CN1570082A - 多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,属于生物工程中微生物发酵领域。本发明采用多种微生物菌种按比例组合制作成发酵剂,原料与秸秆混合均匀拌入活化后的发酵剂,装入容器进行发酵后即成成品。本发明发酵剂制作的饲料,或使奶牛产奶量日均提高0.5-1Kg,延长泌乳期;奶牛产后恢复快,提前进入旺奶期,消化吸收快,抑制肠道致病菌滋生;具有独特的酸香味增加奶牛的食欲,进食速度提高,没有残留,提高饲料利用率15%。经对饲料进行分析:粗蛋白提高20%-25%,粗纤维降低10%-15%,饲料成本大大降低,企业效益明显。本发明的产品可达到绿色饲料的要求,实现安全饲养。
Description
一、技术领域:
本发明涉及一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,属于生物工程中微生物发酵领域。
二、背景技术:
目前,对于奶牛精饲料的研究与开发,仅限于玉米、麸皮、饼粕的混合及鱼粉、肉骨粉,羽毛粉、玉米蛋白的比例,或加入酶制剂、矿物元素和抗生素的配方研究,造成配方中能量有余,蛋白质饲料单一氨基酸搭配不当,矿物质、微量元素和维生素严重缺乏,以致造成饲料的转化效率低,产奶量、乳脂率的乳蛋白率低,奶牛瘤胃酸中毒,营养代谢病发症较高,奶牛三脂淘汰率高和利用年限短,影响了奶牛生产潜力的发挥。且饲料成本高。
三、发明内容:
发明的目的在于提供一种抗病能力强,明显减少奶牛瘤胃酸中毒和腹泻现象,延长泌乳时间,提高了乳脂含量且成本低的多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用。
本发明的目的是这样实现的:
多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,其特征在于:发酵剂的制作步骤如下:
菌种培养:(1)原斜面菌种:1)8种细菌:双氮纤维单胞细胞Cellulomnas biazotea;产黄纤维单胞细胞Cellulominas flavigena;枯草杆菌10264 Bacillus subtilis;凝结芽孢干菌Bacillus coagulans;嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus;淀粉乳杆菌Lactobacillusamylophllus;费氏丙酸杆菌propionibacterium freudenreichii,枯草芽子胞干菌Bacillus subtilis TO13055;
2)3种酵母菌:产朊假丝酵母Candida utilis;糖化酵母Saccharomycesdiastaticus;酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae
3)3种霉菌:斜卧青霉Penicillium decumbers、米根霉Rhizopusoryzar、黑曲霉Aspergillus niger;
(2)纯种分离:从原斜面菌种取1环放入杀过菌且装有玻璃珠和100ml水的三角瓶中摇匀,以无菌操作,用无菌吸管取1ml放入已杀菌并装有培养基的平皿中,用无菌玻璃刮刀将菌液刮匀,并用该刮刀连续刮入第二、第三、第四、第五个相同的平皿即为不同的稀释分离平皿,放入25-38℃保温箱中培养;
(3)斜面培养:双氮纤维单孢菌,产黄纤维单孢菌,用稻草粉培养基:稻草3-5%煮沸10分钟加酵母粉少许,自然PH;
枯草杆菌10264、枯草芽孢杆菌TQ13055,牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏0.5%蛋白胨1%、氯化钠0.5%、PH7.2-7.6;
凝结芽孢杆菌:酵母粉0.8%、蛋白胨1%、葡萄糖0.7%、磷酸二氢钾0.18%、硫酸镁0.11%、PH7.0-7.2;
费氏丙酸菌:酵母粉0.8%、蛋白胨1%、蔗糖1.5%、磷酸铵0.4-0.6%、PH6.8-7.0;
嗜酸乳杆菌:脱脂奶粉10%、糖5%、加琼脂1.5-2%、自然PH、温度:38-39℃、培养4-8小时;
淀粉乳杆菌:酵母膏1%、蛋白胨1.0%、(NH4)2SO4 0.5%、蔗糖2.0%、PH7.2-7.4;
将平皿中长出的单个菌落各取一种接入相应培养基中,液体培养基加琼脂1.5-2%,125℃杀菌后接菌在25-35℃条件下静止培养培养20-40小时,放入4℃冰箱保存;
发酵培养基:双氮纤维单胞菌、产黄纤维单孢菌、发酵培养基:草粉2%、麸皮0.5%、粉酵母0.5%;PH72-7.4、温度:28-30℃、培养20-22小时;
枯草芽孢杆菌10264 TQ13055:牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏0.5%、蛋白胨1%、氯化钠0.5%、葡萄糖0.2%、PH7.2-7.6;温度:25-30℃、时间:22-24小时;
凝结芽孢杆菌:酵母膏1.0%、蛋白胨1.0%、葡萄糖0.6%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸锰0.1%、硫酸镁0.11%、PH7.0;温度:25-30℃、时间22-24;
费氏丙酸菌:玉米桨0.5%、葡萄糖0.2%、磷酸铵0.02%、K2HPO4 0.08%、CoCl2:(0.1%取0.04ml)蒸溜水100ml、PH6.8-7.0、温度:25-30:时间:24-28小时;
嗜酸乳杆菌:蛋白胨1.0%、牛肉膏1.0%、酵母膏0.5%葡萄糖2%、K2HPO40.2%、醋酸钠0.5%、柠檬酸二钠0.2%、MgSO4·7H2O 0.2%、MnSO4·4H2O 0.1%、奶粉1%、吐温80.1%、PH6.0-6.5、温度:38-39℃、培养4-8小时;
淀粉乳杆菌:可溶性淀粉2.0%、MgSO4·7H2O 0.05%、KNO3 0.1%、FeSO40.001%、NaCL 0.05%、K2HPO4 0.05%、PH7.2-7.4、温度:25-30℃、时间:26-28小时;
酵母菌:产朊假丝酵母Candida utilis;糖化酵母Saccharomycesdiastaticus斜面培养基:蛋白胨1.0%、酵母粉0.5%、葡萄糖2.0%、PH6.5或自然PH;
酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培养基:5%玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3%、K2HPO4 0.15%、CaCO3 0.5%、酵母粉0.5%、PH5-6、时间:24小时;
霉菌:斜卧青霉Penicillum decumbers斜面培养基:土豆20%、蔗糖2%、K2HPO4 0.3%、MgSO4·7H2O 0.15%、琼脂2.0%、PH6.0;
发酵培养基:NaNO3 0.3%、KCl 0.05%、K2HPO4 0.1%、FeSO4 0.001%、蔗糖3%、MgSO4·7H2O 0.05%、PH6.7、时间:48-56小时;
米根霉斜面培养基同斜卧青霉;
米根霉Rhizopus oryzar发酵培养基:Vogel′s液4%、半纤维素1%、微量元素0.01%(2NHcl 5ml、FeSO4 0.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl2 0.83g、CoCl2 1.0g蒸溜水100ml)、温度:28-30、时间:2天;
黑曲霉Aspergillus niger斜面培养基:NaNO3 0.3%、KCl0.05%、K2HPO4 0.1%、FeSO4 0.001%、蔗糖3.0%、MgSO4·7H2O0.05%、琼脂2.0%PH6.7、时间:28-32小时;
发酵培养基:Vogel′s母液4%、微晶纤维素1%、微量元素0.01;其配方同米根霉;
(4)摇管:从长好的斜面菌种中取一环接入已杀菌装有10ml液体培养基试管中,除嗜酸乳杆菌、费氏丙酸菌静止培养外,其余菌种在25-38℃条件下摇床培养1-2天;
(5)三角瓶培养:用500ml三角瓶装入相应的培养基100-120ml杀菌后,将摇培好的试管在酒精灯下倒入三角瓶中25-38℃摇培1-2天;
(6)上罐扩大培养:将各菌种所需相应的液体培养基配制后,高压灭菌0.1MPa、时间:20-50分钟,冷却到30-38℃用无菌操作,将已培养好的三角瓶菌种接入罐中,接种量为2-10%、在25-38℃条件下,通风或不通风培养,通风培养8-12m3/h,罐压0.01-0.08Mpa,培养时间18-24小时,不通风需隔4-5小时搅拌一次。
各菌种的配比:将培养好的细菌按1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1配合成细菌发酵剂,将培养好的酵母菌按1∶1∶0.5本合成酵母发酵剂,将培养好的霉菌按1∶1∶1制成霉菌发酵剂,将三种发酵剂按0.5∶1∶1;0.5∶2∶1;0.5∶3∶1;1∶0.5∶1;1∶1∶1;1∶2∶1;1∶3∶1;2∶0.5∶1;2∶1∶1;2∶3∶1配成不同的比例菌种作为精饲料发酵的发酵剂;
将农作物玉米400-600Kg、葵饼150-200Kg、葫麻饼50-150Kg、豆饼50-150Kg、麸皮30-80Kg、秸杆粉30-50Kg、矿物质20-50Kg、尿素2.5-10Kg等原料粉碎后,经20目过筛后,配合拌匀,加水量为40-50%,加水后润料1小时,润好的原料按1000Kg添加100L混合好的发酵剂,原料与水的混合比例为1∶0.5-1,混合均匀后装袋发酵,每袋装20-40kg,发酵时间:可根据菌种而定,如用自然发酵夏天4-7天,春秋天12-17天,冬天1-2个月,发酵后即为成品。
本发明具有如下特点:1、产生有机酸主要为乳酸,直接参与机体代谢,供给能量;2、无残留、无毒害、不产生抗药性;3、防止和治疗腹泻;4、降低肠道内PH值,抑制腐败菌生长,激活蛋白酶;5、提高免疫力并保持肠道生态平稳;6、增加奶的产量和质量;7、改善饲料风味;8、增强食欲,提高进食量。
四、发明效果:
多菌种微生物菌群使奶牛瘤胃益生菌大量增加。使微生物发酵奶牛精饲料具有香味,适用性好,无明显换料期,对奶牛的产奶量没有明显的影响。奶牛体质明显提高,表现为奶牛毛色光泽,粪便正常,奶牛的泌乳产量稳定,经一般饲料饲喂的奶牛产奶量日均提高0.5-1Kg,并且有利于延长泌乳期。促进奶牛产后恢复,一般奶牛产后需半个月以上才能恢复,而饲喂多菌种微生物发酵奶牛精饲料的奶牛只需3-8天即可恢复体质,提前进入旺奶期。
多菌种微生物发酵奶牛精饲料已达无公害绿色饲料的标准。一般饲料中都需添加激素和抗生素等添加剂,长期积累奶牛体内,严重影响牛的食用安全性,而发酵微生物菌群中具有肠道益生菌群,对奶牛无任何副作用,并会促进消化吸收,抑制肠道致病菌滋生,达到予防疫和增强奶牛抵抗力和作用。在喂养实验中,虽然在多菌种微生物发酵奶牛精饲料没有添加抗生素等添加剂,食用实验组奶牛在实验期从未见胀肚、腹泻现象。而对照组经常出现牛胀肚和腹泻症状。乳腺炎是奶牛的常见病,该病会明显影响奶牛的产奶量,并需要使用抗生素,而饲喂多菌种微生物发酵奶牛精饲料期间的实验奶牛没发生乳腺炎。所以本发明的产品可达到绿色饲料的要求,实现安全饲养。
节约粮食提高饲料利用率。多菌种微生物发酵奶牛精饲料中,用秸杆粉替代3%-5%的粮食,实现了节粮的目的,并且发酵饲料具有独特的酸香味和滋味,增加奶牛的食欲,进食速度明显提高,采食时间缩短到了3-10分钟,即可将所有饲喂的发酵饲料食净,没有残留,提高饲料利用率15%,减少饲料浪费,而且经对饲料进行分析:粗蛋白提高20%-25%,粗纤维降低10%-15%,饲料成本大大降低,企业效益明显。
多菌种微生物发酵奶牛精饲料有明显的经济效益:
(1)对于用户来讲,目前一般精饲料的价格在0.6-0.8元/500克,而饲喂相同能量的多菌种微生物发酵奶牛精饲料的成本在0.5元/500克。每日每头奶牛平均食用10Kg发酵精饲料,即可节约成本2-6元。且饲喂多菌种微生物发酵奶牛精饲料,奶牛日增产0.5-1Kg鲜奶,年增加收入274.5-509元。两项合计每头奶牛中每年可增加收入1004.5-2179元,经济效益非常明显。
(2)对生产者来讲,按每日100吨产量计可创收2-6万元,如果按投入1000万元,投资回收期,以最保守计算不足两年,效益更明显。
五、具体实施方式:(本发明的最佳实施例)
发酵剂的制作步骤如下:
原斜面菌种→纯种分离→接入斜面→摇管培养→三角瓶扩大培养→上罐培养→将十四种菌种发酵产物按不同的比例混合均匀→发酵剂。
多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,其特征在于:发酵剂的制作步骤如下:
菌种培养:(1)原斜面菌种:1)8种细菌:双氮纤维单胞细胞Cellulomnas biazotea;产黄纤维单胞细胞Cellulominas flavigena;枯草杆菌10264 Bacillus subtilis;凝结芽孢干菌Bacillus coagulans;嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus;淀粉乳杆菌Lactobacillusamylophllus;费氏丙酸杆菌propionibacterium freudenreichii,枯草芽子胞干菌Bacillus subtilis TO13055;
2)3种酵母菌:产朊假丝酵母Candida utilis;糖化酵母Saccharomyces diastaticus;酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae
3)3种霉菌:斜卧青霉Penicillium decumbers、米根霉Rhizopusoryzar、黑曲霉Aspergillus niger;
(2)纯种分离:从原斜面菌种取1环放入杀过菌且装有玻璃珠和100ml水的三角瓶中摇匀,以无菌操作,用无菌吸管取1ml放入已杀菌并装有培养基的平皿中,用无菌玻璃刮刀将菌液刮匀,并用该刮刀连续刮入第二、第三、第四、第五个相同的平皿即为不同的稀释分离平皿,放入25-38℃保温箱中培养;
(3)斜面培养:双氮纤维单孢菌,产黄纤维单孢菌,用稻草粉培养基:稻草3-5%煮沸10分钟加酵母粉少许,自然PH;
枯草杆菌10264、枯草芽孢杆菌TQ13055,牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏0.5%蛋白胨1%、氯化钠0.5%、PH7.2-7.6;
凝结芽孢杆菌:酵母粉0.8%、蛋白胨1%、葡萄糖0.7%、磷酸二氢钾0.18%、硫酸镁0.11%、PH7.0-7.2;
费氏丙酸菌:酵母粉0.8%、蛋白胨1%、蔗糖1.5%、磷酸铵0.4-0.6%、PH6.8-7.0;
嗜酸乳杆菌:脱脂奶粉10%、糖5%、加琼脂1.5-2%、自然PH、温度:38-39℃、培养4-8小时;
淀粉乳杆菌:酵母膏1%、蛋白胨1.0%、(NH4)2SO4 0.5%、蔗糖2.0%、PH7.2-7.4;
将平皿中长出的单个菌落各取一种接入相应培养基中,液体培养基加琼脂1.5-2% 125℃杀菌后接菌,在25-35℃条件下静止培养培养20-40小时,放入4℃冰箱保存;
发酵培养基:双氮纤维单胞菌、产黄纤维单孢菌、发酵培养基:草粉2%、麸皮0.5%、粉酵母0.5%;PH72-7.4、温度:28-30℃、培养20-22小时;
枯草芽孢杆菌10264 TQ13055:牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏0.5%、蛋白胨1%、氯化钠0.5%、葡萄糖0.2%、PH7.2-7.6;温度:25-30℃、时间:22-24小时;
凝结芽孢杆菌:酵母膏1.0%、蛋白胨1.0%、葡萄糖0.6%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸锰0.1%、硫酸镁0.11%、PH7.0;温度:25-30℃、时间22-24;
费氏丙酸菌:玉米桨0.5%、葡萄糖0.2%、磷酸铵0.02%、K2HPO4 0.08%、CoCl2:(0.1%取0.04ml)蒸溜水100ml、PH6.8-7.0、温度:25-30:时间:24-28小时;
嗜酸乳杆菌:蛋白胨1.0%、牛肉膏1.0%、酵母膏0.5%葡萄糖2%、K2HPO40.2%、醋酸钠0.5%、柠檬酸二钠0.2%、MgSO4·7H2O 0.2%、MnSO4·4H2O 0.1%、奶粉1%、吐温80.1%、PH6.0-6.5、温度:38-39℃、培养4-8小时;
淀粉乳杆菌:可溶性淀粉2.0%、MgSO4·7H2O 0.05%、KNO3 0.1%、FeSO4 0.001%、NaCL 0.05%、K2HPO4 0.05%、PH7.2-7.4、温度:25-30℃、时间:26-28小时;
酵母菌:产朊假丝酵母Candida utilis;糖化酵母Saccharomyces斜面培养基:蛋白胨1.0%、酵母粉0.5%、葡萄糖2.0%、PH6.5或自然PH;
酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培养基:5%玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3%、K2HPO4 0.15%、CaCO3 0.5%、酵母粉0.5%、PH5-6、时间:24小时;
霉菌:斜卧青霉Penicillum decumbers斜面培养基:土豆20%、蔗糖2%、K2HPO4 0.3%、MgSO4·7H2O 0.15%、琼脂2.0%、PH6.0
发酵培养基:NaNO3 0.3%、KCl 0.05%、K2HPO4 0.1%、FeSO4 0.001%、蔗糖3%、MgSO4·7H2O 0.05%、PH6.7、时间:48-56小时;
米根霉斜面培养基同斜卧青霉:
米根霉Rhizopus oryzar发酵培养基:Vogel′s母液4%、半纤维素1%、微量元素0.01%(2NHCl 5ml、FeSO4 0.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl2 0.83g、CoCl2 1.0g蒸溜水100ml)、温度:28-30、时间:2天;
黑曲霉Aspergillus niger斜面培养基:NaNO3 0.3%、KCl0.05%、K2HPO4 0.1%、FeSO4 0.001%、蔗糖3.0%、MgSO4·7H2O0.05%、琼脂2.0%PH6.7、时间:28-32小时;
发酵培养基:Vogel′s母液4%、微晶纤维素1%、微量元素0.01;其配方同米根霉;
(4)摇管:从长好的斜面菌种中取一环接入已杀菌装有10ml液体培养基试管中,除嗜酸乳杆菌、费氏丙酸菌静止培养外,其余菌种在25-38℃条件下摇床培养1-2天;
(5)三角瓶培养:用500ml三角瓶装入相应的培养基100-120ml杀菌后,将摇培好的试管在酒精灯下倒入三角瓶中25-38℃摇培1-2天;
(6)上罐扩大培养:将各菌种所需相应的液体培养基配制后,高压灭菌0.1MPa、时间:20-50分钟,冷却到30-38℃用无菌操作,将已培养好的三角瓶菌种接入罐中,接种量为2-10%、在25-38℃条件下,通风或不通风培养,通风培养8-12m3/h,罐压0.01-0.08Mpa,培养时间18-24小时,不通风需隔4-5小时搅拌一次。
各菌种的配比:将培养好的细菌按1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1配合成细菌发酵剂,将培养好的酵母菌按1∶1∶0.5本合成酵母发酵剂,将培养好的霉菌按1∶1∶1制成霉菌发酵剂,将三种发酵剂按0.5∶1∶1;0.5∶2∶1;0.5∶3∶1;1∶0.5∶1;1∶1∶1;1∶2∶1;1∶3∶1;2∶0.5∶1;2∶1∶1;2∶3∶1配成不同的比例菌种作为精饲料发酵的发酵剂;
实施例一:生产1000kg多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用:将农作物玉米410Kg、葵饼160Kg、葫麻饼135Kg、豆饼130Kg、麸皮70Kg、秸杆粉50Kg、矿物质40Kg(包括:CaCO3 40-60%、CaHPO4·2H2O15-25%、NaCl20-30%、MgSO4·7H2O0.3-0.8%、Se20-70PPm、I1000-150PPm、Co20-30PPm、Mn0.05-0.15%)、尿素5Kg等原料粉碎后,经20目过筛后,加水量为100Kg加水后润料1小时,润好的原料按1000Kg添加100L混合好的发酵剂,原料与水的混合比例为1∶0.5-1,混合均匀后装袋发酵,每袋装20-40kg,发酵时间:可根据菌种而定,如用自然发酵夏天4-7天,春秋天12-17天,冬天1-2个月,发酵后即为成品。
成品性状:颜色金黄色或原料原色,有酸香味质地柔软;
精饲料发酵后:粗蛋白18-22%、粗纤维6-12%、灰分7-8%、水分45-50%、磷0.7-0.9%、钙1.15-1.30%;
各种酶含量:纤维素酶:98-105%单位/g、半纤维素酶18-21单位/g、果胶酶50-93单位/g、蛋白酶850-950单位/g、葡聚糖苷酶60-70单位/g。
实施例二:生产1000kg多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用:将农作物玉米500Kg、葵饼170Kg、葫麻饼100Kg、豆饼100Kg、麸皮50Kg、秸杆粉40Kg、矿物质32Kg(包括:CaCO3 40-60%、CaHPO4·2H2O15-25%、NaCl20-30%、MgSO4·7H2O0.3-0.8%、Se20-70PPm、I100-150PPm、Co20-30PPm、Mn0.05-0.15%)、尿素8Kg等原料粉碎后,经20目过筛后,加水量为100Kg加水后润料1小时,润好的原料按1000Kg添加100L混合好的发酵剂,原料与水的混合比例为1∶0.5-1,混合均匀后装袋发酵,每袋装20-40kg,发酵时间:可根据菌种而定,如用自然发酵夏天4-7天,春秋天12-17天,冬天1-2个月,发酵后即为成品。
实施例三:生产1000kg多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用:将农作物玉米550Kg、葵饼180Kg、葫麻饼60Kg、豆饼73Kg、麸皮60Kg、秸杆粉40Kg、矿物质30Kg(包括:CaCO3 40-60%、CaHPO4·2H2O15-25%、NaCl20-30%、MgSO4·7H2O0.3-0.8%、Se20-70PPm、I1000-150PPm、Co20-30PPm、Mn0.05-0.15%)、尿素3Kg等原料粉碎后,经20目过筛后,加水量为100Kg加水后润料1小时,润好的原料按1000Kg添加100L混合好的发酵剂,原料与水的混合比例为1∶0.5-1,混合均匀后装袋发酵,每袋装20-40kg,发酵时间:可根据菌种而定,如用自然发酵夏天4-7天,春秋天12-17天,冬天1-2个月,发酵后即为成品。
Claims (3)
1、一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,其特征在于:发酵剂的制作步骤如下:
菌种培养:(1)原斜面菌种:1)8种细菌:双氮纤维单胞细胞Cellulomnasbiazotea;产黄纤维单胞细胞Cellulominas flavigena;枯草杆菌10264Bacillus subtilis;凝结芽孢干菌Bacillus coagulans;嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus;淀粉乳杆菌Lactobacillus amylophllus;费氏丙酸杆菌propionibacterium freudenreichii,枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis TO13055;
2)3种酵母菌:产朊假丝酵母Candida utilis;糖化酵母Saccharomyces diastaticus;酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae;
3)3种霉菌:斜卧青霉Penicillium decumbers;米根霉Rhizopusoryzar;黑曲霉Aspergillus niger;
(2)纯种分离:从原斜面菌种取1环放入杀过菌且装有玻璃珠和100ml水的三角瓶中摇匀,以无菌操作,用无菌吸管取1ml放入已杀菌并装有培养基的平皿中,用无菌玻璃刮刀将菌液刮匀,并用该刮刀连续刮第二、第三、第四、第五个相同的平皿即为不同的稀释分离平皿,放入25-38℃保温箱中培养;
(3)斜面培养:双氮纤维单孢菌,产黄纤维单孢菌,用稻草粉培养基:稻草3-5%煮沸10分钟加酵母粉少许,自然PH;
枯草杆菌10264、枯草芽孢杆菌TQ13055,牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏0.5%蛋白胨1%、氯化钠0.5%、PH 7.2-7.6;
凝结芽孢杆菌:酵母粉0.8%、蛋白胨1%、葡萄糖0.7%、磷酸二氢钾0.18%、硫酸镁0.11%、PH7.0-7.2;
费氏丙酸菌:酵母粉0.8%、蛋白胨1%、蔗糖1.5%、磷酸铵0.4-0.6%、PH6.8-7.0;
嗜酸乳杆菌:脱脂奶粉10%、糖5%、加琼脂1.5-2%、自然PH、温度:38-39℃、培养4-8小时;
淀粉乳杆菌:酵母膏1%、蛋白胨1.0%、(NH4)2SO40.5%、蔗糖2.0%、PH7.2-7.4;
将平皿中长出的单个菌落各取一种接入相应培养基中,液体培养基加琼脂1.5-2%,125℃杀菌后接菌,在25-35℃条件下静止培养20-40小时,放入4℃冰箱保存;
发酵培养基:双氮纤维单胞菌、产黄纤维单孢菌、发酵培养基:草粉2%、麸皮0.5%、粉酵母0.5%;PH 72-7.4、温度:28-30℃、培养20-22小时;
枯草芽孢杆菌10264 TQ13055:牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏0.5%、蛋白胨1%、氯化钠0.5%、葡萄糖0.2%、PH 7.2-7.6;温度:25-30℃、时间:22-24小时;
凝结芽孢杆菌:酵母膏1.0%、蛋白胨1.0%、葡萄糖0.6%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸锰0.1%、硫酸镁0.11%、PH 7.0;温度:25-30℃、时间22-24;
费氏丙酸菌:玉米桨0.5%、葡萄糖0.2%、磷酸铵0.02%、K2HPO4 0.08%、CoCl2:(0.1%取0.04ml)蒸溜水100ml、PH 6.8-7.0、温度:25-30:时间:24-28小时;
嗜酸乳杆菌:蛋白胨1.0%、牛肉膏1.0%、酵母膏0.5%葡萄糖2%、K2HPO40.2%、醋酸钠0.5%、柠檬酸二钠0.2%、MgSO4·7H2O 0.2%、MnSO4·4H2O 0.1%、奶粉1%、吐温80.1%、PH6.0-6.5、温度:38-39℃、培养4-8小时;
淀粉乳杆菌:可溶性淀粉2.0%、MgSO4·7H2O 0.05%、KNO3 0.1%、FeSO40.001%、NaCL 0.05%、K2HPO4 0.05%、PH 7.2-7.4、温度:25-30℃、时间:26-28小时;
酵母菌:产朊假丝酵母Candida utilis;糖化酵母Saccharomyces斜面培养基:蛋白胨1.0%、酵母粉0.5%、葡萄糖2.0%、PH 6.5或自然PH;
酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培养基:5%玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3%、K2HPO4 0.15%、CaCO3 0.5%、酵母粉0.5%、PH 5-6、时间:24小时;
霉菌:斜卧青霉Penicillum decumbers斜面培养基:土豆20%、蔗糖2%、K2HPO4 0.3%、MgSO4·7H2O 0.15%、琼脂2.0%、PH6.0;
发酵培养基:NaNO3 0.3%、KCl 0.05%、K2HPO4 0.1%、FeSO4 0.001%、蔗糖3%、MgSO4·7H2O 0.05%、PH 6.7、时间:48-56小时;
米根霉斜面培养基同斜卧青霉:
米根霉Rhizopus oryzar发酵培养基:Vogel′s母液4%、半纤维素1%、微量元素0.01% NHCl 5ml、FeSO4 0.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl20.83g、CoCl2 1.0g蒸溜水100ml、温度:28-30、时间:2天;
黑曲霉Aspetgillus niger斜面培养基:NaNO3 0.3%、KCl0.05%、K2HPO4 0.1%、FeSO4 0.001%、蔗糖3.0%、MgSO4·7H2O0.05%、琼脂2.0%PH 6.7、时间:28-32小时;
发酵培养基:Vogel′s母液4%、微晶纤维素1%、微量元素0.01;其配方同米根霉;
(4)摇管:从长好的斜面菌种中取一环接入已杀菌装有10ml液体培养基试管中,除嗜酸乳杆菌、费氏丙酸菌静止培养外,其余菌种在25-38℃条件下摇床培养1-2天;
(5)三角瓶培养:用500ml三角瓶装入相应的培养基100-120ml杀菌后,将摇培好的试管在酒精灯下倒入三角瓶中25-38℃摇培1-2天;
(6)上罐扩大培养:将各菌种所需相应的液体培养基配制后,高压灭菌0.1MPa、时间:20-50分钟,冷却到30-38℃用无菌操作,将已培养好的三角瓶菌种接入罐中,接种量为2-10%、在25-38℃条件下,通风或不通风培养,通风培养8-12m3/h,罐压0.01-0.08Mpa,培养时间18-24小时,不通风需隔4-5小时搅拌一次。
2、根据权利要求1所述的一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,其特征在于:各菌种的配比:将培养好的细菌按1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1配合成细菌发酵剂,将培养好的酵母菌按1∶1∶0.5本合成酵母发酵剂,将培养好的霉菌按1∶1∶1制成霉菌发酵剂,将三种发酵剂按0.5∶1∶1;0.5∶2∶1;0.5∶3∶1;1∶0.5∶1;1∶1∶1;1∶2∶1;1∶3∶1;2∶0.5∶1;2∶1∶1;2∶3∶1配成不同的比例菌种作为精饲料发酵的发酵剂;
3、根据权利要求1或2所述的一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用,其特征在于:将农作物玉米400-600Kg、葵饼150-200Kg、葫麻饼50-150Kg、豆饼50-150Kg、麸皮30-80Kg、秸杆粉30-50Kg、矿物质20-50Kg、尿素2.5-10Kg等原料粉碎后,经20目过筛后,配合拌匀,加水量为40-50%,加水后润料1小时,润好的原料按1000Kg添加100L混合好的发酵剂,原料与水的混合比例为1∶0.5-1,混合均匀后装袋发酵,每袋装20-40kg,发酵时间:可根据菌种而定,如用自然发酵夏天4-7天,春秋天12-17天,冬天1-2个月,发酵后即为成品。
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