CN1515278A - 一种治疗急慢性鼻渊的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗急、慢性鼻渊的中药组合物及其制备方法。该组合物由辛夷、苍耳子、麻黄、白芷、薄荷、藁本、连翘、野菊花、天花粉、地黄、丹参、茯苓、甘草等十四味药组成。该中药组合物可制备成各种不同的临床剂型，达到使有效药物的充分发挥。本组合物治疗急慢性鼻渊具有很好的效果。

Description

一种治疗急慢性鼻渊的中药组合物及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种中药组合物，特别涉及用于治疗急、慢性鼻渊的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法。

背景技术

现代医学认为，急慢性鼻窦炎的病因主要是人体抵抗力降低，鼻道内和外在的病毒及细菌乘隙侵入，造成鼻腔炎症。急慢性鼻渊是我国常见病和多发病，据文献报道，各地鼻病发生率波动在10.7-44.5％之间，尤其在南方各地，气候潮湿，发病率甚高，其中76％是发生在30岁以下，从40-50岁间有6.4％，50岁以后仅有1％或2％，该病病程长，易反复，常因伴有头痛、头晕、记忆力减退等症状，给患者带来不利影响。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种新的治疗急慢性鼻渊的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗急慢性鼻渊中药组合物的方法。

本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

辛夷10-30重量份     苍耳子30-90重量份     麻黄20-60重量份

白芷30-90重量份     薄  荷10-30重量份     藁本5-15重量份

黄芩20-40重量份     连  翘20-40重量份

本发明药物组合物的原料药中还可加入下述组分的原料药：

野菊花20-40重量份   天花粉20-40重量份     地黄30-60重量份

丹  参20-40重量份   茯  苓40-120重量份

本发明药物组合物的原料药中还可加入甘草5-15重量份

本发明药物组合物的原料药组成及配比还可以是(按重量份)：

辛夷15-25重量份     苍耳子50-70重量份      麻  黄30-50重量份

白芷50-70重量份     薄  荷15-35重量份      藁  本8-18重量份

黄芩30-50重量份     连  翘30-50重量份      野菊花30-50重量份

天花粉30-50重量份     地黄50-70重量份      丹参30-50重量份

茯  苓70-90重量份     甘草8-15重量份

上述原料的最佳重量配比为：

辛  夷20重量份     苍耳子60重量份      麻  黄40重量份

白  芷60重量份     薄  荷20重量份      藁  本10重量份

黄  芩40重量份     连  翘40重量份      野菊花40重量份

天花粉40重量份     地  黄60重量份      丹  参40重量份

茯  苓80重量份     甘  草10重量份

上述药物组成中的苍耳子以炒为佳。

按照常规的制剂工艺，可以将上述原料制备成常用的临床药物剂型，例如：丸剂、片剂、颗粒剂、口服液、胶囊剂、膏剂、乳剂和中药膜剂等。

本发明药物还可根据需要加入常规的药物赋形剂，如调味剂、分散剂、粘合剂、增稠剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、防腐剂等。

本药物组合物的制备方法：

以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮1-3小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成临床可接受的剂型。

本组合物制剂在治疗急慢性鼻渊中有显著的效果，具有收脓涕效果好，见效快的特点，它可作用于炎症反应的多个环节，从而减轻炎症反应的症状，使炎症反应消退，对急慢性炎症均有良好的抗炎作用；对引起急慢性鼻炎及鼻窦炎的常见致病菌有不同程度的抑菌作用；对非特异免疫功能及特异性免疫功能，都有一定的促进作用。

下面实验例用于进一步说明本发明。

本组合物制剂(鼻渊净颗粒)对角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀，对组胺和5-羟色胺所致的毛细血管通透性增加，羧甲基纤维素钠引起的大鼠白细胞游走以及大鼠皮下棉球肉芽肿增生均有明显抑制作用。提示鼻渊净颗粒作用于炎症反应的多个环节，从而降低炎症反应的症状，使炎症反应消退。对急、慢性炎症均有良好的抗炎作用。体外抑菌试验选择7种临床分离菌株共106株(其中多数菌株对常用抗菌药物青霉素和链霉素耐药)及3株标准菌株，对鼻渊净颗粒进行了体外抗菌作用的实验研究，结果表明该药对引起急、慢性鼻炎及鼻窦炎的常见致病菌，如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌、变形杆菌、肺炎杆菌等均有不同程度的抑菌作用。鼻渊净颗粒对小鼠非特异免疫功能—单核巨噬细胞吞噬功能具有明显的促进作用，提高小鼠对血中胶体廓清速度；在迟发性变态反应中，鼻渊净颗粒也都能增加DNFB致敏后的耳壳肿胀度，提高正常机体对超敏反应的感受力，提高其细胞免疫功能：在免疫器官方面，对脾脏重量有增加趋势，但无统计学意义：在体液免疫方面，对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠溶血素生成都具有一定提高作用。以上研究初步表明，鼻渊净颗粒对非特异免疫功能及特异性免疫功能，包括细胞免疫，体液免疫都具有一定的促进作用。鼻渊净颗粒对无芽胞厌氧的体外抑菌试验：选择有代表性的各种厌氧菌共24株，测定了鼻渊净颗粒的体外抗厌氧活性，并以甲硝唑作阳性对照。试验结果表明鼻渊净颗粒对3种无芽胞厌氧菌均有一定的抑制作用，但其抑菌活性远低于对照药甲硝唑。体内抗菌试验：采用预防性给药，即感染前3天给药，在较高剂量时对金色葡萄球菌所致小鼠感染有一定的保护作用，ED₅₀为14.4g/Kg。这一结果与其在体外具有抗金葡萄球菌作用的结果是一致的。

实验例1本组合物制剂(鼻渊净颗粒)的抗炎作用

一、实验材料及统计方法

1、药物：鼻渊净清膏，每毫升含生药3g，武汉市第三医院提供(批号930514)，以下所用浓度均以生药表示，分别取3g/ml的鼻渊净颗粒40ml、20ml、10ml，加蒸馏水至100ml配成120％、60％、30％的混悬液备用，用时混匀；地塞米松片(合肥制药厂，批号890572)，用蒸馏水配成0.125g/ml的溶液备用；阿斯匹林片(济南第三制药厂，批号9105812-5)，用乙醇溶解，配成2％的溶液备用；扑尔敏片(山东德州制药厂，批号920401)；用蒸馏水配成1％的溶液备用。2、试剂：角叉菜胶(Nacala Tesqe，Inc Japan)；5-羟色胺(Koch-Light Lab.Ltd.England)；组胺(上海生化所)；羟甲基纤维素钠(上海赛璐珞厂)。3、动物：Wistar大鼠，同济医科大学实验动物中心提供。4、仪器：72型分光光度计，普通光学显微镜。5、统计方法：所有数据均用均数标准表示，各均数间差异用方差分析进行差异显著性检验。显著性界限为p＜0.05。

二、方法与结果

1、对大鼠足跖肿胀的影响：Wistar大鼠50只，体重120-160(157±12)g，雌雄各半，随机分成5组，每组10只，设蒸馏水组、阿斯匹林组和鼻渊净颗粒高、中、低剂量组，分别给予每日灌胃一次，连续3天，末次给药后1小时，每鼠右后足跖皮下注射1％角叉莱胶0.1ml，给药前和后1、2、3、4、5和6小时分别测定固定位置的足跖体积(毛细管放大测量法)，二者之差即肿胀度。结果表明阿斯匹林在上述各时间点对足跖肿胀均有显著抑制作用。高剂量组在致炎后2、3、4、5和6小时时间点有明显抑制作用，中、低剂量组在4、5小时时间点有抑制作用，见表1。

                   表1  鼻渊净清膏对大鼠足跖肿胀的影响( X±SD)

组别       剂量  动物数                                  足跖肿胀度(cm³)

           g/kg   (只)

                             1h            2h            3h            4h               5h              6h

蒸馏水      -      10    0.34±0.04    0.75±0.03    0.99±0.05    1.08±0.04      1.12±0.06      1.06±0.05

阿斯匹林    0.2    10    0.21±0.03**  0.39±0.09**  0.73±0.04**  0.75±0.06**    0.82±0.03**    0.78±0.03**

鼻渊净高    12     10    0.42±0.09    0.56±0.07**  0.74±0.08**  0.79±0.05**    1.04±0.07**    0.83±0.06**

鼻渊净中    6      10    0.41±0.04    0.72±0.03    1.00±0.06    1.00±0.04**    1.02±0.06**    0.89±0.08

鼻渊净低    3      10    0.32±0.08    0.73±0.08    0.97±0.05    0.98±0.03      1.02±0.06**    0.90±0.04

与蒸馏水比较**p＜0.01

2、对血管通透性的影响：Wistar大鼠50只，体重150-190(173±12)g，雌雄各半，随机分成5组，每组10只，分别设蒸馏水组、扑尔敏组和鼻渊净颗粒高、中、低剂量组，给药容量均为10ml/kg，每日灌胃一次，连续3天。末次给药后1小时后在背部已剃毛的四个部位，分别皮内注射0.1％组胺和0.1％5-HT 0.1ml(各二点)形成小丘，然后立即股静脉注射1％伊纹氏蓝4ml/kg。5分钟后断头处死；剥开背部皮肤，将着色的皮肤剪下，切碎，放人5ml生理盐水-丙酮溶液(3∶7)内浸泡24小时，离心(3000rpm 20min)，取上清液，在610nm波长处比色(72型分光光度计)。结果表明扑尔敏、鼻渊净颗粒高、中剂量能明显抑制组胺和5-HT引起的血管通透性增高，见表2。

          表2、鼻渊净颗粒对血管通透性的影响( X±SD)

组别          剂量    动物数(只)         致炎剂       光密度(OD)

蒸馏水      10ml/kg     10                组胺        0.35±0.09

                                          5-HT        0.27±0.11

扑尔敏      100mg/kg    10                组胺        0.16±0.06**

                                          5-HT        0.13±0.04**

鼻渊净高    12g/kg      10                组胺        0.22±0.05**

                                          5-HT        0.17±0.07*

鼻渊净中    6g/kg       10                组胺        0.25±0.07**

                                          5-HT        0.18±0.06*

鼻渊净低    3g/kg       10                组胺        0.32±0.09

                                          5-HT        0.25±0.10

与蒸馏水组比较*p＜0.05  **P＜0.01

3、对白细胞游走反应的影响：雄性Wistar大鼠50只，体重130-180(153±13)g。随机分成5组，每组10只，分别设蒸馏水组、地塞米松组和鼻渊净颗粒高、中、低剂量组。给药容量均为10ml/kg，每日灌胃一次，连续三天。致炎前一天在背部肩胛间区皮下注射5ml空气，形成气囊。末次给药后1小时，抽囊内注入1.5、3和7.5小时从囊内吸取液体0.1ml作白细胞计数。结果表明地塞米松和高剂量组鼻渊净颗粒明显抑制白细胞游走反应，见表3。

      表3、鼻渊净颗粒对大鼠白细胞游走反应的影响( x±SD)

                                           白细胞数(10⁹/L)

组别        剂量       动物数

                                  1.5h           3h            7.5h

蒸馏水      10ml/kg      10    4.34±0.28    5.79±0.47     26.26±2.48

地塞米松    1.25mg/kg    10    2.18±0.28*   2.80±0.62*    14.27±1.79*

鼻渊净高    12g/kg       10    3.70±0.46*   4.75±0.47*    21.88±3.27*

鼻渊净中    6g/kg        10    4.20±0.28    5.55±0.48     26.28±2.30

鼻渊净低    3g/kg        10    4.46±0.31    5.63±0.45     27.29±1.66

与蒸馏水组比较*p＜0.01

4、对大鼠皮下棉球肉芽肿增生的影响：雄性Wistar大鼠50只，体重120-160(142±12)g，随机分成5组，每组10只，分别设蒸馏水组，地塞米松组和鼻渊净颗粒高、中、低剂量组。浅麻醉无菌条件下，将棉球(29-31mg)植入两侧腹股沟。术前三天给药，每日灌胃十次，连续10天。给药结束后断头处死动物，剥出棉球肉芽肿，90℃烤箱内干燥，1小时后称重。结果表明地塞米松和高、中剂量鼻渊净颗粒明显抑制皮下棉球肉芽肿增生，抑制率分别为24.8％、20.0％和13.3％，见表4。

      表4、鼻渊净颗粒对大鼠棉球肉芽肿的影响( X±SD)

组别        剂量          动物数(只)   肉芽肿重(mg)    抑制率(％)

蒸馏水      10mg/kg          10          105±15

扑尔敏      1.25mg/kg        10          79±13**        24.8

鼻渊净高    12g/kg           10          84±14**        20.0

鼻渊净中    6g/kg            10          91±12*         13.3

鼻渊净低    3g/kg            10          94±13          10.5

结论：该项研究对鼻渊净颗粒在四种大鼠动物模型上进行了实验。其剂量由人用量折算而来。人用每日剂量30-45g(10-15g Tid)相当于生药16.8-25.2g，按公斤体重计为0.34-0.50g/kg/日，实验结果表明，鼻渊净颗粒对角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀，对组胺和5-羟色胺所致的毛细血管通透性增加，羧甲基纤维至少钠引起的大鼠白细胞游走以及大鼠皮下棉球肉芽肿增生均有明显抑制作用。提示鼻渊净颗粒对炎症反应的多个环节都有作用，从而降低炎症反应的症状，使炎症反应消退。对急、慢性炎症均有良好的抗炎作用。

实验例2本组合物制剂(鼻渊净颗粒)体外抑菌作用

一、实验材料：1、样品：鼻渊净清膏，每毫升含生药3g，武汉第三医院药剂科生产，批号930514。配制方法同前，以蒸气100℃，30min灭菌备用。2、药敏纸片：青霉素G，(10IU/片)，批号931211：链霉素(10IU/片)，批号931127：诺氟沙星(10ug/片)。以上药敏纸片均由北京天坛药物生物技术开发部生产。3、培养基：MH(Muller-Hinton)培养基，每100中含牛肉膏3g，蛋白胨17.5g，可溶性淀粉1.5g，琼脂17g，PH 7.4经高压灭菌(115℃，30分钟后)备用。链球菌接种于巧克力琼脂平板。4、菌种：选用与该药主治疾病有关的临床分离所得致病菌及部分标准菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922，绿脓杆菌ATCC27853)共109株。其中金黄色葡萄球菌21株，表皮葡萄球菌19株，溶血性链球菌3株，大肠杆菌22株，绿脓杆菌16株，变形杆菌15株，肺炎杆菌13株。受试菌株经同济医科大学微生物学教研室和协和医院检验科细菌室鉴定。

二、方法和结果：1、纸片法药敏试验，将测试菌分别接种于肉汤中，置37℃培养6-8h，用无菌棉拭子蘸取菌液均匀涂布于琼脂表面，置37℃培养16-18h后测量抑菌圈大小。按照统一规定的抗菌药物药敏试验判断标准进行判断。2、MIC测定，将测试菌分别接种于肉汤中，置37℃培养16-18h(大肠杆菌和绿脓杆菌培养8h)后，用无菌肉汤稀释成1∶1000的菌液备用。采用平皿内药液稀释法，取不同浓度(6g/ml，3g/ml，1.5g/ml…0.009375g/ml)的鼻渊净清膏2ml分别加入18ml MH培养基中，摇匀后倒人无菌平皿内，使培养基内药物终浓度分别为0.6g/ml 0.3g/ml 0.15g/ml……，0.009375g/ml)，同时设药物对照平皿(仅药物与培养基混合，不接种细菌)和受试菌株对照平皿(培养基内不含药物)。待琼脂凝固后，用接种环划线接种各实验菌液，并于平皿底部标明药物浓度和细菌种类及菌株编号，置37℃培养箱培养24h后观察结果。MIC为抑制细菌生长的最低药物浓度。3、结果：纸片法药敏试验结果见表5。本试验所收集的临床致病菌92％的菌株对诺氟沙星敏感，所有金黄色葡萄球菌和73％表皮葡萄球菌对青霉素耐药，44％革兰氏阴性杆菌对链霉素耐药。鼻渊净颗粒的体外抗菌活性见表6。由表6可见，鼻渊净颗粒对受试菌株具有不同程度的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、肺炎杆菌的MIC₅₀的分别为0.02812、0.02344、0.18、0.09、0.206＞0.6g/ml；MIC₉₀分别为0.03750.0625 0.42 0.14＞0.6＞0.6g/ml，对溶血性链球菌的MIC范围为0.075-0.6g/ml。本试验所设药物对照平皿均未见细菌生长，受试菌株对照生长良好，表明药物本身不含有活菌，培养条件符合试验要求。

三、结论：鼻渊净颗粒是中药复方制剂，具有清热解毒等作用。本试验选择7种临床分离菌株共106株(其中多数菌株对常用抗菌药物青霉素和链霉素耐药)及3株标准菌株，对鼻渊净颗粒进行了体外抗菌作用的实验研究，结果表明该药对引起急、慢性鼻炎及鼻窦炎的常见致病菌，如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌、变形杆菌、肺炎杆菌等均有不同程度的抑菌作用。

                表5临床分离株对3种抗菌药物的纸片法药敏试验结果

菌种                       青霉素C             链霉素           诺氟沙星

               株数

                      S    M    R(％)    S    M    R(％)    S    M   R(％)

金黄色葡萄球菌  20    0    0    20(100)  19   0    1(5)     19   0   1(5)

表皮葡萄球菌    15    4    0    11(73)   4    0    11(73)   13   0   2(15)

大肠杆菌        21    -    -      -      5    3    13(62)   15   0   6(29)

绿脓杆菌        15    -    -      -      2    4    9(60)    15   0   0(0)

变形杆菌        15    -    -      -      14   0    1(7)     14   1   0(0)

肝炎杆菌        12    -    -      -      7    0    5(42)    12   0   0(0)

S：敏感菌株数，M：中度敏感菌株数，R(％)：耐药菌株数(耐药朱百分比)。

                                表6鼻渊净清膏对109株细菌的MIC测定

细菌           株数  药物浓度(g/ml)                                                           MIC₁₀  MIC₁₀  MIC范围

                     0.009375     0.01875   0.0375    0.75     0.15    0.3    0.6    ＞0.6

金黄色葡萄球菌    21                1       18        2                                        0.02812 0.0375  0.01875-0.075

表皮葡萄球菌      19      5         3       6         5                                        0.02344 0.0625  0.009375-0.075

溶血性链球菌      3                                   1                        2                               0.075-0.6

大肠杆菌          22                                            10      6      6               0.18    0.42    0.15-0.6

绿脓杆菌          16                                  6         9              1               0.09    0.14    0.075-0.6

变形杆菌          15      4         2                                   3      4      2        0.206   ＞0.6   0.009375-＞0.6

肝炎杆菌          13                                                           3      10       ＞0.6   ＞0.6   0.6-＞0.6

实验例3本组合物制剂(鼻渊净颗粒)对免疫功能作用

一、鼻渊净颗粒对小鼠碳粒廓清的影响：1、材料：鼻渊净清膏，每毫升含生药3g，批号930541，系武汉市第三医院研制，配制方法同前；云芝多糖胶囊系南京老山制药厂产品，批准文号：苏卫药准字(87)3612-1号；规格是0.5克/粒，用去离子水稀释成10％浓度混悬液，供试验使用，使用时振摇；印度墨汁系英国Winsor&Newton产品；751分光光度计，上海分析仪器厂产品；动物：昆明种小鼠，由同济医科大学动物实验中心提供；2、方法：取20-24g健康小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，即蒸馏水组、云芝多糖阳性对照组、鼻渊净颗粒高、中、低剂量组，各组均按10ml/kg体重口服灌胃给药，每日一次，连续7天，第7天给药后每鼠尾静脉注射印度墨汁10ml/kg体重，于2、10分钟后分别从眼眶静脉取血0.03ml，加到0.1％碳酸钠溶液2ml中摇匀，用751紫外光分光度计在680mm波长处测定光密度，按下列公式计算廓清指数K值。K＝(logOD₂-logOD₁₀)/(t₁₀-t₂)OD₂和OD₁₀分别代表2、10分钟所测血样的光密度，t₁₀和t₂代表测定时间，取血完毕后，小鼠颈椎脱臼处死，分别称取肝、脾重量，然后根据下列公式计算吞噬指数a值：

a＝(体重/脾肝重)׳√K

各组的K值和a值均以XSD表示，进行F检验，比较各组差异显著性。3、实验结果：蒸馏水组廓清指数K值和吞噬指数a值分别是5.2±1.7(K×1000，XSD下同)和2.75±0.5(x±sD下同)，而云芝多糖组分别是13.75±5.7和3.7±9.50，两者具有显著性差异(p＜0.01)。证实此方法是可靠的，与文献报道一致^[10]，云芝多糖能增加小鼠吞噬功能，鼻渊净颗粒高、中、低剂量组廓清指数和吞噬指数与蒸馏水组比较都具有显著差异(p＜0.05)，与云芝多糖比较，除低剂量组有显著差异外(p＜0.05)，高、中剂量则无显著差异(p＞0.05)，这表明在较高剂量时，鼻渊净颗粒具有与云芝多糖类似的增加小鼠吞噬功能的作用，鼻渊净颗粒各个剂量组廓清指数与剂量间有一定相关性，剂量增大，吞噬活性增强，高低剂量相比较，具有显著性差异(p＜0.05)，吞噬指数各个剂量组之间则无显著差异(p＞0.05)，以上结果表明；鼻渊净颗粒可增加单核巨噬细胞系统对血中胶体碳的廓清速度，提高其吞噬功能，见表7。

           7、鼻渊净颗粒对小鼠碳粒廓清功能的影响(XSD)

组别           剂量       动物数(只)      廓清指数(K值)      吞噬指数(a值)

蒸馏水组     10ml/kg          10          5.2±1.7           2.75±0.53

云芝多糖组   1g/kg            10          13.7±5.7**        3.71±0.50**

鼻渊净低     3g/kg            10          8.2±3.1*#         3.45±0.68*#

鼻渊净中     6g/kg            10          10.1±4.5**        3.85±0.45**

鼻渊净高     12g/kg           10          12.7±4.4**@       3.66±0.75**

与蒸馏水组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与云芝多糖组比较，#p＜0.05；

与鼻渊净颗粒低剂量组比较@p＜0.05

二、鼻渊净颗粒对迟发性变态反应的影响

(一)、材料：1、鼻渊净颗粒，云芝多糖胶囊同前，按同法配成试验所需浓度。2、雷公藤片，系湖北省黄石市制药厂产品，批准文号：鄂卫药准字(89)240号，用去离子水稀释成0.0033％混悬液供实验使用，使用时振摇。3、2，4-二硝氟苯(DNFB)系上海金山化工厂产品，用丙酮麻油溶液配制成1％DNFB。4、动物：昆明种小鼠，同济医科大学动物实验中心提供；(二)、方法：取18-22g健康小鼠60只，雌雄各半随机分成6组，即蒸馏水空白对照组，云芝多糖对照组，雷公藤对照组，鼻渊净颗粒高、中、低剂量组，按口服灌胃给药，每日一次，连续7天，在第一天给药的同时，各鼠腹部去毛，范围约为3×3CM²，用1％DNFB丙酮麻油溶液50ul均匀涂抹皮肤表面致敏，第二天再强化致敏一次，给药第6天，将1％DNFB溶液10ul均匀涂抹右耳廓两面进行攻击，左耳作对照。攻击24小时后，颈部脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径3mm的耳片，称重，两耳片重量之差为耳肿胀度，同时取出各鼠脾脏和胸腺称重，分别以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)的，即：

脾指数＝脾重(mg)/体重(g)×10

胸腺指数＝胸腺重重(mg)/体重(g)×10

将耳壳肿胀度，脾指数、胸腺指数进行F检验，判断各组差异显著性。

(三)、结果：雷公藤组其耳壳肿胀度是0.49±0.24，较蒸馏水组1.24±0.47有较明显地下降，与文献报道雷公藤抑制迟发性变态反应结果完全一致，而鼻渊净颗粒高、中、低三种剂量给药组和云芝多糖给药组其耳壳肿胀度分别是1.83±0.38，1.66±0.38，2.51±0.36和2.31±0.35，均较蒸馏水组有明显增加，低剂量组作用更强(见表8)。对脾脏指数有一定的提高作用，但无显著意义，中高剂量对胸腺指数有降低作用，低剂量对其无影响，通过本实验揭示鼻渊净颗粒能增强小鼠致敏反应，参与机体的免疫功能的调节作用。

表8鼻渊净颗粒对小鼠耳壳肿胀、脾指数和胸腺指数的影响( x±SD)

组别          剂量    动物数    肿胀度          脾指数       胸腺指数

                                 (mg)        (mg/10g体重)  (mg/10g体重)

蒸馏水组    10ml/kg     10    1.24±0.47      42.9±12.3    24.8±6.7

雷公藤组    330ug/kg    10    0.49±0.24**    26.7±16.7*   5.80±4.5**

云芝多糖    1g/kg       10    2.31±0.35**    44.4±12.4    19.1±6.3*

鼻渊净高    12g/kg      10    1.83±0.38*     49.3±10.6    17.1±5.9*

鼻渊净中    6g/kg       10    1.66±0.38*     51.3±16.3    17.2±6.7*

鼻渊净低    3g/kg       10    2.51±0.36**    50.3±10.4    24.1±4.5

与蒸馏水组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；

三、鼻渊净颗粒对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下血清溶血素生成的影响

(一)、材料：1、鼻渊净颗粒、雷公藤、云芝多糖胶囊同前实验。2、环磷酰胺系上海十二制药厂产品，批准文号：沪卫药准字(1981)第0364号一(十二)。3、SRBC保存液(Alsever)葡萄糖2.05g，氯化钠0.42g，柠檬酸钠0.8g，柠檬酸0.05g，蒸馏水100ml，溶解混合过滤，在8磅压力下灭菌10分钟，在4℃保存备用。4、都氏溶液(用测定血红蛋白使用)：碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钢，0.2g，氰化钾0.05g加蒸馏水1000ml。5、补体：取新鲜豚鼠(3只)混合血清经SRBC(以10∶1)的体积比例(于4℃吸收30分钟，震荡离心(2000rpm，10分钟)取上清液，用蒸馏水按1∶10将血清稀释备用。6、SRBC：在无菌条件下，从健康成年绵羊颈静脉取血，将血液放入有玻璃珠的三角烧杯中轻摇10分钟以除去纤维蛋白，加入2倍量的保存液，放入4℃冰箱备用，临时用生理盐水洗涤3次，经2000rpm，10分钟，得压积红细胞，再按所需浓度稀释。7、昆明种小鼠：由同济医科大学动物实验中心提供。

(二)、方法，取健康小鼠60只，体重在20-24g，雌雄各半随机分成6组，即蒸馏水组，环磷酰胺组，环磷酰胺加云芝多糖组，环磷酰胺加鼻渊净颗粒高、中、低剂量组。给药前先给各鼠(除蒸馏水组外)环磷酰胺按110mg/kg皮下注射造成免疫功能低下的病理模型，然后连续口服给药7天，在给药第二天每鼠腹腔注射致敏。第八天从小鼠眼眶摘除眼球取血，分离血清，将血清稀释800倍，在试管内依次加入经稀释的血清1ml，5％SRBC0.5ml，10％补体1ml，加都氏液3ml，摇匀后放置10分钟，在540nm波长处比色记录吸光度，另外取5％SRBC0.25ml，加都氏液4ml，记录其吸光度值，此值即为实验所用SRBC半数溶血时的肖光度值，最后按下式计算样品的半数溶血值。

(三)、结果：环磷酰胺组半数溶血值(HC₅₀)325.4166.10(XSD)明显地低于蒸馏水组464.8615.85，其差异有显著性(P＜0.01)，通过给环磷酰胺造成体液免疫功能低下，在给予环磷酰胺同时，给予鼻渊净颗粒，都能提高半数溶血值，其高、中、低剂量组HC₅₀值分别是427.94±33.63，396.9675.66和397.29±71.32，与单用环磷酰胺组比较，差异都具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，云芝多糖组作用非常明显，其HC₅₀值与环磷酰胺组比较明显提高(P＜0.01)，在鼻渊净颗粒各组中，高剂量组作用最强，见表9。

表9.鼻渊净颗粒对免疫功能低下小鼠血清溶血素生产的影响( x±SD)

组别                           剂量     动物数      HC₅₀值(X±SD)

蒸馏水组                      10ml/kg     10        64.84±15.85

环磷酰胺组                    11g/kg      10        325.4166.10##

环磷酰胺+低剂量鼻渊净颗粒     11g/kg      10        397.29±71.32*

                              3g/kg

环磷酰胺+中剂量鼻渊净颗粒     11g/kg      10        396.96±75.56*

                              6g/kg

环磷酰胺+高剂量鼻渊净颗粒     11g/kg      10        427.94±33.63**

                              12g/kg

环磷酰胺+云芝多糖             11g/kg      10        539.23±101.13**

                              1g/kg

##与蒸馏水组比较P＜0.01；

*与环磷酰胺比较P＜0.05；**与环磷酰胺组比较P＜0.01。

鼻渊净颗粒对免疫功能药效学结论：实验结果表明，三种剂量鼻渊净颗粒对小鼠非特异免疫功能—单核巨噬细胞吞噬功能都具有明显的促进作用，提高小鼠对血中胶体廓清速度，高剂量组较低剂量组作用更为明显；在迟发性变态反应中，三种剂量鼻渊净颗粒也都能增加DNFB致敏后的耳壳肿胀度，提高正常机体对超敏反应的感受力，提高其细胞免疫功能，其中以低剂量组作用更强：在免疫器官方面，对脾脏重量有增加趋势，但无统计学意义；在体液免疫方面，三种剂量鼻渊净对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠溶血素生成都具有一定提高作用。以上研究初步表明，鼻渊净颗粒对非特异免疫功能及特异性免疫功能，包括细胞免疫，体液免疫都具有一定的促进作用。

实验例4本组合物制剂(鼻渊净颗粒)对无芽胞厌氧的体外抑菌试验

一、材料和方法：1、试验药品，试验药：鼻渊净清膏(鼻渊净未浓缩剂型)，每毫升含生药3g，武汉第三医院药剂科生产，批号960620。用蒸馏水配制5000mg/ml，以蒸气100℃，30min灭菌备用，用时稀释。阳性对照药：甲硝唑，武汉滨湖制药厂生产，批号960541，配制成320ug/ml。2、试验菌株，试验用菌株均为武汉地区临床病例标本的分离株，其中脆弱类杆菌20株，齿龈类杆菌2株，共计3种24株。受试菌株经同济医科大学微生物学教研室细菌室鉴定。标准菌株(脆弱类杆菌5524)购于北京生物药品检验所。所有菌株均冻干存于-30℃，使用时用无菌生理盐水稀释，接种于厌氧分离培养基，37℃厌氧培养48h，再挑取单个菌落接种于厌氧菌基础培养基，37℃厌氧培养24h，调整菌液至10⁶cfu/ml。3、培养基，厌氧培养基，购于上海医工所。4、试验方法，琼脂平板稀释法，取5000mg/ml的鼻渊净颗粒和320ug/ml甲硝唑2ml分别作对倍稀释，最小浓度分别为39mg/ml和0.3ug/ml。分别取两种药物各种浓度药液2ml加入18ml厌氧琼脂培养基中，摇匀后分别倒人无菌平皿内。待琼脂凝固后，用接种环划线接种各实验菌液，同时接种不含药物的平皿，于平皿底部标明药物浓度和细菌种类及菌株编号，37℃厌氧条件下培养48h后观察结果。MIC为抑制细菌生长的最低药物浓度。

二、结果：鼻渊净颗粒和甲硝唑对24株无芽胞厌氧菌的最小抑菌浓度见表10。

      表10鼻渊净颗粒和皿硝唑对24株厌氧菌的体外抑菌作用

菌数            株数            药物               MIC

脆弱类杆菌       20         鼻渊净(mg/ml)        31～≥250

                            甲硝唑(ug/ml)        0.06～32

齿龈类杆菌       2          鼻渊净(mg/ml)        125

                            甲硝唑(ug/ml)        0.03，0.125

疮疱丙酸杆菌     2          鼻渊净(mg/ml)        125

                            甲硝唑(ug/ml)        0.06，0.25

脆弱类杆菌5542   1          鼻渊净(mg/ml)        62.5

                            甲硝唑(ug/ml)        0.125

讨论：本试验选择有代表性的各种厌氧菌共24株，测定了鼻渊净颗粒的体外抗厌氧活性，并以甲硝唑做阳性对照。试验结果表明鼻渊净颗粒对3种无芽厌氧菌均有一定的抑制作用，但其抑菌活性远低于对照药甲硝唑。

实验例5本组合物制剂(鼻渊净颗粒)体内抗菌试验

材料和方法：1、药品，试验药：鼻渊净清膏(鼻渊净颗粒未浓缩剂型)，棕色液体，每ml含生药3g，武汉市第三医院生产，批号960620。用蒸馏水配成不同浓度(0.3、0.6、0.9、1.2、1.5g/ml)的混悬液，用时混匀。对照药：乳酸环丙沙星注射液(200mg/100ml)，广州侨光制药厂生产，批号95091502，用无菌生理盐水配制成0.3mg/ml。2、试验菌株，用于感染动物的细菌为临床分离的金黄色葡萄球菌，经同济医科大学附属同济医院检验科细菌室鉴定。3.菌液制备，试验前一日，取5个菌落移种于5ml肉汤试管，37℃培养18h后作为原菌液。原菌液用生理盐水适当稀释，取稀释后的菌液1ml加5％胃膜素9ml，制成均匀混悬液。根据MLD预试验结果最终用5％胃膜素制成感染动物用菌液。MLD为最小100％致死病菌(Minimal100％  lethaldose of bacteria)。本试验选用80％-90％小鼠死亡的细菌量感染动物。4.试验动物，昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半，试验前18h禁食供水。试验动物由同济医科大学医学实验动物中心提供。5、试验方法，按动物体重，性别分层随机分组，每组10只，共分7组，即蒸馏水阴性对照，环丙沙星(3mg/kg/次)阳性对照，5组不同剂量的鼻渊净颗粒组(3、6、9、12、15g/Kg/日)。用准备好的菌液采用腹腔注射感染动物，每只小鼠0.5ml。鼻渊净颗粒于感染前3天及感染后4天每天灌胃一次，环丙沙星于感染后即刻及感染后6h各静脉注射一次，阴性对照组给予等容量蒸馏水，给药容量为0.1ml/10g。观察时间7天，记录各组小鼠死亡数，按Bliss法计算鼻渊净颗粒的ED₅₀。

二、结果：小鼠感染金黄色葡萄球菌后，鼻渊净颗粒及对照组小鼠死亡数见表11，鼻渊净颗粒的ED₅₀与95％可信限分别为14.4g/kg和9.1～22.8g/Kg。

            表11  鼻渊净颗粒金黄色葡萄球菌感染小鼠的体内保护试验

菌种             药物名称    剂量(g/kg)    对数剂量X    动物数    死亡动物数(只)    死亡率     ED₅₀与95％可信限(g/kg)

                                                         (只)                        (％)

                    鼻           3          0.4771        10           9              90

                    渊           6          0.7782        10           10             100

                    净           9          0.9542        10           7              70

                                                                                                        14.4

金黄色葡萄球菌      颗           12         1.0792        10           6              60

                                                                                                      (9.1～22.8)

                    粒           15         1.1761        10           4              40

                 环丙沙星      3mg/kg                     10           0              0

                   蒸馏水         -                       10           9              90

讨论：由于中药抗菌作用较弱，难以在体内达到有效抗菌浓度，且中药常可能通过调动非特异抗感染能力而起效，故正式试验时感染菌量应低于MLD，以选取80-90％小鼠死亡的细菌量感染动物，并且研究中药体内抗菌作用时常采用预防性给药。本试验蒸馏水组和环丙沙星对照组小鼠死亡率分别为90％和0％，说明所选用的感染菌量是适当的。试验药鼻渊净颗粒采用预防性给药，即感染前3天给药。研究结果表明，本品在较高剂量时对金黄色葡萄球菌所致小鼠感染有一定的保护作用，ED₅₀为14.4g/kg。这一结果与其在体外具有抗金葡萄球菌作用的结果是一致的。

下列实施例均能实现上述实验例的效果。

实施例1：

辛夷10g    苍耳子30g    麻黄20g    白  芷30g    薄  荷10g

藁本5g     黄  芩20g    连翘20g    野菊花20g    天花粉20g

地黄30g    丹  参20g    茯苓40g    甘  草5g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成软胶囊。

实施例2：

辛夷30g    苍耳子90g    麻黄60g    白  芷90g    薄  荷30g

藁本15g    黄  芩40g    连翘40g    野菊花40g    天花粉40g

地黄60g    丹  参40g    茯苓120g   甘  草15g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成胶囊。

实施例3：

辛夷15g   苍耳子50g    麻黄30g    白  芷50g    薄  荷15g

藁本8g    黄  芩30g    连翘30g    野菊花30g    天花粉30g

地黄50g   丹  参30g    茯苓70g    甘  草8g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成片剂。

实施例4：

辛夷25g    苍耳子70g    麻黄50g    白  芷70g    薄  荷35g

藁本18g    黄  芩50g    连翘50g    野菊花50g    天花粉50g

地黄70g    丹  参50g    茯苓90g    甘  草15g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成软胶囊。

实施例5：

辛夷20g    苍耳子60g    麻黄40g    白  芷60g    薄  荷20g

藁本10g    黄  芩40g    连翘40g    野菊花40g    天花粉40g

地黄60g    丹  参40g    茯苓80g    甘  草10g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上十四味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩至60℃相对密度1.35-1.40的清膏；与辅料混合制粒，干燥整粒，制成200粒，喷挥发油，密闭24小时，即得颗粒剂。每粒0.3克，相当原料药2.8g，开水冲服，一日3次，一次10-15g，每袋装10g。

实施例6：

辛夷20g    苍耳子60g    麻黄40g    白芷60g

薄荷20g    藁  本10g    黄芩40g    连翘40g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上八味，辛夷、薄荷、藁本三味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他五味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成软胶囊。

实施例7：

辛夷20g    苍耳子60g    麻黄40g    白  芷60g    薄  荷20g

藁本10g    黄  芩40g    连翘40g    野菊花40g    天花粉40g

地黄60g    丹  参40g    茯苓80g

其中，苍耳子以炒为佳。

以上十三味，辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他九味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成软胶囊。

Claims (10)

1、一种中药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

辛夷10-30重量份    苍耳子30-90重量份       麻黄20-60重量份

白芷30-90重量份    薄  荷10-30重量份       藁本5-15重量份

黄芩20-40重量份    连  翘20-40重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于还可加入下述组分的原料药：

野菊花20-40重量份  天花粉20-40重量份       地黄30-60重量份

丹  参20-40重量份  茯  苓40-120重量份。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于还可加入甘草5-15重量份。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

辛  夷15-25重量份  苍耳子50-70重量份       麻  黄30-50重量份

白  芷50-70重量份  薄  荷15-35重量份       藁  本8-18重量份

黄  芩30-50重量份  连  翘30-50重量份       野菊花30-50重量份

天花粉30-50重量份  地  黄50-70重量份       丹  参30-50重量份

茯  苓70-90重量份  甘  草8-15重量份。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

辛  夷20重量份       苍耳子60重量份          麻  黄40重量份

白  芷60重量份       薄  荷20重量份          藁  本10重量份

黄  芩40重量份       连  翘40重量份          野菊花40重量份

天花粉40重量份       地  黄60重量份          丹  参40重量份

茯  苓80重量份       甘  草10重量份。

6.如权利要求1、2、3、4或5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物中苍耳子优选炒苍耳子。

7.如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮1-3小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序，加入药学上可接受的赋形剂辅料制成临床可接受的剂型。

8.如权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：辛夷、薄荷、藁本、野菊花四味药提取挥发油，蒸馏后的水溶液及药渣分别另器收集；其他十味药加水煎煮2小时，趁热过滤；将上述两种药渣合并，再加水煎煮两次，每次1小时，过滤，合并滤液与上述辛夷等蒸馏后的水溶液，浓缩成清膏；最后经过常规工序加入药学上可接受的赋形剂辅料制成临床可接受的剂型。

9如权利要求1-5所述的任一药物组合物，其特征在于该药物组合物还可加入赋形剂制成临床可接受的剂型，例如：丸剂、片剂、颗粒剂、口服液、胶囊剂、膏剂、乳剂和中药膜剂。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于所说的赋形剂是调味剂、分散剂、粘合剂、增稠剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、防腐剂中的一种或几种。