CN109929903B - 一种霉菌和酵母菌检测用培养基及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种霉菌和酵母菌检测用培养基及其制备方法和应用，所述培养基包括如下原料组分，脱脂乳粉10－15％；琼脂1－2％；菌种0.1－2％；增稠剂0－5％。本发明提供的霉菌和酵母菌检测用培养基，包括脱脂乳粉、琼脂、菌种和增稠剂等主要原料，不包括传统的氯霉素等抑菌剂，避免了抑菌剂对霉菌和酵母菌生长的抑制，缩短了检测时间、能够明显缩短风险判读时间，可由国标法5天缩短至3天定量判读报出结果，提高了检测结果的准确性；所得培养基体系与发酵乳营养成分相接近，培养基的针对性更强，便于霉菌和酵母菌快速生长，更适于发酵乳及其加工环境中霉菌和酵母菌的检测，可有效指导加工厂对产品及生产加工过程及时采取纠偏措施。

Description

一种霉菌和酵母菌检测用培养基及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种霉菌和酵母菌检测用培养基及其制备方法和应用。
背景技术
霉菌和酵母菌广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。长期以来，人们利用某些霉菌和酵母菌加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美；还可利用霉菌和酵母菌酿酒、制酱等；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母菌。但在某些情况下，霉菌和酵母菌也会可引起食物霉变，会刺激人体消化道、胃部等，严重的还可对肝脏造成损伤，造成食物中毒，危及生命安全。
现行检测霉菌和酵母菌的技术主要采用GB4789.15法，该方法为平板法，是经典的微生物检测和鉴定方法，然该方法存在如下问题：第一，该国标方法检测使用广谱的中性霉酵菌培养基(孟加拉红培养基)，其中使用氯霉素作为杂菌抑制剂，使用蛋白胨和葡萄糖作为培养基中主要起增菌培养作用的成分，上述培养基与待测样品体系营养差别较大，对于不同产品的检测针对性较差。第二，检测周期长，上述国标检测方法判读出具结果的周期为5天左右，不利于货架期较短产品上市新鲜度的管控。第三，氯霉素的使用会对霉菌和酵母菌产生一定的抑制作用，从而影响检测结果的准确性。
现有技术中，为解决培养基检测不同产品针对性差的技术问题，也进行了一些研究，例如，中国专利文献CN102943105A，提供了一种霉菌数量检测用培养基及其制备与应用，其组成包括马铃薯、葡萄糖、琼脂、氯霉素、氯化钠，适用于烟草及烟草制品中霉菌数量的检测。中国专利文献CN101003786A，提供了一种酱油中耐高渗透压酵母菌培养基及其应用，其具体组成主要包括葡萄糖、酵母粉、氯化钠、大豆提取液，其适用于酱油特有的高渗透压和营养条件。但目前，现有技术中并没有发现适合发酵乳这一酸性体系中霉菌和酵母菌检测用的培养基，这严重影响了发酵乳产品的卫生检测及市场占有率的开发。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的霉菌和酵母菌检测用培养基与产品营养相差较大、抑菌剂的使用会影响检测结果、检测时间长等缺陷，从而提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基及其制备方法和应用，所述培养基尤其适用于发酵乳及其加工环境中霉菌和酵母菌的检测。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，
优选的，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，
进一步地，余量为水；优选的，选用蒸馏水。
进一步地，所述增稠剂选自淀粉，明胶，果胶中的至少一种。
进一步地，所述菌种为满足GB19302中规定菌种中的至少一种。常用的为保加利亚乳杆菌(德氏乳杆菌保加利亚亚种)、嗜热链球菌，也可以为其它由国务院卫生行政部门批准使用的菌种。
本发明还提供一种上述的霉菌和酵母菌检测用培养基的制备方法，包括以下步骤：
原料杀菌：将脱脂乳粉，琼脂，增稠剂和水混合均匀，杀菌处理；
发酵：将杀菌处理后的原料降温至发酵温度，加入菌种进行发酵处理，得所述培养基。
进一步地，所述杀菌处理的温度为92－98℃，时间为5－10min。
进一步地，所述发酵温度为40－45℃，发酵时间为4－8h。
进一步地，采用pH判定发酵终点，所述发酵终点的pH为4－4.6。
其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节需在无菌操作台或同等洁净度级别环境下进行。
具体地，可以将培养基原料直接在培养皿中进行发酵，具体步骤为，将菌种除外的原料混合15－30分钟，升温92－98℃，杀菌5－10分钟，降温至40－45℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位1/3－1/2处加盖，恒温静止发酵4－8小时(pH值4－4.6为判定点)，降温至2－10℃，备用。
本发明还提供一种上述霉菌和酵母菌检测用培养基在发酵乳及其加工环境的检测中的应用。
本发明提供的培养基，还可以根据发酵乳的组成，添加一些其它营养组分。制备得到的培养基需要在2－10℃下储存，如果储存5－10天后，出现凝胶析水或状态差(如豆腐脑状)，直接弃用。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的霉菌和酵母菌检测用培养基，包括脱脂乳粉、琼脂、菌种和增稠剂等主要原料，培养基体系为酸性，直接抑制了杂菌的生长，不再需要传统的氯霉素等抑菌剂，避免了抑菌剂对霉菌和酵母菌生长的抑制，缩短了检测时间、提高了检测结果的准确性；所得培养基体系与发酵乳营养成分相接近，培养基的针对性更强，便于霉菌和酵母菌快速生长，更适于发酵乳及其加工环境中霉菌和酵母菌的检测。
本发明提供的霉菌和酵母菌检测用培养基，通过对各原料组分用量、菌种以及增稠剂的优选，可进一步提高培养基的状态和检测性能，使检测结果更准确。
2.本发明提供的霉菌和酵母菌检测用培养基的制备方法，先将除菌种以外的原料组分混合均匀，杀菌处理；将杀菌处理后的原料降温至发酵温度，加入菌种进行发酵处理，即得培养基。通过该方法，能够制备得到模拟发酵乳组成的培养基体系，便于霉菌和酵母菌的快速生长，所得培养基的针对性强，适于发酵乳及其加工环境中霉菌和酵母菌的检测，检测结果更准确，同时，制备、储存方法操作简易，便于发酵乳生产加企业及其上游直接接触产品包装等材料生产企业的制备及应用。
本发明提供的霉菌和酵母菌检测用培养基的制备方法，通过对杀菌条件、发酵条件以及发酵终点的控制，能够进一步改善培养基的状态，使其更稳定，便于储存。
3.本发明提供的霉菌和酵母菌检测用培养基的应用，将本发明提供的培养基在发酵乳及其加工环境检测中进行应用，能够明显缩短风险判读时间，可由国标法5天缩短至3天定量判读报出结果，判读时效性及针对性均有显著优势，可有效指导加工厂对产品及生产加工过程及时采取纠偏措施。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
本实施例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉10g；琼脂1g；保加利亚乳杆菌0.1g；水88.9g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、水混合15分钟，升温92℃，杀菌5分钟；降温至40℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位1/3处加盖，恒温静止发酵4小时，体系pH到达4时发酵结束，降温至2℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
实施例2
本实施例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉12.5g；琼脂1.5g；嗜热链球菌1.05g；淀粉2.5g；水82.45g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合22.5分钟，升温95℃，杀菌7.5分钟；降温至42.5℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位2/5处加盖，恒温静止发酵6小时，体系pH到达4.3时发酵结束，降温至6℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
实施例3
本实施例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉15g；琼脂2g；德氏乳杆菌保加利亚亚种2g；淀粉5g；水76g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合30分钟，升温98℃，杀菌10分钟；降温至45℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位1/2处加盖，恒温静止发酵8小时，体系pH到达4.6时发酵结束，降温至10℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
实施例4
本实施例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉11g；琼脂1.8g；德氏乳杆菌保加利亚亚种0.6g；果胶4g；水82.6g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合20分钟，升温95℃，杀菌8分钟；降温至41℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位2/5处加盖，恒温静止发酵6小时，体系pH到达4.3时发酵结束，降温至6℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
实施例5
本实施例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉14g；琼脂1.3g；嗜热链球菌1.5g；果胶1.5g；水81.7g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合22.5分钟，升温95℃，杀菌7.5分钟；降温至42.5℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位2/5处加盖，恒温静止发酵6小时，待pH到达4.3时发酵结束，降温至6℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
实施例6
本实施例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉13g；琼脂1.5g；保加利亚乳杆菌1.3g；淀粉3g；水81.2g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合22.5分钟，升温95℃，杀菌7.5分钟；降温至42.5℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位2/5处加盖，恒温静止发酵6小时，待pH到达4.3时发酵结束，降温至6℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
对比例1
本对比例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉9g；琼脂0.9g；保加利亚乳杆菌0.09g；水90.01g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、水混合10分钟，升温90℃，杀菌4分钟；降温至40℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位1/4处加盖，恒温静止发酵3小时，体系pH到达3.9时发酵结束，降温至0℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
对比例2
本对比例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉10g；琼脂0.5g；保加利亚乳杆菌1g；淀粉1g；水87.5g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合15分钟，升温95℃，杀菌8分钟；降温至35℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位1/5处加盖，恒温静止发酵4小时，体系pH到达4.6时发酵结束，降温至1℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
对比例3
本对比例提供一种霉菌和酵母菌检测用培养基，以培养基的总质量计，包括如下质量百分含量的原料组分，脱脂乳粉16g；琼脂3g；保加利亚乳杆菌3g；淀粉6g；水72g。
其制备方法包括以下步骤：
将脱脂乳粉、琼脂、淀粉、水混合40分钟，升温100℃，杀菌12分钟；降温至46℃，加菌种，搅拌均匀，浇皿，每个皿液位4/5处加盖，恒温静止发酵9小时，体系pH到达4.7时发酵结束，降温至11℃，备用。其中，杀菌完成后的降温、加菌种搅拌、浇皿加盖环节在无菌操作台下进行。
实验例
1.稳定性测试
将本发明实施例1－6和对比例1－3制备得到的培养皿，分别放置2天、5天、10天后，观察其状态，并记录结果，参见表1：
表1
从上表中的结果可知，本发明实施例提供的培养基状态优于对比例，可见制备工艺和组成都对培养基的状态有影响。对比例提供的培养状态不佳，根本不能用于正常的空爆测试。
2.测试实验
将本发明实施例1－6的提供的培养基和GB4789.15所用培养基(孟加拉红培养基)进行空暴测试，发酵乳产品使用商业霉菌标准样品(用初始菌中位值450CFU/ml的霉菌质控样液，取10倍稀释染菌液0.1ml)，结果取平均值。具体测试结果见表2：
表2
从上表中的数据可知，本发明提供的培养基在3天观察结果可见显著菌落形成，且菌落数量随着培养时间增加基本无显著变化，可以判读结果；且经数据对比，本发明提供的培养基的观测结果显著高于国标法平行样观测结果；对比国标法监测微生物交叉污染风险识别的及时性及有效性有显著差异。
综上，本发明提供的配方工艺制备的培养基较国标方法，在判读时效性及针对性均有显著优势，可有效指导加工厂对产品及生产加工过程及时采取纠偏措施。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (7)

1.一种发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基，其特征在于，以培养基的总质量计，由如下质量百分含量的原料组分组成，
脱脂乳粉 10-15%；
琼脂1-2%；
菌种0.1-2%；
增稠剂0-5%；
余量为水；
所述菌种为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌中的至少一种；
所述增稠剂选自淀粉，明胶，果胶中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基，其特征在于，以培养基的总质量计，由如下质量百分含量的原料组分组成，
脱脂乳粉 11-14%；
琼脂1.3-1.8%；
菌种0.6-1.5%；
增稠剂1.5-4%；
余量为水。
3.一种权利要求1-2任一项所述的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
原料杀菌：将脱脂乳粉，琼脂，增稠剂和水混合均匀，杀菌处理；
发酵：将杀菌处理后的原料降温至发酵温度，加入菌种进行发酵处理，得所述培养基。
4.根据权利要求3所述的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基的制备方法，其特征在于，所述杀菌处理的温度为92-98℃，时间为5-10min。
5.根据权利要求3或4所述的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基的制备方法，其特征在于，所述发酵温度为40-45℃，发酵时间为4-8h。
6.根据权利要求3或4所述的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基的制备方法，其特征在于，采用pH判定发酵终点，所述发酵终点的pH为4-4.6。
7.一种权利要求1-2任一项所述的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基或权利要求3-6任一项所述的制备方法制备得到的发酵乳及其加工环境中霉菌检测用培养基在发酵乳及其加工环境的检测中的应用。
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