CN1575802A - 抑制血糖升高用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抑制血糖升高的组合物，其目的在于，阐明蜂巢蜡胶的新发现的、有实用性的生物活性及其活性成分，并据此提供有实用性的组合物。通过提供以蜂巢蜡胶或其水溶性组分、或三咖啡酰基奎宁酸为有效成分的抑制血糖升高用组合物、以及含有该组合物的人类或动物用食品及医药品而达到发明目的。
Description
技术领域
本发明涉及以蜂巢蜡胶或其水溶性组分为有效成分的抑制血糖升高用组合物、以三咖啡酰基奎宁酸(tricaffeoylquinic acid)或其可用于医药品的盐类为有效成分的抑制血糖升高用组合物、以及含有该抑制血糖升高用组合物的人类或动物用食品及医药品。
背景技术
三大生活习惯病之一的糖尿病可引起视网膜病、肾病、神经障碍等严重并发症，为不可逆疾患。据说，现在日本的糖尿病患者达700万人，若加上所谓糖尿病预备军，则高达约1,400万人，且近年来一直呈增加趋势。糖尿病分为胰岛素依赖型(I型)和非胰岛素依赖型(II型)。前者由于先天性病毒感染，后者有遗传因素，加之各种生活习惯的原因导致发病，约95％的糖尿病为这种II型糖尿病。作为II型糖尿病的有效预防方法，可以举出延缓或抑制因对小肠上皮内负责糖质最终转化的α-糖苷酶(AGH)的阻碍、即对由二糖类生成葡萄糖等单糖的阻碍而导致的血糖升高。
另一方面，宠物等动物也存在同样问题：因饮食生活的改变而寿命渐渐延长，但同时，因室内饲养等造成运动不足，而导致糖尿病等生活习惯病增加。随着宠物的家族化，动物也和人一样。作为预防糖尿病的对策之一，正在进行抑制和延缓血糖升高的研究。
在治疗糖尿病的药物中，可举出根据AGH阻碍作用抑制血糖升高的药物阿卡波糖(拜尔药品工业)。但是，糖尿病一旦发病，很难治愈，故防患于未然尤为重要。现在，预防方法之一是饭后食用具有抑制和延缓血糖升高的功能性食品。同时，近年来揭示食品功能的研究也得到飞速发展。最近已经搞清：用作食品的菊科植物雪莲果等所含的二咖啡酰基奎宁酸，可以抑制血糖升高(专利文献1和2)。
蜂巢蜡胶是蜜蜂采集的植物嫩芽及渗出液、树木的浆汁、花粉以及蜜蜡等的混合物，为树脂状块状固体。故原料蜂巢蜡胶也称作蜂巢蜡胶原块。可以想象：蜜蜂是为防止外敌侵入，因填补蜂巢间隙等修补目的而采集蜡胶的。蜂巢蜡胶用于人们生活的历史非常久远。在欧洲，蜂针疗法(用养蜂制品进行治疗的方法)与蜂王浆、蜂蜜、蜂花粉等其它养蜂制品一起，至今仍用于人们的保健。
蜂巢蜡胶由类黄酮、类萜、有机酸、氨基酸、多糖类、矿物质等多种天然成分组成。迄今，有关蜂巢蜡胶所具有的抗菌活性、抗炎活性、镇痛活性、止痒活性、免疫活化活性、抗肿瘤活性、抗氧化活性等各种生物活性已有记载，对这些成分及生物活性正在进一步研究之中。
近年来，日本也在期待口服蜂巢蜡胶能取得上述效果，并将其用于多种保健食品原料。
但是，有关蜂巢蜡胶的实用性及其活性成分，尚不能说已完全搞清。
根据上述情况，如果能用蜂巢蜡胶类天然物质中具有抑制血糖升高作用的组合物，不仅从产业角度，就是从安全角度也是极为可取的。因此，为获取有效的预防糖尿病组合物，我们使用蜂巢蜡胶，进行了反复深入的研究。
专利文献1：特开2002-255806号公报，
专利文献2：特开2003-34636号公报。
发明内容
本发明人等人，以阐明蜂巢蜡胶的新发现的、有实用性的生物活性及其活性成分、并提供其有实用性的组合物为目的，经过深入研究后发现：蜂巢蜡胶具有阻碍AGH的活性(下文也称之为“AGH阻碍活性”)；蜂巢蜡胶中含有三咖啡酰基奎宁酸；蜂巢蜡胶中阻碍AGH的主要活性成分是三咖啡酰基奎宁酸和二咖啡酰基奎宁酸；而且，特别是三咖啡酰基奎宁酸，具有很强的AGH阻碍活性，从而完成本发明。
因此，根据本发明，可以提供以蜂巢蜡胶或其水溶性组分为有效成分的抑制血糖升高用组合物、以三咖啡酰基奎宁酸或其可用于医药品的盐类为有效成分的抑制血糖升高用组合物、以及含有该抑制血糖升高用组合物的人类或动物用食品及医药品。
附图说明
图1表示实施例1的HPLC溶离曲线。
图2表示3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸的1H-NMR谱图。
图3表示3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸的13C-NMR谱图。
图4表示3，4-二-O-咖啡酰基奎宁酸的1H-NMR谱图。
图5表示3，4-二-O-咖啡酰基奎宁酸的13C-NMR谱图。
图6表示3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸的1H-NMR谱图。
图7表示3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸的13C-NMR谱图。
图8表示麦芽糖负荷试验的结果。
图9表示蜂巢蜡胶与50％甲醇溶离组分的用量关系性试验的结果。
具体实施方式
本发明中的蜂巢蜡胶没有特别的限定，例如，可以使用来自巴西、中国、欧洲各国、大洋洲、美洲等任一产地·植物的产品。而且，蜂巢蜡胶可直接使用，但当其中含由各种杂质的时候，优选使用利用水溶性溶剂萃取蜂巢蜡胶得到的水溶性组分作为有效成分。
获取蜂巢蜡胶水溶性组分的方法不限。作为原料的蜂巢蜡胶，通常用蜂巢蜡胶原块或经醇类洗净的蜂巢蜡胶原块。这些蜂巢蜡胶原块可以直接使用，优选为切割成适当大小、或粉碎后使用，以提高萃取效率。
而且，也可事先用乙醇等萃取蜂巢蜡胶、获得蜂巢蜡胶萃取液，用水性溶剂萃取。
作为水性溶剂，可仅使用水，也可将在水中适当添加有乙醇等低级醇类；盐酸、硫酸、硝酸或磷酸等无机酸；己烷；柠檬酸、醋酸、苹果酸或乳酸等有机酸；或卵磷脂、皂角苷、甘油、甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、脂肪酸丙二醇酯等食品乳化剂的混合物作为溶剂。
萃取时间没有特别限定，可根据作为原料使用的蜂巢蜡胶的形态；用于萃取的溶剂种类、量；萃取时的温度和搅拌条件等适当设定，具体方法可参考实施例记载的萃取方法。
萃取操作结束后，通常是利用过滤等方法从萃取的混合物中除去固态物质，进而可根据需要进行离心分离等分离水相、得到蜂巢蜡胶的水萃取组分。
上述方法得到的水萃取组分，可直接作为本发明中抑制血糖升高的有效成分使用，也可按通常方法将水萃取组分浓缩，制成浓缩液，或将浓缩液进行喷雾干燥、冻结干燥等，制成粉末状使用。
而且，也可将水萃取组分置于色谱柱，用水和乙醇等的混合液溶离、精制而成水性溶剂溶离组分，将其作为本发明的抑制血糖升高用组合物的有效成分使用。
进而，从上述水性溶剂溶离组分溶离的三咖啡酰基奎宁酸以及/或者二咖啡酰基奎宁酸，也可作为本发明的抑制血糖升高用组合物的有效成分使用。
所以，本发明的水溶性组分应理解为：包括上述水萃取组分、水性溶剂溶离组分以及下述水溶性组分的全部。
本发明的发明者们首次发现：蜂巢蜡胶中含有三咖啡酰基奎宁酸，而且三咖啡酰基奎宁酸有明显抑制血糖升高的活性。
本发明中的三咖啡酰基奎宁酸，不限于取自蜂巢蜡胶。作为制造方法之一，以下就蜂巢蜡胶离析法与二咖啡酰基奎宁酸离析法一并进行说明。而且，下述离析法以阻碍AGH活性的强度为指标。
首先，将粉碎蜂巢蜡胶所得蜂巢蜡胶粉末用乙醇或含水乙醇萃取，从萃取液中将乙醇减压蒸馏除去，获取浓缩为高浓度的蜂巢蜡胶萃取物的蜂巢蜡胶萃取液。
其次，将蜂巢蜡胶萃取液加入去离子水和正己烷搅拌后、离心分离所得水相冷冻干燥，获得蜂巢蜡胶水溶性组分。
将水溶性组分溶于去离子水得到的水溶液置于离子交换色谱柱，用例如水、50％含水甲醇以及100％甲醇分层溶离。由各溶离液减压蒸馏除去溶剂，获得干燥固态物质，再加入去离子水洗净后冷冻干燥，获得各溶离组分。
将上述获取的50％含水甲醇溶离组分溶于10％乙腈水溶液，将其置于高速液相色谱(HPLC)，分离获得AGH阻碍活性值很高的精制组分。
在下述实施例1记载的条件下进行HPLC实验时，溶离时间为51.1分、52.3分、以及59.0分的各精制组分，分别为：3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸(以下称化合物1)、3，4-二-O-咖啡酰基奎宁酸(以下称化合物2)、以及3，4，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸(以下称化合物3)。
上述离析各种化合物时的HPLC条件，并不限定于下述实施例1记载的条件，任何一种化合物的离析都可以AGH阻碍活性为指标进行。
上述化合物1～3，可以和碱金属，例如钠或钾；碱土类金属，例如钙或镁；或者铜、铁或锌等的过渡族金属形成可用于医药的盐类。
对由上述方法获取的水溶性组分以及化合物1～3进行糖苷酶阻碍活性测定时，任何一种对麦芽糖酶的阻碍活性都很强，特别是三咖啡酰基奎宁酸的阻碍活性最高。
而且，将含有这些化合物1～3的水溶性组分在大白鼠身上进行糖负荷实验时，可确认具有抑制血糖升高的效果。
所以，根据本发明，可将蜂巢蜡胶或其水溶性组分、或二咖啡酰基奎宁酸或三咖啡酰基奎宁酸、或它们的盐作为有效成分，作为抑制血糖升高用组合物。
本发明的抑制血糖升高用组合物，通常采用适用于口服的液体或固体制剂。
液体制剂可为口服液、糖浆制剂等；固体制剂可为散剂、颗粒、胶囊、片剂、咀嚼剂、糖锭剂等口服形式。
制造液体制剂时，作为赋形剂，可用水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等。
制作固体制剂时，作为赋形剂，可用乳糖、蔗糖、葡萄糖、玉米淀粉、明胶、淀粉、糊精、磷酸钙、碳酸钙、脂肪酸、脂质、合成或天然硅酸铝、氧化镁、无水氢氧化铝、硬脂酸镁、碳酸氢钠、干酵母等。
还可以根据不同要求，在本发明的组合物中添加柠檬酸、磷酸、苹果酸、或者这些酸的盐类等稳定剂，三氯蔗糖、乙酰舒泛钾等高甜度甜味料和蔗糖、果糖、蜂蜜等甜味剂；醇类、甘油等防腐剂，以及稀释剂、缓冲剂、香料、着色剂等常用添加剂。
由本发明制造的组合物，本身可作为食品或医药供人类或动物使用，还可以将这些组合物混合或喷洒于食品或医药品的原料、中间产品或最终产品中，以作为人类、动物用食品或医药品、以及动物用保健食品使用，达到抑制血糖升高的目的。
这里的食品除日常食品外，还指较通常食品更具有积极意义的、以保健、保护并增进健康等为目的的食品。如健康食品、功能食品、营养滋补品、增补剂、或厚生劳动省指定的特殊用途食品(如：特定保健食品、营养功能食品、患者用食品、患者用复合食品、老人食品等)。
作为通常食品，例如有饮料类(茶饮料、咖啡、果汁、营养剂类清凉饮料、乳饮料、乳酸菌饮料、酸奶、碳酸饮料、日本酒、洋酒、果酒、蜂蜜酒等酒类)；涂抹食品(奶油等)；糊类(水果糊等)；洋味甜点类(巧克力、面包圈、派、奶油泡夫、口香糖、果冻、糖果、曲奇、蛋糕、布丁)；日式甜点类(大福年糕、年糕、豆沙包、蛋糕、豆沙水果凉粉、羊羹；冷饮类(冰激凌、冰棍、冰糕)；养蜂制品(例如蜂蜜、蜂王浆、蜂幼虫、蜂花粉等)；软包装食品(例如咖喱、牛肉盖饭、粥、烫饭、肉沙司等)；速食品(例如方便面、粉末汤料、粉末果汁等)；瓶罐头；易拉罐罐头；果冻状食品(如果冻、琼脂、果冻状饮料等)；谷类加工品(如面、通心粉、米粉等)；蔬菜类(如杂拌、煎炸食品等)；冷冻食品(如土豆饼、春卷、豆包等)以及调味品类(调味汁、调味粉、美味调味品、汤料等)。
将本发明抑制血糖升高用组合物作为人类食品或医药品使用时，对于体重60公斤的成人来讲，其用量以蜂巢蜡胶为例，如实施例1所示的50％甲醇溶离组分(以后表示)为每天10mg～20g，优选为100mg～10g。对于3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸，每天10mg～20g，优选用量为300mg～15g。可将各用量每天分1～4次服用。但其用量，应根据服用人的健康状态、投药方法以及与其它药剂的组合等各种因素调整。
作为食品使用时，用量范围优选为不会对食品的味道、气味、外观等造成不良影响。
将本发明抑制血糖升高用组合物作为动物食品或医药品使用时，同上所述。
实施例
以下，举例说明本发明，但本发明并不限定于这些实施例。
实施例1
(1)由蜂巢蜡胶萃取液调制水萃取组分
将1g的55w/v％蜂巢蜡胶萃取液(用95％乙醇萃取，干燥固态成分浓度为55w/v％的液体)中加入去离子水3ml和正己烷3ml，用涡轮搅拌器强烈搅拌10分钟。将其在4℃、4000rpm下，离心分离10分钟，分离为水相3ml和己烷相3ml，分别冷冻干燥，获得水萃取组分和甲烷溶离组分。根据Pseudo in vivo法(参照Biol.Pharm.Bull.，23(9)，1084-1087(2000))，就两个样本，分别测定对麦芽糖酶、蔗糖酶的阻碍活性。己烷组分没有显示任何阻碍活性。而水萃取组分呈结果为：对麦芽糖酶的阻碍活性为IC50＝0.35mg/ml，对蔗糖酶的阻碍活性为IC50＝2.49mg/ml。此结果表明：水萃取组分对麦芽糖酶的阻碍活性特别强。故以蔗糖酶的阻碍活性为指标进行水萃取组分(干燥重量49.9mg、对550mg蜂巢蜡胶萃取液的收率为9.08％)的筛选。
(2)从水萃取组分调制50％甲醇溶离组分
将上述水萃取组分49.9mg溶解于5ml去离子水，按以下条件置于离子交换色谱柱。
离子交换色谱柱条件
柱种类 Amberlite XAD-2树脂(Organo公司制)
柱尺寸 内径2.5cm×32cm
柱温度 室温
流速 5ml/分
接着，用浓度0％(仅为去离子水)、50％、100％的甲醇，根据逐级梯度溶离法进行筛选。
将0％(去离子水)250ml加入色谱柱，获得250ml溶离液。接着将50％甲醇溶液250ml加入色谱柱，得到50％甲醇溶离液250ml，最后，将100％甲醇溶液250ml加入色谱柱，获得100％甲醇溶离液250ml。由溶离液减压蒸馏除去溶剂，分别干燥得到固态物质。将各干燥固态物质加入去离子水2ml洗净后，冷冻干燥，分别获得去离子水溶离组分(干燥重量15.9mg、对49.9mg水萃取组分的收率为31.8％)、50％甲醇溶离组分(干燥重量10.4mg，对49.9mg水萃取组分的收率为20.9％)、100％甲醇溶离组分(干燥重量2.25mg，对49.9mg水萃取组分的收率为4.519％)。
将该3种组分调整为1mg/ml的浓度，研究AGH阻碍率时，0％的甲醇溶离组分为41.9％、50％的甲醇溶离组分为76.2％、100％的甲醇溶离组分为56.3％。因为50％的甲醇溶离组分的阻碍活性最高，故用该溶离组分进行有效成分的离析。
(3)从50％的甲醇溶离组分中离析的二及三-咖啡酰基奎宁酸
将50％的甲醇溶离组分10.4mg溶解于10％乙腈350μl中，按以下条件置于高速液体色谱柱。
HPLC的条件：
系统： 日本分光UV-970(日本分光社制)
柱种： Cosmosil 5C18-AR(内径4.6mm×250mm)(Nakalai tesque社制)
柱压： 约40kgf/cm2
柱温： 35℃
检测仪：日本分光PU-980，λ＝400nm(日本分光社制)
流速： 0.3ml/分
洗提液：10～70％CH3CN/0.1％TFA(含有0.1％三氟乙酸的乙腈10％～70％的梯度液)
梯度程序
表1
| 项 目 | 开始 → 结束 | |||||
| 时间(分钟后) | 0 | 10 | 70 | 85 | 95 | 100 |
| 10％CH3CN | 100％ | 100％ | 0％ | 0％ | 100％ | 100％ |
| 70％CH3CN | 0％ | 0％ | 100％ | 100％ | 0％ | 0％ |
溶离曲线图见图1
获得阻碍活性最高的峰值1组分(溶离时间为51.1分，干燥重量0.69mg，明黄土色粉末，对50％甲醇溶离组分的收率为6.6％)、峰值2组分(溶离时间为52.3分，干燥重量1.21mg，黄土色粉末，对50％甲醇溶离组分的收率为11.6％)、峰值3组分(溶离时间为59.0分，干燥重量0.16mg，黄土色粉末，对50％甲醇溶离组分的收率为1.5％)。
对根据HPLC获取的这些精制组分，进行NMR等化学结构分析。
根据NMR法确定各化合物的结构
3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸
1H-NMG测定(图2)
使用机器：JMN-A400(400MHz、日本电子公司制)
溶剂：二甲亚砜
内部标准物质：四甲基硅烷
测定法：去偶合操作
扫描次数：16
旋转速度：11Hz
脉冲幅：3.69μ秒
脉冲延缓时间：10.0秒
分解能：0.49Hz
13C-NMR测定(图3)
使用机器：JMN-A400(400MHz、日本电子公司制)
溶剂：二甲亚砜
测定法：BCM
扫描次数：27934
旋转速度：11Hz
脉冲幅：4.50μ秒
脉冲延缓时间：1.8秒
分解能：0.83Hz
3，4-二-O-咖啡酰基奎宁酸
1H-NMR测定(图4)
使用机器：JMN-A400(400MHz、日本电子公司制)
溶剂：二甲亚砜
内部标准物质：四甲基硅烷
测定法：去偶合操作
扫描次数：256
旋转速度：13Hz
脉冲幅：4.20μ秒
脉冲延缓时间：10.0秒
分解能：0.49Hz
13C-NMR测定(图5)
使用机器：JMN-A400(400MHz、日本电子公司制)
溶剂：二甲亚砜
测定法：BCM
扫描次数：26059
旋转速度：13Hz
脉冲幅：4.50μ秒
脉冲延缓时间：1.8秒
分解能：0.83Hz
3，4，5，-三-O-咖啡酰基奎宁酸
1H-NMR测定(图6)
使用机器：JMN-A400(400MHz、日本电子公司制)
溶剂：甲醇
内部标准物质：四甲基硅烷
测定法：去偶合操作
扫描次数：16
旋转速度：11Hz
脉冲幅：3.69μ秒
脉冲延缓时间：10.0秒
分解能：0.49Hz
13C-NMR测定(图7)
使用机器：JMN-A400(400MHz、日本电子公司制)
溶剂：二甲亚砜
测定法：BCM
扫描次数：20000
旋转速度：10Hz
脉冲幅：4.50μ秒
脉冲延缓时间：1.8秒
分解能：0.83Hz
按上述方法离析3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸、3，4-二-O-咖啡酰基奎宁酸以及3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸，确认其结构。
实验例1
测定α-淀粉酶·麦芽糖酶·蔗糖酶阻碍活性
对α-淀粉酶的阻碍活性，使用淀粉酶测试剂(和光纯药工业株式会社)对来自人体唾液的α-淀粉酶的阻碍活性进行了评价。取含有实验化合物的样品溶液(100μl)，加入可溶性淀粉溶液(550μl)，在37℃温度下预培养5分钟后，加入α-淀粉酶溶液(50μl/0.1M磷酸盐缓冲液0.1U)，在37℃温度下反应10分钟。反应结束后，加入0.01N碘液(550μl)，令其显色后，对残存淀粉量进行定量(A660)。
α-淀粉酶的阻碍活性(IC50值)是以样品溶液吸光度为AS，不使用样品溶液、而是用水时的吸光度为AC，被测溶液和基质溶液混合液的吸光度为AB，样品溶液和基质溶液混合液的吸光度为ASB，由下式算出的。
阻碍率(％)＝(|AC-AB|-|AS-ASB|)/|AC-AB|×100
另一方面，对于麦芽糖酶、蔗糖酶的阻碍活性，根据上述参考文献(参考Biol.Pharm.Bull.，23(9)，1084-1087(2000))测定。
结果如表2所示。而且，表中的N.I.表示未能确认阻碍活性。
表2
单位：μM
| 化合物 | 麦芽糖酶 | 蔗糖酶 | α-淀粉酶 |
| 3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 | 1890 | 838 | N.I. |
| 3，4-二-O-咖啡酰基奎宁酸 | 1910 | 2270 | N.I. |
| 3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸 | 24 | 574 | 634 |
| 阿卡波糖 | 0.426 | 1.2 | - |
如上所示，已经搞清：3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸不仅对麦芽糖酶有极高的阻碍活性，对蔗糖酶、淀粉酶也有阻碍活性，可起到有效的复合阻碍糖分解酶的效果，故作为抑制血糖升高制剂，特别有效。
实验例2
in vivo评价
买进7周大小的雄性SD系大白鼠(CHARLES RIVER公司)后，进行1周的预备饲养(饲料用MF颗粒(东洋酵母社制造)，然后用于实验。
将实施例1所得到的50％甲醇溶离组分(20mg/ml)溶解于去离子水1ml制成样品溶液，用营养导管，经口送入绝食16小时后的大白鼠胃部。5分钟后，强行经口投入糖质(麦芽糖2g/kg)，糖质负荷后0分、30分、60分、以及120分钟后从尾部静脉采血。将得到的血液马上进行血糖测定(葡萄糖测试PRO、三和化学研究所)。而对照组则用水代替蜂巢蜡胶溶液。
抑制血糖升高的效果是根据不同时段测定血中葡萄糖量，比较血糖升高面积(AUC)判断的。血糖升高面积根据下式算出：
AUC(h*mg/dl)＝(a+2b+3c+4d)/4-2a
上式中a、b、c以及d，分别意味着0分、30分、60分、以及120分钟后的血糖值。
数值用平均值±标准偏差表示，2组间有效差的测定，根据Student的t检验进行。
结果如表3及图8所示。表中的n表示样品数。表及图中的**表示以不足1％的危险率与对照组比较的有效差。
表3
| 糖负荷后经过的时间 | 血糖值(mg/dl-血浆) | |
| 对照组(n＝4) | 50％甲醇溶离组分(n＝3) | |
| 0分 | 58.3±2.6 | 58.3±1.7 |
| 30分 | 170.3±4.6 | 125.2±6.7** |
| 60分 | 140.1±8.1 | 111.3±1.9** |
| 120分 | 84.4±4.8 | 73.3±6.7 |
与糖质负荷中仅用水的对照组相比，蜂巢蜡胶的50％甲醇溶离组分的确具备有效的抑制血糖升高的效果，该效果可有效地持续到糖质负荷60分钟后，而对于AUC，对照组为130.7±8.3h*mg/dl、50％甲醇溶离组分为80.7±4.2h*mg/dl。根据该AUC比较，血糖升高抑制率为38.3％。
实验例3
对于与50％甲醇溶离组分的用量关系，以与实验例2同样的方法进行了研究。结果如表4及图9所示。数值以平均值±标准偏差表示，数值旁添加的小字母，表示不同数值间，危险率不足5％的有效差。
表4
| 投料组 | AUC(h*mg/dl) |
| 对照组 | 130.7±8.3a |
| 50％甲醇溶离组分5mg/kg | 98.7±3.0b |
| 50％甲醇溶离组分10mg/kg | 91.7±2.2bd |
| 50％甲醇溶离组分20mg/kg | 80.7±4.2cd |
| 阿卡波糖(3mg/kg) | 76.1±13.0c |
溶离组分的AUC随用量的减少而减小，证明血糖升高可随用量而得到抑制。根据Duncan的多重比较进行各投料组中AUC平均值有效差测定时，证实：以溶离组分20mg/kg投料，与阿卡波糖(3mg/kg)的投料量抑制效果程度等同。
而且，根据AUC的比较，就对照的血糖升高的50％抑制用量，即计算ED50值时，与阿卡波糖相比，蜂巢蜡胶的溶离组分ED50值仅为10倍(ED50：蜂巢蜡胶的50％甲醇溶离组分32.7mg/kg、阿卡波糖3.07mg/kg)。
根据上述结果可知，实施例1获得的蜂巢蜡胶溶离组分，具有抑制血糖升高的效果，可与临床上使用的药物媲美。
实施例2：食品组合物(蜂巢蜡胶添加剂清凉饮料)
使用实施例1的蜂巢蜡胶水溶性组分(50％甲醇溶离组分)，按下列配方将各成分混合、过滤后装瓶，90℃温度下杀菌30分钟，调制成柠檬味的蜂巢蜡胶添加剂清凉饮料。
柠檬果汁 20ml
蜂巢蜡胶 1g
维生素C 0.2g
蜂 蜜 13g
水 活量
合计 100ml
实施例3：食品组合物(茶饮料)
根据常用方法调制绿茶。将实施例1获得的3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸5g、维生素C 10mg，加入绿茶，混合到总量为500ml，按常规方法加热、杀菌、装瓶。
3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸 5g
绿茶 适量
维生素C 10mg
合计 500ml
实施例4：食品组合物(胶囊类增补剂)
用实施例1所得的蜂巢蜡胶水溶性组分(50％甲醇溶离组分)，按下列处方调制增补剂。
将下列处方粉末混合均匀，经过60目筛子后，填入2号明胶硬质胶囊，制成胶囊式增补剂。
蜂巢蜡胶 100mg
乳 糖 100mg
玉米淀粉 80mg
合计 280mg
实施例5：动物用食品组合物(片剂)
用实施例1所得的蜂巢蜡胶水溶性组分(50％甲醇溶离组分)，按下列处方调制成动物用增补剂。
将下列处方粉末混合均匀，按常规用打片机制成250mg的片剂增补剂。
蜂巢蜡胶 100mg
干啤酵母粉 50mg
还原麦芽糖 75mg
蔗糖脂肪酸酯 20mg
纤维素 5mg
合计 250mg
实施例6：医药品组合物(片剂)
用实施例1所得3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸，按下列处方调制成片剂医药品。
将3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸和纤维素微晶混合，按常规颗粒化。将所制颗粒物用粗筛筛选后，加入残余的玉米淀粉和硬脂酸镁混合。然后，按常规方法用打片机制成260mg的片剂。
3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸 100mg
纤维素微晶 80mg
玉米淀粉 78mg
硬脂酸镁 2mg
合计 260mg
本发明的抑制血糖升高用组合物，因为以食用历史十分久远的天然蜂巢蜡胶或其水溶性组分、或三咖啡酰基奎宁酸为有效成分，故可安全、有效地使用。
Claims (10)
1.一种抑制血糖升高用组合物，其特征在于，其有效成分为蜂巢蜡胶或其水溶性组分。
2.如权利要求1所述的抑制血糖升高用组合物，其特征在于，所述有效成分为二咖啡酰基奎宁酸或三咖啡酰基奎宁酸，或其可用于医药品的盐类。
3.如权利要求2所述的抑制血糖升高用组合物，其特征在于，所述二咖啡酰基奎宁酸为3，4-或3，5-二-O-咖啡酰基奎宁酸。
4.如权利要求2所述的抑制血糖升高用组合物，所述三咖啡酰基奎宁酸为3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸。
5.含有权利要求1～4任一项所述的抑制血糖升高用组合物的人类或动物用食品。
6.含有权利要求1～4任一项所述的抑制血糖升高用组合物的人类或动物用医药品。
7.一种抑制血糖升高用组合物，其特征在于，其有效成分为三咖啡酰基奎宁酸或其可用于医药品的盐类。
8.如权利要求7所述的抑制血糖升高用组合物，其特征在于，所述三咖啡酰基奎宁酸为3，4，5-三-O-咖啡酰基奎宁酸。
9.含有权利要求7或8所述的抑制血糖升高用组合物的人类或动物用食品。
10.含有权利要求7或8所述的抑制血糖升高用组合物的人类或动物用医药品。
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