9q22.3的单个等位基因缺失通常发生在散发性和遗传性BCC中。连锁分析揭示出，在BCNS患者的肿瘤中，缺陷型遗传性等位基因得到保留，而正常等位基因丢失。 
散发性肿瘤也证明patched两个功能性等位基因的丧失。在用单链构象多态性筛选测定鉴定出patched突变中的12个肿瘤中，9个具有第二个等位基因的染色体缺失，而其余3个在这两个等位基因中具有失活突变(Gailani，参见上文)。所述改变在相应的种系DNA中没有发生。 
大多数经鉴定的突变导致出现提前终止密码子或移码。Lench，N.J.等，Hum.Genet.1997 Oct；100(5-6)：497-502。然而，有几个是导致胞外结构域或胞质结构域中氨基酸取代的点突变。这些突变位点可能表明对与胞外蛋白或下游信号途径的胞质成员相互作用具有功能重要性。 
patched参与抑制基因表达以及发生patched在BCC中的常见等位基因缺失证明了该基因的肿瘤抑制功能。其在调节已知参与细胞信号和细胞间通讯的基因家族中的作用提供了一种可能的肿瘤抑制机制。 
发明概述 
本发明提供可利用的用于调节细胞分化或增殖的方法和组合物。可用于所述方法和组合物的化合物包括那些由通式(I)表示的化合物： 
Figure BYZ000004127989500091
式I
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar和Ar′独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基；且 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Ar′代表苯环，例如未取代的苯环或者被一个或多个包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环等。在某些实施方案中，Y和Ar′在间位和/或1，3-位与Ar连接。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy在所述环中或所述环的取代基上包含一个氨基，例如Cy为吡啶基、咪唑基、吡咯基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基等，和/或带有一个氨基取代基。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在某些实施方案中，Cy直接与N连接。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方 案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，Ar或Ar′上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基(sulfoxido)、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(II)表示： 
Figure BYZ000004127989500111
式II
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar和Ar′独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)- 和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔，其中在Mj中，M有时或每次出现时都构成完整的环结构或其一部分； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy′代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
j每次出现时独立代表0-10的整数，最好是2-7的整数；且 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Ar′代表苯环，例如未取代的苯环或者被一个或多个包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环等。在某些实施方案中，Y和Ar′在间位和/或1，3-位与Ar连接。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为 单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，Ar或Ar′上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(III)表示： 
Figure BYZ000004127989500131
式III
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar和Ar′独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基；且 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Ar′代表苯环，例如未取代的苯环或者被一个或多个包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环等。在某些实施方案中，Y和Ar′在间位和/或1，3-位与Ar连接。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某 些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy直接与N连接和/或与NR2连接。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，Ar或Ar′上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，可用于本发明主题方法的化合物包括由通 式(IV)表示的化合物： 
式IV
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy′代表取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P 烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
Cy代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy在所述环中或所述环的取代基上包含一个氨基，例如Cy为吡啶基、咪唑基、吡咯基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基等，和/ 或带有一个氨基取代基。在某些实施方案中，Cy直接与N连接。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(V)表示： 
Figure BYZ000004127989500181
式V
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy′代表取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
Cy′代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
j每次出现时独立代表0-10的整数，最好是2-7的整数； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(VI)表示： 
Figure BYZ000004127989500211
式VI
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy′代表取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯 基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂芳环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶基等。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy直接与N连接和/或与NR2连接。在某些实施方案中， Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，本发明主题化合物具有以下式VII的结构： 
式VII
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy代表取代或未取代的杂环基或环烷基； 
Cy′为取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
W为O或S； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂芳环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶基等。在某些其它的实施方案中，Cy′代表芳环或至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即以形成联芳环体系。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的饱和碳环或杂环，即由多个sp3杂化原子组成的碳环或杂环。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO- 低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，本发明主题化合物具有以下式VIII的结构： 
Figure BYZ000004127989500251
式VIII
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
U代表取代或未取代的、与含氮环稠合的芳环或杂芳环； 
V代表低级亚烷基，例如亚甲基、1，2-亚乙基、1，1-亚乙基、1，1-亚丙基、1，2-亚丙基、1，3-亚丙基等； 
W代表S或O，最好是O； 
X代表C＝O、C＝S或SO2； 
R3代表取代或未取代的芳基、杂芳基、低级烷基、低级链烯基、低级链炔基、碳环基、碳环基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳烷基或杂芳烷基； 
R4代表取代或未取代的芳烷基或低级烷基，例如苯乙基、苄基或氨基烷基等； 
R5代表取代或未取代的芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基，包括多环芳基或杂芳基。 
在某些实施方案中，U代表与含氮环稠合的苯环。 
在某些实施方案中，R3选自取代或未取代的芳基、杂芳基、低级烷基、低级链烯基、芳烷基和杂芳烷基。 
在某些实施方案中，R4为未取代的低级烷基，或者为被仲胺或 叔胺取代的低级烷基。 
在某些实施方案中，R5选自取代或未取代的苯基或萘基，或者为二芳基烷基，例如2，2-二苯基乙基、二苯基甲基等。 
另外，具有式IX-XII结构的化合物可用于本发明的组合物和方法中。 
在某些实施方案中，可用于本发明的hedgehog依赖性化合物(例如上述化合物)诱导或增加一种或多种hedgehog活性(例如正调节gli表达)的EC50可能小于约1000nm，小于约100nm，小于约10nm，或者甚至小于约1nm。在某些实施方案中，可用于本发明的hedgehog依赖性化合物(例如上述化合物)，增加一种或多种hedgehog活性(例如正调节gli表达)至少1个数量级，2个数量级，或者甚至3个数量级。本发明的化合物可用于例如治疗动物或病人的疾病或病症的体内方法中，以及可用于例如包括干细胞或祖细胞在内的培养细胞(例如作为培养基成分)的体外方法中，例如以促进所述培养细胞的增殖、存活和/或分化。 
附图简述 
图1-31显示可用于合成依照本发明化合物的反应。 
图32和图33举例说明依照本发明的代表性化合物。 
图34a和图34b显示使用本发明化合物的hedgehog途径报道测定结果。 
图35显示证明本发明hedgehog激动剂正调节Ptc和Gli的测定结果。 
图36和图37显示在本发明主题激动剂存在下，小脑神经元前体的增殖增加。 
图38A和图38B显示根据握力分析测定，本发明主题激动剂对压伤的坐骨神经愈合的影响。 
图39A-D证明根据趾伸展分析测定，本发明主题激动剂对压伤 的坐骨神经愈合的影响。 
图40显示本发明主题激动剂与低剂量的hedgehog蛋白一起对正在发育的小鼠肺组织、肩胛骨组织、皮肤组织和颅骨组织的影响。 
图41显示其中加有和不加hedgehog蛋白的本发明主题激动剂对正在发育的小鼠胰脏组织、肾脏组织、皮肤组织和心脏组织的影响。 
图42显示本发明主题激动剂对新生小鼠前肢的影响。 
图43显示不同浓度的本发明主题激动剂对新生小鼠前肢的影响。 
图44显示本发明主题激动剂对正在发育的肺组织的影响。 
图45显示本发明主题激动剂对正在发育的肾脏组织的影响。 
图46A和图46B显示在存在和不存在hedgehog蛋白的情况下，本发明主题激动剂对小鼠皮肤组织的影响。 
图47A和图47B比较本发明主题激动剂在小鼠和人报道细胞中的活性。 
图48显示Gli在用经修饰的Sonic hedgehog N-末端片段处理的HEPM细胞或用本发明主题激动剂处理的HEPM细胞中的正调节。 
图49举例说明本发明化合物对丙二酸诱导的损害的影响。 
图50和图51显示在MCAO中风模型中，测试本发明化合物预防损伤的实验结果。 
图52和图53显示MCAO后用本发明化合物处理的作用。 
图54显示在帕金森病模型中，用本发明化合物预处理的作用。 
图55显示在帕金森病模型中，用本发明化合物作为治疗药物的作用。 
图56显示在注射本发明化合物后，体内神经细胞的增殖增加。 
图57和图58举例说明在口服本发明化合物后，体内神经细胞的增殖增加。 
图59显示Sonic hedgehog(Shh)蛋白在糖尿病性神经病模型中的 作用。 
图60证明本发明激动剂在糖尿病性神经病模型中的作用。 
图61和图62显示在糖尿病性神经病模型中，在给予本发明激动剂后，坐骨神经滋养血管的影像。 
图63-65举例说明在给予本发明激动剂后，各种生长因子的正调节。 
实施本发明的最佳模式 
发明详述
I.概述
本发明涉及这样的发现：由hedgehog、patched(Ptc)、gli和/或smoothened调节的信号转导途径可以至少部分受到小分子的调节。虽然不希望受任何具体理论的束缚，但是通过改变细胞表面缔合物(例如复合物)而激活patched-smoothened途径可能是这些因子起作用的机制。人们认为，通过patched和smoothened的缔合，例如以蛋白质复合物形式缔合，可负调节hedgehog途径，所述缔合由于hedgehog与patched的结合而被破坏。因此，这些因子激活hedgehog途径的能力可能是由于这样的分子的以下能力所致：与patched或smoothened相互作用或者与其结合，以其它方式破坏smoothened与patched的缔合，或者至少促进所述蛋白激活hedgehog、ptc和/或smoothened介导的信号转导途径的能力。该作用模式，例如smoothened依赖性途径的调节要与以下化合物相区别：所述化合物通过直接激活cAMP途径而调节hedgehog途径，例如通过与PKA、腺苷酸环化酶、cAMP磷酸二酯酶结合或者与其相互作用而调节hedgehog途径。 
本文中公开的某些hedgehog激动剂在不存在hedgehog蛋白本身的情况下可调节hedgehog活性，例如所述激动剂模拟hedgehog的活性，而不是仅仅例如通过促进hedgehog与patched的结合来补充或增加hedgehog蛋白的活性。在本文将这些化合物称为hedgehog非依 赖性激动剂，并且这些化合物单独可以模拟由于hedgehog处理产生的表型或效应。本发明的某些其它化合物增强hedgehog蛋白的活性，并且需要存在或加入hedgehog蛋白，才能观察到由于hedgehog诱导产生的表型或作用。这样的hedgehog依赖性激动剂可用于包含hedgehog蛋白的治疗制剂或治疗中，或者可用于增加由待用所述激动剂处理的细胞或组织天然产生的hedgehog蛋白的活性。本文中公开的hedgehog激动剂可以例如通过与patched或smoothened结合来诱导patched-smoothened复合物的解离，或者破坏patched和smoothened之间的相互作用，从而激活所述hedgehog途径。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法使用一种作用于靶细胞胞外膜的一种或多种组分的化合物。 
在某些实施方案中，可用于本发明的hedgehog激动剂诱导hedgehog依赖性转录调节，例如表达glil或ptc基因。因此，这样的激动剂可以诱导或增强由于例如hedgehog蛋白水平增加而产生的hedgehog依赖性途径激活。 
因此，准确地讲，本发明考虑了调节hedgehog、ptc或smoothened信号转导活性各方面的这些小分子将在具有功能性ptc-smo途径的细胞中同样能够促进增殖(或其它生物学结果)。在优选的实施方案中，本发明主题激动剂是这样的有机分子：所述有机分子的分子量小于2500amu，更优选小于1500amu，甚至更优选小于750amu，并且能够诱导或增加hedgehog蛋白、准确地讲最好是靶细胞中的hedgehog蛋白的至少某些生物活性。可以对hedgehog激动剂激活hedgehog途径进行定量，例如相对于在不存在激动剂的情况下的对照，检测在所述激动剂存在下ptc或gli-1转录方面的增加情况。例如，增加至少5％、至少10％、至少20％或甚至至少50％可以说明hedgehog途径被试验化合物激活。在某些实施方案中，本发明主题化合物的激动剂活性不被hedgehog抗体5E1所抑制，但被介藜芦胺或具有下式的拮抗剂所抑制： 
Figure BYZ000004127989500301
该性质可以进行定量，例如在不存在所述hedgehog拮抗剂的情况下，通过测定所述抗体或拮抗剂是否诱导由所述激动剂诱导的ptc或gli-1的正调节减少大于50％、大于20％、大于10％或甚至大于5％，等等。在某些实施方案中，可用于本发明化合物(例如上述化合物)诱导或增加一种或多种hedgehog活性(例如正调节ptc或gli表达)的EC50可能小于约1000nM，小于约100nM，小于约10nM，或者甚至小于约1nM。示例性人Gli基因的编码序列包括例如Genbank登记号X07384的Gli-1基因序列以及Genbank登记号AB007298的Gli-2基因序列。另见Kinzler等Nature1988，332，371。例如，通过测量mRNA水平(转录)或蛋白质水平(翻译)，可以确定gli或ptc表达的水平。 
因此，本发明的方法包括例如通过激活smoothened或所述信号途径的下游组分而拮抗hedgehog信号的ptc抑制的小分子在调节各种各样的细胞、组织和器官的修复和/或功能表现中的用途。例如，本发明主题方法具有以下范围的治疗和美容应用：调节神经组织、骨和软骨的形成和修复、调节精子发生、调节平滑肌、调节肺、肝、泌尿生殖器官(例如膀胱)和其它起源于原始消化管的器官、调节造血功能、调节皮肤和毛发的生长等。此外，可以在培养物中提供的细胞(体外)或完整动物中的细胞(体内)上实施本发明主题方法。参见例如PCT公布号WO 95/18856和WO 96/17924(所述文献的说明书内容通过引用结合到本文中)。 
在一个实施方案中，本发明主题方法可用于处理上皮细胞。一 般而言，可以使上皮细胞与一定量的hedgejog激动剂接触，以诱导上皮组织生长和/或形成。可以在培养物中分散的上皮细胞或者为完整组织或器官的一部分上实施本发明主题方法。此外，可以在培养物中提供的细胞(体外)或完整动物中的细胞(体内)上实施所述方法。 
本发明的hedgehog激动剂可用作治疗上皮组织的疾病或者手术修复或美容修复上皮组织的方案的一部分，所述上皮组织例如皮肤和皮肤器官；角膜、晶状体和其它眼组织；粘膜；和牙周上皮。本文中公开的方法和组合物提供对各种各样受损上皮组织和粘膜组织的治疗或预防手段。例如，本发明主题方法可用于控制伤口愈合过程，例如可能最好是联合使用涉及上皮组织的任何手术如皮肤病学手术或牙周病学手术。hedgehog激动剂可能对其有用的示例性手术修复包括严重烧伤和皮肤再生、皮肤移植、褥疮、皮肤溃疡、裂伤、术后瘢痕缩小和溃疡性结肠炎。 
在本发明的另一方面，hedgehog激动剂可用于实现毛发生长，例如用于治疗脱发，从而促进毛发生长。 
在本发明的另一个优选实施方案中，本发明主题方法可用作恶性成神经管细胞瘤和其它原发性CNS恶性神经外胚层肿瘤的治疗方案的一部分。 
另一方面，本发明提供包含作为有效成分的hedgehog激动剂、ptc拮抗剂或smoothened激动剂(如本文所述的激动剂和拮抗剂)、以足以促进体内增殖或其它生物学结果的量配制的药用制剂。 
使用hedgehog激动剂、patched拮抗剂或smoothened激动剂的本发明主题治疗对于人和动物受治疗者可能都是有效的。本发明可应用的动物受治疗者延伸至作为宠物或商业目的饲养的驯养动物和家畜。实例为狗、猫、牛、马、绵羊、猪和山羊。 
II.定义
为了方便起见，在此收集了本发明说明书、实施例和所附权利 要求书中所用的某些术语。 
短语基因的“异常修饰或突变”是指这样的遗传损伤，如基因核苷酸的缺失、取代或添加以及基因的严重染色体重排或基因的异常甲基化。同样，基因的错误表达是指基因的转录水平相对于在正常细胞中在相似条件下的转录水平为异常，以及从该基因转录的mRNA的非野生型剪接。 
“烧伤”是指个体大面积的皮肤表面由于热和/或化学剂而被完全损坏或丧失的病例。 
“真皮”是指表皮深处的皮肤层，由血管结缔组织的致密基底构成，并且含有神经和感觉终末器官。毛根以及皮脂腺和汗腺是深埋在真皮内的表皮结构。 
“牙组织”是指口腔中类似于上皮组织的组织，例如牙龈组织。 
本发明的方法可用于治疗牙周疾病。 
“真皮皮肤溃疡”是指由组织的浅表性损伤引起的皮肤损伤，通常伴有炎症。可以用本发明方法治疗的真皮皮肤溃疡包括褥疮、糖尿病性溃疡、静脉曲张性溃疡和动脉溃疡。褥疮是指由于长期压迫皮肤区引起的慢性溃疡。该类型的创伤常常称为褥疮。静脉曲张性溃疡由血液或缺损静脉的其它流体的滞留引起。动脉溃疡是指血流不畅的动脉周围区域中的坏死性皮肤。 
术语“ED50”是指产生其最大反应或效应的50％的药物剂量。 
就本发明主题治疗方法而言，例如hedgehog激动剂的“有效量”是指制剂中所述激动剂的量，其中当激动剂用作所需给药方案的一部分时，根据对待治疗疾病或美容目的临床公认标准，引起例如细胞增殖率和/或细胞分化状态和/或细胞存活率的改变。 
术语“上皮”是指机体内表面和外表面的细胞覆盖物(皮肤、粘液和浆液)，包括由其衍生的腺体和其它结构，例如角膜、食管、表皮和毛囊的上皮细胞。其它示例性的上皮组织包括：嗅上皮，它为衬于鼻腔嗅区的假复层上皮，并且含有嗅觉感受器；腺上皮，它是 指由分泌细胞构成的上皮；鳞状上皮，它是指由扁平样细胞构成的上皮。术语“上皮”也可以指移行上皮，其特征为发现由于收缩和扩张而经历巨大机械变化的被覆中空器官，例如位于复层鳞状上皮和复层柱状上皮之间的过渡型组织。 
术语“上皮形成”是指由于上皮组织在裸露表面生长而使伤口愈合。 
术语“表皮腺”是指与表皮相关的细胞的聚集并且特化以分泌或排泄与其正常代谢需求无关的物质。例如，“皮脂腺”是真皮内分泌油性物质和皮脂的全质分泌腺。术语“汗腺”是指分泌汗液的腺体，位于真皮或皮下组织内，汗液通过打开体表的导管而排出体外。 
术语“表皮”是指皮肤的最外层和非血管层，起源于胚胎外胚层，厚度在0.07-1.4mm之间变动。在手掌面和足趾面，从内向外，它包括5层：基底层，由垂直排列的柱状细胞构成；棘细胞层或棘层，由带有短突起或短刺的扁平多角细胞构成；颗粒层，由扁平颗粒细胞构成；透明层，由几层无核透明细胞层构成；和角质层，由扁平、角质化无核细胞构成。在全身体表的表皮内，通常不存在透明层。 
“切除创伤”包括皮肤上皮层内的撕裂伤、擦伤、刀伤、刺伤或裂伤，并且可以延伸到真皮层，甚至延伸到皮下脂肪和更深部位。切除创伤可以由外科手术或偶然穿透皮肤引起。 
细胞的“生长状态”是指细胞增殖速率和/或细胞分化状态。“改变的生长状态”是特征为异常增殖速率的生长状态，例如相对于正常细胞，表现出增殖速率增加或减少的细胞。 
术语“毛发”是指由角蛋白构成且由真皮的乳头状凹陷发育而来的线状结构，尤其是特化的表皮结构，其仅由哺乳动物产生的，并且是该组动物的特征。另外，“毛发”可以指这类毛发的聚集物。“毛囊”是指包裹毛发的一种管状内陷，毛发从中生长出来。“毛 囊上皮细胞”是指毛囊内真皮乳头周围的上皮细胞，例如干细胞、外根鞘细胞、基质细胞和内根鞘细胞。这样的细胞可以是正常的非恶性细胞或转化细胞/无限增殖化细胞。 
术语“hedgehog激动剂”是指增强或再现hedgehog生物活性、例如激活靶基因转录的试剂。优选的hedgehog激动剂可用于以smoothened依赖性方式模拟或增强hedgehog蛋白的活性或作用。本文所用的术语“hedgehog激动剂”不仅指可以通过直接激活hedgehog蛋白正常功能而发挥作用的任何试剂，而且指激活hedgehog信号途径并因此抑制ptc功能的任何试剂。 
术语“hedgehog功能丧失”是指ptc基因、hedgehog基因或smoothened基因的异常修饰或突变，或者在这样的基因的表达水平方面的降低(或丧失)，从而导致类似使细胞与hedgehog抑制剂接触的表型，例如hedgehog途径的异常抑制。“功能丧失”可以包括ptc基因产物调节Ci基因(例如Gli1、Gli2和Gli3)表达水平的能力增加。术语“hedgehog功能丧失”在本文中也用来指由于在hedgehog信号转导途径任何其它方面的改变而出现的任何相似的细胞表型(例如表现出增殖降低)，包括但不限于hedgehog本身的修饰或突变。例如，由于使hedgehog信号途径失活而具有异常低增殖速率的细胞将会具有“hedgehog功能丧失”的表型，即使hedgehog在该细胞中不发生突变的情况下也是如此。 
本文所用的“无限增殖化细胞”是指已通过化学方法和/或重组方法改变的细胞，致使所述细胞具有通过在培养时不限定分裂次数的生长能力。 
“内部上皮组织”是指机体内的组织，其特征类似于皮肤表皮层。实例包括肠内衬。本发明的方法可用来促进某些内部伤口(例如由于手术引起的伤口)的愈合。 
术语“角化病”是指特征为表皮角质层增生的增生性皮肤疾病。示例性角化病包括毛囊角化病、掌跖角化病、咽角化病、毛周角化 病和光化性角化病。 
术语“LD50”是指使受试者的50％致死的药物剂量。 
术语“甲”是指手指或足趾的远端背面上的角化皮肤板。 
术语“patched功能获得”是指ptc基因的异常修饰或突变，或者所述基因的表达水平增加，从而导致类似使细胞与hedgehog抑制剂接触的表型，例如hedgehog途径的异常失活。所述功能获得可以包括ptc基因产物调节Ci基因(例如Gli1、Gli2和Gli3)表达水平的能力增加。 
待经本发明主题方法治疗的“患者”或“受治疗者”可指人类或非人类动物。 
术语“前体药物”意指包括在生理条件下转变成本发明的治疗活性剂的化合物。用于制备前体药物的普通方法是包括在生理条件下被水解以获得所需分子的选定部分。在其它实施方案中，所述前体药物经宿主动物的酶活性作用发生转化。 
本文所用的“增殖”是指经历有丝分裂的细胞。 
在本申请中，术语“增生性皮肤病”是指特征为皮肤组织的不需要或异常增殖的任何皮肤疾病/障碍。这些病症的特征通常为表皮细胞增殖或不完全细胞分化，包括例如X连锁鱼鳞病、牛皮癣、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、表皮松解性角化过度症和脂溢性皮炎。例如，表皮发育不良是一种表皮有缺陷发育的形式。另一实例是“表皮松解”，它是指表皮的松弛状态，伴有自发或者在创伤部位形成疱和大疱。 
术语“皮肤”是指机体的保护性外覆盖层，它由真皮和表皮构成，可理解为包括汗腺和皮脂腺以及毛囊结构。在本发明说明书中，可以使用形容词“皮肤的”，并且应该理解为一般指皮肤的属性，适合于其在本发明说明书正文中所用之处的上下文含义。 
术语“小分子”是指具有以下分子量的化合物：小于约2500amu，优选小于约2000amu，甚至更优选小于约1500amu，再更优选小于 约1000amu，或者最优选小于约750amu。 
术语“smoothened功能丧失”是指smo基因的异常修饰或突变，或者所述基因表达水平降低，从而导致类似使细胞与hedgehog抑制剂接触的表型，例如hedgehog途径的异常失活。虽然不希望受任何具体理论的束缚，但要注意ptc不可能直接发信号到细胞中，而是与smoothened相互作用，smoothened是位于hedgehog信号中ptc下游的另一种膜结合蛋白(Marigo等，(1996)Nature 384：177-179)。基因smo是果蝇中每个体节正确图式发育所必需的体节极性基因(Alcedo等，(1996)Cell 86：221-232)。已经鉴定出smo的人同系物。参见例如Stone等(1996)Nature 384：129-134，和GenBanlc登记号U84401。smoothened基因编码其特征为异源三聚体G-蛋白偶联受体的膜内在蛋白；即七跨膜区。该蛋白显示与果蝇Frizzled(Fz)蛋白即wingless途径的一个成员有同源性。人们最初认为smo编码Hh信号的受体。然而，该猜测随后证明有误，因为获得了ptc为Hh受体的证据。表达Smo的细胞不能结合Hh，说明smo不直接与Hh相互作用(Nusse，(1996)Nature384：119-120)。相反，认为Sonic hedgehog(SHH)与其受体PTCH的结合阻止对PTCH对smoothened(SMO)即七跨膜蛋白的正常抑制。 
术语“治疗指数”是指药物的治疗指数，定义为LD50/ED50。 
术语“酰氨基”是本领域公知的，指可由以下通式表示的部分： 
其中R9如上定义，而R’11代表氢、烷基、链烯基或-(CH2)m-R8，其中m和R8如上定义。 
在此，术语“脂族基”是指直链烃基、支链烃基或环状脂族烃基，包括饱和和不饱和脂族基，例如烷基、链烯基和链炔基。 
术语“链烯基”和“链炔基”是指长度类似的且上述烷基可能取代的、但分别含有至少一个双键或叁键的不饱和脂族基。 
本文所用的术语“烷氧基”是指如上定义的、具有与其连接的氧基团的烷基。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。“醚”是两个通过氧共价连接的烃。因此，使烷基变成醚的烷基的取代基是烷氧基或者类似于烷氧基，例如可以由下式之一表示：-O-烷基、-O-链烯基、-O-链炔基、-O-(CH2)m-R8，其中m和R8如上所述。 
术语“烷基”是指饱和脂族基，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环基)、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在优选的实施方案中，直链烷基或支链烷基在其主链中具有30个或少于30个碳原子(例如对于直链为C1-C30，对于支链为C3-C30)，更优选20个或少于20个碳原子。同样，优选的环烷基在其环状结构中具有3-10个碳原子，更优选在其环状结构中具有5个、6个或7个碳原子。 
此外，在本发明说明书、实施例和权利要求书中所用的术语“烷基”(或“低级烷基”)意指既包括“未取代的烷基”又包括“取代的烷基”，后者是指具有置换烃主链的一个或多个碳上的氢的取代基的烷基部分。这样的取代基可以包括例如卤基、羟基、羰基(例如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(例如硫代酸酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰胺基、脒基、亚氨基、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将会知道，烃链上取代的部分本身必要时可以再次被取代。例如，取代烷基的取代基可以包括氨基、叠氮基、亚氨基、酰胺基、磷酰基(包括膦酸酯基和亚膦酸酯基)、磺酰基(包括硫酸酯基、亚磺酰氨基、氨磺酰基和磺酸酯基)和甲硅烷基以及醚基、烷硫基、羰基(包括酮基、醛基、羧酸酯基和酯基)、-CF3、-CN等的取代和未取代形式。示例性的取代烷基如下所述。环烷基可进一步被烷基、链烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、羰基取代的烷基、-CF3、-CN等取代。 
除非对碳数目另有说明，否则本文所用的“低级烷基”是指如上定义的、但在其主链结构中具有1-10个碳原子、更优选1-6个碳原子的烷基。同样，“低级链烯基”和“低级链炔基”具有相似的链长。在本申请中，优选的烷基是低级烷基。在优选的实施方案中，在本文称为烷基的取代基是低级烷基。 
术语“烷硫基”是指如上定义的、具有一个与其结合的硫基团的烷基。在优选的实施方案中，“烷硫基”部分由-S-烷基、-S-链烯基、-S-链炔基和-S-(CH2)m-R8之一表示，其中m和R8如上定义。代表性的烷硫基包括甲硫基、乙硫基等。 
术语“胺基”和“氨基”是本领域公知的，既指未取代的胺又指取代的胺，例如可由以下通式表示的部分： 
或 
Figure BYZ000004127989500382
其中R9、R10和R’10各自独立代表氢、烷基、链烯基、-(CH2)m-R8，或者R9和R10与其所连接的N原子结合在一起形成在其环状结构中具有4-8个原子的杂环；R8代表芳基、环烷基、环烯基、杂环基或多环基；而m为0或1-8范围内的整数。在优选的实施方案中，仅R9或R10中的一个可以为羰基，例如R9、R10和氮一起不形成二酰亚胺。在再更优选的实施方案中，术语“胺基”不包括酰胺基，例如，其中R9和R10中的一个代表羰基。在甚至更优选的实施方案中，R9和R10(和任选R’10)各自独立代表氢、烷基、链烯基或-(CH2)m-R8。因此，本文所用的术语“烷基氨基”是指如上定义的、具有与其连接的取代或未取代的烷基的胺基，即R9和R10中至少一个为烷基。 
术语“酰胺基”是本领域公知的氨基取代的羰基，包括可由以下通式表示的部分： 
Figure BYZ000004127989500391
其中R9、R10如上定义。酰胺的优选实施方案将不包括可能为不稳定的二酰亚胺。 
本文所用的术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基(例如芳族基或杂芳族基)。 
本文所用的术语“芳基”包括可包括0-4个杂原子的5元、6元或7元单环芳族基团，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、 唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。那些在环结构中具有杂原子的芳基也可以被称为“芳基杂环基”或“杂芳基”。芳环可以在一个或多个环位置上被如上所述的这类取代基取代，所述取代基例如卤基、叠氮基、烷基、芳烷基、链烯基、链炔基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚基、烷硫基、磺酰基、亚磺酰氨基、酮基、醛基、酯基、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等。术语“芳基”也包括具有两个或两个以上环的多环体系，其中两或两个以上碳对于两个相邻环是共用的(所述环为“稠环”)，其中所述环中至少一个为芳环，例如其它环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基。 
本文所用的术语“碳环”是指其中每个环原子都为碳的芳环或非芳环。 
术语“羰基”是本领域公知的，包括可由以下通式表示的部分： 
或 
其中X为一个键，或者代表氧或硫，且R11代表氢、烷基、链烯基、 -(CH2)m-R8或药学上可接受的盐，R′11代表氢、烷基、链烯基或-(CH2)m-R8，其中m和R8如上定义。在X为氧且R11或R′11不为氢的情况下，该式代表“酯”。在X为氧且R11如上定义的情况下，该部分在本文被称为羧基，特别是当R11为氢时，该式代表“羧酸”。在X为氧且R′11为氢的情况下，该式代表“甲酸酯”。一般而言，在上式中氧原子被硫原子取代的情况下，该式代表“硫代羰基”。在X为硫且R11或R′11不为氢的情况下，该式代表“硫代酸酯”。在X为硫且R11为氢的情况下，该式代表“硫代羧酸”。在X为硫且R′11为氢的情况下，该式代表“硫代甲酸酯”。另一方面，在X为一个键且R11不为氢的情况下，上式代表“酮”基。在X为一个键且R11为氢的情况下，上式代表“醛”基。 
本文所用的术语“杂原子”是指除碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子为硼、氮、氧、磷、硫和硒。 
术语“杂环基”是指其环结构包括1-4个杂原子的3-10元环状结构，更优选3-7元环。杂环也可以是多环。杂环基包括例如噻吩、噻蒽、呋喃、吡喃、异苯并呋喃、色烯、呫吨、苯并氧硫杂环己二烯(phenoxathiin)、吡咯、咪唑、吡唑、异噻唑、异 
Figure 766110DEST_PATH_GYZ000002699134400011
唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、嘧啶、菲咯啉、吩嗪、吩砒嗪、吩噻嗪、呋咱、吩 
Figure 620933DEST_PATH_GYZ000002699134400012
嗪、吡咯烷、 
Figure 400670DEST_PATH_GYZ000002699134400013
烷、硫杂环戊烷、 
Figure 795880DEST_PATH_GYZ000002699134400014
唑、哌啶、哌嗪、吗啉、内酯、内酰胺例如β-丙内酰胺和吡咯烷酮、磺内酰胺、磺酸内酯等。杂环可以在一个或多个位置上被如上所述的这类取代基取代，所述取代基例如卤基、烷基、芳烷基、链烯基、链炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚基、烷硫基、磺酰基、酮基、醛基、酯基、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等。 
本文所用的术语“硝基”是指-NO2；术语“卤基”是指-F、-Cl、 -Br或-I；术语“巯基”是指-SH；术语“羟基”是指-OH；而术语“磺酰基”是指-SO2-。 
“亚膦酰胺基”可由以下通式表示： 
或 
Figure BYZ000004127989500412
其中R9和R10如上定义，Q2代表O、S或N，且R48代表低级烷基或芳基，Q2代表O、S或N。 
“亚磷酰胺基”可由以下通式表示： 
Figure BYZ000004127989500413
或 
其中R9和R10如上定义，而Q2代表O、S或N。 
“磷酰基”通常可由以下通式表示： 
其中Q1代表S或O，而R46独立代表氢、低级烷基或芳基。当用于取代例如烷基时，所述磷酰基烷基的磷酰基可由以下通式表示： 
Figure BYZ000004127989500416
或 
Figure BYZ000004127989500417
其中Q1代表S或O，而每个R46独立代表氢、低级烷基或芳基，Q2代表O、S或N。当Q1为S时，所述磷酰基部分为“硫代磷酸酯基”。 
术语“多环基”是指两个或两个以上的环基(例如环烷基、环烯 基、环炔基、芳基和/或杂环基)，其中两个或两个以上碳是两个相邻环所共有的，例如所述环为“稠环”。通过非相邻原子连接的环称为“桥连的”环。多环的每个环都可以被如上所述的这类取代基取代，所述取代基例如卤基、烷基、芳烷基、链烯基、链炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚基、烷硫基、磺酰基、酮基、醛基、酯基、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等。 
本文所用的短语“保护基”是指保护潜在反应性官能团免遭不需要的化学转化的临时取代基。这类保护基的实例分别包括羧酸的酯、醇的甲硅烷基醚以及醛和酮的缩醛和缩酮。保护基化学领域已有综述(Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective Groups in OrganicSynthesis，第二版；Wiley：New York，1991)。 
“硒烷基”是指具有与其连接的取代硒基的烷基。可以在烷基上取代的示例性“硒醚”选自-Se-烷基、-Se-链烯基、-Se-链炔基和-Se-(CH2)m-R8之一，m和R8如上定义。 
本文所用的术语“取代的”意指包括有机化合物的所有容许的取代基。广义上，所述容许的取代基包括有机化合物的无环和环、分支和不分支、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。说明性的取代基包括例如上文描述的那些取代基。容许的取代基对于合适的有机化合物可以是一种或多种以及相同或不同的取代基。对于本发明而言，诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文描述的满足杂原子化合价的有机化合物的任何容许的取代基。本发明并不以任何方式受到有机化合物的可能取代基的限制。 
可以理解“取代”或“被......取代”包括隐含的附加条件，即这样的取代依照取代原子和取代基的允许化合价进行，并且取代产生稳定的化合物，例如不自发地例如通过重排、环化、消除等发生转化。 
术语“氨磺酰基”是本领域公知的，包括可由以下通式表示的 部分： 
Figure BYZ000004127989500431
其中R9和R10如上定义。 
术语“硫酸酯基”是本领域公知的，包括可由以下通式表示的部分： 
Figure BYZ000004127989500432
其中R41如上定义。 
术语“亚磺酰氨基”是本领域公知的，包括可由以下通式表示的部分： 
Figure BYZ000004127989500433
其中R9和R′11如上定义。 
术语“磺酸酯基”是本领域公知的，包括可由以下通式表示的部分： 
Figure BYZ000004127989500434
其中R41为一个电子对、氢、烷基、环烷基或芳基。 
本文所用的术语“亚磺酰基”是指可由以下通式表示的部分： 
其中R44选自氢、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环基、芳烷基 或芳基。 
可以对链烯基和链炔基进行类似的取代，以产生例如氨基链烯基、氨基链炔基、酰胺基链烯基、酰胺基链炔基、亚氨基链烯基、亚氨基链炔基、硫代链烯基、硫代链炔基、羰基取代的链烯基或链炔基。 
本文所用的对每种表达方式例如烷基、m、n等的定义，当其在任一结构中不止出现一次时，意味着独立其相同结构另外的定义。 
术语三氟甲磺酰基、甲苯磺酰基、甲磺酰基和九氟甲磺酰基是本领域公知的，分别指三氟甲磺酰基、对甲苯磺酰基、甲磺酰基和九氟丁磺酰基。术语三氟甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基和九氟甲磺酰基是本领域公知的，分别指三氟甲磺酸酯基、对甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基和九氟丁磺酸酯基官能团和含有所述基团的分子。 
缩写Me、Et、Ph、Tf、Nf、Ts、Ms分别代表甲基、乙基、苯基、三氟甲磺酰基、九氟丁磺酰基、对甲苯磺酰基和甲磺酰基。本领域普通有机化学家所用的缩写的更详尽一览表参见the Journal ofOrganic Chemistry每卷的第一期；该一览表通常在题为Standard List ofAbbreviations的表中给出。所述一览表中包括的缩写以及本领域普通有机化学家所用的缩写通过引用结合到本文中。 
本发明的某些化合物可以以特定几何形式或立体异构形式存在，本发明考虑认为所有这样的化合物，包括顺式-异构体和反式-异构体、R-对映异构体和S-对映异构体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体、其外消旋混合物及它们的其它混合物，都属于本发明的范围。在取代基例如烷基中可以存在另外的不对称碳原子。所有这样的异构体以及它们的混合物都有意包括在本发明中。 
如果例如本发明化合物的具体对映异构体是所需的，则它可以通过不对称合成来制备，或者通过用手性助剂衍生化，其中分离所得的非对映异构体混合物并切下所述辅助基团，以提供所需的纯对 映异构体。或者，在所述分子含有一个碱性官能团(例如氨基)或酸性碱性官能团(例如羧基)的情况下，可以与合适的旋光酸或碱形成非对映异构体的盐，接着通过本领域熟知的分级分离结晶法或色谱法，对如此形成的非对映异构体进行拆分，随后回收所述纯对映异构体，从而制备非对映异构体的盐。 
考虑了上述化合物的等同实施方案包括在其它方面符合上述化合物并且具有上述化合物相同的一般特性(例如激活hedgehog信号的能力)的化合物，其中对取代基进行一种或多种不负面影响所述化合物功效的简单变化。一般而言，本发明化合物可以采用容易得到的原料、试剂和常规合成方法，通过通用反应方案举例说明的方法(例如下述方法)来制备，或者通过改进方法来制备。在这些反应中，也有可能利用本身已知的但此处并未提及的改进方法。 
对于本发明而言，化学元素依照以下文献进行鉴定：the PeriodicTable of the Elements，CAS version，Handbook of Chemistry and Physics，第67版，1986-87，(封二)。对于本发明而言，也考虑了术语“烃”包括具有至少一个氢原子和一个碳原子的所有容许的化合物，广义上，所述容许的烃包括无环或有环、分支和不分支、碳环和杂环、芳族和非芳族的、可以被取代或者是未取代的有机化合物。 
III.本发明的示例性化合物
正如下文进一步详细描述的，本发明考虑了可以用可以容易鉴定的各种不同的小分子，例如通过本文所述的这类药物筛选测定鉴定的小分子，来实施本发明主题方法。例如，可用于本发明主题方法的化合物包括由通式(I)表示的化合物： 
Figure BYZ000004127989500461
式I
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar和Ar′独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基；且 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Ar′代表苯环，例如未取代的苯环或者被一个或多个包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的苯环。在某 些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环等。在某些实施方案中，Y和Ar′在间位和/或1，3-位与Ar连接。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy在所述环中或所述环的取代基上包含一个氨基，例如 Cy为吡啶基、咪唑基、吡咯基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基等，和/或带有一个氨基取代基。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在某些实施方案中，Cy直接与N连接。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，Ar或Ar′上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(II)表示： 
Figure BYZ000004127989500481
式II
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar和Ar′独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔，其中在Mj中，M有时或每次出现时都构成完整的环结构或其一部分； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy′代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
j每次出现时独立代表0-10的整数，最好是2-7的整数；且 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Ar′代表苯环，例如未取代的苯环或者被一个或多个包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环等。在某些实施方案中，Y和Ar′在间位和/或1，3-位与Ar连接。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或 未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3、C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，Ar或Ar′上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中p和n每次出 现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(III)表示： 
Figure BYZ000004127989500511
式III
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar和Ar′独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基；且 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚 甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Ar′代表苯环，例如未取代的苯环或者被一个或多个包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Ar′中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环等。在某些实施方案中，Y和Ar′在间位和/或1，3-位与Ar连接。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy直接与N连接和/或与NR2连接。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，Ar或Ar′上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，可用于本发明主题方法的化合物包括由通式(IV)表示的化合物： 
Figure BYZ000004127989500531
式IV
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy′代表取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)aR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
Cy代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚 甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy直接与N连接。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所 述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(V)表示： 
Figure BYZ000004127989500561
式V
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy′代表取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、- CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
Cy′代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
j每次出现时独立代表0-10的整数，最好是2-7的整数； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
p和n每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多 个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(VI)表 示： 
Figure BYZ000004127989500591
式VI
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy′代表取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰 基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂芳环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶基等。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在其中某个位 置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi中，如果i＝0将导致存在的两个Y直接连接，或者存在的一个Y直接与N或NR2连接，则在相邻的Mi中i优选代表1-2的整数。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺。 
在某些实施方案中，R代表H或低级烷基，例如H或Me。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy直接与N连接和/或直接与NR2连接。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，本发明主题化合物具有以下式VII的结构： 
Figure BYZ000004127989500621
式VII
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Cy代表取代或未取代的杂环基或环烷基； 
Cy′为取代或未取代的芳环或杂芳环，包括多环； 
W为O或S； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、酰胺基、脒基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式； 
n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，Cy′代表取代或未取代的双环或杂芳环体系，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶基等。在某些其它的实施方案中，Cy′代表芳环或至 少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即以形成联芳环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的饱和碳环或杂环，即由多个sp3杂化原子组成的碳环或杂环。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，R1和R2只要化合价允许则独立代表与其连接的环上的0-5个选自以下的取代基：卤基、低级烷基、低级链烯基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式。 
在某些实施方案中，本发明主题化合物具有以下式VIII的结构： 
式VIII
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
U代表取代或未取代的、与含氮环稠合的芳环或杂芳环； 
V代表低级亚烷基，例如亚甲基、1，2-亚乙基、1，1-亚乙基、1，1-亚丙基、1，2-亚丙基、1，3-亚丙基等； 
W代表S或O，最好是O； 
X代表C＝O、C＝S或SO2； 
R3代表取代或未取代的芳基、杂芳基、低级烷基、低级链烯基、低级链炔基、碳环基、碳环基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳烷基或杂芳烷基； 
R4代表取代或未取代的芳烷基或低级烷基，例如苯乙基、苄基或氨基烷基等； 
R5代表取代或未取代的芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基，包括多环芳基或杂芳基。 
在某些实施方案中，U代表与含氮环稠合的苯环。 
在某些实施方案中，R3选自取代或未取代的芳基、杂芳基、低级烷基、低级链烯基、芳烷基和杂芳烷基。 
在某些实施方案中，R4为未取代的低级烷基，或者为被仲胺或叔胺取代的低级烷基。 
在某些实施方案中，R5选自取代或未取代的苯基或萘基，或者为二芳基烷基，例如2，2-二苯基乙基、二苯基甲基等。 
在某些实施方案中，本发明主题化合物包括由通式(IX)表示的化合物： 
Figure BYZ000004127989500651
式IX
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Z不存在，或者代表取代或未取代的芳环、碳环、杂环或杂芳环，或者代表低级烷基、硝基、氰基或卤基取代基； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-，条件是如果Z不是环，则与Z连接的Y不存在； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、碳环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基烷基、碳环基烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如与N一起可形成4-8元环； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
k代表0-3的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。在某些实施方案中，i每次出现时代表0，只是在排列顺序N-Mi-Y-Ar中例外，其中i代表1。 
在某些实施方案中，Ar和Z独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环，例如未取代的芳环或杂芳环，或者被一个或多个任选包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的芳环或杂芳环。在某些实施方案中，Ar代表苯环。在某些实施方案中，Ar中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环、呋喃环等。在某些实施方案中，与Ar连接的Y出现时以间位和/或1，3-位排列。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在某些实施方案中，Y的唯一一次出现与Mk连接。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi/k中，如果i/k＝0将导致存在的两个Y直接相互连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi/k中i或k优选代表2。在某些实施方案中，如果Y的两次出现与M连接，则Y的至少一次这样的出现不存在。在某些实施方案中，存在不多于两次出现的Y。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲 基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy在所述环中或所述环的取代基上包含氨基，例如Cy为吡啶基、咪唑基、吡咯基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基等，和/或带有氨基取代基。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在某些实施方案中，Cy直接与N连接。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，Ar或Z(其中Z为芳环或杂芳环)上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，Z直接与Ar连接，或者通过一个或两个原子链与Ar连接。在某些实施方案中，Z-Y-M不存在。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(X)表 示： 
式X
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Z不存在，或者代表取代或未取代的芳环、碳环、杂环或杂芳环，或者代表低级烷基、硝基、氰基或卤基取代基； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-，条件是如果Z不为环，则不存在与Z连接的Y； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、碳环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基烷基、碳环基烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如可与N形成形成4-8元环； 
Cy′代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔，其中在Mj中，M有时或每次出现时都构成完整的环结构或其一部分； 
j每次出现时独立代表2-10的整数，最好是2-7的整数； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
k代表0-3的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。在某些实施方案中，i每次出现时代表0，只是在排列顺序N-Mi-Y-Ar中例外，其中i代表1。 
在某些实施方案中，Ar和Z独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环，例如未取代的芳环或杂芳环，或者被一个或多个任选包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的芳环或杂芳环。在某些实施方案中，Ar代表苯环。在某些实施方案中，Ar代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环、呋喃环等。在某些实施方案中，与Ar连接的Y出现时排列在间位和/或1，3-位上。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在某些实施方案中，Y的唯一一次出现与Mk连接。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi/k中，如果i/k＝0将导致存在的两个Y直接相互连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi/k中i或k优选代表2。在某些实施方案中，如果Y的两次出现与M连接，则Y的至少一次这样的出现不存在。在某些实施方案中，存在不多于两次出现的Y。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取 代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，Ar或Z(其中Z为芳环或杂芳环)上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，Z直接与Ar连接，或者通过一个或两个原子链与Ar连接。在某些实施方案中，Z-Y-M不存在。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(XI)表示： 
式XI
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Z不存在，或者代表取代或未取代的芳环、碳环、杂环或杂芳环，或者代表低级烷基、硝基、氰基或卤基取代基； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-，条件是如果Z不为环，则不存在与Z连接的Y； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、碳环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基烷基、碳环基烷基、链炔基、链烯基或烷基，或者两个R结合在一起可形成4-8元环，例如可与N形成形成4-8元环； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基； 
i每次出现时独立代表0-5的整数，最好是0-2的整数；且 
k代表0-3的整数，最好是0-2的整数。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基、芳基或芳烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，最好是伯胺或仲胺。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Ar和Z独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环，例如未取代的芳环或杂芳环，或者被一个或多个任选包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的芳环或杂芳环。在某些实施方案中，Ar和Z中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Z中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环、呋喃环等。在某些实施方案中，与Ar连接的Y出现时排列在间位和/或1，3-位上。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在某些实施方案中，Y的唯一一次出现与Mk连接。在其中某个位置上存在Y的实施方案中，在相邻的Mi/k中，如果i/k＝0将导致存在的两个Y直接相互连接，或者存在的一个Y直接与N连接，则在相邻的Mi/k中i或k优选代表2。在某些实施方案中，如果Y的两次出现与M连接，则Y的至少一次这样的出现不存在。在某些实施方案中，存在不多于两次出现的Y。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中， Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在某些实施方案中，Cy直接与N连接和/或与NR2连接。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和胺取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，Ar或Z(其中Z为芳环或杂芳环)上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磷酰基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)P芳基、-(CH2)P芳烷基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，Z直接与Ar连接，或者通过一个或两个原子链与Ar连接。在某些实施方案中，Z-Y-M不存在。 
在某些实施方案中，可用于本发明的化合物可以由通式(XII)表示： 
式XII
其中，只要化合价和稳定性允许，则： 
Ar代表取代或未取代的芳环或杂芳环； 
Z不存在，或者代表取代或未取代的芳环、碳环、杂环或杂芳环，或者代表低级烷基、硝基、氰基或卤基取代基； 
Y不存在，或者每次出现时独立代表-N(R)-、-O-、-S-或-Se-，条件是如果Z不为环，则不存在与Z连接的Y； 
X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(O2)-、-S(O)-、-C(＝NCN)-、-P(＝O)(OR)-和任选被1-2个诸如低级烷基、链烯基或链炔基的基团取代的亚甲基； 
M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等，或者两个M结合在一起代表取代或未取代的乙烯或乙炔； 
R每次出现时独立代表H或者取代或未取代的芳基、杂环基、碳环基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基烷基、碳环基烷基、链炔基、链烯基或烷基； 
Cy和Cy′独立代表取代或未取代的芳基、杂环基、杂芳基或环烷基，包括多环基；且 
k代表0-1的整数。 
在某些实施方案中，NR2代表分别被一个或两个低级烷基取代的伯胺或仲胺或叔胺，优选伯胺或仲胺，最优选仲胺。 
在某些实施方案中，M每次出现时独立代表取代或未取代的亚甲基，例如-CH2-、-CHF-、-CHOH-、-CH(Me)-、-C(＝O)-等。 
在某些实施方案中，Y在所有位置上都不存在。在某些实施方案中，在Y与Mk相邻的情况下，或者Y不存在，或者k＝0。在某些实施方案中，对于与Cy连接的Mk出现至少一次，k＝0，对于任选出现两次也是如此。在某些实施方案中，对于与Ar和N连接的Mk，k＝1。 
在某些实施方案中，Ar和Z独立代表取代或未取代的芳环或杂芳环，例如未取代的芳环或杂芳环，或者被一个或多个任选包含杂原子(例如O、N和S)的基团取代的芳环或杂芳环。在某些实施方案中，Ar和Z中至少一个代表苯环。在某些实施方案中，Ar和Z中至少一个代表杂芳环，例如吡啶环、噻唑环、噻吩环、嘧啶环、呋喃环等。在某些实施方案中，与Ar连接的Mk出现时排列在间位和/或1，3-位上。 
在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的芳基或杂芳基。在某些实施方案中，Cy′直接与X连接。在某些实施方案中，Cy′为取代或未取代的双环或杂芳环，最好是既为双环又为杂芳环，例如苯并噻吩、苯并呋喃、苯并吡咯、苯并吡啶等。在某些实施方案中，Cy′为单环芳环，或者为至少被取代或未取代的芳环或杂芳环取代的杂芳环，即形成联芳体系。在某些实施方案中，Cy′包括两个取代或未取代的芳环或杂芳环，例如相同或不同、直接由一个或多个键连接的芳环或杂芳环，例如以形成联芳环或双环体系。在某些实施方案中，Cy′代表苯并(b)噻吩-2-基，优选3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，例如其中所述苯并环被1-4个选自以下的取代基取代：卤基、硝基、氰基、甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)和乙基(例如包括卤代乙基，例如CH2CCl3，C2F5等)，优选卤基和甲基(例如包括卤代甲基，例如CHCl2和CF3)。在某 些这样的实施方案中，Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环在4-位(邻近噻吩环的3-取代基)、且任选在7-位(“邻近”噻吩环的S)被氟取代。 
在某些实施方案中，Cy代表取代或未取代的非芳族碳环或杂环，即包括至少一个sp3杂化原子，最好是多个sp3杂化原子。在某些实施方案中，Cy为5-7元环。在某些实施方案中，Cy直接与N连接和/或与NR2连接。在其中Cy为直接与N连接的6元环并且在所述环相对于N的4位上带有一个氨基取代基的实施方案中，所述N和氨基取代基可以在所述环上以反式排列。 
在某些实施方案中，X选自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-S(O2)-。 
在某些实施方案中，Ar或Z(其中Z为芳环或杂芳环)上的取代基选自卤基、低级烷基、低级链烯基、芳基、杂芳基、羰基、硫代羰基、酮基、醛基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、亚磺酰基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、-(CH2)P烷基、-(CH2)P链烯基、-(CH2)P链炔基、-(CH2)POH、-(CH2)PO-低级烷基、-(CH2)PO-低级链烯基、-O(CH2)nR、-(CH2)PSH、-(CH2)PS-低级烷基、-(CH2)PS-低级链烯基、-S(CH2)nR、-(CH2)PN(R)2、-(CH2)PNR-低级烷基、-(CH2)PNR-低级链烯基、-NR(CH2)nR和上述基团的被护形式，其中n和p每次出现时分别代表0-10的整数，最好是0-5的整数。 
在某些实施方案中，Z直接与Ar连接，或者通过一个或两个原子链与Ar连接。在某些实施方案中，Z-Y-M不存在。 
在某些实施方案中，本发明主题激动剂可以根据其对于hedgehog途径的选择性进行选择。这种选择性可以是针对所述hedgehog途径的，而不是针对其它途径的，或者是针对特定hedgehog途径(例如ptc-1，ptc-2等)之间的选择性。 
在某些优选的实施方案中，本发明主题激动剂调节ptc-smo介导的信号转导的ED50为1mM或更低，更优选为1μM或更低，甚至 更优选为1nM或更低。对于hedgehog依赖性激动剂，本发明主题激动剂使hedgehog的活性增加10倍、100倍或甚至1000倍。 
在具体的实施方案中，所述小分子根据用途进行选择，因为它对一种patched同种型比对另一种patched同种型更具选择性，例如对一种patched途径(ptc-1，ptc-2)比对另一种patched途径的选择性高10倍，更优选高至少100倍，或者甚至高1000倍。 
在某些实施方案中，对作为hedgehog途径激动剂的化合物进行选择，以超过除PKA以外的蛋白激酶(例如PKC)选择性地激活hedgehog活性，例如所述化合物调节PKA/hedgehog途径的活性要比其调节其它蛋白激酶的活性高至少一个数量级，优选高至少两个数量级，甚至更优选高至少三个数量级。因此，例如，hedgehog途径的优选激活剂可以激活hedgehog活性的Ki要比其激活PKC的Ki低至少一个数量级，优选低至少两个数量级，甚至更优选低至少三个数量级。在某些实施方案中，PKA/hedgehog激活的Ki小于10nM，优选小于1nM，甚至更优选小于0.1nM。 
本发明主题化合物的合成 
本发明的化合物可以容易地通过有机合成的标准技术来制备，例如依照下面实施例部分中叙述的实施例来制备。例如，可以通过使如下所示命名为A的一种化合物或一对化合物与如下所示命名为B的一种化合物或一对化合物以及命名为C的一种化合物反应，制备本发明主题化合物， 
Figure BYZ000004127989500781
同样，可以使以上命名为C的一种化合物与以下命名为D的一种化合物或一对化合物以及以下命名为E的一种化合物或一对化合物反应， 
或者，可以使以上命名为A的一种化合物或一对化合物以及以上命名为E的一种化合物或一对化合物与以下命名为F的一种化合物反应， 
Figure BYZ000004127989500792
优选如上所示的化合物的组合相互连续反应，例如使两种化合物一起反应，使产物与第三种化合物反应等等，并且所述化合物一般可以以任何顺序连续进行偶联，这是本领域技术人员知道的。在某些实施方案中，一种或多种化合物上的官能团在一个或多个反应 过程中可能需要保护，这是本领域众所周知的，并且为此可以使用任何合适的保护基。对于具体官能团和具体反应，本领域技术人员可以容易地选择出合适的保护基。可以随时进行加工步骤，以修饰反应产物上的官能团或部分，例如通过亲核取代、还原性烷基化或任何其它合适的方法，例如以将N(R)2＝NH2转变成N(R)2＝NHR。 
在以上命名为A-F的化合物中，元件M、X、Y、Z、Cy、Cy′、Ar、i、k、R等如上定义(正如可由下文所概述的)，而R′每次出现时独立代表H、保护基或不稳定反应性基团，例如三烷基甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基)，且R″每次出现时独立代表1)离去基团，例如卤素(例如F、Cl、Br或I)、烷硫基、氰基、烷氧基或当与X连接时能够被胺亲核试剂置换的任何其它基团，2)可活化基团，例如OH，它可以被以下活化剂激活：例如碳二亚胺(例如二异丙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺等)、含磷试剂(例如BOP-Cl、PyBROP等)、草酰氯、光气、三光气或任何相似的试剂，以产生相对于其中R″＝OH的化合物，其针对与胺偶联的、敏感性增加的反应性中间体，或3)X和R″结合在一起代表能够与胺反应的亲电子基团，例如异氰酸酯、异硫氰酸酯或其它类似的反应性部分。 
各种命名为A-F的亚单位可以采用本领域技术人员熟知的多种反应中的任一种进行混合，而且取决于待偶联的具体部分。例如，如在亚单位A-F上标出的NH2基团之一的胺可以通过以下反应与烷基进行偶联：还原性烷基化(例如最后出现的M为醛)、离去基团的亲核置换(例如卤基、磺酸酯基或其它合适的取代基)、环氧化物的亲核开环或者本领域技术人员已知的任何其它合适的反应。同样，胺可以与活化羧酸衍生物或硫代羧酸衍生物进行偶联，例如，从羧酸或硫代羧酸以及活化剂原位制备，或者制备为分离的化合物，例如异氰酸酯、羧酸氯化物等，以提供酰胺、脲、硫脲、硫代酰胺等；与氯甲酸酯、磺酰氯或其它这类化合物反应来提供尿烷、氨磺酰等； 或者同与胺形成共价键的其它亲电子试剂反应。 
芳环和/或杂芳环可以容易地直接使用Stille、Suzuki或其它相关反应例如钯介导的交叉偶联反应进行偶联。芳环和/或杂芳环可以容易地使用以下反应通过杂原子进行偶联：例如使用各种反应例如Ullman反应、由S.Buchwald等开发的各种钯介导的反应之一、通过亲核芳族取代或其它这类反应。同样，采用由S.Buchwald等开发的钯介导的反应、亲核芳族取代等，可以使胺、醇、硫醇和其它这类带有杂原子的化合物与芳环和/或杂芳环进行偶联。对本领域技术人员而言显而易见的是，通过Stille、Suzuki、Heck、Friedel-Crafts反应和其它反应，可以制备通过取代或未取代的烃链连接的芳环和/或杂芳环。 
可能可以用来制备本发明化合物的多种通用合成反应在下文有更详细的描述并且示于图1-31。在不偏离以上概述的通用合成方法的情况下，以上命名为A-F的亚单位中包括的可变基团可以改变以符合式I-VIII和式X-XII中的任一个。 
同样，本发明的化合物可以通过使合适的部分与部分装配的结构进行偶联来制备。例如，可以通过以下方案所示的步骤I-VI中的任一步骤，来制备式XI化合物。 
同样，可以通过以下方案中的任一步骤，来制备式X化合物。 
以此类推，可以通过以下方案中叙述的任一步骤，来制备式XII化合物。 
在以上方案中，M、Cy、Ar、X、Cy′、Y、Z、R、i、k、R′和R″对应于其以上应用，并且可以在如式X-XII描述中所叙述的更窄范围内定义，或者对应于式I-VIII的元件，任选如式I-VIII所附描述进行改进。 
适合进行步骤I的反应包括由S.Buchwald等开发的各种钯介导的反应、亲核芳族取代、氧化性偶联等。 
适合进行步骤II的反应包括M上离去基团的亲核置换、还原性烷基化、胺与以下基团的反应：亲电子羧酸/硫代羧酸衍生物(酰基氯、异氰酸酯、异硫氰酸酯或由BOP-Cl、PyBrOP、碳二亚胺或其它活化剂(例如肽偶联领域中常用的)活化的羧酸，或者其它类似的反应，包括图1-31中某些图详细描述的反应和下文所附的描述中的反应，或者在不存在M和Y的情况下的那些反应，使用由Buchwald等开发的钯介导的反应。 
适合进行步骤III或IV的反应包括Y-R′与亲电子羰基或磺酰基 衍生物(X-R″＝酰基氯、异氰酸酯、异硫氰酸酯，氯甲酸酯，磺酰氯或由BOP-Cl、PyBrOP、碳二亚胺或其它活化剂(例如肽偶联领域中常用的)活化的酸)的反应，或者其它类似的反应，例如图1-31中某些图详细描述和下文所附的描述中的那些反应。 
适合进行步骤V的反应包括离去基团的亲核置换、还原性烷基化、胺与以下基团的反应：亲电子羧酸/硫代羧酸衍生物(酰基氯、异氰酸酯、异硫氰酸酯或由BOP-Cl、PyBrOP、碳二亚胺或其它活化剂(例如肽偶联领域中常用的)活化的羧酸)，或者其它类似的反应，包括图1-31中某些图详细描述和下文所附的描述中的那些反应。 
适合进行步骤VI的反应包括离去基团的亲核置换、还原性烷基化、胺与以下基团的反应：亲电子羧酸/硫代羧酸衍生物(酰基氯、异硫氰酸酯、异氰酸酯或由BOP-Cl、PyBrOP、碳二亚胺或其它活化剂(例如肽偶联领域中常用的)活化的羧酸)，或者其它类似的反应，包括图1-31中某些图详细描述和下文所附的描述中的那些反应。 
适合进行其中Y与所出现的M偶联的步骤VII的反应包括离去基团的亲核置换、还原性烷基化、胺与以下基团的反应：亲电子羧酸/硫代羧酸衍生物(酰基氯、异氰酸酯、异硫氰酸酯或由BOP-Cl、PyBrOP、碳二亚胺或其它活化剂(例如肽偶联领域中常用的)活化的羧酸，或者其它类似的反应，包括图1-31中某些图详细描述和下文所附的描述的那些反应。在其中M不出现的实施方案中，合适的偶联反应包括由S.Buchwald等开发的钯介导的反应、亲核芳族取代、氧化性偶联等。在其中M和Y不存在且Z代表芳环或杂芳环的实施方案中，合适的反应包括Stille、Suzuki和适合形成联芳体系的其它反应。 
本发明的方法还包括使式I-VII中任一个的化合物在以下条件下反应：其中NR2中至少一个R代表H，在使该化合物转变成同一结构式的化合物的条件下，其中相应出现的R代表低级烷基。例如，可以使用与醛和还原剂的还原性烷基化、与烷基卤例如MeI的亲核 烷基化或其它类似的反应。在某些实施方案中，这样的反应可以通过甲硅烷基化的(例如R＝SiMe3)中间体进行。 
本领域技术人员将会容易地认识到，本发明的化合物适合于依照本领域熟知的各种各样的方案来合成，除了本文描述的方案外，所有其它方案计划都属于本发明范围内。 
IV.方法和组合物的示例性应用
本发明的另一方面涉及一种调节细胞的分化状态、存活和/或增殖的方法，即依照本发明主题方法并且在环境可以保证的情况下，使所述细胞与hedgehog激动剂接触。 
例如，本发明考虑了根据这样的发现：hedgehog、ptc和smoothened明显广泛参与形成脊椎动物体内分化组织的有序空间排列，本发明主题方法可用作在体外和体内产生和/或保持一系列不同脊椎动物组织的方法的一部分。所述hedgehog激动剂，就给定组织的增殖或分化而论，无论是诱导型还是抗诱导型的，都可以适当时作为上述任一种制剂。 
例如，本发明方法适用于细胞培养技术。已经证明，体外神经元培养系统对于研究神经发育以及鉴定神经营养因子例如神经生长因子(NGF)、睫状神经营养因子(CNTF)和脑源神经营养因子(BDNF)是基础的和必不可少的工具。本发明的一种用途可以是神经元干细胞培养物，例如使用这类培养物产生新神经元和神经胶质。在本发明主题方法的这些实施方案中，可以使培养细胞与本发明的hedgehog激动剂接触，以便改变培养物中的神经元干细胞的增殖速率和/或改变分化率，或者保持某些终末分化神经元细胞培养物的完整性。在一个示例性的实施方案中，本发明主题方法可用于培养例如感觉神经元或者运动神经元。这样的神经元培养物可用作常规测定系统以及用于治疗性治疗的可植入细胞源。 
依照本发明，大量非致瘤性神经祖细胞可以在体外无限增殖， 并且其增殖速率和/或分化率可由于所述细胞与本发明的hedgehog激动剂接触而受到影响。一般而言，提供一种包括下述步骤的方法：从动物中分离出神经祖细胞，使这些细胞在体外或体内无限增殖，优选在生长因子存在下使这些细胞无限增殖，然后调节这些细胞，使其分化成特定的神经表型，例如神经元和神经胶质，即通过使所述细胞与hedgehog激动剂接触。 
人们认为祖细胞是在紧张性抑制影响之下，这保持所述祖细胞处于抑制状态，直到其需要分化为止。然而，已提供了允许这些细胞增殖的最新技术，而且与终末分化并因此是不分裂的神经元不同，它们可以以无限的数量产生并且特别适合于移植到患有神经变性性疾病的异源宿主和自体宿主中。 
所谓“祖细胞”是指能够无限分裂的并且在特定条件下可以产生最终分化成例如神经元和神经胶质的子细胞的寡潜能干细胞或多潜能干细胞。这些细胞可用于移植到异源宿主或自体宿主体内。所谓异源是指所述祖细胞所来源的动物以外的宿主。所谓自体是指与所述细胞所来源的相同的宿主。 
细胞可得自任何动物的胚胎、出生后、幼体或成体神经组织。所谓任何动物是指含有神经组织的任何多细胞动物。更具体地讲，是指任何鱼、爬行动物、鸟类、两栖动物或哺乳动物等。最优选的供体是哺乳动物，尤其是小鼠和人类。 
就异源供体动物而论，可以使所述动物安乐死，采用无菌程序取出脑和感兴趣的特定部位。具体的感兴趣脑区包括可以获得祖细胞的任何部位，所述祖细胞用于恢复宿主脑退化区的功能。这些区包括中枢神经系统(CNS)区和周围神经系统(PNS)区，其中CNS区包括大脑皮质、小脑、中脑、脑干、脊髓和脑室组织，而PNS区包括颈动脉体和肾上腺髓质。更具体地讲，这些区包括由尾状核和豆状核组成的基底神经节、最好是纹状体内的区，或者发现在早老性痴呆患者中变性的各组细胞，例如苍白球、底丘脑核、上颚基质核； 或者发现在帕金森病患者中变性的致密黑质部分。 
人异源神经祖细胞可来源于从选择流产获得的胎儿组织或者来源于出生后、幼年或成年器官供体。自体神经组织可得自活检组织，或者可得自经历其中去除神经组织的神经外科手术的患者，尤其是在癫痫外科手术，更具体地讲在颞叶切除术和海马切除术期间的患者。 
通过从组织的连接性胞外基质分离出单个细胞，可以从供体组织中获得细胞。可以采用任何已知的方法，包括用酶例如胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理，或者采用物理分离方法，例如用钝头仪器或者用解剖刀切碎，以从组织中获得特定的细胞类型的生长晕，可以实现分离。胎儿细胞的分离可以在组织培养液中进行，而对于分离幼体和成体细胞的优选培养液是人工脑脊髓液(aCSF)。常用的aCSF含有124mM NaCl、5mM KCl、1.3mM MgCl2、2mM CaCl2、26mMNaHCO3和10mM D-葡萄糖。低Ca2+aCSF含有相同的组分，只是MgCl2的浓度为3.2mM，而CaCl2的浓度为0.1mM。 
可以将分离的细胞置于能够支持细胞生长的任何已知培养基(包括MEM、DMEM、RPMI、F-12等)中，所述培养基含有细胞代谢所需的添加剂，例如谷氨酰胺和其它氨基酸、维生素、矿物质和有用的蛋白质例如运铁蛋白等。培养基也可以含有诸如青霉素、链霉素和庆大霉素等抗生素，以防止被酵母、细菌和真菌污染。在某些情况下，所述培养基也可以含有来源于牛、马、鸡等的血清。一种特别优选的细胞培养基是DMEM和F-12的混合物。 
培养条件应该接近生理条件。培养基的pH应该接近生理pH，优选在pH 6-8之间，更优选接近pH 7，甚至更特别是大约pH 7.4。应该在接近生理温度，优选在30℃-40℃之间，更优选在32℃-38℃之间，最优选在35℃-37℃之间，培养细胞。 
细胞可以在悬浮液中或固定底物上生长，但祖细胞的增殖最好是在悬浮液中进行，以通过形成“神经球(neurosphere)”而产生大量 的细胞(参见例如Reynolds等(1992)Science 255：1070-1709；和PCT公布号WO93/01275、WO94/09119、WO94/10292和WO94/16718)。就繁殖(或分裂)悬浮细胞而论，将烧瓶充分振荡，让神经球沉降在瓶底的角落上。然后将该球转移至50ml离心管中，并低速离心。吸出培养基，将细胞重悬于含生长因子的少量培养基中，机械方法分离细胞，然后将其重悬于单独的等份培养基中。 
培养基中的细胞悬液补充任何使祖细胞增殖的生长因子，并且接种到能够支持细胞的任何容器中，尽管如上所述，但是最好是接种到培养瓶或滚瓶中。细胞通常在37℃培养箱中在3-4天内增殖，并且增殖可以在任何时间重新启动，此后分离细胞并将其重悬于含有生长因子的新鲜培养基中。 
在不存在底物的情况下，细胞从瓶底向上生长并且在悬液中继续增殖，形成未分化细胞的中空球。大约在体外3-10天之后，通过轻轻离心并重悬于含有生长因子的培养基中，每2-7天、更准确地讲每2-4天喂养增殖细胞团(神经球)。 
在体外6-7天后，可以通过用钝头仪器、更准确地讲用移液管研磨神经球，以对神经球进行物理分离，可以分离出神经球内的单个细胞。将来自分离神经球的单细胞悬浮于含有生长因子的培养基中，通过在hedgehog激动剂存在下，平板接种(或重悬浮)细胞，可以在培养物中控制细胞的分化。 
为了进一步说明本发明主题hedgehog激动剂的其它用途，注意到大脑内的移植已显露出作为中枢神经系统疗法的另一方案。例如，一种修复受损脑组织的方法包括将来自胎儿或新生动物的细胞移植到成体脑中(Dunnett等(1987)J Exp Biol 123：265-289；和Freund等(1985)J Neurosci 5：603-616)。来自多个脑区的胎神经元可以成功地植入到成体脑中，并且这样的移植物可以缓解行为缺陷。例如，可以通过胚胎多巴胺能神经元的移植物，防止由多巴胺能投射到基底神经节的损伤诱发的运动疾病。新皮质损伤后减退的综合认知功能 也可通过胚胎皮层细胞移植物得到部分恢复。本发明主题方法可用于调节培养物的生长状态，或者在使用胎组织、尤其是神经元干细胞的情况下，可用于调节所述干细胞的分化速率。 
可用于本发明的干细胞是众所周知的。例如，已经鉴定出数种神经嵴细胞，其中一些细胞是多潜能的，可能代表未定型神经嵴细胞，而另一些细胞只可以产生一种细胞类型，例如感觉神经元，可能代表定型祖细胞。本发明方法中所用的hedgehog激动剂对培养这样的干细胞的作用可以是调节未定型祖细胞的分化，或者是调节对定型祖细胞朝向变成终末分化的神经元细胞的发育命运的进一步限制。例如，本发明方法可用于在体外调节神经嵴细胞分化成神经胶质细胞、许旺细胞、嗜铬细胞、胆碱能交感或副交感神经元以及肽能神经元和5-羟色胺能神经元。所述hedgehog激动剂可以单独使用，或者可以与用来更具体地讲增强神经元祖细胞的具体分化命运的其它神经营养因子联合使用。 
除了在本发明主题hedgehog激动剂存在下植入培养的细胞外，本发明的另一方面涉及hedgehog激动剂调节中枢神经系统和周围神经系统中神经元和其它神经元细胞的生长状态的治疗性应用。ptc、hedgehog和smoothened在神经系统发育期间并且也可能在成体状态调节神经元分化的能力说明，在某些情况下，预期本发明主题hedgehog激动剂可以有利于成体神经元对正常细胞的维持、功能表现和衰老的控制；化学或机械损伤细胞中的修复和再生过程；并且治疗某些病理病症的变性。根据这种理解，本发明具体考虑了将本发明主题方法用于来源于下述神经病症的治疗方案(预防和/或降低严重性)：(i)神经系统的急性、亚急性或慢性损伤，包括创伤性损伤、化学损伤、血管损伤和缺陷(例如由中风引起的局部缺血)，以及感染/炎症和肿瘤诱导的损伤；(ii)神经系统的衰老，包括早老性痴呆(Alzheimer′s disease)；(iii)神经系统的慢性神经变性性疾病，包括帕金森病、亨廷顿舞蹈病(Huntington′s chorea)、肌萎缩性侧索硬化等以 及脊髓小脑变性；和(iv)神经系统或影响神经系统的慢性免疫性疾病，包括多发性硬化。例如，就帕金森病的具体病例而论，通过用本发明主题激动剂增加hedgehog活性的干预可以提高胎儿和成体多巴胺能神经元的体内存活率，因而可以提供对该疾病的更有效治疗。因此，在一个实施方案中，本发明主题方法包括给予罹患帕金森病的动物或者处于发生帕金森病危险之中的动物有效量的hedgehog激动剂，以提高所述动物多巴胺能神经元的存活率。 
本发明的方法适用于细胞培养技术。已经证明，体外神经元培养系统对于研究神经发育以及鉴定神经营养因子例如神经生长因子(NGF)、睫状神经营养因子(CNTF)和脑源神经营养因子(BDNF)是基础的和必不可少的工具。一旦神经元细胞已变成终末分化的，则它通常将不会变成另一种终末分化的细胞类型。然而，尽管如此神经元细胞容易丧失其分化状态。当它们在来自成体组织的培养物中生长时以及当它们在再生期间形成胚基时常常观察到这种现象。本发明方法提供一种用于确保充分限制环境的手段，以便在分化状态下保持多巴胺能和GABA能细胞，并且可用于例如设计来测试其它营养因子的特定活性的细胞培养物中。 
在本发明主题方法的这些实施方案，可以使包括多巴胺能和/或GABA能细胞的分化细胞培养物与hedgehog激动剂接触，以便通过防止分化丧失而保持终末分化神经元细胞培养物的完整性。本发明主题方法可以与诱导神经元前体(例如祖细胞或干细胞)分化成多巴胺能神经元或GABA能神经元的试剂联合使用 
许多神经障碍与神经元元件离散群体的变性相关，并且可以用包括hedgehog激动剂的治疗方案进行治疗。例如，早老性痴呆与几个神经递质系统中的缺陷相关，既包括投射到新皮质的那些缺陷又包括居留在皮质的那些缺陷。例如，与年龄相匹配的对照相比，已经观察到早老性痴呆患者体内的基底核的神经元损失相当大(75％)。虽然早老性痴呆迄今为止仍是最常见的痴呆形式，但是数种其它的 障碍也可以引起痴呆。这些变性疾病中的几种是特征为中枢神经系统各部位、尤其是大脑皮质中的神经元死亡的变性性疾病。然而，某些形式的痴呆与位于大脑皮质下的丘脑或白质的变性相关。在此，认知功能障碍由传出物和传入物变性导致的皮质区的分离而引起。亨廷顿舞蹈病涉及纹状体内和皮质胆碱能神经元以及GABA能神经元的变性。皮克病(Pick′s disease)是一种额颞叶和前颞叶的新皮质中的严重神经元变性，有时伴有纹状体内神经元的死亡。对患有这类变性病症的患者的治疗可包括应用hedgehog激动剂，以便控制例如分化和导致神经元损失的细胞凋亡事件(例如提高现有神经元的存活率)以及通过受影响区内的祖细胞促进分化和再生。 
除变性剂诱发的痴呆外，一种或多种本发明主题hedgehog激动剂的药用制剂可以适当地用于治疗其表现为震颤和不随意运动的神经变性性疾病。帕金森病例如主要影响皮质下结构，其特征为黑质纹状体通路、缝核、蓝斑和迷走神经运动核的变性。颤搐通常与底丘脑核损伤相关，该损伤由于急性血管意外伤害所致。也包括最终影响周围神经系统的体细胞分裂的神经原性疾病和肌病，并且表现为神经肌肉障碍。实例包括慢性萎缩症，例如肌萎缩性侧索硬化、Guillain-Barre综合征和慢性周围神经病以及可以表现为进行性延髓性麻痹或脊髓性肌萎缩的其它疾病。本发明方法适合于治疗导致张力减退或共济失调的小脑障碍，例如在同侧肢体中引起损伤性疾病的小脑中的那些病变。例如，hedgehog激动剂制剂可用于治疗涉及前叶(蚓区和腿区)的小脑皮质变性的有限形式，例如这种形式常见于酒瘾患者。 
在一个说明性的实施方案中，本发明主题方法用来治疗肌萎缩性侧索硬化。ALS是包括上运动神经元和下运动神经元在内的疾病综合征所给出的名称。患者可表现出进行性脊髓性肌萎缩、进行性延髓性麻痹、原发性侧索硬化或这些病症的组合。主要病理异常的特征为脊髓中的下运动神经元和大脑皮质中的上运动神经元的选择 性和进行性变性。hedgehog激动剂的治疗性应用可以单独使用，或者结合其它神经营养因子例如CNTF、BDNF或NGF一起使用，以预防和/或逆转ALS患者的运动神经元变性。 
本发明的hedgehog激动剂也可用于治疗周围神经系统的自主性障碍，所述障碍包括影响平滑肌和内分泌组织(例如腺体组织)的神经无力的障碍。例如，本发明主题方法可用于治疗可能由支配心脏纹状肌的神经的变性性病症引起的心动过速或房性心律不齐。 
此外，某些hedgehog激动剂的潜在作用源自hedgehog蛋白在轴索神经元树突的发育和保持中的作用。因此，hedgehog激动剂的潜在作用包括指导轴索的投射以及促进使受神经支配细胞的轴突的分化和保持的能力。因此，包含hedgehog激动剂的组合物可用于支持几种类型的神经节神经元交感神经元和感觉神经元以及运动神经元的存活和再投射。特别是，这样的治疗组合物可用于设计的恢复性治疗，例如，恢复来自损伤诱发的死亡的各种神经元以及在这样的损伤后指导这些神经元的再投射。这样的疾病包括但不限于CNS创伤性梗死、感染(例如病毒性感染，如水痘-带状疱疹病毒感染)、代谢疾病、营养缺乏症、毒性剂(例如顺铂治疗)。 
适当时，本发明主题方法也可用于产生供中枢神经和周围神经损伤修复用的神经修复物。特别是，在通过利用假器官装置插入压伤或切断轴突的情况下，可以将hedgehog激动剂加入到假器官装置中，以调节树突的生长率和再生率。示例性的神经指导通道描述于美国专利5,092,871和4,955,892。 
在另一个实施方案中，本发明主题方法可用于治疗瘤性或增生性转化，例如可能发生在中枢神经系统中的瘤性或增生性转化。例如，hedgehog激动剂可用于使这样的转化细胞变成有丝分裂期后的细胞或凋亡细胞。因此，本发明方法可用作治疗例如恶性神经胶质瘤、脑脊膜瘤、成神经管细胞瘤、神经外胚层肿瘤和室管膜瘤的治疗方案的一部分。 
本发明主题方法对于治疗或预防影响调节周围神经的疾病具有广泛的应用性，所述周围神经包括周围神经节神经元、交感神经元、感觉神经元和运动神经元。一般而言，所述方法的特征可能为包括给予动物有效量的hedgehog激动剂以改变经治疗周围神经细胞的增殖和/或分化状态的步骤。这样的治疗组合物可用于设计的治疗性拯救例如来自损伤诱导死亡的视网膜神经节、内耳神经和听神经以及运动神经元以及这样的损伤后指导这些神经元再投射。这样的疾病和病症包括但不限于化学创伤或机械性创伤、感染(例如病毒性感染，如水痘-带状疱疹病毒感染)、代谢疾病(例如糖尿病)、营养缺乏症和毒性剂(例如顺铂治疗)。每种情况下的治疗目的都可以具有两重性：(1)消除病因和(2)减轻其症状。 
周围神经病是一种涉及手足神经末稍损伤的病症。周围神经病一般是指影响周围神经的疾病，最常见的表现为运动神经、感觉神经、感觉运动神经或自主神经的功能障碍中的一种或其组合。周围神经病所表现出的各种各样的形态可以分别对同样各种各样的原因造成独特影响。例如，周围神经病可以是遗传获得的，可以由系统疾病引起，或者可以由毒性剂诱发。某些引起神经毒性的毒性剂是治疗药物、抗肿瘤药、食物或药物中的污染物以及环境和工业污染物。 
特别是，已知引起感觉和/或运动神经病的化疗药包括长春新碱-一种用于治疗血液恶性肿瘤和肉瘤的抗肿瘤药。神经毒性是剂量依赖性的，并且表现为肠动力降低和周围神经病(在手脚远端肌肉中尤其如此)、体位性低血压和膀胱张力缺乏。同样的问题用紫杉醇和顺铂已有记载(Mollman，J.E.，1990，New Eng Jour Med.322：126-127)，虽然顺铂相关神经毒性可以用神经生长因子(NGF)缓解(Apfel，S.C.等，1992，Annals of Neurology 31：76-80)。尽管所述神经毒性有时在神经毒性剂停药后是可逆转的，但是恢复过程可能非常缓慢(Legha，S.，1986，Medical Toxicology 1：421-427；Olesen等，1991，Drug Safety 6： 302-314)。 
存在许多遗传性周围神经病，包括：雷弗素姆病(Refsum′sdisease)、血内β-脂蛋白缺乏症、丹吉尔病(Tangier disease)、克拉贝病(Krabbe′s disease)、异染性脑白质营养不良、法布莱病(Fabry′sdisease)、Dejerine-Sottas综合征等。迄今为止，所有这些遗传性神经病中，最常见的仍是Charcot-Marie-Tooth病。 
Charcot-Marie-Tooth(CMT)病(亦称腓骨肌萎缩或遗传性运动感觉神经病(HMSN))是最常见的遗传性神经障碍。其特征为无力和萎缩，主要是腓骨肌的无力和萎缩，这是由于周围神经的节段性脱髓鞘及轴突和前角细胞的相关变性所致。通常为常染色体显性遗传，并且常见相关变性性CNS障碍例如弗里德赖希共济失调(Friedreich′sataxia)。 
一方面，本发明的方法可用于治疗遗传性神经病和维持现状。随着分子遗传学的显著进步，该组神经病现在越来越被人们所了解。不同遗传性神经病的症状是多种多样的。共同特性通常是早期开始的脚轻度麻木和麻刺感，缓慢进行性发展到腿和手，随后发展到上肢的其它部位。大多数遗传性神经病的确具有由下肢和上肢远端无力构成的运动组元。大多数遗传性神经病患者的脚患有高位足弓或其它牙间骨变形。该症状是非常缓慢进行性的，并且大多数患者在其症状开始后仍能行走二十多年。 
对遗传性神经病的诊断通常建议早期开始诊断神经病症状，尤其是当也存在有家族史时。在最新遗传学进步之前，该诊断的支持为这样的典型发现：肌电图描记法上神经传导显著变慢以及神经活组织检查。对神经活组织检查的典型发现包括存在所谓的洋葱球，说明神经纤维的反复脱髓鞘和加髓鞘(remyelinating)。随着最新的遗传学进步，两种被称为Charcot-Marie-Tooth病的重要遗传性神经病和易患压迫性麻痹的遗传性神经病现在可用简单的血试验进行诊断，该血试验鉴定出负责这两个实体的不同突变。 
遗传性神经病由代代相传的遗传性异常引起。对于这些病中的几种，遗传缺陷是已知的，并且有各种试验可用于诊断和产前忠告。 
如上所述，本发明主题方法可用作治疗Charcot-Marie Tooth病(CMT)的治疗方案的一部分。这是对遗传性感觉运动神经病的统称。CMT 1型(CMT 1)与髓鞘的脱髓鞘或分解相关。几种不同的异常已被鉴定出来。CMT 1A型最常见由编码髓鞘蛋白(称为PMP-22)的基因的重复引起，而CMT 1B型由一种髓鞘蛋白(称为Po糖蛋白)中的一个突变引起。CMTX是主要影响男人的遗传性感觉运动神经病。它由在X-染色体上编码一种称为连接蛋白32的蛋白的基因突变引起。 
在另一个实施方案中，本发明主题方法可用于治疗家族性淀粉状蛋白性神经病和其它相关遗传性神经病。淀粉状蛋白性神经病通常伴有疼痛、感觉缺失和自主性功能障碍。它由称为甲状腺素运载蛋白的蛋白中的一个突变引起，导致如淀粉状蛋白的蛋白在周围神经中的沉积。 
本发明主题方法可用于治疗遗传性卟啉病，该病可以具有周围神经病的组元。可以用本发明主题方法进行治疗的另一种遗传性神经病是遗传性感觉神经病II型(HSN II)。本发明的方法和组合物也可用于治疗获得性神经病和维持现状。 
例如，hedgehog激动剂可用于预防糖尿病性神经病。糖尿病是神经病最常见的已知病因。它在大约10％糖尿病病人中产生症状。在大多数情况下，该神经病主要是感觉性的，伴有手脚疼痛和感觉缺失。但有些糖尿病病人患有引起一根或多根神经无力的单神经炎或多发性单神经炎，或者患有引起腿无力的腰骶丛病或肌萎缩。 
本发明方法也可用于治疗免疫介导的神经病。免疫系统的主要功能是保护机体抵抗由外界进入的感染性生物体。然而，在某些情况下，免疫系统转变成抵抗自身机体，并引起自身免疫病。免疫系统由几种类型的白细胞组成，所述白细胞包括T-淋巴细胞，它也调节免疫应答；和B-淋巴细胞或浆细胞，它们分泌称为“抗体”的特 异性蛋白，有时，由于未知的原因，免疫系统错误地攻击机体的某些部位，例如周围神经。这就是“自身免疫性”周围神经病。根据受攻击的周围神经部位和免疫反应的类型，存在几种不同的类型。下文概述由免疫系统介导的神经病。 
例如，hedgehog激动剂可用于治疗Guillain-Barre综合征(GBS)-一种发病突然或快速的急性神经病。Guillain-Bane综合征可在发病后数天或数周内发展成麻痹和呼吸衰竭。当免疫系统破坏运动和感觉神经的髓鞘时引起所述神经病。该病发生之前常常发生感染、接种疫苗或创伤，而这被认为是触发自身免疫反应的原因。该病是自身限制性的，而且在6-8周内自发性恢复。但是恢复常常是不完全的。 
急性发病并且可以用本发明方法进行治疗的其它神经病包括急性运动神经病、急性感觉神经病和急性自主神经病，其中存在分别针对运动神经、感觉神经或自主神经的免疫攻击。Miller-Fisher综合征是另一种变异体，其中发生眼注视麻痹、动作失调和不稳定步态。 
可以用本发明主题方法进行治疗的另一种获得性神经病是慢性炎性脱髓鞘多神经病(CIDP)。人们认为CIDP是Guillain-Barre综合征的一种慢性和比较无痛的形式。该病由于重复攻击(称为复发)或以逐步或稳定方式而发展。如在GBS中，这似乎是髓鞘被抗体和T-淋巴细胞破坏。但是由于没有针对CIDP的特异性试验，因此诊断基于临床和实验室特征。 
具有抗周围神经抗体的慢性多神经病是另一种可以用本发明主题方法进行治疗或预防的周围神经病。在某些类型的慢性神经病中，抗神经特异性组分的抗体已被鉴定出来。这些包括与抗髓磷脂相关糖蛋白(MAG)抗体相关的脱髓鞘神经病、与抗神经节苷脂GM1或GDla抗体相关的运动神经病和与抗硫脑苷脂或GDlb神经节苷脂抗体相关的感觉神经病。在这些情况下，所述抗体与寡糖或糖等分子结合，所述分子与神经中的蛋白(糖蛋白)或脂质(糖脂或神经节苷脂)结合。怀疑这些抗体可能引起所述神经病。 
本发明主题方法也可用作治疗与周围神经的脉管炎或血管炎症相关的神经病的治疗计划的一部分。神经病也可以由脉管炎-周围神经中的血管炎症引起。它在周围神经病程中产生小“中风”，并且可以限于所述神经或者它可以扩散到全身，包括皮疹，或者涉及其它器官。数种风湿病如类风湿性关节炎、狼疮、结节性动脉外膜炎或斯耶格伦综合征(Sjogren′s syndrome)都与也可涉及周围神经的全身性脉管炎相关。根据病变的分布和严重程度，脉管炎可以引起多神经炎、单神经炎或多发性单神经炎。 
在再一个实施方案中，本发明的方法可以用来治疗臂神经丛炎或腰骶神经丛炎。位于腋下的臂神经丛包含臂神经和手神经。臂神经丛炎是神经束炎症的结果，并且在一个手臂或两个手臂中产生无力和疼痛。发生在骨盆的骶突(umbosacral)神经丛炎引起腿无力和疼痛。 
hedgehog激动剂也可以适合用于治疗与单克隆γ球蛋白病相关的神经病。在单克隆γ球蛋白病中，骨髓或淋巴器官中的B细胞或浆细胞的单克隆扩充形成良性或恶性肿瘤并且分泌抗体。“单克隆”是因为存在抗体的单克隆，而“γ球蛋白病”表示抗体另一名称的γ球蛋白。在某些情况下，所述抗体与神经组分反应；在其它情况下，所述抗体的片段形成淀粉状蛋白沉积。 
本发明的再一方法涉及本发明主题方法在治疗与肿瘤或赘生物相关的神经病中的用途。神经病可能是由于肿瘤细胞直接浸润神经或者是由于肿瘤的间接作用引起的。后者称为副肿瘤性神经病。几种类型已有描述。例如，本发明主题方法可用于控制与肺癌相关性的感觉神经病。这种神经病与抗称为Hu的蛋白的抗体相关，Hu存在于周围神经的感觉神经元中。同样，本发明主题方法可用于治疗与多发性骨髓瘤相关的神经病。多发性骨髓瘤是一种由骨髓中的分泌抗体的浆细胞引起的骨肿瘤。该肿瘤由浆细胞的单克隆构成，并且它们产生的抗体是相同的或者是单克隆抗体。某些多发性骨髓瘤 病人发生感觉运动多神经病，而且伴有周围神经轴突变性。在其它实施方案中，本发明主题方法可用于治疗与瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom′s macroglobulemia)、慢性淋巴细胞白血病或B细胞淋巴瘤相关的神经病。这些是由脾、骨髓或淋巴结中分泌抗体的B-淋巴细胞引起的肿瘤。这些抗体是单克隆抗体，并且通常与周围神经组元例如MAG、GM1或硫脑苷脂反应。在其它实施方案中，本发明的hedgehog激动剂可用作治疗癌症患者的治疗方案的一部分，其中神经病是局部照射的结果，或者由药物例如长春新碱和顺铂引起。 
本发明也考虑了应用hedgehog激动剂治疗与淀粉状蛋白病相关的神经病。淀粉状蛋白是一种在周围神经中沉积的物质并且干预其作用：所述疾病为淀粉状蛋白病。存在两种主要的类型：原发性淀粉状蛋白病，其中所述沉积含有单克隆抗体的片段(参见上述单克隆γ球蛋白病)；和遗传性淀粉状蛋白病，其中所述沉积含有称为甲状腺素运载蛋白的突变蛋白。原发性淀粉状蛋白病通常与单克隆γ球蛋白病或骨髓瘤相关。 
本发明的另一方面提供作为治疗由感染引起的神经病的手段的本发明主题方法。周围神经病可以由周围神经的感染引起。引起周围神经病的病毒包括引起缓慢进行性感觉神经病的AIDS病毒HIV-I、引起快速进行性麻痹性神经病的巨细胞病毒、引起带状疱疹的带状疱疹病毒和引起运动神经病的脊髓灰质炎病毒。有时，乙型肝炎或丙型肝炎感染与脉管炎性神经病相关。 
引起神经病的细菌性感染包括麻风病和白喉，麻风病引起斑形(patchy)感觉神经病，而白喉可以引起快速进行性麻痹性神经病。引起神经病的其它感染性疾病包括由螺旋体引起莱姆病(Lyme disease)和由寄生虫引起的锥虫病。它们两者均同时伴有多病灶性神经病。 
由营养失调引起的神经病也是用本发明主题方法进行治疗的候选疾病。例如维生素B12、B1(硫胺素)、B6(吡哆醇)或E的缺乏可以产生多神经病，而且伴有周围神经轴突变性。这可能是由于饮食 差或者不能从胃或肠吸收营养物所致。此外，巨大剂量的维生素B6也可以引起周围神经病，因而本发明主题方法可用作这类病例中解毒作用程序的一部分。 
本发明主题方法的另一用途是治疗由肾脏疾病引起的神经病。慢性肾衰可引起严重感觉周围神经病，而且伴有周围神经轴突变性。 
本发明的另一方面提供一种用于治疗甲状腺机能减退性神经病的方法。甲状腺机能减退有时与疼痛性感觉多神经病相关，而且伴有轴突变性。单神经病或多发性单神经病也可能由于肿胀组织压迫周围神经而引起。 
本发明主题方法也可用于治疗由酒精和毒素引起的神经病。某些毒素可引起周围神经病。铅毒性与运动神经病相关；砷或汞引起感觉神经病，而铊可引起感觉神经病和自主神经病。数种有机溶剂和杀虫剂也可以引起多神经病。酒精对神经有直接毒性，而酒瘾是神经病的一个主要病因。在某些实施方案中，本发明主题方法可用作更广泛解毒作用程序的一部分。 
在再一个实施方案中，本发明的方法和组合物可用来治疗由药物引起的神经病。已知数种药物引起神经病。它们其中包括用于治疗癌症的长春新碱和顺铂、用于治疗肾盂肾炎的呋喃妥因、用于治疗心律失常的胺碘酮、用于治疗酒精中毒的戒酒硫、用于治疗AIDS的ddC和ddI以及用于治疗麻疯病的氨苯砜。如上所述，在某些实施方案中，本发明主题方法可用作更广泛解毒作用程序的一部分。 
本发明的方法也可用于治疗由创伤或压迫引起的神经病。局部神经病可以因神经由于受外力或者受到腱和其它组织压迫而引起。其中了解最清楚的是由于腕关节受压引起的腕管综合征和由于神经根伸出脊柱时受压引起的颈神经根病或腰神经根病(坐骨神经痛)。神经压迫的其它共同部位包括肘、腋和膝盖。 
本发明主题方法也可用于各种各样的特发性神经病。每当不能找出神经病的病因时，就使用术语“特发性神经病”。在这些情况 下，所述神经病依照其表现进行分类，即感觉特发性多神经病、运动特发性多神经病或感觉运动特发性多神经病。 
本发明主题方法对治疗或预防影响肌肉组织的疾病具有广泛应用性。一般而言，所述方法的特征可以为包括给予动物有效量的hedgehog激动剂以改变经治疗肌肉组织的增生状态的步骤。给药模式和给药方案将根据待治疗的肌肉组织而变化。 
一方面，本发明涉及肌肉营养因子及其在刺激哺乳动物肌肉生长或分化方面的应用。对肌肉生长的这种刺激可用于治疗萎缩或无力，特别是骨胳肌萎缩和心肌萎缩。另外，其中肌肉组织受损伤、异常或已萎缩的某些疾病是可用本发明进行治疗的，所述疾病例如正常衰老、废用性萎缩、无力或恶病质以及与衰老和肌肉质量丢失相关的各种继发性疾病，例如高血压、葡萄糖不耐症和糖尿病、异常脂血症和动脉粥样硬化性心血管疾病。对肌肉肌病例如肌营养不良的治疗也包括在本发明中。 
就去神经或废用而论，骨胳肌经历导致肌肉大小、蛋白质含量和收缩强度显著减小的快速萎缩。这种萎缩是人类许多神经肌肉疾病的重要组元。在临床环境下，包含本发明主题hedgehog激动剂的组合物可用来抑制肌肉变性，例如用来减小肌肉质量的丢失，例如作为治疗这样的肌消耗性疾病的一部分。 
在优选的实施方案中，将依照本发明的药用组合物给予患有以下疾病的患者：即身体状况异常、与异常肌肉组织和/或肌肉组织的异常调节相关的疾病或病理生理病症。优选给予本发明组合物的疾病是那些直接或间接产生肌肉质量消耗(即丢失)的疾病，即肌肉消耗性疾病。这些疾病包括肌营养不良、心源性恶病质、肺气肿、麻疯病、营养不良、骨软化症、儿童急性白血病、AIDS恶病质和癌症恶病质。 
肌营养不良是遗传性疾病，其特征为进行性无力和肌纤维变性，而无明显神经变性迹象。在杜兴肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy)(DMD)中，患者表现出肌肉质量平均降低67％，而在肌强直性营养不良中，已经显示少数肌蛋白合成平均减少28％，而在非肌蛋白合成中却无任何相应的减少(可能是由于对合成代谢激素或底物反应的终末器官反应减退所致)。已经证明在DMD患者肌肉中蛋白质降解加速。本发明主题方法可用作预防并且在某些情况下逆转与这样的营养不良相关的肌消耗性病症的治疗策略的一部分。 
严重充血性心力衰竭(CHF)的特征为“心源性恶病质”，即心肌和骨骼肌两者中肌蛋白消耗，体重平均减轻19％。所述心源性恶病质由肌纤维蛋白分解速率增加引起。本发明主题方法可用作治疗心源性恶病质的一部分。 
肺气肿是一种慢性阻塞性肺部疾病，定义为终末非呼吸细支气管远端的气腔膨大，伴有小泡壁的破坏性改变。肺功能降低的临床表现包括咳嗽、喘鸣、周期性发生呼吸感染、水肿、和功能减退以及寿命缩短。在肺气肿患者中，酪氨酸流出增加47％。另外，全身亮氨酸流出仍保持正常，全身亮氨酸氧化作用增加，而全身蛋白质合成减少。结果是肌蛋白合成减少，伴有全身蛋白质更新和骨骼肌质量减少。这种减少随着疾病的发展和长期恶化而变得越来越明显。本发明主题hedgehog激动剂可用于预防和/或逆转与这样的疾病相关的肌肉消耗性病症。 
在糖尿病中，存在由于慢性部分去神经(神经病)引起的手的小块肌肉的全面消耗。这随着长期疾病的发展和严重程度而更加明显和恶化。本发明主题方法可用作治疗糖尿病的治疗策略的一部分。 
麻疯病与发生在拇指和食指掌骨之间的肌肉消耗相关。严重营养不良的特征尤其为严重肌肉消耗。本发明主题方法可用于治疗麻疯病的肌肉消耗作用。 
骨软化症是一种由维生素D和钙缺乏引起的营养障碍。在儿童中称其为“佝偻病”，而在成年人中称其为“骨软化症”。显著特征为骨软化(由于矿化作用削弱，伴有过量的骨样累积)、疼痛、触痛、 肌肉消耗和无力、食欲缺乏和体重减轻。这可以由营养不良、屡次妊娠和泌乳(耗尽或减少维生素D和钙贮存)以及维生素D抗性引起。本发明主题方法可用作治疗骨软化症的治疗策略的一部分。 
在儿童急性白血病中，存在导致骨骼肌消耗的蛋白质能量营养不良。研究已经表明，某些儿童表现出肌肉消耗，甚至在诊断出白血病之前就表现出肌肉消耗，肌肉质量平均减少27％。同时脂肪组织却增加33％-37％，导致相对体重和四肢粗细没有净变化。这样的患者可适合用hedgehog激动剂依照本发明方法进行治疗。 
癌症恶病质是一种实体瘤和血液恶性肿瘤患者中以可变发生率发生的复征综合征。在临床上，癌症恶病质表现为脂肪组织和净肌肉质量均大量消耗的体重减轻，是癌症引起的一种死亡病因。癌症恶病质患者生存时间缩短，并且对化疗反应降低。除引起肌肉消耗的疾病外，其它环境条件似乎以某种方式与肌肉质量减少相关。这样的疾患包括由慢性背痛引起的肌肉消耗、衰老提前、由疾病或损伤造成的长期住院治疗、酒精中毒和皮质类固醇治疗。本发明主题方法可用作预防并且在某些情况下逆转与这类癌症相关的肌肉消耗性病症的治疗策略的一部分。 
研究已经表明，在慢性腰背痛的严重病例中，存在脊柱旁肌肉消耗。减少脊柱旁肌肉消耗能缓解疼痛并改善机能。疾病的疗程可包括给予治疗量的一种hedgehog激动剂。 
也认为，老年人中全身无力是由于肌肉消耗引起的。随着机体年龄的增加，越来越多的骨骼肌被纤维组织置换。结果是肌肉力量显著降低，但仅在无脂肪肌肉中只有少量减少。本发明主题方法可用作预防/逆转老年患者肌肉消耗的治疗和预防策略的一部分。 
研究也表明，在损伤或慢性疾病患者和长期住院患者中，存在持续性单侧肌肉消耗，肌肉质量平均减少31％。研究也表明，这可以用增强的物理治疗加以纠正。然而，至少用本发明主题方法扩展至少这样的疗法，可能对许多患者更有效。 
在酗酒者中，存在前胫骨肌肉的消耗。这种近端肌肉损伤由神经原性损伤即糖酵解和磷酸化酶活性降低引起。酒瘾持续时间越长，损害越明显越大。用皮质类固醇治疗的患者经历肌肉质量丢失。这样的患者可能也适合用本发明主题方法进行治疗。 
本发明化合物可用于缓解由上述病症以及其它病症引起的肌肉质量丢失。另外，本发明的hedgehog激动剂可用于兽医和动物饲养业应用，以对抗动物体重减轻，或者促进生长。例如，本发明也可用于提高动物肉品生产效率。具体地说，用hedgehog激动剂喂养动物，或者给动物注射hedgehog激动剂，以便增加总骨骼肌质量，例如，增加如牛、猪、羊、鸡和大麻哈鱼等养殖动物的体重。 
组织和器官的离体保存也是非常需要的。在治疗人类疾病中已很好建立了组织置换疗法。在许多情况下，人们可能希望将肌肉细胞、尤其是肌肉干细胞移植到受体宿主体内，所述受体宿主的细胞是肌肉消耗性疾病中死亡、损伤或功能异常的肌细胞。例如，正常成肌细胞的移植可用于治疗杜兴肌营养不良(Duchenne musculardystrophy)和其它肌肉变性和消耗性疾病。参见例如Partridge(1991)Muscle&Nerve 14：197-212。就成肌细胞而论，可以将其在不同部位进行注射，以治疗肌消耗性疾病。 
本发明主题方法可用于调节体外肌细胞和组织的生长以及加速将植入的肌组织移植到动物宿主中。在这方面，本发明也涉及用hedgehog激动剂进行处理以扩充的成肌细胞培养物。在一个说明性的实施方案中，这样的方法包括获得肌肉样品，最好是包括成肌细胞的样品；任选用酶学方法处理所述细胞样品，以分离所述细胞；在hedgehog激动剂存在下进行培养。 
本发明的另一方面涉及本领域的观察结果：ptc、hedgehog和/或smoothened参与除如上所述的神经元分化以外的其它脊椎动物器官发生途径中所包括的形态发生信号，在其它内皮图式发育以及中胚层和内胚层分化过程中都具有重要的作用。因此，本发明考虑了包 含hedgehog激动剂的组合物也可用于细胞培养和包括非神经元组织的产生和维持的治疗方法。 
在一个实施方案中，本发明利用了这样的发现：ptc、hedgehog和smoothened显然参与控制负责形成消化道、肝脏、肺、和其它起源于原始消化管的其它器官的干细胞的发育。Shh用作从内胚层至中胚层的诱导型信号，该信号对肠形态发生是必不可少的。因此，例如，本发明方法的hedgehog激动剂可用来调节可以具有正常肝脏的多种代谢功能的人工肝脏的发育和保持。在一个示例性的实施方案，本发明主题方法可用于调节消化管干细胞的增殖和分化，以形成可用于聚集胞外基质或者可以在生物相容性聚合物中被囊化的肝细胞培养物，以形成可移植的体外人工肝脏。 
在另一个实施方案中，hedgehog激动剂的治疗组合物可以与这样的人工肝脏移植以及胚胎肝结构联合使用，以调节腹膜内植入的摄取、血管形成以及所植入肝组织的体内分化和保持。 
在再一个实施方案中，本发明主题方法可用于治疗性调节物理损伤、化学损伤或病理损害后的所述器官。例如，包含hedgehog激动剂的治疗组合物可用于部分肝切除术后的肝脏修复。 
起源于胚胎肠的胰腺和小肠的产生取决于肠的内胚层细胞和中胚层细胞之间的细胞间信号。特别是，已经表明，肠中胚层分化成平滑肌取决于来自相邻内胚层细胞的信号。在胚胎后肠中内胚层源性信号的一种候选介质是Sonic hedgehog。参见例如Apelqvist等(1997)Curr Biol 7：801-4。Shh基因通过胚胎肠内胚层表达，但胰腺芽内胚层除外，胰腺芽内胚层反而表达高水平的同源域蛋白Ipf1/Pdx1(胰岛素启动子因子1/胰和十二指肠同源框1)，即一种早期胰腺发育的必要调节剂。Apelqvist等(参见上文)已检查了Shh在胚胎肠管中的差异表达是否控制将周围中胚层分化成小肠和胰腺的特化中胚层衍生物。为了测试这一点，他们使用Ipf1/Pdx1基因的启动子选择性地表达发育中的胰腺上皮中的Shh。在Ipfl/Pdx1-Shh转基因小鼠中，胰 中胚层发育成肠特有的平滑肌和Cajal间质细胞，而不发育成胰间充质和脾脏。另外，接触Shh的胰外植块经历肠分化的相似程序。这些结果提供了这样的证据：内胚层源性Shh的差异表达控制肠管不同部位中相邻中胚层的命运。 
因此，在本发明的正文中，考虑了本发明主题hedgehog激动剂可用于在体内和体外控制或调节胰腺组织的增殖和/或分化。 
存在各种各样的病理细胞增殖和分化病症，本发明的激动剂可为这些病症提供治疗益处，就一般策略而论，例如，为对异常胰岛素表达进行纠正或者调节分化。然而，更一般而言，本发明涉及一种通过使所述细胞与本发明主题激动剂接触来诱导和/或保持分化状态、提高存活率和/或影响胰细胞增殖的方法。例如，本发明考虑了，鉴于ptc、hedgehog和smoothened显然参与形成胰脏组织的有序空间排列，本发明主题方法可作为在体外和体内产生和/或保持这种组织的技术的一部分。例如，可以在细胞培养和治疗方法中使用对hedgehog功能的调节作用，包括产生并保持β-细胞，并且也可能对非胰腺组织，例如用于控制以下组织的发育和保持现状，这些组织得自消化道、脾脏、肺和其它起源于原始消化管的器官。 
在一个示例性的实施方案中，本发明方法可用于治疗影响胰腺组织、特别是其特征为胰腺细胞异常增殖的增生性疾病和肿瘤疾病。例如胰腺癌的特征为可以导致胰腺胰岛素分泌能力改变的胰腺细胞异常增殖。例如，某些胰腺增生(例如胰腺癌)可以导致由于β-细胞功能异常或胰岛细胞团减少所致的低胰岛素血症。就疾病进程中显示异常ptc、hedgehog和smoothened信号而言，本发明主题激动剂可用于提高抗肿瘤治疗后所述组织的再生。 
此外，对hedgehog信号特性在不同点上进行操作可用作在体内和体外重构/修复胰腺组织的策略的一部分。在一个实施方案中，本发明利用了这个事实：ptc、hedgehog和smoothened显然参与调节胰腺组织的发育。一般而言，本发明主题方法可用于治疗性地调节物 理损伤、化学损伤或病理损害后的胰腺。在再一个实施方案中，本发明主题方法可用于细胞培养技术，特别是可用于增强假器官胰腺组织装置的初始产生。例如通过改变hedgehog活性对胰腺组织的增殖和分化的操作，可以提供一种更加小心地控制培养组织特征的手段。在一个示例性的实施方案中，本发明主题方法可用于增强需要β-胰岛细胞的假器官装置的生产，例如可以用于以下专利中介绍的被囊化装置：the Aebischer等的美国专利第4,892,538号、the Aebischer等的美国专利第5,106,627号、the Lim的美国专利第4,391,909号和theSefton的美国专利第4,353,888号。胰岛细胞的早期祖细胞是多潜能的，并且显然从其一开始出现就辅助激活所有胰岛特异性基因。随着发育进行，胰岛特异性激素例如胰岛素的表达变得限于成熟胰岛细胞所特有的表达图式。然而，成熟胰岛细胞的表型在培养时是不稳定的，这是由于可以观察到胚胎性状在成熟β-细胞中的再现。通过应用本发明主题hedgehog激动剂，可以对细胞的分化途径或增殖指数进行调节。 
此外，对胰腺组织分化状态的操纵可以与人工胰脏的移植联合使用，以便促进植入、血管形成和所植入组织的体内分化和保持。例如，对影响组织分化的hedgehog功能的操纵可用作保持移植物存活的一种手段。 
Bellusci等(1997)Development 124：53中报道了Sonic hedgehog调节体内肺间充质细胞增殖。因此，本发明方法可用于调节肺组织的再生，例如用于治疗肺气肿。 
在本发明的另一个实施方案中，包含hedgehog激动剂的组合物可用于体外产生骨骼组织，例如来自骨骼发生干细胞的骨骼组织，以及体内治疗骨骼组织缺陷。本发明特别考虑了应用hedgehog激动剂调节软骨发生和/或骨发生的速率。所谓“骨骼组织缺陷”，是指需要恢复骨或结缔组织的任何部位的骨或其它骨骼结缔组织中的缺陷，而与缺陷来源无关，例如无论是外科手术干预、切除肿瘤、溃 疡、植入物、骨折的结果还是其它创伤性或变性性病症的结果。 
例如，本发明方法可用作恢复结缔组织软骨功能的方案的一部分。这样的方法可用于例如修复软骨组织的缺陷或损伤，所述缺陷或损伤是例如引起关节炎的变性性磨损的结果，以及可由组织创伤引起的机械性扰乱的结果，所述组织创伤例如撕裂半月板组织的置换、半月板切除术、由于撕裂韧带引起的关节松驰、关节错位、骨折或遗传性疾病。本发明的修复方法也可用于重建软骨基质，例如用于整形外科或修复外科以及牙周外科。本发明方法也可用于改进例如半月板、韧带或软骨手术修复后的初步修复程序。此外，如果创伤后尽早应用时，则它可以防止变性性疾病的发生或恶化。 
在本发明的一个实施方案中，本发明主题方法包括用治疗上足够量的一种hedgehog激动剂、特别是Indian hedgehog信号转导选择性激动剂治疗受影响结缔组织，以通过控制包埋在结缔组织中的软骨细胞分化和/或增殖速率来调节所述组织的软骨修复反应。例如关节软骨、关节间软骨(半月板)、肋软骨(连接真肋骨和胸骨)、韧带和腱等结缔组织特别适合于用本发明主题方法在重建和/或再生疗法中进行治疗。本文所用的再生疗法包括治疗已发展至有明显损害的组织的变性状态以及预防性治疗其变性处于最早期或即将来临时的组织。 
在一个说明性的实施方案中，本发明主题方法可用作治疗动关节例如膝关节、踝关节、肘关节、髋关节、腕关节、手指或脚指的指节关节或颞下颌关节的软骨中的治疗性干预的一部分。所述治疗可针对关节的半月板、关节的关节软骨或者它们两者。为了进一步说明，本发明主题方法可用于治疗膝关节的变性性疾病，例如可能由于创伤性损伤(例如运动损伤或过度劳损)或骨关节炎引起的变性性疾病。可以用例如关节镜检查针注射到关节腔内而给予本发明主题激动剂。在某些情况下，所述注射剂可以为水凝胶形式或其它上述缓释溶媒形式，以便使所述注射剂更长时间和更有规律地接触受治 疗的组织。 
本发明还考虑了将本发明主题方法用于软骨移植和假器官装置治疗领域。然而，例如因为软骨和纤维软骨的特征在不同组织间的变化而出现各种问题：例如在关节软骨、半月板软骨、韧带和腱之间，在同一韧带或腱的两端之间，以及在组织表面和深处之间。这些组织的带状排列可以反映出机械性能的逐渐变化，并且当植入组织时不能发生，所述植入组织在这些情况下不分化，缺乏适当应答的能力。例如，当用半月板软骨修复前十字形韧带时，所述组织经历组织转化成纯纤维组织。通过调节软骨发生的速率，本发明主题方法可用于具体解决该问题，即通过有助于适当控制新环境中的植入细胞，可以有效地模拟所述组织较早发育期的肥大软骨细胞。 
同样，本发明主题方法可用于增加假器官软骨装置的产生及其植入。改进治疗的需要已推动以下目的的研究：产生基于胶原-糖胺聚糖模板的新软骨(Stone等(1990)Clin Orthop Relat Red 252：129)、分离的软骨细胞(Grande等(1989)J Orthop Res 7：208；和Takigawa等(1987)Bone Miner 2：449)以及与天然或合成聚合物连接的软骨细胞(Walitani等(1989)J Bone Jt Surg 71B：74；Vacanti等(1991)PlastReconstr Surg 88：753；von Schroeder等(1991)J Biomed Mater Res 25：329；Freed等(1993)J Biomed Mater Res 27：11；和the Vacanti等的美国专利第5,041,138号)。例如，软骨细胞可以在培养物中在由诸如以下聚合物构成的生物可降解、生物相容的高度多孔支架上生长：聚乙醇酸、聚乳酸、琼脂糖凝胶或在规定时间内随着所述聚合物主链的水解而降解成无害单体的其它聚合物。所述基质可设计允许合适营养素和气体交换到所述细胞中，直到开始植入。所述细胞可以在体外进行培养，直至得到待植入细胞的适当细胞体积和密度。所述基质的一个优点是它们可以铸塑或模制成所需的个性化形状，使得最终产物非常类似患者本人的耳或鼻(作为实例)，或者如在关节中，可以使用允许在植入时进行操作的柔性基质。 
在本发明主题方法的一个实施方案中，使所述植入物在培养过程的某些阶段与hedgehog激动剂接触，以便控制软骨细胞的分化速率以及在培养中形成肥大软骨细胞。 
在另一个实施方案中，所述植入装置用hedgehog激动剂进行处理，以便主动重建植入基质，并且使其更适合其预定功能。如上关于组织移植所叙述的，在与基质植入其中的实际机械环境相当的环境中，人工移植物具有不是所来源的相同缺陷。用本发明主题方法调节所述基质中的软骨细胞的能力可以允许所述植入物获得与计划置换的组织相似的特征。 
在又一个实施方案中，本发明主题方法用于增强假器官装置的附着。为了说明，本发明主题方法可用于植入牙周假器官，其中对周围结缔组织的处理刺激在所述假器官周围形成牙周韧带。 
在再一个实施方案中，本发明主题方法可用作在其中这样的骨骼组织有缺陷的动物的某一部位产生骨(骨发生)的方案的一部分。Indian hedgehogis特别是与最终被成骨细胞所置换的肥大软骨细胞相关。例如，本发明hedgehog激动剂的给药可用作调节受治疗者骨丢失速率的方法的一部分。例如，可以使用包含hedgehog激动剂的制剂，例如以控制骨化“模型”形成中软骨内的骨化。 
在本发明的又一个实施方案中，hedgehog激动剂可用于调节精子发生。已经表明，hedgehog蛋白、特别是Dhh参与睾丸生殖细胞的分化和/或增殖和保持。Dhh表达始于紧接Sry(睾丸决定基因)活化后的支持细胞前体，并且在睾丸中持续存在至成年。雄性生物是有活力的但不生育，原因是完全不存在成熟精子。发育中的睾丸在不同遗传背景下的检查提示，Dhh既调节早期精子发生又调节晚期精子发生。Bitgood等(1996)Curr Biol 6：298。在一个优选的实施方案中，hedgehog激动剂可用作致育因子。同样，本发明主题方法的hedgehog激动剂可潜在用于调节正常的卵巢功能。 
本发明主题方法对治疗或预防影响上皮组织的疾病以及在美容 应用中具有广泛的应用性。一般而言，所述方法的特征可以为包括给予动物有效量的一种hedgehog激动剂以改变经治疗上皮组织生长状态的步骤。给药模式和给药方案将根据待治疗上皮组织而变化。例如，在受治疗组织为表皮组织例如皮肤组织或粘膜组织的情况下，将优选局部制剂。 
一种“促进伤口愈合”的方法导致由于进行所述治疗的伤口比没有进行所述治疗的相似伤口更快的愈合。“促进伤口愈合”也可以指所述方法调节尤其是角质形成细胞的增殖和/或生长，或者伤口愈合瘢痕形成更少、疤痕收缩更少、胶原沉积更少和浅表面积更大的方法。在某些情况下，“促进伤口愈合”也可以指当与本发明方法一起使用时，伤口愈合的某些方法提高了成功率(例如皮肤移植的成活率(take rate))。 
并发症对具有不完全愈合的伤口和开放型伤口是恒定的危险因素。尽管大多数伤口无需治疗就可快速愈合，但是某些类型的伤口抵抗愈合。覆盖大表面积的伤口也在较长时间内也仍然开放。在本发明的一个实施方案中，本发明主题方法可用于加速涉及上皮组织的伤口愈合，例如由于手术、烧伤、炎症或刺激引起的伤口愈合。本发明的某些hedgehog激动剂也可预防性用于例如美容制剂形式，以促进组织的再生过程，例如促进皮肤、毛发和/或手指甲的再生过程。 
尽管在修复性外科技术方面的显著进步，但是瘢痕形成在重新获得愈合皮肤的正常功能和形状方面可能是一个重要的障碍。当病理瘢痕形成例如手或脸的瘢痕疙瘩或肥大瘢痕引起功能丧失或身体畸形时尤其如此。在最严重的情况下，这样的瘢痕形成可以突然造成精神社会苦恼和经济生活剥夺的困顿。伤口修复包括下述阶段：止血、炎症、增殖和重建。增殖期包括成纤维细胞和内皮细胞和上皮细胞的增殖。通过应用本发明主题方法，可以使上皮细胞在伤口内及其附近的增殖速率受到控制，以便加速伤口愈合和/或使瘢痕组 织的形成减至最小。 
完全或部分厚度烧伤是常常覆盖大表面积的伤口类型的一个实例，因此需要相当长时间来愈合。结果，常常发生威胁生命的并发症例如感染及体液损失。另外，烧伤愈合常常是无序的，导致瘢痕形成和毁容。在某些情况下，由于过度胶原蛋白沉积所致的伤口挛缩导致伤口附近肌肉活动性降低。本发明的组合物和方法可用于加速烧伤的愈合速率，促进导致更理想的美容结果和更小的伤口挛缩和瘢痕形成的愈合过程。 
覆盖大面积的严重烧伤常常通过取自患者自身的未损坏面积的皮肤自体移植物进行治疗。本发明主题方法也可以与皮肤移植物联合使用，以通过加速移植皮肤和患者的接近移植物的皮肤的生长而提高移植物的“存活”率。 
皮肤溃疡是适合于用本发明主题方法进行治疗的伤口的又一个实例，例如使溃疡愈合和/或防止溃疡变成慢性伤口。例如，七分之一的糖尿病患者在其四肢发生易受感染的皮肤溃疡。受感染糖尿病性溃疡患者常常需要住院治疗、深切护理、昂贵的抗生素且在某些情况下需要截肢。皮肤溃疡例如由于静脉疾病(静脉停滞溃疡)、过度受压(褥疮)和动脉溃疡引起的那些皮肤溃疡也抵抗愈合。现有技术治疗一般限于保护伤口免遭感染，并且在某些情况下，通过血管手术恢复血液流动。依照本发明方法，受影响皮肤部位可以通过包括应用促进伤口的上皮形成的hedgehog激动剂的疗法进行治疗，例如加速皮肤溃疡的愈合速率。 
本发明治疗也可有效作为治疗口腔溃疡和非口腔溃疡(例如由放疗和/或化疗引起的)的治疗方案的一部分。这样的溃疡通常在化疗或放疗后数天内开始。这些溃疡通常开始为被细软灰色坏死性膜覆盖且为炎性组织所包围的小的疼痛性不规则形状损害。在许多情况下，不经过治疗将会导致炎症基础上的损害周围发生的组织增生。例如，溃疡边缘的上皮通常证明有增殖活性，导致表面上皮的持续性损失。 这些损害，由于其大小和上皮完整性丧失，使机体易受继发性感染。食物和水的常规摄取成为一个非常痛苦的事情，如果溃疡扩散到整个消化道，则腹泻及其并发因素通常是显而易见的。依照本发明，包括应用hedgehog激动剂对这样的溃疡的治疗可以降低受影响上皮的异常增殖和分化，有助于降低后续炎症的严重程度。 
在另一个示例性的实施方案中，提供用于治疗或预防胃肠道疾病的本发明主题方法。简而言之，各种各样的疾病与胃肠上皮或绒毛被破坏有关，包括化疗和放疗诱发的肠炎(例如肠毒性)和粘膜炎、消化性溃疡疾病、胃肠炎和结肠炎、绒毛萎缩性疾病等。例如，骨髓移植和癌症治疗中所用的化疗药和放疗快速影响造血组织和小肠中的增殖细胞，导致严重毒性，且常常是剂量限制性毒性。对小肠粘膜屏障的损害导致出血和脓毒病的严重并发症。本发明主题方法可用于促进胃肠上皮的增殖，从而增加对放疗和化疗药的耐受剂量。对胃肠道疾病的有效治疗可以根据包括肠炎评分在内的几个标准、本领域熟知的其它试验来确定。 
Levine等(1997)J Neurosci 17：6277中表明了，hedgehog蛋白可以调节脊椎动物视网膜中的有丝分裂发生和光感受器分化，而Ihh是一种来自着色上皮、促进视网膜祖细胞增殖和光感受器分化的候选因子。同样，Jensen等(1997)Development 124：363中证明了，用Sonichedgehog蛋白的氨基末端片段处理围产期小鼠视网膜细胞，导致掺入溴脱氧尿苷的细胞比例、总细胞数和棒状光感受器、无长突细胞和放射状胶质细胞增加，提示Sonic hedgehog促进视网膜前体细胞的增殖。因此，本发明主题方法可用于治疗视网膜细胞的变性性疾病，并且调节光感受器分化。 
随年龄增加，表皮变薄，皮肤附件萎缩。毛发变得稀疏，皮脂分泌减少，结果是皮肤对干燥敏感、皲裂和裂隙。皮肤弹性降低，胶原纤维减少，从而皮肤收缩。此外，角质化细胞的增殖(说明皮肤厚度和皮肤增殖能力)随年龄的增加而减少。据认为，角质化细胞的 增殖对抗皮肤衰老，即皱纹、厚度、弹性和修复。根据本发明，增殖形式的hedgehog激动剂可在治疗上或美容上对抗、至少在一段时间内对抗衰老对皮肤的作用。 
本发明的再一方面涉及应用本发明主题方法促进毛发生长。毛发基本上由角蛋白即一种坚韧不溶性蛋白组成；其主要强度在于其半胱氨酸的二硫键。每个个体的毛发包括圆柱形毛干和毛根，并且包含在毛囊-皮肤中的瓶样凹陷中。毛囊基部含有称为乳头的指样突出，它由毛发从中生长和血管赖以供应营养的细胞的结缔组织组成。毛干是从皮肤表面向外延伸的部分，而毛根则被描述为毛发的隐蔽部分。毛根的基部延伸到位于乳头上的毛球中。产生毛发的细胞生长在毛囊球中；它们由于毛囊中的细胞增殖而以纤维形式被挤出。毛发“生长”是指由于分裂细胞而形式和延伸毛发纤维。 
正如本领域众所周知的，普通的毛发循环可分为3个阶段：毛发生长初期、毛发生长中期和毛发生长终期。在活动期(毛发生长初期)，皮肤乳头的表皮干细胞快速分裂。子细胞向上移动并分化形成毛发本身的同心层。过渡期即毛发生长中期的特征为毛囊中干细胞的有丝分裂停止。休眠期被称为毛发生长终期，此时毛发保留在头皮中达数周，然后重从其下面长出的新毛发使毛发生长终期的毛干从毛囊除去。根据该模型，显而易见的是，分化成毛细胞的分裂干细胞库越大，毛发生长发生越多。因此，通过分别加强或抑制这些干细胞的增殖，可以实施增加或减少毛发生长的方法。 
因此，在某些实施方案中，本发明主题方法可用作一种促进人毛发生长的方法，例如治疗秃发、脱发或特征为掉头发的其它疾病。 
本发明主题方法也可用于治疗眼组织创伤。一般而言，根据创伤性质，角膜组织的损伤，无论是由于疾病引起，还是由于手术或损伤引起的角膜组织的损伤，都可以影响到上皮细胞和/或内皮细胞。角膜上皮细胞是衬于角膜外表面的非角化上皮细胞，并且提供抗抵外部环境的保护性屏障。角膜创伤愈合是临床医师和研究人员均十 分关注的事情。眼科医师通常面对角膜营养不良和导致持续且复发的上皮糜烂的疑难损伤，这些损伤常常导致永久性内皮损失。在这些情况下，可以使用增殖形式的本发明主题hedgehog激动剂，来促进受影响角膜组织的上皮形成。 
为了进一步说明，通常与眼上皮细胞损伤相关的并且本发明主题方法可提供有益治疗的特殊疾病包括持久性角膜上皮缺陷、复发性糜烂、神经营养性角膜溃疡、角膜结膜炎性干燥、细菌性角膜溃疡、病毒性角膜溃疡等。通常引起上皮细胞层损伤的外科手术包括在眼睛表面实施的激光手术、任何屈光矫正外科手术例如放射状角膜切开术和散光角膜切开术、结膜片、结膜移植、角膜表面片术(epikeratoplasty)和角膜刮除术。此外，浅表创伤例如擦伤、表面糜烂、炎症等可引起上皮细胞损失。根据本发明，使角膜上皮与有效量的hedgehog激动剂接触，以使角膜上皮细胞增殖至适当愈合所述创伤。 
在本发明的另一方面，本发明主题方法可用于诱导上皮源性组织分化和/或促进上皮源性组织增殖。这些分子的这类形式可提供用于治疗涉及上皮组织的增生性和/或瘤性病症的分化疗法的基础。例如，这类制剂可用于治疗其中存在皮肤细胞异常增殖或生长的皮肤疾病。 
本发明方法可用来提高皮肤移植物的“存活率”。表皮组织的移植物，如果所述移植物的存活速率延长，则可以起疱和发生剪切，使所述自体移植物的“存活”概率降低，即与伤口粘连并与下面的肉芽组织形成基底膜。通过用本发明主题方法诱导角质化细胞增殖，可以提高存活率。提高存活率的方法包括使皮肤自体移植物与有效伤口愈合量的一种hedgehog激动剂接触，所述激动剂描述于如上所述的促进伤口愈合的方法中以及促进角质化细胞生长和增殖的方法中。 
皮肤等同物具有许多用途，不仅用作人或动物皮肤供皮肤移植用的置换物，而且用作测定药物和化妆品对皮肤的影响的试验皮肤。 药理试验、化学试验和美容试验中的主要困难是确定产品对皮肤的功效和安全性有困难。本发明皮肤等同物的一个优点是其通过对试验皮肤的体外测试可用作由这类物质产生的效应的指示剂。 
因此，在一个实施方案中，本发明主题方法可用作例如裸露区、形成肉芽伤口和烧伤等皮肤移植的方案的一部分。hedgehog激动剂的应用可以提高这样的移植技术，如分离厚度自体移植物和表皮自体移植物(培养的自体角质化细胞)和表皮自体移植物(培养的同种异体角质化细胞)。就所述同种异体移植物而论，应用本发明主题方法增加培养物中皮肤等同物的形成有助于提供/保持这类移植物的迅速供应(如在组织库中)，使得患者可以在一次手术中用允许持久性愈合出现的材料覆盖。 
在该方面，本发明也涉及包含经用hedgehog激动剂处理而扩充的培养角质化细胞表皮层的活的复合皮肤等同物。本发明主题方法可用作制备活的复合皮肤等同物的方法的一部分。在一个说明性的实施方案中，这种方法包括获得皮肤样品，用酶学方法处理所述皮肤样品，使表皮与真皮分开，用酶学方法处理所述表皮，以释放角质化细胞，在hedgehog激动剂存在下培养表皮角质化细胞直至汇合，平行或独立用酶学方法处理所述真皮，以释放成纤维细胞，培养所述成纤维细胞直至亚汇合，接种含有所述培养细胞的多孔交联胶原蛋白海绵膜，孵育其表面接种的胶原蛋白海绵，使所述成纤维细胞在整个胶原蛋白海绵上生长，然后将其与培养角质化细胞一起接种，再在hedgehog激动剂存在下孵育所述复合皮肤等同物复合物，以促进所述细胞的生长。 
在其它实施方案中，既含有上皮层又含有间充质层的皮肤片可以在培养时分离并且用补充增殖形式的hedgehog激动剂的培养基进行扩充。适用于细胞培养技术的任何皮肤样品可以按照本发明使用。所述皮肤样品可以是自体皮肤样品，或者是同种异体皮肤样品。 
在本发明的另一方面，本发明主题方法可以与各种牙周手术联 合使用，其中最好是控制牙周组织内及其周围的上皮细胞增殖。在一个实施方案中，hedgehog激动剂可用于增强天然牙和假牙周围再次上皮形成(reepithelialization)，例如促进牙龈组织的形成。 
hedgehog基因产物能够调节T淋巴细胞的成熟。本发明的某些方面涉及hedgehog激动剂及其用作抵抗获得性和遗传性免疫性疾病的免疫调节剂。 
例如，这样的组合物可用于使T辅助细胞群体增加到宿主的最佳水平，例如刺激所述动物的免疫系统。本发明主题组合物的这些用途可用于治疗细菌性感染或病毒性感染，以及有助于机体抵抗癌细胞。另一方面，这些物质也能够使宿主适应由自我识别过程紊乱引起的疾病，在所述过程中宿主T-细胞过度攻击内源组织。在这些情况下，本发明主题组合物可用于减少T-细胞群体，使得针对自身的炎性疾病(自身免疫病)例如类风湿性关节炎和多发性硬化的体征和症状得以缓解。 
如本文所述，hedgehog蛋白抑制T淋巴细胞的成熟。根据其抑制作用，在本文提示给予hedgehog激动剂，作为对数种类型的涉及细胞免疫不想要的活化的免疫性疾病例如移植物排斥、自身免疫病等的治疗。 
一般而言，本发明的方法包括给予动物或体内培养淋巴细胞一定量的hedgehog激动剂，所述激动剂通过抑制细胞的成熟而产生非毒性应答。可以在细胞上实施本发明主题方法，所述细胞可以在培养物时分散或是为完整组织或器官的一部分。此外，可以在培养物中提供的细胞(体外)或者完整动物体内的细胞(体内)上实施所述方法。本发明也涉及通过应用本发明的药用制剂来控制T细胞功能性表现的方法。 
虽然不希望受任何具体理论的束缚，但是hedgehog对T细胞成熟的抑制作用可能是至少部分由于hedgehog蛋白拮抗(直接或间接)patched介导的基因表达的调节作用以及由该蛋白介导的其它生理作 用的能力所致的。人们知道，patched基因产物-一种细胞表面蛋白通过引起形态发生素即传递位置信息的蛋白的Wnt和Dpp/BMP家族成员的转录抑制的途径发送信号。在其它组织中，hedgehog的导入缓解(去抑制)由patched赋予的这种抑制，使得特定基因程序得以表达。 
另一方面，本发明提供包含hedgehog激动剂的药用制剂。可供本发明主题方法用的hedgehog激动剂可以方便地与以下生物学上可接受的介质一起配制便于给药：例如水、缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等)或它们的合适混合物。有效成分在所选介质中的最适浓度可以依照药物化学家熟知的方法凭经验确定。本文所用的“生物学上可接受的介质”包括任何和所有溶剂、分散介质以及适合用于所述药用制剂的所需给药途径的介质。对于药学上的活性物质，这类介质的应用是本领域已知的。除非在任何常规介质或试剂与hedgehog激动剂的活性不相容的情况下，否则考虑了其在本发明药用制剂中的用途。合适的溶媒及其包括其它蛋白的制剂描述于例如参考书Remington′s Pharmaceutical Sciences (Remington′s Pharmaceutical Sciences.Mack Publishing Company，Easton，Pa.，USA 1985)。这些溶媒包括注射用“贮库制剂(deposit formulation)”。 
本发明的药用制剂也可以包括兽用组合物，例如适合于兽用的hedgehog激动剂的药用制剂，例如用于治疗家畜或驯养动物，例如狗。 
可充电装置或生物可降解装置也可以提供引入方法。已经开发出各种缓释聚合物装置并且已在最近数年内对药物(包括蛋白质性生物药物)的控制释放进行了体内测试。包括生物可降解聚合物和不可降解聚合物的各种各样的生物相容性聚合物(包括水凝胶)可用于形成供hedgehog激动剂在特定靶部位缓慢释放的植入物。 
本发明的制剂可以经口、胃肠外、局部或直肠给予。它们当然 通过适合于每种给药途径的形式给予。例如，它们以片剂或胶囊剂形式通过注射、吸入、洗眼剂、软膏剂、栓剂、控释贴剂等给予，通过注射、输注或吸入给予；通过洗剂或软膏剂局部给予；以及通过栓剂经直肠给予。优选口服和局部给药。 
本文所用的短语“胃肠给药”是指除肠内给药和局部给药以外的给药模式，通常通过注射给药，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。 
本文所用的短语“系统给药”和“外周给药”是指将化合物、药物或其它物质间接给予中枢神经系统中，致使其进入到患者的系统内，因而经过代谢和其它类似的过程，例如皮下给药。 
可以将这些化合物通过以下任何合适的给药途径给予人或其它动物用于治疗：包括经口、鼻(例如喷雾)、直肠、阴道内、胃肠外、脑池内和局部(例如散剂、软膏剂或滴剂)，包括口腔含化和舌下。 
无论选择何种给药途径，可以合适的水合形式使用的本发明化合物和/或本发明药用组合物都可以配制成药学上可接受的剂型(例如下述剂型)，或者通过本领域技术人员已知的常规方法来配制， 
本发明药用组合物中有效成分的实际剂量水平可以根据具体患者、组合物和给药模式而变化，以便获得有效达到所需的治疗反应而对所述患者无毒的有效成分的量。 
所选剂量水平将会取决于各种各样的因素，包括所用的本发明具体化合物或其酯、盐或酰胺的活性、给药途径、给药时间、待用具体化合物的排泄率、治疗持续时间、结合所用的具体hedgehog激动剂一起使用的其它药物、化合物和/或物质、待治疗患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和先前的药物史以及药学领域熟知的其它因素。 
掌握本领域常规技术的主治医师或兽医可以容易地确定所需药用组合物的有效量并开出处方。例如，主治医师或兽医可以开始以 低于需要达到所需疗效的水平给予所述药用组合物中所用的本发明化合物，然后逐渐增加剂量直到达到所需的效应。 
一般而言，本发明化合物的合适日剂量必将是产生疗效的最低有效剂量的化合物的量。一般而言，这样的有效剂量将取决于上述因素。总的来讲，对于患者，本发明化合物的静脉内、脑室内和皮下剂量范围为每天每千克体重约0.0001mg至约100mg，优选约0.001mg/kg至约10mg/kg，甚至更优选约0.01mg/kg至约1mg/kg。 
如果需要，所述活性化合物的有效日剂量可以在一天内、以适当的间隔、任选在单位剂型内，以独立给予的2、3、4、5、6或更多个亚剂量给予。 
术语“治疗”意指也包括预防、治疗和治愈。 
接受该治疗的患者是有需要的任何动物，一般包括灵长类(特别是人类)和其它哺乳动物，例如马、牛、猪和羊；以及家禽和宠物。 
本发明化合物可以照原样给予，或者在含有药学上可接受的和/或无菌的载体的混合物中给予，并且也可以与其它抗微生物剂例如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷和糖肽联合给予。因此，联合疗法包括以第一次给予的化合物当后续给药时并不完全消失的方式序贯、同时和独立给予所述活性化合物。 
V.药用组合物
尽管有可能单独给予本发明化合物，但是优选本发明化合物作为药用制剂(组合物)给予。依照本发明的hedgehog激动剂可以以任何方便的方式配制，以供人用或兽用药物。在某些实施方案中，所述药用制剂中所包括的化合物本身可以是有活性的，或者可以是前体药物，例如能够在生理环境中转变成活性化合物的前体药物。 
因此，本发明的另一方面提供包含治疗有效量的一种或多种上述化合物的药学上可接受的组合物，所述化合物与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂配制在一起。如下文详细描述 的，本发明的药用组合物可以具体配制成用于给药的固体或液体形式，包括适合于以下的那些形式：(1)口服给药，例如兽用顿服药(水性或非水性溶液剂或混悬剂)、片剂、大丸剂、散剂、颗粒剂、舌用糊剂等；(2)胃肠外给药，例如皮下注射、肌内注射或静脉内注射，例如无菌溶液剂或混悬剂等；(3)局部应用，用于皮肤的乳膏剂、软膏剂或喷雾剂等；或(4)阴道内或直肠内给药，例如子宫托、乳膏剂或泡沫剂等。然而，在某些实施方案中，可以将本发明主题化合物简单地溶于或悬浮于无菌水中。在某些实施方案中，所述药用制剂是无热原的，即不会升高患者的体温。 
本文所用的短语“治疗有效量”是指化合物、物质或包含本发明化合物的组合物以可用于任何医学治疗的合理利益/风险比在动物细胞的至少一个亚群中有效产生某种所需疗效、从而阻断经治疗的细胞内该途径的生物学结果的量。 
本文所用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医疗判断范围内、适合用于与人类和动物组织接触时无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症、同时具有合理利益/风险比的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。 
本文所用的短语“药学上可接受的载体”是指参与将本发明主题激动剂从机体的一种器官或部分运送或转运到机体的另一种器官或部分的药学上可接受的材料、组合物或溶媒，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。每种载体在与制剂的其它组分相容的意义上必须是“可接受的”并且对患者不造成伤害。可用作药学上可接受的载体的材料的某些实例包括：(1)糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉状西黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)甘醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如 甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)Ringer氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)药用制剂中所用的其它无毒性相容的物质。 
如上所述，本发明hedgehog激动剂的某些实施方案可含有碱性官能团，例如氨基或烷基氨基，因而能够与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。在该方面，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒性无机酸和有机酸的加成盐。这些盐可以在本发明化合物的最后分离和纯化期间在现场制备，或者通过使本发明的纯化化合物以其游离碱形式与合适的有机酸或无机酸分别反应，并且分离如此形成的盐。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳二糖酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见例如Berge等(1977)″Pharmaceutical Saks(药用盐)″，J. Pharm.Sci.66：1-19)。 
本发明主题化合物的药学上可接受的盐包括所述化合物的常规无毒盐或季铵盐，例如衍生自无毒有机酸或无机酸的盐。例如，这样的常规无毒盐包括衍生自无机酸的那些盐以及由有机酸制备的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；而所述有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酸苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、异硫代硫酸等。 
在其它情况下，本发明化合物可以含有一个或多个酸性官能团， 因而能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒性无机碱和有机碱的加成盐。这些盐同样可以在本发明化合物的最后分离和纯化期间在现场制备，或者通过使本发明的纯化化合物以其游离酸形式与合适的碱(例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、氨或与药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺分别反应。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。(参见例如Berge等，参见上文)。 
在所述组合物中也可以存在润湿剂、乳化剂和润滑剂例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和香味剂、防腐剂和抗氧化剂。 
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)脂溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁羟茴醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螫合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。 
本发明的制剂包括适合于经口、鼻、局部(包括口腔含化和舌下)、直肠、阴道和/或胃肠外给药的那些制剂。所述制剂可以方便地为单位剂型，并且可以通过药学领域熟知的任何方法来制备。可以与载体材料混合以生产一种剂型的有效成分的量将会根据待治疗宿主、具体的给药模式而变化。可以与载体材料混合以生产一种剂型的有效成分的量一般将是产生疗效的化合物的量。一般而言，在100％范围以内，该量的范围将为有效成分的约1％至约99％，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。 
这些制剂或组合物的制备方法包括使本发明化合物与所述载体 且任选与一种或多种助剂结合的步骤。一般而言，通过使本发明化合物与液体载体或细分的固体载体或它们两者均匀且最终结合、然后必要时使所述产物成形，来制备所述制剂。 
适合于口服给药的本发明制剂可以为以下形式：胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用矫味基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂，或者为水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂，或者为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂，或者为酏剂或糖浆剂，或者作为软锭剂(使用惰性碱，例如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶)和/或漱口剂等，每种剂型都含有预定量的作为有效成分的本发明化合物。本发明化合物也可以作为大丸剂、干药糖剂或糊剂给予。 
在本发明供口服给药用的固体剂型(胶囊剂、片剂、丸剂、糖锭剂、散剂、颗粒剂等)中，将所述有效成分与一种或多种药学上可接受的载体例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或任一下述物质混合：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶等；(3)湿润剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液型阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和一硬脂酸甘油酯等；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物；和(10)着色剂。就胶囊剂、片剂和丸剂而论，所述药用组合物也可以包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可以用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂作为填充软明胶和填充硬明胶的胶囊剂中的填充剂。 
片剂可以通过压制或模制、任选与一种或多种助剂一起压制或模制来制备。压制片剂可以使用以下物质来制备：粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如 淀粉羟乙酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂。模制片剂可以通过在合适的机器中使粉状与用惰性液态稀释剂湿润的化合物的混合物塑型来制备。 
本发明药用组合物的片剂和其它固体剂型例如糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可以任选用包衣剂和壳体(例如肠溶衣或制药领域熟知的其它包衣剂)刻痕或包衣。也可以例如提供所需释放分布型的不同比例的羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、脂质体和/或微球体，将其配制成提供缓慢释放或控制释放其中的有效成分。它们可以通过例如除菌滤器来过滤除菌，或者通过在无菌固体组合物形式中掺入灭菌剂，临用前将该无菌固体组合物溶于无菌水或某些其它无菌注射用介质中。这些组合物也可以任选含有遮光剂，并且可以为它们仅释放所述有效成分或者优先在胃肠道的某一部位中释放所述有效成分、任选以延迟方式释放所述有效成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。所述有效成分也可以为微囊化形式，适当时含有一种或多种上述赋形剂。 
本发明化合物用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。所述液体剂型除含有所述有效成分，还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(特别是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯以及它们的混合物。 
除惰性稀释剂外，所述口服组合物还可以包括辅料，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。 
混悬剂除含有所述活性化合物外，还可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化(metahydroxide)铝、膨润土、琼脂和西黄蓍胶以及它们的混合物。 
可供直肠或阴道给药用的本发明药用组合物的制剂可以为栓剂，所述栓剂可以通过将一种或多种本发明化合物与一种或多种合适的非刺激性赋形剂或载体混合来制备，所述栓剂包含例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯，所述栓剂在室温下为固体，但在体温下为液体，因此，在直肠或阴道腔内会熔化并释放所述活性hedgehog激动剂。 
适用于阴道给药的本发明制剂适当时也包括含所述载体的子宫托、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，这是本领域已知的。 
用于局部或透皮给予本发明化合物的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。可以在无菌条件下将所述活性化合物与药学上可接受的载体以及任何可能需要的防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。 
所述软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂除含有本发明的活性化合物外，还可以含有赋形剂例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或它们的混合物。 
散剂和喷雾剂除含有本发明化合物外，还可以含有赋形剂例如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可另外还含有常用的抛射剂(例如含氯氟烃)和挥发性未取代烃(例如丁烷和丙烷)。 
透皮贴剂具有给机体提供控制传递本发明化合物的相加优点。这样的剂型可以通过将所述hedgehog激动剂溶于或分散在合适的介质中来制备。也可以用吸收增强剂来增强所述hedgehog激动剂穿过皮肤的流出。这样的流出速率可以通过提供控制膜或所述化合物在聚合物基质或凝胶中分散来控制。 
眼用制剂、眼膏剂、散剂、溶液剂等也考虑在本发明范围内。 
适用于胃肠外给药的本发明药用组合物包含一种或多种本发明 化合物以及一种或多药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液剂、分散剂、悬浮剂或乳剂，或者临用前可以在无菌注射用溶液或分散体中重建的无菌粉针剂，还可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使所述制剂与计划受体血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。 
可用于本发明药用组合物中的合适水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和它们的合适混合物、植物油(例如橄榄油)和注射用有机酯(例如油酸乙酯)。可以例如通过使用包衣材料例如卵磷脂、就分散体而论保持所需粒径以及使用表面活性剂，来维持适当的流动性。 
这些组合物也可以含有辅料，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，来确保防止微生物的作用。在所述组合物中可能最好还包括等渗剂例如糖、氯化钠等。另外，可以通过包括延迟吸收的试剂例如一硬脂酸铝和明胶，来延长吸收所述注射药物形式。 
在某些情况下，为了延长药物的作用，最好使皮下或肌内注射的药物缓慢吸收。通过使用水溶性差的晶形或非晶形材料的液体混悬剂，可以完成这一步。所述药物的吸收速率则取决于其溶解率，进而可能还取决于晶体大小和晶形。另一方面，通过将所述药物溶于或悬浮于油性溶媒中，可完成胃肠外给予的药物形式的延迟吸收。 
注射用贮库(depot)形式通过使本发明主题化合物在生物可降解聚合物例如聚交酯-聚乙交酯中形成微囊化基质而制备。根据药物与聚合物之比以及所用具体聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。贮库注射制剂也可通过将所述药物包封在与机体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备。 
当本发明化合物作为药物给予人类和动物时，它们可以照原样给予或者作为含有例如0.1-99.5％(更优选0.5-90％)的有效成分以及 药学上可接受的载体的药用组合物给予。 
优选通过制备含有有效量的所述活性化合物的合适饲料预混合物，并将所述预混合物掺入到完全口粮中，完成在动物饲料中添加本发明的活性化合物。 
另一方面，可以将含有所述有效成分的中间体浓缩物或饲料添加剂掺混到饲料中。可以制备或给予的这种饲料预混合物和完全口粮的方式在参考书中有介绍(例如″Applied Animal Nutrition″，W.H.Freedman and CO.，San Francisco，U.S.A.，1969或″Livestock Feeds and Feeding″O and B books，Corvallis，Ore.，U.S.A.，1977)。 
VI.活性激动剂的合成方案和鉴定
本发明主题抑制剂及其同类物可以容易地通过采用Suzuki、Stille等的交叉偶联技术来制备。这些偶联反应在相对温和的条件下进行并且容许各种各样的“旁观者(spectator)”官能度。 
a.组合文库
本发明化合物、特别是具有各类代表性取代基的变异体的文库适合于组合化学和其它平行合成方案(参见例如PCT WO 94/08051)。结果是相关化合物的大文库，例如在高通量测量中可以对上述化合物的花斑文库(variegated library)进行快速筛选，以便鉴定出潜在的hedgehog激动剂先导化合物，以及改进先导化合物的特异性、毒性和/或细胞毒性-动力学分布型。例如，ptc、hedgehog或smoothened生物活性测定可用于筛选本发明主题化合物文库中针对ptc具有拮抗剂活性或者针对hedgehog或smoothened具有激动剂活性的那些化合物。 
仅仅用以说明，对本发明而言，组合文库是可以根据所需特性一起筛选的化学上相关化合物的混合物。在一个反应中制备许多相关化合物大大减少和简化了需要进行的多个筛选过程。可以通过常规方法对合适的物理性能进行筛选。 
可以在多种不同水平上创建文库的多样性。例如，组合反应中所用的底物芳基就核心芳基部分而论、例如就环状结构而论花斑可以是多样化的，和/或可以随其它取代基而变化。 
在本领域可以利用各种各样的技术来产生有机小分子例如本发明主题hedgehog激动剂的组合文库。参见例如Blondelle等(1995) Trends Anal.Chem.14：83；the Affymax的美国专利5,359,115和5,362,899：the Ellman的美国专利5,288,514：the Still等的PCT公布号WO 94/08051；the ArQule的美国专利5,736,412和5,712,171；Chen等(1994)JACS116：2661：Kerr等(1993)JACS 115：252；PCT公布号WO92/10092、WO93/09668和WO91/07087；和the Lerner等的PCT公布号WO93/20242)。因此，可以合成本发明主题hedgehog激动剂数量级约100-1,000,000或更多的多样化单体(diversomer)的种类繁多的文库，并可以对其特定活性或性能进行筛选。 
在一个示例性的实施方案中，可以利用适合于Still等的PCT公布号WO 94/08051中介绍的技术的方案，来合成候选hedgehog激动剂多样化单体的文库，例如将其通过可水解基团或可光解基团、任选位于候选激动剂或合成中间体取代基的一个位置上的可水解基团或可光解基团与聚合物微珠连接。按照the Still等的技术，在一组微珠上合成所述文库，每个微珠包括一组鉴定该微珠上特定多样化单体的标签。然后可以给微珠文库“平板接种(plated)”hedgehog-效应细胞。所述多样化单体例如通过水解可以从所述微珠中释放出来。 
可用于本发明的化合物结构使其本身可进行快速有效的合成。总的来讲，如上所述，本发明主题化合物的结构性质允许这类化合物的快速组合装配。例如，正如在下述的方案中，与微珠或其它固体支持体连接的活化芳基、例如芳基三氟甲磺酸酯或芳基溴可以通过与芳基锡烷或芳基硼酸进行Stille或Suzuki偶联而与另一芳基连接。如果第二芳基被醛官能化，则可以通过还原性胺化加入一个胺取代基。或者，第二芳基可以被能够被胺置换的离去基团例如三氟 甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基或卤化物官能化。或者，第二芳基可以被能够与胺(例如CyKNH2)进行还原性胺化的胺基官能化。其它可行的偶联技术包括过渡金属介导的胺芳基化反应。所产生的仲胺则可以通过酰基化、烷基化或芳基化进一步官能化，产生叔胺或酰胺，然后可以将其从所述树脂或支持体上切割下来。这些反应一般是相当温和的，并且已成功地应用于组合固相合成方案。此外，适合这些反应并且是可利用的各种各样的底物和偶联配偶体允许在如此中叙述的测定中快速装配大的多样化化合物文库，以供测试用。对于某些方案以及本发明主题化合物的各种取代基上的某些取代，本领域技术人员将会认识到，需要用合适的保护基掩蔽某些官能团。这样的技术是本领域众所周知的，并且容易地应用于组合合成方案中。 
Figure BYZ000004127989501301
对以上途径和相关途径的许多改变使得可以合成可以测试作为hedgehog功能激动剂的化合物的多种多样化文库。 
b.筛选测定
各种各样的测定可用于测定化合物拮抗ptc功能或激活smoothened或hedgehog功能的能力，其中许多化合物可以以高通量形式排列。在许多测试化合物和天然提取物的文库的药物筛选程序中，优选高通量测量，以便使在给定时间周期内所检查的化合物数量最大化。因此，可以抽样检查合成和天然产物文库中作为hedgehog激动剂的其它化合物。 
除无细胞测定外，也可以在基于细胞的测定中对试验化合物进行测试。在一个实施方案中，使对加入的hedgehog蛋白有反应的细胞与感兴趣试验化合物接触，同时对所述测定评分，例如对在所述试验化合物存在下促进细胞增殖进行评分。 
已知多种基因产物涉及patched介导的信号转导，包括patched、cubitus interruptus(ci)家族的转录因子、丝氨酸/苏氨酸激酶fused(fu)和costal-2、smoothened和suppressor-of fused的基因产物。 
通过hedgehog蛋白诱导细胞启动包括对下游效应物的激活和抑制的级联，最终的结果是，在某些情况下，出现基因转录或翻译方面的可检测变化。hedgehog介导信号的潜在转录靶是patched基因(Hidalgo和Ingham，1990 Development 110，291-301；Marigo等，1996)和果蝇cubitus interruptus基因的脊椎动物同系物即Gli基因(Hui等(1994)Dev Biol 162：402-413)。已经表明，patched基因表达在对Shh有反应的肢芽细胞和神经板细胞中被诱导。(Marigo等(1996)PNAS93：9346-51；Marigo等(1996)Development122：1225-1233)。Gli基因编码具有锌指DNA结合结构域的推定转录因子(Orenic等(1990)Genes &Dev 4：1053-1067；Kinzler等(1990)Mol Cell Biol 10：634-642)。据报道，Gli基因的转录在肢芽中在对hedgehog反应时受到正调节，而Gli3 基因的转录在对hedgehog诱导反应时受到负调节(Marigo等(1996) Development 122：1225-1233)。通过选择来自这样的靶基因、例如来自基因patched或Gli基因、在对hedgehog信号反应时负责正调节或负调节这些基因的转录调节序列，并且将这样的启动子与报道基因有效连接，可以进行对特定试验化合物改变hedgehog介导的信号途径的能力灵敏的基于转录的测定。因此，报道基因的表达提供一种用于开发用作hedgehog激动剂的化合物的有价值的筛选工具。 
本发明基于报道基因的测定测量上述事件级联例如转录调节的末期。因此，在实施所述测定的一个实施方案中，将报道基因构建体插入到试药细胞中，以便产生依赖于hedgehog途径被激活或被Shh本身刺激的检测信号。可以用适合于本领域技术人员已知的任一方法，测量所述报道基因的转录量。例如，可以用RNA酶保护或基于RNA的PCR来检测报道基因的mRNA表达，或者可以通过特征性染色剂或内在生物活性鉴定出所述报道基因的蛋白质产物。然后，将报道基因的表达量与在不存在试验化合物的情况下在任一相同细胞中的表达量进行比较，或者将其与在缺少靶受体蛋白的大致相同的细胞中的转录量进行比较。转录量方面的任何统计学上或其它方面的显著增加说明，所述试验化合物以某种方式拮抗正常ptc信号(或激活hedgehog或smoothened信号)，例如所述试验化合物是一种潜在的hedgehog激动剂。 
实施例部分
现在，参照以下实施例，将会更加容易地理解以上作出概括描述的本发明，以下实施例仅仅用来说明本发明的某些方面和实施方案，而不是用来限制本发明。 
在以下的实验部分，术语“Hh蛋白”用来指辛基-Shh-N，即一种亲脂形式的人sonic hedgehog蛋白的细菌源性片段(氨基酸24-198，Shh-N)。准确地讲，Shh-N在体外通过其氨基末端半胱氨酸与辛基马 来酰胺基团共价连接。这种修饰形式，同最近描述的其它形式一样(Pepinsky等，J Biol.Chem.1998，273，14037-45)，在hedgehog信号的几种基于细胞的测定中表现出要比相应的未修饰片段高的特异性潜力。 
化合物筛选
为了测量化合物的hedgehog激动剂活性，我们使用含有hedgehog效应Gli-Luc报道构建体的[10T1/2(s12)]细胞。在每个MTP(微量滴定板；96孔板)中，每孔在完全培养基(10％FBS)中接种10,000-20,000个细胞。大约24-48小时后，各板更换成低血清培养基(＝0.5％FBS)。随后，在存在或不存在辛基-hedgehog的情况下，加入1-5μM试验化合物(参见下文)。再过24小时后，弃去MTP中的培养基，更换为含有裂解缓冲液和萤光素酶底物的萤光素酶测定混合物。将各板在室温下孵育约15-30分钟，然后在发光计中读数。 
筛选A
将各板孵育48小时，然后更换为低血清培养基。在Hh蛋白(0.01μg/ml；EC30＝最大诱导活性的约30％)存在下，对1-2 μM化合物进行筛选。 
筛选B
将各板孵育24小时，然后更换为低血清培养基。在不加Hh蛋白的情况下，对5μM化合物进行筛选。 
化合物反筛选(SV-Luc)
对于反筛选，我们使用含有SV40-萤光素酶表达盒的[10T1/2(SV-Luc)]细胞，该表达盒允许萤光素酶-活性在所述细胞中的组成型水平。该测定使人们能够评价Gli-Luc测定中所选化合物的特异性，即所述化合物是否仅特异性地刺激hedgehog信号途径还是一 般的报道构建体。细胞接种和培养以及化合物操作依照Gli-Luc测定进行。在该测定中，不加入Hh蛋白，因为所述报道构建体已具有组成型活性。 
根据筛选A，我们鉴定出图32和图33中鉴定的命中物(hits)。图32中包括该部分的化合物的1，4-二氨基环己烷亚单位具有两个以反式排列的氨基取代基，例如等同于环己烷亚单位上的这两个取代基。这些命中物在筛选B中得到证实。图34a和图34b所示的数据实质上包括在这两个测定中给予这两种化合物(Gli-Luc和SV-Luc)。 
将Gli-Luc测定的数据换算成活性百分比，其中将Hh蛋白的完全活性设定在100％(图35；表1)。该数据表明，这两种化合物均可以显著刺激Gli-luc报道构建体的活性(即激活hedgehog信号)，甚至在没有Hh蛋白的情况下也是如此；用Hh蛋白，浓度范围0.1-15μM，EC50＝2μM，EC最大＝最大诱导活性的50-70％)。此外，在hedgehog存在下，所述化合物显示出更显著的诱导作用(用Hh蛋白，EC50＝0.2-0.3μM，EC最大＝最大诱导活性的70-90％)，说明所述化合物和Hh蛋白的协同作用，这与用作hedgehog途径激动剂的化合物一致。 
表1
  化合物   EC50(μM)   化合物   EC50(μM)
  A     A’   ＜10
  B   ＜10   B’   ＜10
  C   ＜1   C’   ＜10
  D   ＜0.1   D’   ＜10
  E   ＜10   E’   ＜10
  F   ＜10   F’   ＜10
  G   ＜10   G’   ＜10
  H   ＜1   H’   ＞10
  I   ＞10   I’   ＜1
  J   ＜1   J’   ＜1
  K   ＜1   K’   ＜10
  L   ＜0.05   L’   ＜0.05
  M   ＜1   M’   ＜10
  N   ＜1   N’   ＜1
  O   ＜1   O’   ＜1
  P   ＜1   P’   ＜1
  Q   ＜1   Q’   ＜1
  R   ＜1   R’   ＜0.05
  S   ＜1   S’   ＜0.1
  T   ＜10   T’   ＜0.5
[0800] 
  U   ＜10   U’   ＜1
  V   ＜0   V’   ＜1
  W   ＜10   W’   ＜10
  X   ＜10   X’   ＜10
  Y   ＜10   Y’   ＜10
  Z   ＜10   Z’   ＜10
  A”   ＜10   B”   ＜10
  C”   ＜10   D”   ＜10
  E”   ＜10   F”   ＜0.1
  G”   ＜0.1   H”   ＜0.1
  I”   ＜0.5   J”   ＜0.5
  K”   ＜0.5   L”   ＜1
  M”   ＜1   N”   ＜1
  O”   ＜1   P”   ＜10
  Q”   ＜1   R”   ＜1
  S”   ＜10   T”   ＜10
  U”   ＜0.005   V”   ＜0.005
  W”   ＜0.005   X”   ＜0.005
  Y”   ＜0.05   Z”   ＜0.05
  A”’   ＜0.05   B”’   ＜0.05
  C”’   ＜0.05   D”’   ＜0.05
  E”’   ＜0.05   F”’   ＜0.05
  G”’   ＜5   H”’   ＜0.05
  I”’   ＜0.05   J”’   ＜0.5
  K”’   ＜5   L”’   ＜5
  M”’   ＜0.5   N”’   ＜5
  O”’   ＜1   P”’   ＜5
  Q”’   ＜1   R”’   ＜1
  S”’   ＜1   T”’   ＜1
  U”’   ＜1    
SV-Luc测定的数据(图35)表明，这两种化合物在所测试的浓度范围(高达15μM)内并不影响所述萤光素酶活性，提示所述化合物不刺激来自报道构建体本身的活性，但可能对hedgehog途径有特异性。此外，未受影响的活性提示，所述化合物对所述细胞没有内在毒性。 
Hh激动剂：gli正调节的定量RT-PCR测定
测试图32和图33的化合物激活Hedgehog途径的两个已进行了深入细致研究的靶的转录的能力：转录因子Gli-1和推定的Hedgehog受体组分Ptc-1。如图35所示，我们发现化合物浓度为8μM时，对这两个靶的诱导是对对氰基苯基化合物B而言约为用最适浓度Hh蛋白获得的60％，而对间硝基苯基化合物A而言约为用最适浓度Hh蛋白获得的40％。 
各测定如下进行： 
将鼠C3H 10T1/2细胞以约200,000个细胞/孔接种到装有完全培养基(10％FBS)的24孔板中。24小时后，除去培养基并更换成含有不同稀释度的化合物或Hh蛋白的“饥饿”培养基(0.5％FBS)。16-18小时后，采用TriZol(Life Technologies，inc.)制备总RNA。 
用1μg等分的总RNA和M-MTV逆转录酶(Life Technologies，，Inc.)制备随机六聚体引发的cDNA。 
为了测量Gli-1和Ptc-1转录物的相对水平，用ABI Prism 7700Sequence Detection System(序列检测系统)进行TaqMan测定(PEBiosystems)。作为内部对照，在各反应中同时测量GAPDH转录物水平。运用Sequence Detector v1.6.3(Perkin Elmer)对数据进行分析。 
Hedgehog信号激动剂诱导小脑神经元前体增殖
为了测试Hedgehog信号激动剂的功效，测定所述激动剂刺激小脑神经元前体增殖的能力。已知小脑颗粒神经元前体由于增殖而对Hh蛋白应答。为了测试所述激动剂，剥离出生后(1周)大鼠脑的小脑神经元，并将其置于原代细胞培养物中。在培养的第一天(0 DIV)加 入处理剂一次。保持细胞在培养物中直至2DIV，当加入3H-胸苷达5小时；该3H-胸苷掺入到细胞中的量提供对所述细胞增殖水平的度量。然后将细胞裂解，测定3H-胸苷的掺入情况。阳性对照为终浓度为1.0μg/ml的Hh蛋白。单独的Hh蛋白在3H-胸苷掺入方面引起约20倍增加，这与Shh刺激这些细胞增殖的已知能力一致。未经Hh-蛋白刺激的细胞(包括用对照溶媒(DMSO)处理的细胞)的增殖水平非常低。然而，发现图32中所测试的两种Hh激动剂即A和B在不存在Hh蛋白处理的情况下显著刺激3H-胸苷掺入，如图36所示。5.0μM的对氰基苯基化合物B引起诱导3H-胸苷掺入达10.2倍。图37显示激动剂D在不存在Shh的情况下也强烈刺激3H-胸苷掺入。1.0μM、0.3μM或0.1μM D分别引起16倍、17倍或13倍的诱导3H胸苷掺入到所述细胞中。这些观察结果证明，所述hedgehog激动剂可以刺激靶细胞中已知的hedgehog生物反应。 
神经挤压测定
CD-1雄性小鼠用240mg/kg IP阿佛丁进行麻醉。剃掉小鼠膝周围大腿腹侧部位上的毛，用70％乙醇消毒，接着用聚维酮碘拭抹。用镊子镊住大腿上的皮肤，然后用小剪刀在皮肤上剪开1/4英寸切口。去掉脂肪并暴露出股神经、动脉和静脉。用7号向下弯曲的镊子尖，剥离出恰好位于股动脉/静脉下的肌肉，以露出该肌肉深处的坐骨神经。同时使用两把镊子保持肌肉分开，再用两把镊子小心地镊出该神经。小心操作以致不镊出肌肉纤维。用镊子镊3次，以使神经与肌肉分开。用弯头镊子提起神经且保持在肌肉之上，用止血钳夹住神经，使神经保持在该止血钳的中部。将该止血钳在该处保持10秒。以这种方式，挤压膝盖(和分支)上大约1+cm的两条坐骨神经。松开止血钳，让神经重新缩回到肌肉中。用一支小吸管尖(P2)将少量组织学组织标记染料加入到该压伤部位。用手术小夹缝合该切口。小心操作以防止将皮肤夹进肌肉中。在整个实验过程中，将 该小夹保留在原处。 
给一组小鼠进行对照手术。这包括用镊子摄出神经，然后让其在无任何挤压的情况下缩回原处。该部位也可以用组织学染料进行标记。 
药物处理在手术后当天开始。对于以剂量为1mg/kg的PBS溶液给予的Shh蛋白即Shh和免疫球蛋白的融合蛋白(如描述于美国临时专利申请号60/164025，该文献通过引用结合到本文中)，用装有28针头的1/2cc胰岛素注射器在小鼠背的中部进行皮下注射，并且每隔一天重复该步骤直到第12-13天。(到那时完成恢复过程)。对于激动剂给药，通过微量泵(1μL/小时)给予在43％DMSO/PBS中的激动剂溶液(图38A和图39B)或在10％DMSO/水中的激动剂溶液(图38B和图39D)。手术后第4天开始行为实验，并连续进行到第12天或第13天。 
行为实验-握力分析
将一只小鼠放在8″x8″金属网格(类似试管架)，孔径1cm，将该网格慢慢地匀速反转10次。记录小鼠不能用其左右后肢抓握的次数。必要时，通过将小鼠在该网格上重定位，使该小鼠远离网格边缘。如果小鼠恰好用其小腿钩住网格或攀住网格，则认为失败。如果小鼠走动而不能抓住网格，则重复反转。 
左右腿失败的动物与该实验组的其它动物混放在一起(在任何给定的时间点，6只动物/组x2只脚握力评分/动物＝12握力评分/组)。激动剂D的结果示于图38A。仅用溶媒处理的动物一般到手术后第9天自发恢复。图38B显示在处理方案中用在10％DMSO/水的溶媒中溶解的激动剂D获得的结果。 
行为实验-趾伸展测量
趾伸展测量在手术后第4天开始并且每隔一天进行测量。小鼠通过近尾部的部位固定，并让小鼠用其前肢抓住笼子的金属丝上面。 用一把小的漆刷或棉花涂药器给小鼠的后趾和爪垫涂上油漆。让小鼠走过一张干净的纸，使每个后肢留下至少两个清楚的趾印。用一把尺子，在每只脚最宽的趾印间画出一条直线，然后量出它们之间的距离。随着动物的恢复，距离增加至正常测量结果。 
求出该动物左右腿分值的平均值，并将其与该实验组的其它动物混放在一起(在任何给定的时间点，6只动物/组x2只脚握力评分/动物＝12握力评分/组)。激动剂D的结果示于图39A和图39B。图39D显示了在该方案中在10％DMSO/水的溶媒中溶解的激动剂D的作用。 
报道小鼠测定
带有处于patched基因座调节控制之下的β-半乳糖苷酶转基因的小鼠(ptc-lacZ小鼠)在其中表达内源小鼠patched基因的相同细胞中表达β-半乳糖苷酶蛋白。因此，所述β-半乳糖苷酶蛋白可用作表达内源patched基因的真正报道基因。所述patched基因是hedgehog信号途径的已知组分并且当所述hedgehog途径被激活时而受到正调节。因此，在ptc-lacZ小鼠中，β-半乳糖苷酶蛋白在其中所述hedgehog途径已被激活的小鼠中过量表达，导致当组织用X-gal底物针对酶活性进行染色时着更深的蓝色(由于较高水平的β-半乳糖苷酶所致)。 
将ptc-lacZ小鼠分成4个处理组并且用以下化合物或化合物的组合处理4天，而且从出生后的第1天开始(dipal-Shh＝二棕榈酰化Sonic hedgehog)： 
1)   dipal-Shh        10mg/kg/注射       2X/天 
2)   Dipal-Shh        1mg/kg/注射        2X/天 
     溶媒             10-15μl/注射      4X/天 
3)   dipal-Shh        1mg/kg注射         2X/天 
     激动剂B          15mg/kg/注射       4X/天 
4)   不进行处理 
所述激动剂的溶媒是10％DMSO的PBS溶液(pH 7.2)。注射来自在溶媒溶液中溶解的4.67mM原液的激动剂。 
最后一次注射后18小时，处死小鼠，收集以下组织：颅骨、肾脏、肺、肩胛骨、皮肤和心脏。所有组织都在0.2％戊二醛、5mM EDTA(pH 8.0)、20mM MgCl2、100mM Na2HPO4中固定30分钟，然后在1mg/ml X-gal、12.5mM亚铁氰化钾、12.5mM铁氰化钾、2mMMgCl2、0.01％脱氧胆酸、0.02％NP-40和100mM Na2HPO4中染色30小时。判断各组织的相对强度并照相。 
与处理组2(溶媒+低剂量dipal-Shh)相比，来自处理组3(激动剂+低剂量dipal-Shh)的所有组织都表现出β-半乳糖苷酶的显著正调节(根据着更深的蓝色所示)，如图40所示，其中各图的右边显示来自组3的组织。图41的图像显示来自4个处理组中每个处理组的组织的一个实例。组3中观察到的正调节与处理组1(高剂量dipal-Shh)中所见到的相似。处理组2中β-半乳糖苷酶染色的水平与在处理组4(不进行处理)中所见到的相似。 
在低剂量的dipal-shh存在下，激动剂B显然能够正调节体内hedgehog途径，而低剂量的dipal-shh本身不足以产生可检测的正调节。 
图42：将ptc-lacZ小鼠分成2个处理组并且用以下化合物处理3天，而且从出生后的第1天开始： 
1)溶媒              8-15μl/注射      4X/天 
2)激动剂D           4mg/kg/注射       4X/天 
所述激动剂的溶媒是10％DMSO的PBS溶液(pH 7.2)。注射在溶媒溶液中溶解的1.0mM原液的激动剂。 
最后一次注射后18小时，处死小鼠，收集前肢并如上所述进行处理。来自激动剂处理的小鼠的前肢在神经、血管、软骨和结缔组织中显示出强正调节。 
在不存在dipal-Shh的情况下，激动剂D显然能够正调节体内hedgehog途径。在该剂量的激动剂D所见到的正调节要比注射10mg/kg/注射(2X/天)的dipal-Shh所见到的正调节高。 
在第3个实验中，将ptc-lacZ小鼠分成5个处理组并且用以下化合物处理4天，而且从出生后的第1天开始： 
1)   溶媒        9-20μl/注射       4X/天 
2)   激动剂D     0.9mg/kg/注射      4X/天 
3)   激动剂D     0.3mg/kg/注射      4X/天 
4)   激动剂D     0.1mg/kg/注射      4X/天 
5)   辛基-shh    10mg/kg/注射       2X/天 
所述激动剂的溶媒是10％DMSO的PBS溶液(pH 7.2)。注射在溶媒溶液中溶解的0.3mM、0.1mM和0.03mM原液的激动剂。 
最后一次注射后18小时，处死小鼠，收集前肢并如上所述进行处理。该实验结果示于图43中，在图中没有显示溶媒对照。来自激动剂处理的小鼠的前肢在神经、血管、软骨和结缔组织中再次显示出强正调节(与溶媒组相比)。在该实验中，0.9mg/kg组显示出最高水平的正调节。0.9mg/kg和0.3mg/kg剂量组均显示比10mg/kg Hh蛋白组高的正调节。0.1mg/kg组显示出很弱的正调节，显然比在Hh蛋白组中所见到的要低。 
激动剂D显然能够以剂量-反应方式正调节体内hedgehog途径。0.9mg/kg和0.3mg/kg剂量的激动剂D所见到的正调节比注射Hh蛋白(10mg/kg注射，2X/天)所见到的正调节高。 
肺分支分布测定
收获E12.5龄ptc-1(d11)lacZ肺，通过使用尾的lacZ检测，鉴定出转基因胚胎。将外植块在置于塑料栅格上层(组织学包埋室)的1μm聚碳酸酯滤膜(Costar)上装配，然后将其置于装有肺外植块培养液(基于DMEM的，其中添加剂对小鼠肺培养物优化)的标准12孔组织 培养板中达48小时，在lacZ固定剂中固定，冲洗，然后于37℃对lacZ染色。 
结果示于图44。在左边的对照小图中，可以观察到在紧邻远端分布尖的间充质中的LacZ表达，即反映出内源patched表达的图式。用5μM激动剂B处理导致报道基因表达和该转基因表达结构域扩充显著增加，说明hedgehog途径受到正调节。最右边的小图显示用5μg/ml Hh蛋白处理的结果。 
肾脏分支分布测定
收获E13.5龄ptc-1(d11)lacZ肺，通过使用尾的lacZ检测，鉴定出转基因胚胎。将外植块在置于塑料栅格上层(组织学包埋室)的1μm聚碳酸酯滤膜(Costar)上装配，然后将其置于装有肾外植块培养液(基于DMEM的，添加剂对小鼠肺培养物优化)的标准12孔组织培养板中达48小时，在lacZ固定剂中固定，冲洗，然后于37℃对lacZ染色。 
结果示于图45。在左边的对照小图中，可以观察到在紧邻最接近的输尿管上皮的间充质中的LacZ表达，即反映出内源patched表达的图式。用5μM激动剂B处理导致报道基因表达和该转基因表达结构域扩充显著增加，说明hedgehog途径受到正调节。注意到该信号仍位于间充质中，并且不扩充到位于更远端的输尿管上皮中，说明仅内源位置中的hedgehog信号反应的间充质细胞类型对所述激动剂有反应，而通常不激活该途径的细胞类型不受激动剂处理的影响。最右边的小图显示用5μg/ml Hh蛋白处理的结果。 
皮肤外植块
用2mm皮肤钻孔器钻取ptc-lacZ E17.5幼鼠的皮肤。然后将这些皮肤穿刺物在对照培养基、或者包括激动剂B或D或Hh蛋白的培养基、或者包括激动剂和Hh蛋白两者的培养基中培养6天。然后该外植块用X-Gal染色剂染色。图46A显示激动剂B的结果。用单 独的激动剂处理显示比仅与低剂量的Hh蛋白一起培养的染色强，并且用激动剂和低剂量的Hh蛋白处理显示染色类似于实质上较高剂量的Hh蛋白。激动剂D的类似结果示于图46B。 
人细胞活性
图47A和图47B比较本发明主题化合物O和R在小鼠报道细胞(具有Gli-Luc报道构建体的TM3细胞，如上所述)和人报道细胞(具有Gli-Luc构建体的人胚胎腭间充质(HEPM)细胞)中的活性。图48显示对在用溶媒、Hh蛋白和激动剂O处理的人细胞中由hedgehog靶基因Gli-1表达的RNA的定量PCR分析。报道细胞系的激活以及Gli-1信使对所述化合物应答时增加证明该激动剂在人细胞中发挥作用。 
体内神经病学活性
已经表明，hedgehog(Hh)途径的激活在包括帕金森病(PD)在内的神经变性性疾病的动物模型中产生有益的效应。Hh途径的本发明主题小分子激动剂表现出有利的药代动力学特性，并且在口服给药后有效激活成年啮齿动物脑中的Hh途径，正如通过纹状体诱导的Gli-1表达所证明的。通过这些激动剂激活Hh途径在以下疾病的体内模型中产生保护/再生效应：亨廷顿舞蹈病(丙二酸损害)、中风(小鼠大脑中动脉闭塞，MCAO)和帕金森病(小鼠1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶，MPTP)。这些化合物可以诱导以下区中神经前体细胞的增殖：两个已知神经发生持续终生的脑区、侧脑室的脑室下区(SVZ)和海马齿状回的亚粒状区。 
部分1：Hh激动剂在大鼠亨廷顿舞蹈病的丙二酸模型中是神经保护性的
先前的研究证明了直接脑给予的Shh蛋白在动物亨廷顿舞蹈病(HD)模型即丙二酸损害模型中是神经保护性的。丙二酸是一种线粒体毒素，并且认为线粒体能量代谢方面的缺陷在神经变性性疾病(例 如HD)的病理中起作用。当将丙二酸注射到大鼠纹状体中时，病变在该脑区中形成。下述实验测试Hh激动剂是否会缩小丙二酸诱导的纹状体损害的大小。 
将Hh激动剂通过与Alzet渗透泵连接的插管直接给药到雄性SD大鼠的脑室内。所述泵装有溶媒(5％2-羟丙基-B-环糊精、4.35％甘露糖醇、0.2％DMSO)或Hh激动剂(U″，浓度范围1-600mM)，并且所述泵将化合物以1μl/小时的恒定速率释放到脑室内达6天。用化合物预处理6天后，将丙二酸直接注射到脑纹状体中，然后除去Alzet泵。4天后，将大鼠安乐死，然后取出脑组织并将其切成2mm薄切片。将该薄切片置于2％溶液(TTC)中，活组织被染成红色，而纹状体梗死组织被染成白色。运用图象分析软件测量梗死大小(梗死百分率)，并通过单因素ANOVA，接着通过合适的事后检验，对数据进行分析(p＜0.05)。 
在图49所示的实验中，大鼠用溶媒溶媒(n＝8)或200μMU″(n＝8)或300μMU″(n＝7)进行预处理。这些数据表明，与溶媒处理的动物相比，直接脑给予的浓度为300μM的Hh激动剂缩小丙二酸诱导的梗死大小(F(2，20)＝5.12，p＝0.0159)。 
这些数据证明，Hh激动剂在HD的丙二酸模型中是神经保护性的。另外，该结果表明，Hh激动剂可以模拟Hh蛋白的神经保护效应，这是因为先前已经证明所述蛋白在该模型系统中缩小纹状体损害大小。 
部分2：Hh激动剂在小鼠中风的MCAO模型中是神经保护性的
在该动物模型中，将一根细缝线插入到颈总动脉内，并直接穿过脑的循环系统。放入该缝线使其阻断大脑中动脉(MCA闭塞)的血流，大脑中动脉是前脑的主要血源。过了一段时间，在此为90分钟，取出缝线，恢复前脑的血流(再灌注)。前脑血流的暂时性阻断导致模拟人中风患者中所见到的行为症状和脑部病理。在脑中，MCA闭塞 后24小时，使用染色剂(TTC)可见梗死，TTC将活组织染成红色，而将梗死区染成白色。90分钟后，MCAO通常既出现在脑皮质区又出现在脑皮质下区。 
MCAO前用Hh激动剂处理
在本项研究中，在MCAO之前，小鼠用溶媒(0.5％甲基纤维素、0.2％Tween-80/0.9％NaCl，n＝12)或Hh激动剂X″(20mg/kg，po，n＝11)处理3天(1次/天)。然后使动物经受90分钟MCAO，接着再灌注。开始闭塞后大约24小时(再灌注23.5小时)，将小鼠安乐死，然后取出脑组织并将其切成2mm薄切片。将该脑薄切片用TTC染色，以显示脑的梗死区。通过测量和统计学分析，对梗死区/总前脑(梗死百分率)进行分析。 
图50显示与溶媒处理的对照相比，用Hh激动剂预处理的小鼠的总梗死大小显著缩小(p＝0.057)。 
图51显示皮质中梗死百分率和皮质下(包括纹状体、丘脑和海马)中梗死百分率。这些数据表明，皮质梗死大小显著缩小(p＝0.052)。因此，用Hh激动剂预处理在该动物中风模型中是神经保护性的。 
MCAO后用Hh激动剂处理
使雄性小鼠(7-8周龄)经受90分钟MCAO，然后再灌注。然后动物在开始再灌注(闭塞后90分钟)时用溶媒(n＝11)或Hh激动剂X″(20mg/kg，po，n＝12)处理。开始MCAO后24小时，将小鼠安乐死，然后取出脑组织并将其切成2mm薄切片，然后将各薄切片用TTC染色，供梗死大小分析用。 
图52显示MCAO后用Hh激动剂处理显著缩小小鼠梗死大小(p＜0.05)。 
同样，图53显示MCAO后用激动剂处理显著缩小皮质和皮质下损害大小。 
总之，这些数据表明，在小鼠MCAO中风模型中，口服给予的 Hh激动剂是神经保护性的和神经恢复性的。 
部分3：口服Hh激动剂在小鼠MPTP帕金森病模型中是有效的
先前的研究证明，SHh蛋白在动物PD模型中是有效的。1-甲基-4-苯基-1，2，36-四氢吡啶即MPTP是一种多巴胺能神经毒素，给小鼠系统注射该化合物引起与在帕金森病(PD)患者中所见到的相似多巴胺水平降低。设计下述实验以测试将Hh激动剂给予小鼠是否减少用MPTP处理所见到的多巴胺和酪氨酸羟化酶的损失。 
用Hh激动剂预处理减轻由MPTP损害引起的损伤
图54所示的数据得自其中给小鼠口服Hh激动剂X″(0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg，po)3天然后用MPTP处理的实验。MPTP处理后7天，将小鼠安乐死，测量纹状体中多巴胺(DA)和酪氨酸羟化酶(TH)的水平。 
图54显示根据纹状体DA(图54)和TH活性的测定，损伤后7天，与溶媒处理的小鼠相比，用Hh激动剂预处理显著减轻(～↓260％)对黑质纹状体通路的损伤。 
MPTP后用Hh激动剂处理是有效的
图55所示的数据得自其中MPTP后3天开始用Hh激动剂处理的实验。当MPTP损害后3天开始用激动剂处理时，纹状体DA(图55)和TH活性水平显著高于(～↑250％)溶媒处理的小鼠。 
这些发现清楚地证明，小分子Hh激动剂激活Hh途径对黑质纹状体通路既发挥保护性作用又发挥恢复性作用。总的来讲，这些数据对开发帕金森病的新治疗策略具有重要的意义。 
部分4：用Hh激动剂处理增加成年啮齿动物神经前体细胞的增殖
在成体脑中，已知新神经元的产生在两个脑区即侧脑室的脑室 下区(SVZ)和海马齿状回的亚粒状区(SG)中持续进行。已知Shh蛋白在各种各样的体外系统中诱导前体细胞的增殖，包括小脑颗粒状神经元。下述实验测试用Hh激动剂处理是否会影响成年啮齿动物脑中内源神经前体细胞的增殖。 
将Hh激动剂直接脑给予成年大鼠增加SVZ前体细胞的增殖
通过与Alzet渗透泵连接的导管，将Hh激动剂直接给予雄性SD大鼠的脑室内。所述泵装有溶媒(5％2-羟丙基-B-环糊精、4.35％甘露糖醇、0.2％DMSO)或Hh激动剂(U″，浓度范围10-600μM)，所述泵以0.5μl/小时的恒定速率将化合物释放到脑室中达6天。用化合物预处理6天后，给动物注射溴脱氧尿苷(BrdU，50mg/kg，ip)，以标记正在分裂的细胞。BrdU处理后2小时，将大鼠安乐死，然后灌注固定液。采集大脑并进行加工，供BrdU免疫组织化学用。然后对有导管的脑侧(同侧)和没有导管的脑侧(对侧)SVZ中的BrdU免疫反应性(BrdU-IR)细胞的数目进行计数。 
图56显示得自其中各动物用溶媒(n＝3)或Hh激动剂(200μM，n＝3)的实验数据。在激动剂处理6天后，两侧大脑中BrdU-IR细胞的数目显著增加(*p＜0.05)。 
这些数据证明，直接脑给予Hh激动剂增加成年大鼠脑中内源前体细胞的增殖。 
口服给予Hh激动剂增加成年小鼠神经前体细胞的增殖
为了测试口服给予Hh激动剂是否会影响前体细胞的增殖，每天给予小鼠溶媒或Hh激动剂X″达1-7天(每天1次或2次，po)。在适当的一天，给小鼠注射BrdU(ip)，2小时后，将小鼠安乐死，然后灌注固定液并对脑进行加工，供BrdU免疫组织化学用。对SVZ和海马齿状回的亚粒状区(SG)中的BrdU-IR细胞数目进行计数。 
图57和图58所示的数据得自其中口服给予小鼠溶媒(n＝4)或Hh激动剂X″(10mg/kg，n＝3或25mg/kg，n＝3)达7天(BID)的研究。最 后一次给药后一天，给小鼠注射BrdU，2小时后，如上所述采集大脑，加工并进行分析。 
图57显示与溶媒处理的对照相比，口服给予Hh激动剂7天增加了SVZ中BrdU标记细胞的数目(*p＜0.05)。图58的数据显示口服给予Hh激动剂也增加了齿状回SG中增殖细胞的数目。 
这些数据表明，口服给予Hh激动剂增加了这两个脑区中神经前体细胞的增殖，其中已知神经发生持续终生。对干细胞增殖的这种影响可能是Hh激动剂在各种神经疾病和/或损伤模型中，是一种神经保护性/神经再生性机制。 
部分5：在成年动物中口服给予的激动剂正调节Hh-效应组织
用正调节的Hh效应转录因子gli-1作为证明口服给予的Hh激动剂的体内生物功效的标记。将为单剂量的本发明所选的代表性化合物口服给予成年动物，24小时后处死动物并采集组织。用标准定量实时PCR测定测量Gli-1表达，且用GapDH作为参比基因。证明Gli-1在脑、脊髓、周围神经、心脏和肺中受到激动剂的正调节。综合得自CNS疾病和周围神经系统疾病的治疗模型的数据，这些结果证明Hh途径-效应组织以预期方式对口服给予的激动剂应答，产生了显著的生物和治疗效应。 
部分6：对链佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型中糖尿病性神经病的治疗
在大鼠糖尿病性神经病的STZ模型中，显示SHh-Ig蛋白使运动和感觉神经传导速度正常化，即标准临床试验终点(图59)。也显示了口服给予的激动剂D对运动NCV的类似结果(图60)。另外，根据坐骨神经滋养血管的Doppler激光灌注成像(图61)和坐骨神经滋养血管的BS-1凝集素荧光成像(图62)的测定，受损神经的血流得到改善。另外，SHh-Ig和激动剂D均导致神经生长因子(NGF)在坐骨神经中的水平增加(图63)，这被认为是改善神经健康状况的指标。 
进行各项研究，以评价参与神经功能和修复的因子是否在SHh处理后受到正调节。在SHh蛋白存在下，体外培养来源于神经束膜的成纤维细胞。经处理的成纤维细胞证明BDNF和IGF-1被正调节(图64)，这被认为有助于介导神经以及VEGF的生长和修复(图65)，而作为生血管生长因子的介导血管的修复和生长的血管生成素-II(图66)。也证明了VEGF对培养神经具有直接营养作用。综上所述，这些数据证明，用SHh蛋白或激动剂激活Hh途径导致对神经组织的许多关键性生长因子的正调节，从而导致神经修复。 
另外，这些结果证明，用SHh蛋白或激动剂处理对血管疾病具有潜在的广泛治疗效用，以促进血管生长和血流改善。 
方法：
糖尿病的诱发、监控和维持
在雄性Wistar大鼠(Charles River，UK or Harlan，San Diego，USA)中，用腹膜内注射(55mg/kg)链佐菌素(STZ；Sigma)诱发糖尿病，而且在空腹过夜后给予。临注射前将药物新鲜溶于无菌盐水中。3天后，用strip-operated反射光度计测量尾静脉血葡萄糖，血葡萄糖＜15mmol/l的任何STZ处理的大鼠排除在本研究之外。大鼠分组关养，自由进食进水，12小时光照/黑暗周期。每项研究结束时，采集所有大鼠的血样，提取血浆，使用商业试剂盒(Sigma，St.Louis，MO)，通过分光光度分析测量血浆葡萄糖水平。 
药物治疗 
对于体外分析，所用的SHh蛋白或者是未经修饰的(SHh)或者是通过用2个异亮氨酸分子取代N-末端半胱氨酸而修饰的(II-SHh)(F.R.Taylor等，Enhanced potency of human sonic hedgehog by hydrophobic Modification(人sonic hedgehog由于疏水性修饰而效力增强).2001.Biochemistry 40：4359-4371)。对于体内研究，另外将经修饰的SHh与IgG1融合(SHh-IgG)。让SHh-IgG在巴斯德毕赤酵母 (Pichia pastorus)中表达，用SP琼脂糖凝胶、A蛋白琼脂糖凝胶和CMporos层析纯化。将完整的融合蛋白合并，过滤并透析到2X PBS中，供贮存用。在每项研究开始时制备日等份样品，进行编号，以便实验者无法得知处理组，然后将其贮存于-70℃。临用前将注射物在室温下解冻，然后用水稀释，以达到溶媒终浓度为1X PBS。在大鼠颈背皮下注射剂量为0.3mg/kg、1.0mg/kg或3.0mg/kg的SHh-IgG(Mon，Wed，Fri)，每周注射3次。给不接受SHh-IgG的所有动物都注射溶媒。患糖尿病4-8周后开始进行治疗，并再维持4周，致使糖尿病的总持续时间为8-12周，这取决于具体的研究。 
神经传导速度测量
大鼠用氟烷或异氟烷麻醉，然后评价神经传导速度(NCV)。根据后肢肌电图的化合物M波的潜伏期，测量运动神经传导速度(MNCV)；根据同一系统中H反射潜伏期，测量感觉神经传导速度(SNCV)。涉及背根但不是前根的选择性横切片的初步研究建立了我们的H波测量的真实有效性(APM，未发表的数据)。在坐骨神经压迹处对神经进行刺激，并记录足骨间肌的引发的肌电图。在整个程序中，将中股神经温度保持在36±0.5℃。 
坐骨神经滋养血管的Laser Doppler灌注成像
根据P.Schratzberger等，Reversal of experimental diabetic neuropathy by VEGF gene transfer(通过VEGF基因转移逆转实验性糖尿病性神经病).2001.J Clin.Invest.107(9)：1083-92描述的方法，进行所述程序。 
坐骨神经滋养血管的BS-1凝集素荧光成像
根据P.Schratzberger等，Reversal of experimental diabetic neuropathy by VEGF gene transfer(通过VEGF基因转移逆转实验性糖尿病性神经病).2001.J Clin.Invest.107(9)：1083-92描述的方法，进 行使用BS-1凝集素的程序。 
神经生长因子(NGF)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质测定
根据P.Fernyhough等，Human recombinant nerve growth factor replaces deficient neurotrophic support in the diabeetic rat(人重组神经生长因子置换糖尿病大鼠体内的缺陷型神经营养支持体).1995.Eur.J Neurosci.7：1107-1110描述的方法，通过ELISA测定坐骨神经节段提取物中的NGF。通过标准ELISA测定、VEGF、脑源神经营养因子(BDNF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA测定，测量VEGF。使用GapDH作为参比基因，通过标准定量实时PCR技术，测定所有这3种生长因子。 
本发明化合物的制备
a.说明性的合成方案
用于制备可用于本发明方法和组合物的hedgehog激动剂的示例性合成方案示于图1-31。 
图1-31的说明性方案中的反应条件如下： 
1)R1CH2CN，NaNH2，甲苯 
(Arzneim-Forsch，1990，40，11，1242) 
2)H2SO4，H2O，回流 
(Arzneim-Forsch，1990，40，11，1242) 
3)H2SO4，EtOH，回流 
(Arzneim-Forsch，1990，40，11，1242) 
4)NaOH，EtOH，回流 
5)(Boc)2O，2M NaOH，THF 
6)LiHDMS，R1X，THF 
(Merck专利申请号WO 96/06609) 
7)Pd-C，H2，MeOH 
8)t-BuONO，CuBr，HBr，H2O 
(J.Org.Chem.1977，42，2426) 
9)ArB(OH)2，Pd(PPh3)4，二 
Figure BYZ000004127989501531
烷 
(J.Med.Chem.1996，39，217-223) 
10)R12(H)C＝CR13R14，Pd(OAc)2，Et3N，DMF(Org.React.1982，27，345) 
11)Tf2O，THF 
(J.Am.Chem.Soc.1987，109，5478-5486) 
12)ArSnBu3，Pd(PPh3)4，二 烷 
(J.Am.Chem.Soc.1987，109，5478-5486) 
13)KMnO4，Py，H2O 
(J.Med.Chem.1996，39，217-223) 
14)NaOR1，THF 
15)NaSR1，THF 
16)HNR1R13，THF 
17)HONO，NaBF4
(Adv.Fluorine Chem.1965，4，1-30) 
18)Pd(OAc)2，NaH，DPPF，PhCH3，R1OH 
(J.Org.Chem.1997，62，5413-5418) 
19)i.R1X，Et3N，CH2Cl2，ii R13X 
20)SOCl2，催化性DMF 
21)CH2N2，Et2O 
22)Ag2O，Na2CO3，Na2S2O3，H2O 
(Tetrahedron Lett.1979，2667) 
23)AgO2CPh，Et3N，MeOH 
(Org.Syn.，1970，50，77；J.Am.Chem.Soc.1987，109，5432) 
24)LiOH，THF-MeOH 
25)(EtO)2P(O)CH2CO2R，BuLi，THF 
26)MeO2CCH(Br)＝P(Ph)3，苯 
27)KOH或KOtBu 
28)碱，X(CH2)nCO2R 
29)DPPA，Et3N，甲苯 
(Synthesis 1985，220) 
30)HONO，H2O 
31)SO2，CuCl，HCl，H2O 
(Synthesis 1969，1-10，6) 
32)Lawesson氏试剂，甲苯 
(Tetrahedron Asym.1996，7，12，3553) 
33)R2M，溶剂 
34)30％H2O2，冰CH3CO2H 
(Helv.Chim.Acta.1968，349，323) 
35)三光气，CH2Cl2
(Tetrahedron Lett.，1996，37，8589) 
36)i.(EtO)2P(O)CHLiSO2Oi-Pr，T HF，ii.NaI 
37)Ph3PCH3I，NaCH2S(O)CH3，DMSO 
(Synthesis 1987，498) 
38)Br2，CHCl3或其它溶剂 
(Synthesis 1987，498) 
39)BuLi，Bu3SnCl 
40)ClSO2OTMS，CCl4
(Chem.Ber.1995，128，575-580) 
41)MeOH-HCl，回流 
42)LAH，Et2O或LiBH4，EtOH或BH3-THF 
(Tetrahedron Lett.，1996，37，8589) 
43)MsCl，Et3N，CH2Cl2
(Tetrahedron Lett.，1996，37，8589) 
44)Na2SO3，H2O 
(Tetrahedron LETT.，1996，37，8589) 
45)R2R4NH，Et3N，CH2Cl2
46)R2M，溶剂 
47)CH3NH(OCH3)，EDC，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
(Tetrahedron Lett，1981，22，3815) 
48)MeLi，THF 
49)mCPBA，CH2Cl2
50)HONO，Cu2O，Cu(NO3)2，H2O 
(J.Org.Che m.1977，42，2053) 
51)R1M，溶剂 
52)HONO，NaS(S)COEt，H2O 
(Org.Synth.1947，27，81) 
53)HSR2或HSR4，CH2Cl2
54)i-BuOC(O)Cl，Et3N，NH3，THF 
55)R2R4NH，CH2Cl2，NaBH(OAc)3
56)R2R4NH，MeOH/CH3CO2H，NaBH3CN 
57)R2OH，EDC，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
58)R2OH，HBTU，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
59)R2R4NH，EDC，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
60)R2R4NH，HBTU，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
61)POCl3，Py，CH2Cl2
62)R2R4NCO，溶剂 
63)R2OC(O)Cl，Et3N，溶剂 
64)R2CO2H，EDC或HBTU，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
65)R2X，Et3N，溶剂 
66)(CH3S)2C＝N(CN)，DMF，EtOH 
(J.Med.Che m.1994，37，57-66) 
67)R2SO2Cl，Et3N，CH2Cl2
68)R2-或R3-或R4CHO，MeOH/CH3CO2H，NaBH3CN 
(Synthesis 1975，135-146) 
69)Boc(Tr)-D或L-CysOH，HBTU，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF 
70)Boc(Tr)-D或L-CysH，NaBH3CN，MeOH/CH3CO2H 
(Synthesis 1975，135-146) 
71)S-Tr-N-Boc cysteinal，ClCH2CH2Cl或THF，NaBH(OAc)3
(J.Org.Che m.1996，61，3849-3862) 
72)TFA，CH2Cl2，Et3SiH或(3∶1∶1)茴香硫醚/乙二硫醇/DMS 
73)TFA，CH2Cl2
74)DPPA，Et3N，甲苯，HOCH2CH2SiCH3
(Tetrahedron Lett.1984，25，3515) 
75)TBAF，THF 
76)碱，TrSH或BnSH 
77)碱，R2X或R4X 
78)R3NH2，MeOH/CH3CO2H，NaBH3CN 
79)N2H4，KOH 
80)Pd2(dba)3，P(o-tol)3，RNH2，NaOtBu，二 
Figure BYZ000004127989501561
烷，R1NH2
(Tetrahedron Lett.1996，37，7181-7184)。 
81)氨腈。 
82)Fmoc-Cl，碳酸氢钠。 
83)BnCOCl，碳酸钠。 
84)AllylOCOCl，吡啶。 
85)苄基溴，碱。 
86)草酰氯，DMSO。 
87)RCONH2。 
88)碳酰二咪唑，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)。 
89)硫代碳酰二咪唑，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)。 
90)溴化氰，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)。 
91)RCOCl，三乙胺 
92)RNHNH2，EDC。 
93)RO2CCOCl，Et3N，DCM。 
94)MsOH，吡啶(J.Het.Chem.，1980，607)。 
95)碱，中性溶剂(例如DCM，甲苯，THF)。 
96)H2NOR，EDC。 
97)RCSNH2。 
98)RCOCHBrR，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)，(Org.Proc.Prep.Intl.，1992，24，127)。 
99)CH2N2，HCl。(Synthesis，1993，197)。 
100)NH2NHR，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)。 
101)RSO2Cl，DMAP。(Tetrahedron Lett.，1993，34，2749)。 
102)Et3N，RX。(J.Org.Chem.，1990，55，6037)。 
103)NOCl或Cl2(J.Org.Chem.，1990，55，3916)。 
104)H2NOH，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)。 
105)RCCR，中性溶剂(DCM，THF，甲苯)。 
106)RCHCHR，中性溶剂(DCM，THF，甲苯)。 
107)H2NOH，HCl。 
108)硫代碳酰二咪唑，SiO2或BF3OEt2。(J.Med.Chem.，1996，39，5228)。 
109)硫代碳酰二咪唑，DBU或DBN。(J.Med.Chem.，1996，39，5228)。 
110)HNO2，HCl。 
111)ClCH2CO2Et(Org.Reactions，1959，10，143)。 
112)吗啉烯胺(Eur.J.Med.Che m.，1982，17，27)。 
113)RCOCHR′CN 
114)RCOCHR′CO2Et 
115)Na2SO3
116)H2NCHRCO2Et 
117)EtO2CCHRNCO 
118)RCNHNH2。 
119)RCOCO2H，(J.Med.Chem.，1995，38，3741)。 
120)RCHO，KOAc。 
121)2-氟硝基苯。 
122)SnCl2，EtOH，DMF。 
123)RCHO，NaBH3CN，HOAC。 
124)NH3，MeOH。 
125)2，4，6-Me3PhSO2NH2。 
126)Et2NH，CH2Cl2
127)MeOC(O)Cl，Et3N，CH2Cl2
128)R2NH2，EDC，HOBT，Et3N，CH2Cl2
129)DBU，PhCH3
130)BocNHCH(CH2STr)CH2NH2，EDC，HOBT，Et3N，CH2Cl2
131)R2NHCH2CO2Me，HBTU，HOBT，Et3N，CH2Cl2
132)BocNHCH(CH2STr)CH2OMs，LiHMDS，THF 
133)R2NHCH2CO2Me，NaBH(OAc)3，ClCH2CH2Cl或THF 
134)R2NHCH2CH(OEt)2，HBTU，HOBT，Et3N，CH2Cl2
135)NaBH(OAc)3，ClCH2CH2Cl或THF，AcOH。 
136)哌啶，DMF。 
137)Pd(Ph3P)4，Bu3SnH。 
138)RCO2H，EDC，HOBT，Et3N，DCM。 
139)RNH2，中性溶剂。 
140)RCHO，NaBH3CN，HOAc。 
141)RNCO，溶剂。 
142)RCO2H，EDC或HBTU，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF。 
143)RCOCl，三乙胺 
144)RSO2Cl，Et3N，CH2Cl2。 
145)SnCl2，EtOH，DMF。 
146)RNH2，EDC，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF。 
147)二溴乙烷，Et3N，CH2Cl2
148)草酰氯，中性溶剂。 
149)LiOH，THF-MeOH。 
150)碳酰二咪唑，中性溶剂(例如DCM，DMF，THF，甲苯)。 
151)RNH2，Et3N，CH2Cl2。 
152)碱，RX。 
153)DBU，PhCH3
154)DPPA，Et3N，甲苯(Synthesis 1985，220) 
155)SOCl2，催化性DMF。 
156)ArH，路易斯酸(AlCl3，SnCl4，TiCl4)，CH2Cl2。 
157)H2NCHRCO2Et，中性溶剂。 
158)BocHNCHRCO2H，EDC或HBTU，HOBt，DIEA，CH2Cl2或DMF。 
159)TFA，CH2Cl2。 
b.芳基亚单位的说明性制备方法
采用本领域技术人员已知的各种各样的反应，可以对Ary亚单位进行官能化。芳环和杂芳环的化学方法是丰富的，在此仅可给出有用反应的一些例子。下面显示了多个说明性实施例，特别是可用于产生本发明主题化合物的联芳部分的说明性实施例。 
Suzuki偶联第1号： 
Figure BYZ000004127989501591
Suzuki偶联第2号： 
Stille偶联第1号： 
Figure BYZ000004127989501601
Stille偶联第2号： 
Stille偶联第3号： 
c.偶联底物的说明性制备方法
以上概述的偶联底物的各大类成员即芳基锡烷、芳基硼酸、芳基三氟甲磺酸酯基和芳基卤-可得自母体杂环。一般而言，制备 
偶联底物所需的转化作用是可靠的，并且适用于大规模制备。下面显示了说明性实施例。 
芳基碘的制备 
Figure BYZ000004127989501611
芳基锡烷的制备 
芳基三氟甲磺酸酯的制备 
Figure BYZ000004127989501613
芳基硼酸的制备 
Figure BYZ000004127989501614
本发明主题化合物的固相合成法
概要： 
洗涤方案
方法1：水(3x)，丙酮(2x)，N，N二甲基甲酰胺(3x)，水(2x)，丙酮(1x)，N，N-二甲基甲酰胺(3x)，水(2x)，丙酮(3x)，甲醇(3x)，丙酮(3x)和甲醇(3x)； 
方法2：二氯甲烷，己烷，N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，己烷，二氯甲烷和己烷； 
方法3：水，N，N-二甲基甲酰胺，水，1.0M氢氧化钠水溶液，水，N-N二甲基甲酰胺，水，1.0氢氧化钠水溶液，水，N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，甲醇，二氯甲烷和甲醇。 
方法4：N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，甲醇，二氯甲烷，甲醇(2x)和乙醚(2x)。 
通用方案： 
Figure BYZ000004127989501631
步骤A-(硝基苯-4′-基氧基羧基)苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯-(Wang PNP碳酸酯聚苯乙烯)的制备
羟基苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯(Wang树脂)-
在室温、氮气下将甲醇钠(233g，4.31mol)缓慢加入到氯甲基聚苯乙烯(2.4kg，3.6mol官能化填料(functionalised loading))和4-羟基苄 醇(581g，4.68mol)的 
N，N-二甲基乙酰胺(10L)的搅拌混合物中。用N，N-二甲基乙酰胺(13L)稀释后，将该混合物于50℃加热5小时，然后通过装有P-ETFE筛网(70μm)的套管过滤。采用方法1的顺序，将该粗产物进行充分洗涤，然后于60℃真空干燥，得到2630g的标题树脂。 
(硝基苯-4′-基氧基羧基)苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯-(Wang PNP碳酸酯聚苯乙烯)
在0℃、氮气下将4-甲基吗啉(660ml，6.0mol)在2小时内滴加到羟基苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯(2000g，2.5mol官能化填料)和氯甲酸4-硝基苯酚(1209g，6.0mol)的二氯甲烷(22L)的搅拌混合物中。将混合物逐渐加热至室温，搅拌过夜并通过装有P-ETFE筛网(70μm)的套管过滤。采用方法2的顺序，将该粗品树脂进行充分洗涤，然后在室温下真空干燥，得到2728g的标题树脂和4-甲基吗啉盐酸盐的混合物。 
步骤B-Wang树脂结合的二胺的制备
通用方法(对于哌嗪、高哌嗪和反式-1，4-二氨基环己烷而言)： 
将粗品(硝基苯-4′-基氧基羧基)苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯(1002.5g，～0.9mol官能化填料)在50％v/v无水二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(9L)的混合物中在氮气下溶胀15分钟。加入N，N-二异丙胺(626ml，5摩尔当量)和合适的二胺(5摩尔当量)，将混合物在室温下剧烈搅拌过夜。将混合物通过P-ETFE筛网(70μm)过滤，采用方法3的顺序充分洗涤，然后于60℃真空干燥，得到标题树脂结合的二胺。 
与Wang树脂结合的乙二胺
将粗品(硝基苯-4′-基氧基羧基)苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯(1002.5g，～0.9mol官能化填料)在二氯甲烷(7L)中在氮气下溶胀15分钟，然后用乙二胺(181ml，2.7mol)溶液处理。将所得的粘稠黄色悬浮液用 二氯甲烷(2L)稀释并在室温下剧烈搅拌过夜。将混合物通过P-PETFE筛网(70μm)过滤，采用方法3的顺序充分洗涤，然后于60℃真空干燥，得到树脂结合的二胺。 
与Wang树脂结合的间苯二甲胺
将粗品(硝基苯-4′-基氧基羧基)苄-4-基氧基甲基聚苯乙烯(1002.5g，～0.9mol官能化填料)在四氢呋喃(7L)中在氮气下溶胀15分钟，然后用间苯二甲胺(828ml，6.27mol)的四氢呋喃(1L)溶液处理。将所得的粘稠黄色悬浮液用二氯甲烷(2L)稀释并在室温下剧烈搅拌过夜。将混合物通过P-ETFE筛网(70μm)过滤，采用方法3的顺序充分洗涤，然后于60℃真空干燥，得到树脂结合的二胺。 
步骤C：采用Suzuki偶联程序制备结构单元
将合适的芳基溴(1当量)和碳酸钾(2.2当量)在甲苯(13倍体积)中的悬浮液在室温下搅拌并脱气。加入四(三苯膦)钯(0)(0.01当量)，将反应容器抽空并用氮气吹扫(3次)。15分钟后，通过套管加入2-甲氧基-5-甲酰基苯基硼酸(1.2当量)的乙醇(6.3倍体积)脱气溶液，然后将混合物在回流下加热并在氮气下搅拌过夜。冷却后，从溶液中滤出固体，将其用甲苯充分洗涤。将滤液在减压下蒸发至干，得到粗产物。将该粗产物用乙醚(5倍体积)研磨，将所得浆液过滤，用乙醚洗涤并真空干燥。得到为黄色粉末的联芳醛。 
步骤D：将结构单元加载到Wang二胺上
还原性烷基化
将合适的树脂(1当量，～0.75mmol官能化填料)在四氢呋喃、原甲酸三甲酯和二氯甲烷(1∶1∶1，v/v/v，10ml)的混合物中溶胀15分钟，然后轻轻搅拌并用合适的醛(2当量)处理。在室温下轻轻搅拌过夜后，将树脂过滤，用四氢呋喃充分洗涤并于40℃真空干燥。然后将干树脂在四氢呋喃中溶胀15分钟并用乙酸(0.12当量)和三乙酰氧基硼氢 化钠(5当量)处理。将树脂悬浮液在室温下轻轻搅拌过夜，然后过滤， 
采用方法4的顺序充分洗涤并于60℃真空干燥。 
酰基氯加帽
将合适的树脂(1当量)在二氯甲烷(10倍体积)中溶胀10分钟，然后用合适的酰基氯(3当量)和N，N-二异丙基乙胺(3当量)处理。将树脂悬浮液在室温下轻轻搅拌过夜，然后过滤，采用方法4的顺序充分洗涤并于40℃真空干燥。 
本发明主题化合物的溶液相合成
下面的示例性方案举例说明一种可以制备本发明hedgehog激动剂的途径。对该示例性途径的变化对于本领域技术人员将会是容易理解和实施的，使得有可能制备属于所公开通式中的多种化合物。该方案中所用的化合物编号与以下程序中的一致，并且独立于本申请其它地方(例如附图)所用的化合物编号。 
3-氯-苯并[b]噻吩-2-羧酸(4′-氰基-6-甲氧基-二苯基-3-基甲基)-(4-甲基氨基环己基)-酰胺盐酸盐(7)的合成 
(4-氨基-环己基)-氨基甲酸叔丁酯(1)
将碳酸氢二叔丁酯(12.0g，54.7mmol)和四氢呋喃(250ml)溶液在氮气下、在3小时内缓慢加入到1，4-二氨基环己烷(50.0g，0.44mol)的四氢呋喃(250ml)悬浮液中，同时将温度保持在10℃以下。让混合物升温至室温，随后搅拌16小时，然后过滤。真空浓缩滤液，得到残余物。向该残余物中加入水(500ml)，然后搅拌约15分钟，此后将混合物过滤，水层用二氯甲烷(3x 200ml)萃取。合并有机萃取液并浓缩，得到残余物，将其溶于叔丁基甲基醚(350ml)中，用水(3x 50ml)洗涤。真空除去叔丁基甲基醚，得到为固体的标题化合物1(8.1g，69％)：δH(360MHz：CDCl3)1.06-1.24(m，4H)，1.43(s，9H)，1.83(d，2H)，1.98(d，2H)，2.56-2.66(m，1H)，3.30-3.35(m，1H)和4.31-4.38(m，1H)。 
N-甲基-环己烷-1，4-二胺(2)
将胺1(15.0g，0.7mol)在氮气下、在45分钟内缓慢加入到1N氢化铝锂的THF(450ml，0.36mol)溶液中。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后在回流、氮气下加热5-6小时。向该混合物中先加入水(13.2ml)，接着加入15％氢氧化钠水溶液(13.2ml)和水(39.7ml)。然后将混合物搅拌15-30分钟。滤出固体，用叔丁基甲基醚(200ml)、二氯甲烷(200ml)和叔丁基甲基醚(200ml)洗涤。收集有机萃取液，干燥(MgSO4)，并过滤。然后干燥剂用二氯甲烷洗涤，合并有机萃取液并真空浓缩，得到为浅黄色固体的标题化合物2(7.52g，84％)：δH(360MHz：CDCl3)1.04-1.20(q，4H)，1.51(br s，3H)，1.80-1.96(m，4H)，2.25-2.35(m，1H)，2.41(s，3H)，2.61-2.72(m，1H)。 
(4-氨基-环己基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(3)
在氮气下将苯甲醛(12.8ml，0.13mol)一次性加入到N-甲胺2(16.2g，0.13mol)和甲苯(150ml)的溶液中。将所得的混合物用Dean-Stark装置加热至回流达4小时，让该混合物冷却至室温后，分次加入碳酸氢叔丁酯(27.5g，0.13mol)，然后将混合物搅拌16小时。真空浓缩混合物，得到黄色油状物，向所述油状物中加入1N硫酸氢钾水 溶液 
(90ml)，接着剧烈搅拌，直到TLC指示反应完成为止(～2.5小时)。将混合物萃取到乙醚(3x 100ml)中，用氢氧化钠水溶液使水层变成碱性(pH～12)。然后水层用氯化钠饱和，将产物萃取到氯仿(3x 40ml)中。真空浓缩合并的萃取液，得到为黄色油状物的标题化合物3(16.3g，59％)：δH(360MHz：CDCl3)1.11-1.34(m，5H)，1.45(s，9H)，1.66(br d，2H)，1.90(br d，2H)，2.56-2.66(m，1H)，2.71(s，3H)和3.98(br s，2H)。 
{4-[(4′-氰基-6-甲氧基-二苯基-3-基甲基)-氨基]-环己基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(5)
将胺3(5.0g，21.92mmol)、醛4(5.19g，21.92mmol)和原甲酸三甲酯(50ml)的溶液在室温、氮气下搅拌16小时。然后分次加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.5g，30.7mmol)，将混合物在室温下搅拌直至根据LC-MS分析确定，反应完成。小心地加入水，将混合物搅拌5分钟，接着分离各层。将原甲酸三甲酯层倾至1N硫酸氢钾水溶液(100ml)中并搅拌15分钟。将沉淀的固体过滤，用水(50ml)、冷的三丁基甲基醚(3x 30ml)洗涤。然后将经洗涤的沉淀悬浮于二氯甲烷(150ml)中，边剧烈搅拌边向所述二氯甲烷溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)，使得pH变成碱性(pH～10)。二氯甲烷层用水和盐水洗涤，将有机萃取液干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到为灰白色固体的标题化合物5(6.9g，69％)：δH(360MHz：CDCl3)1.18-1.31(m，4H)，1.43(s，9H)，1.68(d，2H)，2.01(d，2H)，2.44-2.56(m，1H)，2.69(s，3H)，3.76(s，2H)，3.80(s，3H)，6.92(d，1H)，7.24(s，1H)，7.29(d，1H)，7.61(d，2H)和7.66(d，2H)。 
{4-(3-氯-苯并[b]噻吩-2-羰基)-(4′-氰基-6-甲氧基-二苯基-3-基甲基)-氨基-环己基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(6)
在氩气下边搅拌边将N，N-二异丙基乙胺(2.1ml，12.1mmol)加入到胺5(2.2g，4.9mmol)、3-氯苯并[b]噻吩-2-碳酰氯(1.3g，5.86mmol) 和无水二氯甲烷(22ml)的溶液中。根据TLC监测，一旦所有原料耗 
尽(约2.5小时)，则将该混合物用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并真空浓缩。然后将黄色残余物经用己烷/乙酸乙酯3∶1的硅胶色谱纯化，得到为浅黄色固体的标题化合物6(2.93g，93％)。 
3-氯-苯并[b]噻吩-2-羧酸(4′-氰基-6-甲氧基-二苯基-3-基甲基)-(4-甲基氨基-环己基)-酰胺盐酸盐(7)
将浓盐酸(27.5ml)加入到化合物6(11.0g，17.1mmol)和乙醇(82.5ml)的溶液中。搅拌混合物，直到根据TLC监测反应完成。真空浓缩混合物，加入二氯甲烷并再次浓缩，重复该步骤直到得到固体为止。然后将固体用叔丁基甲基醚(30ml)研磨成浆液，过滤，将有机层干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到标题化合物7(10.0g，99％)：δH(360MHz：DMSO，70℃)1.30-1.50(m，2H)，1.85(br s，4H)，2.12(br d，2H)，2.48(s，3H)，2.91(br t，1H)，3.81(s，3H)，3.87(br s，1H)，4.71(s，2H)，7.14(d，1H)，7.29(s，1H)，7.40(d，1H)，7.57-7.68(m，4H)，7.80-7.90(m，3H)，8.09(d，1H)，8.82(br s，2H)。 
所选原料的合成
反式4-(BOC甲基氨基)环己胺的合成
反式4-(氨基环己基)氨基甲酸正丁酯 
在氮气下边搅拌边将氯甲酸正丁酯(102ml，0.79mol，0.5eq)的二氯甲烷(1.8L，10vol)溶液加入到1，4-反式-二氨基环己烷(180g，1.58 mol，1.0eq)的二氯甲烷(1.8L，10vol)中，并保持温度在0-5℃之间(冰/盐浴)。 
将所得的悬浮液再搅拌60-70分钟，然后让其升温至5-10℃。加入新鲜配制的碳酸钠溶液(Na2CO392.0g，0.8mol，0.5eq，在水720ml中，4vol)并再搅拌5分钟，同时升温至环境温度。 
分离各相，水相用二氯甲烷(720ml，4vol)洗涤。合并二氯甲烷相并经硫酸钠(360g，2wt)干燥，过滤并在旋转蒸发器上于40℃浓缩至干，得到二胺、双氨基甲酸酯和单氨基甲酸酯的混合物粗品。 
将该粗制材料(164g，1wt)悬浮于水(410ml，2.5vol)中，并在20-25℃下剧烈搅拌10-15分钟。通过过滤除去固体双氨基甲酸酯，滤饼用水(164ml，1 vol)洗涤。含水滤液用3x TBME(3x 3.28L，20vol)萃取。合并TBME层，用水(246ml，1.5vol)回洗，经硫酸钠(492g，3wt)干燥，过滤并在旋转蒸发器上于35-40℃浓缩至干，得到固体单氨基甲酸酯产物(87.5g，52％)。 
1H-NMR(400MHz)(CDCl3)：4.47(1H，bs)；3.97(2H，m)；3.36(1H，bs)；2.57(1H，m)；1.94(2H，m)；1.78(2H，m)；1.51(2H，m)；1.38(2H，六重峰)；1.13(6H，m)；0.86(3H，t)。 
反式4-(甲基氨基)环己胺 
将氨基甲酸酯(102g)的THF(1L∶10vol)溶液在30分钟内加入到在冰上冷却的氢化铝锂(90.4g∶5当量)的THF(2L∶20vol)悬浮液中。一旦加完，则将反应加热至回流达2小时(根据TLC确定完成情况)，然后让其冷却过夜。将反应冷却至0-5℃，通过加入水(90ml)、15％氢氧化钠(90ml)和更多的水(270ml)猝灭反应。然后将悬浮液在室温下搅拌1小时，然后过滤并用TBME(2x2L)和DCM(2x2L)洗涤滤饼。通过蒸发除去溶剂，并通过与甲苯(2L)共沸而除去剩余的水和正丁醇。收率＝62g，通过NMR测定含有10.6wt％甲苯。这等于55.4g(91％)。 
反式4-(BOC甲基氨基)环己胺 
将甲胺(55.4g)和苯甲醛(46ml∶1.05当量)溶于甲苯(554ml∶10vol)中，然后用Dean-Stark装置加热至回流达6小时。除去水的计算体积(7.5ml)。向该冷却溶液中在15分钟内分次加入BOC酐(103.7g∶1.1当量)，然后将反应物搅拌约3小时(通过NMR测定显示完成情况)。除去溶剂，得到160g油状固体(8wt％甲苯相当于147.2g(107％)产物)。将该固体悬浮于1M KHSO4(1.47L∶10vol)中。此外，用水(200ml)和TBME(100ml)洗涤剩余的原料。4小时后，用TBME(600ml，然后3x300ml)萃取反应物。水层用6M氢氧化钠(75ml)碱化至pH 13，然后用DCM(2x735ml)萃取。合并的DCM层用盐水(2x500ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将溶液过滤并蒸发，得到含有DCM(2.4wt％)的油状物(69.5g)。收率＝67.8g(69％)。 
总收率基于氨基甲酸酯计算＝64％，而基于反式1，4-二氨基环己烷计算＝16.5％。 
3-氯-4，7-二氟苯并[b]噻吩-2-碳酰氯的合成
Figure BYZ000004127989501711
2，5-二氟苯甲醛的制备 
将1，4-二氟苯(10g，87.6mmol，1wt)的THF(175ml，17.5vol)溶液在氮气下搅拌并冷却至-75℃至-78℃。在大约20分钟内，向反应混合物中加入正丁基锂(82ml 1.6M的己烷溶液，131.4mmol，1.5eq)，同时保持温度低于-65℃。再过1小时后，在大约10分钟内，加入DMF(10.16ml，131.4mmol，1.5eq)，同时保持温度低于-65℃。10分钟后通过加入乙酸(17.5ml，1.75ml)、紧接着加入水(440ml，36.4 vol)而猝灭反应混合物。这使反应放热至5℃。然后除去冷浴，加入TBME(220ml，22vol)，将反应物搅拌5分钟。分离各相，水相用TBME(2x 220ml，22vol)萃取。将有机相合并，先用0.2M HCl(220ml，22vol)、2M Na2CO3(220ml，22vol)、然后用饱和盐水(220ml，22vol)洗涤，经硫酸镁(50g，5wt)干燥并在旋转蒸发器上浓缩，得到粗产物(11.07g)。经Kugelrohr蒸馏纯化，得到为无色透明油状的产物(7.52g，60％)。 
2，5-二氟肉桂酸的制备 
将哌啶(2ml，20.2mmol，0.168vol)加入到2，5-二氟苯甲醛(12.07g，85.0mmol，1wt)和丙二酸(18.28g，175.6mmol，1.51wt)在吡啶(50ml，4.14vol)中的搅拌混合物中。将反应混合物在氮气下加热并在回流(油浴100℃)下保持2小时，观察到泡腾达90分钟-开始剧烈，然后逐渐减弱。然后让反应混合物冷却至20-25℃并倾至经搅拌的2M盐酸(310ml，25.7vol)(pH记录为1)中。所得的沉淀于20-25℃老化1小时，然后过滤。滤饼用水(2x 50ml，4.1vol)洗涤，然后再干燥1小时。如下干燥固体产物：将其溶于TBME(250ml，20.7vol)中，分离各相，水相用TBME(100ml，8.3vol)洗涤。将TBME相合并，经硫酸镁(25g，2wt)干燥，过滤并在旋转蒸发器上浓缩，得到为白色固体的产物(13.4g，85.7％)。 
3-氯-4，7-二氟苯并[b]噻吩-2-碳酰氯的制备 
将2，5-二氟肉桂酸(26g，0.14mol)和亚硫酰氯(36.1ml；0.49mol)在装有涤气联动装置(train)的烧瓶中混合。加入吡啶(2.85ml；35mmol)，使其产生更多的气体。将反应混合物加热(Text＝140℃)过夜。将庚烷(260ml；10vol)加热至回流，然后加入反应混合物。用热庚烷(2x25ml)充分洗涤反应烧瓶，并使合并的溶液冷却至0℃。将沉淀滤出，用庚烷(2x25ml)洗涤，在氮气流下干燥。收率＝17.4g(46％)。 
本文中所引用的所有出版物和专利通过引用全部结合到本文中。 
本领域技术人员只使用常规实验方法就可确认或者能够确定，此中描述的本发明具体实施方案的许多等同实施方案。这样的等同实施方案计划包括在以下权利要求书的范围内。 

Claims (26)

1.一种由通式(IX)表示的化合物，或其药学上可接受的盐；
其中，只要化合价和稳定性允许，则：
Ar代表取代或未取代的苯基；
X选自-C(＝O)-；
Y不存在；
Z代表取代或未取代的苯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基；
M代表未取代的亚甲基；
Cy代表被由以下通式表示的氨基取代的C3-10环烷基：
其中R9、R10和R′10各自独立表示H或C1-10烷基；
Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基、3-氟-苯并(b)噻吩-2-基或3-甲基-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环被1-4个选自卤基、硝基、氰基、甲基和乙基的取代基取代，其中一个所述取代基为在4位处的氟取代基；
i所有出现时都代表0，只是在排列顺序N-Mi-Y-Ar中例外，其中i代表1；且
k代表0，且
其中所述Ar和Z的取代基选自C1-10烷基；卤基；羟基；-O-C1-C10烷基；由通式或表示的氨基，其中R9、R10和R′10各自独立表示H或C1-10烷基；-CF3；氰基；硝基；巯基；C1-C10烷硫基；
Figure FSB00001086083600023
其中X为键或表示O或S，且R11为H或C1-10烷基；其中X为键或表示O或S，R′11为H或C1-C10烷基；
Figure FSB00001086083600025
其中R9和R10各自独立表示H或C1-C10烷基；
Figure FSB00001086083600026
其中R41为H、C1-C10烷基或芳基，其中所述芳基为含有0至4个杂原子的5、6或7员环；
Figure FSB00001086083600027
其中R9和R10各自表示H或C1-C10烷基，或R9和R10与它们连接的N原子一起形成具有4-8元环的杂环；或
Figure FSB00001086083600028
其中R9和R’11表示H或C1-C10烷基。
2.权利要求1的化合物，其中所述Cy上的氨基为伯氨基或仲氨基。
3.权利要求2的化合物，其中所述Cy上的氨基为伯氨基或甲氨基。
4.权利要求3的化合物，其中所述Cy上的氨基为甲氨基。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述C3-10环烷基为环己基，所述氨基位于所述环己基环上相对于N的4位。
6.权利要求5的化合物，其中所述环己基环上的氨基与N的呈反位排列。
7.权利要求1-4中任一项的化合物，其中Cy′代表3-氯-苯并(b)噻吩-2-基，其中所述苯并环被1-4个选自卤基、硝基、氰基、甲基和乙基的取代基取代。
8.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述苯并环被1-4个选自卤基和甲基的取代基取代。
9.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述苯并环被1-4个氟取代基取代。
10.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述苯并噻吩在4位和7位被氟基取代。
11.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述Ar取代基选自卤基和-O-C1-C10烷基。
12.一种药用组合物，所述组合物包含无菌赋形剂和权利要求1的化合物。
13.权利要求12的药用组合物，所述组合物适合口服。
14.权利要求1的化合物在制备用于调节细胞增殖、存活或分化的药物中的用途。
15.权利要求14的用途，其中所述化合物激活hedgehog介导的信号转导的ED50为1μM以下。
16.权利要求14的用途，其中所述化合物激活hedgehog介导的信号转导的ED50为1nM以下。
17.权利要求14的用途，其中所述药物用于治疗或美容应用。
18.权利要求17的用途，其中所述治疗或美容应用选自调节神经组织、骨和软骨的形成和修复、调节精子发生、调节平滑肌、调节肺、肝和其它起源于原始消化管的器官、调节造血功能和调节皮肤和毛发的生长。
19.权利要求18的用途，其中所述治疗或美容应用选自调节皮肤和毛发的生长。
20.权利要求14的用途，其中所述药物适合经口给药。
21.权利要求1的化合物在制备用于治疗或预防中枢神经系统疾病的药物中的用途。
22.权利要求21的用途，其中所述疾病是帕金森病、亨廷顿舞蹈病或局部缺血。
23.权利要求21的用途，其中所述药物适合经口给药。
24.一种调节细胞增殖、存活或分化的方法，所述方法包括使所述细胞在体外与权利要求1的化合物接触。
25.权利要求24的方法，其中所述化合物激活hedgehog介导的信号转导的ED50为1μM以下。
26.权利要求24的方法，其中所述化合物激活hedgehog介导的信号转导的ED50为1nM以下。
CN028233328A 2001-09-26 2002-09-18 细胞增殖的有机小分子调节剂 Expired - Lifetime CN1578779B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/964,276 2001-09-26
US09/964,276 US6683192B2 (en) 2000-03-30 2001-09-26 Small organic molecule regulators of cell proliferation
PCT/US2002/029522 WO2003027234A2 (en) 2001-09-26 2002-09-18 Small organic molecule regulators of cell proliferation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1578779A CN1578779A (zh) 2005-02-09
CN1578779B true CN1578779B (zh) 2013-09-18

Family

ID=25508346

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN028233328A Expired - Lifetime CN1578779B (zh) 2001-09-26 2002-09-18 细胞增殖的有机小分子调节剂

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6683192B2 (zh)
EP (1) EP1436287A4 (zh)
JP (1) JP4563028B2 (zh)
KR (2) KR101039198B1 (zh)
CN (1) CN1578779B (zh)
AU (1) AU2002336580B2 (zh)
BR (1) BR0212825A (zh)
CA (1) CA2461709A1 (zh)
EA (1) EA200400355A1 (zh)
GE (1) GEP20063855B (zh)
HU (1) HUP0402307A2 (zh)
IL (3) IL161104A0 (zh)
MX (1) MXPA04002880A (zh)
NO (1) NO20041260L (zh)
NZ (1) NZ531970A (zh)
PL (1) PL371343A1 (zh)
UA (1) UA78225C2 (zh)
WO (1) WO2003027234A2 (zh)
ZA (1) ZA200402322B (zh)

Families Citing this family (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7230000B1 (en) 1999-10-27 2007-06-12 Cytokinetics, Incorporated Methods and compositions utilizing quinazolinones
US7671200B2 (en) 1999-10-27 2010-03-02 Cytokinetics, Inc. Quinazolinone KSP inhibitors
US6683108B1 (en) * 2000-03-30 2004-01-27 Curis, Inc. Agonists of hedgehog signaling pathways and uses related thereto
KR20040068339A (ko) * 2001-12-21 2004-07-30 아노르메드 인코포레이티드 효능이 강화된 케모카인 수용체 결합 헤테로사이클릭 화합물
US7354932B2 (en) * 2001-12-21 2008-04-08 Anormed, Inc. Chemokine receptor binding heterocyclic compounds with enhanced efficacy
PL211300B1 (pl) 2002-04-17 2012-05-31 Cytokinetics Inc Związek i kompozycja zawierająca ten związek
MXPA04011074A (es) 2002-05-09 2005-06-08 Cytokinetics Inc Compuestos de pirimidinona, composiciones y metodos.
US7361368B2 (en) 2002-06-28 2008-04-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Device and method for combining a treatment agent and a gel
US20040224302A1 (en) * 2002-07-16 2004-11-11 Thomas Jessel Systems and methods for screening for modulators of neural differentiation
FR2842422B1 (fr) * 2002-07-16 2006-06-30 Univ Aix Marseille Ii Compositions destinees au traitement des neuropathies peripheriques, preparation et utilisations
US7632679B2 (en) * 2002-07-16 2009-12-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Systems and methods for screening for modulators of neural differentiation
US7390659B2 (en) 2002-07-16 2008-06-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for inducing differentiation of embryonic stem cells and uses thereof
JP2005533119A (ja) 2002-07-17 2005-11-04 サイトキネティクス・インコーポレーテッド 化合物、組成物、及び方法
US7641643B2 (en) * 2003-04-15 2010-01-05 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods and compositions to treat myocardial conditions
JP2007521333A (ja) * 2003-12-19 2007-08-02 キュアリス・インコーポレーテッド 中枢神経系の活動を調節するための組成物および方法
SI1789390T1 (sl) 2004-09-02 2012-05-31 Genentech Inc Piridilni inhibitorji hedgehog signalizacije
WO2006039569A1 (en) * 2004-09-30 2006-04-13 The University Of Chicago Combination therapy of hedgehog inhibitors, radiation and chemotherapeutic agents
US20060165739A1 (en) * 2005-01-06 2006-07-27 Mary Kay Inc. Alcohol-free microemulsion composition
US8303972B2 (en) 2005-04-19 2012-11-06 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Hydrogel bioscaffoldings and biomedical device coatings
US20080125745A1 (en) 2005-04-19 2008-05-29 Shubhayu Basu Methods and compositions for treating post-cardial infarction damage
US8828433B2 (en) 2005-04-19 2014-09-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Hydrogel bioscaffoldings and biomedical device coatings
US9539410B2 (en) 2005-04-19 2017-01-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods and compositions for treating post-cardial infarction damage
US8187621B2 (en) 2005-04-19 2012-05-29 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods and compositions for treating post-myocardial infarction damage
EP2258359A3 (en) 2005-08-26 2011-04-06 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation with sabcomelin
US7678363B2 (en) 2005-08-26 2010-03-16 Braincells Inc Methods of treating psychiatric conditions comprising administration of muscarinic agents in combination with SSRIs
EP1940389A2 (en) 2005-10-21 2008-07-09 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by pde inhibition
US20070112017A1 (en) 2005-10-31 2007-05-17 Braincells, Inc. Gaba receptor mediated modulation of neurogenesis
WO2007089669A2 (en) * 2006-01-26 2007-08-09 Wyeth Processes for the preparation of compounds which modulate cell proliferation
EP1986622B1 (en) * 2006-02-15 2013-10-02 Dendreon Corporation Small-molecule modulators of trp-p8 activity
US20100216734A1 (en) 2006-03-08 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
EP1991212A1 (en) * 2006-03-08 2008-11-19 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
MX2008014320A (es) * 2006-05-09 2009-03-25 Braincells Inc Neurogenesis mediada por el receptor de 5-hidroxitriptamina.
US20100009983A1 (en) * 2006-05-09 2010-01-14 Braincells, Inc. 5 ht receptor mediated neurogenesis
EP2021000A2 (en) 2006-05-09 2009-02-11 Braincells, Inc. Neurogenesis by modulating angiotensin
US9242005B1 (en) 2006-08-21 2016-01-26 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Pro-healing agent formulation compositions, methods and treatments
US20100184806A1 (en) 2006-09-19 2010-07-22 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by ppar agents
EP2066355A2 (en) * 2006-09-19 2009-06-10 Braincells, Inc. Combination comprising a peroxisome proliferator activated receptor agent and a second neurogenic agent for treating a nervous system disorder, increasing neurodifferentiation and increasing neurogenesis
MY181496A (en) * 2006-10-31 2020-12-23 Government Of The United States Of America Represented By The Sec Dep Of Health And Human Services Smoothened polypeptides and methods of use
WO2008057468A1 (en) * 2006-11-02 2008-05-15 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US20080194637A1 (en) * 2006-11-02 2008-08-14 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US20080182859A1 (en) * 2006-11-02 2008-07-31 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US9005672B2 (en) 2006-11-17 2015-04-14 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods of modifying myocardial infarction expansion
US20080177389A1 (en) * 2006-12-21 2008-07-24 Rob Gene Parrish Intervertebral disc spacer
WO2009042646A1 (en) * 2007-09-24 2009-04-02 Curis, Inc. Anti-proliferative agents
BRPI0906351A2 (pt) * 2008-01-29 2019-09-24 Novartis Ag uso de agonistas hedgehog no tratamento de distúrbios relacionados ao musculoesquelético
US8969081B2 (en) * 2008-12-10 2015-03-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Caudal motor neuron derived from embryonic stem cells under conditions essentially free of any retinoid
US20100216805A1 (en) 2009-02-25 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis using d-cycloserine combinations
EP2625263B1 (en) 2010-10-08 2020-03-11 Terumo BCT, Inc. Configurable methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system
US9708299B2 (en) 2011-01-03 2017-07-18 Genentech, Inc. Hedgehog antagonists having zinc binding moieties
GB201201298D0 (en) 2012-01-26 2012-03-07 Universitat Leipzig Therapeutic use of activators of zinc finger protein gli3
US9248128B2 (en) 2012-01-27 2016-02-02 New York University Method for enhancing remyelination using GLI1 inhibitors
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US9751888B2 (en) 2013-10-04 2017-09-05 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
EA201690713A1 (ru) 2013-10-04 2016-08-31 Инфинити Фармасьютикалз, Инк. Гетероциклические соединения и их применения
US9814703B2 (en) 2013-11-14 2017-11-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for treating cancer by activation of BMP signaling
JP6633522B2 (ja) 2013-11-16 2020-01-22 テルモ ビーシーティー、インコーポレーテッド バイオリアクターにおける細胞増殖
CA2943075C (en) 2014-03-19 2023-02-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds for use in the treatment of pi3k-gamma mediated disorders
US11008547B2 (en) 2014-03-25 2021-05-18 Terumo Bct, Inc. Passive replacement of media
JP6830059B2 (ja) 2014-09-26 2021-02-17 テルモ ビーシーティー、インコーポレーテッド スケジュール化された細胞フィーディング
US9708348B2 (en) 2014-10-03 2017-07-18 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Trisubstituted bicyclic heterocyclic compounds with kinase activities and uses thereof
WO2016142427A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method ank kit for reprogramming somatic cells
WO2017004592A1 (en) 2015-07-02 2017-01-05 Terumo Bct, Inc. Cell growth with mechanical stimuli
CN105130978B (zh) * 2015-07-22 2017-11-21 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种化合物及其在帕金森疾病方面的应用
NZ740616A (en) 2015-09-14 2023-05-26 Infinity Pharmaceuticals Inc Solid forms of isoquinolinone derivatives, process of making, compositions comprising, and methods of using the same
WO2017106332A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 X4 Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer
CN109069426B (zh) 2015-12-14 2021-10-29 X4 制药有限公司 治疗癌症的方法
US10610527B2 (en) 2015-12-22 2020-04-07 X4 Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating immunodeficiency disease
WO2017161116A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as pi3k kinase inhibitors
JP2019510785A (ja) 2016-04-08 2019-04-18 エックス４ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 癌を処置する方法
EP3464565A4 (en) 2016-05-25 2020-01-01 Terumo BCT, Inc. CELL EXPANSION
US11104874B2 (en) 2016-06-07 2021-08-31 Terumo Bct, Inc. Coating a bioreactor
US11685883B2 (en) 2016-06-07 2023-06-27 Terumo Bct, Inc. Methods and systems for coating a cell growth surface
WO2017214269A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CA3027495A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 X4 Pharmaceuticals, Inc. Cxcr4 inhibitors and uses thereof
CA3027500A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 X4 Pharmaceuticals, Inc. Cxcr4 inhibitors and uses thereof
JP7054529B2 (ja) 2016-06-21 2022-04-14 エックス４ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｃｘｃｒ４阻害剤およびその使用
US11066419B2 (en) 2016-12-30 2021-07-20 Frequency Therapeutics, Inc. 1H-pyrrole-2,5-dione compounds and methods of using same
WO2018129470A1 (en) * 2017-01-09 2018-07-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Reversing deficient hedgehog signaling restores deficient skeletal regeneration
CN117247899A (zh) 2017-03-31 2023-12-19 泰尔茂比司特公司 细胞扩增
US11624046B2 (en) 2017-03-31 2023-04-11 Terumo Bct, Inc. Cell expansion
WO2019048898A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION
US20200397901A1 (en) * 2018-01-24 2020-12-24 The University Of Tokyo Photoresponsive smoothened ligand
US10548889B1 (en) 2018-08-31 2020-02-04 X4 Pharmaceuticals, Inc. Compositions of CXCR4 inhibitors and methods of preparation and use
EP3883932B1 (en) 2018-11-19 2023-03-29 New York University Inhibitors of gli1 as therapeutic agents
WO2020106755A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 New York University Inhibitors of gli1 as therapeutic agents
CN112898178A (zh) * 2021-01-25 2021-06-04 蚌埠产品质量监督检验研究院 一种N-Boc-反式-1,4-环己二胺的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1051358A (zh) * 1989-10-31 1991-05-15 藤泽药品工业株式会社 稠合的咪唑衍生物及其制备方法
US5557002A (en) * 1992-06-17 1996-09-17 Eisai Co., Ltd. Process for the preparation of biphenyl containing intermediates useful in making angiotensin II receptor antagonists
WO1999010004A2 (en) * 1997-08-29 1999-03-04 Ontogeny, Inc. Regulation of muscle tissues by hedgehog-like polypeptides, and formulations and uses related thereto
US6218426B1 (en) * 1998-03-05 2001-04-17 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Non-peptide GnRH agents

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3612974A1 (de) * 1986-04-17 1987-10-29 Basf Ag 1,4-cyclohexandiamine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als fungizide
JPH0625250A (ja) * 1992-07-13 1994-02-01 Tooa Eiyoo Kk チエノ〔３，４−ｄ〕イミダゾール誘導体、その製造法およびそれを含有する循環器官用剤
DE4326344A1 (de) * 1993-08-05 1995-02-09 Thomae Gmbh Dr K Carbonamide, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und Verfahren zu ihrer Herstellung
US6281332B1 (en) * 1994-12-02 2001-08-28 The Johns Hopkins University School Of Medicine Hedgehog-derived polypeptides
US6291516B1 (en) * 1999-01-13 2001-09-18 Curis, Inc. Regulators of the hedgehog pathway, compositions and uses related thereto
EP1183229B1 (en) * 1999-05-17 2005-10-26 Novo Nordisk A/S Glucagon antagonists/inverse agonists
AU780846B2 (en) * 1999-09-16 2005-04-21 Curis, Inc. Mediators of hedgehog signaling pathways, compositions and uses related thereto
ATE324876T1 (de) * 1999-10-14 2006-06-15 Curis Inc VERMITTLER VON ßHEDGEHOGß ÜBERMITTELNDEN BAHNEN, DAZUGEHÖRIGE ZUSAMMENETZUNGEN UND VERWENDUNGEN
ES2250377T5 (es) * 2000-03-30 2010-04-06 Curis, Inc. Moleculas organicas pequeñas reguladoras de la proliferacion celular.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1051358A (zh) * 1989-10-31 1991-05-15 藤泽药品工业株式会社 稠合的咪唑衍生物及其制备方法
US5557002A (en) * 1992-06-17 1996-09-17 Eisai Co., Ltd. Process for the preparation of biphenyl containing intermediates useful in making angiotensin II receptor antagonists
WO1999010004A2 (en) * 1997-08-29 1999-03-04 Ontogeny, Inc. Regulation of muscle tissues by hedgehog-like polypeptides, and formulations and uses related thereto
US6218426B1 (en) * 1998-03-05 2001-04-17 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Non-peptide GnRH agents

Also Published As

Publication number Publication date
WO2003027234A2 (en) 2003-04-03
WO2003027234A9 (en) 2004-02-19
HUP0402307A2 (hu) 2005-02-28
EP1436287A2 (en) 2004-07-14
US20020198236A1 (en) 2002-12-26
WO2003027234A3 (en) 2003-12-18
AU2002336580B2 (en) 2008-10-30
EA200400355A1 (ru) 2005-06-30
GEP20063855B (en) 2006-06-26
KR101039198B1 (ko) 2011-06-03
IL161104A (en) 2013-08-29
NO20041260L (no) 2004-05-26
IL161104A0 (en) 2004-08-31
CA2461709A1 (en) 2003-04-03
EP1436287A4 (en) 2005-10-26
MXPA04002880A (es) 2005-06-20
US6683192B2 (en) 2004-01-27
ZA200402322B (en) 2005-06-23
UA78225C2 (en) 2007-03-15
BR0212825A (pt) 2005-05-10
IL228106A0 (en) 2013-09-30
JP4563028B2 (ja) 2010-10-13
PL371343A1 (en) 2005-06-13
NO20041260D0 (no) 2004-03-25
NZ531970A (en) 2006-11-30
KR20100105784A (ko) 2010-09-29
CN1578779A (zh) 2005-02-09
KR20040045003A (ko) 2004-05-31
JP2005520788A (ja) 2005-07-14
KR101051535B1 (ko) 2011-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1578779B (zh) 细胞增殖的有机小分子调节剂
JP4808895B2 (ja) 細胞増殖の小型有機分子レギュレーター
US7115653B2 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation
JP4898044B2 (ja) ヘッジホッグシグナル伝達経路のメディエーター、それらと関連する組成物及び利用
DE60017157T2 (de) Vermittler von igel signalwegen, deren zusammenstellungen und verwendungen
US6683108B1 (en) Agonists of hedgehog signaling pathways and uses related thereto
AU2002336580A1 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation
AU2001249664A1 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation
US20050070578A1 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation
US8852937B2 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation
CN101007802A (zh) Hedgehog信号转导途径介质、其相关组合物以及应用
AU2005244542B2 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation
JP2004531458A (ja) ヘッジホッグシグナル伝達経路メディエーター、それに関連した組成物及び利用
EP1645275A1 (en) Small organic molecule regulators of cell proliferation

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CX01 Expiry of patent term
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20130918